CN108059535A - 一种生态肥料的生产方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种生态肥料的生产方法，将生态海藻生物刺激素或生态海藻液体生物刺激素，加入到肥料当中，即得生态肥料。本发明通过生态海藻生物刺激素的加入，达到刺激作物生长，调理土壤，增产的目的。

Description

一种生态肥料的生产方法
技术领域
本发明涉及一种生态肥料的生产方法。
背景技术
目前由于长期施肥不合理，导致土壤板结、污染严重，土壤污染直接涉及到食品健康问题，市场需要生态肥料，满足人们食品安全的需要。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种生态肥料的生产方法，本发明通过生态海藻生物刺激素和肥料的配合达到增产和调理土壤的目的。
为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种生态肥料的生产方法，其特征在于按照以下步骤进行：
将生态海藻生物刺激素或生态海藻液体生物刺激素，加入到肥料当中，即得生态肥料；所述肥料为单质肥、复混肥、掺混肥、复合肥、有机肥、有机无机肥、水溶肥和生物有机肥中的一种；生态海藻生物刺激素或生态海藻液体生物刺激素和肥料的质量比为0.1～10:90～99.9。
所述生态海藻生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的海藻破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在60～120℃条件下灭菌5～40min，冷却至27～45℃接入酶，酶解30～60min，海藻破碎物、水和酶的质量比5～30:70～95:0.02～1,得酶解海藻；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为50～70％，在70～150℃条件下灭菌5～40min，冷却至27～36℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.1～2:98～99.9,在温度为27～36℃，发酵罐中氧气浓度为8～21％，发酵6～144h，在温度为70～150℃条件下灭菌20～40min，冷却至20～40℃,得海藻发酵物；
5)、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为95～99.8:0.2～5，在温度为25～35℃，含氧量为1～8mg/L条件下，发酵1～6天，压滤后所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
6)、制备生态海藻生物刺激素：生态海藻液体生物刺激素经浓缩和喷雾干燥后，即得生态海藻生物刺激素；
所述海藻是浒苔、海带、马尾藻、裙带和昆布中的一种或任意比例两种以上。
融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法至少重复一次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂20.0～25.0g；
其中牛肉浸液的生产方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物，其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，至少匀质一次，匀质温度为30～60℃，匀质压力为2～40MPa，匀质时间为10～40min，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为15000～30000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:3～8，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.001～0.5mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为2000～10000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶；
所述树脂是所述树脂为阳离子交换树脂或大孔吸附树脂；阳离子交换树脂的型号为001*7、732、AmberliteIR-120、Dowex-50、Lewatit-100、Diaion SK-1、AllassionCS、Duolite C-20、SDB-3中的一种或多种，大孔吸附树脂为AB-8、D101、D3520、X-5、NKA-II、NKA-9、S-8、XDA-1、H-20、H-30、H-40中的一种或多种。
步骤3)所述分离包括压滤、过滤和离心分离中的一种或两种以上。
步骤4)所述混合培养基至含水量为60％，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min。
步骤5)混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天。
所述胶红酵母和产氨棒杆菌均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号分别为CICC 31192和CICC 10168。
步骤A)中所述匀质为匀质2次，匀质温度为40℃，匀质时间为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa。
发明具有以下有益技术效果：
1、本发明采用新鲜海藻，新鲜海藻中含有大量可以刺激生长的刺激素和抗逆性物质，活性好。
