CN107964522B - 海洋链霉菌dut11及其抗补体活性应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株海洋链霉菌DUT11及其抗补体活性应用；所述海洋链霉菌为海洋链霉菌(Streptomyces sp.)DUT11 CGMCC No.14581。本发明的海洋链霉菌，补体溶血测试显示其发酵液具有显著的抗补体活性。本发明还公开了该海洋链霉菌抗补体活性物质制备的发酵条件和其代谢产物衣霉素I、V和VII都具有抗补体活性。

Description

海洋链霉菌DUT11及其抗补体活性应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一株海洋链霉菌DUT11及其抗补体活性应用。

背景技术

海洋环境占据地球总面积的70.8％，蕴含着丰富的微生物资源，海洋独特的环境特点，如低温、低营养、高压、高盐度等，造就了海洋微生物特有的代谢方式和代谢产物，放线菌因具有复杂的形态分化过程而具有合成种类丰富的次级代谢产物的能力。近年来，随着分子生物学技术的发展，越来越多的海洋放线菌被发现，许多源于海洋放线菌的次级代谢产物也被鉴定出具有抗肿瘤、抗菌、抗疟、杀虫功能以及酶抑制剂等多种生物活性功能(Zotchev,J Biotechnol,2012,158:168-75)。海洋放线菌所产生的结构新颖、功能多样的活性物质成为天然活性产物和新药开发的重要来源。

补体(Complement)是存在于正常人和动物血清与组织液中的一组经活化后具有酶活性的蛋白质，可辅助和补充特异性抗体，介导免疫溶菌、溶血作用，故称为补体(Min,etal.Biol Pharm Bull,2003,26:1042-4)。补体***是人体重要的免疫防御***之一。补体***的正常激活在消灭外来微生物、清除肌体内损伤或死亡的细胞和组织以及维持机体的平衡中起着重要的作用(Hourcade,et al.Molecular immunology,2016,69:62-9)。补体激活途径主要有三条：经典途径(Classical pathway)、旁路途径(Alternative pathway)和凝集素(MBL)途径(Terminal pathway)。然而，补体异常活化会引起许多疾病如风湿性关节炎、老年痴呆症、***性红斑狼疮、缺血性再灌注、急性心肌梗死、急性呼吸窘迫综合征等等(Qu,et al.Mol Immunol,2009,47:185-95)。此外，补体过度激活也会对一些组织造成实质性的损伤，如血管(Alper,et al.Science,1976,191:1275-6)、肾脏(Cooper,J Exp Med,1973,137:451-60)、关节(Holden,Science,1980,207:161)和红细胞(Caldwell,Rheum DisClin North Am,1999,25:919-28)等。研究还发现重症非典型性肺炎(SARS)也和补体***的过度激活有关(Peiris,et al.Lancet,2003,361:1767-72；Wong,et al.BMJ,2003,326:1358-62)。因此，具有抗补体活性药物的研发引起了人们广泛的关注。

化学合成的抗补体抑制剂具有成本高、选择性差、长期使用会降低人体防御机能，并能产生多种副作用等缺点，而天然产物来源的中的抗补体活性成分开发成本低，并可以直接在体内被消化吸收(谢予朋，等，中国医药导报,2013,33:28-31)。因此，天然产物来源的抗补体活性物质引起了国内外学者的普遍关注。近年来，天然产物来源的抗补体活性物质不断被发现，显示出了较好的抗补体活性应用前景。迄今为止，已经从动植物及微生物中分离出多种具有抗补体活性的物质，包括多糖、黄酮、甾体、皂苷、萜类、生物碱等(徐小娜，等.天然产物研究与开发,2015,2:355-359)。

相比植物资源的生长周期长、产量低、质量控制困难等限制，微生物具有其独特的优势，如生长繁殖快、易培养、生长过程可控、产量高、适合工业化生产，同时微生物的次生代谢产物种类繁多。此外，微生物容易进行遗传操作，可以利用组合生物合成等方法获得大量的类似物，更容易进行结构和药效的研究以及改善活性。因此，开发微生物来源的抗补体活性物质对于保护有限的植物资源和物种多样性具有重要的意义，同时在大量生产方面具有巨大的应用开发前景。

