CN108159069A

CN108159069A - 灰树花多糖f2在制备治疗高脂血症药物、预防或延缓动脉粥样硬化药物中的应用

Info

Publication number: CN108159069A
Application number: CN201810079130.7A
Authority: CN
Inventors: 吴清平; 丁银润; 谢意珍; 白丽娟; 肖春
Original assignee: Guangdong Detection Center of Microbiology of Guangdong Institute of Microbiology; Guangdong Yuewei Edible Mushroom Technology Co Ltd
Current assignee: Guangdong Detection Center of Microbiology of Guangdong Institute of Microbiology; Guangdong Yuewei Edible Mushroom Technology Co Ltd
Priority date: 2018-01-26
Filing date: 2018-01-26
Publication date: 2018-06-15

Abstract

本发明公开了一种灰树花多糖F2在制备治疗高脂血症药物、预防或延缓动脉粥样硬化药物中的应用。本发明将灰树花多糖F2灌胃给高脂血症大鼠，发现灰树花多糖F2能够极显著地降低高脂血症大鼠血清TC、TG和LDL‑C含量；基于蛋白质组学研究还发现，灰树花多糖F2还通过上调抗氧化酶SOD1、Prdx‑1和HPX的蛋白表达量和下调HSP60和CPPED1的蛋白表达量而预防和延缓动脉粥样硬化的发生和发展。因此，灰树花多糖F2对高脂血症和动脉粥样硬化具有较好的预防和辅助治疗的作用。为开发治疗高脂血症和动脉粥样硬化的新药打下基础，积极推动降血脂及预防和延缓动脉粥样硬化天然药物活性成分的研究开发。

Description

灰树花多糖F2在制备治疗高脂血症药物、预防或延缓动脉粥样硬化药物中的应用

技术领域：

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种灰树花多糖F2在制备治疗高脂血症药物、预防或延缓动脉粥样硬化药物中的应用。

背景技术：

高脂血症是一种常见和多发的代谢性疾病，由于脂类物质代谢异常使血清中的一种或几种脂质含量高于正常值，常表现为总胆固醇(TC)异常升高的高胆固醇血症、甘油三酯(TG)异常升高的高甘油三酯血症、或TC和TG都异常升高的混合型高脂血症。高脂血症是导致人类脑卒中、心肌梗死等致残、致死性动脉粥样硬化疾病发生的重要危险因素之一，据估计，我国目前中老年人群血脂异常患病人群已达1亿6千万。研究显示，胆固醇每下降1％，心血管疾病发病率下降2至3％，因此，降低血脂尤其是胆固醇水平一直被认为是预防或延缓心脑血管疾病进展的一个重要途径。

近年来在心血管疾病、肝脏疾病等研究中的应用越来越广，许多疾病的原发过程和多数药物靶标均发生在蛋白质水平，在降血脂药物的研究中也渐渐流行。然而几乎很少有研究评价灰树花粗多糖的蛋白组学降血脂效果报道，目前缺乏生物***水平的灰树花多糖药理基础研究，限制了天然食品新药的开发。蛋白质组是基因组所表达产生的所有相应蛋白质。蛋白质组学是研究机体组织细胞中全部蛋白质的科学，是运用2-DE和质谱技术对组织中蛋白质进行大规模平行分离分析，比较样品处理前后组织中蛋白质表达谱的改变，选出样品影响表达的标志物并研究其作用机制。因此，2-DE技术是目前蛋白质组学研究的主流技术之一。Choi等利用2-DE技术检测辣椒碱对肥胖大鼠肝脏蛋白质的差异表达情况。应用考染或银染可视化分离蛋白点，运用计算机软件比较分析凝胶上的蛋白点，选出认为有意义的蛋白点，通过MALDI-TOF-MS进行鉴定。为了证实灰树花调控大鼠肝脏蛋白质的差异表达，我们采用了蛋白质组学中的双向聚丙稀酰胺凝胶电泳(two-dimensionalpolyacrylamide gel electrophoresis，2-DE)结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight MassSpectrometry，MALDI-TOF-MS)技术全面检测了灰树花对高脂血症大鼠肝脏蛋白质的差异表达情况。因此，本申请基于蛋白质组学水平评价了灰树花多糖F2的降血脂功能效果。