2、本发明采用溶菌酶和果胶酶对海藻进行预处理，溶菌酶使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出，方便后续提取。
3、本发明采用好氧兼厌氧的产氨棒杆菌在缺氧条件下发酵，生产ATP，ATP是一种高能磷酸化合物，在细胞中，它能与ADP的相互转化实现贮能和放能，从而保证了细胞各项生命活动的能量供应，促进作物生长。由于长期施肥的不合理，造成土壤酸化，产氨棒杆菌可还原N03--和尿素，产生氨使发酵产物呈弱碱性，可以改善酸化土壤问题。
4、本发明对重金属有一定的固定作用。本发明发酵物中含有多肽、海藻酸及其它蛋白类，重金属可以使蛋白、海藻酸和多肽类失活，同时重金属也会被蛋白、海藻酸和多肽固定，从而防止作物吸收。
5、目前土壤板结严重，施入地中的微生物常处于缺氧状态，采用好氧兼氧菌更能适应现在土壤环境。
6、通过融冻法提高产氨棒杆菌细胞的通透性，可以使产氨棒杆菌产生的ATP更容易从细胞膜中渗透到细胞外，其产物效果明显好于用未经处理的产氨棒杆菌的产物。
7、本发明将肥料和生态海藻生物刺激素结合，达到增产、改良土壤的目的。
具体实施方式
下面结合具体实例进一步说明本发明。
实施例1
将生态海藻液体生物刺激素喷到复混肥颗粒的表面，生态海藻液体生物刺激素和复混肥颗粒的质量比为0.4:99.6，干燥后得到生态复混肥料。
所述生态海藻液体生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为40℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例2
将生态海藻液体生物刺激素喷到复混肥颗粒的表面，生态海藻液体生物刺激素和复混肥颗粒的质量比为0.4:99.6，干燥后得到生态复混肥料。
所述生态海藻生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为35℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例3
将生态海藻液体生物刺激素喷到复混肥颗粒的表面，生态海藻液体生物刺激素和复混肥颗粒的质量比为0.4:99.6，干燥后得到生态复混肥料。
所述生态海藻液体生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为45℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例4
将生态海藻液体生物刺激素喷到复混肥颗粒的表面，生态海藻液体生物刺激素和复混肥颗粒的质量比为0.4:99.6，干燥后得到生态复混肥料。
所述生态海藻液体生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质1次，匀质温度均为40℃，匀质时间为30min，匀质压力为25MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例5
将生态海藻液体生物刺激素喷到复混肥颗粒的表面，生态海藻液体生物刺激素和复混肥颗粒的质量比为0.4:99.6，干燥后得到生态复混肥料。
所述生态海藻液体生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质3次，匀质温度均为40℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，第三次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例6
将生态海藻液体生物刺激素喷到复混肥颗粒的表面，生态海藻液体生物刺激素和复混肥颗粒的质量比为0.4:99.6，干燥后得到生态复混肥料。
所述生态海藻液体生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带晾干，采用粉碎机将干海带粉碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为40℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例7
将生态海藻液体生物刺激素加入到尿浆中，生态海藻液体生物刺激素和尿浆的质量比为0.8:99.2，干燥后得到海藻生态尿素。
所述生态海藻液体生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带晾干，采用粉碎机将干海带粉碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为40℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例8
将生态海藻生物刺激素加入到生物有机肥原料中，生态海藻生物刺激素和生物有机肥原料的质量比为1:99，通过造粒、烘干、冷却、筛分后得到海藻生态生物有机肥。
所述生态海藻液体生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带晾干，采用粉碎机将干海带粉碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
6)、制备生态海藻生物刺激素：生态海藻液体生物刺激素经浓缩和喷雾干燥后，即得生态海藻生物刺激素；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为40℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为26000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:6，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.02mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为6000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
