CN108034601A - 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA，该菌株已于2016年12月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其生物保藏号为：CGMCC NO.13449。该菌株具有解磷、解钾、抑制植物病原菌和促进烟草植株生长多种功能，为提高烟田土壤肥力、改善烟田土壤环境、植物病害生物防治和进一步提高我国烟叶品质提供了理论依据和菌质资源。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一株解淀粉芽孢杆菌及其应用。
背景技术
植物内生细菌(Endophytic bacteria)泛指那些定殖于植物体内而未表现致病外部症状的、或对宿主植物无负面影响的细菌。植物内生细菌的一个重要生物学功能是生防特性，可用于植物病害、虫害和植物寄生线虫的生物防治。植物内生细菌易于定殖在植物体内，相对于植物外生生防微生物，在定殖方面更具优势。在地球上存在的300 000种植物中，每种植物都有内生细菌存在，但仅有少数植物的内生细菌资源被报道。
部分烟草品种的烟草内生菌种类组成、种群动态特征已有报道，并用于烟草病害的生物防治。但大多数研究都集中于单一功能生物因子或同一功能的不同生物因子的功能菌群的研究，对多功能内生细菌菌株筛选研究甚少。
钾和磷在优质烟叶生产中具有重要作用，国外优质烟叶的钾含量一般都高于2.5％，而我国烟叶钾含量一般低于2％，优质烤烟要达到所需含钾量实际上是钾素在烟株体内的积累过程，因此，生产优质烟叶必须施用形成最适产量烟株生产所需钾素2-3倍的钾肥，才能使烟叶含钾量大幅提高。磷也是烟草生长的要素之一，烟草缺磷时，会导致烟草生长缓慢，抗逆性减弱，影响烤烟品质。但是，我国烟区土壤中有效钾、磷含量普遍偏低，而且土壤中95％以上的钾以矿物钾形态存在，不能被烟株直接吸收利用。土壤中的磷素以无机态和有机态两种形式存在，其中无机磷的含量约占35-50％，可供烟株直接利用的只有不足10％；有机磷不能被直接吸收利用，必须在微生物的作用下转变成可利用的无机态形式才能被吸收利用。为提升烟叶品质，在烟草种植的过程中大量施入钾肥和磷肥，虽然能够增加烟叶的产量，但却破坏了土壤结构，造成土壤肥力不断下降。因此，开发新的高效解磷、解钾菌株制成微生物肥料，来释放土壤中固定的磷和钾资源，对于发展生态农业具有十分重要的意义。
另外，烟草是受病害威胁最为严重的农作物之一，烟草从育苗到采收的各个阶段，都可受到病原物的侵害。采用生物防治烟草病害，可以提高烟叶的质量和使用安全性，但现有的用于烟草病害防治的微生物农药，其抑菌谱范围较小，抑菌效果不理想。
因此，针对烟草的生理特性，为提高烟田土壤肥力，改善烟田土壤环境，提高烟草的抗病能力和提升烟叶品质，亟需开发新的多功能烟草内生菌。
发明内容
针对上述现有技术的不足，发明人经长期的技术与实践探索，从烟草茎秆的髓部组织中筛选分离出一株具有解磷、解钾、抑菌和促进烟草植株生长的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)NTBA，该菌株为多功能的烟草内生菌，为提高烟田土壤肥力、改善烟田土壤环境、植物病害生物防治和进一步提高我国烟叶品质提供了理论依据和菌质资源。
具体的，本发明涉及以下技术方案：
本发明的第一方面，提供了一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA，该菌株已于2016年12月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，其生物保藏号为：CGMCCNO.13449。
本发明的第二方面，提供上述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA的培养方法，所述培养方法包括：将解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA置于NB培养基中培养，培养条件为28℃下有氧培养，如28℃、150r/min振荡培养。
本发明的第三方面，提供解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA的发酵培养物。所述发酵培养物具体可为如下方法制备的发酵培养物：将解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA接种到NB培养基中，28℃、150r/min振荡培养48-72h，得到发酵培养物(即整个发酵体系)。
本发明的第四方面，提供上述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA的应用；所述应用为解钾和/或解磷和/或抑制植物病原菌和/或促进烟草植株生长；
所述植物病原菌为杨树溃疡病菌和烟草黑胫病菌。
本发明的第五方面，提供上述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和/或解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的发酵培养物在制备产品中的应用；所述产品具有如下至少一种用途：
