CN108101646A - 一种花卉果蔬用生物有机液体肥的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物肥料技术领域,具体涉及到一种花卉果蔬用生物有机液体肥的制备方法。该方法是通过以下步骤实现的:首先进行种子液的培养,然后在发酵罐内进行固体发酵,最后用板框压滤机或膜分离技术滤出发酵液中的固体杂质即得。本发明通过优化培养基的组成,进行混菌发酵,两种菌种能够功能互补、协同配合,发酵产物有效活性菌体多,可抑制土壤中有害微生物繁殖,减少病虫害发生,有机物质含量高,特别是各种氨基酸含量高,不仅肥效释放期长,而且使土壤疏松,通气性好,用于花木施肥,花卉色泽鲜艳,保鲜期长,不易凋谢;应用于水果后,能够促进水果生长,提高产量及营养物质的含量。
Description
技术领域
本发明属于生物肥料技术领域,具体涉及到一种花卉果蔬用生物有机液体肥的制备方法。
背景技术
随着城镇一体化和新农村建设进程的快速推进,大部分农民陆续迁往城市,住上楼房,乔迁新居总要购置几盆花卉装饰房间,原住城市居民每逢过年过节也总是更换新鲜花卉,以显万象更新、生机勃勃。花卉市场的需求量越来越大,花卉种植面积逐年扩大。
但是家庭购买养殖的花卉短时期就凋谢、萎缩、直至枯死。其主要原因是营养枯竭,有的为补充养分,施用一些花肥,而这些花肥的主要成分不外乎氮、磷、钾和少量无机微量元素,施肥量少,肥效短;量多则容易烧根,致花卉死亡,。近几年,多数花农为使花卉鲜艳茂盛,施用“营养液”,这些液体肥的配方仍以氮磷钾、无机元素为主,添加部分如聚天门冬氨酸、氨基酸等易被吸收的有机合成物质,效果比施用固体花肥好得多。
随着微生物科学研究的不断深入,生物肥料逐步推广应用于农业和园林花卉领域,中国农业大学研究开发了酵素菌肥料,目前农业领域以作物秸秆、牲畜粪便等为原料,以酵素菌为菌种,采用堆积发酵在田间地头堆积发酵制作生物有机肥料。酵素菌是由细菌、放线菌和酵母菌三大类几十种菌和酶组成的有益生物活性的功能团。酵素菌是好氧性微生物群体,具有很强的发酵能力。在发酵的过程中,多种有益菌迅速增殖,产生大量有益代谢物质,分泌出多种活性分解酶,这些酶具有很强的催化分解能力,能分解各种有机质,它在分解发酵过程中能生成多种氨基酸、维生素、核酸、菌体蛋白等发酵产物,营养价值相当丰富。
现有技术中,酵素菌进行液体肥的发酵成为了研究的重点,由于酵素菌是好氧性微生物群体,堆积发酵通风性差,不能满足酵素菌需氧的要求,农业废弃物有机质含量低,很难制作出高含量的肥料,固体发酵也很难分离提取液体肥料,同时固体堆积发酵需要购买大量的菌种,费用过高。研究一种获得高营养成分的花卉果蔬用生物有机液体肥料、且简便易行的方法是非常必要的。
发明内容
针对现有技术存在的问题,本发明的目的是提供一种花卉果蔬用生物有机液体肥的制备方法。
为实现上述目的,本发明采取了如下的技术方案:
本发明提供了一种花卉果蔬用生物有机液体肥的制备方法,包括以下步骤:
(1)种子液的培养:取容积2000mL的三角玻璃瓶装入400mL摇瓶培养基,经灭菌消毒后,在无菌室超净平台上接入2mL酵素菌种、1cm2红栓菌原菌菌块及0.2 cm2的肠膜明串珠菌原菌菌块,将摇瓶密封后放入摇床内,在38℃恒温下,培养15h,制备混合菌种子液;
(2)将过程(1)培养的种子液按接种量10%转接到装有培养基的发酵罐内,在搅拌转速200r/min,通气量2vvm,pH6.9-7.2,温度38-39℃条件下发酵48h,得到发酵液;
(3)用板框压滤机或膜分离技术滤出发酵液中的固体杂质,板框压滤机采用闭式压滤机,压力为0.5 MPa,分离膜采用微孔3μm的树脂膜,循环压力0.5mPa。
本发明所使用的摇瓶培养基的配方:豆粕粉(200目)25g,葡萄糖20g,硫酸铵5g,酵母粉5g,硫酸镁3g,碳酸钙2g,磷酸二氢钾3g,磷酸氢二钾2g,甜菜汁20mL、微量元素溶液10ml,纯净水350质量份。
上述甜菜汁采用以下方法制备而成:将甜菜根粉碎后打浆,然后升温至50-60℃,甜菜浆中加入饱和石灰水,搅拌均匀后,保温20-30min,然后加入柠檬酸及咪唑烷基脲,搅拌均匀,过滤,滤液中加入酪朊酸钠,搅拌均匀即可。
进一步的,所述每1kg甜菜浆中加入50mL饱和石灰水。
进一步的,所述柠檬酸的加入量为每1kg甜菜浆中加入0.18g;所述咪唑烷基脲同柠檬酸的质量比为0.5:1。
进一步的,所述每100mL微量元素溶液含有FeSO4·5H2O 8%、CuSO4 4%、ZnCl2 5%、HCl 50ml、硼酸 5%及余量的水。
