CN107828657A - 一种用于堆肥发酵除臭的微生物菌剂的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于堆肥发酵除臭的微生物菌剂的制备方法，为了获取除臭微生物制剂的候选菌种，从新鲜禽大便中分离筛选出具有对氨气和硫化氢高效降解菌株，然后利用菌糠将菌株固定，制备微生物菌剂的方法简单，得到的微生物菌剂成本低，处理禽畜粪便堆肥发酵过程中能够有效降低发酵过程中的臭味，并且还能促进发酵时间，得到的发酵产物可以直接适用于土壤也可和其他肥料混合使用，应用范围广。

Description

一种用于堆肥发酵除臭的微生物菌剂的制备方法
技术领域
本发明涉及有机肥加工技术领域，尤其涉及一种用于堆肥发酵除臭的微生物菌剂的制备方法。
背景技术
随着畜牧业向集约化、规模化快速发展，产生大量的畜禽粪便给生态环境带来巨大的危害，数据资料显示，我国畜禽粪便年排放量约21.7亿吨 ，而实际处理不到10%，因此，生态承载能力作为评价畜牧业可持续发展的指标得到广大研究者的认同。堆肥是目前无害化、资源化，发酵处理畜禽粪便的有效方法，在减轻环境污染的同时可最大程度实现资源化利用，但传统堆肥存在功能微生物数量少，发酵周期长、腐熟化程度低、臭气污染大、肥效损失严重等问题。堆肥过程中产生的恶臭气体成分复杂多样，按化学组分分为含氮化合物：如氨气、吲哚和胺类等；含硫化合物：如硫化氢、硫醇和硫醚类等；卤素及其衍生物：如卤代烃和氯气类等；含氧有机化合物：如酚、醇和醛类等；烃类：如炔烃、烯烃和烷烃类等，在危害环境和人畜健康的同时，也降低了堆肥的肥效和农用价值，因而控制减少堆肥过程中恶臭气体的排放是实现优质、高效、无污染堆肥及生态环境保护的迫切需要。
发明内容
本发明目的就是为了弥补已有技术的缺陷，提供一种用于堆肥发酵除臭的微生物菌剂的制备方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种用于堆肥发酵除臭的微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）称取10g新鲜禽畜粪便置于90mL灭菌的生理盐水中，用无菌水稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5和10-6浓度梯度，配置牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、马丁氏培养基，将不同浓度梯度的禽畜粪便量取100μL涂布于上述培养基平板上，置于30℃恒温培养箱培养5d，然后利用平板稀释法进一步分离纯化；
（2）将步骤（1）分离纯化后的菌株接种到氨气选择性培养基和硫化氢选择性培养基，在30℃、180r/min的摇床上恒温培养5d，保留让菌液浑浊的菌株；
（3）将步骤（2）中初选的菌株培养活化，再另外称取新鲜禽畜粪便，按照禽畜粪便质量的10%接种初选的活化菌株，置于30℃的恒温室中密封发酵30天，其中密封的禽畜粪便中装有吸收氨气的2%硼酸溶液和吸收硫化氢的锌胺络盐吸收液，选择吸收氨气和硫化氢效果较强的菌株；
（4）挑选出步骤（3）中分解氨气和硫化氢作用较强的单菌株，然后将它们在牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、马丁氏培养基相应培养基上的单一菌种接种到共培养基上进行振荡培养至对数生长后期；
（5）将菌糠于121℃下灭菌30min后烘干，置于超净工作台上紫外线灭菌10min，然后按照10g菌糠接种1mL的活化后期的混合菌种，混合均匀后密封保存。
一种用于堆肥发酵除臭的微生物菌剂的制备方法，步骤（2）中所述的除氨气菌株初选的具体方法为：取10mL氨气选择性培养基装于摇菌瓶中，高压灭菌后注入25%的氨水10μL，接种分离纯化的菌株，置于180r/min摇床上30℃恒温培养3-7d，按照5%的接种量接种至摇菌瓶密封培养，观察菌液有无变化，若浑浊表明具有降解氨气的能力。
一种用于堆肥发酵除臭的微生物菌剂的制备方法，步骤（2）中所述的除硫化氢菌株初选的具体方法为：将分离纯化的菌株接种至液体培养基上置于180r/min摇床内30℃恒温培养3-7d，按照5%的接种量接种至装有200mL硫化氢选择性培养基中，培养基的瓶内壁放有装有12mL体积浓度为25%的硫酸溶液，向硫酸溶液中加入4g硫化铁后密封培养，观察菌液有无变化，浑浊说明具有降解硫化氢的能力。
一种用于堆肥发酵除臭的微生物菌剂的制备方法，步骤（4）中所述的共培养基组分为：葡萄糖5g/L、牛肉粉1g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉5g/L、硫酸铵2g/L、磷酸二氢钾0.3g/L、硫酸镁0.6g/L、硫酸锰0.05g/L、氯化钠5g/L，调节pH值7.2±0.2，然后121℃，灭菌15min。
本发明的优点是：本发明为了获取除臭微生物制剂的候选菌种，从新鲜禽大便中分离筛选出具有对氨气和硫化氢高效降解菌株，然后利用菌糠将菌株固定，制备微生物菌剂的方法简单，得到的微生物菌剂成本低，处理禽畜粪便堆肥发酵过程中能够有效降低发酵过程中的臭味，并且还能促进发酵时间，得到的发酵产物可以直接适用于土壤也可和其他肥料混合使用，应用范围广。
具体实施方式
一种用于堆肥发酵除臭的微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）称取10g新鲜禽畜粪便置于90mL灭菌的生理盐水中，用无菌水稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5和10-6浓度梯度，配置牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、马丁氏培养基，将不同浓度梯度的禽畜粪便量取100μL涂布于上述培养基平板上，置于30℃恒温培养箱培养5d，然后利用平板稀释法进一步分离纯化；
（2）取10mL氨气选择性培养基装于摇菌瓶中，高压灭菌后注入25%的氨水10μL，接种步骤（1）中分离纯化的菌株，置于180r/min摇床上30℃恒温培养5d，按照5%的接种量接种至摇菌瓶密封培养，在30℃、180r/min的摇床上恒温培养5d，观察菌液有无变化，若浑浊表明具有降解氨气的能力，将步骤（1）中分离纯化的菌株接种至液体培养基上置于180r/min摇床内30℃恒温培养5d，按照5%的接种量接种至装有200mL硫化氢选择性培养基中，培养基的瓶内壁放有装有12mL体积浓度为25%的硫酸溶液，向硫酸溶液中加入4g硫化铁后在30℃、180r/min的摇床上恒温培养5d密封培养，观察菌液有无变化，若浑浊说明具有降解硫化氢的能力；
（3）将步骤（2）中初选的菌株培养活化，再另外称取200g新鲜禽畜粪便，按照禽畜粪便质量的10%接种初选的活化菌株，置于30℃的恒温室中密封发酵30天，其中密封的禽畜粪便中装有吸收氨气的20mL、2%硼酸溶液和吸收硫化氢的20mL锌胺络盐吸收液，选择吸收氨气和硫化氢效果较强的菌株；
（4）挑选出步骤（3）中分解氨气和硫化氢作用较强的单菌株，然后将它们在牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、马丁氏培养基相应培养基上的单一菌种接种到共培养基上进行振荡培养至对数生长后期，其中共培养基的配方为：葡萄糖5g/L、牛肉粉1g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉5g/L、硫酸铵2g/L、磷酸二氢钾0.3g/L、硫酸镁0.6g/L、硫酸锰0.05g/L、氯化钠5g/L，调节pH值7.2±0.2， 121℃，灭菌15min；
（5）将菌糠于121℃下灭菌30min后烘干，置于超净工作台上紫外线灭菌10min，然后按照10g菌糠接种1mL的活化后期的混合菌种，混合均匀后密封保存。

