CN107864624B

CN107864624B - 用于硫酸长春新碱脂质体注射剂的即用型制剂

Info

Publication number: CN107864624B
Application number: CN201680043056.2A
Authority: CN
Inventors: 威廉·T·蒙特; 罗伯特·马尔柯姆·恩布拉; 骆兵; 张元鹏
Original assignee: Spectrum Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Spectrum Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2015-07-22
Filing date: 2016-07-22
Publication date: 2021-05-25
Anticipated expiration: 2036-07-22
Also published as: EP3324969B1; KR20180122050A; HK1250477A1; US11559486B2; KR102384126B1; ZA201800391B; CN107864624A; TWI678213B; TW201717913A; JP6850788B2; RU2676762C1; IL257068A; EP3324969A4; AU2016206387A1; MX2018000951A; KR101916835B1; ES2808938T3; EP3324969A1; KR20180016612A; CA2992724A1

Abstract

本文中所公开的是包含肿瘤制剂的各种组合物及其使用方法。

Description

用于硫酸长春新碱脂质体注射剂的即用型制剂

背景技术

类似于长春新碱的化学治疗剂的脂质体制剂可以通过其非包封形式提供显著的抗癌临床益处。医药学纳米粒子调配物可允许活体内延长的药物滞留、更长的药物代谢动力学半衰期和经增加的在肿瘤部位处的累积，其可以转化成改进的临床结果。对于在细胞有丝***期间干扰微管蛋白结合的类似于长春新碱的细胞周期特别药物，这些特征可以是特别地有吸引力的。源自脂质体的显著优势在于能够潜在地施用硫酸长春新碱脂质体注射剂(VSLI)而没有剂量上限且甚至可允许剂量加强。然而，非包封长春新碱可规定有剂量上限以避免严重的剂量限制神经病理学毒性(neuropathological toxicities)。

脂质体制剂的功效似乎在于脂质体能够保存治疗剂且保持活性剂的化学稳定性。认为当如在VSLI中使用由鞘磷脂胆固醇构成的脂质体时，这些耐水解脂质体允许治疗学上有意义的药物滞留时间。然而，长春新碱的化学不稳定性可能限制VSLI的存放期稳定性。对于

的稳定性研究似乎展示出在室温下VSLI降解发生于组成的24小时内。当前审批通过FDA标记需要在组成之后24小时内施用。由于VSLI的长期稳定性限制，其仅在施用之前在药店中制备。

由于不能实现标称地稳定即用型制剂，硫酸长春新碱脂质体注射剂(VSLI)(0.16mg/mL)在药店由作为

试剂盒的部分供应的三种药品成分组成。所述三种药品成分是硫酸长春新碱注射剂USP(VSI)、鞘磷脂胆固醇脂质体注射剂(SCLI)以及磷酸钠注射剂(SPI)。三种成分试剂盒被选定作为提供具有适用于至少24个月的存放期的演示的方式。所述试剂盒的稳定性可以通过在2℃到8℃下具有最短有效期的试剂盒成分(例如硫酸长春新碱注射剂)来调节。

因此可能需要研发一种即用型制剂来避免需要在药店的多步复合；这将提升Marqibo施用的简易性以及消除采购辅助设备(例如构成水浴)的需要且将药剂制备误差的可能性最小化。产物的稳定性受到长春新碱的降解(主要是N-去甲酰基长春新碱(NFV)的形成)的限制。这似乎是VSLI以及Marqibo试剂盒的成分VSI的最大单一降解。这种杂质随时间推移而增加导致Marqibo试剂盒和VSI两个的有效期为24个月。

长春新碱是从植物长春花(Vinca rosea)的叶子分离出的二聚吲哚二氢吲哚化合物。生物碱由桥接到长春碱胺(velbanamine)物种的N-去甲基-N-甲酰基文朵奎碱部分构成。似乎在其盐形式下最为稳定。盐易于通过将理论量的酸添加到生物碱游离碱的溶液中来制备，然而，如上所述，在4℃下平均长春新碱盐具有24个月的有限稳定性。硫酸长春新碱的N-去甲酰基化是长春新碱的重要降解路径。N-甲酰胺被放置在紧绷的文朵奎碱杂环的N1氮上且很可能将酰胺的羰基官能团扩张到易受亲核攻击或水解的位置。其它微量降解途径包括水解转换长春新碱，例如4-去乙酰化或在18′下损失甲酯接着去羧基。

长春新碱的这个不稳定性已经妨碍使未包封长春新碱制剂稳定的研发回到VSIUSP创新者，礼来公司(Eli Lilly)。礼来公司寻求研发硫酸长春新碱注射剂的冻结脱水或冻干制剂。长春新碱降解似乎已导致有利于含有硫酸长春新碱的即用型溶液的这些表现报废。长春新碱对热、酸以及光压力敏感导致N-去甲酰基长春新碱物种以及其它相关物质杂质降解。空气氧化可以是促成者并且已经证明由于降解杂质的形成，热除菌不与VSLI或VSI相容。

长春新碱的结构复杂度和二聚体的通常不可预测化学敏感性对于通常用于药物制剂的所使用的常见类型的赋形剂已是危害。礼来公司科学家在其VSI的制剂研发中指出应最小化氯离子的存在，因为其可“对溶瘤的长春花二聚体具有有害影响”。药物制剂中的氯离子的有害成果是罕见的。氯化钠充分地用于药物制剂中以提供所需等张性质。一个报告主张在25℃到37℃下阿霉素(Doxorubicin)和长春新碱两个在0.45％氯化钠水溶液和林格氏(Ringers)掺合物中快速降解。在含有作为等张剂的氯化钠的眼用制剂中，氯离子也涉及硫柳汞(抗真菌剂)的不稳定性。这些观察结果突出显示长春新碱的独特和极端化学敏感性。

未能找到能够延长存储的

的即用型制剂导致寻找施用VSLI的可替换方式导致研发三瓶试剂盒。用于施用

的三瓶组成工艺(在药店组成)在2012年8月收到来自FDA的营销批准。

即用型演示的研发对于

施用将是显著的改进。由Inex(Marqibo创新者)提议研究来改进VSLI制剂的稳定性，所述研究使用冻干、离子载体装载，和/或锰或硫酸镁脂质体装载平台。这些建议是基于使用二代包封方法，据称相较于pH梯度方法，所述二代包封方法对脂质体更温和或电中性。然而，在研发Marqibo期间，未曾实现稳定即用型制剂。持续需要VSLI的即用型制剂。

发明内容

一些实施例包括即用型长春新碱组合物，包含：包含第一水性缓冲液的连续水相、分散于第一水性缓冲液内的脂质体相、以及作为货物包封于脂质体相内的稳定水溶液；其中稳定水溶液包含第二水性缓冲液和溶解于其中的稳定长春新碱；其中第二水性缓冲液包含具有至少一种溶质的盐，可将所述溶质输送出脂质体相且将带正电溶质或水合氢离子留在稳定水溶液中，其中带正电溶质或水合氢离子使长春新碱稳定；并且其中连续水相与稳定水溶液的pH差值为至少2个pH单位。