进一步的,步骤(2)中,所述发酵罐内培养基的配方:豆粕粉18g,葡萄糖10g,硫酸铵2g,酵母粉3g,皂角粉3g,磷酸二氢钾3g,磷酸氢二钾2g,硫酸镁3g,碳酸钙2g,纯净水50mL。
本发明所使用的皂角粉采用以下方法制备而成:将100g皂荚及皂角子研磨成30目的粉,然后加入100mL醋酸-乙醇的混合溶液(醋酸和乙醇的体积比为1:19),水浴加热至55℃,保温2h,过滤后烘干,继续研磨至100目粉即得。
本发明所使用的酵素菌、肠膜明串珠菌及红栓菌均购自中国普通微生物菌种保藏管理中心。本发明通过酵素菌、肠膜明串珠菌和红栓菌混合发酵,发酵能力强,发酵过程能分解各种有机物,代谢多种维生素、核酸、菌体蛋白等多种生物质营养,能够提高发酵物的营养价值。同时以大豆粕、葡萄糖等有机质含量较高的物质为原料,应用中国农业大学培育的酵素菌群为菌种,在好氧条件下液体发酵制备营养丰富的花卉用生物有机液体肥,关键是保持充足的通气量、适宜的温度、pH和高浓度有机物培养基。
本发明的有益效果为:
(1)本发明通过优化培养基的组成,进行混菌发酵,菌种能够功能互补、协同配合,发酵产物有效活性菌体多,可抑制土壤中有害微生物繁殖,减少病虫害发生,有机物质含量高,特别是各种氨基酸含量高,不仅肥效释放期长,而且使土壤疏松,通气性好,用于花木施肥,花卉色泽鲜艳,保鲜期长,不易凋谢;应用于水果后,能够促进水果生长,提高产量及营养物质的含量。
(2)本发明提供的培养基配方易得,通过合理控制各原料的添加量及控制发酵的温度、时间等参数,得到的发酵物生长势好,产率高且质量佳。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
实施例1
一种花卉果蔬用生物有机液体肥料的制备方法,方法如下:
(1)取容积2000ml的三角玻璃瓶两只,洗净并在灭菌锅内121℃灭菌20min,冷却后装入350ml的纯净水,用电子称分别称取两份豆粕粉(200目)25g,葡萄糖20g、硫酸铵5g,酵母粉5g,碳酸钙2g、硫酸镁3g、磷酸二氢钾3g、磷酸氢二钾2g,甜菜汁20mL,微量元素溶液10ml(溶液含FeSO4·5H2O 8%、CuSO4 4%、ZnCl2 5%、HCl 50ml、硼酸 5%)。依次先后装入三角瓶内混合均匀,用纱布瓶塞封闭,放入灭菌锅内116℃灭菌25min,冷却至室温。然后移到无菌室,在超净平台上酒精火焰保护下,用接种环从已复活的甘油管中各取出2ml酵素菌、1cm2红栓菌原菌菌块及0.2 cm2的肠膜明串珠菌原菌菌块分别接入三角瓶内,用棉纱瓶塞封闭后放入摇瓶内,设定温度38℃,摇速100次/min,培养时间15h,得混菌种子液;
(2)发酵罐高浓度培养基好氧液体发酵:选取容积100L发酵罐,首先开启所有与罐体相连接的阀门,通入蒸汽,在121℃条件下,空罐灭菌25min,冷却至38℃,关闭所有阀门,装入50L纯净水,用电子称分别称取豆粕粉18kg,葡萄糖12kg、酵母粉3kg,皂角粉3kg、硫酸铵2kg、磷酸二氢钾3kg、磷酸氢二钾2kg、碳酸钙2kg,依次装入发酵罐内;发酵罐夹套内通入蒸汽,并开启液面以上的放空阀、补碱阀,升温至116℃,进行实罐灭菌25min,冷却至38℃,在酒精火焰的保护下,打开接种口,将过程(1)培养的混合菌种子液接入发酵罐内,封闭后,开启搅拌机,转速200r/min,开启压缩空气进口阀,进气压力250KPa,通气量160-200L/min(即2-2.5vvm),稍开罐顶放空阀,保持罐压50KPa,启动温度自控和pH自控***,保持发酵温度37-38℃,pH 6.9-7.2,每2h取样用分度光度仪测量OD值,以观察菌的生长繁殖情况,滴定测量氨基酸含量,发酵时间持续48h,所得滤液即为液体肥。
实施例2
一种花卉果蔬用生物有机液体肥的制备方法,与实施例方法基本相同,不同之处在于,步骤(1)摇瓶培养基配方中不含有甜菜汁;步骤(2)的培养基中不含有皂角粉。
对比例1
一种花卉果蔬用生物有机液体肥的制备方法,发酵方法同实施例1,不同之处在于,仅接种酵素菌。
对比例2
一种花卉果蔬用生物有机液体肥的制备方法,发酵方法同实施例1,不同之处在于,仅接种红栓菌。
对比例3
一种花卉果蔬用生物有机液体肥的制备方法,发酵方法同实施例1,不同之处在于,仅接种肠膜明串珠菌。
(一)采用同实施例1相同的方法,进行三次试验,分别仅接种酵素菌、仅接种红栓菌及仅接种肠膜明串珠菌,培养结束后,分别测定胞外多糖和胞内多糖的产量,测定方法采用蒽酮-硫酸法,具体结果见表1。
表1