发明内容：

本发明的目的是为了克服现有技术中的缺陷，提供一种灰树花多糖F2在制备治疗高脂血症药物、预防或延缓动脉粥样硬化药物中的应用。

本发明的第一个目的是提供灰树花多糖F2在制备治疗高脂血症药物中的应用。

所述的治疗高脂血症药物优选为治疗高胆固醇血症药物或治疗高甘油三酯血症药物。

所述的治疗高胆固醇血症药物优选为具有抑制HMGCR、ACAT2、apoB的mRNA表达水平和下调HMGCR2的蛋白质表达量的治疗高胆固醇血症药物。

所述的治疗高甘油三酯血症药物优选为具有抑制ACC1和FAS的mRNA表达水平的治疗高甘油三酯血症药物。

本发明的第二个目的是提供一种治疗高脂血症药物，其含有有效量的灰树花多糖F2作为活性成分。

本发明的第三个目的是提供灰树花多糖F2在制备预防或延缓动脉粥样硬化药物中的应用。

所述的预防或延缓动脉粥样硬化药物优选为具有上调抗氧化酶SOD1、Prdx-1和HPX的蛋白表达量和下调HSP60和CPPED1的蛋白表达量的预防或延缓动脉粥样硬化药物。

本发明的第四个目的是提供一种预防或延缓动脉粥样硬化药物，其含有有效量的灰树花多糖F2作为活性成分。

该灰树花多糖F2是按照中国专利号：ZL201310733480.8，发明名称：灰树花多糖F2的制备方法及其降血糖功能中公开的方法制备得到的，灰树花多糖F2平均分子量为4.52×10⁵D，多糖含量为95.6％，蛋白含量为3.6％，多糖主要由葡萄糖、甘露糖、木糖、半乳糖、***糖组成，氨基酸组分主要是脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、天冬氨酸(Asp)、赖氨酸(Lys)、丙氨酸(Ala)、谷氨酸(Glu)、苏氨酸(Thr)、甘氨酸(Gly)、精氨酸(Arg)、亮氨酸(Leu)和缬氨酸(Val)，为β-吡喃糖环杂多糖，并且含有糖醛酸。

本发明将灰树花多糖F2灌胃给高脂血症大鼠，测定各组别大鼠血清TC、TG、LDL-C水平，提取各组别大鼠肝脏RNA，应用RNA-Seq技术检测灰树花多糖F2对大鼠肝脏差异基因表达的影响，发现灰树花多糖F2既能有效降低高脂血症大鼠血清TC和LDL-C含量，也能降低血清TG含量，其机理是通过抑制高脂血症大鼠HMGCR、ACAT2、apoB的mRNA表达水平和下调HMGCS2的蛋白质表达量，从而降低血清TC水平，同时通过抑制高脂血症大鼠ACC1和FAS的mRNA表达水平减少甘油三酯的合成，从而降低血清TG水平。基于蛋白质组学研究还发现，灰树花多糖F2还通过上调抗氧化酶SOD1、Prdx-1和HPX的蛋白表达量和下调HSP60和CPPED1的蛋白表达量而预防和延缓动脉粥样硬化的发生和发展。因此，灰树花多糖F2对高脂血症和动脉粥样硬化具有较好的预防和辅助治疗的作用。为开发治疗高脂血症和动脉粥样硬化的新药打下基础，积极推动降血脂及预防和延缓动脉粥样硬化天然药物活性成分的研究开发。

附图说明：

图1是灰树花多糖F2对实验大鼠体重的影响；其中正常代表正常组，模型代表模型组，灰树花多糖F2代表灰树花多糖F2组；^##代表灰树花多糖F2组与模型组比较差异极显著(P<0.01)；

