CN107714646A - 可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束：包括抗肿瘤药物、两亲性聚合物以及胶原蛋白酶，所述两亲性聚合物将所述抗肿瘤药物包裹于内部，所述两亲性聚合物外部通过共价键连接所述胶原蛋白酶。本发明还提供了其制备方法：将两亲性聚合物与胶原蛋白酶在交联剂的作用下在溶剂中在20‑26℃下反应，除掉第一有机溶剂；将修饰有胶原蛋白酶的两亲性聚合物与抗肿瘤药物溶于第二有机溶剂，得到药物溶液；将药物溶液加入纯水中，除掉第二有机溶剂，形成可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束。本发明的胶束表面的胶原蛋白酶可穿透细胞外基质，使得抗肿瘤药物能更好地进入肿瘤部位，增加肿瘤细胞内的药物量，从而引起肿瘤细胞的凋亡。

Description

可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种药物制剂领域，尤其涉及一种可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束及其制备方法。
背景技术
近年来，癌症的发病率正在逐年升高，严重威胁着人类的生命健康。尽管***的方法和技术不断进步，并且在很大程度提高了患者的生存率，但多数患者发病时已处于晚期，不能接受手术治疗，只能采用抗癌药物进行保守治疗。化学药物通常水溶性差，心脏毒性和骨髓抑制等副作用较明显，直接应用对患者正常细胞损伤比较大。
具有PEG亲水性嵌段的胶束可以避免载药***在网状内皮***中被非特异性识别并吞噬，进入将药物运输至肝、脾以及以外的器官。不少专利和文献报道表明，在PEG的末端修饰导向性分子，可以使得药物具有靶向性。以转铁蛋白作为靶向因子对PLC-PEG-B纳米粒子进行生物功能化，可以明显提高PLA-PEG纳米粒子在脑部肿瘤的特异性靶向能力。虽然靶向性载体具有较强的肿瘤特异性结合能力，但是仍未从根本上解决肿瘤微环境中存在的一系列屏障。
细胞外基质(extracellular matrix，ECM)是一种三维大分子网络，由胶原蛋白、纤连蛋白、糖蛋白、蛋白聚糖和糖胺聚糖等组成。在肿瘤发生期间，ECM发生明显改变，从而导致纤维化基质的形成增加，刚度增加，ECM成分过度沉积，导致异常的ECM重塑，因此ECM组分会显著影响药物的递送。
化学药物制成纳米粒后，可以提高疗效和降低毒副作用。目前，应用纳米药物治疗癌症的一个主要挑战是它们难以穿透肿瘤细胞外基质。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种可穿透肿瘤胞外基质(ECM)的两亲性聚合物胶束，本发明的双亲性聚合物胶束，能提高载体对肿瘤细胞穿透的能力，增加化学药物进入肿瘤细胞，从而引起肿瘤细胞的凋亡。
本发明提供了一种可穿透肿瘤胞外基质(ECM)的两亲性聚合物胶束：包括抗肿瘤药物、两亲性聚合物以及胶原蛋白酶，两亲性聚合物将所述抗肿瘤药物包裹在其内部，两亲性聚合物外部通过共价键连接胶原蛋白酶。
进一步地，抗肿瘤药物为多西他赛、阿霉素和紫杉醇中的一种或几种。
进一步地，两亲性聚合物为PCL-PEG共聚物、PLA-PEG共聚物和PLGA-PEG共聚物中的一种或几种。具体地，两亲性聚合物为PCL-PEG-COOH或PLA-PEG-COOH、PLGA-PEG-COOH。其中，PCL为聚己内酯，PEG为聚乙二醇，PLA为聚乳酸，PLGA为聚乳酸-羟基乙酸共聚物。
进一步地，胶原蛋白酶和两亲性聚合物的摩尔比为1：100-1000。优选地，胶原蛋白酶和两亲性聚合物的摩尔比为1:100。
进一步地，抗肿瘤药物与两亲性聚合物的质量比为0.5-15:100。
进一步地，两亲性聚合物的分子量为10000-25000g/mol。
具体地，PCL-PEG-COOH中，PCL的分子量为8000g/mol，PEG的分子量为2000g/mol；PLA-PEG-COOH中，PLA的分子量为8000g/mol，PEG的分子量为2000g/mol；PLGA-PEG-COOH中，PLGA的分子量为20000g/mol，PEG的分子量为2000g/mol。
