CN108434369A - 治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液，它是由下述方法制备的：1）称取黄芪、黄连、乌梅、白头翁、茯苓、黄芩、金银花、大青叶、葛根、千里光、神曲、甘草、山楂、泽泻、诃子、明矾、黄柏、麦芽，加水，加热30~50min，过滤，收集滤液，浓缩，即为水提中药液；2）保加利亚乳杆菌与植物乳杆菌活化，按1:1~6接种在MRS液体培养基，36~38℃下恒温培养20~30h，得到复方益生菌制剂；3）将步骤2）的复方益生菌制剂接种到步骤1）的水提中药液中，接种量为中药液体积分数的3~5%，发酵，得到治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液；本发明发酵液的抑菌效果好，能维护肠道微生态平衡、提高机体免疫力，并具有有抑菌消炎的效果。

Description

治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液
技术领域
本发明属于鸡大肠杆菌病的防治技术领域，具体涉及治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液。
背景技术
鸡大肠杆菌病是我国临床常见的鸡病之一，是由致病性大肠杆菌引起的。具有发病快、死亡率高、病程长的特点，其主要的病型有胚胎和幼雏的死亡、败血症、气囊炎、心包炎、输卵管炎、肠炎、腹膜炎和大肠杆菌性肉芽肿等。由于常和霉形体病合并感染，又常继发于其他传染病(如新城疫、禽流感惑、传染性支气管炎、巴氏杆菌病等)，使治疗十分困难。目前本病已成为危害养业的重要传染病，常造成巨大的经济损失。
目前对于大肠杆菌病多采用抗菌药物治疗，但由于此类药物的过量使用，已导致大肠杆菌的耐药谱不断扩大，防治效果下降，同时抗菌药物在机体内的残留，易引起菌群失调，降低了肉蛋产品品质，影响了人类健康和公共卫生安全。中草药具有天然、使用安全、无毒副作用、无化学物质残留、不易产生抗药性等特点，但是存在疗效慢的特点，目前市售的用于治疗鸡大肠杆菌病的中草药制剂虽然种类很多，但实际使用效果不尽人意；中药发展至今，加工方法过于简单，产品始终难以摆脱粗、大、黑的特点，尤其是散剂，保留了中药材的有效和无效部位，且药物粒径大，粗纤维含量高，病畜尤其是家禽难以消化和吸收，致使中药材中抗菌或抗病毒的有效成分难以充分发挥疗效，同时也造成了中药材宝贵资源的大量浪费。因此开发一种含有益生菌的中药符合制剂可弥补以上药物的缺陷。
发明内容
本发明目的是提供一种取材容易、制备方便、减少药物残留及毒副作用、价格低廉疗效较高的治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液。
治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液，它是由下述方法制备的：
1）称取黄芪、黄连、乌梅、白头翁、茯苓、黄芩、金银花、大青叶、葛根、千里光、神曲、甘草、山楂、泽泻、诃子、明矾、黄柏、麦芽，加水，加热30~50min，过滤，收集滤液，浓缩，即为水提中药液；
2）保加利亚乳杆菌与植物乳杆菌活化，按1:1~6接种在MRS液体培养基，36~38℃下恒温培养20~30h，得到复方益生菌制剂；
3）将步骤2）的复方益生菌制剂接种到步骤1）的水提中药液中，接种量为中药液体积分数的3~5%，发酵，得到治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液；
步骤1）中所述的黄芪10~30份、黄连5~10份、乌梅6~15份、白头翁13~50份、茯苓13~50份、黄芩15~25份、金银花10~30份、大青叶5~15份、葛根13~50份、千里光15~25份、神曲10~20份、甘草6~30份、山楂10~20份、泽泻5~10份、诃子5~15份、明矾5~10份、黄柏5~20份、麦芽15~50份；