(二)将实施例1和实施例2提供的方法进行10次重复,统计污染率,发生在发酵过程中任意步骤发生污染,均进行污染率的统计,具体结果见表2。
表2
(三)对实施例及对比例进行发酵时间的统计,本发明实施例1发酵时间最短。
(四)将实施例1-2及对比例1-3制备的肥料应用于草莓,选择同一品种的草莓进行试验,均不喷洒任何农药,同时设置对照组,对照组采用市售的草莓专用无机肥,设置5个重复,统计草莓产量及平均单果重,具体结果见表3。
增产率=(各组的产量-空白对照组产量)/空白对照组产量╳100%
表3
注:表中不同字母表示在0.05水平的差异显著性。
对于收获的草莓进行可溶性固形物、可溶性糖及维生素含量进行统计,具体结果见表4。
表4
同时,在草莓使用肥料之后,发现应用本发明实施例1提供的草莓的病害率明显降低,较实施例2降低了10%。
(五)将实施例1-2及对比例1-3制备的肥料应用于玫瑰花,玫瑰花的品种为红玫瑰,每个实验组设置10株玫瑰花,进行5次重复,统计玫瑰花的平均株高,年每株玫瑰花的花蕾个数、花色及玫瑰花的保鲜期,设置空白对照组,对照组采用尿素等无机肥进行施肥,保鲜期统计为较空白对照组的延长时间,各个实验组的玫瑰花的长势及株高基本相同,具有可比性,具体结果见表5。
表5
本发明采用了高浓度有机质培养基添加磷、钾、铁、锌等无机元素,在富氧条件下液体发酵新工艺,在发酵过程中,多种有益菌迅速繁殖,产生大量有益代谢物,分泌出多种活性分解酶,分解培养基中的高蛋白有机物质和葡萄糖,转化为多种氨基酸、维生素、菌体蛋白等发酵产物,营养价值相当丰富,同时因活性菌体多,形成有益菌群优势,使土质疏松、透气好,并能抑制有害菌的生长,用于花卉根繁叶茂、色泽鲜艳,保鲜期长;应用于蔬菜、水果,原味口感好,叶绿素含量高,可溶性固形物等含量明显提高,且病害率降低。
Claims (7)
1.一种花卉果蔬用生物有机液体肥的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)种子液的培养:取容积2000mL的三角玻璃瓶装入400mL摇瓶培养基,经灭菌消毒后,在无菌室超净平台上接入2mL酵素菌种、1cm2红栓菌原菌菌块及0.2 cm2的肠膜明串珠菌原菌菌块,将摇瓶密封后放入摇床内,在38℃恒温下,培养15h,制备混合菌种子液;
(2)将过程(1)培养的种子液按接种量10%转接到装有培养基的发酵罐内,在搅拌转速200r/min,通气量2vvm,pH6.9-7.2,温度38-39℃条件下发酵48h,得到发酵液;
(3)用板框压滤机或膜分离技术滤出发酵液中的固体杂质,板框压滤机采用闭式压滤机,压力为0.5 MPa,分离膜采用微孔3μm的树脂膜,循环压力0.5mPa。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述摇瓶培养基的配方:豆粕粉(200目)25g,葡萄糖20g,硫酸铵5g,酵母粉5g,硫酸镁3g,碳酸钙2g,磷酸二氢钾3g,磷酸氢二钾2g,甜菜汁20mL、微量元素溶液10ml,纯净水350质量份。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述甜菜汁采用以下方法制备而成:将甜菜根粉碎后打浆,然后升温至50-60℃,甜菜浆中加入饱和石灰水,搅拌均匀后,保温20-30min,然后加入柠檬酸及咪唑烷基脲,搅拌均匀,过滤,滤液中加入酪朊酸钠,搅拌均匀即可。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述每1kg甜菜浆中加入50mL饱和石灰水。
5.根据权利要求3或4所述的制备方法,其特征在于,所述柠檬酸的加入量为每1kg甜菜浆中加入0.18g;所述咪唑烷基脲同柠檬酸的质量比为0.5:1。
6.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述每100mL微量元素溶液含有FeSO4·5H2O 8%、CuSO4 4%、ZnCl2 5%、HCl 50ml、硼酸 5%及余量的水。
7.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述发酵罐内培养基的配方:豆粕粉18g,葡萄糖10g,硫酸铵2g,酵母粉3g,皂角粉3g,磷酸二氢钾3g,磷酸氢二钾2g,硫酸镁3g,碳酸钙2g,纯净水50mL。
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