(I)解钾；(II)解磷；(III)抑制植物病原菌；(IV)促进烟草植株生长；
所述植物病原菌为杨树溃疡病菌和烟草黑胫病菌。
本发明的第六方面，提供一种微生物菌剂，其活性成分为上述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA或解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA的发酵培养物。
作为优选，微生物菌剂的剂型为可湿性粉剂、水分散剂、水悬浮剂或可分散油悬浮剂。
作为优选，微生物菌剂中还包括农药学上可接受的辅料，所述农药学上可接受的辅料选自分散剂、润湿剂、崩解剂、粘结剂、消泡剂中的一种或多种。本发明对于所述农药学上可接受的辅料的来源没有特殊限制，一般采用市售产品即可。
在烟田土壤中施用本发明的微生物菌剂，其活性成分解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)NTBA或其发酵培养物可以将烟田土壤中难以被烟草植株直接利用的磷和钾分解成可被直接吸收的磷和钾，提高了烟田土壤的肥力，促进了烟草植株的生长，也促进了钾素在烟株体内的积累，从而提高了烟草和烟叶的品质；另外，本发明的微生物菌剂对烟草生长过程中的病原菌具有防治作用，提高了烟草植株的抗病能力。基于此，上述微生物菌剂在提高烟田土壤中可被烟草直接利用的钾和磷含量、提高烟草植株的抗病能力和提高烟叶品质中的应用也是本发明的保护范围。
本发明的有益效果：
本发明首次从烟草植株内分离出了一株具有解磷、解钾、抑制植物病原菌和促进烟草植株生长的多功能解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA，为提高烟田土壤肥力、改善烟田土壤环境、植物病害生物防治和进一步提高我国烟叶品质提供了理论依据和菌质资源。而且，本发明的解淀粉芽孢杆菌本身为烟草的内生细菌，将其应用于烟草种植时，相较于其他外来引进的菌种，能够在烟地土壤环境中更好的存活和迅速的生长，更有利于促进烟草植株的生长和烟草病虫害的防治，对生态环境的安全性也更高。
附图说明
图1：菌株的***发育树。
图2：解淀粉芽孢杆菌NTBA的抑菌活性实验结果；其中，A：对杨树溃疡病菌的抑菌效果；B：对烟草黑胫病菌的抑菌效果。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
正如背景技术部分所介绍的，由于我国烟区土壤中有效钾、磷含量普遍偏低，而优质烟叶需要大量钾和磷的积累，再加之烟草植株极易受到植物病原菌的侵害，因此，亟需一种能够集解钾、解磷、抑制植物病原菌和促进烟草植株生长多种功能于一体的烟草内生菌。
解淀粉芽孢杆菌是芽孢杆菌的一个种，在酶工业、食品工业和农业中具有广泛的应用，但解淀粉芽孢杆菌同种不同菌株的性能会存在非常显著的差异，由于筛选环境的不同，不同来源筛选得到的解淀粉芽孢杆菌的功能也会存在很大的差异。生防微生物与土壤环境中的微生物群落之间往往存在相互作用，外源菌株的引入可能会引起作物土壤微生物群落组成发生变化。基于此，本发明首次从烟草植株内分离出了一株同时具有解磷、解钾、抑制植物病原菌和促进烟草植株生长的多功能解淀粉芽孢杆菌，该解淀粉芽孢杆菌为烟草内生菌，生态安全性更高，特别适用于烟草的种植、烟叶品质的提高和烟区土壤的改良。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。如果实施例中未注明的实验具体条件，通常按照常规条件，或者按照试剂公司所推荐的条件；下述实施例中所用的试剂、耗材等，如无特殊说明，均可通过商业途径获得。
实施例1：菌株的分离和鉴定
1.菌株的获得：
烟株采自山东省烟田处在成株期的健康烟株，烟草茎秆切取长度5cm左右的小段，75％酒精浸泡1min，用酒精火焰表面灭菌，纵向切开茎秆，取2mm*2mm髓部组织接种到NA培养基上，28℃培养3d。挑取髓部组织块周围菌落，在NA培养基划线，28℃培养3d，挑取单菌落进一步纯化制得菌株NTBA。
2.菌株的鉴定：
以菌体DNA为模板，用通用引物(5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3')和(5'-CGGTGTGTACAAGGCCC-3')扩增16SrRNA片段测序分析。反应在体系：95℃预变性5min；30个循环(94℃40s，56℃40s，72℃45s)；72℃延伸7min。通用引物测序，得到的16S rRNA基因序列，如SEQ ID NO.1所示，用BLAST搜索程序从GenBank中进行同源性分析。同时根据GenBank中与菌株的16S rRNA序列相似性较高的序列用MEGA5.1软件进行***发育树构建，***发育树见图1。
结合菌株的形态鉴定和分子鉴定结果，确定菌株NTBA属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA，并于2016年12月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNO.13449。
