CN107709343B

CN107709343B - 针对肺炎链球菌血清型5的疫苗

Info

Publication number: CN107709343B
Application number: CN201680033744.0A
Authority: CN
Inventors: C·阿尼什; M·里斯本; C·马丁; C·L·佩雷拉; P·H·泽贝格尔; N·可汗
Original assignee: Max Planck Gesellschaft zur Foerderung der Wissenschaften eV
Current assignee: Max Planck Gesellschaft zur Foerderung der Wissenschaften eV
Priority date: 2015-06-08
Filing date: 2016-01-26
Publication date: 2021-05-18
Anticipated expiration: 2036-01-26
Also published as: US20180296687A1; DK3303357T3; WO2016198170A1; ES2880957T3; EP3303357A1; EP3303357B1; US10596272B2; CN107709343A; WO2016198170A8

Abstract

本发明涉及与肺炎链球菌血清型5荚膜多糖的重复单元有关的通式为(I)的明确定义的合成糖及其缀合物。该缀合物和含有所述缀合物的药物组合物可用于预防和/或治疗与肺炎链球菌相关的疾病，更具体地针对与肺炎链球菌血清型5相关的疾病。此外，通式为(I)的合成糖可在用于检测针对肺炎链球菌细菌的抗体的免疫学测定中用作标志物，

Description

针对肺炎链球菌血清型5的疫苗

技术领域

本发明涉及与肺炎链球菌血清型5荚膜多糖的重复单元有关的通式为(I)的明确定义的合成糖及其缀合物。该缀合物和含有所述缀合物的药物组合物可用于预防和/或治疗与肺炎链球菌相关的疾病，更具体地针对与肺炎链球菌血清型5 相关的疾病。此外，通式为(I)的合成糖可在用于检测针对肺炎链球菌细菌的抗体的免疫学测定中用作标志物。

背景技术

肺炎链球菌是一种革兰氏阳性的囊状细菌，是呼吸道感染的主要原因，并且可导致严重的侵入性肺炎球菌疾病(IPD)。迄今为止已经描述了90多种不同的肺炎球菌血清型。这些通过它们对于每种血清型所特有的荚膜多糖(CPS)的结构被分类。因此，针对CPS产生的免疫应答在不同血清型之间变化。这被用于在兔子中产生针对每种血清型的抗原的特异性抗体。由于不同血清型的CPS的结构相似性，与培养这些特异性抗体所针对的血清型相比，经常观察到这些特异性抗体和其它血清型之间的交叉反应性。由于其免疫学特性，CPS被用作肺炎链球菌疫苗的主要成分。

在1945年描述了含有四种不同血清型的CPS的第一种高效疫苗。然后花费了三十多年，直到引入了包括14种血清型的疫苗，紧接着是23价疫苗。然而，这些多糖疫苗有几个缺点。它们不能引起长期的保护，并且对于最容易感染的人群(即两岁以下的儿童)以及免疫缺陷患者和老年患者不起作用。这些缺点由碳水化合物的免疫学造成，并且通过引入碳水化合物-蛋白质缀合物疫苗而被克服。第一种肺炎球菌缀合物疫苗是七价(PCV-7)疫苗和十价(PCV-10)疫苗。后来 PCV-7被最新的疫苗(PCV-13)取代，PCV-13含有13种不同血清型的CPS-糖缀合物。

肺炎链球菌血清型5(SP5)是全球第五大儿童流行性IPD致病血清型，在全球最贫穷国家儿童中是第二大流行性血清型，理应得到全球疫苗免疫联盟 (GAVI)的支持。此外，SP5最近被确定为在以色列军队新兵中出现的严重肺炎流行病和在加拿大贫穷的城市人口中出现的侵入性感染社区爆发的病原体。最近的一项研究显示，SP5是西班牙儿童和成年人中IPD爆发的常见原因。尽管大多数SP5血清型仍易受抗生素的影响，但耐抗生素的SP5细菌的出现和传染却令人担忧。

SP5CPS是最新PCV-10缀合物疫苗和PCV-13缀合物疫苗的成分。SP5CPS 由具有序列[→4)-β-D-Glcp-(1→4)-[α-L-PnepNAc-(1→2)-β-D-GlcpA-(1→3)]-α-L- FucpNAc-(1→3)-β-D-Sugp(1→]的支链戊糖重复单元组成，其中Sugp是4-酮 -D-FucNAc(合成名称：2-乙酰氨基-2,5-二脱氧-D-木-己-4-酮糖(2-乙酰胺基-2,5- 二脱氧-D-木-己-4-糖))并且PneNAc是N-乙酰基-L-肺炎糖胺(pneumosamine) (参见图1)。

法国专利申请FR2850106A1(AVENTIS PASTEUR，2004年7月23日)描述了将通过SP5CPS的还原胺化得到的缀合物用作针对SP5的疫苗。缀合物的糖质部分是从平均含有30至35个重复单元的细菌来源分离的SP5CPS的片段，其中至少85％的重复单元与以下重复单元之一对应： [→4)-β-D-Glcp-(1→4)-[α-L-PnepNAc-(1→2)-β-D-GlcpA-(1→3)]-α-L-FucpNAc-(1→ 3)-β-D-Sugp(1→]；[→4)-β-D-Glcp-(1→4)-[α-L-PnepNAc-(1→2)-β-D-GlcpA-(1→3)] -α-L-FucpNAc-(1→3)-β-D-FucpNAc(1→]；和[→4)-β-D-Glcp-(1→4)-[α-L- PnepNAc-(1→2)-β-D-GlcpA-(1→3)]-α-L-FucpNAc-(1→3)-β-D-QuipNAc(1→]。在尺寸和结构方面，SP5CPS片段的异源性对于明确定义的疫苗的有效制造是不利的。

本发明的目的是提供与肺炎链球菌血清型5荚膜多糖的重复单元有关的通式为(I)的明确定义的合成糖。所述明确定义的合成糖适于缀合到免疫原性载体以提供可用于预防和/或治疗与肺炎链球菌相关的疾病，更具体地针对肺炎链球菌血清型5相关的疾病的缀合物及其药物组合物。此外，通式为(I)的合成糖在用于检测针对肺炎链球菌细菌的抗体的免疫学测定中可用作标志物。

本发明的目的通过独立权利要求的教导来解决。本发明的其它有利的特征、方面和细节从本申请的从属权利要求、说明书、附图和实施例中显而易见。

发明内容

定义

本文使用的术语“连接子”包括能够可选地通过结合到至少一个互连分子将糖的还原端单糖与免疫原性载体或固体载体连接的分子片段。因此，连接子本身或连同互连分子一起的功能是在还原端单糖和免疫原性载体或固体载体之间建立、保持和/或桥接特定的距离。更具体地，连接子的一个末端与还原端单糖的端基异构中心处的环外氧原子相连，另一个末端通过氮原子与互连分子连接，或直接与免疫原性载体或固体载体连接。

如本文所用，术语“互连分子”是指包含官能团X和官能团Y的双官能团分子，其中官能团X能够与连接子L上的末端氨基反应并且官能团Y能够与存在于免疫原性载体上或固体载体上的官能团反应。图2显示了可商购的互连分子的实例，但是不将根据本发明可以使用的互连分子限制到本文所示的实例。

如本文所用的术语“佐剂”是指免疫学佐剂，即用于疫苗组合物中的物质，其通过增强对疫苗中所含的给定抗原的免疫应答来改性或增强所述疫苗的效果而不与疫苗抗原相关。对于本领域技术人员而言，通常认识的佐剂实例包括：

-含有矿物质的组合物，包括钙盐和铝盐(或其混合物)。钙盐包括磷酸钙。铝盐包括氢氧化物、磷酸盐、硫酸盐等，其盐呈任何合适的形式(例如凝胶、结晶、无定形等)。对这些盐的吸附是优选的。含有矿物质的组合物也可以被配制成金属盐颗粒。也可以使用称为氢氧化铝和磷酸铝的佐剂。本发明可以使用通常用作佐剂的“氢氧化物”佐剂或“磷酸盐”佐剂中的任何一种。被称为“氢氧化铝”的佐剂通常是羟基氧化铝盐，其通常至少部分是结晶的。被称为“磷酸铝”的佐剂通常是羟基磷酸铝，通常还含有少量硫酸盐(即羟基磷酸硫酸铝)。它们可以通过沉淀获得，并且沉淀过程中的反应条件和浓度影响磷酸盐对盐中的羟基的取代度。氢氧化铝和磷酸铝的混合物可用于根据本发明的制剂中；

-皂苷，它们是在宽范围的植物物种的树皮、叶、茎、根甚至花中发现的甾醇糖苷和三萜糖苷的异源基团。已经广泛研究了皂树、莫利纳树的树皮中的皂苷作为佐剂。皂苷也可以从自丽花菝葜(墨西哥菝葜)、锥花丝石竹(新娘面纱(brides veil))和石碱草(皂根)商购获得。皂苷佐剂制剂包括纯化的制剂例如QS21，以及脂质制剂例如ISCOM。已经使用HPLC和RP-HPLC纯化皂苷组合物。已经鉴定了使用这些技术的具体纯化级分，包括QS7、QS17、QS18、QS21、QH-A、 QH-B和QH-C。皂苷制剂还可以包含甾醇，例如胆固醇。皂苷和胆固醇的组合可用于形成称为免疫刺激复合物(ISCOM)的独特颗粒。ISCOM通常包括磷脂，例如磷脂酰乙醇胺或磷脂酰胆碱。任何已知的皂苷都可以用于ISCOM中。优选地，ISCOM包括QuilA、QHA和QHC中的一种或多种；

-由可生物降解且无毒的材料形成的微粒(即直径为100nm至150pm，更优选直径为200nm至30pm，或直径为500nm至10pm)。这种无毒且可生物降解的材料包括但不限于聚(α-羟基酸)、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚酐、聚己内酯；

-CD1d配体，例如α-糖基神经酰胺、含植物鞘氨醇的α-糖基神经酰胺、OCH、KRN7000[(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-半乳吡喃糖基)-2-(N-二十六烷基酰氨基) -1,3,4-十八烷三醇]、CRONY-101、3"-磺基-半乳糖基-神经酰胺；

-免疫刺激性寡核苷酸，例如含有一种(含有由与鸟苷残基键合的磷酸酯连接的非甲基化胞嘧啶残基的二核苷酸序列)的CpG基序、含有一种(含有与肌苷连接的胞嘧啶的二核苷酸序列)的CpI基序、或双链RNA、或含有回文序列的寡核苷酸、或含有聚(dG)序列的寡核苷酸。免疫刺激性寡核苷酸可以包括核苷酸改性物/类似物如硫代磷酸酯改性物，并且可以是双链的或(除了RNA)单链的；

-含有与含磷酸酯的无环骨架连接的脂质的化合物，例如TLR4拮抗剂 E5564；

-油乳剂(例如弗氏佐剂)。

理论上，能够有利于或增强免疫事件级联中的特定情况，最终导致更显著的免疫应答的每个分子或物质可以被定义为佐剂。

原则上，通过在疫苗制剂中使用佐剂，人们可以

-引导和优化对疫苗适合或需要的免疫应答；

-允许疫苗的粘膜递送，即使得疫苗与粘膜表面例如口腔上皮细胞或胃上皮细胞或肺上皮细胞以及相关淋巴组织接触的施用；

-促进细胞介导的免疫应答；

-增强较弱免疫原例如高度纯化抗原或重组抗原的免疫原性；

-减少提供保护性免疫所需的抗原量或免疫频率；以及

-提高疫苗对免疫应答降低或减弱的个体，例如新生儿、老年人和免疫功能低下的疫苗接种者的功效。

尽管对佐剂的作用模式知之甚少，但目前认为它们通过以下机制之一增强免疫应答：

-增加抗原的生物学半衰期或免疫学半衰期；

-例如通过使抗原在通过抗原呈递细胞(APC)摄入抗原-佐剂复合物后穿过核内体膜进入细胞溶质，来改善到APC的抗原递送以及通过APC的抗原加工和抗原呈递；

-模拟来自应激细胞或受损细胞的危险诱导信号，其用于启动免疫应答；

-诱导免疫调节细胞因子的产生；

-将免疫应答偏向于免疫***的特定子集；以及

-阻断抗原激发的快速分散。

本领域技术人员已知糖为TI-2(T细胞非依赖性-2)抗原和不良免疫原。因此，为了生产基于糖的疫苗，将所述糖与免疫原性载体缀合以提供与糖相比呈现提高的免疫原性的缀合物。在此上下文中，术语“免疫原性载体”被定义为与糖缀合以形成与糖本身相比呈现增强的免疫力的结合物的结构。因此，糖与免疫原性载体的缀合具有刺激针对所述糖的免疫应答的效果，而不会诱导针对所述免疫原性载体的免疫应答。

本发明涉及通式为(I)的糖：

其中，

R¹选自R²、R⁴、

R²表示

R³选自-H、-CH₃、-C₂H₅、-C₃H₇、-C₄H₉和-CF₃；

R⁴表示R⁶或

R⁵表示-H或

R⁶表示-O-L-NH₂；

R⁷和R⁸彼此独立地选自-H和-OH，并且不能同时为-H；

R⁷和R⁸可以一起形成a＝O残基；或者换言之，R⁷和R⁸可以与它们所连接的碳原子一起形成羧基C＝O；

R²³选自-H、-C(O)CH₃、-C(O)CF₃和-C(O)CCl₃；

-L-是连接子；

及其药学上可接受的盐。

-L-被定义为连接子并且是片段-O-L-NH₂的一部分。因此，连接子-L-与氧原子以及NH₂-基团的氮原子结合。优选地，连接子的至少两个碳原子在氧原子和 NH₂-基团之间，如-O-C-C-NH₂。连接子-L-可以是脂族链，其中脂族链可以可选地包括***其中的芳族链，或者多个从0至10摆动的杂原子。

连接子L优选含有2至40个碳原子(包括可选侧链的碳原子)，更优选2至30个，更优选2至20个，更优选2至14个，更优选2至12个，但更优选2至 10个碳原子。

氧(即-O-L-NH₂的氧)和NH₂-基团之间的最短原子链优选由2至14个原子，更优选2至12个原子，更优选2至10个原子，更优选2到8个原子组成。在最短链(其是端基异构中心处的氧与NH₂-基团之间的最短可能的连接)由2至6 个原子组成的情况下，这些优选为碳原子。在最短链由4至8个原子组成的情况下，链可以含有1个或2个选自O、N和S的杂原子。在最短链由9至14个原子组成的情况下，链可以包含1、2、3或4个选自O、N和S的杂原子。优选地，最短链含有0、1或2个硫原子和/或0、1或2个氮原子和/或0、1、2或3个氧原子。

还优选地，连接子-L-或最短链被完全或部分氟化。连接子-L-可以含有3元或4元或5元或6元饱和碳环或5元部分不饱和(而不是芳族)碳环或4元或5 元或6元饱和氧杂环或4元或5元或6元饱和氮杂环或6元芳族碳环。

连接子-L-还可以含有酰胺(-NH-CO-，-CO-NH-)和/或脲(-NH-CO-NH-) 残基，优选只含有一个酰胺或脲残基。连接子还可以含有取代基，优选一个取代基例如R¹⁰或两个取代基例如R¹⁰和R¹⁴，其具有如本文所定义的含义，并且优选选自：–F、–Cl、–CH₃、–C₂H₅、–C₃H₇、–C₅H₉、–C₆H₁₃、–OCH₃、–OC₂H₅、–CH₂F、–CHF₂、–CF₃、–C(O)–NH₂、–SCH₃、–SC₂H₅、–NHC(O)CH₃、–N(CH₃)₂和–N(C₂H₅)₂；

在连接子被氟化的情况下，多于两个取代基–F是优选的。

优选地，连接子–L–选自：–CH₂–、–(CH₂)₂–、–(CH₂)₃–、–(CH₂)₄–、–(CH₂)₅–、–(CH₂)₆–、–(CH₂)₇–、–(CH₂)₈–、–(CH₂)₉–、–(CH₂)₁₀–、–CF₂–、–(CF₂)₂–、–(CF₂)₃–、–(CF₂)₄–、–(CF₂)₅–、–(CF₂)₆–、–(CF₂)₇–、–(CF₂)₈–、–(CF₂)₉–、–(CF₂)₁₀–、–(CH₂)₂–O–(CH₂)₂–、–CH₂–O–(CH₂)₃–、–(CH₂)₃–O–CH₂–、–CH₂–O–(CH₂)₂–、–(CH₂)₂–O–CH₂–、–(CH₂)₃–O–(CH₂)₂–、–(CH₂)₂–O–(CH₂)₃–、–(CH₂)₄–O–CH₂–、–CH₂–O–(CH₂)₄–、–L^a–、–L^a–L^e–、–L^a–L^b–L^e–、–L^a–L^b–L^d–L^c–L^e–、–L^a–L^d–L^e–；

其中，

–L^a–选自：–(CH₂)_m–、–(CF₂)_m–、–(CH₂–CH₂–O)_m–C₂H₄–、–(CH₂–CH₂–O)_m–CH₂–、–(CR¹⁰R¹¹)_m–、

–L^b–和–L^c–彼此独立地选自：–O–、–S–、–NH–C(O)–NH–、–NH–C(S)–NH–、–NH–C(O)–、–C(O)–NH–、–NH–C(O)–O–、–NR⁹–、–NR¹⁸–、–SO₂–、

–L^d–表示–(CH₂)_n–、–(CF₂)_n–、–(CR¹²R¹³)_n–、–(CH₂–CH₂–O)_n–C₂H₄–、–(CH₂–CH₂–O)_n–CH₂–、

–L^e–选自：–(CH₂)_p1–、–(CF₂)_p1–、–C₂H₄–(O–CH₂–CH₂)_p1–、–CH₂–(O–CH₂–CH₂)_p1–、–(CH₂)_p1–O–(CH₂)_p2–、–(CH₂)_p1–S–(CH₂)_p2–、–(CR¹⁴R¹⁵)_p1–、–(CR¹⁴R¹⁵)_p1–O–(CR²¹R²²)_p2–、–(CR¹⁴R¹⁵)_p1–S–(CR²¹R²²)_p2–、

R⁹和R¹⁸彼此独立地选自：–CH₃、–C₂H₅、–C₃H₇和–C(O)CH₃；

R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁹、R²⁰、R²¹和R²²彼此独立地选自：–H、–F、–Cl、–CH₃、–C₂H₅、–C₃H₇、–C₅H₉、–C₆H₁₃、–OCH₃、–OC₂H₅、–CH₂F、–CHF₂、–CF₃、–C(O)–NH₂、–SCH₃、–SC₂H₅、–NHC(O)CH₃、–N(CH₃)₂和–N(C₂H₅)₂；

m、n、p1和p2彼此独立地为选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数。

本发明的糖具有碱性取代基和/或酸性取代基，并且它们可以与有机酸或无机酸或碱形成盐。

用于这种酸加成盐形成的合适的酸的实例是盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、草酸、丙二酸、水杨酸、对氨基水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、磺酸、膦酸、高氯酸、硝酸、甲酸、丙酸、葡糖酸、乳酸、酒石酸、羟基马来酸、丙酮酸、苯乙酸、苯甲酸、对氨基苯甲酸、对羟基苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、亚硝酸、羟基乙磺酸、亚乙基磺酸、对甲苯磺酸、萘基磺酸、磺胺酸、樟脑磺酸、中国酸、扁桃酸、邻甲基扁桃酸、氢-苯磺酸酸、苦味酸、己二酸、二对甲苯基酒石酸(d-o-tolyltartaric acid)、丙醇二酸、(邻、间、对)甲苯甲酸、萘胺磺酸、以及本领域技术人员熟知的其它矿物酸或羧酸。以传统方式通过使游离碱形式与足够量的所需的酸接触来制备盐。

合适的无机碱或有机碱的实例是例如NaOH、KOH、NH₄OH、四烷基氢氧化铵、赖氨酸或精氨酸等。可以使用本领域公知的方法以传统方式制备盐，例如通过用从上述组中选出的碱溶液处理通式为(I)的化合物的溶液。

此外，本发明的化合物还可能同时具有碱性基团和酸性基团。此外，还可能出现的是，这些碱性基团和酸性基团看上去彼此非常接近，使得分子内质子从酸性基团转移到碱性基团。因此，在本发明的优选实施方式中，式(I)的化合物可以是两性离子的，至少具有例如一个-O^-和一个-NH₃ ⁺基团。

碳水化合物化学领域的技术人员清楚的是，通式为(I)的糖不包含-O-O-键和/或通过它们的端基异构碳或C-1碳彼此连接或接合的糖片段。

优选是通式为(IV)、(V)、(VI)和(VII)的糖：

其中R²、R³、R⁴和R²³具有如上定义的含义，并且甚至更优选的是通式为(VI)和(VII)的糖。

本发明的另一优选的实施方式针对通式为(I)的糖，其中R¹表示：

根据本发明的特别优选的糖是其中残基R⁴表示R⁶的糖。因此，其中R⁴为 R⁶的通式为(I)、(IV)、(V)、(VI)和(VII)的糖是特别优选的。

本发明的更加优选的实施方式针对通式为(III)的糖。

其中残基R³、R⁵、R⁶和R²³具有在本文中所定义的含义。

特别优选的是根据本发明的其中R³表示–H的糖。因此，其中R³为–H的通式为(I)、(III)、(VI)和(VII)的糖是特别优选的。

优选地，残基R²³表示–C(O)CH₃。因此，其中残基R³表示–H并且R²³表示–C(O)CH₃的通式为(I)的糖是特别优选的。

根据本发明的优选的糖是通式为(I)、(III)、(IV)、(V)或(VII)的糖，其中连接子-L-选自：–L^a–、–L^a–L^e–、–L^a–L^b–L^e–、–L^a–L^b–L^d–L^c–L^e–、–L^a–L^d–L^e–，并且其中

–L^a–选自：–(CH₂)_m–、–(CF₂)_m–、–(CH₂–CH₂–O)_m–C₂H₄–、–(CH₂–CH₂–O)_m–CH₂–、–(CR¹⁰R¹¹)_m–；

–L^b–和–L^c–彼此独立地选自：–O–、–S–、–NR⁹–、–NH–C(O)–NH–、–NH–C(O)–、–C(O)–NH–、–NH–C(O)–O–、–NR¹⁸–、–SO₂–、

–L^e–选自：–(CH₂)_p1–、–(CF₂)_p1–、–C₂H₄–(O–CH₂–CH₂)_p1–、–CH₂–(O–CH₂–CH₂)_p1–、–(CH₂)_p1–O–(CH₂)_p2–、–(CH₂)_p1–S–(CH₂)_p2–、–(CR¹⁴R¹⁵)_p1–、–(CR¹⁴R¹⁵)_p1–O–(CR²¹R²²)_p2–、–(CR¹⁴R¹⁵)_p1–S–(CR²¹R²²)_p2–,