图2是灰树花多糖F2对高脂血症大鼠血清中血脂含量的影响；其中正常代表正常组，模型代表模型组，灰树花多糖F2代表灰树花多糖F2组；^*代表模型组与正常组比较差异显著(P<0.05)，^**代表模型组与正常组比较差异极显著(P<0.01)，^##代表灰树花多糖F2组与模型组比较差异极显著(P<0.01)；

图3是大鼠肝脏组织中蛋白质的2-DE凝胶照片；A：正常组，B：模型组，C：灰树花多糖F2组；

图4是灰树花多糖F2对高脂血症大鼠肝脏相关蛋白mRNA表达的影响；其中control代表正常组，hyperlipidemia代表模型组，Grifola frondosa代表灰树花多糖F2组；^*代表模型组与正常组比较差异显著(P<0.05)，^**代表模型组与正常组比较差异极显著(P<0.01)，^##代表灰树花多糖F2组与模型组比较差异极显著(P<0.01)；

图5是灰树花多糖F2降血脂机理图；其中，与模型组相比，灰树花多糖F2组mRNA表达水平和酶浓度上调；与模型组相比，灰树花多糖F2组mRNA表达水平和酶浓度下调；与模型组相比，灰树花多糖F2组的蛋白质表达量上调；与模型组相比，灰树花多糖F2组的蛋白质表达量下调。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

灰树花多糖F2是按照中国专利号：ZL201310733480.8，发明名称：灰树花多糖F2的制备方法及其降血糖功能中公开的方法制备得到的，灰树花多糖F2平均分子量为4.52×10⁵D，多糖含量为95.6％，蛋白含量为3.6％，多糖主要由葡萄糖、甘露糖、木糖、半乳糖、***糖组成，氨基酸组分主要是脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、天冬氨酸(Asp)、赖氨酸(Lys)、丙氨酸(Ala)、谷氨酸(Glu)、苏氨酸(Thr)、甘氨酸(Gly)、精氨酸(Arg)、亮氨酸(Leu)和缬氨酸(Val)，为β-吡喃糖环杂多糖，并且含有糖醛酸。

一、药理实验

1.1降血脂实验

1.1.1大鼠高脂血症模型的诱导和给药

采用SPF级雄性健康SD大鼠，6周龄，体重120g左右，标记，所有大鼠都按SPF级动物分笼饲养，自由饮水和进食，保持实验室环境卫生、通风良好，温度为18-22℃，相对湿度为50％-60％，12小时光照和黑夜的循环。适应性喂养一周后，将所有大鼠随机分为3组，正常组、模型组、灰树花多糖F2组，除正常组大鼠继续喂食普通饲料外，其它组大鼠都改为喂食高脂高胆固醇饲料。采取预防模式给药：即高脂高胆固醇饲料造模与给药同时进行。每天定时对灰树花多糖F2组大鼠灌胃相应的灰树花多糖F2一次，每只大鼠灌胃剂量为100mg/kgBW，正常组和模型组大鼠灌胃等体积的蒸馏水。所有大鼠均予以常规的自由饮水和进食，实验进行4周。实验期间每周称量一次体重，每天观察大鼠摄食，自主活动情况。

1.1.2实验动物的取材和血脂测定

最后一天灌胃后，所有大鼠禁食不禁水12小时后，断颈取血，室温下血液自然凝固20分钟，3000r/min离心20分钟，仔细收集上清液即血清，并将血清存放于4℃冰箱中隔天用，取血后赶快解剖大鼠，迅速取出肝脏，用生理盐水清洗肝脏上的血污并用滤纸吸干上面的生理盐水，然后将其分成两份保存于冻存管中，冻存管置于液氮中速冻后存放于-80℃冰箱中备用。

1.2双向电泳(2-DE)的实验流程

1.2.1大鼠肝脏蛋白质的提取制备及总蛋白的定量

1.2.1.1蛋白质的提取

从-80℃冰箱中取出步骤1.1.2保存的大鼠肝脏并将其置于液氮预冷的研钵中，迅速倒入液氮后马上研磨，此时肝脏容易研碎，直至肝脏变成粉末状，均匀而没有明显颗粒即可。然后在研钵中加入800μL的裂解液，充分溶解粉末并转移至1.5mL eppendorf(EP)离心管中，再加400μL的裂解液刷一次研钵，转移至相同的EP管中，4℃，12000r/m，离心10min，收集上清液，上清液即为提取的蛋白质液。

