CN108303363B - 一种血细胞分析方法及使用该方法的血细胞分析仪 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种血细胞分析方法及使用该方法的血细胞分析仪，该方法包括使用试剂处理血液样本的反应池，加注各种试剂和样本的液路***，用于对处理后的样本中的血细胞进行检测的激光散射检测***。该方法利用更加合理的流程，使得在一个反应池中，利用分时复用技术，可以得到可靠的白细胞五分类结果，同时节省测量时间，简化仪器复杂度，降低成本。
Description
技术领域
本发明涉及一种血细胞分析方法及血细胞分析仪。
背景技术
血细胞分析仪主要用于检测人体外周血中各血液细胞的含量，主要包括红细胞总数，血小板总数，白细胞总数，白细胞的五个亚群等。其中白细胞亚群分别为淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞。另外血细胞分析仪还可以检测血液中红细胞的血红蛋白浓度（HGB）。以及基于上述参数的衍生参数。
目前市场上的血细胞分析仪大部分采用双通道方案来实现白细胞的五分类：采用两个反应池，分别进行白细胞四分类（DIFF）反应和嗜碱性粒细胞反应（BASO），然后分别送入同一个光电检测单元或者各自独立的相应检测单元。在DIFF通道，试剂将溶解血液中的红细胞，并处理血液中的白细胞，使得白细胞的四分类（淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞）在大小和内部复杂程度两个维度上出现聚集和分类现象。将DIFF通道的待测样本送入激光散射检测单元后，该单元检测上述两个维度的信息，从而对白细胞进行四分类。在BASO通道，试剂将溶解血液中的红细胞，并使得白细胞中处嗜碱性粒细胞之外的其他细胞全部发生皱缩，送入检测单元（该检测单元可以是激光散射检测单元，如图1所示；也可能是电阻抗法检测单元，如图2所示）后，就可以得到嗜碱性粒细胞的计数值。两个通道的结果结合后，可以计算获得完整的白细胞五分类信息。
在这种血细胞分析仪中，一般配备单独的红细胞检测通道，采用电阻抗法检测红细胞和血小板的计数值，一般在BASO通道,或者单独的专用通道检测血液中的血红蛋白含量。其检验流程如图1、图2所示。
就白细胞的分类检测来说，需要两个单独的检测通道。优点是能够准确可靠的进行白细胞五分类，并可以在BASO检测通道中获得HGB的检测结果。但其缺点比较明显：需要进行两个反应，用血量多，试剂种类多；需要两个反应池，两套样本液输送管路，仪器体积大，结构复杂，成本高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种血细胞分析方法及使用该方法的血细胞分析仪，既能获得可靠的白细胞五分类结果，又能减少血液和试剂用量，简化仪器结构，缩小仪器体积，并降低仪器成本。
根据本发明的第一个方面，本发明提供一种血细胞分析方法，包括使用试剂处理血液样本的反应池，加注各种试剂和样本的液路***，用于对处理后的样本中的血细胞进行检测的激光散射检测***，分析方法的流程如下：
将血液样本及第一组试剂注入反应池，所述第一组试剂用于稀释血液样本，稀释后得到稀释样本液；
将适量的稀释样本液抽离所述反应池，并暂时存储；
将第二组试剂注入反应池，并与反应池中剩余的样本稀释液发生反应，得到第二样本液；
将适量的第二样本液输送到所述的激光散射检测***进行白细胞分类检测；
将反应池中剩余的第二样本液排空，并清洗第二样本液在输送过程中经过的相关液路和激光散射检测***，但不清洗反应池；
将适量的暂时存储的稀释样本液和第三组试剂注入反应池，发生反应后得到第三样本液。
其中的反应池仅有一个，其第二样本液用于白细胞四分类检测，适量的所述第三样本液被输送至所述激光散射检测***用于嗜碱性粒细胞的分类检测，且所述的第三样本液还用于血红蛋白检测。
该方法利用第二样本液和/或第三样本液的激光散射检测数据进行白细胞总数计数。
第二样本液进入激光散射检测***进行检测、反应池中第二样本液排空、清洗第二样本液流经管路和激光散射检测***、加注第三组试剂和稀释样本液进入反应池等四个动作可以部分同时或者分时进行。
所述的第二样本液也可直接用于白细胞五分类检测，在这种情况下所述的第三样本液仅用于血红蛋白检测。
根据本发明的第二个方面，本发明提供一种血细胞分析仪，其特征在于包括：