R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁹、R²⁰、R²¹和R²²彼此独立地选自：–H、–F、–Cl、–CH₃、–C₂H₅、–C₃H₇、–C₅H₉、–C₆H₁₃、–OCH₃、–OC₂H₅、–CH₂F、–CHF₂、–CF₃、–C(O)–NH₂、–SCH₃、–SC₂H₅、–NHC(O)CH₃、–N(CH₃)₂、和–N(C₂H₅)₂；

m、n、p1和p2彼此独立地为选自1、2、3、4、5和6的整数。

在更加优选的实施方式中，连接子–L–选自：–L^a–、–L^a–L^b–L^e–和–L^a–L^d–L^e–；

并且

–L^a–选自：–(CH₂)_m–、–(CF₂)_m–、–(CH₂–CH₂–O)_m–C₂H₄–、–(CH₂–CH₂–O)_m–CH₂–；

–L^b–选自：–O–、–S–、–NH–C(O)–NH–、–NH–C(O)–和–C(O)–NH–；

–L^d–选自：–(CH₂)_n–和–(CF₂)_n–；

–L^e–选自：–(CH₂)_p1–、–(CF₂)_p1–、–C₂H₄–(O–CH₂–CH₂)_p1–、–CH₂–(O–CH₂–CH₂)_p1–、–(CH₂)_p1–O–(CH₂)_p2–和–(CH₂)_p1–S–(CH₂)_p2–，

并且，

m、n、p1和p2彼此独立地是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数。因此，其中连接子–L–具有上述含义的通式为(I)、(III)、(IV)、(V)或(VII) 的糖是特别优选的。

在最优选的实施方式中，连接子–L–表示–(CH₂)_m–、其中m具有在本文中所定义的含义，并且最优选地，m是选自1、2、3、4、5和6的整数，或连接子–L–表示–(CH₂–CH₂–O)_m–C₂H₄–或–(CH₂–CH₂–O)_m–CH₂–，并且m是选自1、2和3的整数。

优选地，根据本发明的糖选自：

5-氨基-戊基2-N-乙酰基-α-l-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-N-乙酰基-α-l-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-2-N-乙酰基-β- D-岩藻吡喃糖胺糖苷(fucosaminopyranoside)(33*)

5-氨基-戊基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-[β-D-葡糖吡喃糖基 -(1→4)]-2-乙酰胺基-2,5-二脱氧-β-D-木-己-4-糖苷(88*)

5-氨基-戊基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-[β-D-葡糖吡喃糖基 -(1→4)]-2-N-乙酰基-β-D-吡喃岩藻糖糖胺糖苷(73*)

5-氨基-戊基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-[β-D-葡糖吡喃糖基 -(1→4)]-2-N-乙酰基-β-D-异鼠李吡喃糖胺糖苷(85*)

通式为(I)的糖能够在人类和/或动物宿主中诱导针对肺炎链球菌血清型5 细菌的保护性免疫应答。在通式为(I)的糖中存在α-L-肺炎糖胺残基对实现针对天然肺炎链球菌5型荚膜多糖的交叉反应性是必不可少的。

本发明的另一方面涉及通式为(IX)的中间体，

其中，

R²⁴选自

–F、–Cl、–Br、–I、–SR²⁸、–SeR²⁹、–OPO₃R³⁰ ₂；

R²⁵选自：–N₃、–NBn₂、–NBnCbz；

R²⁶和R²⁷彼此独立地选自：–H、–Bn、

–Si(CH₃)₃、–Si(CH₂CH₃)₃、–C(O)CH₃、–C(O)Ph、

或R²⁶和R²⁷可共同形成

R²⁸选自：–CH₃、–CH₂CH₃、–Ph、

R²⁹表示–Ph；

R³⁰表示–CH₂CH₂CH₂CH₃；和式36、41、63、68*、70和70a的中间体

其中L和R²³、以及R⁷′和R⁸′被如本文所公开的定义，优选L是–C₅H₁₀–和/或R²³是CH₃CO–。

糖缀合物

本发明的另一方面涉及包含根据本发明的糖的缀合物。所述缀合物被证明有效作为对与肺炎链球菌血清型5细菌相关的疾病免疫的疫苗。

本领域技术人员已知糖通常为TI-2(T细胞非依赖性-2)抗原和不良免疫原。 TI-2抗原是通过表面暴露的免疫球蛋白受体的交联仅由成熟的B细胞识别的抗原。没有T细胞的帮助，不产生免疫记忆，并且既不发生从IgM到其它IgG亚类的同种型转换，也不发生B细胞亲和力成熟。而且，由于与人糖脂和糖蛋白的结构同源性，糖对于人类是已知的弱免疫原。由于它们的免疫原性差，糖表现出由B细胞产生抗体以及形成记忆细胞的能力弱，这是生产有效疫苗所必需的特征。

因此，为了生产有效的基于糖的疫苗，将通式为(I)、(III)、(IV)、(V)、 (VI)和(VII)的糖与免疫原性载体缀合以提供缀合物，其与糖相比呈现增强的免疫原性。令人惊奇的是，发现用包含与免疫原性载体共价连接的通式为(I) 的糖的缀合物进行的免疫使得产生对通式为(I)的糖的碳水化合物部分特异性的高滴度抗体。所述抗体与天然SP-5CPS交叉反应并呈现调理吞噬和杀菌活性，从而赋予针对肺炎链球菌血清型5细菌的保护。

在此上下文中，术语“免疫原性载体”被定义为与糖缀合，以形成与糖本身相比呈现增强的免疫力的缀合物的结构。因此，通式为(I)、(III)、(IV)、(V)、 (VI)和(VII)的糖与免疫原性载体的缀合具有刺激针对通式为(I)、(III)、(IV)、 (V)、(VI)和(VII)的糖的免疫应答的作用，而不会诱导针对所述免疫原性载体的免疫应答。

优选的免疫原性载体是具有免疫调节性质的载体蛋白或鞘糖脂。对于本领域技术人员而言，载体蛋白选自由白喉类毒素、突变白喉类毒素、改性白喉类毒素、突变且改性的白喉类毒素、破伤风类毒素、改性破伤风类毒素、突变破伤风类毒素、外膜蛋白(OMP)、牛血清白蛋白(BSA)、匙孔血蓝蛋白(KLH)或霍乱类毒素(CT)所组成的组。本文使用的术语“类毒素”是指通过化学(***)或热处理使其毒性已经失活或得以抑制但其它性质(通常为免疫原性)得以维持的细菌毒素(通常是外毒素)。如本文所用的突变型类毒素是重组细菌毒素，其已通过修改野生型氨基酸序列被修改为较低毒性或甚至无毒的。这种突变可以是对一个或多个氨基酸的取代。这种突变类毒素在其表面上存在可与互连分子的官能团Y反应以提供改性类毒素的官能度。所述官能度是本领域技术人员已知的，并且包括但不限于在还原剂存在下可以与活化酯、异氰酸酯基或醛反应的赖氨酸残基的伯氨基官能度，可以被碳化二亚胺活化的谷氨酸酯或天冬氨酸酯残基的羧酸酯官能度，或者半胱氨酸残基的硫醇官能度。

活化酯包括但不限于N-(γ-马来酰亚胺丁酰氧基)磺基琥珀酰亚胺酯(磺基 -GMBS)、琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯(磺基-SIAB)、琥珀酰亚胺基-3-(溴乙酰氨基)丙酸酯(SBAP)、戊二酸二琥珀酰亚胺酯(DSG)、己二酸二琥珀酰亚胺酯(DSA)、2-吡啶基二硫醇基-四氧杂十四烷-N-羟基琥珀酰亚胺 (PEG-4-SPDP)(参见图2)。

载体蛋白上的半胱氨酸残基可以转化成相应的脱氢丙氨酸，其可以进一步与合适的互连分子反应以提供在其表面上具有互连分子的官能团X的改性载体蛋白。

特别优选地，通式为(I)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VII)的糖，优选糖10、11、21、24、25、26、32、42、57、61、65、72、27*、33*、36*、73*、 85*和88*与无毒突变白喉毒素CRM₁₉₇缀合，所述无毒突变白喉毒素CRM₁₉₇作为功能性呈递作为官能度的赖氨酸残基的伯胺官能度。

CRM₁₉₇如野生型白喉毒素是535个氨基酸(58kD)的单一多肽链，其由通过具有谷氨酸的单个氨基酸取代为甘氨酸的二硫桥键连接的两个子单元构成。它被用作用于诸如肺炎球菌疫苗(Prevnar)的疾病所批准的一些缀合疫苗中的载体蛋白。

因此，在本发明的优选实施方式中，载体蛋白在其表面上存在赖氨酸残基的伯氨基官能度，其能够与互连分子的官能团Y反应以提供在其表面上具有互连分子的所述官能团X的改性载体蛋白，所述改性载体蛋白能够与通式为(I)的化合物的连接子的末端氨基反应。

所述互连分子的官能团X选自包含或由马来酰亚胺；-碘乙酰基；-溴乙酰基；和N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS)、醛、亚氨酸酯、羧酸、烷基磺酸酯、磺酰氯、环氧化物、酸酐、碳酸酯所组成的组(参见图3)。

优选地，通式为(I)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VII)的糖与被马来酰亚胺改性的无毒突变白喉毒素CRM₁₉₇缀合。在另一个优选的实施方式中，通式为(I)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VII)的糖与被溴乙酰胺改性的无毒突变白喉毒素CRM₁₉₇缀合。在最优选的实施方式中，通式为I的糖与被己二酸N-羟基琥珀酰亚胺酯改性的无毒突变白喉毒素CRM₁₉₇缀合。

更优选地，CRM₁₉₇糖缀合物选自由以下组成的组：

其中x、y和z独立地为1至20的整数；优选1至15的整数；更优选5至 14的整数；更优选7至13的整数；更优选8至12的整数。

最优选的是缀合物58a*、58b*、58c*和87*

58*a(当x＝7时)；58*b(当x＝8时)；58*c(当x＝11.2时)。

在另一个实施方式中，所述免疫原性载体优选为具有免疫调节性质的鞘糖脂，更优选为(2S，3S，4R)-1-(α-D-半乳吡喃糖基)-2-二十六烷酰基氨基十八烷-3，4-二醇。如本文所用，术语具有免疫调节性质的鞘糖脂是指如上所定义的能够刺激免疫***对靶抗原的应答但其本身不赋予免疫性的合适鞘糖脂。

本文所用的鞘糖脂是含有与鞘脂α-连接的碳水化合物部分的化合物。优选地，碳水化合物部分是己吡喃糖，最优选是α-D-半乳吡喃糖。对于本领域技术人员而言，鞘脂是一类含有通过酰胺键与脂肪酸连接的C18氨基醇的脂质。C18氨基醇优选被羟基单取代、二取代或多取代。特别优选地，C18氨基醇是植物鞘氨醇。脂肪酸优选是具有碳数范围为16至28、更优选为18至26的饱和烷基链的一元羧酸。具有免疫调节性质的鞘糖脂包括但不限于(2S，3S，4R)-1-(α-D- 半乳吡喃糖基)-2-二十六烷酰基氨基十八烷-3，4-二醇，其可以刺激自然杀伤T (NKT)细胞的自然杀伤(NK)活性和细胞因子产生，并在体内显示有效的抗肿瘤活性(Proc.Natl Acad.Sci.USA,1998,95,5690)。

通式为(I)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VII)的糖与具有免疫调节性质的鞘糖脂的缀合物具有热稳定的优点。为了适于缀合，在具有免疫调节性质的鞘糖脂上引入了官能度。所述官能度易于与通式为(I)、(III)、(IV)、(V)、(VI) 和(VII)的糖的连接子的末端氨基直接反应以提供通式为(I)、(III)、(IV)、(V)、 (VI)和(VII)的糖的缀合物，或与互连分子的官能团Y连接以提供具有免疫调节性质的改性鞘糖脂。

优选地，所述官能度在具有免疫调节性质的鞘糖脂的碳水化合物部分的C6 处被引入。因此，具有免疫调节性质的鞘糖脂被易于与糖的末端氨基反应或与互连分子的官能团Y反应的官能度官能化。易于与氨基反应的官能度包括但不限于活性酯、异氰酸酯基、醛、环氧化物、亚氨酸酯、羧酸、烷基磺酸酯和磺酰氯。易于与互连分子的官能团Y反应从而提供具有呈递互连分子的官能团X的免疫调节性质的改性鞘糖脂的官能度包括但不限于胺、醇、硫醇、活化酯、异氰酸酯基、醛、环氧化物、乙烯基、亚氨酸酯、羧酸、烷基磺酸酯、磺酰氯、乙烯基、炔基和叠氮基。

优选地，在具有免疫调节性质的鞘糖脂的碳水化合物部分的C6处引入的官能度选自包括或包含胺、硫醇、醇、羧酸、乙烯基、马来酰亚胺、α-碘乙酰基、α-溴乙酰、N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS)、2-吡啶基二硫醇的组。

所述互连分子的官能团X选自由马来酰亚胺、α-碘乙酰基、α-溴乙酰基、N- 羟基琥珀酰亚胺酯(NHS)、醛、羧酸、环氧化物(epoxyde)烷基磺酸酯、磺酰氯、酸酐、碳酸酯所组成的组。

如本文所用，术语“互连分子”是指含有官能团X和官能团Y的双官能分子，其中官能团X能够与连接子-L-上的末端氨基反应，官能团Y能够与存在于免疫原性载体上或固体载体上的官能度反应。

发现包含本发明的糖的缀合物，优选缀合物(X)、(XI)和(XII)，更优选 58*a、58*b、58*c、87*适于在人类和/或动物宿主中提高保护性免疫应答，因此可用于预防和/或治疗与其荚膜多糖中含有N-乙酰基-L-肺炎糖胺的细菌相关的疾病。

优选地，在荚膜多糖中含有N-乙酰基-L-肺炎糖胺的细菌是肺炎链球菌血清型5。

在优选的实施方式中，包含与免疫原性载体缀合的通式为(I)、(III)、(IV)、 (V)、(VI)或(VII)的糖的缀合物优选缀合物(X)，XI)和(XII)，更优选 58*a、58*b、58*c、87*可用于预防和/或治疗与细菌相关的疾病，特别是与其荚膜多糖中含有N-乙酰基-L-肺炎糖胺的细菌相关的疾病，优选与肺炎链球菌血清型5相关的疾病，其中所述疾病包括肺炎、脑膜炎、中耳炎、菌血症以及慢性支气管炎的急性加重、鼻窦炎、关节炎和结膜炎。

本发明的一个方面涉及药物组合物，特别是疫苗，包括：包含与免疫原性载体缀合的通式为(I)的糖的缀合物，和/或通式为(I)的一种糖，以及至少一种药学上可接受的冷冻保护剂、冻干保护剂、赋形剂和/或稀释剂。所述药物组合物可用于在人类和/或动物宿主中提高保护性免疫应答。

本发明的一个方面涉及药物组合物，特别是疫苗，其进一步包含其它肺炎链球菌血清型，优选血清型2、4、8、9A，9V和14的抗原中的至少一种。

所述疫苗可以制备成悬液形式或可以冻干。悬液形式可以被冷冻储存。在冻干形式中，优选加入一种或多种稳定剂。可选地，也可以添加一种或多种佐剂。在根据本发明的疫苗中可以包含任何传统稳定剂和佐剂。

如本文所用的术语“佐剂”是指免疫佐剂，即用于疫苗组合物中的物质，其通过增强对疫苗中所含的给定抗原的免疫应答来改性或增强所述疫苗的作用而不与其抗原相关。对于本领域技术人员而言，传统认可的免疫佐剂实例包括但不限于油乳剂(例如弗氏佐剂)、皂苷、铝盐或钙盐(例如明矾)、非离子嵌段聚合物表面活性剂等。

接种疫苗可以在任何年龄进行。疫苗多通过皮下、喷雾、注射、口服、眼内、气管内或鼻内施用。

本发明的另一方面涉及含有疫苗作为活性成分以及至少一种药学上可接受的载体、赋形剂、溶剂和/或稀释剂的药物制剂和药物组合物。

进一步优选地，药物组合物被配制成冻干物或液体缓冲溶液的形式。

疫苗也可以可选地使用基本上无毒的药学上可接受的载体、赋形剂、佐剂或稀释剂以其药物活性盐的形式被施用。本发明的疫苗以已知方式用传统的固体或液体载体或稀释剂和传统的药学上制备的佐剂以合适的剂量水平制备。优选的制剂是适于口服施用的可施用形式。这些可施用形式例如包括丸剂、片剂、薄膜包衣片剂、包衣片剂、胶囊、粉剂和沉淀剂(deposit)。除了口服施用形式以外的形式也是可行的。本发明的疫苗可以通过任何适当的手段施用，包括但不限于吸入；注射(静脉内、腹膜内、肌内、皮下)；通过上皮内层或皮肤粘膜内层(口腔粘膜、直肠和***上皮内层、鼻咽粘膜、肠粘膜)吸收；口服、直肠、经皮、局部、皮内、胃内、皮内、***内、输精管内、鼻内、口内、经皮肤、舌下，或药学领域中可用的任何其它手段。

含有与免疫原性载体缀合的包含通式为(I)的糖的缀合物、通式为(I)的糖或其药学上可接受的盐作为活性成分的本发明的疫苗通常以与合适的载体物质的混合物并符合传统的药学实践被施用，所述载体物质针对所要施用形式例如口服片剂、胶囊剂(固体填充型、半固体填充型或液体填充型)、组合粉剂、口服凝胶剂、酏剂、可分散颗粒剂、糖浆剂和混悬剂等。例如，对于片剂或胶囊剂形式的口服施用，活性成分可以与任何口服无毒的药学上可接受的惰性载体例如乳糖、淀粉、蔗糖、纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、滑石、甘露醇、乙醇(液体形式)等组合。此外，当期望或需要时，也可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺入混合物中。

合适的粘合剂包括淀粉、明胶，天然糖、玉米甜味剂、天然树胶和合成树胶例如***胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇和蜡。在用于这些剂型中的润滑剂中，可以提及硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括淀粉、甲基纤维素、瓜尔豆胶等。在适当时也可以包括甜味剂和调味剂以及防腐剂。上述的一些术语，即崩解剂、稀释剂、润滑剂、粘合剂等将在下面被更详细地论述。

此外，本发明的疫苗可被配制成缓释形式以提供任何一种或多种组分或活性成分的速率控制释放，以优化治疗效果。用于缓释的合适剂型包括含有不同崩解速率的层的分层片剂或浸渍有活性成分并且以片剂形式成形的缓释聚合物基质或含有这种浸渍或包封的多孔聚合物基质的胶囊。

液体形式制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂。作为实例可以列举用于肠胃外注射的水或水-丙二醇溶液，或用于口服溶液溶液剂、混悬剂和乳剂所添加的甜味剂和遮光剂。液体形式的制剂也可以包括鼻内施用的溶液剂。

适于吸入的气溶胶制剂可以包括溶液剂和粉末形式的固体剂，其可以与药学上可接受的载体例如惰性压缩气体如氮组合。

为了制备栓剂，首先将诸如可可脂等脂肪酸甘油酯混合物的低熔点蜡熔化，并通过搅拌或类似的混合将活性成分均匀分散于其中。然后将熔化的均匀混合物倒入合适尺寸的模具中，使其冷却并从而固化。

还包括固体形式制剂，其在即将使用前旨在转化成液体形式制剂以用于口服施用或肠胃外施用。这种液体形式包括溶液剂、混悬剂和乳剂。

本发明的疫苗也可以被经皮递送。经皮施用组合物可以采用膏剂、洗剂、气雾剂和/或乳剂的形式，并且可以包含在本领域传统用于该目的的基质或储库型的透皮贴剂中。

术语“胶囊”是指由甲基纤维素、聚乙烯醇或变性明胶或淀粉制成的用于保持或容纳包含活性成分的组合物的特殊容器或封装物。硬壳胶囊通常由凝胶强度相对高的骨骼和猪皮明胶的混合物制成。胶囊本身可以含有少量染料、避光剂、增塑剂和防腐剂。

片剂是指含有活性成分和合适的稀释剂的压制或模制的固体剂型。片剂可以通过压制本领域技术人员熟知的通过湿法制粒、干法制粒或压制获得的混合物或颗粒来制备。

口服凝胶是指分散或溶解在亲水性半固体基质中的活性成分。

组合粉剂是指含有活性成分和可以悬浮在水或果汁中的合适稀释剂的粉末混合物。

合适的稀释剂是通常构成组合物或剂型主要部分的物质。合适的稀释剂包括糖，例如乳糖，蔗糖，甘露糖醇和山梨糖醇，源自小麦、玉米、大米和马铃薯的淀粉，以及纤维素例如微晶纤维素。组合物中的稀释剂的量的范围可以为总组合物的约5重量％-约95重量％，优选约25重量％-约75重量％，更优选约30重量％-约60重量％，最优选约40重量％-50重量％。

术语“崩解剂”是指添加到组合物中以帮助其破裂(崩解)并释放药物的材料。合适的崩解剂包括淀粉，“冷水可溶的”改性淀粉如羧甲基淀粉钠，天然和合成树胶如刺槐豆胶、梧桐树胶、瓜尔豆胶、黄蓍胶和琼脂，纤维素衍生物例如甲基纤维素和羧甲基纤维素钠，微晶纤维素，和交联微晶纤维素例如交联羧甲基纤维素钠，海藻酸盐如海藻酸和海藻酸钠，粘土如膨润土，以及泡腾混合物。组合物中崩解剂的量的范围可以为组合物的约1重量％-约40重量％，优选为组合物的2 重量％-约30重量％，更优选为组合物的约3重量％-20重量％，并且最优选为约5重量％-约10重量％。

粘合剂具有将粉末粘合或“胶合”在一起并通过形成颗粒使其粘着的物质，因此用作制剂中的“粘着剂”。粘合剂增加稀释剂或膨胀剂中已有的粘着强度。合适的粘合剂包括糖例如蔗糖；源自小麦、玉米、大米和马铃薯的淀粉；天然胶例如***胶、明胶和黄蓍胶；海藻衍生物例如海藻酸、海藻酸钠和海藻酸钙铵；纤维素材料如甲基纤维素和羧甲基纤维素钠以及羟丙基甲基纤维素；聚乙烯吡咯烷酮；和无机物例如硅酸铝镁。组合物中粘合剂的量的范围可以为组合物的约1重量％-30重量％，优选为组合物的约2重量％-约20重量％，更优选为约3重量％ -约10重量％，甚至更优选为约3重量％-约6重量％。

