CN108485985A - 一种高产纤维素酶的复合霉菌体系及制备方法 - Google Patents

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张悦
王罡
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Abstract

本发明公开了一种高产纤维素酶的复合霉菌体系及制备方法，其制备方法为：(1)取绿色木霉菌肥和哈茨木霉菌肥分别溶于无菌水中，26‑30℃培养8‑12h；(2)分别取步骤(1)获得的悬浊液涂在灭菌后的马铃薯葡萄糖琼脂培养基，于26‑30℃，培养，获得绿色木霉菌单菌落和哈茨木霉菌单菌落；(3)将相同体积的绿色木霉菌单菌落和哈茨木霉菌单菌落，接种到同一灭菌后的马铃薯葡萄糖肉汤培养基中，于26‑30℃，培养20‑28h，得到高产纤维素酶的复合霉菌体系。本发明的方法高效简捷、时间短、成本低，复合霉菌共同培养提高了纤维素酶的产率，在实践操作中代替其他纤维素酶产方法，酶产效率高。

Description

一种高产纤维素酶的复合霉菌体系及制备方法
技术领域
本发明属于复合霉菌领域，涉及一种高产纤维素酶的复合霉菌体系及制备方法。
背景技术
随着经济的快速发展，自然资源的消耗和人口的数量的增加，人们开始逐渐的意识到可再生资源的重要性，从而对可再生资源的开发和利用日益增加，同时由于植物的纤维材料具有可再生性、价格便宜、容易获得以及能够降解等特点，因此，秸秆资源成为了非常重要的资源物质也引起了人们的重视。我国作为一个农业大国，农作物的产量很高，作物秸秆的产量也随之很大，居世界第一，作物秸秆也成为了一种巨大的可再生资源，秸秆综合利用的前景十分广阔，但是这种资源很难被利用，其中大部分的秸秆被焚烧处理，这样不仅造成了资源浪费，还会造成严重的环境污染。有研究表明，秸秆中主要成分为纤维素、半纤维素和木质素，其中纤维素含量最高。
然而在自然的情况下，降解纤维素是一个复杂的过程，这个过程有很多微生物的参与，纤维素是在多种微生物的协同作用下才能分解完全，不是单一微生物能够完成纤维素的分解，单一的微生物种类通常酶的活力很低，不能够使纤维素完全降解，因此，利用微生物生长和繁殖复杂性，通过对微生物群落之间的相互作用，进行培养分离，筛选出纤维素酶高产的复合霉菌受到了广泛的关注和重视。
目前，亟需一种高产纤维素酶的复合霉菌体系及制备方法。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种高产纤维素酶的复合霉菌体系。
本发明的第二个目的是提供一种高产纤维素酶的复合霉菌体系的制备方法。
本发明的技术方案概述如下：
一种高产纤维素酶的复合霉菌体系的构建方法，包括如下步骤：
(1)取绿色木霉菌肥和哈茨木霉菌肥分别溶于无菌水中，26-30℃培养8-12h；
(2)分别取步骤(1)获得的悬浊液涂在灭菌后的马铃薯葡萄糖琼脂培养基，于26-30℃，培养，获得绿色木霉菌单菌落和哈茨木霉菌单菌落；
(3)将相同体积的绿色木霉菌单菌落和哈茨木霉菌单菌落，接种到同一灭菌后的马铃薯葡萄糖肉汤培养基中，于26-30℃，培养20-28h，得到高产纤维素酶的复合霉菌体系。
上述方法制备的高产纤维素酶的复合霉菌体系。
本发明的优点：
本发明的方法高效简捷、时间短、成本低，复合霉菌共同培养提高了纤维素酶的产率，在实践操作中代替其他纤维素酶产方法，酶产效率高。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
本发明的实施例是为了使本领域技术人员能够更好地理解本发明，但对本发明不作任何限定。
绿色木霉菌肥从山东绿陇生物技术有限公司购置。
哈茨木霉菌肥从山东绿陇生物技术有限公司购置。
黑曲霉菌肥从山东绿陇生物技术有限公司购置。
马铃薯葡萄糖琼脂培养基配方：马铃薯200克；葡萄糖20克；琼脂15克；加ddH2O至1000毫升；自然PH，121℃灭菌20min。
马铃薯葡萄糖肉汤培养基配方：马铃薯200克；葡萄糖20克；加ddH2O至1000毫升；自然PH，121℃灭菌20min。
羧甲基纤维素钠固体培养基配方：CMC-Na 15g；NH4NO3 1g；蛋白胨1g；MgSO4·7H2O0.5g；KH2PO4 1g，琼脂20g；加ddH2O至1000毫升；PH自然，121℃灭菌20min。
实施例1
一种高产纤维素酶的复合霉菌体系及制备方法，包括如下步骤：
(1)取绿色木霉菌肥和哈茨木霉菌肥分别溶于无菌水中，28℃培养10h；