仅有一个用于将血液样本与试剂混合，制备成样本液的反应池；仅有一个用于检测白细胞的激光散射检测装置；具有相应的液路装置，用于加注、输送样本液和/或试剂；具有相应的控制装置，其与液路装置、激光散射检测装置等结合，用于按照权利要求1~9所述的方式制备样本液，检测样本液和清洗、排空管路。
其中液路装置包括注射泵，正负气压源，DP泵等液气路动力源和相关可控阀，管路等。
其中的激光散射检测装置至少包括半导体激光器，激光整形用非球面透镜等。
附图说明
图1为一种现有技术的血细胞分析方法流程图；
图2为另一种现有技术的血细胞分析方法流程图；
图3为单通道血细胞分析方法1流程图；
图4为单通道血细胞分析方法2流程图；
图5为本发明提供的血液分析方法流程图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明做进一步的详细说明。
为了克服双通道方案仪器结构复杂，体积大，成本高的缺点，最容易想到的方案为单通道法。即采用一个白细胞反应池，利用更加优化的试剂成分，只通过一次反应，得到的样本液经激光散射检测***后即可将白细胞进行五分类，然后利用分时复用技术，在同一个反应池中检测血液中的HGB含量。流程如图3所示。
或者采用一个白细胞反应池，先加入DIFF试剂，完成反应后进行激光散射检测，完成检测后排空，清洗管路，然后加入BASO试剂和相应的样本，进行HGB检测和激光散射检测。流程如图4所示。
这两种方案都是利用分时复用技术，将两组不同的试剂反应串行进行，优点是至需要一套液路***，一套激光散射检测***，缺点是需串行进行，仪器单次测试的时间会更长。更重要的是，对第一种方案来说，由于嗜碱性粒细胞的特殊性，想要在一次反应中将其从其他白细胞中分类出来比较困难，很难将二者彻底区分开，这就导致测量结果不够准确。
本发明提供的分析方法，事实上是在研究DIFF试剂和BASO试剂特点的基础上，对分时复用单通道法第二种方案的一种优化。
对于上述血细胞分析方法来说，其DIFF试剂的主要作用是溶解血液样本中的红细胞，并处理血液样本中的白细胞，使得白细胞的四分类（淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞）在大小和内部复杂程度两个维度上出现不同成都聚集和并分为明显的四类，事实上并为对所有白细胞产生明显的皱缩作用。而BASO试剂的主要作用是，利用嗜碱性粒细胞的特性，使得除嗜碱性粒细胞之外的所有白细胞发生明显的皱缩，使其体积变小。所以从原理上来说，在BASO试剂发生作用时，即使样本中有少许DIFF试剂残留，也不会对检测结果产生影响。
正是基于上述原理，本发明提出一种全新的优化的血细胞分析方法，其流程图如图5所示，下面结合图示将详细介绍该方法。
第一步先吸取样本，然后将该样本加入白细胞反应池，同时加入第一组试剂，该组试剂的主要功能是对血液样本进行稀释，以便后续处理完成的样本液具有合适的稀释比。处理完成之后的稀释样本液会被分成三分，其中一份留存在白细胞反应池，一部分注入红细胞反应池，一部分暂存在样本液吸取管路中。
在白细胞反应池中，留存有已定体积的稀释样本液，再往白细胞反应池中加入第二组试剂，所述的第二组试剂可以是一种或者多种试剂。第二组试剂与稀释样本液充分混匀，并且发生相应的化学反应后，形成待测的第二样本液。将适量的第二样本液输送至激光散射检测单元进行检测，测量后可以对白细胞进行DIFF四分类。待第二样本液输送完成后，即排空白细胞反应池，该动作可以与激光散射单元检测第二样本液的动作同时或者分时进行。
排空白细胞反应池后，依据上述原理，不需要对该反应池进行清洗，即可将样本液吸取管路中暂存的稀释样本也注入至排空后的白细胞反应池，同时或者分时注入第三组试剂，所述的第三组试剂可以是一种或者多种试剂。第三组试剂与稀释样本液充分混匀并发生相应的化学反应后，在白细胞反应池中形成第三样本液。
第二样本液检测完成后，即对第二样本液的输送管路和激光散射检测单元进行清洗（该单元也可不清洗），以避免交叉污染，清洗管路动作与第三样本液的制备动作可以同时或者分时进行。
待第三样本液制备完成，第二样本液输送管路清洗完成后，将适量的第三样本液输送至激光散射检测单元，如果之前没有清洗激光散射检测单元，则在输送的同时，利用管路中的试剂和输送的动力源对检测单元进行清洗，若果之前已经清洗激光散射检测单元，则直接输送第三样本液至激光散射检测单元。