润滑剂是指加入到剂型中以使片剂、颗粒等在被压制后能够通过减少摩擦或磨损从模子或模具中释放的物质。合适的润滑剂包括金属硬脂酸盐例如硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸钾；硬脂酸；高熔点蜡；和水溶性润滑剂例如氯化钠、苯甲酸钠、乙酸钠、油酸钠、聚乙二醇和D,L-亮氨酸。通常在压制之前的最后一步加入润滑剂，因为润滑剂必须存在于颗粒的表面以及它们和压片机的部件之间。组合物中润滑剂的量的范围可以为组合物的约0.05重量％-约15重量％，优选为组合物的0.2重量％-约5重量％，更优选为约0.3重量％-约3重量％，最优选为组合物的约0.3重量％-约1.5重量％。

助流剂是防止结块的物质，改善颗粒的流动特性，使得流动平滑均匀。合适的助流剂包括二氧化硅和滑石。助流剂在组合物中的量的范围可以为组合物的约 0.01重量％至10重量％，优选为总组合物的0.1重量％-约7重量％，更优选为约0.2重量％-5重量％，最优选为约0.5重量％-约2重量％。

着色剂是向组合物或剂型提供着色的赋形剂。这种赋形剂可以包括食品级染料和吸附在合适的吸附剂例如粘土或氧化铝上的食品级染料。着色剂的量可以为组合物的约0.01重量％-10重量％，优选为约0.05重量％-6重量％，更优选为约 0.1重量％-4重量％，最优选为约0.1重量％至约1重量％。

本发明疫苗的配制和施用技术可以在“Remington's Pharmaceutical Sciences"Mack Publishing Co.,Easton PA”中找到。包括本发明的至少一种缀合物和/或其药学上可接受的盐的合适的疫苗组合物可以是包括与合适的液体药物载体中的免疫原性载体缀合的通式为(I)的糖的一种缀合物的溶液，或任何其它制剂例如片剂、丸剂、薄膜包衣片剂、包衣片剂、糖衣丸、胶囊剂、粉剂以及沉淀剂、凝胶剂、糖浆剂、浆剂、混悬剂、乳剂等。

根据本发明的一种缀合物或通式为(I)的一种糖的治疗有效剂量是指使得对疾病至少部分免疫的化合物的量。这种化合物的毒性和治疗功效可以通过在细胞培养或实验动物中的标准药物学、药理学和毒理学过程来确定。毒性作用和治疗效果之间的剂量比是治疗指数。施用的组合物的实际量将取决于所治疗的受试者、受试者的体重、病痛的严重程度、施用方式和处方医师的判断。

本发明的另一个方面涉及通式为(I)的糖在免疫学测定中用作标志物，用于检测针对荚膜多糖中含有N-乙酰基-L-肺炎糖胺的细菌的抗体。

这种测定包括例如微阵列和ELISA(酶联免疫吸附测定)，其用于检测针对荚膜多糖中含有N-乙酰基-L-肺炎糖胺的细菌(例如肺炎链球菌血清型5)的抗体。

本发明的糖可以容易地与固体载体缀合，以提供用于检测针对荚膜多糖中含有N-乙酰基-L-肺炎糖胺的细菌的抗体的免疫学测定。所述固体载体在其表面上存在易于与通式为(I)的糖的氨基或与互连分子的官能团Y反应的官能度，以提供改性固体载体，该改性固体载体在其表面上存在可进一步与通式为(I)的糖的氨基反应的互连分子。在根据本发明的实施方式中，固体载体是微阵列载片，其在表面上存在易于与互连分子的官能团Y反应的官能团以提供改性微阵列载片，其在其表面上存在易于与互连分子的官能团X反应的官能度，以提供改性微阵列载片，该改性微阵列载片在其表面上存在互连分子的官能团X。这种微阵列载片的实例包括但不限于涂覆有

环氧化物的载片或涂覆有

GAPS^TMII的载片。

在优选的实施方式中，固体载体是在其表面上存在易于与通式为(I)的糖的氨基反应的官能度的微阵列载片，并且更优选为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化的酯。这种微阵列载片是例如

NHS载片。

使用如实施例78中所述制备的聚糖微阵列来鉴定在兔子中产生的商业抗 SP5特异性分型血清的结合表位(参见图4)。

如图4A所示，十一个印刷聚糖当中仅三个与特异性抗SP5IgG结合，即四糖33*(位置1)、α-PneNAc-(1→2)-GlcA二糖27*(位置8)和α-PneNAc单糖 36*(位置10)。所有三种被识别的寡糖均含有α-PneNAc残基，表明该基序是所识别的表位的一部分。还观察到，IgG以相当的水平结合四糖33*和二糖27*，表明α-PneNAc-(1→2)-GlcA实际上是由特异性SP5分型血清的IgG识别的表位。图4B示出了微阵列样品，其中分型血清被用天然SP5CPS的溶液预温育。与图 4A的样品相比，抗聚糖IgG水平显著降低。这意味着在预温育期间与天然CPS 结合的抗体不再可用于与合成聚糖结合。因此，天然CPS和合成聚糖的结合表位是相同的。

为了鉴定被人免疫***识别的表位，使用已接受基于肺炎球菌CPS的疫苗的含有多种不同血清型的CPS的合并的人血清进行进一步的筛选(参见图5)。

图5A中示出了经免疫的人对合成聚糖的IgG应答。尽管经免疫的人的血清不是SP5特异性的，但它们含有主要针对四糖33*(位置1)的IgG。还观察到与PneNAc-(1→2)-GlcA二糖27*(位置8)和PneNAc 36*(位置10)结合的IgG，但是以较低水平结合。

此外，检测到低水平的抗21*(位置5)IgG和抗-51*(位置6)IgG和非常低水平的抗20*(位置4)IgG、抗-44*(位置7)IgG、抗-52*(位置9)IgG和抗37*(位置11)IgG。完全没有检测到针对D-FucNAc 15*(位置3)和含有Sug 的样品14*(位置2)的抗体。有趣的是，检测到比含有L-FucNAc-(1→3)-β-Sug 20* 的样品更高水平的抗二糖21*抗体。这将表明酮的存在确实对于抗体结合是有害的。如图5B所示，用天然SP5CPS对人血清的预温育导致抗四糖33*IgG水平的显著降低。这证明结合33*的抗体是SP5特异性的，因为它们也结合SP5CPS。

此外，微阵列数据表明，血清型与CPS-5多糖一起识别出多钟合成聚糖(图 8B)。然而，血清型还以高亲和力识别四糖33*和五糖73*，并被认为是已经被呈递给MHCII分子的B细胞表位。因此，表明这些寡糖对免疫力是至关重要的。

已经示出，SP5CPS的例如基准结构1(参考文献1)和基准结构2(参考文献2)的不含肺炎糖胺的亚结构不被免疫期间产生的抗体所识别。因此，假设肺炎糖胺是免疫原性表位的非常重要的部分，并且对于有效且保护性的免疫应答以及抗体产生在某种程度上是所需的。到目前为止，当使用与CRM₁₉₇缀合的上述参考结构之一在兔子中进行免疫时，不可能触发针对SP5CPS的可测定抗体滴度。

总之，微阵列分析表明，末端PneNAc残基是由抗SP5CPS抗体识别的表位的一部分，并且α-PneNAc-(1→2)-GlcA是由SP5分型血清识别的主要表位。在接种人的情况下，SP5特异性表位似乎更大，像四糖33*和五糖73*。还原端 D-FucNAc或Sug残基对于对SP5的免疫应答看起来并不重要。

也示出了具有在兔子中培养的针对ST5合成聚糖缀合物的抗体的聚糖微阵列(实施例81，图9B和图9D)。该结果表明四糖33*和五糖73*在兔中具有免疫原性并诱导交叉反应性抗体。

如实施例82和图10所示，通过ELISA分析的抗体应答支持：与四糖33*相比，五糖73*更具免疫原性。

抗ST5聚糖缀合物血清的表面结合表明针对ST5聚糖的抗体定位了肺炎球菌表面上的表位(实施例83，图11)并被认为是新型合成疫苗候选。

进行调理吞噬杀菌试验以评估对用ST5(四糖)缀合物58*c进行免疫应答所诱导的抗体的功能相关性。该数据表明ST5(四糖)缀合物58*c产生中和抗体并促进分化的HL-60细胞杀死肺炎球菌。

化学合成

方案1：逆合成方案

通式为I的糖可以从构建嵌段1、2、3、4、5和6开始组装(参见方案1)。通过从已知的3,4-二乙酰基-L-岩藻烯糖开始的叠氮硒化反应可以容易地制备构建嵌段1和2。例如，硫代葡萄糖苷3和4可以通过位于硫代葡萄糖苷构建嵌段 7的位置4和位置6处的亚苄基缩醛的区域选择性开口而进入。D-岩藻糖构建嵌段5可以通过从已知的D-岩藻烯糖8开始的叠氮硒化反应得到。

LG表示优选选自以下的离去基团：–F、–Cl、–Br、–I、–SR²⁸、–SeR²⁹、–OPO₃R³⁰ ₂、

R²⁸选自：–CH₃、–CH₂CH₃、–Ph、

R²⁹表示–Ph；

R³⁰表示–CH₂CH₂CH₂CH₃。

PG¹、PG²、PG³、PG⁴、PG⁵、PG⁶、PG⁷、PG⁸、PG⁹、PG¹⁰、PG¹¹、PG¹²、PG¹³、 PG¹⁴、PG¹⁵、PG¹⁶和PG¹⁷表示保护基团。这里使用的术语“保护基团”是指在有机合成中常用的基团，优选用于保护胺、羟基、硫醇、亚胺、羰基、羧基或其它常用官能团，并且特别优选用于保护胺和羟基。

保护基团可以分为永久性保护基团和临时保护基团。永久性保护基团是在整个合成过程中保持稳定的保护基团，并且可以在合成末期被有效除去。在这种情况下，永久性保护基团包括PG¹、PG²、PG⁶、PG⁷、PG⁹、PG¹¹、PG¹⁵和PG¹⁶。 PG¹、PG²、PG⁶、PG⁷、PG⁹和PG¹¹在整个合成过程中掩蔽了羟基，而保护基团 PG¹⁵和PG¹⁶掩蔽了存在于连接子L上的末端氨基。优选地，保护基团PG¹、PG²、 PG⁶、PG⁷、PG⁹、PG¹⁰、PG¹¹和PG¹⁵是苄基，保护基PG16是苄氧羰基保护基团(Cbz)。

临时保护基团通常是正交保护基团，包括单糖或其它保护基团，其可以在不同的合成水平下被选择性地去除，以使羟基游离，用于随后引入不同的取代基。这种情况下，临时保护基团包括PG³、PG⁴、PG⁵、PG⁸、PG¹²、PG¹³、PG¹⁴和PG¹⁷。

巧妙选择保护基团使得能够方便地获得用氨基官能化了的通式为I的糖库，以随后缀合至免疫原性载体或固体载体。

更具体地，PG³、PG⁴、PG⁵、PG⁸、PG¹²、PG¹³、PG¹⁴和PG¹⁷是适合于保护羟基的临时保护基团，即能够随后通过合适的脱保护反应序列被一一去除。优选地，PG³、PG⁴、PG⁵、PG⁸、PG¹²、PG¹³、PG¹⁴和PG¹⁷选自由烯丙基、乙酰基，苯甲酰基、对甲氧基苄基、三苯甲基、2-萘基甲基、三异丙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、叔丁基甲氧基苯基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三甲基甲硅烷基、2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基、9-芴基甲氧基羰基和乙酰丙酰基(levulinoyl)所组成的组。

优选地，位于构建嵌段2的C-3和C-4上的PG³和PG⁴是确保形成α-糖苷键的参与保护基团，更优选它们是乙酰基。

优选地，存在于葡萄糖苷构建嵌段3和4的2位上的保护基团PG⁸和PG¹²是有利于形成选自苯甲酰基和乙酰丙酰基的β-糖苷键的参与保护基团。优选地，保护基团PG¹⁷具有与保护基团PG⁸和PG¹²相同的含义。

正交保护基团PG⁵位于葡萄糖苷3的第6位处以预期地在该位置引入羧酸基团。优选地，保护基团PG⁵表示烯丙基、2-萘基甲基、苯甲酰基或对甲氧基苄基。可替选地，可以使用构建嵌段3a代替构建嵌段3来组装通式为(I)的糖。

保护基团PG¹³和PG¹⁴是非参与保护基团。优选地，在预期地在C-3位处进行链延长时，保护基团PG¹⁴可以在PG¹³的存在下被去除。这种非参与保护基团是本领域技术人员已知的，包括但不限于烯丙基醚、甲硅烷基醚、2-萘基甲基醚和对甲氧基苄基醚。优选地，PG¹⁴是对甲氧基苄基并且PG¹³是2-萘基甲基。

因此，可以根据方案2中描述的合成路径合成通式为I的糖(即通式为10 的单糖)，其中R¹表示R⁴且R⁴表示R⁶。三氯乙酰亚胺酸酯L-肺炎糖胺的合成通过已知的3,4-二乙酰基-L-岩藻烯糖的叠氮硒化完成。通过在-30℃在TMSOTf存在下用氨基醇HO–L–NBnCbz处理构建嵌段1，将末端氨基连接子附加在端基异构位置。

受保护的单糖9可以在技术人员已知的随后的脱保护过程后转化成通式为 (10)的糖。例如，在溶剂EtOH/H₂O/AcOH的混合物中使用Pd/C作为催化剂的氢解提供通式为10的糖，其中R²³是-H。R²³为–C(O)CH₃的通式为10的糖可以经由两步脱保护过程获得，包括通过用吡啶中的硫代乙酸处理将叠氮基转化成乙酰氨基，接着使用Pd/C作为催化剂进行氢解。R²³为–C(O)CF₃或–C(O)CCl₃的通式为10的糖可以通过三步脱保护过程制备，包括将叠氮基化学选择性还原成氨基，然后进行酰化并用Pd/C作为催化剂进行氢解。化学选择性还原可以通过 Staudinger反应(PPh₃或PMe₃,THF/H₂O)或通过在氨、乙酸铵、三苯基膦或吡啶存在下在Pd/C上进行氢解来实现。酰化可以例如通过在吡啶存在下用合适的酰氯或合适的酸酐处理胺来完成。

方案2：通式为10的单糖的合成：a.HO-L-NBnCbz、TMSOTf、DCM、

分子筛，-30℃至-20℃；b.一般的脱保护过程。

其中R¹表示R⁴且R⁴表示

的通式为I的糖(即通式为11 的二糖)可以例如根据在方案3中描述的合成路径制备。因此，从已知的D-呋喃 8开始，根据文献中描述的步骤以5个步骤合成三氯乙酰亚胺酯4*。在该水平，通过在-15℃在TMSOTf存在下使三氯乙酰亚胺酸酯4*与氨基醇HO–L–NBnCbz 反应将氨基连接子附接在端基异构位置而得到单糖13。为了获得其中R²³选自-H、–C(O)CF₃和–C(O)CCl₃的通式为11的二糖，通过用吡啶中的硫代乙酸处理而在该水平下将叠氮基基团转化成乙酰氨基，得到中间体14。去除中间体13和14 上的PMB保护基团，得到表示糖基受体的醇15和16以用于下一糖基化反应。然后使醇15与亚氨酸酯8*在TMSOTf存在下反应以生成与通式为II的二糖的前体对应的二糖17，其中R²³为–C(O)CH₃。将相同反应过程用于单糖16使得形成二糖18，其是通式11的二糖的前体，其中R²³选自–H、–C(O)CF₃和–C(O)CCl₃。

在方案4中针对化合物17详细描述了包括安置残基R⁷和R⁸以及最终的脱保护的步骤e。对化合物18执行相同的路径。

方案3：通式为11的二糖的合成：a.HO–L–NBnCbz、TMSOTf、DCM、

分子筛，-15℃；b.CAN、乙酮/水；c.1、TMSOTf、DCM、

分子筛-30℃至-20℃； d.1)安置残基R⁷和R⁸；2)脱保护。

为获得二糖21(R⁷＝–OH且R⁸＝–H)，将化合物17用吡啶中的硫代乙酸处理，使叠氮基转化成乙酰氨基，然后用DDQ(二氯二氰基苯醌)除去Nap保护基团，并在Pd/C上进行氢解。为了获得二糖25(R⁷和R⁸表示-OH或它们一起形成a＝O残基)，使用Dess-Martin高价碘化物使中间体醇20发生氧化反应，得到酮22。然后，将酮22上的永久性保护基团去除以得到作为酮(R⁷和R⁸一起形成a＝O残基)或作为水合酮(R⁷和R⁸表示-OH)的二糖25。当需要时，酮22 可以暂时受保护为二噻烷以避免降解。

方案4：安置残基R⁷和R⁸：合成二糖21、24和25：a.AcSH、吡啶；b.DDQ、 DCM、H₂O、0℃到室温；c.1)1,3-丙烷二硫醇、p-TsOH；2)H₂、Pd/C、 EtOH/EtOAc/H₂O/AcOH；d.Dess-Martin高价碘化物、DCM；e.三仲丁基硼氢化锂；f.H₂、Pd/C、EtOH/EtOAc/H₂O/AcOH；

从酮中间体22开始，通过用三仲丁基硼氢化锂进行区域选择性还原并随后使用Pd/C作为催化剂进行氢解，可以容易地获得二糖24(R⁷＝–H且R⁸＝–OH)。

其中R¹表示

且R⁴表示R⁶的通式为I的糖(通式26的二糖)可以按照方案5中所示的合成路线进行构建。

通过将硫代糖苷10*与用NIS/TfOH活化的连接子结合来生成单糖28。在第 6位受保护的硫代糖苷10*作为苯甲酰基酯而非2-萘基甲基醚，也适于被用作在该水平的构建嵌段。去除乙酰丙酯得到醇29，用8*对其进行糖基化，生成二糖 30。在该水平，应用方案2所述的反应之一可以将残基B安置在分子上。随后，用DDQ去除保护基团以生成伯醇31，将其用TEMPO和二乙酸碘苯进一步氧化以得到羧酸。使用Pd/C作为催化剂对羧酸进行进一步氢解得到通式为26的二糖。为了得到R³不同于-H(R³选自–CH₃、–C₂H₅、–C₃H₇、–C₄H₉和–CF₃)的二糖，应在步骤f和步骤g之间***酯化步骤。

方案5：通式为26的二糖的合成：a.HO–L–NBnCbz、NIS/TfOH、DCM、

MS、–30℃至–20℃；b.N₂H₄.H₂O、AcOH/吡啶、DCM；c.8*、TMSOTf、DCM、

MS、–30℃ to–20℃；d.–N₃残基转化成-NHR²³残基；e.DDQ、DCM、磷酸盐缓冲液、pH 7.2、0℃到室温；f.TEMPO、二乙酸碘苯、DCM、H₂O、0℃到室温；g.H₂、Pd/C、EtOH/EtOAc/H₂O/AcOH.。

其中R¹表示

并且R⁴表示

的通式为(I)的糖(通式为32的三糖)可以按照方案6中所示的合成路线进行构建。

首先，将如上所述获得的构建嵌段15和16在活化剂如NIS/TfOH存在下与硫代葡萄糖苷10*(参见方案5)反应以得到二糖33和34。去除Lev保护基团得到仲醇36和37，将它们进一步参与糖苷缀合以得到三糖38和39。根据前述过程之一将-N₃基团转化成相应的–NHR²³残基，然后通过Nap醚裂解，得到通式为 40的二醇。用TEMPO和二乙酸碘苯对伯醇进行区域选择性氧化，得到羧酸41，其可以进一步使用适当的安置R⁷和R⁸(参见方案4)的反应条件和氢解成通式 32的三糖的反应条件。可选地，可容易地通过使三糖38从起始经历步骤e、f和 g而得到具有R²³为-H的通式为32的三糖。

方案6：通式为32的三糖的合成：a.10*、NIS/TfOH、DCM、

MS、–20℃至–10℃；b.N₂H₄.H₂O、AcOH/吡啶、DCM；c.8*、TMSOTf、DCM、

MS、–30℃至–20℃；d.–N₃残基转化成–NHR²³残基；e.DDQ、DCM、磷酸盐缓冲液、pH 7.2、 0℃到室温；f.TEMPO、二乙酸碘苯、DCM、H₂O、0℃到室温；g.1)安置R⁷和R⁸；2)H₂、Pd/C、EtOH/EtOAc/H₂O/AcOH。

可以根据方案7中所示的合成路线合成其中R¹表示

且R⁴表示R⁶的通式为(I)的多糖(即通式为42 的三糖)。合成开始于在D-岩藻糖的第四位置处安置β-D-葡萄糖残基。该步骤通过在NIS/TfOH存在下用L-岩藻糖苷38*处理硫代葡萄糖苷60*来实现。裂解乙酰丙酰基酯后，在葡萄糖苷的第二位置处的游离醇受保护为苄基醚，除去叔己基二甲基甲硅烷基(thexydimethylsilyl)保护基团以得到中间体乳醇，其进一步转化成相应的三氯乙酰亚氨酸酯46。在该水平，通过在活化剂例如TMSOTf存在下使三氯乙酰亚氨酸酯46与醇6反应而将连接子为附加到分子上。随后，通过用硫代乙酸和吡啶处理将中间体47上的叠氮基转化成相应的乙酰胺。使用 Zémplen条件去除乙酸酯基团，以使L-岩藻糖第二位置处的仲醇游离，从而为下一糖基化反应提供亲核试剂。通过在TMSOTf存在下使醇49与三氯乙酰亚氨酸酯1反应来附加最后的糖部分。将完全保护的三糖转化成目标三糖42包括：将 -N3残基转化成-NHR²³残基，并按照前述方法除去永久性保护基团。

方案7：通式为42的糖的合成：a.60*、NIS/TfOH、DCM、–30℃；b.1) N₂H₄.H₂O、AcOH/吡啶、DCM；2)BnBr、NaH、DCM:DMF；c.1)TBAF、AcOH、 THF；2)CCl₃CN、DBU、DCM；d.HO–L–NBnCbz、TMSOTf、DCM；e.AcSH/ 吡啶；f.MeONa/MeOH；g.8*、TMSOTf、DCM、

MS、–30℃至–20℃；h.1)–N3 残基转化成–NHR²³残基；2)脱保护。

可以根据方案8中所示的合成路线合成其中R¹表示

并且R⁴表示R⁶的通式为(I)的二糖。合成开始于在L-岩藻糖残基上安置连接子L。该步骤通过在活化剂例如TMSOTf的存在下用HO-L-NBnCbz处理亚氨酸酯52来完成。随后，通过用硫代乙酸和吡啶处理将叠氮化物53转化成相应的乙酰胺54。使用Zémplen条件除去乙酸酯基团得到二醇中间体，使其进一步与原乙酸三甲酯和p-TsOH反应，随后用80％AcOH处理以得到醇54。在活化剂存在下，将醇54 进一步用亚氨酸酯8*糖基化得到二糖55，将其进一步分别用MeONa/MeOH处理以得到醇56。从醇56起始，可以按照上述过程容易地获得根据本发明的通式为 57的二糖。