一些实施例包括一种使脂质体中的长春新碱稳定的方法，包含：使脂质体相分散于包含第一水性缓冲液的连续水相内；其中脂质体相含有包封于脂质体相内的稳定水溶液；其中稳定水溶液包含第二水性缓冲液和溶解于其中的稳定长春新碱；其中第二水性缓冲液包含具有至少一种溶质的盐，可将所述溶质输送出脂质体相且将带正电溶质或水合氢离子留在稳定水溶液中，其中带正电溶质或水合氢离子使长春新碱稳定；并且其中连续水相和稳定水溶液的pH差值为至少2个pH单位。

一些实施例包括治疗哺乳动物癌症的方法，包含施用治疗量的组合物，所述组合物包含：包含第一水性缓冲液的连续水相、分散于第一水性缓冲液内的脂质体相以及作为货物包封于脂质体相内的稳定水溶液；其中稳定水溶液包含第二水性缓冲液和溶解于其中的稳定长春新碱；其中第二水性缓冲液包含具有至少一种溶质的盐，可将所述溶质输送出脂质体相且将带正电溶质或水合氢离子留在稳定水溶液中，其中带正电溶质或水合氢离子使长春新碱稳定；并且其中连续水相和稳定水溶液的pH差值为至少2个pH单位。

附图说明

图1是用于硫酸长春新碱脂质体制剂的包封机制的图式。

具体实施方式

本文中所公开的是涉及用于具有增强稳定性的硫酸长春新碱脂质体注射剂的即用型制剂的组合物和方法。一些实施例是通过用硫酸铵缓冲液(AS)置换用于当前VSLI制剂中的柠檬酸缓冲液并且产生增大稳定硫酸长春新碱物种的浓度的多重脂质体膜pH平衡而实现的(参看图1)。伴随互补外部pH缓冲液的硫酸铵可减缓长春新碱降解成N-去甲酰基长春新碱同时保持鞘磷脂胆固醇脂质体的结构和动态完整性。这可允许通过跨膜方法而高效装载和滞留长春新碱。一些实施例涉及用于治疗不同类型的淋巴瘤的方法，例如用于治疗复发形式的非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin′s Lymphoma)的方法。通常地，根据本公开的用于稳定药物的即用型组合物可包括连续水相、分散于连续水相中的脂质体相和作为货物包封于脂质体相内的稳定水溶液。

连续水相可包含第一水性缓冲液。第一缓冲液可使长春新碱稳定，且可帮助便于包封长春新碱。举例来说，中间或较高pH的连续水相(例如图1中所描绘的外部磷酸缓冲液)可允许长春新碱主要地以游离碱形式穿过脂质体膜。相比之下，包封于脂质体中的稳定水溶液具有足够低的pH来驱使长春新碱的酸碱平衡使得脂质体内的中性长春新碱的量可忽略。举例来说，这是通过图1的内部脂质体溶液中所描绘的长春新碱游离碱、硫酸长春新碱、氨和硫酸铵之间的平衡来说明的。这可提供在可具有更高长春新碱游离碱浓度的连续水相与包封于脂质体内的可具有可忽略的长春新碱游离碱浓度的稳定水溶液之间的长春新碱游离碱的浓度梯度。这个浓度梯度可驱使游离长春新碱从具有高浓度的长春新碱游离碱的连续水相中移动到具有可忽略浓度的中性长春新碱的在脂质体内的稳定水溶液中。也认为驱使了长春新碱装载，因为盐形式的长春新碱通常不穿过脂质体屏障到连续水相中，但中性的长春新碱可能穿过脂质体屏障到在脂质体内的稳定水溶液中。

在一些实施例中，第一缓冲水溶液包括可将连续水相缓冲到主要地提供中性长春新碱的pH的任何缓冲液，例如(但不限于)盐、酸或与酸或碱的共轭物组合的碱，所述酸或碱的共轭物例如单阴离子共轭碱、双阴离子共轭碱、三阴离子共轭碱、共轭碱、共轭酸或其任何混合物或组合。在一些实施例中，上文的任何组合可能以滴定混合物形式存在。在一些实施例中，缓冲液为硫酸盐缓冲液。在一些实施例中，缓冲液是磷酸盐缓冲液(例如，磷酸钠缓冲液)、碳酸氢盐缓冲液、硼酸盐缓冲液等。在一些实施例中，第一缓冲水溶液可以是原生载剂溶剂或脂质体相的流体载剂。

第一水性缓冲液可以任何合适浓度存在。举例来说，第一水性缓冲液可以使得缓冲液大约等张的浓度存在，例如浓度为约150mM到约400mM或约250mM到约350mM。

脂质体包括至少所属领域的普通技术人员理解的最广泛意义并且还包括由层状相双层(例如脂质双层)构成的囊泡或奈米粒子。在一些实施例中，脂质体或脂质体层由大致上不可溶于包括所属领域中已知的任何材料的第一缓冲水溶液的任何物质形成以形成脂质体奈米粒子。在一些实施例中，脂质体包含可形成由层状相脂质双层构成的囊泡的任何材料。脂质体可包含脂类，例如磷脂(例如磷脂酰胆碱)、鞘脂(例如鞘磷脂)、糖脂、磷酸甘油酯、聚乙二醇、胆固醇等。在一些实施例中，脂质体包含聚乙二醇化和/或未聚乙二醇化的磷脂酰基胆碱脂类和/或磷脂。在一些实施例中，一些脂质体中的脂类成分包含可给予脂质体的脂质双层有效性质的任何脂肪酸尾，例如改进的弹性、改进的药物装载等。

在一些实施例中，纳米颗粒或脂质体用于产生溶剂屏障或用于产生化学或渗透梯度。脂质体或纳米颗粒可用于分离两种大体上不同pH的水溶液。脂质体或纳米颗粒还可用于分离两种大体上相同pH的水溶液。在一些实施例中，纳米颗粒用于分离包含大体上不同缓冲液的两种溶液。脂质体或纳米颗粒还可用于分离包含大体上类似缓冲液的两种溶液。在一些实施例中，脂质体用于分离大体上不同pH且包含大体上不同的缓冲溶液的两种水溶液。在一些实施例中，通过分离两种水溶液而形成的梯度可能增大脂质体或纳米颗粒的装载效率。在一些实施例中，由脂质体形成的层描述为脂质体相、脂质体相或内部纳米颗粒相。

包封货物应理解为包括至少由所属领域的普通技术人员理解的最广泛意义且包括通过脂质体脂质双层与周围水相分离的水相。

在一些实施例中，脂质体包封可包含第二水性缓冲液和溶解于其中的稳定长春新碱的稳定水溶液。

在一些实施例中，第二水性缓冲液包含可缓冲包含铵盐的稳定水溶液的pH的任何缓冲液，例如硫酸铵缓冲液、铵柠檬酸盐缓冲液、铵磷酸盐缓冲液、碳酸氢铵缓冲液、碳酸铵缓冲液、铵硼酸盐缓冲液等。相信相较于最初提供类似pH的其它缓冲液，铵缓冲液可有助于通过随时间推移而将稳定水溶液保持在更低pH下来使长春新碱稳定。相信非铵缓冲液可随时间推移而失去其缓冲能力。一旦药物包封于脂质体中，那么其在可脂质体中变得高度浓缩而产生错离子移动平衡，如果错离子移动不平衡，那么可能促进长春新碱的降解。出乎意料地，铵缓冲液可比具有最初类似pH的其它缓冲液保持更多稳定的pH。对于例如图1中所描绘的***，这可能是因为游离氨可脱逃通过脂质体屏障而留下质子，所述质子由此使内部脂质体pH稳定。

