CN108517307A - 一种改性粘土与抑藻菌耦合使用抑制藻类生长的方法 - Google Patents

一种改性粘土与抑藻菌耦合使用抑制藻类生长的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种改性粘土与抑藻菌耦合使用抑制藻类生长的方法。所述改性粘土为十六烷基三甲基溴化铵改性钠性蒙脱土。所述抑藻菌可为蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus G4，简称G4菌株。已于2017年12月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号分别为GDMCC NO.60299。实验数据表明：改性粘土和抑藻菌(G4)的联合使用对藻细胞有明显抑制作用，持续抑藻时间可达168小时，未见藻细胞数量的反弹。本发明中所使用的改性粘土来源广、制备简单，成本低廉且易于操作；改性粘土和抑藻细菌的结合使得赤潮能够更彻底地抑制；改性粘土和抑藻细菌结合抑制赤潮的方法，不会产生二次污染，是一种环境友好型方法。

Description

一种改性粘土与抑藻菌耦合使用抑制藻类生长的方法
技术领域
本发明属于海洋环境保护领域，具体涉及一种改性粘土与抑藻菌耦合使用抑制藻类生长的方法。
背景技术
赤潮是一种严重的全球性海洋自然灾害之一,已经引起世界各地的高度关注。近年来我国近海海域污染加剧，局部海域富营养化问题突出，赤潮爆发日益频繁，给近岸水域带来了严重的生态、资源和环境问题，并造成巨大的经济损失，是滨海生态安全和沿海经济可持续发展的重大威胁。因此，研究新型高效环保的赤潮调控方法，是当前赤潮防控领域中亟待解决的重大问题之一。
以往的研究中虽然已经开发出一些赤潮的控制技术，如物理方法、化学方法和生物治理方法，但这些方法都存在一定的缺陷，治理效果不甚理想。例如物理方法中的黄泥浆絮凝法需要较大的剂量才能起到抑制的效果，这在一定程度上增加了操作的难度和成本的投入；一些化学方法如杀藻剂，在杀灭藻类的同时，也给其它生物带来了直接或间接的危害，不能体现环境友好性特征；一些生物学方法如投放摄食藻类的大型生物(鱼类)，也存在打破食物网结构，破坏种群稳定的生态风险。
现行控制赤潮的方法中，包括物理法、化学法和生物学方法，这些方法往往单一使用，实际应用中已暴露出一些不足。具体表现在：物理法治理赤潮只能达到在初期有较强的抑制作用，对藻类没有彻底去除，藻类的爆发存在反弹的可能；而利用化学方法如铜制剂、除草剂等化学杀藻剂虽然可以直接杀死藻类，但这些化学物质的专一性差，而且容易富集在食物链中造成二次污染；一些生物学方法的使用，如摄藻生物的介入，又会造成种群的扰动、带来生态风险；且生物学方法见效较慢，不易形成立竿见影的效果。
近年来，溶藻细菌(algicidal bacteria)的发现给赤潮的治理带来了新的曙光。它作为水生生态***生物种群结构和功能的重要组成部分，对维持藻类生物量平衡具有非常重要的作用。研究表明，赤潮的消亡可能与溶藻细菌的存在有关。溶藻细菌作为赤潮防治的有效微生物，已引起越来越多的关注。但是面对赤潮现象中藻类的种群优势，溶藻细菌的用量需求很大，难以满足实际环境治理的需求。
因此如何将已有的技术进行有效耦合，充分发挥各种技术的自身优势，开发一种集成、高效、环境友好型的抑藻方法一直是科研工作者的努力目标。
发明内容
本发明的目的是提供一种抑制藻类生长的方法。
本发明所提供的抑制藻类生长的方法，为：将藻类沉降剂和抑藻菌加入到待处理藻液中，耦合处理来抑制藻类生长。
上述方法中，所述藻类沉降剂可为改性粘土。
所述改性粘土可通过包括下述步骤的方法制备得到：向改性剂中加入稀盐酸溶液，待改性剂溶解后，加水，得到改性剂盐酸溶液，搅拌下将所述改性剂盐酸溶液加入到粘土中，得到改性粘土。
所述改性剂可为高效率和低毒性的高烷基化合物。
所述改性剂具体可为十六烷基三甲基溴化铵和/或三丁基十六烷基溴化磷，优选为十六烷基三甲基溴化铵。
所述稀盐酸溶液可为质量浓度1％的稀盐酸。
所述改性剂与稀盐酸溶液的配比可为10mg：1mL。
所加入的水为海水，优选为滤过的海水。
所述改性剂与水的配比可为10mg：10mL。
所述粘土可为钠性蒙脱土。
所述粘土与改性剂盐酸溶液中的改性剂的质量比可为1g：100mg。
所述改性粘土具体可为十六烷基三甲基溴化铵改性钠性蒙脱土。
上述方法中，所述抑藻菌可为蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus G4，简称G4菌株。