方案8：二糖57的合成。a.HO–L–NBnCbz、TMSOTf、DCM、

MS、–30℃到–20℃；b.1)AcSH、吡啶；2)MeONa、MeOH；3)原乙酸三甲酯、p-TsOH、 DMF然后80％AcOH；c.8*、TMSOTf、DCM、

MS、–30℃；d.MeONa、 MeOH；e.1)–N₃残基转化成–NHR²³残基；2)脱保护。

在方案9中示出了用于得到其中R¹表示

且R⁴表示

的通式为(I)的糖(即通式为61的四糖)的合成路径。合成从二糖55*开始，在其上乙酸酯被裂解以得到醇66。用8*使醇66糖基化以得到三糖58。在除去叔己基二甲基甲硅烷基保护基团后，将中间体乳醇转化成相应的三氯乙酰亚氨酸酯59。通过附加非还原性末端糖部分并将叠氮基团转化成相应的乙酰氨基而完成被完全保护的四糖的合成。按照上述过程将受保护的四糖60 转化成目标四糖61。

方案9：四糖61的合成：a.MeONa/MeOH；b.8*、TMSOTf、DCM；c.1)TBAF、 AcOH、THF；2)CCl₃CN、DBU、DCM；d.1)15、TMSOTf、DCM；2)AcSH、吡啶；e.1)安置残基R⁷和R⁸；2)脱保护。

在方案10中示出了用于得到其中R¹表示

且R⁴表示

的通式为(I)的糖(即通式为65的三糖)的合成路径。该合成涉及使三氯乙酰亚氨酸酯52与醇15反应以得到二糖62，如方案8步骤b 所示将二糖62转化成醇63，将醇63进一步进行糖基化反应得到被完全保护的三糖。按照上述过程将受保护的三糖64转化成目标三糖65。

方案10：三糖65的合成：a.TMSOTf、DCM；b.1)AcSH、吡啶；2) MeONa/MeOH；3)原乙酸三甲酯、p-TsOH、DMF然后80％AcOH；c.1、TMSOTf、 DCM；d.1)–N₃残基转化成–NHR²³残基；2)安置残基R⁷和R⁸；3)脱保护。

最后，根据在方案11中所示的合成路径可以得到其中R¹表示

R²表示

且R⁴表示

的通式为(I)的糖(即通式为72的五糖)。合成通过在L- 岩藻糖残基上裂解乙酸酯进行，以得到醇56*，将醇56*进行糖基化反应得到三糖57*。用TBAF/AcOH处理三糖67使得除去叔己基二甲基甲硅烷基保护基团，得到中间体乳醇，将乳醇进一步转化成相应的三氯乙酰亚胺酸酯68。在此水平，通过糖基化反应使还原端糖部分附加在分子上，并且使葡萄糖残基上的乙酰丙酰基酯裂解以得到四糖70。在安置非还原端糖部分之后，获得被完全保护的目标五糖71。

将被完全保护的五糖71转化成所需的五糖72包括：

-除去苯甲酰基，然后将伯醇氧化成相应的羧酸；

-将-N₃残基转化成-NHR²³残基；

-安置残基R⁷和R⁸；以及

-去保护。

方案11：五糖72的合成：a.MeONa/MeOH；b.NIS/TfOH、DCM；c.1)TBAF、 AcOH、THF；2)CCl₃CN、DBU、DCM；d.15、TMSOTf、DCM；e.1)AcSH、吡啶；2)N₂H₄.H₂O、AcOH/吡啶、DCM；f.1、TMSOTF、DCM；g.1)MeONa/MeOH； 2)TEMPO、二乙酸碘苯、DCM、H₂O；3)–N₃残基转化成–NHR²³残基；4)安置残基R⁷和R⁸；5)脱保护。

可替选地，可以按照如方案12所示的下面的合成路线合成五糖73。

方案12：五糖73的合成：a.DDQ、DCM/H₂O；b.NIS/TfOH、DCM/到l； c.1)HF.py、DCM/py；2)CCl₃CNPhCl、Cs₂CO₃、DCM；d.TMSOTf、DCM；e. N₂H₄.H₂O、AcOH/吡啶/DCM；f.1、TMSOTF、Tol；g.–N₃残基转化成–NHR²³残基。

附图说明

图1示出了肺炎链球菌血清型5重复单元的化学结构。

图2提供了根据本发明的可商购互连分子的实例。

图3提供了根据本发明的互连分子的官能团X的实例。

图4示出了肺炎链球菌血清型5兔子分型血清的聚糖阵列筛选的结果。A) 兔子分型血清的代表性孔(稀释度1：1000)；B)用SP5CPS(5μg/mL)预温育的兔子分型血清(1：1000稀释)的代表性孔；C)列出各个聚糖的位置1-11的表。样品14*和20*不纯。

图5示出了人肺炎球菌CPS疫苗接受者的混合血清的聚糖阵列筛选结果。 A)人肺炎球菌血清代表性孔(稀释度1：100)；B)用SP5CPS(5μg/mL)预温育的人肺炎球菌血清(1：100稀释)的代表性孔；C)列出各个聚糖的位置1-11 的表。样品14*和20*不纯。

图6：A)合成的SP-5四糖33*的化学结构；B)通过基于PNP的化学过程将四糖33*与CRM₁₉₇缀合，并在10％SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)上与重组CRM₁₉₇一起解析并用考马斯亮蓝R250染色。分子量标志物显示在SDS-PAGE的中间；C)使用根据已知浓度的BSA(BCA：二喹啉甲酸)绘制的标准曲线估计蛋白量。

图7：A和B：通过基于PNP的化学过程将ST5的四糖33*和五糖73*与CRM₁₉₇缀合，并分别与重组CRM₁₉₇一起在10％SDS-PAGE上解析并用考马斯亮蓝R250 染色。分子量标志物显示在SDS-PAGE的最左边；C和D：分别进行基质辅助激光解吸/电离(MALDI)分析以测量ST5四糖33*和五糖73*缀合物在pH 8.0时的平均分子大小。使用重组CRM₁₉₇作为标准。

图8：具有ST5型血清的微阵列

A)微阵列载片印刷图样。(B)将微阵列载片与5型兔子血清(Statens SerumInstitute、Denmark)以1：100的稀释度一起温育。微阵列分析表明血清型与天然CPS-5多糖一起识别合成结构。(C)印刷在载片上的结构说明。

图9：具有兔子抗ST5合成缀合物血清的微阵列

(A)免疫模式和血清收集(在所有研究中印刷图样都是相同的)。在第0、 14和28天以首要加强方式使兔子免疫。从各个兔子收集免疫前血清(第0天) 和超免疫血清(第14、21和35天)。(B和D)将微阵列载片与针对四糖缀合物和五糖缀合物培养用于载片的合并兔子血清(第35天)一起温育。两组超免疫血清均显示与天然多糖的交叉反应性。(C)微阵列载片的印刷图样。

图10：终点滴度分析。

用ST5聚糖缀合物的免疫在兔子中诱导高抗体滴度。在第0、14和28天，将每组三只兔子(雌性ZIKA兔子，10-12周，2.5kg-3kg)用3个剂量的10μg 四糖缀合物和五糖缀合物(在明矾中)进行皮下免疫。在每个时间点(A)按照倍数变化对免疫应答进行分析和绘图。在来自各个兔子(B)的超免疫血清(第 35天)中确定终点滴度(总IgG)。每个柱代表各个兔子抗体滴度。以最高稀释度的倒数绘制抗体滴度，其给出读数减去用免疫前血清(第0天；1：100稀释) 获得的吸光度值。还分析了组间的抗体应答(C)。

图11：具有肺炎球菌菌株的抗ST5聚糖缀合物的表面染色。通过流式细胞术分析抗ST5聚糖缀合物血清与血清型5菌株的表面结合。实心灰色直方图代表阴性对照(细菌+第二抗体)，黑色虚线代表第0天。黑色直方图和灰色直方图分别代表四糖和五糖。

图12：抗ST5(四糖)抗体促进肺炎球菌的吞噬作用。

具体实施方式

将分化的HL-60细胞与经抗ST5(四糖)或预免疫血清预处理的血清型5细菌一起温育，45分钟后评估肺炎球菌存活率。基于相对于无血清对照获得的活肺炎球菌菌落计算肺炎球菌的杀死百分比。这是重复三次所做的三个独立实验中的代表值。数值代表平均值±SE。

包括以下实施例以说明本发明的优选实施方式。本领域技术人员应该理解，下面的实施例中公开的技术代表了由发明人所发现的用于在本发明的实践中良好发挥作用的技术，因此可被认为构成针对其实践的优选模式。然而，本领域的技术人员根据本公开应理解，不背离本发明的精神和范围下，可以在所公开的具体实施方式中做出许多改变，而仍然获得相似或类似的结果。

鉴于本说明书，对本发明的各个方面的进一步修改和可替选实施方式对于本领域技术人员将是显而易见的。因此，该说明书仅被解释为说明性的，并且是为了教导本领域技术人员实施本发明的一般方式的目的。应该理解，本文中示出和描述的本发明的形式将被视为实施方式的示例。在此示出和描述的元素和材料可以被替换，部件和过程可以颠倒，并且可以独立地使用本发明的某些特征，所有这些对于本领域技术人员而言在受益于本发明的说明书后将是显而易见的。在不背离如所附权利要求所述的本发明的精神和范围下，可以对本文所述的元件进行改变。

实施例

化学合成

缩写：

NIS：N-碘代琥珀酰亚胺；

TfOH：三氟甲磺酸；

h：小时；

DCM：二氯甲烷；

TLC：薄层色谱法；

rt：室温；

EtOAc：乙酸乙酯；

MS：分子筛；

TMS：三甲基甲硅烷基；

Tempo：2,2,6,6-四甲基-1-哌啶基氧基，自由基；

BAIB：[双(乙酰氧基)碘]苯；

TMSOTf：三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯；

TBAF：四丁基氟化铵；

TDS：二甲基叔己基甲硅烷基(dimethylthexylsilyl)；

DDQ：2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌；

Et₃N：三乙胺；

DBU：1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯；

Nap：2-萘基甲基；

equiv：当量；

sat.：饱和；

aq.：水性的；

Hex：己烷；

TMSN₃：三甲基甲硅烷基叠氮化物；

PMBCl：对甲氧基苄基氯；

THF：四氢呋喃；

DMAP：4-二甲基氨基吡啶；

TBAI：四丁基碘化铵；

TBAB：四丁基溴化铵；

Bu₂SnO：***；

CAN：硝酸铈铵；

BnBr：苄基溴；

BH3.THF：硼烷四氢呋喃络合物；

DMF：二甲基甲酰胺；

UV：紫外线；

NMR：核磁共振；

MALDI-TOF：基质辅助激光解吸/电离飞行时间光谱法；

HRMS：高分辨质谱；

ESI：电喷雾电离；

MeCN：乙腈；

IR：红外线；

EDC：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺；

Et2O：***；

NaOMe：甲醇钠；

OTCA：三氯乙酰亚胺酸酯；

化学合成的一般信息

除非另有说明，商业试剂不经进一步纯化使用。按照常规方法在使用之前将溶剂干燥并再蒸馏。除非另有说明，所有反应均在惰性气氛下在烘箱干燥过的玻璃器皿中进行。在预先涂有0.25mm厚度硅胶的Kieselgel 60F254铝板上进行分析薄层色谱法(TLC)。将TLC板用紫外光并通过用Hanessian溶液(硫酸铈和钼酸铵的硫酸水溶液)或硫酸-乙醇溶液染色而显现。在Fluka Kieselgel 60(230 目-400目)上进行柱色谱分析。旋光度(OR)用Schmidt&Haensch UniPol L1000 旋光仪在以g/100mL表示的浓度(c)下测量。¹H和¹³C NMR谱用Varian 400-MR 或Varian 600分光仪以Me₄Si作为内标进行测量。NMR化学位移(δ)以ppm记录，耦合常数(J)以Hz记录。在柏林自由大学质谱核心实验室(Freie

Berlin，Mass Spectrometry Core Facility)使用Agilent 6210ESI-TOF质谱仪记录高分辨率质谱(HRMS)。

在端基异构位置除去TDS基团的一般步骤(A)

将端基异构TDS保护的起始材料(1.0当量)溶于THF(0.15M的反应浓度) 并冷却至0℃。加入TBAF(在THF中为1M，10当量)和AcOH(12当量)的溶液，升温至室温并搅拌3小时。将反应混合物用EtOAc稀释，用0.1N HCl、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。将有机相用MgSO₄干燥并浓缩。在硅胶上进行柱色谱(己烷/EtOAc)，得到相应的乳醇，为α端基异构体和β端基异构体的混合物。

用于硫代糖苷和硒代糖苷的NIS/TfOH介导的糖基化的一般过程(B)

将受体(1.0当量-2.0当量)和硫代糖苷或硒代糖苷(1.0当量-1.3当量)与甲苯共同蒸发三次并真空干燥。将剩余物与新活化的分子筛

和NIS(相对于硫代糖苷或硒代糖苷为1.2当量)一起溶于DCM或MeCN(反应浓度为80mM 至120mM)。将混合物冷却，加入TfOH(相对于硫代糖苷或硒代糖苷为0.1当量)。将该反应搅拌1小时，然后通过加入NEt₃猝灭并用DCM稀释。将有机层用饱和 Na₂S₂O₃水溶液然后用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，用MgSO₄干燥并浓缩。经柱层析(己烷/EtOAc)得到纯产物。

用K₂CO₃合成糖基-三氯乙酰亚胺酸酯的一般过程(C)

向乳醇(1.0当量)在DCM中的溶液(反应浓度0.5M)中加入三氯乙腈(10 当量)和K₂CO₃(1.7当量)并在室温下搅拌3小时。将粗产物浓缩并通过硅胶柱层析(己烷/EtOAc)而纯化，得到纯产物。

用DBU合成糖基-三氯乙酰亚胺酸酯的一般过程(D)

在0℃，向乳醇(1.0当量)在DCM中的溶液(反应浓度0.5M)中加入三氯乙腈(10当量)和DBU(1滴)，并在0℃搅拌1小时。将粗产物浓缩并通过硅胶柱层析(己烷/EtOAc)纯化，得到纯产物。

用于糖基-亚氨酸酯的TMSOTf介导的糖基化的一般过程(E)

将受体(1.0当量-2.0当量)和糖基-三氯乙酰亚氨酸酯(1.0当量-1.3当量) 与甲苯共同蒸发三次并真空干燥。将剩余物溶于DCM(反应浓度为 80mM-120mM)，加入新活化的分子筛

将混合物冷却至-30℃，加入TMSOTf (0.1当量)。使反应达到-20℃，然后通过加入NEt₃淬灭并减压浓缩。经柱层析(己烷/EtOAc)得到纯产物。

基于硫代乙酸的叠氮化物还原的一般过程(F)

向叠氮化物起始物质在吡啶(1mL)中的溶液加入硫代乙酸(0.5mL)并搅拌12h-48h。将反应混合物浓缩并通过硅胶柱层析(己烷/丙酮)纯化，得到乙酰胺产物。

去除Nap保护基团的一般过程(G)

在0℃，在1.5小时内向萘基化起始物质(1当量)在DCM/磷酸盐缓冲液(10:1 (v:v)，7mM，pH 7.2，4mM反应浓度或DCM/H₂O(10:1))混合物中的混合物中分批加入DDQ(2当量-3当量)。将反应混合物升温至室温，再搅拌1.5h-5h，用饱和NaHCO₃水溶液稀释混合物，用DCM提取，将有机层经MgSO₄干燥并浓缩。经硅胶柱层析(己烷/EtOAc)得到纯产物。

TEMPO介导的氧化的一般过程(H)

在0℃向伯醇(1.0当量)在DCM/H₂O((2.5:1，v:v)，反应浓度为7mM) 中的混合物中加入TEMPO(0.2当量)和BAIB(5.0当量)。将反应混合物升温至室温，搅拌2小时，然后用H₂O稀释并用DCM提取。将有机相用Na₂SO₄干燥并浓缩。在Sephadex LH-20(CHCl₃/MeOH＝1：1)上通过尺寸排阻色谱法得到产物。

氢解的一般过程(I)

将起始物质(反应浓度为4mM至8mM)在EtOH/EtOAc/H₂O/AcOH的混合物中的溶液用Ar净化。之后加入10％Pd/C，并用H₂净化溶液10分钟，然后在 H₂气氛下搅拌12小时，过滤并浓缩。将粗产物溶于H₂O中，进行反相固相萃取 (RP SPE)(Waters

C18)并冻干。在必要时，在Sephadex LH-20(MeOH) 上进行尺寸排阻层析。

实施例1：苯基2-叠氮基-2-脱氧-1-硒代-α-D-岩藻吡喃糖苷(1*)的合成

在-30℃向岩藻烯糖(Bedini,E.et.al.Synlett 2006,6,825-830)(4.6g,21.6mmol)和Ph₂Se₂(6.75g,21.6mmol)在DCM(70mL)的溶液中加入PhI(OAc)₂ (6.96g,21.6mmol)。然后向所得溶液逐滴加入TMSN₃(5.74mL,43.2mmol)。将溶液升温至-10℃。在-10℃4h后反应完成。使反应混合物升温至室温，并用 NaHCO₃饱和溶液洗涤然后用盐水洗涤。将溶剂蒸发并将不纯物溶解在MeOH (190mL)中。在室温下将NaOMe 0.5M(4.75mmol,9.5mL)溶液逐滴加入混合物中。在室温下将反应搅拌1h。加入安伯来特(Amberlite)并搅拌直到pH降至5。将反应混合物过滤并蒸发掉溶剂。将剩余物通过硅胶层析(DCM 100％到DCM:MeOH:丙酮97:1.5:1.5)纯化.将得到的黄色固体用己烷洗涤以得到二醇 1*，为白色固体(4.24g,12.9mmol,60％产率)。[α]_D ²⁰＝241.6°(c＝1.00,CHCl₃)； IRν_max(膜)3321,2925,2105,1578,1475,1438,1093,1059,739cm-¹；¹H NMR (400MHz,CD₃OD)δ7.71–7.47(m,2H),7.35–7.09(m,3H),5.90(d,J＝5.4Hz, 1H),4.28(q,J＝6.6Hz,1H),4.00(dd,J＝9.9,5.3Hz,1H),3.70(ddd,J＝6.6,4.5, 2.2Hz,2H),1.13(d,J＝6.5Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,CD₃OD)δ134.5,128.6, 127.3,85.5,71.5,71.3,69.2,61.5,15.0.HRMS(ESI+)计算为C₁₂H₁₅O₃N₃SeNa⁺ [M+Na]⁺352.0171,得到352.0179。

实施例2:苯基2-叠氮基-2-脱氧-3-O-对甲氧基苄基-1-硒-α-D-岩藻吡喃糖苷(2*)的合成

将二醇2*(2.5g,7.62mmol)用无水甲苯共蒸发两次并在高度真空下使其干燥30min。然后加入无水甲苯(80mL)，随后加入Bu₂SnO(2.84g,11.43mmol)和 4AMS。在回流下将反应物搅拌1h。将反应物冷却到40℃；加入PMBCl(3.11 mL,22.85mmol)和TBAB(3.68g,11.43mmol)并在室温搅拌过夜。早上反应完成。将反应物过滤并蒸发掉溶剂。将剩余物通过硅胶层析(EtOAC在己烷中为 10％-20％)纯化。得到醇2*，为黄色油(3.09g,6.89mmol,90％)。[α]_D ²⁰＝+177.4° (c＝0.77,CHCl₃)；IRν_max(膜)3493,2935,2111,1613,1514,1249,1091,740cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.79–7.47(m,2H),7.41–7.12(m,5H),6.92(d,J＝8.7Hz,2H),5.88(d,J＝5.4Hz,1H),4.69(d,J＝11.0Hz,1H),4.63(d,J＝11.0Hz, 1H),4.29(q,J＝6.5Hz,1H),4.15(dd,J＝10.2,5.3Hz,1H),3.89–3.84(m,1H), 3.82(s,3H),3.69(dd,J＝10.2,3.1Hz,1H),2.36(s,1H),1.26(d,J＝6.6Hz,3H). ¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ159.7,134.4,129.8,129.1,129.0,128.5,127.8,114.1, 85.2,78.9,71.8,68.6,68.5,60.1,55.3,16.1.HRMS(ESI+)计算为 C₂₀H₂₃O₄N₃SeNa⁺[M+Na]⁺472.0746,得到472.0755。

实施例3:苯基2-叠氮基-2-脱氧-3-O-对甲氧基苄基-4-O-(2-萘基甲基)-1-硒-α-D-岩藻吡喃糖苷-2-(溴甲基)-萘(3*)的合成

将2-(溴甲基)-萘(2.8g,12.67mmol)加入到醇2*(2.84g,6.33mmol)在 DMF:THF(1:1,64mL)的溶液中。然后将混合物冷却到0℃并加入NaH 60％(304 mg,7.60mmol)。使反应物升温到室温并进行搅拌1h。反应完成。然后再将其冷却到0℃并加入100mg的NaH。1h后反应完成。将反应混合物冷却到0℃，加入MeOH并将反应物升温至室温。将反应混合物用醚稀释，用HCl、NaHCO₃和盐水洗涤。蒸发掉溶剂并将剩余物通过硅胶层析(EtOAC在己烷中为5％-10％) 纯化。得到产物3*，为无色油(2.56g,4.35mmol,69％)。[α]_D ²⁰＝151.28°(c＝2.00, CHCl₃)；IRν_max(膜)2896,2109,1612,1513,1249,1101,1065,820,740cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.94–7.75(m,3H),7.71(s,1H),7.63–7.53(m,2H), 7.52–7.42(m,3H),7.40–7.31(m,2H),7.29–7.20(m,3H),7.00–6.84(m,2H), 5.94(d,J＝5.2Hz,1H),5.09(d,J＝11.7Hz,1H),4.78(d,J＝11.7Hz,1H),4.74(d, J＝11.1Hz,1H),4.70(d,J＝11.1Hz,1H),4.48–4.30(m,1H),4.22(q,J＝6.5Hz, 1H),3.84(s,1H),3.77–3.66(m,1H),1.13(d,J＝6.5Hz,3H).¹³C NMR(101MHz, CDCl₃)δ159.5,135.6,134.3,133.1,133.0,129.6,129.0,128.7,128.1,127.9,127.7, 127.6,126.9,126.3,126.1,125.9,114.0,85.6,80.4,75.7,74.9,72.4,69.4,60.9,55.3, 16.6.HRMS(ESI+)计算为C₃₁H₃₁O₄N₃SeNa⁺[M+Na]⁺612.1373,得到612.1371。