下面结合实验数据进一步说明本发明的有益效果：
实验一
1、实验供试材料
1材料与方法：
1.1试验地点和实验对象：烟台某大学化学分析检测中心。
1.2实验检测：测溶菌酶的活性和回收率。
1.3供试材料：针对普通处理(溶菌酶的制备方法除搅拌均匀后，未经过匀质机匀质，其它制作方法与实施例1一致)、实施例1、实施例2、实施例3、实施例4和实施例5中制备的溶菌酶做效果比较。
1.4试验设计：采用高效液相色谱法对样品处理。
本实验除实验用处理不同外其他操作均一致。
2结果与分析
普通处理(搅拌均匀后，未经过匀质机匀质，其它制作方法与实施例1一致)、实施例1、实施例2、实施例3、实施例4和实施例5制备的溶菌酶处理相比，数据见表1
表1
回收率(％) 酶活性(U/mg)
普通处理 72.7 14567
实施例1 91.7 21101
实施例2 84.7 19831
实施例3 88.3 20790
实施例4 91.7 20903
实施例5 89.3 20737
由表1实施例1和普通处理相比，本发明无论是在溶菌酶回收率，还是酶活性方面都明显好于普通处理；由实施例1至实施例3比较可以看出匀质温度对溶菌酶的回收率和活性还是有一定影响，其中实施例1采用40℃总体效果最好；由实施例1、实施例4和实施例5比较可以看出匀质压力和次数对溶菌酶的回收率和活性也有一定影响，并非压力越大，时间越长就越好，综合比较实施例1效果最佳。
实验二
1、实验供试材料
1材料与方法：
1.1试验地点：临沂罗庄区高都镇。
1.2供试材料：普通复混肥料(除未生态海藻液体生物刺激素外，其它制作方法与实施例1一致)、对比1(制备生态海藻液体生物刺激素时，除产氨棒杆菌未经融冻法处理直接使用外，其它制作方法均与实施例1一致)、对比2(除制备溶菌酶时未加入到匀质机中匀质外，其它制作方法均与实施例1一致)、实施例6和实施例1各160kg，做肥效实验比较；水稻种为豫教5号，40kg。
本实验除实验用处理不同外其他管理均一致。
1.3试验设计：选择20亩上一季作物一样的地，分为5组，4平行。将普通复混肥料(除未生态海藻液体生物刺激素外，其它制作方法与实施例1一致)、对比1(制备生态海藻液体生物刺激素时，除产氨棒杆菌未经融冻法处理直接使用外，其它制作方法均与实施例1一致)、对比2(除制备溶菌酶时未加入到匀质机中匀质外，其它制作方法均与实施例1一致)、实施例6和实施例1分别基施入翻耕过的土壤中，平均每亩施入40kg处理肥料，采用机械播种，每亩播种水稻种5kg，检测水稻剑叶宽度、叶绿素a、b含量及收获后统计产量和水稻中镉、铬、铅、砷含量，并测土壤pH。
本实验除采用肥料处理不同外，其它管理均一致。
2结果与分析
水稻平均剑叶宽度、叶绿素a、b含量见表1
表1水稻平均剑叶宽度、叶绿素a、b含量
由表1可以看出在同等条件下，本发明可以明显增加水稻叶片宽度，提高叶绿素a含量以及叶绿素a含量/叶绿素b含量的比值，提高水稻光合作用。由对比1和实施例1数据比较可以看出添加采用融冻法提高细胞活性的产氨棒杆菌制备的生态海藻液体生物刺激素，其效果明显好添加于未经融冻法处理的产氨棒杆菌制备的生态海藻液体生物刺激素；由对比2和实施例1比较可以看出通过匀质机匀质制备的溶菌酶效果明显好于普通搅拌的溶菌酶；由实施例1和实施例6数据对比可以看出采用新鲜海藻的效果好于采用晾干海藻的效果。
水稻产量见表2
表2各处理中水稻产量
产量1(kg) 产量2(kg) 产量3(kg) 产量4(kg) 平均产量(kg)
普通肥料 439.6 438.7 435.3 434.8 437.1
实施例1 481.3 482.5 482.9 483.7 482.6
对比1 459.4 459.7 462.5 459.9 460.4
对比2 457.4 459.3 457.9 456.8 457.9
实施例6 467.2 463.4 465.6 468.4 466.2
由表2可以看出在同等条件下，本发明可以明显增加作物产量。
水稻中镉含量见表3
表3各处理中水稻中镉、铬、铅、砷含量
镉(％) 铬(％) 铅(％) 砷(％)
普通肥料 0.00003 0 0.00001 0
实施例1 0.00001 0 0 0
对比1 0.00002 0 0 0
对比2 0.00002 0 0 0
实施例6 0.00001 0 0 0
由表3可以看出，本发明可以抑制水稻对重金属的吸收，对改善作物品质起到一定的作用。
各处理土壤pH见表4
处理1pH 处理2pH 处理3pH 处理4pH 平均pH
普通肥料 5.82 5.84 5.85 5.84 5.85
实施例1 5.89 5.91 5.87 5.89 5.90
对比1 5.89 5.90 5.86 5.89 5.91
对比2 5.88 5.90 5.87 5.89 5.89
实施例6 5.89 5.91 5.88 5.88 5.90
有表4可以看出，与普通肥料相比本发明可以改善土壤酸化问题；与其它处理相差不大。
由以上实验可以得出，本发明在促进作物生长方面可以提高水稻剑叶宽度，叶片光合作用，提高水稻产量；产氨棒杆菌经融冻法处理后效果更佳；溶菌酶采用匀质机匀质后，效果明显好于简单搅拌均匀的产品。
本发明在调理土壤方面，可以固定重金属，防止作物吸收以及改善酸化土壤的作用。

Claims (9)

1.一种生态肥料的生产方法，其特征在于按照以下步骤进行：
将生态海藻生物刺激素或生态海藻液体生物刺激素，加入到肥料当中，即得生态肥料；所述肥料为单质肥、复混肥、掺混肥、复合肥、有机肥、有机无机肥、水溶肥和生物有机肥中的一种；生态海藻生物刺激素或生态海藻液体生物刺激素和肥料的质量比为0.1～10:90～99.9。