所述的黄芪20份、黄连10份、乌梅10份、白头翁30份、茯苓30份、黄芩20份、金银花20份、大青叶10份、葛根30份、千里光20份、神曲15份、甘草20份、山楂15份、泽泻10份、诃子10份、明矾10份、黄柏10份、麦芽25份；
步骤1）中所述的浓缩至每毫升滤液中0.4~0.5g生药；
步骤2）中所述的接种比例为1:4；
步骤3）中所述的发酵在发酵罐中进行，转速100~300rpm、时间36~60h、温度36~38℃；
所述的转速200rpm、时间48h、温度37℃；
步骤3）中所述的接种量为4%。
发明详述：
葛根具有发表解肌，生津止渴，升阳止泻，使表解里和；白头翁具有清热解毒，凉血止痢，对肠粘膜有收敛作用，故能止泻，是治疗湿热泄泻的要药；黄连具有清热燥湿，肠黄作泻，热痢后重，尤以肠胃湿热之证为宜；黄芩具有清热燥湿，湿热泻痢；黄柏具有湿热泄泻，治疗泻痢；金银花具有清热解毒，治热毒泻痢，常与黄芩为伍治疗热毒泄泻，兼有宣散作用；神曲具有消食化积，健胃和中，治疗脾虚泄泻；茯苓具有脾虚湿困，水湿停滞，既能健脾又能利湿，能补能泻；乌梅具有涩肠止泻，用于久泻久痢；诃子具有涩肠止泻，用于久泻久痢；泽泻具有能利水渗湿，治疗泻痢不止；黄芪具有补气，适用于脾肺气虚，泄泻；大青叶具有清热凉血，胃热毒；千里光具有清热、解毒，菌痢，泄泻；甘草具有性温，补脾胃，治脾胃虚弱，还具有调和诸药的作用，许多配方配伍本品；山楂具有消食健胃，治疗食积不消，止泻；麦芽具有消食和中，治疗脾胃虚弱；明矾具有收敛止血，可用于久泻不止，刺激胃黏膜引起反射性呕吐，制止肠黏膜分泌，因而具有止泻效果。
本发明提供的一种治疗鸡大肠杆菌病中药组合物，以清热、凉血、解毒，涩肠止泻，久泻久痢，调和诸药，兼调肠胃湿热，表里兼治；本发明中诸药合用共成清热止泻之剂，药物经有机组合，辩证配伍和相互辅佐，增强了该方清热燥湿止泻的功效，从而达到治愈鸡大肠杆菌病的目的；所述的中药组合物被保加利亚乳杆菌、植物乳杆菌发酵，产生的发酵液，能维护肠道微生态平衡、提高机体免疫力，并具有有抑菌消炎的效果；在选用本发明治疗鸡的大肠杆菌病时，抓住“湿、热、止泻、久痢”四点，所谓“热”主要表现为发热、拉白色稀粪便，气味恶臭难闻，并且病鸡精神沉郁、眼半睁半闭，喜欢趴着，个别鸡卧地不起，站不起来，舌苔发黄，脉滑而数，食欲减退等，如果符合上面这些症状，则可以认为是“湿热”所致的腹泻；应用要点：拉白稀、兼湿热、舌苔发白、脉数。
本发明提供了一种治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液，它是由下述方法制备的：1）称取黄芪、黄连、乌梅、白头翁、茯苓、黄芩、金银花、大青叶、葛根、千里光、神曲、甘草、山楂、泽泻、诃子、明矾、黄柏、麦芽，加水，加热30~50min，过滤，收集滤液，浓缩，即为水提中药液；2）保加利亚乳杆菌与植物乳杆菌活化，按1:1~6接种在MRS液体培养基，36~38℃下恒温培养20~30h，得到复方益生菌制剂；3）将步骤2）的复方益生菌制剂接种到步骤1）的水提中药液中，接种量为中药液体积分数的3~5%，发酵，得到治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液；本发明发酵液的抑菌效果好，能维护肠道微生态平衡、提高机体免疫力，并具有抑菌消炎的效果。
附图说明
图1 保加利亚乳杆菌、植物乳杆菌复方制剂生长曲线。
具体实施方式
实施例1 复方益生菌制剂配比优化工艺
将保加利亚乳杆菌、植物乳杆菌分别活化：从-80℃冰箱取出保加利亚乳杆菌、植物乳杆菌菌种，用手将离心管预热将其菌种溶解，然后在超净工作台内取出溶解的两种菌种100µL，分别接种于含5mLMRS液体培养基的两个试管内，37℃培养12h，然后在培养后的试管各取出100µL菌液，分别加入含5mLMRS液体培养基的两个试管，在37℃培养12h，然后放入4℃冰箱备用。
按保加利亚乳杆菌与植物乳杆菌比例分别为1:1、1:2、2:1接种在MRS液体培养基（乳酸细菌培养基）上，37℃培养箱中恒温培养12h，培养结束后用分光光度计于600nm测定OD值，结果显示1:2时 OD值最大；将保加利亚乳杆菌与植物乳杆菌分别按1:2、1:3、1:4、1:5、1:6比例，37℃培养箱中恒温培养24h，培养结束后用分光光度计于600nm测定OD值，比较大小，结果显示1:4时OD值最大，因此将保加利亚乳杆菌与植物乳杆菌1：4比例作为复方益生菌制剂的最佳比例；保加利亚乳杆菌与植物乳杆菌1：4时培养生长曲线见图1。
