CN107812017A - 一种抗菌肽妇科凝胶的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明申请公开了一种吸收平和、疗效持久、调节***生态平衡的抗菌肽妇科凝胶的制备方法，包括以下步骤：1)取蜜蜂，加热烘干全虫，粉碎，得到蜜蜂粉末；2)将蜜蜂粉末放入含精氨酸的甘油‑醋酸溶液中，浸泡12～20h，超声振动10～20min，得到混合液；3)将混合液过滤除去滤渣，滤液80～100℃加热40～60min，浓缩，得到蜜蜂提取液；4)向蜜蜂提取液内加入丝瓜汁、芦荟粉，30～50℃搅拌20～40min，再加入MgCl2溶液，搅拌后冻干，在相对湿度为60～80％的空气下恢复常温，即得。
Description
技术领域
本发明涉及妇科技术领域，具体涉及一种抗菌肽妇科凝胶的制备方法。
背景技术
健康女性***在内分泌激素的作用下，上皮细胞增生，表层细胞含有丰富的糖原，有利于乳酸杆菌的生长，这种细菌占***的90％以上。这种乳酸杆菌大量存在，就抑制了其他致病菌的生长，在***形成了一个正常的生态平衡。
当外界病原体大量侵入，破坏***的防御功能，正常寄生在***内的菌群微生态平衡失调，***内乳酸杆菌等有益菌减少而其他细菌大量繁殖，厌氧菌繁殖同时产生胺类物质，碱化***，使***分泌物增多并有臭味，最终导致细菌性***炎。
目前妇科凝胶采用纳米银离子，具有消炎、杀菌、止痒作用，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、***、白色念珠球菌、真菌、酵母菌等病原体微生物的生长有明显抑制作用主要采用抗生素治疗，但也杀灭了有益菌群(乳酸杆菌，***双歧杆菌)，破坏了***菌落的生态平衡。并且制造成本高，接触反应强烈，不适合预防使用。
CN101099815A公开了妇科抗菌凝胶及其制备方法，具体公开了以芦茶、磺胺嘧啶银干粉、冰片等为特征组分的应用于妇科疾患抑菌清洗的药用组合物；制备方法为将羧甲基纤维素溶于水，加入芦荟叶肉胶、磺胺嘧啶银干粉、冰片混合形成凝胶，添加的磺胺嘧啶银干粉和冰片杀菌效果很强，也快速地杀灭了有益菌群，适用于短暂紧迫的疾患治疗，但不适合吸收平和、持效长久的预防。所以，目前缺乏成本低、吸收平和、疗效持久、调节***生态平衡的妇科凝胶。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服以上现有技术的缺陷，提供一种吸收平和、疗效持久、调节***生态平衡的抗菌肽妇科凝胶的制备方法。
本发明的技术解决方案如下：一种抗菌肽妇科凝胶的制备方法，包括以下步骤：
1)取蜜蜂，50～70℃加热1～2h，烘干全虫，粉碎，得到蜜蜂粉末；
2)将蜜蜂粉末放入含精氨酸的甘油-醋酸溶液中，浸泡12～20h，超声振动10～20min，得到混合液；
3)将混合液过滤除去滤渣，滤液80～100℃加热40～60min，浓缩，得到蜜蜂提取液；
4)向蜜蜂提取液内加入丝瓜汁、芦荟粉，30～50℃搅拌20～40min，再加入0.6～1.2mmol/L的MgCl2溶液，搅拌后冻干，在相对湿度为60～80％的空气下恢复常温，即得。
优选地，所述蜜蜂为意大利蜜蜂、蜂王浆高产蜜蜂、安纳托利亚蜜蜂、高加索蜜蜂、卡尼鄂拉蜜蜂、喀尔巴阡蜜蜂中的一种。
优选地，所述蜜蜂粉末的粒径为1～5mm。
优选地，所述步骤2)甘油-醋酸溶液中甘油的体积分数为15～30％。保持弱酸性环境，发挥***的自洁功能。
优选地，所述步骤2)精氨酸在甘油-醋酸溶液的浓度为0.5～1mol/L
优选地，所述步骤3)浓缩至密度为1.4～1.6g/ml。
优选地，所述步骤4)丝瓜汁的质量浓度为10～30％。
优选地，所述步骤4)中各组分的质量份数按如下比例配制：蜜蜂提取液4～8份、丝瓜汁10～15份、芦荟粉8～10份、MgCl2溶液1～2份。
优选地，所述步骤4)中芦荟粉的粒径为0.12～0.18mm。