目前对于天然产物来源的抗补体活性物质的研究仍然处于初级阶段，还有许多问题尚待解决，如许多天然产物中分离得到的具有抗补体活性成分结构不明确、作用靶点和毒副作用未知等。当前临床上对新型抗补体活性药物的需求日益迫切，因此需要加强对天然产物中抗补体活性成分的基础研究，尤其是对微生物来源的抗补体活性成分的开发。

发明内容

本发明的目的在于提供一株海洋链霉菌DUT11及其抗补体活性应用；该海洋放线菌链霉菌(Streptomyces sp.)DUT11的代谢物具有显著的抑制补体活性的作用。

本发明涉及的海洋放线菌链霉菌(Streptomyces sp.)DUT11分离自辽宁大连小平岛海泥样品中，纯化培养基为贝内特(Bennett)培养基，其在贝内特培养基上生长良好；海洋链霉菌DUT11菌落凸起，表面褶皱，有灰白色孢子，且菌株DUT11可产生黄色色素。

本发明的海洋链霉菌(Streptomyces sp.)DUT11，菌种保藏编号为CGMCCNo.14581，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏日期均为2017年8月30日。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

第一方面，本发明涉及一株海洋链霉菌，所述海洋链霉菌为海洋链霉菌(Streptomyces sp.)DUT11 CGMCC No.14581。

优选的，所述海洋链霉菌的纯化培养基为贝内特培养基；每1L所述贝内特培养基的组成为：葡萄糖10g，蛋白胨2g，酵母粉1g，牛肉膏1g，琼脂15g，蒸馏水定容至1L，pH 7.2，121℃湿热灭菌20min。

优选的，海洋链霉菌DUT11的16S rRNA核苷酸全序列如SEQ ID NO.1所示，总长为1440bp。

优选的，所述海洋链霉菌的代谢产物具有抗补体(补体抑制)活性。

第二方面，本发明还涉及所述的海洋链霉菌在制备抗补体活性药物中的用途。

优选的，所述海洋链霉菌的代谢产物用于制备抗补体活性药物。

优选的，所述海洋链霉菌的代谢产物是通过包括如下步骤的方法制备而得：

S1、海洋链霉菌DUT11的发酵；

S2、海洋链霉菌DUT11发酵液离心后的上清液用乙酸乙酯萃取，菌丝体用甲醇萃取；得到的萃取液分别浓缩；再以1/10体积的水溶解，滤去不溶性沉淀，得菌丝体粗提物；

S3、使用恒压反相柱C18(40×300mm)，利用LC3000型高效液相色谱仪对所述菌丝体粗提物进行粗分离，分别用纯水、30％、50％、70％和100％甲醇进行梯度洗脱，对应得到5个组分；第4和第5个组分别通过HPLC(XDB-C18，5μm，4.6×150mm)制备，通过5％-95％乙腈(流速为0.4ml/min)进行梯队洗脱，分别得到海洋链霉菌DUT11的代谢产物衣霉素I、衣霉素V和衣霉素VII。

优选的，所述梯度洗脱的对象是菌丝体粗提物样品，用少量甲醇和水溶解(大约15ml)，滤去不溶性沉淀，即得所述样品的混合液。

优选的，梯度洗脱前，选择适当柱直径色谱柱(40×300mm)，3倍柱体积(1.5L)100％甲醇洗涤色谱柱，再用3倍柱体积(1.5L)纯水平衡色谱柱。

优选的，步骤S3中，通过5％-95％乙腈(流速0.4ml/min)进行梯队洗脱时，保留时间为19.5min时得到代谢产物衣霉素I，保留时间为21.9min时得到衣霉素V，保留时间为23.5min时得到衣霉素VII。

优选的，步骤S1中，所述发酵采用的发酵培养基包括大豆胰蛋白胨、三号、四号、五号、九号或三十三号培养基；

每1L所述大豆胰蛋白胨培养基组成：胰蛋白胨17g，大豆蛋白胨3g，氯化钠5g，葡萄糖2.5g，磷酸氢二钾2.5g，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20min；

每1L所述三号培养基组成：可溶性淀粉20g，黄豆粉25g，硫酸铵2g，氯化钠2g，磷酸氢二钾0.5g，碳酸钙5.0g，pH为7.2，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20min；

每1L所述四号培养基组成：胰蛋白胨17g，大豆蛋白胨3g，氯化钠5g，磷酸氢二钾2.5g，葡萄糖2.5g，蔗糖103g，酵母粉5g，自然pH，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20min；