实施例2 治疗鸡大肠杆菌病的中药液的制备
称量黄芪20g、黄连10g、乌梅10g、白头翁30g、茯苓30g、黄芩20g、金银花20g、大青叶10g、葛根30g、千里光20g、神曲15g、甘草20g、山楂15g、泽泻10g、诃子10g、明矾10g、黄柏10g、麦芽25g,共315g，装入1000mL烧杯，浸泡30min，加4倍量即1260mL水（4倍是指中药组合物重量的倍数），倒入煎药壶中，加热40min，2层纱布过滤，收集滤液倒入指定的瓶中；药渣再加入2倍量蒸馏水，在煎药壶中加热30min，2层纱布过滤，滤液倒入刚才的滤液瓶中；剩下的药渣再加2倍量蒸馏水，在煎药壶中加热30min，2层纱布过滤，滤液倒入上两次的瓶中，中药液共计700mL，相当于每毫升滤液中生药量为0.45g。
实施例3治疗鸡大肠杆菌病的中药液的制备
称量黄芪10g、黄连10g、乌梅15g、白头翁20g、茯苓50g、黄芩15g、金银花10g、大青叶15g、葛根20g、千里光20g、神曲20g、甘草10g、山楂10g、泽泻10g、诃子5g、明矾5g、黄柏20g、麦芽40g,共315g，装入1000mL烧杯，浸泡30min，加4倍量即1260mL水（4倍是指中药组合物重量的倍数），倒入煎药壶中，加热40min，2层纱布过滤，收集滤液倒入指定的瓶中；药渣再加入2倍量蒸馏水，在煎药壶中加热30min，2层纱布过滤，滤液倒入刚才的滤液瓶中；剩下的药渣再加2倍量蒸馏水，在煎药壶中加热30min，2层纱布过滤，滤液倒入上两次的瓶中，中药液共计700mL，相当于每毫升滤液中生药量为0.45g。
实施例4治疗鸡大肠杆菌病的中药液的制备
称量黄芪30g、黄连5g、乌梅6g、白头翁50g、茯苓20g、黄芩25g、金银花30g、大青叶5g、葛根50g、千里光20g、神曲10g、甘草6g、山楂20g、泽泻5g、诃子8g、明矾5g、黄柏5g、麦芽15g,共315g，装入1000mL烧杯，浸泡30min，加4倍量即1260mL水（4倍是指中药组合物重量的倍数），倒入煎药壶中，加热40min，2层纱布过滤，收集滤液倒入指定的瓶中；药渣再加入2倍量蒸馏水，在煎药壶中加热30min，2层纱布过滤，滤液倒入刚才的滤液瓶中；剩下的药渣再加2倍量蒸馏水，在煎药壶中加热30min，2层纱布过滤，滤液倒入上两次的瓶中，中药液共计700mL，相当于每毫升滤液中生药量为0.45g。
实施例5 治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液的制备
复方益生菌制剂制备方法按实施例1制备，水提中药液按实施例2制备。
本实验采取韩国生产的2.5L发酵罐进行益生菌发酵，参数有：温度、转速、复方益生菌接种量、中药量、发酵时间，还有pH、通气量不在设定范围之内。通过发酵罐进行发酵，参数设定为：转速200rpm、时间48h、温度37℃、复方益生菌制剂接种量20mL、水提中药液480mL，进行发酵，得到治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液。
实施例6 治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液的效果验证
鸡大肠杆菌病，病变在肠，其病性湿热证，其临床特征表现排白色新粪便，治疗的关键要清热燥湿，恢复小肠的正常传导功能。
选50只体型、体重相当的健康鸡，随机分成5组，其中一组作为对照组；其余4组作为实验组，通过人工复制鸡大肠杆菌病，在实验动物出现大肠杆菌病症状后，分别喂饲中药（实施例2制备的治疗鸡大肠杆菌病的中药液）、西药（环丙沙星）、实施例3制备的益生菌复方中药发酵液、蒸馏水，作为中药组、西药组、发酵液组、感染组；治疗7天后，分别测定5组实验动物的盲肠SIgA（结果见表1）、十二指肠、盲肠病理组织切片、血清抗氧化指标（丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶）；盲肠SIgA结果见表1，丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶结果分别见表2、3、4；表1~4中，同列肩标小写字母相同者差异不显著（P>0.05）、不同者差异显著（P<0.05）,大写字母不同者差异极显著（P<0.01）；