进一步地，胶原蛋白酶为Ⅰ型胶原蛋白酶、Ⅱ型胶原蛋白酶、Ⅳ型胶原蛋白酶和Ⅴ型胶原蛋白酶中的一种或几种。优选地，胶原蛋白酶为Ⅳ型胶原蛋白酶，Ⅳ型胶原蛋白酶主要降解Ⅳ型胶原纤维层粘连蛋白、弹性蛋白和巢蛋白等ECM，能够消化变性的胶原。
本发明还提供了一种上述可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束的制备方法包括以下步骤：
(1)将两亲性聚合物与交联剂在第一有机溶剂中在20-26℃(室温)下发生反应，除掉第一有机溶剂，然后在纯水中与胶原蛋白酶在20-26℃(室温)下反应，得到修饰有胶原蛋白酶的两亲性聚合物；
(2)将修饰有胶原蛋白酶的两亲性聚合物与抗肿瘤药物溶于第二有机溶剂，得到药物溶液；
(3)将药物溶液加入纯水中，除掉第二有机溶剂，形成可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束。
进一步地，在步骤(1)中，采用碳二亚胺法进行反应，交联剂为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)。
进一步地，在步骤(1)中，采用旋蒸法除掉第一有机溶剂。
进一步地，在步骤(1)中，第一有机溶剂为二甲亚砜、乙腈和三氯甲烷的一种或几种。
进一步地，在步骤(2)中，第二有机溶剂为丙酮、甲醇、乙醇、二氯甲烷和三氯甲烷的一种或几种。
进一步地，在步骤(3)中，在搅拌条件下将药物溶液加入纯水中，搅拌速度为400-700rpm，搅拌时间为4-8h。
在第(3)步中，由于两亲性聚合物中含有亲疏水链段，将药物溶液加入纯水中后，聚合物的亲水端会在外部聚集，内部聚集疏水链段，由于抗肿瘤药物也是疏水的，因此被包裹在内部，除掉第二有机溶剂后，可形成两亲性聚合物胶束。
借由上述方案，本发明至少具有以下优点：
(1)将胶原蛋白酶修饰于胶束表面后，借助于胶原蛋白酶对肿瘤细胞外基质的胶原特异性降解，能够有效增加化药递送进入肿瘤的治疗作用，可增加化疗药物对肿瘤细胞的杀伤力。
(3)将化疗药物包裹于胶束内核中，递送至肿瘤细胞内，发挥杀伤肿瘤细胞。同时本发明的胶束稳定性高、生理相容性好，可增加化学药物稳定性，可使药物稳定缓慢释放，且提高药物生物利用度，降低机体毒副作用。
(4)本发明的制备工艺简单，包封率高，便于工业化生产；所制得的具有增加穿透肿瘤胞外基质作用的双亲性聚合物胶束的物理性质等方面符合肿瘤细胞治疗的需要。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。
附图说明
图1是本发明实施例1、2、6和7所制备的胶束的透射电镜测试结果；
图2为实施例4所制备胶束的体外释放度结果。
具体实施方式
下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
除非另外指明，以下实施例中所涉及到的“DOX”均表示“阿霉素”；“DTX”均表示“多西他赛”；“TAXOL”均代表“紫杉醇”“PEG”均表示“聚乙二醇”；“Ⅳcollagenase”均表示“Ⅳ型胶原蛋白酶”；“Ⅰcollagenase”均表示“Ⅳ型胶原蛋白酶”；“Ⅱcollagenase”均表示“Ⅱ型胶原蛋白酶”；“Ⅴcollagenase”均表示“Ⅴ型胶原蛋白酶”。
以下实施例中，所使用的PCL-PEG-COOH中，PCL的分子量为8000g/mol，PEG的分子量为2000g/mol；PLA-PEG-COOH中，PLA的分子量为8000g/mol，PEG的分子量为2000g/mol；PLGA-PEG-COOH中，PLGA的分子量为20000g/mol，PEG的分子量为2000g/mol。
实施例1.PCL-PEG-COOH空白胶束的制备
本实施例提供了作为对照实验的PCL-PEG空白胶束的制备方法，具体如下：