1.2.1.2蛋白质的纯化

提取的蛋白质液中加入预冷的5倍体积丙酮后，涡旋震荡混匀，置于-20℃过夜。10000g，4℃离心10min，倒弃上清液，沉淀中加入预冷的3倍体积丙酮反复洗两次，在-20℃下，2-3小时，10000g离心15min，倒弃上清液，收集到的蛋白质沉淀在室温干燥约5min直至丙酮完全挥发完后，加入400μL水化上样缓冲液(不含有溴酚蓝和Bio-Lyte)以重新溶解沉淀，-80℃冻存备用。

1.2.1.3蛋白质的定量

使用上海生工生产的非干扰型蛋白质定量试剂盒对纯化后的蛋白质进行定量，并按照试剂盒上的操作说明，制作定量标准曲线，最后根据标准曲线计算蛋白质浓度。

1.2.1.4(2-DE)实验步骤：

第一向等电聚焦→胶条平衡→第二向聚丙稀酰胺凝胶电泳→固定与染色→凝胶图像扫描分析与胶内酶切处理

1.2.1.5蛋白质质谱及蛋白质数据库检索

肽段被酶解消化后，应用德国Bruker Dalton Autoflex speed^TM质谱仪对其进行质谱鉴定。操作参数：扫描质量范围为700-3200Da，加速电压为20000V，重复速率为200Hz，最优质量分辨率为1500Da，激光波长355nm，再与标准肽混合物比对后，进行信号收集。利用识别信号峰和flexAnalysis过滤基线峰。把获得的一、二级质谱数据用BioTools整合到Mascot中，然后搜索Uniprot数据库，鉴定所有匹配rattus norregicus物种的相关蛋白质并查询可能的生物学功能。未定义的蛋白质可以通过NCBI网站对其结构功能进行预测。

1.3荧光定量PCR评价灰树花多糖F2对脂类代谢关键酶mRNA表达的调控作用

1.3.1总RNA的提取

从-80℃冰箱中取出步骤1.1.2保存的装有大鼠肝脏的冻存管，加入1mL RNAisoPlus，用匀浆器充分匀浆；将匀浆液转移至离心管中，室温静置10分钟，12,000g 4℃离心5分钟；小心吸取上清液并移入新的离心管中，往上清液中加入200μL三氯甲烷(RNAiso Plus的1/5体积量)，盖紧离心管盖，混合至溶液乳化呈乳白色；室温静置15分钟，12,000g 4℃离心15分钟；从离心机中小心轻巧的取出离心管，上层：无色的上清液(含RNA)，中层：白色蛋白层(为DNA)，下层：有颜色的有机相，轻轻吸取无色的上清液并转移至另一新的离心管中，向上清中加入1mL异丙醇(1倍体积RNAiso Plus)，上下颠倒离心管充分混匀后，室温下静置10分钟；12,000g 4℃离心10分钟，倒弃上清液，往沉淀中加入1mL 75％乙醇(与RNAisoPlus等量)，7,500g 4℃离心5分钟后小心弃去上清；打开离心管盖，室温干燥沉淀几分钟，加入500μL的DEPC水溶解沉淀。取2μL提取的总RNA原液，用生命科学紫外/可见分光光度计测RNA浓度，并将RNA浓度调节至适当浓度。

1.3.2cDNA的合成

调整各样品总RNA含量一致，用PrimeScript^TM RT Master Mix反转录试剂盒合成cDNA，反转录体系如下表1。反转录程序是：37℃，15分钟(反转录反应)；85℃，5秒钟(反转录酶的失活反应)，4℃储存。得到的cDNA反应液加入到下一步的实时荧光定量PCR反应体系中，其加入量不要超过PCR反应体积的1/10(V/V)量。

表1反转录体系

1.3.3实时荧光定量PCR(Real-Time PCR，RT-PCR)