实施例4:2-叠氮基-2-脱氧-3-O-对甲氧基苄基-4-O-(2-萘基甲基)-α,β-D-岩藻吡喃糖基三氯乙酰亚氨酸酯(4*)的合成

将硒化物化合物3*(730mg,1.24mmol)溶解在THF:H₂O(1.7:1,38mL)中并加入NIS(558mg,2.48mmol)。在室温将反应物搅拌2h并用NaS₂O₃淬灭。然后将反应混合物用CH₂Cl₂稀释并用NaHCO₃和盐水洗涤。蒸发掉溶剂并将剩余物通过硅胶层析(EtOAC在己烷中为20％)纯化。得到产率为94％的无色油(524mg, 1.17mmol)。将产物溶解在DCM(12mL)并冷却至0℃。加入三氯乙氰(1.16 mL,11.57mmol)和DBU(0.012mmol,2μL)。在0℃搅拌1h后反应未完成。然后加入三氯乙氰(1mL)。1小时后反应完成。蒸发掉溶剂并将剩余物通过硅胶层析(EtOAC在己烷中为20％)纯化。得到定量产率(700mg,1.18mmol)的三氯乙酰亚氨酸酯4*，为α端基差向异构体和β端基差向异构体的混合物(α:β,1:3)。对β端基差向异构体进行表征。[α]_D ²⁰＝-8.69°(c＝1.99,CHCl₃)；IRν_max(膜)2934, 2113,1675,1513,1059,821,796cm-¹；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.63(s,1H), 7.98–7.78(m,3H),7.73(s,1H),7.59–7.43(m,3H),7.34(d,J＝8.7Hz,2H),6.92 (d,J＝8.7Hz,2H),5.53(d,J＝8.5Hz,1H),5.10(d,J＝11.8Hz,1H),4.86(d,J＝11.8Hz,1H),4.70(s,2H),4.07(dd,J＝10.2,8.6Hz,1H),3.83(s,3H),3.68–3.52 (m,2H),3.45(dd,J＝10.3,2.7Hz,1H),1.23(d,J＝6.4Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ161.5,159.5,135.4,133.1,133.0,129.6,129.5,128.1,127.9,127.7,127.4,126.6,126.1,126.0,114.0,97.2,92.5,80.7,74.8,74.5,72.6,71.9,62.5,55.3,29.7,16.9.HRMS(ESI+)计算为C₂₇H₂₇O₄N₄Cl₃Na⁺[M+Na]⁺617.0912,得到 617.0930。

实施例5:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-叠氮基-2-脱氧-3-O-对甲氧基苄基-4-O-(2-萘基甲基)-β-D-岩藻吡喃糖苷(5*)的合成

将亚氨酸酯4*(538mg,0.91mmol)和接头N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-1-戊醇(593mg,1.8mmol)用无水甲苯共蒸发并在高度真空下干燥。将剩余物溶解在乙腈中并冷却至-15℃。加入TMSOTf(16μL,0.09mmol)并将反应物搅拌1h。将反应物用三乙胺淬灭并将溶剂蒸发掉。将剩余物通过硅胶层析(EtOAC在己烷中为15％-20％)纯化得到单糖5*，为无色油，产率为74％(510mg,0.672mmol)。 [α]_D ²⁰＝-21.34°(c＝2.10,CHCl₃)；IRν_max(膜)2935,2110,1697,1513,1248,1068, 819,699cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.90–7.77(m,3H),7.72(s,1H),7.58 –7.43(m,3H),7.38–7.14(m,12H),6.91(d,J＝8.6Hz,2H),5.18(d,J＝12.1Hz, 1H),5.07(d,J＝11.9Hz,1H),4.84(d,J＝11.9Hz,1H),4.73–4.60(m,1H),4.50(d,J＝7.6Hz,1H),4.14(t,J＝8.7Hz,1H),3.93–3.71(m,2H),3.53(d,J＝2.4Hz, 1H),3.44–3.35(m,1H),3.32–3.15(m,1H),1.66–1.47(m,1H),1.41–1.26(m, 1H),1.19(d,J＝6.4Hz,1H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ137.9,135.7,133.1, 133.0,129.8,129.5,128.5,128.5,128.0,127.9,127.8,127.7,127.2,126.7,126.0, 125.9,113.9,102.3,80.7,74.7,74.6,72.5,70.5,69.6,67.1,63.1,55.3,50.5,50.2, 47.1,46.2,29.2,27.9,27.5,23.2,17.0.HRMS(ESI+)计算为C₄₅H₅₀O₇N₄Na⁺ [M+Na]⁺781.3577,得到781.3590。

实施例6:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-叠氮基-2-脱氧-4-O-(2-萘基甲基)-β-D-岩藻吡喃糖苷(6*)的合成

将被PMB保护的5*(510mg)溶解在丙酮(10mL)和H₂O(1.1mL)中,然后加入700mg的CAN(固体)。之后，在70min内加入CAN(700mg)在丙酮(1.7mL) 和H₂O(0.2mL)中的溶液。10min后将反应物倒入NaHCO₃中并用CH₂Cl₂提取。蒸发掉溶剂并将剩余物通过硅胶层析(EtOAC在己烷中为20％)纯化。得到醇 6*，为黄色油，产率为73％(315mg,0.493mmol)。[α]_D ²⁰＝-1.73°(c＝2.18,CHCl₃)； IRν_max(膜)3440,3031,2935,2109,1694,1068,698cm-¹；¹H NMR(400MHz, CDCl₃)δ7.89–7.74(m,4H),7.62–7.43(m,3H),7.41–7.21(m,9H),7.17(d,J＝ 6.9Hz,1H),5.18(d,J＝13.1Hz,2H),4.97(d,J＝11.8Hz,1H),4.90(d,J＝11.8Hz, 1H),4.50(d,J＝8.7Hz,2H),4.18(t,J＝8.6Hz,1H),3.95–3.80(m,1H),3.64– 3.37(m,5H),3.23(m,2H),2.31(s,1H),1.69–1.46(m,4H),1.43–1.18(m,2H), 1.31(d,J＝6.5Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ137.9,135.3,133.2,133.1, 128.5,128.4,128.0,127.9,127.8,127.7,127.2,127.1,126.2,126.1,126.1,102.2, 78.2,75.9,73.0,70.8,69.7,67.1,64.7,50.5,50.2,47.1,46.2,29.2,27.9,27.4,23.2, 17.0.HRMS(ESI+)计算为C₃₇H₄₂O₆N₄Na⁺[M+Na]⁺661.3002,得到661.3015。

实施例7:苯基2-叠氮基-3,4-二-O-苄基-2-脱氧-1-硒-β-L-肺炎吡喃糖苷(pneumopyranoside)(7*)的合成

在0℃向在DMF(5mL)含有约25％的2-叠氮基-2-脱氧-1-硒-β-L-肺炎吡喃糖苷(192mg)的不纯混合物中加入BnBr(0.21mL,1.8mmol)和NaH(31mg,1.3 mmol)。3h后在0℃用MeOH将反应物淬灭并用Et₂O稀释。将有机层用0.1M HCl水溶液、NaHCO₃饱和水溶液和盐水洗涤。将有机层通过MgSO₄干燥并浓缩。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到7*(66mg,0.13mmol,22％)。[α]_D ²⁰＝– 72.2°(c＝1.6,CHCl₃)；IRν_max(膜)3062,3031,2933,2869,2106,1578,1496,1477, 1454,1438,1361,1279,1202,1162,1105,1067cm-¹；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.58–7.23(m,15H),5.80(d,J＝1.5,1H),5.02(J＝11.8,1H),4.81–4.64(m,3H), 4.24–4.10(m,2H),3.99–3.90(m,1H),3.71–3.66(m,1H),1.24(d,J＝6.5,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ138.4,137.4,133.9,129.4,129.1,128.8,128.6,128.3, 128.2,128.0,127.8,127.7,83.9,77.5,75.4,75.0,71.4,70.6,60.0,16.7；HRMS(ESI): 计算为C₂₆H₂₇N₃O₃SeNa⁺[M+Na]⁺532.1115,得到532.1112。

实施例8:2-叠氮基-3,4-二-O-苄基-2-脱氧-α-L-肺炎吡喃糖基(pneumopyranosyl)三氯乙酰亚氨酸酯(8*)的合成

向7*(30mg,59μmol)在THF(1.25mL)和H₂O(0.75mL)中的溶液加入NIS (27mg,180μmol)并搅拌2h。将反应物用DCM稀释并将有机层用Na₂S₂O₃饱和水溶液洗涤然后用NaHCO₃饱和水溶液洗涤，通过MgSO₄干燥并浓缩。经柱层析(己烷/EtOAc)得到游离乳醇(20mg,54μmol,92％)，为α端基差向异构体和β端基差向异构体的混合物。IRν_max(膜)3413,3031,2872,2110,1496,1454, 1360,1306,1176,1109,1053,1027cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.59–7.20 (m,10H),5.20(d,J＝1.6Hz,0.5H),4.99(d,J＝11.7Hz,1H),4.81–4.64(m,3H), 4.56(d,J＝1.8Hz,0.5H),4.02(t,J＝3.4Hz,1H),3.67(t,J＝3.4Hz,0.5H),3.65– 3.63(m,0.5H),3.60–3.55(m,0.5H),3.44(qd,J＝6.3,1.1Hz,0.5H),1.26(d,J＝ 6.4Hz,1.5H),1.23(d,J＝6.6Hz,1.5H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ138.4, 138.1,137.8,137.3,129.0,128.8(2C),128.6,128.4,128.3,128.2,127.9,127.7, 127.5,127.4,93.6,93.2,79.7,76.7,75.4,74.9,73.8,71.8,71.4,71.2,67.3,60.4,58.3, 17.0,16.9；HRMS(ESI):计算为C₂₀H₂₃N₃O₄Na⁺[M+Na]⁺392.1586,得到 392.1583.根据一般过程(C)，将乳醇(75mg,0.20mmol)与在DCM(2mL)中三氯乙氰(0.20mL,2.0mmol)和K₂CO₃(48mg,0.35mmol)反应得到化合物 8*(65mg,0.13mmol,62％).[α]_D ²⁰＝–32.3°(c＝1.5,CHCl₃)；IRν_max(膜)3336, 2910,2113,1672,1454,1356,1273,1157,1063cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.65–8.49(m,1H),7.43–7.22(m,10H),6.19(d,J＝1.5Hz,1H),5.03(d,J＝11.7 Hz,1H),4.78(d,J＝11.8Hz,1H),4.70(d,J＝3.7Hz,2H),4.09–3.98(m,3H), 3.69(dd,J＝1.6,1.2Hz,1H),1.23(d,J＝6.5Hz,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃) δ159.9,138.2,137.2,128.9,128.8(2C),128.7,128.4,128.3,128.2,128.0,127.9 (2C),97.0,91.0,76.0,75.1,74.5,71.2,70.3,56.2,16.9；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₂₂H₂₃Cl₃N₄O₄Na⁺[M+Na]⁺535.0677,得到535.0660。

实施例9:乙基2-O-苯甲酰基-3,4-二-O-苄基-6-O-(2-萘基甲基)-1-硫代-β-D-葡糖吡喃糖苷(glucopyranoside)(9*)的合成

在0℃向2-O-苯甲酰基-3-O-苄基-4,6-O-亚苄基-1-硫代-β-D-葡糖吡喃糖苷(584mg,1.15mmol)在DCM(10mL)中的溶液逐滴加入BH₃·THF(在THF中为 1M,6.9mL,6.9mmol)和TMSOTf(0.1mL,0.6mmol)。在2h内使反应物升温至室温，再将其冷却至0℃并通过逐滴加入NaHCO₃饱和水溶液淬灭。将乳状液用DCM稀释并用NaHCO₃饱和水溶液洗涤。然后将有机相通过MgSO₄干燥，过滤并浓缩得到粗制醇。在0℃向粗制醇在THF/DMF(9:1,10mL)中的溶液加入溴化萘(509mg,2.30mmol)和NaH(33mg,1.38mmol)。将反应物升温至室温并搅拌30min，冷却至0℃并通过加入水淬灭。用Et₂O稀释后，将有机相用 0.1M HCl和NaHCO₃饱和水溶液洗涤。然后将有机相通过MgSO₄干燥，过滤并浓缩。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到9*(626mg,0.97mmol,84％)。[α]_D ²⁰＝+29.5°(c＝3.1,CHCl₃),IRν_max(膜)3061,3030,2867,1722,1602,1496,1452, 1359,1315,1264,1087,1067,1026cm-¹；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.06–8.01 (m,2H),7.86–7.79(m,4H),7.60–7.42(m,6H),7.26–7.04(m,10H),5.34(dd,J＝10.0,8.9Hz,1H),4.84–4.54(m,7H),3.88–3.74(m,4H),3.60(ddd,J＝9.5,4.5, 2.0Hz,1H),2.81–2.68(m,2H),1.26(t,J＝7.5Hz,3H)；¹³C-NMR(100MHz, CDCl₃)δ165.4,138.0,137.9,135.8,133.4,133.3,133.2,130.1,130.0,128.5(2C), 128.4,128.3,128.1(3C),127.9,127.8(2C),126.6,126.2,126.0,125.9,84.5,83.4, 79.7,78.1,75.4,75.2,73.7,72.6,69.1,24.1,15.1；HRMS(MALDI-TOF):计算为 C₄₀H₄₀O₆SNa⁺[M+Na]⁺671.2438,得到671.2478。

实施例10:乙基3,4-二-O-苄基-2-O-乙酰丙酰基-6-O-(2-萘基甲基)-1-硫代 -β-D-葡糖吡喃糖苷(10*)的合成

向9*(367mg,0.57mmol)在DCM(5.0mL)中的溶液加入在MeOH(5.0mL) 中的0.5MNaOMe并搅拌16h。将混合物用

IR 120(H+)离子交换树脂中和、过滤并浓缩。将剩余物与DMAP(7mg,0.06mmol)、乙酰丙酸(81μL, 0.79mmol)和EDC(120μL,0.68mmol)一起溶解在DCM(5.0mL)中。将反应混合物搅拌4h、浓缩并重新溶解在EtOAc中。将有机层用NH₄Cl饱和水溶液、 NaHCO₃饱和水溶液和盐水洗涤，然后通过MgSO₄干燥并浓缩。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到10*(271mg,0.42mmol,75％).[α]_D ²⁰＝–1.0°(c＝1.5, CHCl₃),IRν_max(膜)3061,3031,2926,2869,1746,1718,1497,1454,1404,1361, 1203,1158,1081,1062cm-¹；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.89–7.73(m,4H), 7.55–7.42(m,3H),7.41–6.97(m,10H),5.11–5.02(m,1H),4.82–4.69(m,5H), 4.56(d,J＝10.8Hz,1H),4.39(d,J＝10.0Hz,1H),3.82–3.68(m,4H),3.53(ddd,J ＝9.2,4.6,2.1Hz,1H),2.80–2.64(m,4H),2.60–2.46(m,2H),2.16(s,3H),1.28(t, J＝7.5Hz,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ206.2,171.6,138.3,137.9,135.7, 133.3,133.1,128.4(2C),128.3,128.2,128.0(2C),127.9(3C),127.8(2C),126.5, 126.2,125.9,125.8,84.4,83.5,79.5,77.9,75.2,75.1,73.6,72.3,68.9,38.0,29.9, 28.2,24.0,15.0；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₃₈H₄₂O₇SNa⁺[M+Na]⁺665.2543, 得到665.2558。

实施例11:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-叠氮基-3-O-苄基-2-脱氧 -4-O-(2-萘基甲基)-β-D-岩藻吡喃糖苷(11*)的合成

在0℃向6*(50mg,78μmol)在DMF(4ml)中的溶液加入BnBr(28μL,240 μmol)、TBAI(3mg,8μmol)和NaH(3mg,125mmol)。3h后在0℃将反应物用 MeOH淬灭并用Et₂O稀释。将有机层用0.1M饱和HCl水溶液、NaHCO₃饱和水溶液和盐水洗涤。将有机层通过MgSO₄干燥并浓缩。经硅胶柱层析(己烷/ 乙酸乙酯)得到11*(32mg,44μmol,56％)。[α]_D ²⁰＝–24.2°(c＝1.6,CHCl₃)；IR ν_max(膜)3031,2935,2110,1697,1496,1454,1421,1362,1230,1172,1111,1068cm-¹；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.42(s,22H),5.19(d,J＝12.8Hz,2H),5.09(d, J＝11.9Hz,1H),4.86(d,J＝11.9Hz,1H),4.79–4.68(m,2H),4.51(d,J＝8.8Hz, 2H),4.22–4.11(m,1H),3.96–3.80(m,2H),3.58(d,J＝2.5Hz,1H),3.51–3.36 (m,2H),3.34–3.17(m,3H),1.67–1.47(m,4H),1.46–1.28(m,2H),1.21(d,J＝ 6.4Hz,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ138.0,137.9,135.8,133.2,133.1,128.6 (2C),128.6,128.1(2C),128.0,127.9,127.8,127.3,126.8,126.1,126.0,102.4,81.1, 74.8,74.7,72.9,70.6,69.8,67.2,63.3,50.6,50.3,47.2,46.3,29.3,28.0,27.6,23.3, 17.1；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₄₄H₄₈N₄O₆Na⁺[M+Na]⁺751.3466,得到 751.3417。

实施例12:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-N-乙酰基-3-O-苄基-2-脱氧 -4-O-(2-萘基甲基)-β-D-岩藻吡喃糖胺糖苷(12*)的合成

根据一般过程(F),使叠氮基-单糖11*(32mg,44μmol)与硫代乙酸反应24 h得到12*(26mg,35μmol,80％)。[α]_D ²⁰＝+8.8°(c＝1.4,CHCl₃)；IRν_max(膜) 3288,3062,2933,1698,1654,1555,1496,1454,1422,1366,1308,1231,1173,1113, 1068cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.93–7.08(m,22H),5.17(d,J＝15.1Hz, 2H),5.06(d,J＝11.9Hz,1H),4.95(d,J＝8.3Hz,1H),4.84(d,J＝12.0Hz,1H), 4.72–4.63(m,1H),4.60–4.32(m,4H),3.92–3.72(m,1H),3.65(d,J＝2.2Hz, 1H),3.57(q,J＝6.3Hz,1H),3.53–3.32(m,2H),3.32–3.09(m,2H),1.98–1.79 (m,3H),1.63–1.41(m,4H),1.33–1.16(m,5H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ 171.1,138.0,133.2,133.0,128.6,128.1,128.0(2C),127.9,127.8,127.3,127.0, 126.7,126.1,125.9,99.4,78.2,75.5,74.7,72.6,70.4,69.5,67.2,55.5,50.3,47.3, 29.1,27.5,23.8,23.5,17.3；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₄₆H₅₂N₂O₇Na⁺ [M+Na]⁺767.3667,得到767.3575。

实施例13:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-N-乙酰基-3-O-苄基-2-脱氧 -β-D-岩藻吡喃糖胺糖苷(13*)的合成

根据一般过程(G)，使单糖12*(20mg,27μmol)与DDQ(12mg,53μmol)在 DCM/H₂O中反应得到醇13*(12mg,20μmol,74％)。[α]_D ²⁰＝+13.9°(c＝1.2, CHCl₃)；IRν_max(膜)3298,3032,2934,1697,1657,1554,1497,1454,1423,1369, 1303,1229,1173,1069cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.53–7.07(m,15H), 5.16(d,J＝18.4Hz,2H),4.85(d,J＝8.4Hz,1H),4.67(d,J＝11.7Hz,1H),4.59– 4.42(m,3H),4.31–4.15(m,1H),3.92–3.72(m,2H),3.61(q,J＝6.4Hz,1H),3.45 –3.10(m,4H),2.34(s,1H),1.99–1.80(m,3H),1.64–1.43(m,4H),1.36–1.20(m, 5H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ170.9,138.0,128.7,128.6,128.1(2C),127.9, 127.4,127.3,99.4,77.4,76.7,71.9,70.0,69.5,68.7,67.3,54.6,50.5,50.3,47.4,29.3, 29.0,27.5,23.8,23.6,16.7；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₃₅H₇₇N₂O₇Na⁺ [M+Na]⁺627.3041,得到627.2969。

实施例14:5-氨基-戊基2-乙酰胺基-2,5-二脱氧-β-D-木-己-4-糖苷(14*)的合成

向醇13*(12mg,20μmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入Dess Martin高价碘化物(17mg,40μmol)并搅拌12h。将反应混合物上硅胶柱并通过柱层析(己烷 /丙酮)纯化以得到粗制的受保护酮。根据一般过程(I)，将粗制的受保护酮进行氢解得到14*，为化合物混合物中的微量组分。HRMS(ESI):计算为 C₁₃H₂₆N₂O₆Na⁺[M+H₂O+Na]⁺329.1689,得到329.1479。

实施例15:5-氨基-戊基2-N-乙酰基-2-脱氧-β-D-岩藻吡喃糖胺糖苷(15*)的合成

根据一般过程(I),D-岩藻糖胺糖苷(fucosaminoside)12*(7mg,9μmol)进行氢解得到15*(2.5mg,8.6μmol,92％)。¹H-NMR(600MHz,D₂O)δ4.43(d,J＝8.5 Hz,1H),3.94–3.81(m,2H),3.80–3.68(m,3H),3.64–3.56(m,1H),3.06–2.96 (m,2H),2.05(s,3H),1.69(dt,J＝15.2,7.6Hz,2H),1.63–1.57(m,2H),1.45– 1.37(m,2H),1.28(d,J＝6.3Hz,3H)；¹³C-NMR(150MHz,D₂O)δ177.2,104.1, 73.8,73.5,73.1,72.6,54.8,41.9,30.8,29.0,24.8,24.7,18.1；HRMS(ESI):计算为 C₁₃H₂₇N₂O₅ ⁺[M+H]⁺291.1920,得到291.1925。

实施例16:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖基-(1→3)-2-叠氮基-2-脱氧-4-O-(2-萘基甲基)-β-D-岩藻吡喃糖苷(16*)的合成

根据一般过程(E)，在–20℃至–15℃使2-叠氮基-3,4-二-O-苄基-2-脱氧-α-L- 岩藻吡喃糖基三氯乙酰亚氨酸酯(140mg,335μmol)与6*(100mg,157μmol)在 DCM(2mL)中在30min内反应得到粗制的二糖。向粗制的二糖在DCM/MeOH (1:1,2mL)中的溶加入在MeOH(0.1mL)中的0.5M NaOMe并搅拌16h。将混合物用