优选地，所述步骤4)冻干指先在-10～-30℃冷冻，然后在2～10Pa真空条件下脱水干燥。
蜜蜂接触外界多病毒多细菌的环境，能分泌多种抗菌肽，且免疫能力优于人体娇弱的***，故而分泌的抗菌肽天然、抗菌效果高效。经过步骤1)、2)、3)，粉碎、浸泡提取、过滤，得到的蜜蜂提取物包含大量抗菌效果优异的抗菌肽，这些抗菌肽成分能够杀灭致病菌群(如加特纳菌、类杆菌)，为有益菌群乳酸杆菌创造健康平和的生长繁殖条件，调节***炎环境下失调的***菌群平衡。产品抗菌肽成分有利于***平和地吸收，无刺激性，坚持适当使用3～6个疗程(连续使用1周为一疗程)明显缓解***炎病症，分泌物减少，外阴没有瘙痒和灼热感的症状，白带异味消失。
本发明的有益效果是：
1)烘干，水分蒸发，加快粉碎速度，去除蜜蜂翅、足、胸等硬质壳体，提取粉末，方便加工；
2)将蜜蜂粉末浸泡于含葡萄糖的甘油-醋酸缓冲液中，最大限度的提取出蜜蜂粉末内的抗菌肽，使得抗菌肽成分快速渗透到缓冲液中，葡萄糖有助于增加抗菌肽成分在缓冲液中的溶解度和吸收率，保持抗菌肽的效用；
3)蜜蜂提取液经步骤1)～3)快速高效的提取，简单方便，无需发酵、分子筛分离等复杂工艺；
4)过滤除去固体杂质，再经加热浓缩，增加蜜蜂提取液的浓度，保持蜜蜂体内抗菌肽的抗菌品质；
5)MgCl2促进蜜蜂提取物内抗菌肽的表达，加快杀死致病菌群，芦荟粉进一步消除炎症，溶于丝瓜汁***对抗菌肽的充分吸收和保持，增加湿润度，为乳酸杆菌提供优良的繁殖条件；
6)蜜蜂提取液与丝瓜汁、芦荟粉、MgCl2溶液混合好的溶液，经过冻干处理，杀菌消毒，液态变为易凝胶化的固态，在湿润环境中膨胀为柔软适中、伸展压缩自如、胶黏稳定的凝胶胶体，方便使用；
7)各组分通过协同作用，经过多步骤加工制作，成本低，取自有益昆虫蜜蜂，得到的抗菌肽妇科凝胶能够吸收平和、疗效持久、调节***生态平衡，有效治疗***炎。
具体实施方式
下面用具体实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明不仅局限于以下具体实施例。
以下所提供的实施例并非用以限制本发明所涵盖的范围，所描述的步骤也不是用以限制其执行顺序。本领域技术人员结合现有公知常识对本发明做显而易见的改进，亦落入本发明要求的保护范围之内。
实施例一
一种抗菌肽妇科凝胶的制备方法，包括以下步骤：
1)取蜜蜂，50℃加热2h，烘干全虫，粉碎，得到蜜蜂粉末；所述蜜蜂为意大利蜜蜂；所述蜜蜂粉末的粒径为1mm；
2)将蜜蜂粉末放入含精氨酸的甘油-醋酸溶液中，浸泡12h，超声振动10min，得到混合液；所述甘油-醋酸溶液中甘油的体积分数为15％；所述精氨酸在甘油-醋酸溶液的浓度为0.5mol/L；
3)将混合液过滤除去滤渣，滤液80℃加热60min，浓缩至密度为1.4g/ml，得到蜜蜂提取液；
4)按如下质量份数比例配制：蜜蜂提取液4份、丝瓜汁10份、粒径为0.12mm的芦荟粉8份、MgCl2溶液1份；向蜜蜂提取液内加入质量浓度为10％的丝瓜汁、芦荟粉，30℃搅拌40min，再加入0.6mmol/L的MgCl2溶液，搅拌后冻干，在相对湿度为80％的空气下恢复常温冷却，即得。
实施例二
一种抗菌肽妇科凝胶的制备方法，包括以下步骤：
1)取蜜蜂，70℃加热1h，烘干全虫，粉碎，得到蜜蜂粉末；所述蜜蜂为蜂王浆高产蜜蜂；所述蜜蜂粉末的粒径为5mm；
2)将蜜蜂粉末放入含精氨酸的甘油-醋酸溶液中，浸泡20h，超声振动20min，得到混合液；所述甘油-醋酸溶液中甘油的体积分数为30％；所述精氨酸在甘油-醋酸溶液的浓度为1mol/L；
3)将混合液过滤除去滤渣，滤液100℃加热40min，浓缩至密度为1.6g/ml，得到蜜蜂提取液；
4)按如下质量份数比例配制：蜜蜂提取液8份、丝瓜汁15份、粒径为0.18mm的芦荟粉10份、MgCl2溶液2份；向蜜蜂提取液内加入质量浓度为30％的丝瓜汁、芦荟粉，50℃搅拌20min，再加入1.2mmol/L的MgCl2溶液，搅拌后冻干，在相对湿度为60％的空气下恢复常温冷却，即得。
