CN108152489A - 一种用于软骨骨质免疫组化抗原修复的方法 - Google Patents

一种用于软骨骨质免疫组化抗原修复的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于软骨骨质免疫组化抗原修复的方法，取预热至37℃的尿素溶液加到骨组织切片样本上，覆盖整个骨组织切片样本，在37℃的温度条件下孵育30分钟后用0.01M PBS洗涤骨组织切片样本，洗涤3次，每次3min；然后取预热至37℃的胰酶工作液加到骨组织切片样本上，覆盖整个组织样本，在37℃的温度条件下孵育30分钟后用0.01M PBS洗涤骨组织切片样本，洗涤3次，每次3min，即可完成抗原修复，本发明能够克服传统抗原修复方法具有的掉片率高、抗原暴露不充分的问题。

Description

一种用于软骨骨质免疫组化抗原修复的方法
技术领域
本发明涉及生物科学领域，特别涉及一种用于软骨骨质免疫组织抗原修复的方法。
背景技术
免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的技术，它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜中的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质。样品使用该技术检测前一般需要制成石蜡切片，制片需要样品经过醛类试剂的固定及高温处理，这些操作会使样品中的抗原被交联的醛基遮蔽；特定抗原对应的抗体要识别该抗原需要解除交联醛基的遮蔽方可顺利进行。
免疫组织化学中常规的抗原修复有微波修复、高温高压修复、热修复、酶修复等，一般前两种修复方式是比较通用的方法(检测大多数抗原的有效方法)；后面两种方法修复强度低，仅较少的抗原检测中有效。但前两种方法在免疫组织化学检测软骨骨质等易脱片样品时不适用，这类样品经高温溶液会脱片，导致检测没办法继续。
发明内容
本发明的目的在于针对软骨组织类型的样品切片掉片率高、抗原无法充分暴露的问题，提供一种用于软骨骨质免疫组织抗原修复的方法。
为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：
一种用于软骨骨质免疫组化抗原修复的方法，包括如下步骤：
取预热至37℃的尿素溶液加到骨组织切片样本上，覆盖整个骨组织切片样本，在37℃的温度条件下孵育30分钟后用0.01M PBS洗涤骨组织切片样本，洗涤3次，每次3min；然后取预热至37℃的胰酶工作液加到骨组织切片样本上，覆盖整个组织样本，在37℃的温度条件下孵育30分钟后用0.01M PBS洗涤骨组织切片样本，洗涤3次，每次3min，即可完成抗原修复；所述尿素溶液中，尿素的浓度为10mol/ml。
优选地，针对每一片软骨组织切片样本，每次使用的尿素溶液的体积为50-100ul，每次使用的胰酶工作液的体积为50-100ul。
本发明的有益效果：本发明能够克服传统抗原修复方法具有的掉片率高、抗原暴露不充分的问题；尿素可以打断化学分子键，胰酶可以打断蛋白的交联，两者结合可以对样品的抗原去遮蔽情况有一个很好的改良作用，经本发明中所述的抗原修复方法处理后的骨组织切片与传统的抗原修复方法相比较，组织破损面积不超过该样品总面积的5％，且具有抗原暴露更加充分、显色效果好等特性。
具体实施方式
下面通过具体实施例进一步描述本发明的技术方案。
实施例1
一种用于软骨骨质免疫组化抗原修复的方法，包括如下步骤：
取预热至37℃的尿素溶液加到骨组织切片样本上，覆盖整个骨组织切片样本，在37℃的温度条件下孵育30分钟后用0.01M PBS洗涤骨组织切片样本，洗涤3次，每次3min；然后取预热至37℃的胰酶工作液加到骨组织切片样本上，覆盖整个组织样本，在37℃的温度条件下孵育30分钟后用0.01M PBS洗涤骨组织切片样本，洗涤3次，每次3min，即可完成抗原修复；所述尿素溶液中，尿素的浓度为10mol/ml。
针对每一片软骨组织切片样本，每次使用的尿素溶液的体积为80ul，每次使用的胰酶工作液的体积为80ul。

Claims (2)

1.一种用于软骨骨质免疫组化抗原修复的方法，其特征在于，包括如下步骤：
取预热至37℃的尿素溶液加到骨组织切片样本上，覆盖整个骨组织切片样本，在37℃的温度条件下孵育30分钟后用0.01M PBS洗涤骨组织切片样本，洗涤3次，每次3min；然后取预热至37℃的胰酶工作液加到骨组织切片样本上，覆盖整个组织样本，在37℃的温度条件下孵育30分钟后用0.01M PBS洗涤骨组织切片样本，洗涤3次，每次3min，即可完成抗原修复；所述尿素溶液中，尿素的浓度为10mol/ml。
2.如权利要求1所述的用于软骨骨质免疫组织抗原修复的方法，其特征在于，针对每一片软骨组织切片样本，每次使用的尿素溶液的体积为50-100ul，每次使用的胰酶工作液的体积为50-100ul。
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