IR 120(H⁺)离子交换树脂中和、过滤并浓缩。经柱层析 (DCM/MeOH/丙酮)得到二糖16*(110mg,136μmol,87％)。[α]_D ²⁰＝–41.6°(c＝ 1.5,CHCl₃)；IRν_max(膜)3328,2936,2119,1697,1422,1255,1095,1070,1028cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.94–7.72(m,4H),7.59–7.44(m,3H),7.41–7.03 (m,10H),5.24(d,J＝3.6Hz,1H),5.17(d,J＝12.9Hz,2H),4.99(d,J＝12.2Hz, 1H),4.80(d,J＝12.2Hz,1H),4.49(d,J＝6.9Hz,2H),4.21(t,J＝9.3Hz,1H),3.99 –3.84(m,2H),3.59–3.39(m,6H),3.31–3.12(m,4H),2.30(s,2H),1.69–1.47(m, 4H),1.43–1.27(m,5H),1.10(d,J＝6.6Hz,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ 136.0,133.2,133.1,128.6,128.3,128.0,127.9,127.8,127.4,126.8,126.6,126.5, 126.3,102.8,99.9,79.1,78.2,75.6,71.4,71.0,69.9,67.9,67.3,66.3,63.8,59.7,50.6, 50.3,47.2,46.3,29.3,23.3,17.3,16.2；HRMS(MALDI-TOF):计算为 C₄₃H₅₁N₇O₉Na⁺[M+Na]⁺832.3640,得到832.3676。

实施例17:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基3,4-二-O-苄基-2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖基-(1→3)-2-叠氮基-2-脱氧-4-O-(2-萘基甲基)-β-D-岩藻吡喃糖苷(17*)的合成

在0℃,向二醇16*(87mg,107μmol)在DMF(5mL)中的溶液加入BnBr(77 μL,645μmol)、TBAI(4mg,11μmol)和NaH(8mg,333mmol)。3h后在0℃将反应物用MeOH淬灭并用Et₂O稀释。将有机层用0.1M饱和HCl水溶液、饱和水溶液NaHCO₃和盐水洗涤。将有机层通过MgSO4干燥并浓缩。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到17*(88mg,89μmol,83％)。[α]_D ²⁰＝–50.2°(c＝1.4, CHCl₃)；IRν_max(膜)2937,2114,1697,1496,1454,1421,1360,1233,1171,1103,1068,1038cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.92–7.72(m,4H),7.63–7.07(m, 23H),5.22(d,J＝3.7Hz,1H),5.18(d,J＝13.1Hz,2H),4.95(d,J＝12.1Hz,1H), 4.83(dd,J＝12.5Hz,2H),4.57–4.36(m,5H),4.21(dd,J＝11.6,8.1Hz,1H),4.02 –3.84(m,2H),3.75(dd,J＝10.8,3.5Hz,1H),3.64–3.40(m,6H),3.33–3.15(m, 3H),1.70–1.49(m,4H),1.43–1.26(m,5H),1.00(d,J＝6.5Hz,3H)；¹³C-NMR (100MHz,CDCl₃)δ138.1,137.6,136.0,133.2,133.0,128.6,128.5,128.4,128.3, 128.0,127.9(2C),127.8,127.3,126.5,126.4,126.2,102.7,100.4,79.4,78.9,75.8, 75.7,74.9,72.2,70.9,70.0,67.2,63.9,59.4,50.6,50.3,47.2,46.3,29.3,28.0,27.5, 23.3,17.3,16.8；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₅₇H₆₃N₇O₉Na⁺[M+Na]⁺1012.4579,得到1012.4502。

实施例18:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-N-乙酰基-3,4-二-O-苄基 -α-L-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-2-N-乙酰基l-4-O-(2-萘基甲基)-β-D-岩藻吡喃糖胺糖苷(18*)的合成

根据一般过程(F)，使叠氮基-二糖17*(88mg,89μmol)与硫代乙酸反应24h 得到18*(82mg,80μmol,90％)。[α]_D ²⁰＝–21.0°(c＝1.2,CHCl₃)；IRν_max(膜)3314, 2933,1682,1497,1454,1366,1304,1233,1172,1104,1063,1029cm^-1；¹H-NMR (400MHz,CDCl₃)δ7.91–7.71(m,4H),7.55–7.04(m,23H),5.21–5.08(m,2H), 5.00–4.62(m,5H),4.60–4.40(m,4H),4.35–4.00(m,3H),3.90–3.66(m,3H), 3.57–3.09(m,7H),2.07–1.84(m,6H),1.65–1.40(m,4H),1.36–1.15(m,5H), 1.05(d,J＝6.5Hz,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ171.4,170.8,133.2,132.9, 128.6,128.5,128.4(2C),128.3,128.2,128.0,127.9,127.8,127.6,127.5,127.4, 127.3,126.4,126.1,126.0,125.5,101.4,100.5,78.5,75.5,74.3,72.2,70.7,68.5, 67.6,67.2,52.0,50.5,48.1,47.6,29.2,28.7,23.6,23.5,17.4,17.0；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₆₁H₇₁N₃O₁₁Na⁺[M+Na]⁺1044.4981,得到1044.4917。

实施例19:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-N-乙酰基-3,4-二-O-苄基 -α-L-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-2-N-乙酰基-β-D-岩藻吡喃糖胺糖苷(19*)的合成

根据一般过程(G)，使二糖18*(46mg,45μmol)与DDQ(30mg,132μmol) 在DCM/H₂O中反应得到醇19*(30mg,34μmol,76％)。[α]_D ²⁰＝–35.7°(c＝1.0, CHCl₃)；IRν_max(膜)3290,3088,2932,1702,1646,1548,1497,1454,1422,1372, 1304,1227,1101,1063,1024cm-¹；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.41–7.14(m, 20H),5.22–5.07(m,2H),5.01–4.85(m,2H),4.84–4.31(m,6H),4.29–4.18(m, 1H),4.11–3.89(m,2H),3.87–3.38(m,6H),3.36–3.04(m,3H),2.00(s,3H),1.91 (s,3H),1.63–1.38(m,4H),1.27(d,J＝6.4Hz,5H),1.17(d,J＝6.5Hz,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ170.8,128.7,128.6,128.5,128.4(2C),128.0,127.6, 127.5,127.4,101.5,101.1,80.4,78.4,75.8,74.8,72.0,71.5,70.1,68.8,67.4,67.3, 51.3,50.6,48.8,47.6,28.7,27.0,23.6,23.5,17.2,16.5；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₅₀H₆₃N₃O₁₁Na⁺[M+Na]⁺904.4355,得到904.4344。

实施例20:5-氨基-戊基2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-2-乙酰胺基 -2,5-二脱氧-β-D-木-己-4-糖苷(20*)的合成

向19*(9mg,10μmol)在DCM(2mL)中的溶液加入Dess Martin高价碘化物 (9mg,9μmol)并搅拌12h。将反应混合物上硅胶柱并通过柱层析(己烷/丙酮) 得到粗制的受保护酮。根据一般过程(I)，将粗制的受保护酮进行氢解得到20*，为化合物的混合物(约2mg,约4μmol,约39％)。¹H-NMR(600MHz,D₂O)δ 5.02(d,J＝4.0Hz,1H),4.49(q,J＝6.5Hz,1H),4.45(d,J＝8.8Hz,1H),4.15(dd, J＝11.2,4.1Hz,1H),3.99(dd,J＝11.2,3.2Hz,1H),3.92–3.83(m,3H),3.66– 3.54(m,3H),3.01–2.97(m,2H),2.06(s,3H),1.98(s,3H),1.70–1.64(m,2H), 1.61–1.55(m,2H),1.42–1.36(m,2H),1.29(d,J＝6.4Hz,3H),1.20(d,J＝6.6Hz,3H)；¹³C-NMR(150MHz,D₂O)δ177.0,176.4,104.0,100.9,95.4,81.4,75.9,73.7, 72.8,70.2,69.9,52.1,42.0,30.8,29.1,24.9,24.8,24.7,17.9,13.8；HRMS(ESI):计算为C₂₁H₄₀N₃O₁₀ ⁺[M+H₂O+H]⁺494.2714,得到494.2740。

实施例21:5-氨基-戊基2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-2-N-乙酰基 -β-D-岩藻吡喃糖胺糖苷(21*)的合成

根据一般过程(I)，将二糖20*(7mg,7μmol)进行氢解得到21*(2.73mg,5.7 μmol,83％)。¹H-NMR(600MHz,D₂O)δ5.00(d,J＝4.0Hz,1H),4.41(d,J＝8.5 Hz,1H),4.15–4.09(m,2H),4.01–3.94(m,2H),3.89(dt,J＝10.2,6.0Hz,1H), 3.85(d,J＝3.0Hz,1H),3.82–3.74(m,3H),3.58(dt,J＝10.1,6.4Hz,1H),3.04– 2.96(m,2H),2.05(s,3H),2.00(s,3H),1.72–1.64(m,2H),1.63–1.55(m,2H), 1.44–1.36(m,2H),1.28(d,J＝6.5Hz,3H),1.24(d,J＝6.6Hz,3H)；¹³C-NMR (150MHz,D₂O)δ176.8,176.7,104.2,101.6,79.4,73.6,73.3,73.1,72.7,70.1,69.7, 54.0,52.1,41.9,30.8,29.1,24.8(2C),24.7,18.0(2C)；HRMS(ESI):计算为 C₂₁H₄₀N₃O₉ ⁺[M+H]⁺478.2765,得到478.2775。

实施例22:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基3,4-二-O-苄基-2-O-乙酰丙酰基-6-O-(2-萘基甲基)-β-D-葡糖吡喃糖苷(22*)的合成

根据一般过程(B)，在–30℃至–20℃使硫代葡萄糖苷10*(30mg,47μmol)与 N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊醇(31mg,93μmol)、NIS(13mg,56μmol)和 TfOH(0.8μL,9μmol)在DCM(1mL)中在1h内反应。经柱层析(己烷/EtOAc) 加工后得到22*(26mg,29μmol,61％)。[α]_D ²⁰＝+3.7°(c＝0.9,CHCl₃)；IRν_max (膜)2924,1747,1698,1454,1421,1362,1210,1153,1071cm^-1；¹H-NMR(400 MHz,CDCl₃)δ7.84–7.76(m,4H),7.26(s,22H),7.09–7.05(m,2H),5.21–5.13 (m,3H),4.98(t,J＝8.6Hz,1H),4.77(d,J＝10.9Hz,3H),4.70(d,J＝11.6Hz,2H), 4.53–4.44(m,4H),4.37–4.27(m,1H),3.85–3.59(m,5H),3.53–3.11(m,3H), 2.82–2.39(m,4H),2.17–2.03(m,2H),1.62–1.43(m,8H),1.37–1.17(m,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ171.5,138.4,133.4,133.1,128.7,128.5,128.3,128.1 (2C),128.0,127.9,127.8(2C),126.7,126.2,126.0,101.1,83.0,78.1,75.2(2C),75.1, 73.7(2C),69.6,68.8,67.3,50.3,47.2,37.9,30.0,29.3,28.1,23.3；HRMS (MALDI-TOF):计算为C₅₆H₆₁NO₁₀Na⁺[M+Na]⁺930.4188,得到930.4190。

实施例23:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基3,4-二-O-苄基-6-O-(2-萘基甲基)-β-D-葡糖吡喃糖苷(23*)的合成

向22*(13mg,14μmol)在DCM(1mL)中的溶液加入溶解在AcOH(40μL) 和吡啶(60μL)中的水合肼(2.8μL,57μmol)，将溶液搅拌1h。然后通过加入丙酮将反应物淬灭并浓缩。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到23*(10mg,12 μmol,86％)。[α]_D ²⁰＝+4.9°(c＝1.0,CHCl₃)；IRν_max(膜)2926,1698,1454,1230, 1063cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.84–7.01(m,27H),5.16(d,J＝9.8Hz, 2H),4.93(t,J＝11.1Hz,1H),4.81(dd,J＝11.0,6.1Hz,2H),4.75(d,J＝12.4Hz, 1H),4.67(d,J＝12.4Hz,1H),4.51–4.43(m,3H),4.26–4.17(m,1H),4.02–3.79(m,2H),3.78–3.67(m,2H),3.60–3.44(m,4H),3.30–3.12(m,2H),1.66–1.43 (m,4H),1.38–1.19(m,2H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ138.0,135.7,133.4, 133.1,128.7,128.6,128.5,128.3,128.1,128.0(2C),127.8,127.3,126.8,126.2, 126.0,103.1,84.7,77.7,75.3,75.2,74.8,73.7,70.1,69.9,69.0,67.3,50.3,47.2,46.2, 32.4,29.3,27.5,23.5；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₅₁H₅₅NO₈Na⁺[M+Na]⁺ 832.3820,得到832.3870。

实施例24:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-叠氮基-3,4-二-O-苄基-2-脱氧-α-L-肺炎吡喃糖基-(1→2)-3,4-二-O-苄基-6-O-(2-萘基甲基)-β-D-葡糖吡喃糖苷 (24*)的合成

根据一般过程(E)，在–30℃至–20℃使肺炎糖基-亚氨酸酯8*(12mg,23 μmol)与23*(10mg,12μmol)在DCM(1mL)中在30min内反应得到24*(13mg, 11μmol,91％)。[α]_D ²⁰＝–0.7°(c＝0.7,CHCl₃)；IRν_max(膜)2929,2868,2112,1697, 1496,1454,1421,1361,1229,1126,1057cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.86 –7.72(m,4H),7.50–7.43(m,3H),7.41–7.02(m,30H),5.24–5.08(m,3H),4.93 (dd,J＝30.9,11.5Hz,2H),4.77–4.44(m,10H),4.26–4.08(m,2H),3.85–3.67 (m,4H),3.66–3.51(m,5H),3.47–3.29(m,2H),3.25–3.09(m,2H),1.61–1.38 (m,4H),1.32–1.03(m,5H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ137.9,133.4,133.1,128.8,128.7(2C),128.6(2C),128.4,128.2,128.1,128.0,127.9,127.8,127.2,126.8,126.3,126.0(2C),101.8,99.2,78.7,77.4,75.7,75.1(2C),73.8(2C),70.9,68.9,67.3,66.9,29.5,23.4,17.0；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₇₁H₇₆N₄O₁₁Na⁺[M+Na]⁺ 1183.5403,得到1183.5391。

实施例25:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-N-乙酰基-3,4-二-O-苄基 -α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-3,4-二-O-苄基-6-O-(2-萘基甲基)-β-D-葡糖吡喃糖苷 (25*)的合成

根据一般过程(F)，使叠氮基-二糖24*(13mg,11μmol)与硫代乙酸反应24h 得到25*(10mg,8μmol,76％)。[α]_D ²⁰＝–31.1°(c＝1.0,CHCl₃)；IRν_max(膜)2930, 1698,1497,1454,1363,1229,1056cm-¹；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.85–7.73 (m,4H),7.49–7.43(m,3H),7.35–7.12(m,28H),7.08–7.02(m,2H),7.01–6.94 (m,1H),5.28(s,1H),5.21–5.13(m,2H),4.90–4.81(m,3H),4.77–4.67(m,5H), 4.60–4.54(m,1H),4.51–4.30(m,5H),4.28–4.20(m,1H),3.90–3.78(m,2H), 3.76–3.57(m,6H),3.49–3.43(m,1H),3.38(s,1H),3.28–3.14(m,2H),1.65(s, 3H),1.58–1.45(m,4H),1.30–1.16(m,5H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ169.8,138.5,138.3,137.9,135.7,133.4,133.2,128.7(2C),128.5(3C),128.3(2C),128.2,128.1,128.0(3C),127.9,127.7,127.6,126.8,126.3,126.0,102.0,100.3,86.0,79.0,78.5,77.4,75.6(2C),75.1,75.0,73.8,73.3,70.0,69.0,67.3,66.6,50.7,50.4,47.6,29.6,27.7,23.5,23.3,16.8；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₇₃H₈₀N₂O₁₂Na⁺ [M+Na]⁺1199.5603,得到1199.5599。

实施例26:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-N-乙酰基-3,4-二-O-苄基 -α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-3,4-二-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖苷(26*)的合成

根据一般过程(G)，使二糖25*(10mg,8μmol)与DDQ(6mg,25μmol)反应4h得到伯醇26*(7mg,7μmol,79％)。[α]_D ²⁰＝–34.5°(c＝0.7,CHCl₃)；IRν_max (膜)3404,2925,1697,1497,1454,1421,13621260,1027cm^-1；¹H-NMR(400MHz, CDCl₃)δ7.39–7.16(m,30H),7.04–6.93(m,1H),5.28(s,1H),5.23–5.14(m, 2H),4.92–4.83(m,3H),4.80(d,J＝11.0Hz,1H),4.72(d,J＝12.2Hz,2H),4.63– 4.55(m,2H),4.53–4.47(m,2H),4.45–4.37(m,1H),4.35–4.23(m,2H),3.90–3.72(m,3H),3.72–3.53(m,5H),3.47–3.30(m,2H),3.29–3.14(m,2H),1.66(s, 3H),1.58–1.45(m,4H),1.30–1.16(m,5H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ169.8,138.5,138.2,138.0,128.7(3C),128.5(2C),128.3,128.2(2C),128.1,128.0,127.7,127.6,102.0,100.4,85.7,78.9,78.1,77.4,75.8,75.6,75.1,73.2,70.0,67.4,66.7,62.1,50.5,47.6,47.2,29.4,28.1,27.4,23.3,16.7；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₆₂H₇₂N₂O₁₂Na⁺[M+Na]⁺1059.4977,得到1059.4938。

实施例27:5-氨基-戊基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯(27*)的合成

根据一般过程(H)，使醇26*(6mg,6μmol)与TEMPO(0.2mg,2μmol)和 BAIB(9mg,30μmol)反应得到受保护的糖醛酸酯二糖。根据一般过程(I)，将糖醛酸酯二糖进行氢解得到27*(1.6mg,3.4μmol,59％)。¹H-NMR(600MHz,D₂O)δ 5.15(s,1H),4.55(d,J＝7.9Hz,1H),4.33(q,J＝6.7Hz,1H),4.23(d,J＝4.8Hz, 1H),4.09(dd,J＝4.8,3.2Hz,1H),3.92(dt,J＝10.0,6.9Hz,1H),3.85–3.81(m, 1H),3.74–3.65(m,3H),3.55–3.50(m,1H),3.43(dd,J＝9.0,8.0Hz,1H),3.00(t, J＝7.6Hz,2H),2.06(s,3H),1.73–1.66(m,4H),1.49–1.42(m,2H),1.26(d,J＝ 6.6Hz,3H)；¹³C-NMR(150MHz,D₂O)δ178.4,176.74,103.6,102.6,80.8,78.8, 78.7,74.3,73.6,72.7,69.9,66.5,53.8,42.0,30.9,28.9,25.0,24.7,18.1；HRMS(ESI):计算为C₁₉H₃₄N₂O₁₁Na⁺[M+Na]⁺489.2060,得到489.2060。

化合物27*a-27*e构成根据本发明的另外的实施例，其可按照对化合物27 所描述的过程得到：

22-(2-氨基乙氧基)乙基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基 7*a-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯

化学式：C₁₈H₃₂N₂O₁₂，精确质量：468.1955。

22-氨基-2,2-二氟丙基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2) 7*b-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯

化学式：C₁₇H₂₈F₂N₂O₁₁；精确质量：474.1661。

2N-(2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖 7*c基糖醛酸酯)-6-氨基-己酰胺

化学式：C₂₂H₃₉N₃O₁₂，精确质量：537.2534。

2N-(2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖 7*d基糖醛基-2-乙氧基乙基)-3-氨基丙酰胺

化学式：C₂₂H₃₉N₃O₁₂，精确质量：537.2534。

23-(3-氨基丙基)脲基-丙基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基- 7*e(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯

化学式：C₂₁H₃₈N₄O₁₂，精确质量：538.2486。

实施例28:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基4-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧 -α-L-岩藻吡喃糖基-(1→3)-2-叠氮基-2-脱氧-4-O-(2-萘基甲基)-β-D-岩藻吡喃糖苷 (28*)的合成

向二糖16*(110mg,136μmol)在DMF(1mL)中的溶液加入原乙酸三甲酯 (104μL,815μmol)和p-TSA(4mg,21μmol)并将反应混合物搅拌30min。加入三乙胺(2滴)并使用甲苯作为恒沸物在真空下去除溶剂。将粗制剩余物放在 80％乙酸(3mL)并将反应混合物搅拌1h。使用甲苯作为恒沸物在真空下去除溶剂。经硅胶柱层析得到(己烷/EtOAc)28*(92mg,108μmol,80％)。[α]_D ²⁰＝– 50.9°(c＝1.3,CHCl₃)；IRν_max(膜)3436,2937,2114,1743,1696,1423,1363,1232, 1165,1125,1093,1070,1036cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.95–7.74(m,4H),7.59–7.47(m,3H),7.41–7.10(m,10H),5.24(d,J＝3.6Hz,1H),5.17(d,J＝ 13.3Hz,2H),5.05(d,J＝12.4Hz,1H),4.74(d,J＝12.4Hz,1H),4.49(d,J＝7.6Hz, 2H),4.41(d,J＝2.2Hz,1H),4.21(dd,J＝11.2,8.3Hz,1H),4.01–3.84(m,2H), 3.60–3.37(m,6H),3.31–3.16(m,3H),2.09(s,3H),1.67–1.48(m,4H),1.44– 1.27(m,5H),0.94(d,J＝6.6Hz,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ171.3,138.0, 136.0,133.1(2C),128.6,128.4,127.9,127.8,127.3,126.9,126.8,126.7,126.5, 102.7,99.8,79.2,78.1,75.8,72.7,71.0,70.0,67.2,66.5,65.4,63.9,59.6,50.6,50.3, 47.2,46.3,29.3,28.0,27.5,23.3,20.8,17.3,16.1；HRMS(MALDI-TOF):计算为 C₄₅H₅₃N₇O₁₀Na⁺[M+Na]⁺874.3746,得到874.3737。

实施例29:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基3,4-二-O-苄基-6-O-(2-萘基甲基)-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→3)-4-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖基 -(1→3)-2-叠氮基-2-脱氧-4-O-(2-萘基甲基)-β-D-岩藻吡喃糖苷(29*)的合成