取5mg PCL-PEG-COOH溶解在0.5mL丙酮中，得到聚合物溶液10mg/mL。将100μL上述聚合物溶液和400μL丙酮再次充分混合。在剧烈搅拌的条件下，缓慢加入5mL纯水中，搅拌4h，使有机溶剂蒸发。
实施例2.药物和载体投药比为0.5:100的DOX-PCL-PEG-COOH胶束的制备
本实施例提供了作为对照实验的DOX-PCL-PEG-COOH胶束的制备方法，具体如下：
取DOX粉末10mg溶在甲醇中，超声溶解，定容至100mL容量瓶中，得到100μg/mL的DOX标准品溶液。取5mg PCL-PEG-COOH溶解在0.5mL丙酮中，得到聚合物溶液10mg/mL。取100μL聚合物溶液和50μL阿霉素溶液，加丙酮直至500μL。在剧烈搅拌的条件下，缓慢加入5mL纯水中，搅拌4h，使有机溶剂蒸发。
实施例3.药物和载体投药比为5:100的DOX-PCL-PEG-COOH的制备
本实施例提供了作为对照实验的DOX-PCL-PEG-COOH胶束的制备方法，具体如下：
取DOX粉末10mg溶在甲醇中，超声溶解，定容至10mL容量瓶中，得到1mg/mL的DOX标准品溶液。取5mg PCL-PEG-COOH溶解在0.5mL丙酮中，得到聚合物溶液10mg/mL。取100μL聚合物溶液和50μLDOX溶液，加丙酮直至500μL。在剧烈搅拌的条件下，缓慢加入5mL纯水中，搅拌4h，使有机溶剂蒸发。
实施例4.药物和载体投药比为10:100的DOX-PCL-PEG-COOH胶束的制备
本实施例提供了作为对照实验的DOX-PCL-PEG-COOH胶束的制备方法，具体如下：
取DOX粉末10mg溶在甲醇中，超声溶解，定容至10mL容量瓶中，得到1mg/mL的DOX标准品溶液。取5mg PCL-PEG-COOH溶解在0.5mL丙酮中，得到聚合物溶液10mg/mL。胶束药物和胶束药物和载体投药比为10:100的制备：取100μL聚合物溶液和100μLDOX溶液，加丙酮直至500μL。在剧烈搅拌的条件下，缓慢加入5mL纯水中，搅拌4h，使有机溶剂蒸发。
实施例5.药物和载体投药比为15:100的DOX-PCL-PEG-COOH胶束的制备
本实施例提供了作为对照实验的DOX-PCL-PEG-COOH胶束的制备方法，具体如下：
取DOX粉末10mg溶在甲醇中，超声溶解，定容至10mL容量瓶中，得到1mg/mL的DOX标准品溶液。取5mg PCL-PEG-COOH溶解在0.5mL丙酮中，得到聚合物溶液10mg/mL。胶束药物和载体投药比为15:100的制备：取100μL聚合物溶液和150μLDOX溶液，加丙酮直至500μL。在剧烈搅拌的条件下，缓慢加入5mL纯水中，搅拌4h，使有机溶剂蒸发。
实施例6.PCL-PEG-Ⅳcollagenase空白胶束的制备
本实施例提供了作为对照实验的PCL-PEG-Ⅳcollagenase空白胶束的制备方法，具体如下：
精密称取NHS(15.3mg，0.15mmol)和EDC(28.7mg，0.15mmol)分别溶解于1mL二氯甲烷涡旋溶解。取COOH-PEG-PCL(50mg，0.05mmol)溶液加入5mL的二氯甲烷，置于磁力搅拌器中，20-26℃搅拌15min后，同时加入NHS和EDC溶液，产生NHS-PEG-PCL，混合搅拌6-8h，旋蒸使得二氯甲完全烷挥发，加纯水，即得产物。在NHS-PEG-PCL的水溶液中加入胶原蛋白溶液(1mL，0.5mg/mL)，搅拌2h。膜透析24h(Mw＝3500)，每6h换水一次，冻干48h，得到PCL-PEG-Ⅳcollagenase。
取5mg PCL-PEG-Ⅳcollagenase溶解在0.5mL丙酮中，得到聚合物溶液10mg/mL。将100μL聚合物溶液和400μL丙酮充分混合。在剧烈搅拌的条件下，缓慢加入5mL纯水中，搅拌4h，使有机溶剂蒸发。
实施例7.药物和载体投药比为0.5:100的DOX-PCL-PEG-Ⅳcollagenase胶束制备
本发明的具有穿透肿瘤胞外基质作用的功能化DOX-PCL-PEG-Ⅳcollagenase胶束的制备方法，具体如下，其中，以下实施例中，载体均指修饰有胶原蛋白酶的两亲性聚合物：