每1L所述五号培养基组成：酪蛋白胨2g，酵母粉2g，蔗糖10g，六水合氯化锰0.3g，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20min；

每1L所述九号培养基组成：蔗糖20g，黄豆饼粉10g，玉米粉10g，氯化钾8g，pH为6.5，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20min；

每1L所述三十三号培养基组成：可溶性淀粉30g，黄豆粉10g，酵母粉2.5g，碳酸钙3.0g，pH为7.0，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20min。

优选的，步骤S1具体包括：

A、海洋链霉菌DUT11种子液的制备：将平板上的菌丝和孢子接入大豆胰蛋白胨培养基中，30℃，200rpm培养48h得到种子液；

B、海洋链霉菌DUT11的发酵：将所述种子液每1mL接种量接入50mL所述发酵培养基里，30℃条件下培养7天；

优选的，步骤S2中，所述乙酸乙酯萃取为萃取3次，等体积萃取；所述甲醇萃取为萃取3次，等体积萃取。

本发明具有的有益效果为：本发明提供了一株海洋链霉菌，补体溶血测试显示其发酵液对补体具有显著的抑制作用，能够保护血细胞。本发明还公开了此海洋链霉菌的具有抗补体作用的代谢物，其制备方法通过控制海洋链霉菌DUT11的液体发酵条件，简易制备了具有抗补体活性的代谢产物。

附图说明

图1显示的是菌株DUT11的菌落形态；

图2显示的是菌株DUT11的不同培养基提取物的抗补体作用；其中，A：DUT11不同培养基的上清液乙酸乙酯提取物抗补体活性；B：DUT11不同培养基的菌丝体甲醇提取物的抗补体活性；1，3，4，5，9，33为6种用于优化的培养基，1号和33号培养基的乙酸乙酯和甲醇提取物的活性较好；S为标准溶血，M为机械溶血；

图3显示的是衣霉素I、V和VII的正离子模式全扫描电喷雾电离质谱(ESI-MS)谱图；衣霉素I、V和VII是通过HPLC(XDB-C18，5μm，4.6×150mm，0.4mL/min，洗脱剂为5％-95％乙腈)制备得到的；

图4显示的是[M+H]⁺和[M+Na]⁺的分子离子的加合物；在[M+H-221]⁺和[M+H-203]⁺处的电压梯度诱导的离子衣霉素αβ-1和1′-糖苷键断裂而产生稳定的去糖基化物质，其相对质量可判断所连接的为N-酰基(-R)；

图5显示的是衣霉素I、V和VII的MS和MS/MS谱图；(A)衣霉素I的MS和MS/MS谱图，该组分在m/z 803.4处产生[M+H]+离子，分解成600.3、582.3和546.3等主要离子；(B)衣霉素V的MS和MS/MS谱图，该组分在m/z 831.4处产生[M+H]+离子，分解成628.3、610.3和574.3等主要离子；(C)衣霉素VII的MS和MS/MS谱图，该组分在m/z 845.4处产生[M+H]+离子，分解成642.4、624.3和588.3等主要离子；(D)衣霉素I的MS/MS碎裂的模式；(E)衣霉素V的MS/MS碎裂的模式；(F)衣霉素VII的MS/MS碎裂的模式。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。

实施例1、菌株DUT11的鉴定

综合链霉菌的形态特征、生理生化特征、16S rRNA序列等，将其鉴定这株菌为链霉菌属。具体鉴定结果如下：

1.菌体形态

菌株DUT11在贝内特培养基上生长良好，菌落凸起，表面褶皱，有白色孢子(见图1)，而DUT11可产生黄色色素。

2.生理生化特征

链霉菌DUT11能在额外添加盐浓度0-15％的大豆胰蛋白胨培养基上生长，盐浓度在0-8％生长良好并产生孢子，在达到15％时，菌落非常小，生长缓慢，基本上不生长。

表1放线菌DUT11的耐盐性

NaCl含量(％)	0	3	5	8	10	15
							生长状况	++	++	+++	++	+	+

注：“+”数量越多生长越好

3.16S rRNA鉴定

根据***发育树比较分析，该菌株DUT11与杆状链霉菌Streptomyces bacillarisNBRC 13487^T(99.65％)显示出最高的序列同源性。