(2)分别取步骤(1)获得的悬浊液涂在灭菌后的马铃薯葡萄糖琼脂培养基，于28℃，培养，获得绿色木霉菌单菌落和哈茨木霉菌单菌落；
(3)将相同体积的绿色木霉菌单菌落和哈茨木霉菌单菌落，接种到同一灭菌后的马铃薯葡萄糖肉汤培养基中，于28℃，培养24h，得到高产纤维素酶的复合霉菌体系。
取微量步骤(3)获得的菌液涂布于羧甲基纤维素钠固体培养基中，28℃培养10h；菌落正常生长，说明菌落具有产纤维素酶的能力。
再用1mg/mL的刚果红水溶液染色，30min后弃去染液，用1mol/L的NaCl水溶液充分脱色，30min后弃去废液。透明圈直径见表1，说明纤维素酶含量高。
实施例2
一种高产纤维素酶的复合霉菌体系及制备方法，包括如下步骤：
(1)取绿色木霉菌肥和哈茨木霉菌肥分别溶于无菌水中，26℃培养12h；
(2)分别取步骤(1)获得的悬浊液涂在灭菌后的马铃薯葡萄糖琼脂培养基，于26℃，培养，获得绿色木霉菌单菌落和哈茨木霉菌单菌落；
(3)将相同体积的绿色木霉菌单菌落和哈茨木霉菌单菌落，接种到同一灭菌后的马铃薯葡萄糖肉汤培养基中，于26℃，培养28h，得到高产纤维素酶的复合霉菌体系。
取微量步骤(3)获得的菌液涂布于羧甲基纤维素钠固体培养基中，28℃培养10h；菌落正常生长，说明菌落具有产纤维素酶的能力。
再用1mg/mL的刚果红水溶液染色，30min后弃去染液，用1mol/L的NaCl水溶液充分脱色，30min后弃去废液。透明圈直径见表1，说明纤维素酶含量高。
实施例3
一种高产纤维素酶的复合霉菌体系及制备方法，包括如下步骤：
(1)取绿色木霉菌肥和哈茨木霉菌肥分别溶于无菌水中，30℃培养8h；
(2)分别取步骤(1)获得的悬浊液涂在灭菌后的马铃薯葡萄糖琼脂培养基，于30℃，培养，获得绿色木霉菌单菌落和哈茨木霉菌单菌落；
(3)将相同体积的绿色木霉菌单菌落和哈茨木霉菌单菌落，接种到同一灭菌后的马铃薯葡萄糖肉汤培养基中，于30℃，培养20h，得到高产纤维素酶的复合霉菌体系。
取微量步骤(3)获得的菌液涂布于羧甲基纤维素钠固体培养基中，28℃培养10h；菌落正常生长，说明菌落具有产纤维素酶的能力。
再用1mg/mL的刚果红水溶液染色，30min后弃去染液，用1mol/L的NaCl水溶液充分脱色，30min后弃去废液。透明圈直径见表1，说明纤维素酶含量高。
表1复合霉菌体系高产纤维素酶的结果
菌种 透明圈直径R(mm)
实施例1：(绿色木霉+哈茨木霉) 50
实施例2：(绿色木霉+哈茨木霉) 48
实施例3：(绿色木霉+哈茨木霉) 47
对照例1：哈茨木霉+黑曲霉 45
对照例2：绿色木霉+黑曲霉 20
对照例3：绿色木霉 25
对照例4：哈茨木霉 45
对照例5：黑曲霉 18
对照例1
用黑曲霉替代实施例1的绿色木霉，其它同实施例1。再用1mg/mL的刚果红水溶液染色，30min后弃去染液，用1mol/L的NaCl水溶液充分脱色，30min后弃去废液。透明圈直径见表1。
对照例2：
用黑曲霉替代实施例1的哈茨木霉，其它同实施例1。再用1mg/mL的刚果红水溶液染色，30min后弃去染液，用1mol/L的NaCl水溶液充分脱色，30min后弃去废液。透明圈直径见表1。
对照例3：
将实施例1中的哈茨木霉去除。再用1mg/mL的刚果红水溶液染色，30min后弃去染液，用1mol/L的NaCl水溶液充分脱色，30min后弃去废液。透明圈直径见表1。
对照例4：
将实施例1中的绿色木霉去除。再用1mg/mL的刚果红水溶液染色，30min后弃去染液，用1mol/L的NaCl水溶液充分脱色，30min后弃去废液。透明圈直径见表1。
对照例5：
用黑曲霉替代对照例4中的哈茨木霉。再用1mg/mL的刚果红水溶液染色，30min后弃去染液，用1mol/L的NaCl水溶液充分脱色，30min后弃去废液。透明圈直径见表1。

Claims (2)

1.一种高产纤维素酶的复合霉菌体系的制备方法，其特征是包括如下步骤：
(1)取绿色木霉菌肥和哈茨木霉菌肥分别溶于无菌水中，26-30℃培养8-12h；
(2)分别取步骤(1)获得的悬浊液涂在灭菌后的马铃薯葡萄糖琼脂培养基，于26-30℃，培养，获得绿色木霉菌单菌落和哈茨木霉菌单菌落；
(3)将相同体积的绿色木霉菌单菌落和哈茨木霉菌单菌落，接种到同一灭菌后的马铃薯葡萄糖肉汤培养基中，于26-30℃，培养20-28h，得到高产纤维素酶的复合霉菌体系。
2.权利要求1的方法制备的高产纤维素酶的复合霉菌体系。
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