实施例2：菌株的发酵培养
将实施例1分离得到的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA接种于LB培养基中于28℃培养24h，进行菌种活化；将活化后的菌种接种于NB培养基中，于28℃、150r/min振荡培养12h，得种子液；将种子液按体积比为1％接种于NB培养基中，于28℃、150r/min振荡培养72h，得发酵培养物。
实施例3：菌株NTBA在解磷和解钾方面的应用
1.解磷能力(即将植物不能直接利用的磷转变成植物能利用的可溶性磷的能力)
(1)定性测定
将解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA接种于解磷培养基中，28℃培养120h，观察记录具有透明圈的菌落，测量透明圈(即溶磷圈)直径(D)和菌落直径(d)，计算D/d值。
所述解磷培养基包括：解无机磷培养基和解有机磷培养基，其中：
解无机磷培养基：葡萄糖10.0g、(NH4)2SO4 0.5g、MgSO4·7H2O 0.3g、NaCl 0.3g、KCl 0.3g、MnSO4·4H2O 0.03g、FeSO4·7H2O 0.03g、Ca3(PO4)2 5.0g、酵母浸膏0.5g、琼脂18.0g、蒸馏水1000ml；(pH 7.0-7.5)。
解有机磷培养基：葡萄糖10.0g、(NH4)2SO4 0.5g、MgSO4·7H2O 0.3g、NaCl 0.3g、KCl 0.3g、MnSO4·4H2O 0.03g、FeSO4·7H2O 0.03g、CaCO3 5.0g、卵磷脂0.2g、琼脂18.0g、蒸馏水1000ml；(pH 7.0-7.5)。
设置6个重复处理，结果取平均值。结果见表1。
表1：菌株NTBA的解磷效果
| 培养基 | d菌落直径(cm) | D透明圈直径(cm) | D/d |
| 解无机磷培养基 | 0.37±0.06 | 1.17±0.12 | 3.15 |
| 解有机磷培养基 | 1.33±0.32 | 4.62±0.35 | 3.47 |
(2)定量测定
1)用无菌水将解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA制备成菌浓度为109cfu/ml的菌悬液；
2)取部分步骤1)得到的菌悬液121℃高温灭菌20min，得到灭活菌液；
3)实验组：将1ml步骤1)得到的菌悬液接种至50ml解有机磷液体培养基中(解有机磷液体培养基的配方：葡萄糖10.0g、(NH4)2SO4 0.5g、MgSO4·7H2O 0.3g、NaCl 0.3g、KCl0.3g、MnSO4·4H2O 0.03g、FeSO4·7H2O 0.03g、CaCO3 5.0g、卵磷脂0.2g、蒸馏水1000ml)，28℃、180rpm振荡培养5d，然后将整个培养体系转移至无菌的50ml离心管，加入0.5g无磷活性炭，然后进行超声波细胞破碎(处理时间为20min，释放出细胞内的有效磷)，然后在4℃、10000rpm离心15min，取上清液；
对照组：用1ml步骤2)得到的灭活菌液代替步骤1)得到的菌悬液，其余处理方法同实验组。
4)取步骤3)得到的上清液，采用钼酸铵比色法检测可溶性磷含量。
P＝K×V/V1；P：有效磷增量；K：从标准曲线查得显色液的磷含量(mg/L)；V：显色时溶液定容的体积(ml)；V1：显色时吸取上清液的体积(ml)。
溶磷量＝实验组的P值-对照组的P值。
每组设置6个重复处理，结果取平均值。
经计算，溶磷量为120.24±1.83mg/L。
2.解钾能力(即将植物不能利用的钾转变为植物能利用的可溶性钾的能力)
(1)定性测定
将解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA接种于解钾培养基中，28℃培养120h，观察记录具有透明圈的菌落，测量透明圈(即溶磷圈)直径(D)和菌落直径(d)，计算D/d值。
解钾培养基：蔗糖10.0g、酵母膏0.5g、(NH4)2SO4 1.0g、NaHPO4 2.0g、MgSO4·7H2O0.5g、CaCO3 1.0g、钾长石粉(K2O含量不低于9.6％)1.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000ml(pH7.0-7.4)。
设置6个重复处理，结果取平均值。结果表面，解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)NTBA在解钾培养基上生长良好，能形成明显的透明圈，透明圈直径为4.02±0.31cm，菌落直径为1.37±0.38cm，D/d值为2.93。
(2)定量测定
1)用无菌水将解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA制备成菌浓度为109cfu/ml的菌悬液；
2)取部分步骤1)得到的菌悬液121℃高温灭菌20min，得到灭活菌液；
