CN108254241A - 一种糖化白蛋白血液样本处理液及其应用 - Google Patents

一种糖化白蛋白血液样本处理液及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及生化检测技术领域，公开了一种糖化白蛋白血液样本处理液及其应用。本发明所述处理液包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1包括缓冲液、血细胞抗体和防腐剂；所述试剂R2包括缓冲液、氧化剂、铁***、稳定剂和防腐剂，其中所述氧化剂为硫酸铜、硝酸铜或氯化铜。本发明改良试剂成分，通过血细胞抗体、适宜的氧化剂、铁***等组分，有效去除了血细胞、胆红素以及L‑抗坏血酸等血液样本中的干扰物质，保证了糖化白蛋白检测的准确性，同时能够长期保持这种优异的抗干扰能力。

Description

一种糖化白蛋白血液样本处理液及其应用
技术领域
本发明涉及生化检测技术领域，具体涉及一种糖化白蛋白血液样本处理液及其应用。
背景技术
人体中的葡萄糖与血清蛋白的N-末端发生非酶促的糖基化反应，其中90％与血清蛋白链内第189位赖氨酸结合，形成高分子的酮胺结构，总称为糖化血清蛋白，其中90％以上为糖化白蛋白。因此，糖化白蛋白(Glycated Albumin,GA)可以反映糖化血清蛋白的总体水平。而在糖尿病的诊断与监测中，糖化蛋白质具有重要意义。
糖化白蛋白(glycatedalbumin,GA)是临床上血糖监测的指标之一，由于白蛋白在血液中的半衰期较短，所以在2-4周内即可观察到糖化白蛋白的变化，对于评价糖尿病患者近期血糖控制情况及反映短期内血糖水平的变化具有较高的临床价值。
L-抗坏血酸(又称维生素C)和胆红素是体外诊断技术中较常见的干扰物质，因此，在现有的糖化白蛋白试剂盒中普遍加有铁***和维生素C氧化酶，但是由于糖化白蛋白试剂盒内含有参与反应的蛋白酶，会降解试剂盒内部添加的维生素C氧化酶，从而影响试剂盒抗维生素C干扰的性能。
现有专利CN104164473A公开了一种糖化白蛋白酶法检测试剂盒，其加入了乙酸钙、乙酸铜、胆汁酸、三水合亚铁***等多种去除干扰物质的组分，避免采用维生素C氧化酶。但是，采用上述组分面临一个稳定性较差的新问题，即在保存了较长时间后，去除干扰物质的能力下降，使得检测结果出现偏差。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种糖化白蛋白血液样本处理液，使其具有更佳的去除干扰物质的能力以及长期的稳定性。
为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：
一种糖化白蛋白血液样本处理液，包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1包括缓冲液、血细胞抗体和防腐剂；所述试剂R2包括缓冲液、氧化剂、铁***、稳定剂和防腐剂，其中所述氧化剂为硫酸铜、硝酸铜或氯化铜。
针对现有糖化白蛋白试剂盒去除干扰物质的能力不佳以及稳定性较差的问题，本发明改良了血液样本处理液的一些组分，使其能够互相协同作用除去血样样本中常见的干扰物质，并长期保持这种稳定的去干扰能力。
作为优选，所述试剂R1包括20-100mM的缓冲液、10-20g/L的血细胞抗体和0.05-0.1g/L的防腐剂。在本发明具体实施方式中，所述试剂R1由20-100mM的缓冲液、10-20g/L的血细胞抗体和0.05-0.1g/L的防腐剂组成，并可具体选择如下之一：
(1)50mM磷酸盐缓冲液(pH＝7.0)、15g/L血细胞抗体和0.06g/L叠氮钠；
(2)20mM Tris-HCl缓冲液(pH＝7.5)、20g/L血细胞抗体和0.1g/L proclin300；
(3)70mM MOPS缓冲液(pH＝6.5)、10g/L血细胞抗体和0.08g/L krovin300；
作为优选，所述试剂R2包括20-100mM的缓冲液、50-100μM的氧化剂、50-150mM的铁***、1-10g/L的稳定剂和0.05-0.1g/L的防腐剂。在本发明具体实施方式中，所述试剂R2由20-100mM的缓冲液、50-100μM的氧化剂、50-150mM的铁***、1-10g/L的稳定剂和0.05-0.1g/L的防腐剂组成，并可具体选择如下之一：
