CN108070559A - 一种原代人乳腺癌细胞分离及培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种原代人乳腺癌细胞分离及培养方法,包括步骤:(a)含双抗预冷PBS清洗组织标本;(b)剪碎组织,混合酶液消化;(c)完全混合培养基终止消化;(d)连续筛网过滤,收集滤液离心;(e)重悬细胞沉淀,接种于培养瓶中;(f)培养数天后更换混合完全培养基继续培养。本发明提供了一种耗时短、高效获得人乳腺癌细胞的方法。
Description
技术领域
本发明属于细胞生物学领域,具体涉及一种原代人乳腺癌细胞分离及培养方法。
背景技术
乳腺癌是一种通常发生在***腺上皮组织的恶性肿瘤,是严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的恶性肿瘤之一,肿瘤的发生和转移与肿瘤细胞所处的微环境有着密切关系。肿瘤微环境是一个错综复杂的***,其中肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAS)是肿瘤微环境最主要的宿主细胞之一。原代培养的人乳腺癌CAF是直接从组织分离下来的,其生物学特性及遗传特性未发生明显变化,最接近和反映其体内生长特性,是研究肿瘤微环境CAF本身生物学特征、基因表达、体外化疗药物敏感试验快速筛选有效化疗药物。药物疗效体外试验的模型,也是研究乳腺癌微环境CAF与乳腺癌细胞之间相互关系的理想模型。但是人乳腺癌中含有大量脂肪组织,使得分离和纯化人乳腺癌CAF存在一定难度。本发明提供一种相对完善的人乳腺癌组织成纤维细胞原代培养方法,为研究乳腺肿瘤微环境CAF及其与乳腺癌细胞生物相互作用奠定了基础,也为肿瘤的发生发展及综合治疗的研究提供了手段。
发明内容
本发明的目的是建立一种耗时短、高效获得人乳腺癌细胞的方法。
为了解决上述所涉及到的问题,本发明采取如下方法获得原代人乳腺癌细胞:
本发明提供一种原代人乳腺癌细胞分离及培养方法,包括步骤:(a)含双抗预冷PBS清洗组织标本;(b)剪碎组织,混合酶液消化;(c)完全混合培养基终止消化;(d)连续筛网过滤,收集滤液离心;(e)重悬细胞沉淀,接种于培养瓶中;(f)培养数天后更换混合完全培养基继续培养。
可选的组织标本为新鲜的组织标本;
可选的混合酶液为0.05%-0.1%的I型胶原酶、0.05%-0.1%的II型胶原酶和0.1%-0.15%的透明质酸酶,消化时间为1.5h-2h;
可选的混合完全培养基为含10%FBS的H-DMEM和1640(2∶1);
可选的连续筛网过滤的方法为,消化后的组织液依次经过80目、100目、200目筛网过滤;
可选的差速贴壁的方法为混合完全培养基重悬接种后,培养2-4h后更换新鲜完全培养基。
本发明提供一种混合酶消化法获得原代人乳腺癌细胞的方法,不仅操作步骤简便,耗时短,而且获得的人乳腺癌细胞活性高。
附图说明
图1培养72h细胞图片(100×)
具体实施方式
为了使本发明的目的及优势更清晰地展现,现将具体实施方式进一步阐述。此处所阐述的具体实施方式仅针对本发明进行解释,并不用于限定本发明。
本发明选择新鲜的人乳腺癌组织,分离人乳腺癌细胞。具体操作如下:
1、用含双抗预冷的PBS冲洗组织标本2-3次;
2、充分剪碎组织标本,加入0.05%-0.1%的I型胶原酶、0.05%-0.1%的II型胶原酶和0.1%-0.15%的透明质酸酶的混合酶液,37℃摇床水浴锅中消化1.5h-2h;
3、用含10%FBS的H-DMEM和RPMI1640(2∶1)混合完全培养基终止消化;
4、将消化后的组织依次经80目、100目、200目筛网过滤,收集滤液,1800rpm/min离心5min,弃上清;
5、无菌PBS清洗2次,混合完全培养基重悬细胞沉淀;
6、37℃、5%(m/v)的CO2、饱和湿度的培养箱中培养2-3天,弃去不贴壁细胞,加入新鲜混合完全培养基,继续培养,每隔两天换液一次;
以上已经对本发明创造的较佳实施例进行详细阐述,但本发明创造不限定于上述实施例,凡在本发明的精神和原则之内作出任何修改,等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围内。
Claims (5)
1.一种原代人乳腺癌细胞分离及培养方法,包括步骤:(a)含双抗预冷PBS清洗组织标本;(b)剪碎组织,混合酶液消化;(c)混合完全培养基终止消化;(d)连续筛网过滤,收集滤液离心;(e)重悬细胞沉淀,接种于培养瓶中;(f)培养数天后更换混合完全培养基继续培养。
2.根据权利要求1所述的原代人乳腺癌细胞分离及培养方法,其特征在于,所述的组织为新鲜组织。
3.根据权利要求1所述的原代人乳腺癌细胞分离及培养方法,其特征在于,所述步骤b中混合酶液为0.05%-0.1%的I型胶原酶、0.05%-0.1%的II型胶原酶和0.1%-0.15%的透明质酸酶,消化时间为1.5h-2h。
4.根据权利要求1所述的原代人乳腺癌细胞分离及培养方法,其特征在于,所述步骤c中混合完全培养基为含10%FBS的H-DMEM和RPMI1640(2∶1)。
5.根据权利要求1所述的原代人乳腺癌细胞分离及培养方法,其特征在于,所述步骤d连续筛网过滤的方法为,消化后的组织液依次经过80目、100目、200目筛网过滤,收集滤液。
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CN113817665A (zh) * | 2021-09-13 | 2021-12-21 | 哈尔滨中科赛恩斯生物技术有限公司 | 一种小鼠乳腺癌细胞的分离培养及传代培养方法 |
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2016
- 2016-11-15 CN CN201611032625.1A patent/CN108070559A/zh active Pending
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