所述蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus G4从藻际共生菌中分离获得，且均已于2017年12月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(简称GDMCC，地址为：广州市先烈中路100号，广东省微生物研究所，59号楼5楼，邮编：510070)，保藏编号为GDMCC NO.60299。
上述方法中，改性粘土在待处理藻液中的浓度可为5-15mg/mL，具体可为10-15mg/ml、10mg/ml。
所述抑藻菌在待处理藻液中的终浓度可为105-107cells/mL，具体可为106 cells/mL。
所述待处理藻液中的藻类具体可为赤潮爆发藻——锥状斯式氏藻(Scrippsiellatrochoidea，细胞梨形，长16～36μm，宽20～23μm)。
实验数据表明：改性粘土和抑藻菌(G4)的联合使用对藻细胞有明显抑制作用，持续抑藻时间可达168小时，未见藻细胞数量的反弹。
本发明中所使用的改性粘土来源广、制备简单，成本低廉且易于操作；改性粘土和抑藻细菌的结合使得赤潮能够更彻底地抑制；改性粘土和抑藻细菌结合抑制赤潮的方法，不会产生二次污染，是一种环境友好型方法。
生物材料保藏说明
生物材料的分类命名：芽孢杆菌(Bacillus cereus G4)
生物材料的菌株编号：G4
生物材料的保藏单位名称：广东省微生物菌种保藏中心
生物材料的保藏单位简称：GDMCC
生物材料的保藏单位地址：广州市先烈中路100号，广东省微生物研究所，59号楼5楼
生物材料的保藏日期：2017年12月13日
生物材料的保藏中心登记入册编号：GDMCC NO.60299
附图说明
图1为十六烷基溴化铵改性粘土浓度在不同剂量下处理后第120h藻细胞的沉降状态。
图2为三丁基十六烷基溴化磷改性粘土在不同剂量下处理后第120h藻细胞的沉降状态。
图3为改性粘土对藻细胞光合效率的影响。
图4为改性粘土对藻细胞叶绿素的影响。
图5为耦合法对藻细胞光合效率Fm/Fv的影响。
图6为耦合法对藻类叶绿素含量的影响。
图7为空白组与耦合组藻细胞的形态特征对比图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、生物材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实验所用藻种为锥状斯氏藻(Scrippsiella trochoidea)(由本实验从深圳盐田港海域中分离获得)
藻培养液的营养盐配方为(每升海水中含无机盐质量)：NaNO3 37.5mg，NaH2PO42.5mg，Fe-EDTA 2.5mg(FeCl3 1.6g+EDTA 0.9g)，盐酸硫铵素5μg,Biotin VH 0.025 μg,VB12 0.025μg,CuSO4.5H2O 0.0098μg,ZnSO4.7H2O 0.022μg,CaCl2.6H2O 0.01μg,MgCl2.4H2O 0.180μg,Na2MoO4.2H2O,0.0063μg。培养温度21℃±1℃、光照强度 3000Lx、光暗比12h:12h。
藻细胞的叶绿素和光合效率采用浮游植物分类荧光仪(PHYTO-PAM)进行。具体操作如下，取2mL藻液装入测量杯置于暗盒内，对藻体进行5min暗适应，打开 Phyto-PAM调制脉冲荧光仪波长为520nm强度为0.1μmol/(m2·s)的褐色检测光。测量过程由Phytowin软件控制，开启测量光(ML)，待光信号稳定后打开饱和脉冲键，记下Fv/Fm值，即为光合效率yield值。叶绿素水平的(ChII a)测定也使用该仪器进行。
改性剂与粘土的选择。改性剂使用十六烷基三甲基溴化铵和三丁基十六烷基溴化磷两种。粘土选择了钠性蒙脱土。蒙脱土是一种三层结构粘土矿物质，由于其晶格缺陷，表面羟基结构上的原因，此颗粒表面在水中带负电，但和钠离子螯合可以制备出对藻细胞有较强吸附力的阳离子粘土。
改性粘土的制备方法：取100mg的上述两种改性剂，加入10mL1％的稀盐酸溶液，搅拌或震荡使改性剂溶解，后加入滤过海水100mL，得到1mg/mL的改性剂盐酸溶液，再称取1g钠性蒙脱土，边搅拌边加入100mL的改性剂盐酸溶液，即配置出改性粘土。
菌株分离与筛选样品来自藻际共生微生物，由清华大学深圳研究生院培养，菌株培养方法使用LB培养基。藻际微生物来自深圳东涌野外爆发的赤潮样品。
LB固体培养基：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，去离子水1000ml，琼脂粉15g，pH7.0。
LB液体培养基：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，去离子水1000ml，pH7.0。
固体LB培养条件：涂布后，将平板至于30℃培养箱中，培养24-72小时。