在一些实施例中，稳定治疗活性剂是可以在稳定水溶液中稳定的任何药剂。在一些实施例中，稳定治疗活性剂是抗癌药物，例如(但不限于)长春新碱。

长春新碱可以由以下化学结构式表示：

长春新碱也可以由以下化学名称表示：(3aR，3a¹R，4R，5S，5aR，10bR)-甲基-4-乙酰氧基-3a-乙基-9-((5S，7S，9S)-5-乙基-5-羟基-9-(甲氧羰基)-2，4，5，6，7，8，9，10-八氢-1H-3，7-甲桥[1]氮杂环十一烯并(azacycloundecino)[5，4-b]吲哚-9-基)-6-甲酰基-5-羟基-8-甲氧基-3a，3a1，4，5，5a，6，11，12-八氢-1H-氮茚[8，1-cd]咔唑-5-羧酸盐。

在一些实施例中，第二缓冲水溶液有助于使溶解于稳定水溶液内的长春新碱稳定。在一些实施例中，治疗活性剂在稳定水溶液中比其在第一水性缓冲液中大体上更稳定。在一些实施例中，长春新碱在稳定水溶液中比在第一水性缓冲液中大体上更稳定。

稳定水溶液包含第二水性缓冲液。第二水性缓冲液应包含可输送出脂质体相的具有至少一种溶质的盐。当将溶质输送出脂质体相时，其将带正电溶质或水合氢离子留在稳定水溶液中。因此，带正电溶质或水合氢离子可使长春新碱稳定。存在可输送出脂质体相且留下带正电溶质或水合氢离子的多种盐。举例来说，可将带电中性碱输送出脂质体相。因此，对于中性碱中的盐，例如氨、胺、胺基酸、膦等，可将例如氨或胺的中性碱输送出脂质体相且来自盐的阳离子或水合氢离子可保持于稳定水溶液中。合适稳定盐的实例可以包括(但不限于)氨中的盐或例如甲胺、二甲胺、三甲胺、乙胺、二乙胺、三乙胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺等的胺中的盐。

在一些实施例中，治疗活性剂大体上通过第二水性缓冲液中的铵盐来稳定。在一些实施例中，硫酸铵缓冲液大体上降低长春新碱降解成去甲酰基长春新碱的速率。在一些实施例中，硫酸铵大体上保护长春新碱免于去甲酰化。在一些实施例中，铵离子的存在可大体上保护长春新碱免于去甲酰化。在一些实施例中，铵离子到溶液的主要促成者是硫酸铵。在一些实施例中，任何铵盐缓冲液可有助于保护长春新碱免于去甲酰化。

第二水性缓冲液可在可有助于使长春新碱稳定的pH下存在于稳定水溶液中。在一些实施例中，第二水性缓冲液，例如铵盐(例如硫酸铵)可能呈现根据权利要求1所述的组合物，其中铵盐以约100mM到约500mM、约200mM到约400mM、约200mM到约300mM、约250mM到约300mM、约300mM到约350mM或约250mM到约350mM的浓度存在于第二水性缓冲液中。

在一些实施例中，连续水相或第一水性缓冲液的pH为约pH 5到约pH 8.8或约pH9、约pH 5到约pH 6、约pH 6到约pH 7、约pH 7到约pH 8、约pH 7到约pH 8.5、约pH 7到约pH8.8或约pH 9、约pH 7.2到约pH 7.8、约pH 7.4到约pH 7.8、约pH 7.8到约pH 8、约pH 8到约pH 8.2、约pH 8.2到约pH 8.8、约pH 8.4到约pH 8.8、约pH 7.8、约pH 7.4、约pH 8、或受这些值中的任一个限定或在这些值中的任一个之间的任何pH。

在一些实施例中，稳定水溶液或第二水性缓冲液的pH为约pH 3到约pH 5.5、约pH3到约pH 4、约pH 3.5到约pH 4.5、约pH 4到约pH 5、约pH 4或受这些值中的任一个限定或在这些值中的任一个之间的任何pH。

在一些实施例中，连续水相与稳定水溶液或第一水性缓冲液与第二水性缓冲液之间的pH差值或ΔpH为约1pH单位到约4pH单位、约2pH单位到约3pH单位、约1.5pH单位到约2.5pH单位、约2.5到约3.5pH单位、约3pH单位到约4pH单位、约3.8pH单位，或受这些值中的任一个限定或在这些值中的任一个之间的任何差值。

在一些实施例中，ΔpH可能有助于增大脂质体包封效率。在一些实施例中，适用于实现有效脂质体装载的ΔpH为约1pH单位到约4pH单位、约2pH单位到约3pH单位、约1.5pH单位到约2.5pH单位、约2.5pH单位到约3.5pH单位、约3pH单位到约4pH单位、约3.8pH单位，或受这些值中的任一个限定或在这些值中的任一个之间的任何差值。

在一些实施例中，具有活性成份的脂质体的装载可描述为跨膜电位装载。在一些实施例中，电位由如上文所描述的质子梯度产生，所述质子梯度导致脂质体内的治疗剂累积。

在一些实施例中，ΔpH、所采用的缓冲液及脂质体的组合导致对于治疗活性剂的良好装载所需要的特征和最小化治疗活性剂的降解的特征两个的平衡。

在一些实施例中，所公开的组合物包括可产生多重脂质体膜pH平衡的硫酸铵缓冲液，所述平衡导致提高浓度的稳定硫酸长春新碱物种(参看图1)。硫酸铵平衡的所公开的脂质体制剂的用途伴随着由互补外部pH缓冲液控制的离子移动出人意料地减缓长春新碱降解成N-去甲酰和长春新碱(NFV)，又保持脂质体的结构和动态完整性来通过跨膜方法允许高效装载和滞留长春新碱。

N-去甲酰基长春新碱可以由以下结构式表示：

N-去甲酰基长春新碱也可以由以下化学名称表示：(3aR，3a¹R，4R，5S，5aR，10bS)-甲基4-乙酰氧基-3a-乙基-9-((5S，7S，9S)-5-乙基-5-羟基-9-(甲氧羰基)-2，4，5，6，7，8，9，10-八氢-1H-3，7-甲桥[1]氮杂环十一烯并[5，4-b]吲哚-9-基)-5-羟基-8-甲氧基-3a，3a1，4，5，5a，6，11，12-八氢-1H-氮茚[8，1-cd]咔唑-5-羧酸盐。