2.如权利要求1所述生态肥料的生产方法，其特征在于：所述生态海藻生物刺激素按照以下步骤制备而成：
1）、制备海藻破碎物：将洗净后的海藻破碎，得到海藻破碎物；
2）、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在60～120℃条件下灭菌5～40min，冷却至27～45℃接入酶，酶解30～60min，海藻破碎物、水和酶的质量比5～30:70～95:0.02～1,得酶解海藻；
3）、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4）、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为50～70%，在70～150℃条件下灭菌5～40min，冷却至27～36℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.1～2:98～99.9,在温度为27～36℃，发酵罐中氧气浓度为8～21%，发酵6～144h，在温度为70～150℃条件下灭菌20～40min，冷却至20～40℃,得海藻发酵物；
5）、制备生态海藻液体生物刺激素和海藻残渣：将步骤3）得到的海藻滤液加入到步骤4）得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为95～99.8:0.2～5，在温度为25～35℃，含氧量为1～8mg/L条件下，发酵1～6天，压滤后所得滤液即为生态海藻液体生物刺激素；滤渣即为海藻残渣；
6）、制备生态海藻生物刺激素：生态海藻液体生物刺激素经浓缩和喷雾干燥后，即得生态海藻生物刺激素；
所述海藻是浒苔、海带、马尾藻、裙带和昆布中的一种或任意比例两种以上。
3.如权利要求2所述的生态肥料的生产方法，其特征在于：融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a）菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10%的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b）融冻法提高细胞的通透性：融冻法至少重复一次，其步骤为：将步骤1）得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液 1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂20.0～25.0g;
其中牛肉浸液的生产方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
4.如权利要求2所述的生态肥料的生产方法，其特征在于：所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物，其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，至少匀质一次，匀质温度为30～60℃，匀质压力为2～40MPa，匀质时间为10～40min，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为15000～30000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:3～8，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.001～0.5mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗
脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为2000～10000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶；
所述树脂是所述树脂为阳离子交换树脂或大孔吸附树脂；阳离子交换树脂的型号为001*7、732、AmberliteIR-120、Dowex-50、Lewatit-100、Diaion SK-1、AllassionCS、Duolite C-20、SDB-3中的一种或多种，大孔吸附树脂为AB-8、D101、D3520、X-5、NKA-II、NKA-9、S-8、XDA-1、H-20、H-30、H-40中的一种或多种。
5.如权利要求2所述的生态肥料的生产方法，其特征在于：步骤3）所述分离包括压滤、过滤和离心分离中的一种或两种以上。
6.如权利要求2所述的生态肥料的生产方法，其特征在于：步骤4）所述混合培养基至含水量为60%，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，氧气浓度为12%，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min。
7.如权利要求2所述的生态肥料的生产方法，其特征在于：步骤5）混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天。
8.如权利要求2所述的生态肥料的生产方法，其特征在于：所述胶红酵母和产氨棒杆菌均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号分别为CICC 31192和CICC 10168。
9.如权利要求4所述的生态肥料的生产方法，其特征在于：步骤A）中所述匀质为匀质2次，匀质温度为40℃，匀质时间为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa。
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