根据一般过程(B)，在–20℃至–10℃在1h内使硫代葡萄糖苷10*(75mg,117 μmol)与二糖28*(50mg,59μmol)、NIS(29mg,129μmol)和TfOH(1μL,12μmol) 在DCM(2mL)中反应得到粗制的三糖。向粗制的三糖在DCM(3mL)中的溶液加入溶解在AcOH(40μL)和吡啶(60μL)的水合肼(11μL,μmol)并将溶液搅拌1h。然后通过加入丙酮将反应物淬灭并浓缩。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯) 得到醇29*(72mg,54μmol,91％)。[α]_D ²⁰＝–19.2°(c＝1.0,CHCl₃)；IRν_max(膜) 2936,2115,1697,1454,1360,1235,1069cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.87 –7.72(m,8H),7.50–7.17(m,24H),7.10–7.03(m,2H),5.33(d,J＝3.6Hz,1H), 5.19(d,J＝12.8Hz,2H),5.05(d,J＝11.3Hz,1H),4.98(d,J＝12.3Hz,1H),4.88– 4.70(m,6H),4.60–4.46(m,4H),4.32–4.19(m,1H),4.09(d,J＝7.0Hz,1H),4.01 –3.86(m,3H),3.74–3.66(m,3H),3.63–3.42(m,7H),3.40(d,J＝2.1Hz,1H), 3.33–3.18(m,3H),2.13(s,3H),1.71–1.50(m,4H),1.47–1.21(m,5H),0.90(d,J ＝6.5Hz,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ174.1,138.4,138.2,138.0,137.9, 135.6,133.2,133.0,132.9,128.5,128.4,128.3,128.1(2C),128.0,127.9,127.8, 127.7(2C),127.6(2C),127.5,127.3,127.2,126.7,126.5,126.4,126.3,126.1,126.0, 125.7,102.7,100.3,100.2,85.1,82.0,77.9,77.4,77.0,76.7,75.5,75.5,75.0,74.9, 74.5,74.2,73.4,70.8,69.8,68.5,67.1,63.8,58.1,29.2,27.9,23.2,17.1,16.6；HRMS (MALDI-TOF):计算为C₇₆H₈₃N₇O₁₅Na⁺[M+Na]⁺1356.5839,得到1356.5896。

实施例30:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-叠氮基-3,4-二-O-苄基-2-脱氧-α-L-肺炎吡喃糖基-(1→2)-3,4-二-O-苄基-6-O-(2-萘基甲基)-β-D-葡糖吡喃糖基 -(1→3)-4-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖基-(1→3)-2-叠氮基-2-脱氧-4-O-(2-萘基甲基)-β-D-岩藻吡喃糖苷(30*)的合成

根据一般过程(E)，在–30℃至–20℃在30min内使肺炎糖基-亚氨酸酯 8*(100mg,196μmol)和三糖29*(58mg,43μmol)在DCM(2mL)反应得到四糖 30*(40mg,24μmol,55％)。[α]_D ²⁰＝–38.3°(c＝1.2,CHCl₃)；IRν_max(膜)2936, 2114,1744,1697,1496,1454,1361,1231,1065cm-¹；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.85–6.94(m,44H),5.34(d,J＝3.7Hz,1H),5.23(s,1H),5.21–5.10(m,3H), 4.96(dd,J＝11.8,3.2Hz,2H),4.88(d,J＝11.3Hz,1H),4.77–4.36(m,12H),4.27 –4.14(m,2H),4.08–3.99(m,1H),3.95–3.85(m,2H),3.81–3.76(m,1H),3.74– 3.60(m,5H),3.58–3.37(m,8H),3.33–3.16(m,3H),1.90(s,3H),1.64–1.46(m, 4H),1.42–1.22(m,5H),1.19(d,J＝6.5Hz,3H),0.83(d,J＝6.4Hz,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ170.3,138.4,138.0,137.9,137.7,135.6,133.2,133.1, 133.0,128.9,128.7,128.6(2C),128.5,128.4,128.3,128.2,128.1,128.0(2C),127.9, 127.8,127.7,127.4,127.2,126.8,126.5,126.4,126.1,125.9,125.8,102.8,100.1, 98.6,96.7,84.8,78.7,78.5,77.4,76.0,75.3,75.1,75.0,74.7,73.3,71.0,70.9,69.9, 68.9,68.7,67.3,65.7,63.9,57.4,57.0,29.3,27.6,23.3,20.9,17.6,16.8,16.3；HRMS (MALDI-TOF):计算为C₉₆H₁₀₄N₁₀O₁₈Na⁺[M+Na]⁺1707.7422,得到1707.7445。

实施例31:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-N-乙酰基-3,4-二-O-苄基 -α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-3,4-二-O-苄基-6-O-(2-萘基甲基)-β-D-葡糖吡喃糖基 -(1→3)-4-O-乙酰基-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-2-N-乙酰基-4-O-(2- 萘基甲基)-β-D-岩藻吡喃糖胺糖苷(31*)的合成

根据一般过程(F)，使叠氮基-四糖30*(40mg,24μmol)与硫代乙酸反应48h 得到31*(31mg,18μmol,75％)。[α]_D ²⁰＝–58.3°(c＝1.2,CHCl₃)；IRν_max(膜)2963, 1740,1674,1519,1454,1365,1260,1234,1025cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.89–6.61(m,44H),5.40–5.04(m,6H),4.95–4.80(m,2H),4.79–4.11(m,16H), 4.10–3.92(m,2H),3.91–3.73(m,4H),3.74–3.54(m,4H),3.54–3.31(m,4H), 3.30–3.02(m,4H),2.00(s,3H),1.90–1.85(m,3H),1.68(s,3H),1.58–1.38(m, 4H),1.38–1.23(m,5H),1.20(d,J＝6.4Hz,3H),1.10–1.00(m,3H)；¹³C-NMR (100MHz,CDCl₃)δ171.2,170.7(2C),170.0,138.5,138.1,137.9,137.7,136.2, 133.4,133.1(2C),133.0,128.8,128.7,128.5(2C),128.4,128.2,128.0,127.9,127.7 (2C),127.6,127.5,127.4,127.3,126.7,126.3,125.9,125.5,100.7,98.7,98.6,97.1, 84.1,79.1,78.4,77.4,75.6,75.0,74.5,74.0,73.8,73.5,73.3,73.1,70.7,70.1,69.7, 69.3,68.1,67.3,66.9,66.0,50.4,48.6,47.6,47.4,29.0,27.2,23.8,23.4,23.1,21.0, 17.3,16.9,16.7；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₁₀₂H₁₁₆N₄O₂₁Na⁺[M+Na]⁺ 1755.8024,得到1755.8089。

实施例32:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-N-乙酰基-3,4-二-O-苄基α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-3,4-二-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→3)-2-N-乙酰基 -α-L-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-2-N-乙酰基-β-D-岩藻吡喃糖胺糖苷(32*)的合成

向31*(19mg,11μmol)在DCM/MeOH(1:1,1mL)中的溶液加入在MeOH (0.5mL)中的0.5M NaOMe并搅拌16h。将混合物用

IR 120(H⁺)离子交换树脂中和、过滤并浓缩。根据一般过程(G)，使粗制材料与DCM/H₂O中的DDQ(9mg,40μmol)反应得到三醇32*(10mg,7μmol,64％)。[α]D²⁰＝–69.7° (c＝1.0,CHCl₃)；IRν_max(膜)3400,3030,2933,1656,1524,1497,1454,1421,1366, 1305,1232,1055cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.53–6.98(m,30H),5.25– 5.01(m,4H),4.94–4.70(m,4H),4.67–4.34(m,7H),4.28–4.10(m,4H),4.00–3.10(m,19H),2.06(s,3H),1.99–1.94(m,3H),1.70(s,3H),1.63–1.37(m,4H), 1.37–1.07(m,11H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ171.6,170.9,170.1,138.3, 128.7,128.6(2C),128.5,128.4,128.3,128.2,128.1,127.7,127.5,127.3,127.2, 126.8,101.7,101.4,101.2,100.6,99.5,84.2,80.8,78.5,77.5,77.4,77.2,76.8,75.7, 75.5,75.2,72.7,72.5,71.8,71.3,70.2,69.7,68.7,68.6,68.2,67.3,66.9,61.9,51.4, 50.6,49.5,48.5,47.9,23.9,23.8,23.5,21.2,16.6；HRMS(MALDI-TOF):计算为 C₇₈H₉₈N₄O₂₀Na⁺[M+Na]⁺1433.6666,得到1433.6640。

实施例33:5-氨基-戊基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-2-N-乙酰基-β-D-岩藻吡喃糖胺糖苷(33*)的合成

根据一般过程(H)，使三醇32*(10mg,7μmol)与TEMPO(0.3mg,2μmol) 和BAIB(6mg,19μmol)反应得到受保护的糖醛酸酯四糖。根据一般过程(I)，将糖醛酸酯四糖进行氢解得到羧酸33*(4.9mg,5.8μmol,83％)。¹H-NMR(600 MHz,D₂O)δ5.18(s,1H),5.07(d,J＝3.9Hz,1H),4.69(d,J＝7.8Hz,1H),4.65(q, J＝6.7Hz,1H),4.41(d,J＝8.6Hz,1H),4.37(dd,J＝11.6,3.0Hz,1H),4.18(d,J＝ 4.8Hz,1H),4.12(dd,J＝4.7,3.2Hz,1H),4.10–4.06(m,2H),4.03(dd,J＝11.6, 3.9Hz,1H),3.94(t,J＝9.6Hz,1H),3.88(dt,J＝10.1,6.0Hz,1H),3.82–3.74(m, 4H),3.73–3.68(m,2H),3.61–3.52(m,2H),3.51(dd,J＝9.2,7.9Hz,1H),3.02– 2.98(m,2H),2.05(s,3H),2.04(s,3H),2.00(s,3H),1.71–1.65(m,2H),1.61–1.56(m,2H),1.44–1.37(m,2H),1.28(d,J＝6.5Hz,3H),1.24(d,J＝6.6Hz,3H),1.15 (d,J＝6.6Hz,3H)；¹³C-NMR(150MHz,D₂O)δ178.4,176.8,176.5,176.3,104.2, 102.1,101.0,98.2,79.1,78.8,78.1,74.3,73.7,73.5,73.2,73.1,72.6,69.8,69.6,68.9, 66.4,54.0,53.7,51.0,41.9,30.8,29.0,25.0,24.9,24.8,24.7,18.1,18.0,17.9；HRMS (ESI):计算为C₃₅H₆₀N₄O₁₉Na⁺[M+Na]⁺863.3744,得到864.3774。

化合物33*a-33*e构成根据本发明的另外的实施例，其可按照对化合物33* 所描述的过程得到：

33*a2-(2-氨基乙氧基)乙基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-2-N-乙酰基-β-D-岩藻吡喃糖胺糖苷

化学式：C₃₄H₅₈N₄O₂₀；精确质量：842.3644。

33-氨基-2,2-二氟-丙基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基 3*b-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺基 -(1→3)-2-N-乙酰基-β-D-岩藻吡喃糖胺糖苷

化学式：C₃₃H₅₄F₂N₄O₁₉；精确质量：848.3350。

3N-(2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基 3*c-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-2-N-乙酰基-β-D-岩藻吡喃糖胺基)-6-氨基-己酰胺

化学式：C₃₈H₆₅N₅O₂₀；精确质量：911.4223。

3N-(2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基 3*d-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-2-N-乙酰基-β-D-岩藻吡喃糖胺基2-乙氧基乙基)-3-氨基丙酰胺

化学式：C₃₈H₆₅N₅O₂₁；精确质量：927.4172.

33-(3-氨基丙基)脲基-丙基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基 3*e-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺基 -(1→3)-2-N-乙酰基-β-D-岩藻吡喃糖胺糖苷

化学式：C₃₇H₆₄N₆O₂₀；精确质量：912.4175。

实施例34:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-叠氮基-3,4-二-O-苄基-2-脱氧-L-肺炎吡喃糖苷(34*α和34*β)的合成

根据一般过程(E)，在–30℃至–20℃在30min内使肺炎糖基-亚氨酸酯 8*(30mg,58μmol)和N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊醇(38mg,117μmol)在 DCM(1mL)中反应得到α端基差向异构体34*α(28mg,41μmol,71％)和β端基差向异构体34*β(10mg,15μmol,25％)。34*α:[α]_D ²⁰＝–18.0°(c＝1.3,CHCl₃)； IRν_max(膜)2934,2111,1697,1496,1454,1422,1360,1229,1061cm^-1；¹H-NMR (400MHz,CDCl₃)δ7.60–7.06(m,20H),5.18(d,J＝13.0Hz,2H),4.99(d,J＝ 11.7Hz,1H),4.79–4.69(m,3H),4.64(d,J＝11.8Hz,1H),4.50(d,J＝6.9Hz,2H),3.98–3.85(m,2H),3.83–3.73(m,1H),3.62(s,1H),3.58–3.45(m,1H),3.37– 3.15(m,3H),1.58–1.41(m,4H),1.31–1.16(m,5H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃) δ138.4,137.8,128.8,128.7,128.6,128.3,128.1,127.9(2C),127.7,127.4,98.6,77.2, 75.2,74.9,71.2,67.7,67.3,66.9,58.1,50.6,50.3,47.2,46.2,29.1,23.5,16.9.34*β: [α]_D ²⁰＝+59.2°(c＝0.9,CHCl₃)；IRν_max(膜)2928,2110,1697,1496,1454,1421, 1359,1229,1119,1070cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.55–7.09(m,20H), 5.17(d,J＝12.4Hz,2H),5.02(d,J＝11.9Hz,1H),4.77–4.70(m,2H),4.62(d,J＝ 12.2Hz,1H),4.53–4.44(m,2H),4.31(d,J＝14.7Hz,1H),3.96–3.78(m,2H), 3.52(s,2H),3.44–3.14(m,4H),1.62–1.45(m,4H),1.38–1.20(m,5H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ138.6,138.1,137.6,128.7,128.6,128.2,128.1,128.0, 127.9,127.6(2C),127.4,100.1,78.8,77.5,77.2,76.8,74.8,74.1,71.8,70.8,69.3, 67.2,58.8,29.3,23.4,16.9；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₄₀H₄₆N₄O₆Na⁺ [M+Na]⁺701.3310,得到701.3337。

实施例35:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-N-乙酰基-3,4-二-O-苄基-L- 肺炎吡喃糖胺糖苷(35*α和35*β)的合成

根据一般过程(F)，使叠氮基-肺炎糖苷(pneumoside)34*α(28mg,41μmol) 与34*β(10mg,15μmol)分别与硫代乙酸反应12h得到35*α(19mg,27μmol, 66％)和35*β(7mg,10μmol,68％)。35*α:[α]_D ²⁰＝–47.4°(c＝1.9,CHCl₃)；IRν_max (膜)3404,2935,1698,1675,1515,1497,1454,1421,1361,1305,1228,1120,1055, 1040cm-¹；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.43–7.12(m,20H),5.18(d,J＝14.2Hz, 2H),4.90(d,J＝10.3Hz,1H),4.75–4.68(m,2H),4.60(d,J＝10.3Hz,1H),4.56– 4.40(m,4H),3.92–3.79(m,2H),3.67–3.60(m,1H),3.59–3.15(m,5H),1.74(s, 3H),1.61–1.40(m,4H),1.35–1.15(m,5H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ170.4, 138.3,138.2,138.0,128.7,128.6,128.5(2C),128.2,128.1,127.9,127.7(2C),127.4, 127.3,100.1,78.7,75.7,72.8,69.9,67.7,67.3,66.3,50.6,50.3,48.0,47.2,46.2,29.3, 28.1,27.7,23.5,16.8.35*β:[α]_D ²⁰＝+18.3°(c＝0.7,CHCl₃)；IRν_max(膜)3420, 2929,2865,1698,1677,1521,1454,1421,1367,1312,1230,1113,1058cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.42–7.13(m,20H),6.79(d,J＝9.8Hz,1H),5.16(d, J＝11.6Hz,2H),4.91(d,J＝10.2Hz,1H),4.84–4.73(m,2H),4.58(d,J＝10.2Hz, 1H),4.52–4.42(m,3H),4.28(d,J＝13.1Hz,1H),3.80–3.65(m,1H),3.59–3.51 (m,2H),3.50–3.35(m,2H),3.27–3.10(m,2H),1.76(s,3H),1.59–1.43(m,4H), 1.34–1.17(m,5H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ170.7,138.2,138.1,128.8,128.6 (2C),128.5,128.1,128.0,127.9(2C),127.8,127.3,100.5,77.7,76.2,75.7,71.4,69.8, 67.2,47.9,29.3,23.6,23.3,16.8；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₄₂H₅₀N₂O₇Na⁺ [M+Na]⁺717.3510,得到717.3543。

实施例36:5-氨基-戊基2-N-乙酰基-L-肺炎吡喃糖胺糖苷(36*和37*)的合成

根据一般过程(I)，使肺炎糖胺糖苷35*α(19mg,27μmol)和35*β(7mg,10 μmol)分别进行氢解得到36*(7mg,24μmol,88％)和37*(2mg,7μmol,68％)。 36*:¹H-NMR(400MHz,D₂O)δ4.75(s,1H),4.13–3.93(m,3H),3.78(s,1H),3.71 –3.61(m,1H),3.55–3.44(m,1H),3.03–2.91(m,2H),2.01(s,3H),1.74–1.57(m, 4H),1.49–1.35(m,2H),1.22(d,J＝6.6Hz,3H)；¹³C-NMR(150MHz,D₂O)δ176.8, 101.6,73.5,70.2,69.5,66.6,53.9,42.0,30.5,29.2,25.0,18.1.37*:¹H-NMR(400 MHz,D₂O)δ4.61(d,J＝1.7Hz,1H),4.29(d,J＝5.0Hz,1H),3.88(dd,J＝4.5,3.4 Hz,1H),3.81(dt,J＝9.9,6.3Hz,1H),3.71–3.58(m,3H),3.00–2.93(m,2H),2.02 (s,3H),1.68–1.54(m,4H),1.42–1.33(m,2H),1.25(d,J＝6.5Hz,3H)；¹³C-NMR(150MHz,D₂O)δ177.2,102.4,74.2,72.9,72.0,70.1,54.5,42.0,30.8,29.3,25.9, 25.2,24.8,18.0；HRMS(ESI):计算为C₁₃H₂₆N₂O₅Na⁺[M+Na]⁺313.1739,得到 313.1750。

实施例37:叔己基二甲基甲硅烷基3-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖苷(38*)和叔己基二甲基甲硅烷基4-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖苷(39*)的合成

在0℃向2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖苷(200mg,0.60mmol)在DCM/ 吡啶(4:1(v/v),10mL)中的溶液逐滴加入AcCl(51μL,0.72mmol)在DCM(1mL) 中的并在相同的温度搅拌6h。将混合物用DCM稀释并用NaHCO₃饱和水溶液洗涤。将合并的有几层通过MgSO₄干燥、过滤并浓缩。经硅胶柱层析(DCM/MeOH/ 丙酮)得到38*(163mg,0.44mmol,72％)。[α]_D ²⁰＝+4.4°(c＝1.0,CHCl₃)；IRν_max (膜)3483,2958,2868,2111,1747,1726,1465,1370,1251,1171,1145,1069,1039 cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.66(dd,J＝10.8,3.1Hz,1H),4.50(d,J＝7.6 Hz,1H),3.77(d,J＝2.6Hz,1H),3.61(qd,J＝6.4,0.8Hz,1H),3.55(dd,J＝10.8, 7.6Hz,1H),2.16(s,3H),1.66(dt,J＝13.7,6.9Hz,1H),1.28(d,J＝6.5Hz,3H),0.89(d,J＝1.0Hz,3H),0.88(s,9H),0.19(s,6H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ 170.3,97.3,74.0,70.4,69.5,63.5,34.0,25.0,21.2,20.1,20.0,18.6,18.5,16.4,-1.9, -3.2；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₁₆H₃₁N₃O₅SiNa⁺[M+Na]⁺396.1925,得到 396.1911.得到叔己基二甲基甲硅烷基4-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-α-l-岩藻吡喃糖苷(39*)(22mg,0.06mmol,10％)作为副产物。[α]_D ²⁰＝+5.3°(c＝1.3,CHCl₃)； IRν_max(膜)3462,2959,2869,2112,1744,1465,1443,1380,1252,1185,1114,1073 cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.09(dd,J＝3.5,1.1Hz,1H),4.48(d,J＝7.6Hz, 1H),3.65(qd,J＝6.4,1.2Hz,1H),3.57(dd,J＝10.4,3.6Hz,1H),3.40(dd,J＝10.4, 7.6Hz,1H),2.19(s,3H),1.68(dt,J＝13.7,6.9Hz,1H),1.17(d,J＝6.5Hz,3H), 0.93–0.86(m,12H),0.19(d,J＝1.6Hz,6H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ171.7, 97.2,71.9,71.1,69.4,66.5,34.0,25.0,21.0,20.1,20.0,18.6,18.3,16.5,-1.9,-3.0； HRMS(MALDI-TOF):计算为C₁₆H₃₁N₃O₅SiNa⁺[M+Na]⁺396.1925,得到396.1954。

实施例38:叔己基二甲基甲硅烷基2-O-苯甲酰基-3,4,6-三-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→3)-4-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖苷(40*)的合成

根据一般过程(B)，在–25℃至–20℃使2-O-苯甲酰基-3,4,6-三-O-苄基-1- 硫代-β-D-葡糖吡喃糖苷(109mg,0.18mmol)与岩藻糖苷39*(62mg,0.17mmol)、 NIS(45mg,0.20mmol)和TfOH(1.8μL,20μmol)在DCM(1mL)中反应1h。经柱层析(己烷/EtOAc)加工后得到40*(139mg,0.15mmol,92％)。[α]_D ²⁰＝–13.9° (c＝1.9,CHCl₃)；IRν_max(膜)2958,2867,2113,1744,1496,1453,1364,1267,1234, 1179,1095,1071cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.10–8.03(m,2H),7.60– 7.54(m,1H),7.50–7.42(m,2H),7.41–7.21(m,10H),7.16–7.02(m,5H),5.32(dd, J＝9.1,7.7Hz,1H),5.12(d,J＝2.8Hz,1H),4.82(d,J＝11.0Hz,1H),4.76–4.66 (m,4H),4.63(dd,J＝11.0,6.5Hz,2H),4.36(d,J＝7.7Hz,1H),3.89(dd,J＝10.4, 3.5Hz,1H),3.86–3.80(m,2H),3.79–3.72(m,2H),3.62(ddd,J＝9.4,5.3,1.9Hz,1H),3.50–3.41(m,2H),1.73–1.62(m,1H),1.49(s,3H),1.07(d,J＝6.4Hz,3H), 0.92–0.87(m,12H),0.17(d,J＝4.6Hz,6H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ170.6, 164.9,138.6,138.0,137.8,133.3,130.2,129.8,128.6,128.5,128.4,128.3,128.2, 128.1,128.0,127.7,127.6(2C),97.1,96.8,83.0,78.1,75.7,75.3,75.1,74.6,73.7, 73.5,69.0,68.9,67.8,63.9,34.0,25.0,20.2,20.1(2C),18.6(2C),16.5,-1.8,-3.0； HRMS(MALDI-TOF):计算为C₅₀H₆₃N₃O₁₁SiNa⁺[M+Na]⁺932.4124,得到 932.4125。