采用Premix Ex Taq^TM(Tli RNaseH Plus)试剂盒进行Real-Time PCR(RT-PCR)反应。通过RT-PCR反应生成双链DNA，此双链DNA与SYBR Green I结合发出荧光，通过检测PCR反应液中Green I的荧光信号强度，达到监控PCR产物扩增量的目的，即可以对目的基因进行相对定量。RT-PCR反应体系如下表2，程序如下：95℃预变性30秒，95℃变性5秒，58℃退火30秒，72℃延伸30秒，共40个循环，紧接着是溶解曲线，95℃，15秒，60℃，15秒，95℃，15秒。HMGCR、ACAT2、apoB、CYP7A1、FAS、ACC基因和管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)基因的引物序列见表3。每份样品做两次PCR反应重复。

表2SYBR real-time PCR反应体系

表3SYBR real-time PCR反应引物

二、实验结果

1.灰树花多糖F2的降血脂作用

1.1灰树花多糖F2对实验大鼠体重的影响

我们从图1中可以看出，在适应性喂养一周后即第一周的体重，各组大鼠体重都没有明显的差异；当灌胃灰树花多糖F2两周后即第三周的体重，与模型组相比，灰树花多糖F2组大鼠体重极显著下降(P<0.01)，估计刚开始灌胃的前两周，大鼠对灰树花多糖F2不是很适应，影响了进食量，导致体重下降，但是当到实验结束时即第五周的体重，与模型组相比，各组大鼠体重都没有显著差异了，说明随着实验的进行，大鼠已经慢慢适应灰树花多糖F2了，故体重又恢复了。

1.2灰树花多糖F2对高脂血症大鼠血清中血脂含量的影响

灰树花多糖F2连续给实验大鼠灌胃4周后，由图2可知，与模型组相比，灰树花多糖F2能够极显著地降低高脂血症大鼠血清TC、LDL-C含量并将其恢复到正常水平甚至低于正常水平(P<0.01)，而且它也能够极显著地降低高脂血症大鼠血清TG含量并将其恢复到与正常组几乎一样的水平。

2.双向电泳(2-DE)的实验

2.1 2-DE图像分析结果

图3表示了正常组、模型组、灰树花多糖F2组3个组大鼠肝脏组织中蛋白质的2-DE凝胶扫描照片，通过ImageMaster 2D Platinuim 7.0软件分析后发现每张凝胶图平均含有1400个左右的蛋白质点，用软件计算分析了任意两组之间的蛋白质差异表达点(差异表达量都大于1.5倍以上)，结果显示，与模型组相比，正常组中有98个蛋白质点的表达量上调了，与模型组相比，灰树花多糖F2组中也有80个蛋白质点的表达量上调了，在这两组表达量都上调的蛋白质点中，有23个蛋白质点是重复的；同时，与模型组相比，正常组中有59个蛋白质点的表达量下调了，与模型组相比，灰树花多糖F2组中也有74个蛋白质点的表达量下调了，在这两组表达量都下调的蛋白质点中，有17个蛋白质点是重复的。因此，两组蛋白质重复点(23+17＝40)就是我们感兴趣的蛋白质点了，应用胶内酶切处理方法将这40个感兴趣的蛋白质点从凝胶上取下来，酶解消化后，采用MALDI-TOF-MS技术对它们进行质谱鉴定，扣除一些鉴定结果是相同或类似蛋白质的情况外，最后，得到了20个蛋白质的鉴定结果。