Claims (4)

1.一种用于堆肥发酵除臭的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）称取10g新鲜禽畜粪便置于90mL灭菌的生理盐水中，用无菌水稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5和10-6浓度梯度，配置牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、马丁氏培养基，将不同浓度梯度的禽畜粪便量取100μL涂布于上述培养基平板上，置于30℃恒温培养箱培养5d，然后利用平板稀释法进一步分离纯化；
（2）将步骤（1）分离纯化后的菌株接种到氨气选择性培养基和硫化氢选择性培养基，在30℃、180r/min的摇床上恒温培养5d，保留让菌液浑浊的菌株；
（3）将步骤（2）中初选的菌株培养活化，再另外称取新鲜禽畜粪便，按照禽畜粪便质量的10%接种初选的活化菌株，置于30℃的恒温室中密封发酵30天，其中密封的禽畜粪便中装有吸收氨气的2%硼酸溶液和吸收硫化氢的锌胺络盐吸收液，选择吸收氨气和硫化氢效果较强的菌株；
（4）挑选出步骤（3）中分解氨气和硫化氢作用较强的单菌株，然后将它们在牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、马丁氏培养基相应培养基上的单一菌种接种到共培养基上进行振荡培养至对数生长后期；
（5）将菌糠于121℃下灭菌30min后烘干，置于超净工作台上紫外线灭菌10min，然后按照10g菌糠接种1mL的活化后期的混合菌种，混合均匀后密封保存。
2.根据权利要求1所述的一种用于堆肥发酵除臭的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述的除氨气菌株初选的具体方法为：取10mL氨气选择性培养基装于摇菌瓶中，高压灭菌后注入25%的氨水10μL，接种分离纯化的菌株，置于180r/min摇床上30℃恒温培养3-7d，按照5%的接种量接种至摇菌瓶密封培养，观察菌液有无变化，若浑浊表明具有降解氨气的能力。
3.根据权利要求1所述的一种用于堆肥发酵除臭的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述的除硫化氢菌株初选的具体方法为：将分离纯化的菌株接种至液体培养基上置于180r/min摇床内30℃恒温培养3-7d，按照5%的接种量接种至装有200mL硫化氢选择性培养基中，培养基的瓶内壁放有装有12mL体积浓度为25%的硫酸溶液，向硫酸溶液中加入4g硫化铁后密封培养，观察菌液有无变化，浑浊说明具有降解硫化氢的能力。
4.根据权利要求1所述的一种用于堆肥发酵除臭的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，步骤（4）中所述的共培养基组分为：葡萄糖5g/L、牛肉粉1g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉5g/L、硫酸铵2g/L、磷酸二氢钾0.3g/L、硫酸镁0.6g/L、硫酸锰0.05g/L、氯化钠5g/L，调节pH值7.2±0.2，然后121℃，灭菌15min。
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