链霉菌DUT11的16S rRNA核苷酸全序列总长为1440bp，序列如下所示(SEQ IDNO.1)：

实施例2、制备具有抗补体效果的海洋链霉菌DUT11的代谢产物

(1)链霉菌DUT11的发酵

A、链霉菌DUT11种子液的制备：将平板上的菌丝和孢子接入大豆胰蛋白胨培养基中，30℃，200rpm培养48h得到种子液；

B、链霉菌DUT11的发酵：将链霉菌DUT11种子液1mL接种量接入50mL发酵培养基里，包括大豆胰蛋白胨，三号，四号，五号，九号和三十三号培养基，30℃条件下培养7天；

所述大豆胰蛋白胨培养基(1#)组成：胰蛋白胨17g，大豆蛋白胨3g，氯化钠5g，葡萄糖2.5g，磷酸氢二钾2.5g，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20min；

所述三号培养基(3#)组成：可溶性淀粉20g，黄豆粉25g，硫酸铵2g，氯化钠2g，磷酸氢二钾0.5g，碳酸钙5.0g，pH为7.2，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20min；

所述四号培养基(4#)组成：胰蛋白胨17g，大豆蛋白胨3g，氯化钠5g，磷酸氢二钾2.5g，葡萄糖2.5g，蔗糖103g，酵母粉5g，自然pH，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20min；

所述五号培养基(5#)组成：酪蛋白胨2g，酵母粉2g，蔗糖10g，六水合氯化锰0.3g，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20min；

所述九号培养基(9#)组成：蔗糖20g，黄豆饼粉10g，玉米粉10g，氯化钾8g，pH为6.5，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20min；

所述三十三号培养基(33#)组成：可溶性淀粉30g，黄豆粉10g，酵母粉2.5g，碳酸钙3.0g，pH为7.0，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20min。

(2)具有抗补体(补体抑制)活性的链霉菌DUT11的代谢产物的制备

将发酵液在5000rpm离心15min，上清液用乙酸乙酯萃取(萃取3次，等体积萃取)，菌丝体用甲醇萃取(萃取3次，等体积萃取)，得到的萃取液分别用薄膜旋转蒸发仪浓缩(35℃)，再分别以1/10体积的水溶解样品，滤去不溶性沉淀，得到具有明显抗补体活性的链霉菌DUT11的菌丝体粗提物。

(3)海洋链霉菌DUT11的代谢产物衣霉素I、V和VII通过如下步骤的方法制备而得：使用恒压反相柱C18(40×300mm)，利用LC3000型高效液相色谱仪对具有抗补体活性的菌丝体粗提物进行粗分离，将样品用少量甲醇和水溶解(大约15ml)，滤去不溶性沉淀，即得所述样品的混合液；选择适当柱直径色谱柱(40×300mm)，用3倍柱体积(1.5L)100％甲醇洗涤色谱柱，再用3倍柱体积(1.5L)纯水平衡色谱柱。再加入样品的混合液，分别用纯水、30％、50％、70％和100％甲醇进行梯度洗脱，流速20ml/min，25min/瓶，每个组分分别接4瓶，得到5个组分(Fr.1-Fr.5)。

Fr.4和Fr.5分别用HPLC(XDB-C18，5μm，4.6×150mm，0.4mL/min)制备，通过5％-95％乙腈进行梯度洗脱，所得到的单组分峰经过纯化和结构鉴定分别为衣霉素I(保留时间：19.5min)、衣霉素V(保留时间：21.9min)和衣霉素VII(保留时间：23.5min)，如图3、4、5所示。

(4)溶血法测定抗补体活性

将5*BBS缓冲液稀释成1*BBS缓冲液；5000rpm，5min离心绵羊红细胞，弃上清，使用BBS缓冲液洗涤绵羊红细胞两次，稀释绵羊红细胞至2％；使用BBS缓冲液稀释1:4000溶血素至1:1000；使用BBS缓冲液稀释1:20补体试剂至临界浓度1:160；将100μL补体与100μL样品(菌丝体粗提物或步骤3制备的衣霉素纯品)分别混合，含有补体的测试管加入100μL补体后用BBS补齐至200μL，37℃水浴10min(需水浴样品号见表2中标识)；所有样品管分别加入溶血素，绵羊红细胞，使用BBS缓冲液补足0.6mL，配全溶血组；放入37℃水浴30min，拿出后冰上冷却；4℃，5000rpm离心10min，取0.2mL测定OD₄₀₅值。