精密称取NHS(15.3mg，0.15mmol)和EDC(28.7mg，0.15mmol)分别溶解于1mL二氯甲烷涡旋溶解。取PCL-PEG-COOH(50mg，0.05mmol)溶液加入5mL的二氯甲烷，置于磁力搅拌器中，20-26℃搅拌15min后，同时加入NHS和EDC溶液，产生NHS-PEG-PCL，混合搅拌6-8h，旋蒸使得二氯甲完全烷挥发，加纯水，即得产物。在NHS-PEG-PCL的水溶液中加入Ⅳ型胶原蛋白酶溶液(1mL，0.5mg/mL)，搅拌2h。膜透析24h(Mw＝3500)，每6h换水一次，冻干48h，得到修饰有胶原蛋白酶的两亲性聚合物(PCL-PEG-Ⅳcollagenase)。
取DOX粉末10mg溶在甲醇中，超声溶解，定容至100mL容量瓶中，得到100μg/mL的DOX标准品溶液。取5mg PCL-PEG-Ⅳcollagenase溶解在0.5mL丙酮中，得到聚合物溶液10mg/mL。取100μL聚合物溶液和50μLDOX溶液，加丙酮直至500μL。在剧烈搅拌的条件下，缓慢加入5mL纯水中，搅拌4h，使有机溶剂蒸发后得到可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束(DOX-PCL-PEG-Ⅳcollagenase胶束)。
实施例8.药物和载体投药比为5:100的DOX-PCL-PEG-Ⅳcollagenase胶束制备
精密称取NHS(15.3mg，0.15mmol)和EDC(28.7mg，0.15mmol)分别溶解于1mL二氯甲烷涡旋溶解。取PCL-PEG-COOH(50mg，0.05mmol)溶液加入5mL的二氯甲烷，置于磁力搅拌器中，20-26℃搅拌15min后，同时加入NHS和EDC溶液，产生NHS-PEG-PCL，混合搅拌6-8h，旋蒸使得二氯甲完全烷挥发，加纯水，即得产物。在NHS-PEG-PCL的水溶液中加入胶原蛋白溶液(1mL，0.5mg/mL)，搅拌2h。膜透析24h(Mw＝3500)，每6h换水一次，冻干48h，得到PCL-PEG-Ⅳcollagenase。
取DOX粉末10mg溶在甲醇中，超声溶解，定容至10mL容量瓶中,得到1mg/mL的DOX标准品溶液。取5mg PCL-PEG-Ⅳcollagenase溶解在0.5mL丙酮中，得到聚合物溶液10mg/mL。取100μL聚合物溶液和50μL DOX溶液，加丙酮直至500μL。在剧烈搅拌的条件下，缓慢加入5mL纯水中，搅拌4h，使有机溶剂蒸发。
实施例9.药物和载体投药比为10:100的PCL-PEG-Ⅳcollagenase胶束制备
精密称取NHS(15.3mg，0.15mmol)和EDC(28.7mg，0.15mmol)分别溶解于1mL二氯甲烷涡旋溶解。取PCL-PEG-COOH(50mg，0.05mmol)溶液加入5mL的二氯甲烷，置于磁力搅拌器中，20-26℃搅拌15min后，同时加入NHS和EDC溶液，产生NHS-PEG-PCL，混合搅拌6-8h，旋蒸使得二氯甲完全烷挥发，加纯水，即得产物。在NHS-PEG-PCL的水溶液中加入胶原蛋白溶液(1mL，0.5mg/mL)，搅拌2h。膜透析24h(Mw＝3500)，每6h换水一次，冻干48h，得到PCL-PEG-Ⅳcollagenase。
取DOX粉末10mg溶在甲醇中，超声溶解，定容至10mL容量瓶中,得到1mg/mL的DOX标准品溶液。取5mg PCL-PEG-Ⅳcollagenase溶解在0.5mL丙酮中，得到聚合物溶液10mg/mL。取100μL聚合物溶液和100μLDOX溶液，加丙酮直至500μL。在剧烈搅拌的条件下，缓慢加入5mL纯水中，搅拌4h，使有机溶剂蒸发。
实施例10.药物和载体投药比为15:100的PCL-PEG-Ⅳcollagenase胶束制备