液体LB培养条件：30℃、24h恒温摇床中，180转/分钟。
实例1、受试藻种类的选择
本发明中我们选择了广东海域常见的赤潮爆发藻---锥状斯式氏藻(Scrippsiella trochoidea，细胞梨形，长16～36μm，宽20～23μm)，该藻属于甲藻类，广泛分布于近岸和河口，爆发性增殖时可以引起水体局部缺氧，给海洋生物及水产养殖带来危害。 2010至今广东沿岸连续7年发生不同规模的锥状斯式藻赤潮，已成为赤潮发生的高频物种。以2013年8月12日～8月30日为例，深圳坝光和东涌-盐田港一带发生大规模的锥状斯氏藻赤潮，持续时间19天，最大面积15平方公里。因此，本次发明中选择的受试物种为锥状斯氏藻。
实例2、改性粘土的制备
将文献报道的几种粘土种类进行了对比，我们选择了钠性蒙脱土。蒙脱土是一种三层结构粘土矿物质，由于其晶格缺陷，表面羟基结构上的原因，此颗粒表面在水中呈负电性，但和钠离子螯合可以制备出对赤潮细胞有较强吸附力的阳离子粘土。
改性剂选择了高效率和低毒性的高烷基化合物，不同改性剂的种类对粘土改性后效果有很大影响，我们选择两种毒性较低的改性剂：十六烷基三甲基溴化铵和三丁基十六烷基溴化磷两种改性剂。
改性粘土的制备：取100mg的改性剂，加入10mL1％的稀盐酸溶液，搅拌或震荡使改性剂溶解，后加入滤过的海水100mL，得到1mg/mL的改性剂盐酸溶液，再称取1g 钠性蒙脱土，边搅拌边加入100mL的改性剂盐酸溶液,即配置出改性粘土。相比以往以超纯水为溶剂的做法，我们进行了一些改进，以海水为溶剂进行配置。目的是扩大改性粘土的使用范围；其次是制备的改性粘土能更好的匹配海水环境和海水藻类。从预实验的结果来看海水对改性粘土的性状没有显著影响。
实例3、改性粘土对藻细胞的沉降作用
将新鲜配制且呈梯度浓度的改性粘土，加入到50ml的藻细胞培养瓶中，两种改性粘土的浓度分别为：十六烷基溴化铵改性粘土浓度为15mg/ml(高)、10mg/ml(中)、 5mg/ml(低)；三丁基十六烷基溴化磷改性粘土浓度为：30mg/ml(高)、20mg/ml (中)、10mg/ml(低)，震荡摇匀。将已加入改性粘土的藻液于21℃±1℃、光照强度3000Lx、光暗比12h:12h环境下培养观察，每24h观察藻液澄清度和沉降程度。
图1为十六烷基溴化铵改性粘土浓度在不同剂量下处理后第120h藻细胞的沉降状态。
图2为三丁基十六烷基溴化磷改性粘土在不同剂量下处理后第120h藻细胞的沉降状态。
由图1、2可知，改性粘土对藻细胞有明显的絮凝作用，随着浓度的提高其絮凝效果更显著。
从图1中可以看出，第①组十六烷基溴化铵改性粘土在15mg/ml(高浓度)时，藻细胞基本沉到细胞培养瓶底部，藻培养上液澄清；在10mg/ml(中浓度)时，藻细胞部分沉底，藻培养液呈浅黄色且较澄清；在5mg/ml(低浓度)时，藻细胞少部分沉底，藻培养液呈黄色；而空白组明显比实验组颜色深。上述不同浓度藻培养液的颜色对比可以看出改性粘土的加入对藻细胞有明显的沉降作用，且呈现剂量依赖性。
从图2种可以看出，第②组三丁基十六烷基溴化磷改性粘土在30mg/ml(高浓度)时，藻细胞部分沉降到细胞培养瓶底部，藻培养液呈黄色且较澄清；在20mg/ml(中浓度)时，藻细胞进一步沉底，藻培养液呈黄色；在10mg/ml(低浓度)时，藻细胞少量沉底，藻培养液呈黄色且不太澄清，以上三组颜色差异不大，且与第①组相比，对藻类的沉降效果不太明显。
实例4、改性粘土对藻细胞光合效率和叶绿素的影响
通过实例3的实验选择出更高效的改性粘土—十六烷基溴化铵改性粘土。浓度上选择了中浓度10mg/ml，因为高浓度的改性粘土和中浓度的改性粘土对藻细胞的抑制效果相近，为了节约使用量和成本，故选择10mg/ml的剂量浓度。
取实验室传代培养的藻种(初始密度为5.4×105个/mL)，分装于9个100mL的细胞培养瓶中(每瓶装液50mL)。试验设三个测试组(每组3个平行)。三个测试组分别为空白组(不含改性粘土和抑藻细菌)、实验组1(含10mg/ml三丁基十六烷基溴化磷改性粘土)、实验组2(含10mg/ml十六烷基溴化铵改性粘土)。分装后连续监测液体中藻细胞浓度和叶绿素含量。
添加两种改性粘土到培养的藻液当中，对藻类抑制的结果如图3所示。
通过图3可以看出早期十六烷基溴化铵对藻细胞有明显抑制作用，其光合效率Fv/Fm值在24小时后降到了0.07，但随着时间的延长藻细胞Fv/Fm值有明显的反弹，至 120小时后与对照组基本相似(Fv/Fm值分别为0.52和0.51)。而三丁基十六烷基溴化磷对藻细胞的光合效率没有很明显的抑制作用，其Fv/Fm值与对照组基本持平。
添加两种改性粘土到培养的藻液当中，对藻细胞叶绿素的影响如图4所示。