2.2差异蛋白质点的质谱鉴定结果

成功鉴定出20个蛋白质，这20个蛋白质分别是蛋白点NO.1：3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶(Hydroxy methylglutaryl-CoA synthase，HMGCS2)，蛋白点NO.2：长链脂肪酸辅酶A连接酶1(Long-chain-fatty-acid--CoA ligase 1，ACSL1)，蛋白点NO.3：α-甲基酰基辅酶A消旋酶(Alpha-methylacyl-CoA racemase，AMACR)，蛋白点NO.4：过氧化物酶(Peroxiredoxin-1，Prdx-1)，蛋白点NO.5：超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD1)，蛋白点NO.6：血红素结合蛋白(Hemopexin，HPX)，蛋白点NO.7：S-腺苷甲硫氨酸合酶-1(S-adenosylmethionine synthase isoform type-1，Mat1a)，蛋白点NO.8：甜菜碱—同型半胱氨酸甲基转移酶1(Betaine--homocysteine S-methyltransferase 1，Bhmt)，蛋白点NO.9：60kDa热休克蛋白(60kDa heat shock protein，HSP60)，蛋白点NO.10：丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(Serine/threonine-protein phosphatase，CPPED1)，蛋白点NO.11：氨基甲酰磷酸合成酶(Carbamoyl-phosphate synthase，Cps1)，蛋白点NO.12：肌氨酸脱氢酶(Sarcosinedehydrogenase,Sardh)，蛋白点NO.13：肌动蛋白(ctin,Actg1)，蛋白点NO.14：角蛋白(Keratin,type I cytoskeletal 18，Krt18)，蛋白点NO.15：组织蛋白酶B(Cathepsin B，Ctsb)，蛋白点NO.16：ATP合成酶α亚基(ATP synthase subunit alpha，Atp5a1)，蛋白点NO.17：蛋白酶体β亚基9型(Proteasome subunit beta type-9，Psmb9)，蛋白点NO.18：原肌球蛋白α3链(Tropomyosin alpha-3chain，Tpm3)，蛋白点NO.19：谷氨酸半胱氨酸连接酶调节亚基(Glutamate--cysteine ligase regulatory subunit，Gclm)，蛋白点NO.20：细胞色素b5(Cytochromeb5，Cyb5a)。

鉴定的蛋白质通过蛋白质组学服务器UniProtKBC(http://www.uniprot.org/)，对上述蛋白质进行归类分析，发现有3个蛋白质点涉及脂类代谢，5个蛋白质点涉及脂类氧化，5个蛋白质点跟氨基酸代谢有关，2个蛋白质点参与能量代谢，3个蛋白质点跟细胞骨架有关，2个蛋白质点跟蛋白质降解相关。其中，与模型组相比，正常组和灰树花多糖F2组都上调表达的蛋白质点有13个(AMACR、Prdx-1、SOD1、HPX、Mat1a、Bhmt、Cps1、Sardh、Actg1、Krt18、Ctsb、Atp5a1、Psmb9)，表达下调的蛋白质点有7个(HMGCS2、ACSL1、HSP60、CPPED1、Tpm3、Gclm、Cyb5a)。有关这20个蛋白质点的具体详细的质谱信息参见下表4。

表4MALDI-TOF-MS鉴定大鼠肝脏蛋白

注：↑：与模型组相比，正常组和灰树花多糖F2组的蛋白表达量上调；↓：与模型组相比，正常组和灰树花多糖F2组的蛋白表达量下调

3.实时荧光定量PCR实验结果(RT-PCR)

由图4可知，HMGCR是胆固醇生物合成过程中重要的限速酶，它决定着合成反应的速率，也决定着肝脏中的胆固醇合成量，也是外界调控体内胆固醇从头合成的主要作用位点，更是目前最主要的高脂血症临床药物的作用靶点，灰树花多糖F2组大鼠肝脏HMGCR的含量和mRNA表达水平却显著降低了。因此，我们在灰树花多糖F2组大鼠血清中检测到TC、LDL-C水平的降低，可能的原因灰树花多糖F2抑制了HMGCR的mRNA表达水平并降低了HMGCR的含量；从图4中可看出，与正常组相比较，模型组大鼠肝脏中CYP7A1的mRNA表达水平极显著降低(P<0.01)；由此图4可知，与正常组相比较，模型组大鼠肝脏ACC1mRNA表达水平无显著差异，但FAS mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组相比较，灰树花多糖F2灌胃给高脂血症大鼠后，其肝脏ACC1和FAS的mRNA表达水平均显著降低，甚至都降低到比正常大鼠ACC1和FAS mRNA表达水平还低；与正常组相比，模型组大鼠的ACAT2和apoB含量极显著升高(P<0.01)，与模型组相比，灰树花多糖F2灌胃给大鼠，其肝脏ACAT2和apoB含量极显著降低(P<0.01)。灰树花多糖F2组大鼠肝脏apoB的含量和mRNA表达水平却显著降低了。因此，灰树花多糖F2可能通过抑制apoB的表达水平，减少了血清中的LDL和LDL-C水平，预防了动脉粥样硬化的发生发展。