NFV可能有时甚至在存在梯度(即，内部pH为4而外部pH为7.5)时或在外部和内部pH相同(即，pH为4)时形成。这可暗示可能容易发生不可逆去甲酰化反应的长春新碱物种可形成于脂质体内部。一个可能物种为中性长春新碱，其可能容易发生长春新碱降解途径。本发明所公开的组合物的一个优势是其能够最小化脂质体内的容易发生降解的长春新碱物种的形成。

在一些实施例中，可以向哺乳动物施用本文中所公开的组合物以治疗癌症或治疗复发癌症。在一些实施例中，癌症包括淋巴瘤或白血病。在一些实施例中，哺乳动物可能已预先经历癌症治疗疗法。

在一些实施例中，本文中所公开的组合物可以包括于用于治疗哺乳动物的瘤形成的方法中。在一些实施例中，本文中所公开的组合物可以包括于用于治疗哺乳动物的复发形式的瘤形成的方法中。在一些实施例中，本文中所公开的组合物可以包括于用于治疗不同类型的淋巴瘤的方法中。在一些实施例中，可以施用本文中所公开的组合物以治疗非霍奇金淋巴瘤。在一些实施例中，可以施用本文中所公开的组合物以治疗复发的非霍奇金淋巴瘤。

如本文中所使用，术语瘤形成包括至少由所属领域的普通技术人员所理解的最广泛意义并还包括任何异常生长的细胞、肿瘤、恶性积液、包囊等。列举的瘤形成可含有多种细胞类型包括(不限于)瘤性细胞、内皮细胞或免疫细胞，例如白细胞、骨髓细胞(myelocytes)、淋巴细胞等。

在一些实施例中，待治疗的瘤形成是癌症。

在一些实施例中，其中组合物是硫酸长春新碱脂质体注射剂(VLSI)，可以向哺乳动物施用所述组合物以治疗癌症或复发癌症。可以约1mg/m²到约4mg/m²、约1.5mg/m²到约3mg/m²、约2mg/m²到约3mg/m²、约2mg/m²到约2.5mg/m²、约2mg/m²、约1.5mg/m²、约2.25mg/m²、约2.5mg/m²、约3mg/m²、约2.0mg/m²、约2.1mg/m²、约2.2mg/m²、约2.3mg/m²、约2.4mg/m²或约1.9mg/m²的剂量施用组合物。在一些实施例中，VLSI与其它治疗性化合物组合施用。在一些实施例中，VLSI与其它抗肿瘤药剂组合施用。

实例1：更低游离药物含量，渗析Marqibo制剂。

硫酸长春新碱脂质体注射剂(VSLI)的稳定性在其降解成N-去甲酰基长春新碱(NFV)中反映。在VSLI由3瓶试剂盒制剂组成时，由于长春新碱的潜在降解，可能需要在24小时内施用。制备VSLI也始终实现＜5％的游离长春新碱。游离长春新碱将在外部pH为7.4的缓冲液环境中。然而，长春新碱被认为在其盐形式(pKa 5.0和7.4)下最稳定，而相较于pH为4.0的脂质体内部，在pH为7.4下平衡将不太有利于盐形式。可适用于检查游离长春新碱对NFV的形成促进到何种程度及其对VSLI的整体稳定的影响。

VSLI由Marqibo试剂盒当量成分，即VSI、SPI及SCLI，制备。通过在变型pH条件下使用各种缓冲液渗析来移除游离(未包封)长春新碱。将变体在稳定条件下安放多达12周且针对关键VSLI稳定性指示标准进行测定。使用以下外部缓冲液渗析检测变体：

a)pH为7.4的磷酸盐缓冲蔗糖溶液

b)pH为7.4的磷酸盐缓冲盐水(PBS)

c)pH为4.0的磷酸盐缓冲蔗糖溶液

d)pH为5.0的磷酸盐缓冲蔗糖溶液

制备具有pH为4.0到7.4的外部缓冲液的外部游离长春新碱VSLI

执行(各自31mL)且合并由试剂盒成分包封的三个分离的VSLI。移除后装载样本用于分析且将剩余样本体积划分为四个部分(各自～21.75mL)。将这些样本放置在Spectrapor第1号、40mm宽度、6到8kDa MWCO的渗析膜包中且与20体积过量使用四体积更换的pH为7.4的磷酸盐缓冲盐水(PBS)或磷酸盐缓冲蔗糖溶液在室温下免受光照在24小时周期内进行渗析。所制备PBS包含20mM磷酸钠、130mM氯化钠、pH为7.4。磷酸盐缓冲蔗糖包含10％(w/v)蔗糖、20mM磷酸钠、pH为7.4。后渗析，将来自相同缓冲液的样本一起合并，在无菌条件下使用一次性注射器过滤器(帕尔Acrodiscs(Pall Acrodiscs)，0.2pm微孔大小、Supor膜)进行无菌过滤，且等分到单个、无菌导管(4.2mL)中用于每一时间点的稳定研究(在2℃到8℃下，0、2、4、8、12周；在室温下2、4、8、12周及在40℃下2周)。

制备具有pH为4和5的外部缓冲液的外部游离长春新碱VSLI

初级小规模评估

实行最初测试研究来确定在较低pH的条件下是否实际发生Marqibo的渗析。总计8mL的VSLI产品是由如上文所描述的Marqibo试剂盒小瓶制备且装载后材料划分成2mL的等分试样用于在Spectrapor第1号、20mm宽度、6到8kDa MWCO的渗析膜包中与20体积过量使用四体积更换的pH为4、5或6的SPI溶液在2℃到8℃下免受光照在二十四个小时周期内进行渗析。渗析后样本被测定游离长春新碱内含物(表1)且展示通过较低pH的外部缓冲液的渗析是可能的。

表1.渗析对Marqibo变体的总药物和游离药物百分比的影响。

样本	总药物(μg/mL)	游离药物％
			在pH为4下渗析后Marqibo	166.7	0.4
在pH为5下渗析后Marqibo	161.7	0.2
			在pH为6下渗析后Marqibo	165.4	0.3

按比例增长的渗析变体

50mL溶液的VSLI产品由如上文中所描述的Marqibo试剂盒小瓶制备。将装载后产品量划分为两份，且将各一半放置在Spectrapor第1号、40mm宽度、6到8kDa MWCO的渗析膜包中且与20体积过量使用四体积更换的pH为4或5的磷酸盐缓冲蔗糖溶液在2℃到8℃下免受光照在七十二个小时周期内进行渗析。收集渗析后样本、无菌过滤且等分到单个、无菌导管(3.5mL)中用于各个时间点的稳定研究(在2℃到8℃下，0、2、4、8、12周且在室温下2、4周)。