结果显示，发酵液的抑菌效果高于复方中药的抑菌效果，但是略低于西药组治疗效果；综合药物毒副作用等因素，益生菌复方中药发酵液更优。
所述的发酵液的服用方法：
1）药量：发酵液和水放在一起，自由饮水服用；
2）服药时间：每天上午一次，中午一次，晚上一次。
3）药温控制：温服；
4）禁忌事项：发酵液治疗期间，加强对鸡的饲养管理，保证充足的饮水，定时定点饲喂颗粒料。
在一个月的人工复制和治疗过程中，治疗1周，治愈8只，好转1只，治愈率84.3%，有效率100%；
疗效判定标准：主要依据鸡腹泻症状是否消失，服药7天为一疗程；
具体疗效分为三级：治愈-鸡大肠杆菌病拉白稀症状完全消失；好转-鸡大肠杆菌病拉白稀症状部分消失；无效-鸡的大肠杆菌病拉白稀症状毫无消失。

Claims (7)

1.治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液，它是由下述方法制备的：
1）称取黄芪、黄连、乌梅、白头翁、茯苓、黄芩、金银花、大青叶、葛根、千里光、神曲、甘草、山楂、泽泻、诃子、明矾、黄柏、麦芽，加水，加热30~50min，过滤，收集滤液，浓缩，即为水提中药液；
2）活化的保加利亚乳杆菌和植物乳杆菌按1:1~6接种在MRS液体培养基，36~38℃下恒温培养20~30h，得到复方益生菌制剂；
3）将步骤2）的复方益生菌制剂接种到步骤1）的水提中药液中，接种量为中药液体积分数的3~5%，发酵，得到治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液；
步骤1）中所述的黄芪10~30份、黄连5~10份、乌梅6~15份、白头翁13~50份、茯苓13~50份、黄芩15~25份、金银花10~30份、大青叶5~15份、葛根13~50份、千里光15~25份、神曲10~20份、甘草6~30份、山楂10~20份、泽泻5~10份、诃子5~15份、明矾5~10份、黄柏5~20份、麦芽15~50份。
2.根据权利要求2所述的治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液，其特征在于：所述的黄芪20份、黄连10份、乌梅10份、白头翁30份、茯苓30份、黄芩20份、金银花20份、大青叶10份、葛根30份、千里光20份、神曲15份、甘草20份、山楂15份、泽泻10份、诃子10份、明矾10份、黄柏10份、麦芽25份。
3.根据权利要求1、或2所述的治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液，其特征在于：步骤1）中所述的浓缩至每毫升滤液中0.4~0.5g生药。
4.根据权利要求3所述的治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液，其特征在于：步骤2）中所述的接种比例为1:4。
5.根据权利要求4所述的治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液，其特征在于：步骤3）中所述的发酵在发酵罐中进行，转速100~300rpm、时间36~60h、温度36~38℃。
6.根据权利要求5所述的治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液，其特征在于：所述的转速200rpm、时间48h、温度37℃。
7.根据权利要求6所述的治疗鸡大肠杆菌病的益生菌复方中药发酵液，其特征在于：步骤3）中所述的接种量为4%。
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