从图4可以看出实验组在整个实验周期中(24h-168h,间隔24h)，叶绿素的含量分别为：208.31μg/L、225.45μg/L、250.37μg/L、286.82μg/L、253.55μg/L、234.36μg/L 和227.87μg/L。当添加三丁基十六烷基溴化磷改性粘土后，叶绿素浓度在24h后有明显降低，其值为107.23μg/L；而从48h后，叶绿素的降低效果出现反弹，其值分别为： 211.94μg/L、234.93μg/L、222.87μg/L、185.71μg/L、180.33μg/L和176.41μg/L。相比之下十六烷基溴化铵改性粘土对藻细胞叶绿素有明显的抑制作用，与对照相比在整个实验周期中降低了20倍以上，其叶绿素的含量分别为：6.47μg/L、9.71μg/L、10.69μg/L、 14.39μg/L、12.46μg/L、11.84μg/L和11.16μg/L。
综合图3和图4的结果，我们可以看到十六烷基溴化铵改性粘土的效果更好，因而在后续的耦合实验中，我们选择了该种粘土进行后续的实验。
实例5、抑藻菌株的筛选
i)从藻际微生物中用LB培养基分离培养获得单克隆菌株，之后与藻共培养，检测藻细胞的数量和叶绿素含量，挑选有抑制能力的菌株。
ii)16s r-RNA序列同源性分析
常规方法培养上述步骤一分离得到的菌株G4，提取菌株的总DNA作为基因扩增模板，采用通用引物进行扩增，其中正向引物为：27f:
5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'；反向引物为：1492R:
5'-TACGGYTACCTTTGTTACGACTT-3'，于30μL反应体系中进行，反应体系如下：
反应条件：95℃预变性5min；95℃变性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸1min，共35个循环；72℃延伸10min。PCR产物用1％凝胶电泳检测，电泳条件：3μL样品+1％琼脂糖凝胶，Marker条带组成：100bp；250bp；500bp；750bp；1000bp；2000bp； 3000bp；5000bp。750bp条带浓度为20ng/μL,显示为加亮带，其余条带浓度均为10ng/μL。
测序工作由北京六合华大基因科技有限公司完成。
序列分析通过比对美国国家生物技术信息中心NCBI数据库 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov)完成。
鉴于16s rDNA序列同源性分析结果，将步骤一分离筛选得到的菌株鉴定为以下结果：
蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus G4；简称G4菌株(其序列特征见序列表中序列1)
上述菌株已于2017年12月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(简称 GDMCC，地址为：广州市先烈中路100号，广东省微生物研究所，59号楼5楼，邮编：510070)，保藏登记号分别为GDMCC NO.60299。具体的保藏说明如下：
i)保藏说明
菌种名称：芽孢杆菌
拉丁名：(Bacillus cereus G4)
菌株编号：G4
保藏机构：广东省微生物菌种保藏中心
保藏机构简称：GDMCC
地址：广州市先烈中路100号，广东省微生物研究所，59号楼5楼
保藏日期：2017年12月13日
保藏中心登记入册编号：GDMCC NO.60299
序列特征如下：
>1-GGGTGCTATACATGCAGTCGAGCGAATGGATTAAGAGCTTGCTCTTATGAAGTTAGCGGCGGACGGGT GAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCATAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATAACATTTTGAACCGCATGGTTCGAAATTGAAAGGCGGCTTCGGCTGTCACTTATGGATGGACCCGCGTCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAACTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCTAGTTGAATAAGCTGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGTGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAAAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGTCTGTAACTGACACTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGAGGGTTTCCGCCCTTTAGTGCTGAAGTTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAACCCTAGAGATAGGGCTTCTCCTTCGGGAGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCATCATTTAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACGGTACAAAGAGCTGCAAGACCGCGAGGTGGAGCTAATCTCATAAAACCGTTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGGGGTAACCTTTTTGGAGCCAGCCGCCTAAGGT-1438
实例6、改性粘土与抑藻细菌的耦合抑藻效果
耦合法的使用中主要是避免改性粘土效果的反弹。将新配的十六烷基溴化铵改性粘土(10mg/ml)加入藻液，再加入适量菌液保证终浓度在106cells/mL左右，加入的菌株为G4细菌；名称是：蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus G4，由本实验室前期从藻际共生菌中分离获得。
耦合法使用后对藻类抑制的结果如图5所示。对照组光合效率Fv/Fm值在整个试验周期中的变化幅度在0.38-0.56之间，而实验组“十六烷基溴化铵改性粘土+G4”对藻细胞的光合效率有明显的抑制作用，其Fv/Fm值在0.01-0.02的范围，部分时间点(如72h 和96h)光合效率降低到0。
耦合法对藻类叶绿素含量的影响结果如图6所示。通过图6可以看出改性粘土和菌种(G4)的联合使用对藻细胞有明显抑制作用，持续抑藻时间可达168小时，未见藻细胞数量的反弹。从整个实验周期(24h-168h,间隔24h)来看，对照组叶绿素的含量分别为：205.2μg/L、220.6μg/L、240.11μg/L、267.34μg/L、289.24μg/L、310.08μg/L和 340.63μg/L。当耦合使用后，叶绿素浓度在24h后有明显降低，其值在两个实验组中的范围为68.59-95.2μg/L之间；而从48h后，叶绿素的降低效果出现保持，至实验终点时其叶绿素值低于20μg/L水平，且全程未见反弹。
此外，我们通过显微观察比较了实验组与对照组藻细胞的形态特征(图7，左图为对照组藻细胞，右图为耦合组藻细胞)。
从图7可知，对照组藻细胞形态完整，细胞轮廓清晰，着色均匀；而耦合组藻细胞出现裂解、细胞空壳化严重，形态碎裂，大部分细胞被溶藻细菌G4杀灭。
<110> 清华大学深圳研究生院
<120> 一种改性粘土与抑藻菌耦合使用抑制藻类生长的方法
<130> GNCAQ181120
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1438
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 1
gggtgctata catgcagtcg agcgaatgga ttaagagctt gctcttatga agttagcggc 60
ggacgggtga gtaacacgtg ggtaacctgc ccataagact gggataactc cgggaaaccg 120
gggctaatac cggataacat tttgaaccgc atggttcgaa attgaaaggc ggcttcggct 180
gtcacttatg gatggacccg cgtcgcatta gctagttggt gaggtaacgg ctcaccaagg 240
caacgatgcg tagccgacct gagagggtga tcggccacac tgggactgag acacggccca 300
gactcctacg ggaggcagca gtagggaatc ttccgcaatg gacgaaagtc tgacggagca 360
acgccgcgtg agtgatgaag gctttcgggt cgtaaaactc tgttgttagg gaagaacaag 420
tgctagttga ataagctggc accttgacgg tacctaacca gaaagccacg gctaactacg 480
tgccagcagc cgcggtaata cgtaggtggc aagcgttatc cggaattatt gggcgtaaag 540