稳定分析方案

在各个稳定时间点关于以下分析样本：pH(贝克曼

pH计)、重量莫耳渗透浓度(Wescor公司，Vapro 5520蒸气压渗透计)、粒度、总和游离长春新碱以及药物相关杂质。

结果

从由3瓶制剂制备的VSLI的外部缓冲液中移除游离长春新碱的稳定性结果展示于表2中。移除游离长春新碱未显示改进VSLI稳定性。在4周内，在4℃下NFV的数量加倍且对于所有缓冲液以及pH变体，经八周降解速率是＞1.3％NFV/月。总长春新碱与NFV的形成同步减少。不含游离外部长春新碱的VSLI也遵循已知长春新碱化学降解特征，其中药物在室温下降解更快，在2周内NFV百分比加倍。这些降解速率类似于在4℃下所观察到的对于3瓶Marqibo试剂盒稳定性的1.6％NFV/月，其导致要求在24小时内组成的施用VSLI，由于长春新碱到NFV的降解。

由这些渗析研究产生的结果证实VSLI的稳定性驱使因素是N-去甲酰基长春新碱(NFV)的形成。VSLI的存放期将由NFV将如何快速增加到超出3.0规范限制的含量来确定。总长春新碱的损失与所观察到的NFV的增长相关。总杂质未不成比例地增加到NFV的增长，这包括在总杂质分配中。未观察到新杂质。所有变体保持在对于pH、重量莫耳渗透浓度及粒度的所允许的VSLI标准内且对于这些标准未观察到偏离规范的倾向。另外，存在于3瓶制剂中的作为用于甘露醇的等张剂的蔗糖的取代物未对长春新碱的降解速率起作用。

另外，展示于表2中的结果表明通过使用pH为4和pH为5的缓冲液渗析来移除游离长春新碱没有改变脂质体膜的完整性。更改ΔpH梯度的量值没有造成脂质体内含物的渗漏(如果pH装载梯度已受损害，可能已经预期)。随着时间的推移，游离长春新碱在所有变体中保持恒定地较低。

表2.外部游离药物的VSLI后渗析的稳定性。

这些渗析研究的结果证明游离外部长春新碱降解在确定所观察到的VSLI的稳定性中不扮演主要角色，虽然其很可能以次要方式促进VSLI的整体稳定。这些结果展示长春新碱的降解出现在由3瓶试剂盒制备的VSLI的脂质体后组成的内部。将ΔpH梯度保持在脂质体的内部与外部之间或移除(或最小化)VSLI的ΔpH不会改进用于3瓶制剂的脂质体内部的长春新碱的稳定性。

实例2：硫酸铵VCR脂质体变体。

Marqibo通过在药店中将Marqibo试剂盒成分(VSI、SCLI及SPI)培育在一起来构成。硫酸长春新碱(弱碱)由通过pH为4.0的内部SCLI与pH为7.4的所得脂质体外部SPI缓冲液的pH差产生的跨膜梯度的操作而装载入脂质体中。在装载过程期间，仅中性形式的长春新碱穿过脂质体膜且在SCLI内部捕获作为柠檬酸盐。这个装载具有柠檬酸盐缓冲液提供大于95％装载的长春新碱。然而，一旦组成，那么内部长春新碱柠檬酸盐适当地不稳定使得在24小时内尽管应将长春新碱保持作为盐物种的脂质体内部pH为4.0，仍发生NFV增长。从上文所描述的先前游离药物渗析实验中，长春新碱的降解似乎出现在脂质体内部且既不来自pH为7.4的外部长春新碱环境也不来自从脂质体中漏泄的长春新碱。可设想内部脂质体中的柠檬酸盐缓冲能力效率低下且可允许质子和溶质离子在整个膜中转移到使脂质体的内部pH为4.0的缓冲液不稳定的程度。为检查这个可能性，脂质体内部的柠檬酸钠缓冲液置换成可替换的“装载电池”。进行一系列实验，其中内部脂质体缓冲液是硫酸铵溶液(AS)。250mM硫酸铵的pH为约5.5：然而，在脂质体内部，氨与铵盐之间的分解平衡允许中性的氨分子穿过有效地降低内部pH的脂质体膜由于留下氢离子。所得内部pH为约4。这种平衡可比Marqibo的脂质体环境内部的柠檬酸钠柠檬酸平衡更好地将硫酸长春新碱保持作为盐形式。在这些实验中，外部pH从5.5变化到8但保持约4.0的内部pH(由于上文所描述的氨/铵平衡)。重量摩尔渗透浓度(molality)或缓冲液能力在250与350mM AS之间变化，且促进整体重量摩尔渗透浓度的等张成分使用多元醇和离子盐变化。在所有实验中，脂质体由鞘磷脂和胆固醇构成，基本上与SCLI组成相同。唯一的改变是使用硫酸铵缓冲液置换柠檬酸盐缓冲液。

脂质体制备单元方法。

这个实例描述用于鞘磷脂胆固醇脂质体制备的通用方法。

靶向脂质体成份制备计算。

Marqibo脂质体膜以2.5∶1的重量比含有鞘磷脂(SM)和胆固醇(CH)，其中最终产物VSLI含有2.37mg/mL SM。

在这些实验中，对于非药物装载脂质体变体的靶向浓度选择为43mg/mL SM以便易于处理且充分地浓缩用于药物装载步骤。

脂质体制备单元方法如下：针对70mL最终产物的目标：

1.水合作用(形成脂质体)

脂质溶解。将SM和CH脂质原材料溶解于乙醇中。使用充足乙醇以在15.7％(v/v)的水合相中得到最终浓度。在以上实例中，称量3g SM和1.2g CH且混合在一起并溶解于13mL的200标准酒精度的乙醇中。通过在75℃下在密封容器中加热乙醇脂质混合物来实现溶解直到获得清澈乙醇溶液。

含水水合作用。上文所制备的脂质溶液通过将乙醇脂质溶液快速倒入到在水浴中已预先平衡到65℃的水相中来“水合”。在这个实例中，使用将通过脂质体制剂包封的含有所关注溶质的70mL的水相。举例来说，350mM的硫酸铵或相关盐。伴随搅拌培育所得混合物0.5到1小时来使得脂质完全地水合。当脂质的乙醇溶液与水相混合时，快速稀释乙醇溶剂，将脂质暴露于水，这使得脂质自发地形成具有非均质的大小分布的脂质体囊泡。水合作用确保水分子与分子的亲水性部分完全地缔合。

2.精简

形成脂质体之后设定囊泡大小以便产生具有均一和优选的粒径(在这种状况下约100nm)的脂质体群。这通过在压力下将上文步骤1中产生的脂质体悬浮体挤出通过限定微孔大小的膜来实现。在65℃下执行挤出且脂质体通过膜孔的通道通过水合作用中剩余的乙醇来促进。作为这种处理的结果，脂质体大约符合所使用膜孔的直径。在这些研究中，使用能够容纳100mL总体积的Lipex挤压机(Northern脂质)，且在100到400psi的压力下使用氮气使脂质体悬浮体穿过0.2μm(三个通孔)和0.08pm(五个通孔)微孔大小的25mm直径的聚碳酸酯膜。(Whatman Nucleopore追踪蚀刻膜)。脂质体粒度是通过利用动态光散射的ZetaPALS粒径分析仪来测量的(布鲁克海文仪器公司(Brookhaven InstrumentsCorporation))。