精密称取NHS(15.3mg，0.15mmol)和EDC(28.7mg，0.15mmol)分别溶解于1mL二氯甲烷涡旋溶解。取PCL-PEG-COOH(50mg，0.05mmol)溶液加入5mL的二氯甲烷，置于磁力搅拌器中，20-26℃搅拌15min后，同时加入NHS和EDC溶液，产生NHS-PEG-PCL，混合搅拌6-8h，旋蒸使得二氯甲完全烷挥发，加纯水，即得产物。在NHS-PEG-PCL的水溶液中加入胶原蛋白溶液(1mL，0.5mg/mL)，搅拌2h。膜透析24h(Mw＝3500)，每6h换水一次，冻干48h，得到PCL-PEG-Ⅳcollagenase。
取DOX粉末10mg溶在甲醇中，超声溶解，定容至10mL容量瓶中,得到1mg/mL的DOX标准品溶液。取5mg PCL-PEG-Ⅳcollagenase溶解在0.5mL丙酮中，得到聚合物溶液10mg/mL。取100μL聚合物溶液和150μLDOX溶液，加丙酮直至500μL。在剧烈搅拌的条件下，缓慢加入5mL纯水中，搅拌4h，使有机溶剂蒸发。
实施例11.粒径和电位测定
将实施例1、2、6和7中的胶束溶液用纯水稀释至一定的浓度，通过粒度测定仪及Zeta电位分析仪测定胶束的粒径分布和表面电位。
表1为实施例1、2、6和7的粒径分布和表面电位的结果，从表格中可看出PCL-PEG-COOH空白胶束的粒径在110nm左右，载药之后，增加到180nm左右。PCL-PEG-Ⅳcollagenase胶束的的粒径在310nm左右，载药之后增大到360nm左右。同时，可以看出无论是载药前还是载药后，电位均在0mV左右，呈电中性。
表1 不同胶束溶液的粒径分布和表面电位测试结果
实施例12.胶束的形态观察
取制备好的实施例1、2、6和7的胶束分别滴至覆有支持膜的铜网上，置于红外灯下烘干2-4h，采用透射电镜法观察纳米粒的形态并拍照。
图1为上述实施例的测试结果，图a、b、c、d分别代表实施例1、2、6和7的胶束。通过把图a和b中的胶束以及图c和d中的胶束对比，我们可以看到载药后粒径增大，但形态依旧是规整的圆形，药物阿霉素进入载体内部。
实施例13.胶束包封率和载药量测定
取实施例3-5和8-10中的胶束溶液，采用高速离心法测定包封率以及载药量，将制备好的胶束，置于离心管中，在8000rap/min，4℃条件下，超速离心30min，取上清液，测定游离药物含量。
称取10mg的DOX，加纯水，超声溶解后定容至100mL，得到100μg/mL的DOX水溶液标准品配成一系列梯度浓度，制备标准曲线，并测定样品的荧光值。
按下列公式计算胶束的包封率和载药量：
载药量(％)＝WDOX/W载体×100％
包封率(％)＝(WDOX-W游离)/W总DOX×100％
其中，W总DOX是药物总量，W游离是未包进胶束的药物的质量，W载体是载体的质量。
表2为实施例3-5和8-10的包封率和载药量结果，当投料率为15％时，两种载体的溶液均出现浑浊，进而选择投料率为10％时透析法测定包封率和载药量。从表2可看出，DOX-PCL-PEG-COOH载体包封率在90％，载药量在9％，连接Ⅳcollagenase后，包封率和载药量略有降低。
表2 不同胶束的包封率和载药量测试结果
实施例14.体外释放度考察
透析袋用60℃纯水煮15min，将实施例4的DOX-PCL-PEG-COOH胶束溶液置于透析袋中，用棉绳扎紧，悬置于盛有40mL pH7.4的PBS的100mL烧杯中，放于恒温振荡箱中以37±1℃，振荡48h，定时0.5、1、2、4、8、12、24、48和72h取样1mL，同时补加等体积同温度的释药介质PBS。将所取样品，测定释药量，计算累积释药百分比。
图2为实施例4所制备的胶束的测试结果，从图中可看出，随着释放时间的增加，药物的累积释放度逐步上升，当时间超过72h后，释放曲线趋于平稳，可以看出DOX-PCL-PEG-COOH有明显的缓释作用。
实施例15.药物和载体投药比为0.5:100的DOX-PLA-PEG-COOH胶束制备
将实施例7中的两亲性聚合物替换为PLA-PEG-COOH，其他实验步骤参见实施例7，制得可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束。
实施例16.药物和载体投药比为0.5:100的DOX-PLGA-PEG-COOH胶束制备
