CN107764890A - 一种依折麦布对映异构体的区分检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种依折麦布对映异构体的区分检测方法，采用β‑环糊精与Cu离子作为配体，用于与依折麦布(S，R，S)、(R，S，R)形成不同稳定形态的络合物，并利用质谱法对其进行识别区分。本发明极大地缩短了依折麦布对映异构体(S，R，S)、(R，S，R)检测时间，将对映异构体(S，R，S)、(R，S，R)的分析时间缩短至2‑3min，简便了操作过程，并且区分重复性非常好；区分所需样品量极少，只需200μl左右，成本很低。本发明为该药物对映异构体区分提供了更好的方法，同时为区分难度较大的多手性中心对映异构体的分析提供了新的思路。

Description

一种依折麦布对映异构体的区分检测方法
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种依折麦布对映异构体(S，R，S)、(R，S，R)的区分检测方法。
背景技术
依折麦布为胆固醇抑制吸收剂，适用于治疗原发性高胆固醇血症，纯合子家族性高胆固醇血症(HoFH)和纯合子谷甾醇血症(或植物甾醇血症)，其分子式为C24H21F2NO3，化学名为1-(4-氟苯基)-3(R)-[3-(4-氟苯基)-3(S)-羟丙
基]-4(S)-(4-羟苯基)-2-吖丁啶(氮杂环丁烷)酮，结构式为：
该分子中含有3个手性中心，存在多个光学异构体，对于依折麦布的光学异构体杂质，在药物合成过程当中须进行质量控制。含手性碳原子的光学异构体的区分一直是手性药物合成和制剂过程中质量控制的难点，实现依折麦布及其光学异构体的区分在依折麦布药物的合成和制剂过程的质量控制方面具有现实意义。对于多手性中心的分子，非对映异构体区分难度低，对映异构体区分难度较大，因此对该类药物对映异构体区分方法的研究具有重要意义。
目前，常用的依折麦布对映异构体的区分方法是传统的色谱法，如LC、HPLC、CE、CEC、SFC等，但是这些方法都需要较长的区分时间和较大的样品量，对实际操作带来了不便。质谱具有快速、准确、灵敏的特点，自1977年首次用于手性异构体的区分后，现今已经得到了极大的发展，主要的区分手性异构体的方法包括质谱法和串联质谱法。前者又包括主-客体法、离子-分子反应法及非对映异构体解离法。目前用质谱法来区分依折麦布对映异构体还未见文献报道。
发明内容
本发明目的是提供一种依折麦布对映异构体(S，R，S)、(R，S，R)的区分检测方法，以解决现有技术的不足。
本发明采用以下技术方案：
一种依折麦布对映异构体的区分检测方法，采用β-环糊精与Cu离子作为配体，用于与依折麦布(S，R，S)、(R，S，R)形成不同稳定形态的络合物，并利用质谱法对其进行识别区分。
进一步地，β-环糊精终浓度为20-25μg/ml；配置时先加少量DMSO至β-环糊精全部溶解，再用甲醇稀释待用。
进一步地，Cu离子为二价，终浓度为12-12.5μg/ml；配置时用蒸馏水作为溶剂。
进一步地，质谱的进样方法为针泵直接进样，防止络合物在进行碰撞解离之前就被外界环境影响。
进一步地，针泵直接进样的流速为20μl/min，收集时间为1min，质谱真空温度为250℃，荷质比范围设置300-2000。
进一步地，在质谱中进行二级质谱实验时，直接输入目标母离子[Cu(Ezetimibe)2(β-CD)]2+的荷质比(m/z＝1007.8)进二级质谱，将碰撞能量调为0来寻找母离子。
进一步地，进行二级质谱实验时碰撞能量为14-16，收集时间为40ms。
本发明的有益效果：
本发明提供了一种新型的针对依折麦布对映异构体(S，R，S)、(R，S，R)的区分检测方法，采用β-环糊精和二价Cu离子作为配体，根据非对映异构体解离特性差异，用质谱法来区分依折麦布及其对映异构体，并采用计算机模拟的方式构建该络合物体系存在的最优构型，深入理解其区分机理。
本发明极大地缩短了依折麦布对映异构体(S，R，S)、(R，S，R)检测时间，将对映异构体(S，R，S)、(R，S，R)的分析时间缩短至2-3min，简便了操作过程，并且区分重复性非常好；区分所需样品量极少，只需200μl左右，成本很低。本发明为该药物对映异构体区分提供了更好的方法，同时为区分难度较大的多手性中心对映异构体的分析提供了新的思路。
附图说明
图1是SRS-依折麦布+β-环糊精+Cu离子体系的立体结构示意图(A为侧面图、B为俯视图)；
图2是RSR-依折麦布+β-环糊精+Cu离子体系的立体结构示意图(A为侧面图、B为俯视图)；
图3是SRS-依折麦布+β-环糊精+Cu离子体系的二级质谱图；
图4是RSR-依折麦布+β-环糊精+Cu离子体系的二级质谱图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明做更进一步地解释。下列实施例仅用于说明本发明，但并不用来限定本发明的实施范围。
实施例1
A.样品配置：准确称取1mg RSR-依折麦布、1mg SRS-依折麦布、1mg CuSO4固体以及10mgβ-环糊精。RSR-依折麦布以及SRS-依折麦布分别用甲醇稀释至50μg/ml；CuSO4固体用纯水稀释至1mg/ml；β-环糊精先用少量DMSO溶解至看不见固体(DMSO不能超过200μl)，再用甲醇稀释至1mg/ml，再用甲醇稀释至50μg/ml。取200μl 50μg/ml RSR-依折麦布以及200μl 50μg/mlβ-环糊精混匀，加入5μl 1mg/ml的CuSO4水溶液得样品1；SRS-依折麦布同上述配置方法得样品2。
B.质谱区分：将上述2个样品分别通过针泵直接进样的方式，在Agilient Q-ToF6550高分辨质谱仪以20μl/min的速度持续注入质谱，收集时间1min，质谱真空温度为250℃，荷质比范围设置300-2000；在二级质谱图上设置碰撞能量为0寻找到母离子[Cu(Ezetimibe)2(β-CD)]2+(m/z＝1007.8)，然后再逐渐加大碰撞能量，直至得出具有明显差异的离子碎片质谱图，碰撞能量为14-16，收集时间为40ms，如图3、图4所示。图3是SRS-依折麦布+β-环糊精+Cu离子体系的二级质谱图，母离子为[Cu(Ezetimibe)2(β-CD)]2+(m/z＝1007.8)产生的碎片离子分别为[Ezetimibe-H2O+H]+(m/z＝392.15)，[Ezetimibe+H]+(m/z＝410.15)，[Cu(β-CD)-H]+(m/z＝1196.3)和[Cu(Ezetimibe)(β-CD)-H]+(m/z＝1605.5)。图4是RSR-依折麦布+β-环糊精+Cu离子体系的二级质谱图，产生的离子碎片与SRS-依折麦布+β-环糊精+Cu离子体系相同，但是[Ezetimibe-H2O+H]+
(m/z＝392.15)这个碎片离子的丰度与之具有差异。图3、图4的质谱实验结果，可以看出在相同的碰撞能量下，[Ezetimibe-H2O+H]+(m/z＝392.15)这个碎片离子的丰度依折麦布(S，R，S)要比依折麦布(R，S，R)低，表明前者结合的更加稳定，证实了下述理论计算的结果。
C.计算机模拟方法构建络合物最优构型：用计算机模拟方法中的DFT(密度泛函法)进行计算，其中自选多重度为2，体系电荷数为2，Cu离子使用Lanl2DZ赝势基组，其他原子使用6-31G*基组。将2种络合物在质谱的真空环境中可能拥有的最优构型计算出来，直观地显示出依折麦布对映异构体的区分机理，如图1、2所示。图1是利用计算机模拟实验计算出的SRS-依折麦布+β-环糊精+Cu离子体系的立体结构示意图，2分子SRS-依折麦布一个贯穿β-环糊精空腔，与Cu离子形成Cu-O键络合；一个位于β-环糊精周边，与其羟基形成氢键结合。图2是利用计算机模拟实验计算出的RSR-依折麦布+β-环糊精+Cu离子体系的立体结构示意图，2分子RSR-依折麦布均位于β-环糊精空穴处，与其羟基形成氢键结合。对比图1、图2可知，依折麦布(S，R，S)、(R，S，R)与配体结合的方式是不一样的，依折麦布(S，R，S)会与Cu离子形成配位键，比依折麦布(R，S，R)单纯靠氢键结合要更加牢固和稳定。
本实施例采用质谱法区分依折麦布(S，R，S)、(R，S，R)对映异构体，用时只需2-3min，非常快速，另外还辅以计算机模拟的实验方法研究其机理，为手性异构体的区分提供了新的思路。