(1)50mM磷酸盐缓冲液(pH＝7.5)、50μM氯化铜、100mM亚铁***、5g/L甘氨酸和0.08g/L叠氮钠；
(2)20mM Tris-HCl缓冲液(pH＝6.5)、75μM硫酸铜、50mM亚铁***、10g/L甘露醇和0.1g/L proclin300；
(3)70mM MOPS缓冲液(pH＝7.0)、75μM硝酸铜、150mM亚铁***、2g/L牛血清蛋白和0.05g/L krovin300；
具体地，本发明所述缓冲液均为磷酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MOPS缓冲液的一种或两种以上，所述缓冲液的pH值为6.5-7.5；所述防腐剂均为叠氮钠、proclin300或krovin300/400；所述稳定剂为甘露醇、甘氨酸、牛血清白蛋白、吐温-80、聚乙二醇等的一种或两种以上。
与市售的糖化白蛋白试剂盒相比，本发明处理液具备更佳的去除胆红素以及L-抗坏血酸的能力；同时，与对照的处理液相比，本发明处理液在放置了10个月后，去除干扰物质的能力依然没有显著变化，而对照处理液造成了检测结果出现7-17％的偏差，表明其去除干扰物质的能力已经下降，稳定性较差。
基于上述的优异效果，本发明提出了所述处理液在检测糖化白蛋白或制备检测糖化白蛋白试剂盒中的应用。
依据应用，本发明提供了一种检测糖化白蛋白的方法，待测血液样本加入所述处理液的试剂R1静置，然后取上清液加入所述处理液的试剂R2处理，然后采用糖化白蛋白检测反应试剂进行检测。
更为具体地，4mL待测血液样本加入40μL的试剂R1，静置5min后，取上清液(血浆或者血清)1mL加入30μL的R2试剂处理5min，然后采用糖化白蛋白检测反应试剂进行检测。
本发明还提供了一种检测糖化白蛋白的试剂盒，包括所述处理液和糖化白蛋白检测反应试剂。
其中，糖化白蛋白检测反应试剂在本领域有较为公知的试剂，并且其反应原理均属于公知常识，本领域技术人员能够轻易获得这些反应试剂。
由以上技术方案可知，本发明改良试剂成分，通过血细胞抗体、适宜的氧化剂、铁***等组分，有效去除了血细胞、胆红素以及L-抗坏血酸等血液样本中的干扰物质，保证了糖化白蛋白检测的准确性，同时能够长期保持这种优异的抗干扰能力。
具体实施方式
本发明公开了一种糖化白蛋白血液样本处理液及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述处理液及其应用已经通过实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述处理液及其应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明中，采用血细胞抗体(多抗或单抗，可市售获得，例如可购自上海樊克生物、北京雅安达生物)可以有效地与红细胞等结合，诱导血细胞沉降，有效促使血细胞和血浆(血清)的分离，有利于后续去除其他干扰物质；适宜的氧化剂将样本中的L-抗坏血酸氧化，消除了L-抗坏血酸对检测的影响；铁***与胆红素结合生成胆绿素，有效去除了胆红素对测试的影响。并且，三种有效手段的同时使用能够增强抗干扰的能力，且实现了长期的稳定性。
以下就本发明所提供的一种糖化白蛋白血液样本处理液及其应用做进一步说明。
实施例1：本发明所述处理液
试剂R1：
50mM磷酸盐缓冲液(pH＝7.0)、15g/L血细胞抗体和0.06g/L叠氮钠；
试剂R2：
50mM磷酸盐缓冲液(pH＝7.5)、50μM氯化铜、100mM亚铁***、5g/L甘氨酸和0.08g/L叠氮钠；
实施例2：本发明所述处理液
试剂R1：
20mM Tris-HCl缓冲液(pH＝7.5)、20g/L血细胞抗体和0.1g/L proclin300；
试剂R2：
20mM Tris-HCl缓冲液(pH＝6.5)、75μM硫酸铜、50mM亚铁***、10g/L甘露醇和0.1g/L proclin300；
实施例3：本发明所述处理液
试剂R1：
70mMMOPS缓冲液(pH＝6.5)、10g/L血细胞抗体和0.08g/L krovin300；
试剂R2：
70mM MOPS缓冲液(pH＝7.0)、75μM硝酸铜、150mM亚铁***、2g/L牛血清蛋白和0.05g/L krovin300；
实施例4：抗干扰能力的对比
1、抗L-抗坏血酸的消除对比