4.联合qPCR和2-DE的实验的降血脂机理

胆固醇的主要来源是肝脏的自身合成，乙酰辅酶A经过多步酶促反应最终生成胆固醇，在这条胆固醇代谢途径中，HMGCR是整个代谢反应的限速酶，控制着胆固醇的合成数量，而HMGCS2是催化合成3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(HMGC)的酶，如果HMGCS2的数量减少，催化合成HMGC的数量也会减少，那么HMGCR的底物数量就随之变少，最终导致胆固醇的合成量减少，因此，下调HMGCS2的蛋白表达量能减少胆固醇的合成量。本实验用MALDI-TOF-MS鉴定出的HMGCS2，在灰树花多糖F2组大鼠肝脏中的蛋白质表达量要低于模型组，这也正好解释了我们观察到灰树花多糖F2组大鼠血清TC明显低于模型组血清TC的原因。

甘油三酯是由脂肪酸和甘油结合而生成的，乙酰辅酶A作为起始原料，在一系列酶的作用下最终生成甘油三酯，在这条甘油三脂代谢途径中，ACSL1是使游离脂肪酸转换成脂酰辅酶A的重要酶，最后，脂酰辅酶A和二脂酰甘油合成甘油三酯。如果ACSL1的表达量升高的话，脂酰辅酶A的合成量就会增加，甘油三酯合成量也随之增加。在类似的研究中也发现，toll-like receptor agonists通过提高ACSL1的表达量而增加TG的合成，最终使小鼠和人类巨噬细胞摄取了很多的TG。本实验鉴定出的ACSL1，在灰树花多糖F2组大鼠肝脏中的蛋白质表达量要低于模型组，这也正好解释了我们观察到灰树花多糖F2组大鼠血清TG明显低于模型组血清TG的原因。

5.灰树花多糖F2降血脂机理作用

降血脂机理图5结果表明，灰树花多糖F2通过4条途径调控胆固醇的代谢而实现降低血清TC、LDL-C的目的，(1)通过下调HMGCR的表达量而减少胆固醇的生物合成；(2)通过下调ACAT2的表达量而减少胆固醇的吸收；(3)通过下调apoB的表达量而减少LDL的装配；(4)通过上调CYP7A1的表达量而增加胆固醇的转化。这些结果表明灰树花多糖F2通过调控胆固醇代谢关键酶的表达而发挥降胆固醇作用，因此它们是辅助治疗高胆固醇血症的天然功能食品。

Claims

1.灰树花多糖F2在制备治疗高脂血症药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的治疗高脂血症药物为治疗高胆固醇血症药物或治疗高甘油三酯血症药物。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的治疗高胆固醇血症药物为具有抑制HMGCR、ACAT2、apoB的mRNA表达水平和下调HMGCR2的蛋白质表达量的治疗高胆固醇血症药物。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的治疗高甘油三酯血症药物为具有抑制ACC1和FAS的mRNA表达水平的治疗高甘油三酯血症药物。

5.一种治疗高脂血症药物，其特征在于，其含有有效量的灰树花多糖F2作为活性成分。

6.灰树花多糖F2在制备预防或延缓动脉粥样硬化药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的预防或延缓动脉粥样硬化药物为具有上调抗氧化酶SOD1、Prdx-1和HPX的蛋白表达量和下调HSP60和CPPED1的蛋白表达量的预防或延缓动脉粥样硬化药物。

8.一种预防或延缓动脉粥样硬化药物，其特征在于，其含有有效量的灰树花多糖F2作为活性成分。