3.外部缓冲液更换。

在这一阶段，外部水相(例如，350mM的硫酸铵溶液)通过渗析或透滤作用与10％蔗糖溶液或其它所需缓冲液(例如SPI)更换，同时移除乙醇。这种方法产生脂质体梯度(即，脂质体内部的硫酸铵缓冲液与脂质体的外部上的10％蔗糖缓冲液)。硫酸铵很好地与含水介质中的铵和硫酸离子分离。然而，因为带电离子不能穿过脂质体膜，铵离子也与水和作为可穿过脂质体膜的惰性气体氨处于平衡。当氨分子将脂质体留在内部时，留下质子；将脂质体膜内部的pH降低到约4。这产生ΔpH梯度，其中脂质体内部的pH是约4.0而外部是更换缓冲液的pH(例如，7.4)。这种梯度用于将长春新碱装载到脂质体中。透滤方案(用于＞50mL的产品体积)是使用附接到QuixStand透滤***(GE医疗生命科学(GE Healthcare LifeScience))的MidGee滤筒(模型UFP-300-E-3MA，300,000 MWCO)更换15体积的缓冲液。渗析(用于＜50mL的产品量)由将脂质体悬浮体放置到具有MWCO 6到8000的频谱Spectrapore(Spectrum Spectrapore)分子多孔膜中且在室温下将其悬置在20体积过量缓冲液中组成，外部缓冲液在一天时程间更换四次。更换外部缓冲液之后，使用斯图尔特磷脂胆碱检定(Stewart phospholipid choline assay)测量各个透滤后制备物的SM内含物。

4.药物装载。

使用规定的药物脂质比的VSLI实行药物装载来实现所需总体积。VSLI装载混合物靶向0.16mg/mL的长春新碱、2.37mg/mL的SM(作为脂质体制备物)，且用外部脂质体缓冲液来调节到所需总体积以用于所需实验性变体。通过将外部缓冲液、药物和脂质体溶液(预平衡到室温)混合且在65℃下在水浴中伴随轻缓混合培育混合物10分钟来实行装载。接着将混合物从水浴中移出来冷却到室温且在2℃到8℃下存储。

5.无菌过滤和瓶填充。

药物装载主体脂质体悬浮体可以通过常规的脂质体除菌技术，例如过滤到用于存储的合适的小瓶中来除菌。贯穿使用无菌/除菌技术且在Nunair II类、A型/B3生物安全柜中执行操作。室温下的主体产品通过使用具有鲁尔配件(Luer fitting)的无菌10mL注射器的无菌25mm直径、0.2μm微孔大小的

注射过滤器、

膜(帕尔公司)来过滤。将主体以10mL量过滤到无菌接收容器中。

脂质体变体制剂是通过将各种摩尔浓度的AS包覆作为内部脂质体缓冲液而制得。脂质体是使用上文所描述的方法而制备。脂质体是用称量的鞘磷脂(SM)和胆固醇(CH)来制备的，一式两份，在43mg/mL的SM和SM/CH重量比为2.5∶1下的最终水合体积为70mL。将脂质混合物在75℃下溶解于9.5mL的乙醇中，且通过将乙醇脂质溶液倒入到70mL的预升温到65℃的AS溶液中且混合三十分钟产生浓度为12％v/v的最终乙醇来进行水合。因此所形成的脂质体通过以Lipex挤压机(Northern脂质)依序挤出通过微孔大小为0.2μm(三个通孔)和0.08μm(五个通孔)的聚碳酸酯膜来设定大小。挤出后，在MidGee滤筒(模型UFP-300-E-3MA，300,000 MWCO)和QuixStand固持器(GE医疗生命科学)中使用15体积更换来将各个制备物透滤到10％蔗糖溶液中(同时移除任何乙醇)。各个透滤后制备物的SM内含物使用斯图尔特磷脂胆碱检定来测量。

使用上文制备脂质体的小比例测试药物装载是使用调节到pH为5.5、6.5或7.5的SPI缓冲液或pH为5.5、6.5或7.5的磷酸盐缓冲蔗糖来实行。装载小于5％游离长春新碱的变体选用于按比例增长，其是pH为6.5、7.5的SPI缓冲液和pH为6.5的磷酸盐缓冲蔗糖。预先所描述的组成步骤后执行用于各个AS变体和缓冲液的较大比例装载。无菌过滤所得药物包封脂质体混合物且在2℃到8℃下监测稳定性0、2、4、8、12周且在室温下2、4周。

描述于上文实验性章节中的小比例硫酸铵探索性实验检测AS变体的包封效率。这些结果表明在平衡条件下产生pH为约4.0的内部脂质体的硫酸铵内部缓冲液能够在外部缓冲液pH是6.5或更大且不采用多元醇时最佳地装载长春新碱。使用pH为5.5的外部缓冲液的所有变体装载小于90％；明显地提供不充分跨膜ΔpH梯度。PBS缓冲液变体全部装载至少95％的药物，同时使用蔗糖的变体具有混合结果；展示89％到95％的更宽范围的包封。展示类似包封的250mM和350mM缓冲能力变体都倾向具有pH和多元醇变体。展示＞95％装载的所有变体按比例增长且评估稳定性。

按比例增长的硫酸铵脂质体的24周稳定性结果总结于表3中。所有变体保持所需VSLI粒度和重量摩尔渗透浓度标准。pH和游离长春新碱％在稳定性监测周期内也保持恒定。硫酸铵缓冲液未改变鞘磷脂胆固醇脂质体的渗透特征。通过具有pH为7.5的外部PBS缓冲液的250mM和350mM硫酸铵制剂观察到3瓶Marqibo制剂的改进的稳定性。对于这些变体，在冷藏温度下观察到0.2％NFV/月的降解速率。这种速率可将制剂的存放期预计为约一年。另外，总杂质仅随着％NFV的任何增大而按比例增加。整体总杂质的含量保持远低于小于6％的VSLI标准。

相较于pH为7.5的变体，具有pH为6.5的外部缓冲液或其中缓冲液包含多元醇等张剂(例如蔗糖)的硫酸铵脂质体产生较差稳定率。这些变体的降解速率在冷藏温度下介于1.5到1.8NFV％/月(表3)；速率类似于当前基于3瓶柠檬酸盐试剂盒制剂的VSI成分(表2)。250MM和350mM变体都展示对pH和渗透剂改变的相同倾向。另外，在其中稳定性是在室温下监测的所有情况下，可见快速长春新碱降解。仅冷藏样本提供合适的具有硫酸铵制剂的稳定性特征。

250mM和350mM的硫酸铵长春新碱脂质体SPIpH为7.4的制剂显示适用于商用即用型制剂的基本的存放期要求且选用于其它评估。

实例3：具有二价离子和多元醇的硫酸铵VCR脂质体包封和稳定性

进行一系列实验来检查是否含有二价离子或多元醇的VSLI增强包封的长春新碱。

制得具有相同脂质组合物的脂质体变体制剂作为Marqibo产品，包封具有200mM硫酸镁或200mM硫酸锰的200mM硫酸铵；200mM柠檬酸钠和200mM硫酸镁或200mM硫酸锰。将这些制剂中的每一种透滤到10％蔗糖中且如先前描述测定脂质浓度。另外，制备用5％甘露醇包覆250mM硫酸铵的脂质体，在脂质体中20mM PB pH为7.4、SPI pH为7.4和SPI pH为7.0。对培育10分钟(标准情况)或30分钟的各个变体在65℃下尝试10分钟药物装载。