3)实验组：将5ml步骤1)得到的菌悬液接种至100ml解钾液体培养基中(解钾液体培养基的配方：蔗糖10.0g、酵母膏0.5g、(NH4)2SO4 1.0g、NaHPO4 2.0g、MgSO4·7H2O 0.5g、CaCO3 1.0g、钾长石粉(K2O含量不低于9.6％)1.0g、蒸馏水1000ml)，28℃、180rpm振荡培养7d，然后在4℃、10000rpm离心10min，取上清液；
对照组：用5ml步骤2)得到的灭活菌液代替步骤1)得到的菌悬液，其余处理方法同实验组。
4)取步骤3)得到的上清液，利用火焰分光光度计法测钾含量。
解钾量＝实验组的钾含量-对照组的钾含量。
每组设置6个重复处理，结果取平均值。
经计算，解钾量为10.02±0.68mg/L。
由上述试验结果可以看出，本发明的解淀粉芽孢杆菌NTBA具有极好的解钾和解磷能力，能够将植物不能利用的钾和磷转变成植物所能利用的可溶性钾和可溶性磷，对提高土壤肥力有着极其重要的意义。
实施例4：菌株NTBA对植物病原菌的抑制作用
1.菌液的制备：
挑取解淀粉芽孢杆菌NTBA单菌落移入装有5mLNB培养基的试管中，28℃、150r/min振荡培养12h；取20μL移入装有20mL NB培养基的三角瓶中，28℃、150r/min振荡培养12h，获得菌悬液。
2.抑菌活性实验：
取杨树溃疡病菌、烟草黑胫病菌平板，在边缘打取d＝5mm菌碟，置于PDA平板中央。距离杨树溃疡病菌、烟草黑胫病菌菌碟2.5cm处接种解淀粉芽孢杆菌NTBA的菌悬液。以只接种杨树溃疡病菌和烟草黑胫病菌的平板为对照。置于25℃恒温培养箱中培养，3d-5d测量对照菌落半径，计算抑菌率。
解淀粉芽孢杆菌NTBA对杨树溃疡病菌和烟草黑胫病菌的抑菌效果见图2，抑菌率的计算结果见表2。
表2：解淀粉芽孢杆菌NTBA与植物病原菌的对峙结果
3.田间实验：
实验地块为常年严重发生烟草黑胫病的田块。本领域技术人员也可根据现有技术利用土壤稀释法从田间土壤中分离得到病原菌，再回接烟株使烟株发病。
将烟株幼苗进行大田移栽，株行距为20cm×100cm，每实验小区面积60m2，所有实验小区栽培条件一致。分别在烟苗移栽7d和14d后灌根稀释1000倍的菌悬液，用量为50ml/株，同时以25％甲霜灵可湿性粉剂500倍液为药剂对照，以清水为空白对照。每个处理3次重复，各处理随机排列。
在移栽40d和60d后分别调查病情指数和计算相对防效。
病情指数＝∑[各级病株数×该病级值]×100/调查总株数×最高病级数值；
其中，烟草黑胫病分级标准参照中华人民共和国烟草行业标准(YC/T39-1996)规定执行，即根据烟草发病病情分为5级，具体标准为：
0级：不发病；
1级：茎基部变为黑褐色，病基长度不超过茎长1/4；
2级：黑褐色病茎长度达茎长1/4-1/2；
3级：病茎长度超过茎长1/2，且全株萎焉；
4级：全株基本变为黑褐色，死亡。
根据病情指数最终计算相对防效，并据此数值判断防治效果，相对防效的计算方法如下：
相对防效＝(空白对照病情指数-处理病情指数)×100/对照病情指数。
具体调查结果见表3。
表3：解淀粉芽孢杆菌NTBA菌剂对烟草黑胫病防治的田间试验结果
实施例5：菌株NTBA在促进植物生长中的应用
1.菌剂的制备：
将解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA接种于LB培养基中于28℃培养24h，进行菌种活化；将活化后的菌种接种于NB培养基中，于28℃、150r/min振荡培养12h，得种子液；将种子液按体积比为1％接种于NB培养基中，于28℃、150r/min振荡培养72h，制备得到菌剂，将菌剂用无菌水稀释100倍，备用。
2.烟草促生实验：
采用盆栽法培养烟草30d移栽至新的育苗盘中3d后，将稀释100倍的上述菌剂10mL浇灌于烟草苗根际土壤中。以不加菌剂的烟苗培养为对照。
室温环境中培养30d后，在烟草生长的团棵期，测量烟草叶宽、叶长、叶片数、株高、茎粗。结果见表4。
表4：烟草促生实验地上部分测量统计结果
由表4可以看出，施用菌剂的处理在叶宽、叶面积、株高、茎粗指标上都较对照组有明显的差异，即解淀粉芽孢杆菌NTBA菌剂能促进烟草植株的生长。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。
序列表
<110> 山东农业大学；齐鲁工业大学
<120> 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用
<130> 2017
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1443
<212> DNA
<213> 解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)
<400> 1
gaatctgcac ttcggcggct ggctcataaa ggttacctca ccgacttcgg gtgttgcaaa 60
ctctcgtggt gtgacgggcg gtgtgtacaa ggcccgggaa cgtattcacc gcggcatgct 120
gatccgcgat tactagcgat tccagcttca cgcagtcgag ttgcagactg cgatccgaac 180