对照方案：采用专利CN104164473A中的GA试剂1(说明书0030-0035段，去除4-AAP和蛋白酶K)处理，采用常规的酶法检测；
本发明方案：经过实施例1处理液处理后，采用与对照方案相同的常规酶法检测；
配制GA浓度为20g/L标准品样本，分别加入0、5、10、20、30mg/dL的L-抗坏血酸作为一系列干扰样本。
分别利用对照方案和本发明方案进行测试，每个样本测试三次，分别取平均值，检测结果如表1所示：
表1
由表1可知，经实施例1处理液处理过的样本，含不同浓度L-抗坏血酸的样本测试结果相差不大。而对照方案下，不同浓度的L-抗坏血酸对测试结果影响较大，偏差随着L-抗坏血酸浓度的增加而逐渐增大。
此外，实施例2和3处理液处理过的样本，含不同浓度L-抗坏血酸的样本测试结果相差不大，偏差较小，优于对照方案。
2、抗胆红素的消除对比
对照方案和本发明方案同1中方案。
配制GA浓度为20g/L标准品样本，分别加入0、5、7.5、10、15mg/dL的胆红素作为一系列干扰样本。
分别利用对照方案和本发明方案进行测试，每个样本测试三次，分别取平均值，检测结果如表2所示：
表2
由表2可知，经实施例1处理液处理过的样本，含不同浓度胆红素的样本测试结果相差不大。而对照方案下，不同浓度的胆红素对测试结果影响较大，偏差随着胆红素浓度的增加而逐渐增大。
此外，实施例2和3处理液处理过的样本，含不同浓度胆红素的样本测试结果相差不大，偏差较小，优于对照方案。
实施例5：稳定性的对比
对照方案和本发明方案同实施例4的1中方案，在此基础上，将两个方案中的处理液在相同的常温环境下放置10个月，然后开始检测对L-抗坏血酸的消除能力。
配制GA浓度为20g/L标准品样本，分别加入0、5、10、20、30mg/dL的L-抗坏血酸作为一系列干扰样本。
分别利用对照方案和本发明方案进行测试，每个样本测试三次，分别取平均值，检测结果如表3所示：
表3
如表3所示，对照的处理液经10个月放置后，去除L-抗坏血酸的性能进一步降低，当L-抗坏血酸浓度高达10mg/dL时，测试结果干扰超过10％。而本发明样本处理液长期放置后，稳定性较好，放置10个月后，仍能去除30mg/dL的抗坏血酸，测试结果干扰未超过10％，抗L-抗坏血酸干扰性能较好。同时，实施例2和实施例3也表现出与实施例1相类似的优异效果。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种糖化白蛋白血液样本处理液，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1包括缓冲液、血细胞抗体和防腐剂；所述试剂R2包括缓冲液、氧化剂、铁***、稳定剂和防腐剂，其中所述氧化剂为硫酸铜、硝酸铜或氯化铜。
2.根据权利要求1所述处理液，其特征在于，所述试剂R1包括20-100mM的缓冲液、10-20g/L的血细胞抗体和0.05-0.1g/L的防腐剂。
3.根据权利要求1所述处理液，其特征在于，所述试剂R2包括20-100mM的缓冲液、50-100μM的氧化剂、50-150mM的铁***、1-10g/L的稳定剂和0.05-0.1g/L的防腐剂。
4.根据权利要求1-3任意一项所述处理液，其特征在于，所述缓冲液均为磷酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MOPS缓冲液的一种或两种以上。
5.根据权利要求1-3任意一项所述处理液，其特征在于，所述防腐剂均为叠氮钠、proclin300或krovin300/400。
6.根据权利要求1或3所述处理液，其特征在于，所述稳定剂为甘露醇、甘氨酸、牛血清白蛋白、吐温-80、聚乙二醇等的一种或两种以上。
7.权利要求1-6任意一项所述处理液在检测糖化白蛋白或制备检测糖化白蛋白试剂盒中的应用。
8.一种检测糖化白蛋白的方法，其特征在于，待测血液样本加入权利要求1-6任意一项所述处理液的试剂R1静置，然后取上清液加入权利要求1-6任意一项所述处理液的试剂R2处理，然后采用糖化白蛋白检测反应试剂进行检测。
9.一种检测糖化白蛋白的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-6任意一项所述处理液和糖化白蛋白检测反应试剂。
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