将实施例7中的两亲性聚合物替换为PLGA-PEG-COOH，其他实验步骤参见实施例7，制得可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束。
实施例17.药物和载体投药比为5:100的DTX-PCL-PEG-Ⅰcollagenase胶束制备
将实施例8中的抗肿瘤药物替换为-DTX，Ⅳcollagenase替换为Ⅰcollagenase，其他实验步骤参见实施例8，制得可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束。
实施例18.药物和载体投药比为5:100的TAXOL-PCL-PEG-Ⅱcollagenase胶束制备
将实施例8中的抗肿瘤药物替换为TAXOL，Ⅳcollagenase替换为Ⅱcollagenase，其他实验步骤参见实施例8，制得可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束。
实施例19.药物和载体投药比为5:100的TAXOL-PCL-PEG-Ⅴcollagenase胶束制备
将实施例8中的抗肿瘤药物替换为TAXOL，Ⅳcollagenase替换为Ⅴcollagenase，其他实验步骤参见实施例8，制得可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束，其特征在于：包括抗肿瘤药物、两亲性聚合物以及胶原蛋白酶，所述两亲性聚合物将所述抗肿瘤药物包裹在其内部，所述两亲性聚合物外部通过共价键连接所述胶原蛋白酶。
2.根据权利要求1所述的可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束，其特征在于：所述抗肿瘤药物为多西他赛、阿霉素和紫杉醇中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束，其特征在于：所述两亲性聚合物为PCL-PEG共聚物、PLA-PEG共聚物和PLGA-PEG共聚物中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束，其特征在于：所述胶原蛋白酶和两亲性聚合物的摩尔比为1：100-1000。
5.根据权利要求1所述的可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束，其特征在于：所述胶原蛋白酶为Ⅰ型胶原蛋白酶、Ⅱ胶原蛋白酶、Ⅳ型胶原蛋白酶和Ⅴ型胶原蛋白酶中的一种或几种。
6.一种根据权利要求1-5中任一项所述的可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将所述两亲性聚合物与交联剂在第一有机溶剂中在20-26℃下发生反应，除掉所述第一有机溶剂，然后在纯水中与胶原蛋白酶在20-26℃下反应，得到修饰有胶原蛋白酶的两亲性聚合物；
(2)将所述修饰有胶原蛋白酶的两亲性聚合物与所述抗肿瘤药物溶于第二有机溶剂，得到药物溶液；
(3)将所述药物溶液加入水中，除掉所述第二有机溶剂，形成所述可穿透肿瘤胞外基质的两亲性聚合物胶束。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述交联剂为N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述第一有机溶剂为二甲亚砜、乙腈和三氯甲烷的一种或几种。
9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述第二有机溶剂为丙酮、甲醇、乙醇、二氯甲烷和三氯甲烷的一种或几种。
10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：在步骤(3)中，在搅拌条件下将所述药物溶液加入纯水中，搅拌速度为400-700rpm。
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