小规模探索性实验的结果展示在表6上。相较于标准3瓶试剂盒组成，药物装载结果在Mg²⁺或Mn²⁺包括于脂质体的内部缓冲液中且在65℃下培育10(标准情况)或30min时展示不太高效的装载。通过培育十分钟，观察到6％到8％游离药物的最佳装载率，除柠檬酸盐镁变体外，其展示21％游离药物。二价金属离子的存在似乎导致pH梯度平衡的中断或膜渗透率的骤降。

表6.对于含有金属离子样本的药物装载。

样本	装载10分钟，游离药物％	装载30分钟，游离药物％
			Marqibo(对照，2mL)	1	2
AS/Mg<sup>2+</sup>	6	52
			AS/Mn<sup>2+</sup>	7	55
Cit/Mg<sup>2+</sup>	21	80
			Cit/Mn<sup>2+</sup>	8	54

装载后展示6％游离药物的具有MgSO₄变体的硫酸铵按比例增长且监测稳定性。按比例增长这种制剂变体时，在二价离子存在下再确定预先观察到不佳脂质体装载效率；在组成后观察到38％游离药物(表7)。这种混合梯度变体通过再渗析来进一步处理以移除外部游离长春新碱。接着监测渗析后变体的稳定性。在5周的监测期间，脂质体出现保持恒定的游离药物含量，其展示无进一步药物渗漏。然而，观察到NFV快速降解和VCR损失；产生在5周时12.2％NFV。这比250mM AS SPI pH为7.4的脂质体制剂快62倍(图7)。这些结果表明含有二价硫酸的VSLI不提供改进稳定性的包封长春新碱。

相较于不含多元醇的制剂的0.14％NFV/月，有甘露醇的AS制剂展示0.17％NFV/月的降解速率(表7)。然而，其仅包封93.4％长春新碱，比不含多元醇的那些制剂效率低。

表7.在20周时另外AS变体的VSLI的稳定性。

*在最初不佳装载后，渗析变体来移除游离VSI因此T＝0具有2.81％NF

实施例

实施例1.一种组成物，包含：包含第一水性缓冲液的连续水相、分散于第一水性缓冲液内的脂质体相以及作为货物包封于脂质体相内的稳定水溶液；其中稳定水溶液包含第二水性缓冲液和溶解于其中的稳定长春新碱；其中第二水性缓冲液包含具有至少一种溶质的盐，可将所述溶质输送出脂质体相且将带正电溶质或水合氢离子留在稳定水溶液中，其中带正电溶质或水合氢离子使长春新碱稳定；并且其中连续水相和稳定水溶液的pH差值为至少2个pH单位。

实施例2.一种稳定脂质体中的长春新碱的方法，包含：使脂质体相分散于包含第一水性缓冲液的连续水相内；其中脂质体相含有作为货物包封于脂质体相内的稳定水溶液；其中稳定水溶液包含第二水性缓冲液和溶解于其中的稳定长春新碱；其中第二水性缓冲液包含具有至少一种溶质的盐，可将所述溶质输送出脂质体相且将带正电溶质或水合氢离子留在稳定水溶液中，其中带正电溶质或水合氢离子使长春新碱稳定；并且其中连续水相和稳定水溶液的pH差值为至少2个pH单位。

实施例3.根据实施例1或2所述的组合物或方法，其中第二水性缓冲液包含铵盐。

实施例4.根据实施例1、2或3所述的组合物或方法，其中第一水性缓冲液包含磷酸盐缓冲溶液。

实施例5.根据实施例1、2、3或4所述的组合物或方法，其中脂质体相包含鞘磷脂胆固醇脂质体。

实施例6.根据实施例1、2、3、4或5所述的组合物或方法，其中第二水性缓冲液包含硫酸铵。

实施例7.根据实施例1、2、3、4、5或6所述的组合物或方法，其中长春新碱包含硫酸长春新碱。

实施例8.根据实施例1、2、3、4、5、6或7所述的组合物或方法，其中稳定水溶液的pH是约3到约5。

实施例9.根据实施例1、2、3、4、5、6、7或8所述的组合物或方法，其中连续水相的pH是约5到约8。

实施例10.根据实施例9所述的组合物，其中连续水相的pH是约7到约8.8。

实施例11.根据实施例10所述的组合物，其中连续水相的pH是约7.5到约8.8。

实施例12.根据实施例1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11所述的组合物或方法，其中脂质体耐水解。

实施例13.根据实施例1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12所述的组合物或方法，其中长春新碱在稳定水溶液中比在连续水相中更稳定。

实施例14.根据实施例1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13所述的组合物或方法，其中连续水相与稳定水溶液的比率使得两种相的混合将产生pH为约6到约8.8的组合水相。

实施例15.根据实施例1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14所述的组合物或方法，其中铵盐以约150mM到约350mM的浓度存在于第二水性缓冲液中。

实施例16.根据实施例1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15所述的组合物或方法，其中铵盐是硫酸铵。

实施例17.一种治疗哺乳动物癌症的方法，包含向有需要的哺乳动物施用治疗量的实施例1、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16的组合物。

实施例18.根据实施例17所述的方法，其中癌症是淋巴瘤、白血病或骨髓瘤。

实施例19.一种治疗哺乳动物的复发的癌症的方法，包含向所述哺乳动物施用实施例1、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16的组合物。

实施例20.根据实施例19所述的方法，其中复发的癌症是淋巴瘤、白血病或骨髓瘤。

实施例21.根据实施例17、18、19或20所述的方法，其中哺乳动物已预先经历至少一种多药剂组合疗法。

实施例22.根据实施例17、18、19、20或21所述的方法，另外包括共施用至少一种其它化学治疗剂。

实施例23.根据实施例17、18、19、20、21或22所述的方法，其中哺乳动物是人类。

实施例24.一种保护长春新碱免于去甲酰化的方法，包含将长春新碱与铵盐缓冲液混合。

实施例25.根据实施例23所述的方法，其中以约1.5mg/m²到约2.5mg/m²的剂量施用长春新碱。

除非另外指示，否则本说明书和权利要求书中所用的表示成分量、特性(例如分子量)、反应条件等的所有数量应理解为在所有情况下都由术语“约”修饰。因此，除非指示为相反的，否则说明书和所附权利要求书中所阐述的数值参数是可能视试图通过本公开的实施例获得的所需特性而变化的近似值。最低限度地，并且不试图限制同等物原则应用于权利要求书的范围，至少应根据所报告的有效数值的数目并且通过应用普通四舍五入技术来解释每个数字参数。尽管阐述本公开的广泛范围的数值范围和参数是近似值，但特定实例中所阐述的数值是尽可能精确报告的。但是，任何数值固有地含有某些由其各别测试测量值中所发现的标准差必然造成的误差。在一个实施例中，术语“约”与“大约”是指在10％指示范围内的数值参数。