tgagaacaga tttgtgggat tggctaaacc ttgcggtctc gcagcccttt gttctgtcca 240
ttgtagcacg tgtgtagccc aggtcataag gggcatgatg atttgacgtc atccccacct 300
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tcaagggttg cgctcgttgc gggacttaac ccaacatctc acgacacgag ctgacgacaa 420
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gatgtcaaga cctggtaagg ttcttcgcgt tgcttcgaat taaaccacat gctccaccgc 540
ttgtgcgggc ccccgtcaat tcctttgagt ttcagtcttg cgaccgtact ccccaggcgg 600
agtgcttaat gcgttagctg cagcactaag gggcggaaac cccctaacac ttagcactca 660
tcgtttacgg cgtggactac cagggtatct aatcctgttc gctccccacg ctttcgctcc 720
tcagcgtcag ttacagacca gagagtcgcc ttcgccactg gtgttcctcc acatctctac 780
gcatttcacc gctacacgtg gaattccact ctcctcttct gcactcaagt ttcccagttt 840
ccaatgaccc tccccggttg agccgggggc tttcacatca gacttaagaa accgcctgcg 900
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ggcacgtagt tagccgtggc tttctggtta ggtaccgtca aggtgcaagc agttactctt 1020
gcacttgttc ttccctaaca acagagcttt acgatccgaa aaccttcatc actcacgcgg 1080
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ctccggtttc ccggagttat cccagtctta caggcaggtt acccacgtgt tactcacccg 1380
tccgccgcta acatccggga gcaagctccc ttctgtccgc tcgactgcat tatagaccgc 1440
agg 1443
Claims (10)
1.一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA，其生物保藏号为：CGMCCNO.13449。
2.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌的培养方法，其特征在于，所述培养方法包括：将解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NTBA置于NB培养基中培养，培养条件为28℃下有氧培养。
3.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌的发酵培养物。
4.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌的应用；所述应用为解钾和/或解磷和/或抑制植物病原菌和/或促进烟草植株生长；
所述植物病原菌为杨树溃疡病菌和烟草黑胫病菌。
5.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌和/或权利要求3所述的发酵培养物在制备产品中的应用；所述产品具有如下至少一种用途：
(I)解钾；(II)解磷；(III)抑制植物病原菌；(IV)促进烟草植株生长；
所述植物病原菌为杨树溃疡病菌和烟草黑胫病菌。
6.一种微生物菌剂，其活性成分为权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌或权利要求3所述的发酵培养物。
7.根据权利要求6所述的微生物菌剂，其特征在于，微生物菌剂的剂型为可湿性粉剂、水分散剂、水悬浮剂或可分散油悬浮剂。
8.根据权利要求6或7所述的微生物菌剂，其特征在于，微生物菌剂中还包括农药学上可接受的辅料。
9.根据权利要求8所述的微生物菌剂，其特征在于，所述农药学上可接受的辅料选自分散剂、润湿剂、崩解剂、粘结剂、消泡剂中的一种或多种。
10.权利要求6-9任一项所述的微生物菌剂在提高烟田土壤中可被烟草直接利用的钾和磷含量、提高烟草植株的抗病能力和提高烟叶品质中的应用。
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