第三样本液进入激光散射检测单元后，该单元将检测白细胞中的嗜碱性粒细胞含量，与之前得到的DIFF检测结果相结合，即可得到血液中白细胞的五分类结果。
在白细胞反应池中的第三样本液的制备过程中，或者制备完成后，及可启动安装在白细胞反应池上的HGB检测装置，进行血液中HGB含量的检测，该动作可以与第三样本液输送至激光散射检测单元的动作同时或者分时进行。
在红细胞反应池中的相关流程动作完全独立，与白细胞反应池中的反应或者动作无关。当稀释样本液注入红细胞反应池中后，同时或者分时注入红细胞试剂，一般来说，该试剂的主要作用是对血液进行稀释。待充分混匀并发生反应后，红细胞反应池中的红细胞样本液制备完成，该样本液具有合适的稀释比。然后启动安装在红细胞反应池上的电阻抗法检测单元，同时有相关液气路配合，完成红细胞样本液的检测。该检测将得到血液中红细胞和血小板的相关参数。
本发明同时提供一种使用上述血细胞分析方法的血细胞分析仪：其仅有一个白细胞反应池用于检测白细胞五分类和HGB；仅有一个激光散射检测单元用于检测样本液中细胞的大小的内部复杂成度，即细胞对激光的散射情况；仅有一个红细胞反应池检测红细胞和血小板含量；
其含有相关的液路***和控制***，以使得整个样本和试剂的处理流程，各个检测单元的工作流程，按照上述本发明提供的方式运行。
以上内容是对本发明实施例的进一步详细说明，不能认定本发明只限于上述说明。对于本领域的普通技术人员，经简单改变或者替换即可得出的变形，在不脱离本发明构思的前提下，也应认为属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种血细胞分析方法，包括使用试剂处理血液样本的反应池，加注各种试剂和样本的液路***，用于对处理后的样本中的血细胞进行检测的激光散射检测***，其特征在于：
将血液样本及第一组试剂注入反应池，所述第一组试剂用于稀释血液样本，稀释后得到稀释样本液；所述稀释样本液分成三份，其中一份留存在白细胞反应池，一部分注入红细胞反应池，一部分暂存在样本液吸取管路中；
将适量的稀释样本液抽离所述反应池，并暂时存储；
将第二组试剂注入反应池，并与反应池中剩余的样本稀释液发生反应，得到第二样本液；所述的第二样本液用于白细胞四分类检测；
将适量的第二样本液输送到所述的激光散射检测***进行白细胞分类检测；
将反应池中剩余的第二样本液排空，并清洗第二样本液在输送过程中经过的相关液路和激光散射检测***，但不清洗反应池；
将适量的暂时存储的稀释样本液和第三组试剂注入反应池，发生反应后得到第三样本液；所述第三样本液被输送至所述激光散射检测***用于嗜碱性粒细胞的分类检测。
2.如权利要求1所述的血细胞分析方法，其特征在于：所述的反应池仅有一个。
3.如权利要求1或2所述的血细胞分析方法，其特征在于：所述的第三样本液还用于血红蛋白检测。
4.如权利要求1或2所述的血细胞分析方法，其特征在于：利用第二样本液和/或第三样本液的激光散射检测数据进行白细胞总数计数。
5.如权利要求1所述的血细胞分析方法，其特征在于：第二样本液进入激光散射检测***进行检测、反应池中第二样本液排空、清洗第二样本液流经管路和激光散射检测***、加注第三组试剂和稀释样本液进入反应池四个动作部分同时或者分时进行。
6.如权利要求1或2所述的血细胞分析方法，其特征在于：所述的第二样本液用于白细胞五分类检测。
7.如权利要求1或2或4所述的血细胞分析方法，其特征在于：所述的第三样本液用于血红蛋白检测。
8.一种血细胞分析仪，其特征在于包括：
仅有一个用于将血液样本与试剂混合，制备成样本液的反应池；
仅有一个用于检测白细胞的激光散射检测装置；
液路装置，用于加注、输送样本液和/或试剂；
控制装置，其与液路装置、激光散射检测装置结合，用于按照权利要求1～7任一项所述的方法制备样本液，检测样本液和清洗、排空管路。
9.如权利要求8所述的血细胞分析仪，其特征在于：所述的液路装置包括注射泵，正负气压源，DP泵的液气路动力源中的若干种，和相关管路，可控阀。
10.如权利要求8或9所述的血细胞分析仪，其特征在于：所述的激光散射检测装置至少包括半导体激光器，激光整形用非球面透镜。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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