Claims (7)

1.一种依折麦布对映异构体的区分检测方法，其特征在于，采用β-环糊精与Cu离子作为配体，用于与依折麦布(S，R，S)、(R，S，R)形成不同稳定形态的络合物，并利用质谱法对其进行识别区分。
2.根据权利要求1所述的依折麦布对映异构体的区分检测方法，其特征在于，β-环糊精终浓度为20-25μg/ml；配置时先加少量DMSO至β-环糊精全部溶解，再用甲醇稀释待用。
3.根据权利要求1所述的依折麦布对映异构体的区分检测方法，其特征在于，Cu离子为二价，终浓度为12-12.5μg/ml；配置时用蒸馏水作为溶剂。
4.根据权利要求1所述的依折麦布对映异构体的区分检测方法，其特征在于，质谱的进样方法为针泵直接进样，防止络合物在进行碰撞解离之前就被外界环境影响。
5.根据权利要求1所述的依折麦布对映异构体的区分检测方法，其特征在于，针泵直接进样的流速为20μl/min，收集时间为1min，质谱真空温度为250℃，荷质比范围设置300-2000。
6.根据权利要求1所述的依折麦布对映异构体的区分检测方法，其特征在于，在质谱中进行二级质谱实验时，直接输入目标母离子[Cu(Ezetimibe)2(β-CD)]2+的荷质比(m/z＝1007.8)进二级质谱，将碰撞能量调为0来寻找母离子。
7.根据权利要求1所述的依折麦布对映异构体的区分检测方法，其特征在于，进行二级质谱实验时碰撞能量为14-16，收集时间为40ms。
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