实施例三
一种抗菌肽妇科凝胶的制备方法，包括以下步骤：
1)取蜜蜂，60℃加热1.5h，烘干全虫，粉碎，得到蜜蜂粉末；所述蜜蜂为安纳托利亚蜜蜂；所述蜜蜂粉末的粒径为3mm；
2)将蜜蜂粉末放入含精氨酸的甘油-醋酸溶液中，浸泡15h，超声振动15min，得到混合液；所述甘油-醋酸溶液中甘油的体积分数为22％；所述精氨酸在甘油-醋酸溶液的浓度为0.8mol/L；
3)将混合液过滤除去滤渣，滤液90℃加热50min，浓缩至密度为1.5g/ml，得到蜜蜂提取液；
4)按如下质量份数比例配制：蜜蜂提取液6份、丝瓜汁12份、粒径为0.16mm的芦荟粉9份、MgCl2溶液1.5份；向蜜蜂提取液内加入质量浓度为20％的丝瓜汁、芦荟粉，40℃搅拌30min，再加入0.8mmol/L的MgCl2溶液，搅拌后冻干，在相对湿度为70％的空气下恢复常温冷却，即得。
产品测试
一、抑菌效果测试
a)培养试菌：将致病菌群(加特纳菌、类杆菌)和有益菌群(乳酸杆菌，***双歧杆菌)活化，挑取单个菌落至5ml相应液体培养基中，置于37℃培养12h；取100μL，稀释10倍后取100μL菌悬液至固体培养基平板上，并涂匀。
b)制备不同的凝胶样品A、B、C、D，其中A为本发明的抗菌肽妇科凝胶，参照说明书制备；B为现有的妇科凝胶(参照CN101099815A)：以芦茶、磺胺嘧啶银干粉、冰片为特征成分，将羧甲基纤维素溶于水，加入芦荟叶肉胶、磺胺嘧啶银干粉、冰片混合形成凝胶；C为常规的芦荟凝胶，将芦荟经清洗、去皮、稳定化提取、膜过滤、膜浓缩而成；D为现有的蜜蜂抗菌肽(参照CN106146608A)，发酵液中提取制备蜜蜂抗菌肽，主要包括以下步骤：1)发酵液除菌过滤，使用超滤膜过滤发酵滤液，除去滤液中分子量较大的可溶性杂质；2)使用纳滤膜对超滤后的滤液进行浓缩，去除水分、无机盐等杂质；3)对纳滤后的滤液用分子筛柱Sephacryl分离；4)浓缩液经喷雾干燥获得蜜蜂抗菌肽成品。
c)将滤纸用打孔机打成半径为3mm的圆片，120℃高压蒸气灭菌30min，烘干，得到无菌滤纸片。
d)在无菌滤纸片表面涂抹不同的凝胶样品A、B、C、D，涂抹厚度均为10μm，涂抹面贴在含菌平板上，置于37℃培养12h，测定滤纸片抑菌圈的半径，结果见表1。
表1不同的凝胶样品对各细菌的抑菌圈半径(mm)
| 凝胶样品 | 加特纳菌 | 类杆菌 | 乳酸杆菌 | ***双歧杆菌 |
| A | 5.8 | 4.7 | 3.3 | 3.4 |
| B | 5.1 | 4.9 | 5.1 | 4.7 |
| C | 3.4 | 3.5 | 3.1 | 3.4 |
| D | 4.2 | 3.9 | 3.4 | 3.0 |
抑菌圈即表示抗菌效果，即抑菌圈半径越大，抗菌效果越好。本测试采用的不同抑菌物质，每种抑菌物质的用量相同，涂抹在相同的无菌滤纸片上。由表1可以看出，A对致病菌群(加特纳菌、类杆菌)有优良的抗菌效果，对有益菌群(乳酸杆菌，***双歧杆菌)不会造成强烈的破坏；B对致病菌群(加特纳菌、类杆菌)和有益菌群(乳酸杆菌，***双歧杆菌)都会产生强烈的抗菌作用；C对致病菌群(加特纳菌、类杆菌)和有益菌群(乳酸杆菌，***双歧杆菌)基本没作用；D能少量的杀死致病菌群(加特纳菌、类杆菌)，不影响有益菌群(乳酸杆菌，***双歧杆菌)的生长。综合上述比较，可以明显的看出，本发明的抗菌肽妇科凝胶能够高效的杀灭致病菌群(加特纳菌、厌氧菌)，并为有益菌群乳酸杆菌创造健康平和的生长繁殖条件，从而调节***炎环境下失调的***菌群平衡。
二、各组分协同作用测试
1、培养试菌：将致病菌群(加特纳菌、类杆菌)和有益菌群(乳酸杆菌，***双歧杆菌)活化，挑取单个菌落至5ml相应液体培养基中，置于37℃培养12h；取100μL，稀释10倍后取100μL菌悬液至固体培养基平板上，并涂匀。