除非本文另外指示或明显与上下文相矛盾，否则在描述本公开的实施例的上下文中(尤其在所附权利要求书的上下文中)使用的术语“一(a/an)”和“所述”以及类似指示物代语应理解为涵盖单数与复数两者。本文中对值范围的叙述仅为一种对落入范围内的每一单独值进行单独引用的简便方法。除非本文另外指示，否则每一个单独值并入本说明书中，就像在本文中单独地叙述一般。除非本文中另外指示或另外明显与上下文相矛盾，否则本文所述的所有方法可以按任何适合的顺序进行。除非另外要求，否则本文中所提供的任何和所有实例或示范性语言(例如“如”)的使用仅在于更好地阐明本公开的实施例且并不对本公开的范围施加限制。本说明书中的任何语言都不应理解为指示任何非要求的要素与所要求的要素对实践本公开的实施例来说同样必需。

本文中所公开的替代性元素或实施例的分组不应理解为限制。每一个组成员都可以单独地或以与所述组中其它成员或本文中所见其它要素的任何组合形式来提及和要求。预期组中的一个或多个成员可以出于便利性和/或专利性的原因而包括于组中或从组中删除。当任何这类包括或删除发生时，本说明书被认为含有所修改的组，因此满足所附权利要求书中所用的所有马库西(Markush)组的书面描述。

某些实施例描述于本文中，包括本发明人已知的实现本公开的实施例的最佳模式。当然，在阅读前述描述之后，这些所描述实施例的变化对于所属领域的普通技术人员将变得显而易见。本发明人期望熟练的业内人士按需要采用此类变化形式，并且本发明人打算以不同于本文中特定描述的其它方式来实践本公开的实施例。因此，本公开包括适用法律所允许的在此所附的权利要求书中所述的主题的所有修改和同等物。另外，除非本文另外指示或另外明显与上下文相矛盾，否则本公开涵盖上述要素以其所有可能变化形式的任何组合。

本文中所公开的具体实施例可以在权利要求书中使用由……组成或基本上由……组成语言来进一步限制。当用于权利要求书中时，不论如所提交还是根据修改添加，过渡术语“由……组成”排除权利要求书中未指定的任何要素、步骤或成分。过渡术语“基本上由……组成”将权利要求书的范围限制于所指定的材料或步骤以及不实质上影响基本和新颖特征的那些材料或步骤。本文中固有地或明确地描述并且实现如此要求的本公开的实施例。

此外，(如果存在的话)贯穿本公开的已作出的对专利和列印公开案的引用，这些引用和列印公开案中的每一个将单独地以引用的方式全文并入本文中。

最后，应理解，本文中所公开的实施例说明了本公开的原理。可以采用的其它修改在本公开的范围内。因此，借助于实例(但不限制)，可根据本文中的教示利用本公开的实施例的可替换配置。因此，本公开不限于精确展示和描述。

Claims

1.一种即用型长春新碱组合物，包含：

连续水相，包含第一水性缓冲液，

脂质体相，分散于所述第一水性缓冲液内，和

稳定水溶液，作为货物包封于所述脂质体相内；

其中所述稳定水溶液包含第二水性缓冲液和溶解于其中的稳定长春新碱；

其中所述第二水性缓冲液包含铵盐；且

其中所述连续水相与所述稳定水溶液的pH差值为至少2个pH单位，并且其中所述连续水相的pH是7到8.8。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述第一水性缓冲液包含磷酸盐缓冲溶液。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述脂质体相包含鞘磷脂胆固醇脂质体。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述第二水性缓冲液包含硫酸铵。

5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述长春新碱包含硫酸长春新碱。

6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述稳定水溶液的pH是3到5。

7.根据权利要求1所述的组合物，其中所述连续水相的pH是7.5到8.8。

8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述稳定水溶液的pH是3到5。

9.根据权利要求1所述的组合物，其中所述长春新碱为硫酸盐形式。

10.根据权利要求1所述的组合物，其中所述脂质体耐水解。

11.根据权利要求1所述的组合物，其中所述长春新碱在所述稳定水溶液中比在所述连续水相中更稳定。

12.根据权利要求1所述的组合物，其中所述连续水相与所述稳定水溶液的比率使得两种相的混合将产生pH是6到8.8的组合水相。

13.根据权利要求1所述的组合物，其中所述铵盐以150mM到350mM的浓度存在于所述第二水性缓冲液中。

14.根据权利要求13所述的组合物，其中所述铵盐是硫酸铵。

15.治疗量的根据权利要求1所述的组合物在制备在治疗哺乳动物癌症的方法中使用的药物中的用途，所述方法包含向有需要的所述哺乳动物施用治疗量的根据权利要求1所述的组合物。

16.根据权利要求15所述的用途，其中所述癌症是淋巴瘤、白血病或骨髓瘤。

17.根据权利要求15所述的用途，其中以1.5mg/m²到2.5mg/m²的剂量施用所述长春新碱。

18.根据权利要求1所述的组合物在制备在治疗哺乳动物复发的癌症的方法中使用的药物中的用途，所述方法包含向所述哺乳动物施用根据权利要求1所述的组合物。

19.根据权利要求18所述的用途，其中所述复发的癌症是淋巴瘤、白血病或骨髓瘤。

20.根据权利要求18所述的用途，其中所述哺乳动物已预先经历至少一种多药剂组合疗法。

21.根据权利要求18所述的用途，其中所述包封长春新碱脂质体与至少一种另外化学治疗剂一起共施用。

22.根据权利要求18所述的用途，其中所述哺乳动物是人类。

23.一种使脂质体中的长春新碱稳定的方法，包含：

使脂质体相分散于包含第一水性缓冲液的连续水相内；

其中所述脂质体相含有包封于所述脂质体相内的稳定水溶液；

其中所述第二水性缓冲液包含铵盐；且

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述第一水性缓冲液包含磷酸盐缓冲溶液。

25.根据权利要求23所述的方法，其中所述脂质体相包含鞘磷脂胆固醇脂质体。

26.根据权利要求23所述的方法，其中所述第二水性缓冲液包含硫酸铵。

27.根据权利要求23所述的方法，其中所述长春新碱包含硫酸长春新碱。

28.根据权利要求23所述的方法，其中所述稳定水溶液的pH是3到5。

29.根据权利要求23所述的方法，其中所述连续水相的pH是7.5到8.8。

30.根据权利要求23所述的方法，其中所述稳定水溶液的pH是3到5。

31.根据权利要求23所述的方法，其中所述长春新碱为硫酸盐形式。

32.根据权利要求23所述的方法，其中所述脂质体耐水解。

33.根据权利要求23所述的方法，其中所述长春新碱在所述稳定水溶液中比在所述连续水相中更稳定。

34.根据权利要求23所述的方法，其中混合所述连续水相与所述稳定水溶液将产生pH是6到8.8的组合水相。

35.根据权利要求23所述的方法，其中所述铵盐以150mM到350mM的浓度存在于所述第二水性缓冲液中。