cgcgcgcagg tggtttctta agtctgatgt gaaagcccac ggctcaaccg tggagggtca 600
ttggaaactg ggagacttga gtgcagaaga ggaaagtgga attccatgtg tagcggtgaa 660
atgcgtagag atatggagga acaccagtgg cgaaggcgac tttctggtct gtaactgaca 720
ctgaggcgcg aaagcgtggg gagcaaacag gattagatac cctggtagtc cacgccgtaa 780
acgatgagtg ctaagtgtta gagggtttcc gccctttagt gctgaagtta acgcattaag 840
cactccgcct ggggagtacg gccgcaaggc tgaaactcaa aggaattgac gggggcccgc 900
acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac caggtcttga 960
catcctctga caaccctaga gatagggctt ctccttcggg agcagagtga caggtggtgc 1020
atggttgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc 1080
ttgatcttag ttgccatcat ttagttgggc actctaaggt gactgccggt gacaaaccgg 1140
aggaaggtgg ggatgacgtc aaatcatcat gccccttatg acctgggcta cacacgtgct 1200
acaatggacg gtacaaagag ctgcaagacc gcgaggtgga gctaatctca taaaaccgtt 1260
ctcagttcgg attgtaggct gcaactcgcc tacatgaagc tggaatcgct agtaatcgcg 1320
gatcagcatg ccgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccacg 1380
agagtttgta acacccgaag tcggtggggt aacctttttg gagccagccg cctaaggt 1438

Claims (9)

1.蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus G4，其在广东省微生物菌种保藏中心的保藏编号为GDMCC NO.60299。
2.权利要求1所述的蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus G4在抑制藻类生长中的应用。
3.一种抑制藻类生长的产品，包括藻类沉降剂和抑藻菌。
4.根据权利要求3所述的抑制藻类生长的产品，其特征在于：所述藻类沉降剂为改性粘土；和/或
所述抑藻菌为权利要求1所述的蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus G4。
5.根据权利要求4所述的抑制藻类生长的产品，其特征在于：所述改性粘土通过包括下述步骤的方法制备得到：向改性剂中加入稀盐酸溶液，待改性剂溶解后，加水，得到改性剂盐酸溶液，搅拌下将所述改性剂盐酸溶液加入到粘土中，得到改性粘土。
6.根据权利要求5所述的抑制藻类生长的产品，其特征在于：所述改性剂为十六烷基三甲基溴化铵和/或三丁基十六烷基溴化磷；
所述稀盐酸溶液为质量浓度1％的稀盐酸；
所述改性剂与稀盐酸溶液的配比为10mg：1mL；
所加入的水为海水；
所述改性剂与水的配比可为10mg：10mL；
所述粘土为钠性蒙脱土；
所述粘土与改性剂盐酸溶液中的改性剂的质量比为1g：100mg。
7.一种抑制藻类生长的方法，为：将藻类沉降剂和抑藻菌加入到待处理藻液中，耦合处理来抑制藻类生长。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述方法中，所述藻类沉降剂为改性粘土；
所述改性粘土在待处理藻液中的浓度为5-15mg/mL；
所述抑藻菌在待处理藻液中的终浓度为105-107cells/mL。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述待处理藻液中的藻类为赤潮爆发藻——锥状斯式氏藻Scrippsiella trochoidea。
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