化合物衣霉素I、衣霉素V和衣霉素VII经检测均具有抗补体活性，分别为25、75和70μg/ml。测试多种培养基后如图2和表3，DUT11在大豆胰蛋白胨，3号和33号培养基培养时，发酵液和菌丝体提取物具有明显的抗补体效果。

上述巴比妥缓冲液(barbitol buffer solution,BBS)：取巴比妥钠2.875g，溶于250ml热水中，再加入NaCl 42.5g、MgCl₂·6H₂O 0.84g、CaCl₂ 0.14g、巴比妥1.0g，补三蒸水至1000ml配制出5倍浓缩的巴比妥缓冲液(5×BBS)。使用时，将5×BBS用三蒸水稀释成巴比妥缓冲液(BBS)即可。

上述2％绵羊红细胞(sheep red blood cell,SRBC)：取绵羊血2ml，用BBS洗涤后，800rpm，离心3min，重复洗涤3次，再加入BBS至10ml，混匀，取约0.5ml加入红细胞压积管，3000rpm离心10min，测定红细胞体积百分比，按比例加入适量BBS配制成2％SRBC。

上述1:1000溶血素：取溶血素适量，加入BBS，配制成为1:1000溶血素溶液。

表2抗补体活性测试试剂配比

样品号	样品名	血清	溶血素	红细胞	缓冲液	水	样品
								1	标准	0.1	0.1	0.1	0.3
2*	血清背景	0.1			0.5
								3*	溶血素背景		0.1		0.5
4	全溶血			0.1		0.5
								5	机械溶血			0.1	0.5
6	血清溶血	0.1		0.1	0.4
								7	溶血素溶血		0.1	0.1	0.4
8*	样品背景				0.5		0.1
								9	样品溶血			0.1	0.4		0.1
10	样品	0.1	0.1	0.1	0.2		0.1

备注：按照如下配比配样品，带*可以不用配比测定，配比顺序为缓冲液、样品、血清、溶血素和红细胞

抗补体活性检测的计算公式如下：

标准溶血＝标准—血清溶血—溶血素溶血+机械溶血

样品溶血＝样品—血清溶血—溶血素溶血—样品溶血+2×机械溶血

抗补体活性(％)＝(1-样品溶血/标准溶血)×100

其中样品M为机械溶血对照，无补体***，所以不溶血；样品S为全溶血对照，里面的绵阳红细胞和溶血素结合，形成致敏绵阳红细胞，致敏绵阳红细胞再与补体结合，使其激活，补体发生溶细胞作用，引起红细胞肿胀，发生溶血。

表3、DUT11在不同培养基经典途径的抗补体活性

	1	4	5	3	9	33
							E	45.28	34.10	12.91	38.46	31.16	56.56
M	47.25	36.38	14.18	39.58	32.78	60.74

注：E：上清液的乙酸乙酯萃取物；M：菌丝体的甲醇萃取物。

序列表

<110> 上海交通大学

<120> 海洋链霉菌DUT11及其抗补体活性应用

<130> 2017

<141> 2018-01-04

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1440

<212> DNA

<213> Streptomyces sp. DUT11

<400> 1

tgctgcgcat cttaccatgc aattcgtacg atgatcgccg tttaggtggt ggattagtgg 60

cgaacgggtg agtaacacgt gggcaatctg cccttcactc tgggacaagc cctggaaacg 120

gggtctaata ccggataata ctctgttccg catggaacgg ggttgaaagc tccggcggtg 180

aaggatgagc ccgcggccta tcagcttgtt ggtggggtaa tggcctacca aggcgacgac 240

gggtagccgg cctgagaggg cgaccggcca cactgggact gagacacggc ccagactcct 300

acgggaggca gcagtgggga atattgcaca atgggcgaaa gcctgatgca gcgacgccgc 360

gtgagggatg acggccttcg ggttgtaaac ctctttcagc agggaagaag cgcaagtgac 420

ggtacctgca gaagaagcgc cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtagggc 480

gcaagcgttg tccggaatta ttgggcgtaa agagctcgta ggcggcttgt cacgtcggat 540

gtgaaagccc ggggcttaac cccgggtctg cattcgatac gggctagcta gagtgtggta 600

ggggagatcg gaattcctgg tgtagcggtg aaatgcgcag atatcaggag gaacaccggt 660

ggcgaaggcg gatctctggg ccattactga cgctgaggag cgaaagcgtg gggagcgaac 720

aggattagat accctggtag tccacgccgt aaacgttggg aactaggtgt tggcgacatt 780

ccacgtcgtc ggtgccgcag ctaacgcatt aagttccccg cctggggagt acggccgcaa 840

ggctaaaact caaaggaatt gacgggggcc cgcacaagca gcggagcatg tggcttaatt 900

cgacgcaacg cgaagaacct taccaaggct tgacatatac cggaaagcat cagagatggt 960

gccccccttg tggtcggtat acaggtggtg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat 1020

gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc cttgttctgt gttgccagca tgcctttcgg 1080

ggtgatgggg actcacagga gactgccggg gtcaactcgg aggaaggtgg ggacgacgtc 1140

aagtcatcat gccccttatg tcttgggctg cacacgtgct acaatggccg gtacaatgag 1200

ctgcgatgcc gtgaggcgga gcgaatctca aaaagccggt ctcagttcgg attggggtct 1260

gcaactcgac cccatgaagt cggagttgct agtaatcgca gatcagcatt gctgcggtga 1320

atacgttccc gggccttgta cacaccgccc gtcacgtcac gaaagtcggt aacacccgaa 1380

gccggtggga agcagactcg catctgtggc tcagaacgaa cgactgcgac ggctaaccca 1440

Claims (7)

1.一株海洋链霉菌，其特征在于，所述海洋链霉菌为海洋链霉菌（Streptomyces sp.）DUT11，保藏编号为CGMCC No. 14581。

2.一种如权利要求1所述的海洋链霉菌在制备抗补体活性药物中的用途。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述海洋链霉菌的代谢产物用于制备抗补体活性药物。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述海洋链霉菌的代谢产物是通过包括如下步骤的方法制备而得：

S1、海洋链霉菌DUT11的发酵；

S2、海洋链霉菌DUT11发酵液离心后的上清液用乙酸乙酯萃取，菌丝体用甲醇萃取；得到的萃取液分别浓缩；再以1/10体积的水溶解，滤去不溶性沉淀，得菌丝体粗提物；

S3、使用恒压反相柱C18对所述菌丝体粗提物进行粗分离，分别用纯水、30%、50%、70%和100%甲醇进行梯度洗脱，对应得到5个组分；第4和第5个组分别通过HPLC制备，通过5%-95%乙腈以流速为0.4 ml/min进行梯队洗脱，分别得到海洋链霉菌DUT11的代谢产物衣霉素I、衣霉素V和衣霉素VII。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，步骤S1中，所述发酵采用的发酵培养基包括大豆胰蛋白胨、三号、四号、五号、九号或三十三号培养基；

每1L所述大豆胰蛋白胨培养基组成：胰蛋白胨17 g，大豆蛋白胨3 g，氯化钠5 g，葡萄糖2.5 g，磷酸氢二钾2.5 g，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20 min；

每1L所述三号培养基组成：可溶性淀粉20 g，黄豆粉25 g，硫酸铵2 g，氯化钠2 g，磷酸氢二钾0.5 g，碳酸钙5.0 g，pH为7.2，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20 min；

每1L所述四号培养基组成：胰蛋白胨17 g，大豆蛋白胨3 g，氯化钠5 g，磷酸氢二钾2.5g，葡萄糖2.5 g，蔗糖103 g，酵母粉5 g，自然pH，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20 min；

每1L所述五号培养基组成：酪蛋白胨2 g，酵母粉2 g，蔗糖10 g，六水合氯化锰0.3 g，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20 min；

每1L所述九号培养基组成：蔗糖20 g，黄豆饼粉10 g，玉米粉10 g，氯化钾8 g，pH为6.5，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20 min；

每1L所述三十三号培养基组成：可溶性淀粉30 g，黄豆粉10 g，酵母粉2.5 g，碳酸钙3.0 g，pH为7.0，蒸馏水定容至1L，121℃湿热灭菌20 min。

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，步骤S1具体包括：

A、海洋链霉菌DUT11种子液的制备：将平板上的菌丝和孢子接入大豆胰蛋白胨培养基中，30℃，200 rpm培养48 h得到种子液；

B、海洋链霉菌DUT11的发酵：将所述种子液每1 mL接种量接入50 mL所述发酵培养基里，30℃条件下培养7天。

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，步骤S2中，所述乙酸乙酯萃取为萃取3次，等体积萃取；所述甲醇萃取为萃取3次，等体积萃取。

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