2、制备不同的凝胶样品A、A1、A2、A3，其中A为本发明的抗菌肽妇科凝胶，参照说明书制备；A1为本发明步骤4)中取消丝瓜汁制成的凝胶；A2为本发明步骤4)中取消芦荟粉制成的凝胶；A3为本发明步骤4)中取消MgCl2溶液制成的凝胶。
3、将滤纸用打孔机打成半径为3mm的圆片，120℃高压蒸气灭菌30min，烘干，得到无菌滤纸片。
4、在无菌滤纸片表面涂抹不同的凝胶样品A、A1、A2、A3，涂抹厚度均为10μm，涂抹面贴在含菌平板上，置于37℃培养12h，测定滤纸片抑菌圈的半径，具体结果见表2。
表2不同组分凝胶样品对各细菌的抑菌圈半径(mm)
| 凝胶样品 | 加特纳菌 | 类杆菌 | 乳酸杆菌 | ***双歧杆菌 |
| A | 5.8 | 4.7 | 3.3 | 3.4 |
| A1 | 5.3 | 4.6 | 4.2 | 3.7 |
| A2 | 5.4 | 4.5 | 3.7 | 3.5 |
| A3 | 5.2 | 4.3 | 3.5 | 3.8 |
由表2可以看出，A1、A2、A3是取消部分组分后的测试结果，加特纳菌、类杆菌的抑菌圈半径都较A的小，说明取消丝瓜汁、芦荟粉或MgCl2溶液对致病菌群的抗菌效果都有所降低；而乳酸杆菌，***双歧杆菌半径都较A的大，说明取消丝瓜汁、芦荟粉或MgCl2溶液都不利于有益菌群的繁殖。采用本发明A将蜜蜂提取液与丝瓜汁、芦荟粉、MgCl2溶液混合，制成的凝胶抗菌效果最好。
Claims (10)
1.一种抗菌肽妇科凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)取蜜蜂，50～70℃加热1～2h，烘干全虫，粉碎，得到蜜蜂粉末；
2)将蜜蜂粉末放入含精氨酸的甘油-醋酸溶液中，浸泡12～20h，超声振动10～20min，得到混合液；
3)将混合液过滤除去滤渣，滤液80～100℃加热40～60min，浓缩，得到蜜蜂提取液；
4)向蜜蜂提取液内加入丝瓜汁、芦荟粉，30～50℃搅拌20～40min，再加入0.6～1.2mmol/L的MgCl2溶液，搅拌后冻干，在相对湿度为60～80％的空气下恢复常温，即得。
2.根据权利要求1所述的抗菌肽妇科凝胶的制备方法的制备方法，其特征在于，所述蜜蜂为意大利蜜蜂、蜂王浆高产蜜蜂、安纳托利亚蜜蜂、高加索蜜蜂、卡尼鄂拉蜜蜂、喀尔巴阡蜜蜂中的一种。
3.根据权利要求1所述的抗菌肽妇科凝胶的制备方法，其特征在于，所述蜜蜂粉末的粒径为1～5mm。
4.根据权利要求1所述的抗菌肽妇科凝胶的制备方法，其特征在于，所述甘油-醋酸溶液中甘油的体积分数为15～30％。
5.根据权利要求1所述的抗菌肽妇科凝胶的制备方法，其特征在于，所述精氨酸在甘油-醋酸溶液的浓度为0.5～1mol/L。
6.根据权利要求1所述的抗菌肽妇科凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤3)浓缩至密度为1.4～1.6g/ml。
7.根据权利要求1所述的抗菌肽妇科凝胶的制备方法，其特征在于，所述丝瓜汁的质量浓度为10～30％。
8.根据权利要求1所述的抗菌肽妇科凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤4)中各组分的质量份数按如下比例配制：蜜蜂提取液4～8份、丝瓜汁10～15份、芦荟粉8～10份、MgCl2溶液1～2份。
9.根据权利要求1所述的抗菌肽妇科凝胶的制备方法，其特征在于，所述芦荟粉的粒径为0.12～0.18mm。
10.根据权利要求1所述的抗菌肽妇科凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤4)冻干指先在-10～-30℃冷冻，然后在2～10Pa真空条件下脱水干燥。
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