实施例39:2-O-苯甲酰基-3,4,6-三-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→3)-4-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-α-l-岩藻吡喃糖基三氯乙酰亚氨酸酯(41*)的合成

根据一般过程(A)，使二糖40*(55mg,60μmol)与TBAF(在THF为1m, 600μL,600μmol)和AcOH(42μL,725μmol)在THF(2mL)中反应得到粗制乳醇。根据一般过程(D)，在0℃使粗制乳醇与三氯乙氰(60μL,600μmol)和DBU 在DCM(2mL)中反应得到41*(44mg,48mmol,81％)。[α]_D ²⁰＝–64.8°(c＝1.8, CHCl₃)IRν_max(膜)2871,2115,1743,1673,1496,1453,1361,1267,1229,1093, 1070,1027cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.67(s,1H),8.11–8.03(m,2H), 7.60–7.56(m,1H),7.50–7.43(m,2H),7.42–7.26(m,8H),7.24–7.18(m,2H),7.16–7.03(m,5H),6.35(d,J＝3.6Hz,1H),5.38–5.30(m,2H),4.84–4.78(m,2H), 4.73(d,J＝11.0Hz,1H),4.67–4.54(m,5H),4.21(q,J＝6.4Hz,1H),3.88–3.71 (m,5H),3.61(ddd,J＝9.5,4.7,1.8Hz,1H),1.44(s,3H),1.08(d,J＝6.5Hz,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ170.3,165.0,160.9,138.3,137.9,137.8,133.4,130.3, 129.7,128.6,128.5(2C),128.4,128.2,128.1,128.0,127.8,127.7,96.8,95.4,91.1, 82.9,78.1,75.8,75.4,75.2,73.9,73.7,70.8,69.0,68.2,68.0,57.2,19.9,16.3；HRMS (ESI):计算为C₄₄H₄₅Cl₃N₄O₁₁Na⁺[M+Na]⁺933.2048,得到933.2051。

实施例40:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-O-苯甲酰基-3,4,6-三-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→3)-4-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-L-岩藻吡喃糖苷(42*)的合成

根据一般过程(E),在–30℃至–20℃使二糖-亚胺酸酯41*(44mg,48μmol) 与N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊醇(32mg,96μmol)在DCM(2mL)中反应30 min得到42*的以α/β＝1:6的比例的α端基差向异构体和β端基差向异构体(45 mg,42μmol,87％)。给出α端基差向异构体的分析数据。[α]_D ²⁰＝–68.5°(c＝0.5, CHCl₃)；IRν_max(膜)2927,2111,1743,1698,1454,1267,1091cm^-1；¹H-NMR(400 MHz,CDCl₃)δ8.06(d,J＝7.9Hz,2H),7.57(t,J＝7.4Hz,1H),7.44(d,J＝7.6Hz, 2H),7.39–7.27(m,15H),7.23–7.01(m,10H),5.31(t,J＝8.4Hz,1H),5.25(s,1H), 5.16(d,J＝7.8Hz,2H),4.85–4.78(m,2H),4.74–4.69(m,2H),4.63–4.52(m,4H), 4.45(s,3H),4.01–3.90(m,1H),3.85–3.69(m,4H),3.59(dd,J＝8.6,4.1Hz,2H),3.41(dd,J＝10.8,3.6Hz,2H),3.18(d,J＝20.7Hz,2H),1.56–1.43(m,4H),1.42(s, 3H),1.35–1.18(m,3H),1.02(d,J＝6.4Hz,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ 170.5,165.0,138.4,138.0,137.8,133.3,130.3,129.8,128.7,128.6,128.5,128.4, 128.3,128.2,128.1,128.0,127.9,127.7(2C),98.6,97.4,83.1,78.1,77.4,75.7,75.4, 75.2,73.7,73.6,70.9,69.1,68.9,68.5,67.3,65.0,57.8,50.6,47.2,46.2,29.2,23.4, 20.0,16.3；HRMS(ESI):计算为C₆₂H₆₈N₄O₁₃Na⁺[M+Na]⁺1099.4681,得到 1099.4679。

实施例41:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-O-苯甲酰基-3,4,6-三-O-苄基 -α-D-葡糖吡喃糖基-(1→3)-2-N-乙酰基-4-O-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺糖苷(43*) 的合成

根据一般过程(F)，使叠氮基-二糖42*(10mg,9μmol)与硫代乙酸反应48h 得到43*(8mg,7μmol,79％)。[α]_D ²⁰＝–5.5°(c＝1.0,CHCl₃)；IRν_max(膜)2928, 1743,1697,1454,1365,1266,1232,1091cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.06–8.01(m,2H),7.61–7.55(m,1H),7.47–7.42(m,2H),7.38–7.26(m,15H),7.26– 7.20(m,2H),7.18–7.06(m,8H),6.50–6.27(m,1H),5.22–5.12(m,5H),4.80(d,J ＝10.9Hz,1H),4.69(d,J＝10.9Hz,1H),4.66–4.60(m,2H),4.50(dd,J＝22.3,11.3 Hz,5H),4.08(s,2H),3.98–3.86(m,1H),3.82–3.49(m,6H),3.43–3.28(m,1H), 3.28–3.06(m,2H),1.83(s,3H),1.64(s,3H),1.55–1.42(m,4H),1.29–1.16(m, 2H),1.01(d,J＝6.5Hz,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ170.7,165.1,138.0,137.8,137.6,133.3,130.1,129.8,128.7(2C),128.6,128.4(2C),128.(2C),127.9,127.8,98.9,97.1,82.9,77.8,77.4,75.2(2C),74.5,73.5,73.3,72.6,69.9,68.9,68.3,67.3,64.8,49.7,29.2,23.4,23.1,20.2,16.3；HRMS(MALDI-TOF):计算为 C₆₄H₇₂N₂O₁₄Na⁺[M+Na]⁺1115.4876,得到1115.4890。

实施例42:5-氨基-戊基β-D-葡糖吡喃糖基-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺糖苷(44*)的合成

向43*(8mg,7μmol)在MeOH(1mL)中的溶液加入在MeOH(0.2mL)中的 0.5m NaOMe并搅拌16h。将混合物用

IR 120(H⁺)离子交换树脂中和并将所得二醇过滤并浓缩。根据一般过程(I)，将粗制二醇进行氢解得到44*(3.4 mg,7.5μmol,89％)。¹H-NMR(600MHz,D₂O)δ4.95(d,J＝3.7Hz,1H),4.55(d,J＝ 7.9Hz,1H),4.19(dd,J＝11.3,3.7Hz,1H),4.13(dd,J＝11.3,2.9Hz,1H),4.09(q,J ＝6.6Hz,1H),4.03(d,J＝2.5Hz,1H),3.98(dd,J＝12.2,2.1Hz,1H),3.75–3.68(m, 2H),3.54–3.45(m,3H),3.38(t,J＝9.5Hz,1H),3.31(dd,J＝9.4,8.0Hz,1H),3.03 –2.98(m,2H),2.05(s,3H),1.73–1.62(m,4H),1.49–1.41(m,2H),1.27(d,J＝6.6 Hz,3H)；¹³C-NMR(150MHz,D₂O)δ177.1,103.0,99.3,78.7,78.1,77.8,75.4,72.3, 71.3,70.4,69.0,63.6,50.9,42.0,30.5,29.0,24.8,24.6,18.1；HRMS(ESI):计算为 C₁₉H₃₆N₂O₁₀Na⁺[M+Na]⁺475.2268,得到475.2273。

实施例43:叔己基二甲基甲硅烷基3,4-二-O-苄基-2-O-乙酰丙酰基-6-O-(2- 萘基甲基)-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)-3-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖苷(45*)的合成

根据一般过程(B)，在–30℃至–20℃使硫代葡萄糖苷10*(140mg,218 μmol)与岩藻糖苷38*(50mg,134μmol)、NIS(54mg,240μmol)和TfOH(2.4μL, 27μmol)在DCM(1mL)中反应1h。经柱层析(己烷/EtOAc)加工后得到45*(114 mg,119μmol,89％)。[α]_D ²⁰＝–13.0°(c＝1.8,CHCl₃)；IRν_max(膜)2958,2867,2112, 1748,1721,1603,1509,1455,1364,1240,1147,1072cm^-1；¹H-NMR(400MHz, CDCl₃)δ7.87–7.76(m,4H),7.52–7.43(m,3H),7.35–7.25(m,5H),7.23–7.12 (m,3H),7.04–6.98(m,2H),5.16(dd,J＝9.6,8.1Hz,1H),4.80–4.75(m,3H),4.70 (d,J＝12.1Hz,1H),4.60(d,J＝12.2Hz,1H),4.49–4.39(m,3H),4.30(d,J＝8.1Hz,1H),3.94(d,J＝3.4Hz,1H),3.85–3.79(m,1H),3.76–3.65(m,3H),3.58(dd, J＝11.0,7.6Hz,1H),3.52(q,J＝6.5Hz,1H),3.39(ddd,J＝9.8,3.5,2.0Hz,1H), 2.93–2.81(m,1H),2.68–2.63(m,1H),2.62–2.58(m,1H),2.54–2.45(m,1H), 2.16(s,3H),2.11(s,3H),1.67(dt,J＝13.7,6.9Hz,1H),1.25(d,J＝6.5Hz,3H), 0.92(s,3H),0.90(s,3H),0.89(s,6H),0.18(s,3H),0.15(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz, CDCl₃)δ206.4,171.4,171.2,138.3,137.9,135.1,133.3,133.1,128.4(3C),128.1, 128.0,127.9,127.8(3C),126.6,126.3,126.1,125.8,101.9,97.2,82.9,77.5,75.1, 75.0(2C),74.3,73.8,73.4,72.8,70.0,68.7,62.8,38.1,34.0,29.9,28.0,24.9,21.0, 20.0(2C),18.6,18.5,16.4,-2.0,-3.1；HRMS(MALDI-TOF):计算为 C₅₂H₆₇N₃O₁₂SiNa⁺[M+Na]⁺976.4386,得到976.4333。

实施例44:3,4-二-O-苄基-2-O-乙酰丙酰基-6-O-(2-萘基甲基)-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)-3-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-L-岩藻吡喃糖苷(46*)的合成

根据一般过程(A)，使二糖45*(105mg,0.11mmol)与TBAF(1.0mL,1.00 mmol)和AcOH(70μL,1.22mmol)在THF(2mL)中反应得到乳醇46*(81mg, 0.10mmol,95％)，为α端基差向异构体和β端基差向异构体的混合物。IRν_max(膜) 3424,2869,2111,1742,1717,1454,1363,1237,1151,1059cm^-1；¹H-NMR(400 MHz,CDCl₃)δ7.87–7.75(m,4H),7.53–7.41(m,3H),7.34–7.25(m,5H),7.22– 7.10(m,3H),7.03–6.95(m,2H),5.37–5.28(m,0.5H)5.25(d,J＝3.5Hz,0.5H), 5.16–5.02(m,1.5H),4.80–4.65(m,4H),4.60(d,J＝12.1Hz,1H),4.50–4.43(m, 2H),4.35(d,J＝8.0Hz,0.5H),4.31(d,J＝8.1Hz,0.5H),4.19(q,J＝6.6Hz,0.5H),4.07(dd,J＝11.1,3.1Hz,1H),3.88–3.56(m,6H),3.41–3.35(m,1H),2.92–2.62 (m,2H),2.55–2.44(m,1H),2.24(s,1.5H),2.15(s,1.5H),2.12(s,1.5H),2.09(s, 1.5H),1.29(d,J＝6.5Hz,1.5H),1.19(d,J＝6.6Hz,1.5H)；¹³C-NMR(100MHz, CDCl₃)δ208.9,206.4,171.9,171.7,171.2,171.1,138.5,138.4,137.9,135.1(2C), 133.3,133.1,128.5(2C),128.4(2C),128.1,127.9(4C),127.8(3C),127.7,126.8, 126.6,126.4,126.1,125.9,125.8,101.7,100.9,96.8,92.2,83.0,82.9,77.8,77.6,75.4, 75.2,75.1,75.0(2C),73.9(2C),73.6,73.3,72.8,70.7,70.4,68.8,68.6,65.8,62.8, 57.9,38.1,37.6,30.5,30.0,28.1(2C),21.1,21.0,17.0,16.3；HRMS(MALDI-TOF): 计算为C₄₄H₄₉N₃O₁₂Na⁺[M+Na]⁺834.3208,得到834.3222。

实施例45:3,4-二-O-苄基-2-O-乙酰丙酰基-6-O-(2-萘基甲基)-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)-3-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-L-岩藻吡喃糖基三氯乙酰亚氨酸酯 (47*)的合成

根据一般过程(D)，在0℃使乳醇46*(81mg,100μmol)与三氯乙氰(100μL, 998μmol)和DBU在DCM(2mL)中反应得到47*(82mg,86mmol,86％)，为α端基差向异构体和β端基差向异构体的混合物。给出α端基差向异构体的分析数据。[α]_D ²⁰＝–88.7°(c＝1.5,CHCl₃)；IRν_max(膜)3336,3060,3030,2906,2868,2113, 1746,1718,1673,1363,1273,1243,1144,1063,1028cm^-1；¹H-NMR(400MHz, CDCl₃)δ8.67(s,1H),7.90–7.75(m,4H),7.52–7.42(m,3H),7.35–7.25(m,5H), 7.23–7.10(m,3H),7.05–6.96(m,2H),6.36(d,J＝3.6Hz,1H),5.14(dd,J＝9.6, 8.1Hz,1H),5.08(dd,J＝11.1,3.1Hz,1H),4.80–4.69(m,4H),4.60(d,J＝12.1Hz, 1H),4.47(d,J＝10.8Hz,1H),4.34(d,J＝8.0Hz,1H),4.22–4.13(m,2H),4.10(dd,J＝11.1,3.6Hz,1H),3.87–3.72(m,3H),3.71–3.64(m,1H),3.40(ddd,J＝9.8,3.5, 2.0Hz,1H),2.84–2.64(m,2H),2.61–2.46(m,2H),2.17(s,3H),2.13(s,3H),1.24 (d,J＝6.6Hz,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ206.3,171.7,171.0,161.1,138.3, 137.9,135.0,133.3,133.2,128.5,128.4,128.1,128.0,127.9,127.8(2C),126.7,126.4, 126.1,125.9,101.7,95.2,91.1,82.9,77.5,75.1,74.5,73.9,73.5,70.7,68.7,68.5,56.6, 38.1,30.0,28.1,21.0,16.3；HRMS(ESI):计算为C₄₆H₄₉Cl₃N₄O₁₂Na⁺[M+Na]⁺ 977.2310,得到977.2312。

实施例46:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基3,4-二-O-苄基-2-O-乙酰丙酰基-6-O-(2-萘基甲基)-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)-3-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-L-岩藻吡喃糖苷(48*)的合成

根据一般过程(E)，在–30℃至–20℃使二糖-亚胺酸酯47*(17mg,18μmol) 与N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊醇(12mg,36μmol)在DCM(1mL)中反应30 min得到48*的以α/β＝1:3比例的α端基差向异构体和β端基差向异构体(18mg, 16μmol,90％)。给出α端基差向异构体的分析数据。[α]_D ²⁰＝–70.3°(c＝0.3, CHCl₃)；IRν_max(膜)2936,2110,1746,1699,1497,1454,1421,1362,1244,1131, 1054cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.84–7.73(m,4H),7.49–7.40(m,3H), 7.34–7.21(m,14H),7.19–7.09(m,4H),7.00–6.95(m,2H),5.18–5.07(m,3H), 5.00(dd,J＝11.1,2.6Hz,1H),4.78–4.65(m,5H),4.57(d,J＝12.0Hz,1H),4.51–4.42(m,3H),4.28(d,J＝7.9Hz,1H),4.04(s,1H),3.92–3.86(m,1H),3.77(d,J＝ 9.4Hz,1H),3.72–3.57(m,4H),3.36(d,J＝9.6Hz,2H),3.26–3.15(m,2H),2.82– 2.57(m,3H),2.50(t,J＝7.0Hz,2H),2.13(s,3H),2.08(s,3H),1.54–1.46(m,4H), 1.33–1.25(m,2H),1.15(d,J＝6.4Hz,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ206.4, 171.7,171.2,138.4,137.9,135.1,133.4,133.2,128.7,128.5(2C),128.1,128.0,127.9 (3C),127.8,127.4,126.7,126.4,126.1,125.9,101.7,98.0,83.0,77.6,77.4,75.4,75.1 (2C),75.0,73.9,73.5,70.3,68.7,68.3,67.3,65.6,57.1,38.2,30.0,29.3,28.1,23.5, 21.1,16.3；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₆₄H₇₂N₄O₁₄Na⁺[M+Na]⁺1143.4937,得到1143.4974。

实施例47:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基3,4-二-O-苄基-2-O-乙酰丙酰基-6-O-(2-萘基甲基)-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)-2-N-乙酰基-3-O-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺糖苷(49*)的合成

根据一般过程(F)，使叠氮基-二糖48*(28mg,25μmol)与硫代乙酸反应24h 得到49*(20mg,18μmol,70％)。[α]_D ²⁰＝–53.6°(c＝1.0,CHCl₃)；IRν_max(膜)2926, 1694,1454,1364,1247,1053cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.92–7.72(m, 4H),7.60–7.08(m,21H),7.06–6.90(m,2H),5.90–5.30(m,1H),5.27–5.02(m, 3H),4.84(d,J＝11.4Hz,1H),4.80–4.67(m,5H),4.64–4.57(m,1H),4.56–4.39 (m,4H),4.34(d,J＝8.0Hz,1H),3.99–3.46(m,7H),3.39(d,J＝9.7Hz,1H),3.36– 3.10(m,3H),2.89–2.62(m,2H),2.62–2.44(m,2H),2.15(s,3H),2.04(s,3H),1.92 (s,3H),1.66–1.41(m,4H),1.39–1.22(m,2H),1.19(d,J＝5.6Hz,3H)；¹³C-NMR (100MHz,CDCl₃)δ206.8,171.9,171.3,171.1,138.4,137.9,135.3,133.4,133.1, 128.7,128.6,128.5(2C),128.4,128.3,128.1,128.0(2C),127.8(2C),127.7,126.5, 126.3,126.0,125.9,101.8,97.5,83.2,77.7,77.4,75.5,75.1,74.9,73.9,73.5,70.3, 69.0,67.3,65.6,50.3,47.5,47.2,38.2,38.0,30.0,29.3,28.1,27.5,23.9,23.5,21.2, 16.4；HRMS(MALDI-TOF):计算为C₆₆H₇₆N₂O₁₅Na⁺[M+Na]⁺1159.5138,得到1159.5148。

实施例48:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基3,4-二-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺糖苷(50*)的合成

根据一般过程(G)，使二糖49*(20mg,18μmol)与DDQ(12mg,53μmol)反应1.5h得到粗制伯醇。向粗制伯醇在MeOH(1mL)中的溶液加入在MeOH(0.3 mL)中的0.5m NaOMe并搅拌16h。将混合物用

IR 120(H⁺)离子交换树脂中和、过滤并浓缩。经柱层析(DCM/MeOH/丙酮)得到50*(9mg,11μmol, 60％)。[α]_D ²⁰＝–45.2°(c＝0.7,CHCl₃)；IRν_max(膜)3354,2925,1695,1542,1497, 1454,1422,1361,1231,1049cm^-1；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.68–6.84(m, 20H),6.07–5.61(m,1H),5.18(d,J＝11.9Hz,2H),5.01–4.76(m,3H),4.76–4.58 (m,2H),4.57–4.33(m,4H),4.02–3.80(m,2H),3.80–3.42(m,8H),3.39–3.14(m, 3H),2.53(s,1H),2.01(s,3H),1.91–1.63(m,2H),1.63–1.45(m,4H),1.36–1.26 (m,5H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ172.0,138.6,137.9,128.7,128.6(2C),128.3, 128.1,128.0,127.9(2C),103.4,98.1,84.3,83.3,77.7,77.4,76.3,75.4,75.2,74.9, 70.5,67.4,67.2,61.9,50.3,47.0,46.2,29.3,27.5,23.7,16.8；HRMS(MALDI-TOF): 计算为C₄₈H₆₀N₂O₁₂Na⁺[M+Na]⁺879.4038,得到879.4004.

实施例50:5-氨基-戊基β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→4)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺糖苷(51*)的合成

根据一般过程(H)，使三醇50*(8mg,9μmol)与TEMPO(0.3mg,2μmol)和 BAIB(15mg,47μmol)反应得到受保护的糖醛酸酯二糖。根据一般过程(I)，将糖醛酸酯二糖进行氢解得到羧酸51*(2.6mg,5.3μmol,57％)。¹H-NMR(600MHz, D₂O)δ4.89(d,J＝3.7Hz,1H),4.53(d,J＝7.3Hz,1H),4.20–4.12(m,2H),4.05(d, J＝2.9Hz,1H),3.93(dd,J＝11.2,3.0Hz,1H),3.77–3.72(m,1H),3.70(dt,J＝8.1, 5.6Hz,1H),3.59–3.45(m,4H),3.06–2.97(m,2H),2.05(s,3H),1.73–1.63(m, 4H),1.49–1.42(m,2H),1.34(d,J＝6.6Hz,3H)；¹³C-NMR(150MHz,D₂O)δ178.1, 177.1,105.5,99.6,82.5,78.8,77.9,75.8,74.4,70.5,69.6,69.5,53.2,42.0,30.6,29.1, 24.9,24.5,17.9；HRMS(ESI):计算为C₁₉H₃₄N₂O₁₁Na⁺[M+Na]⁺489.2060,得到 489.2063。

实施例51:5-氨基-戊基2-N-乙酰基-L-岩藻吡喃糖胺糖苷(52*)的合成

根据用于合成肺炎糖胺衍生物36*的合成过程得到岩藻糖胺衍生物52*(3.26 mg,11μmol,83％产率)。¹H-NMR(400MHz,D₂O)δ4.81(d,J＝3.8Hz,1H),4.11– 4.02(m,2H),3.88(dd,J＝11.1,3.3Hz,1H),3.77(d,J＝3.1Hz,1H),3.65(dt,J＝ 10.1,6.6Hz,1H),3.44(dt,J＝10.1,6.3Hz,1H),3.01–2.92(m,2H),2.01(s,3H), 1.70–1.57(m,4H),1.47–1.35(m,2H),1.20(d,J＝6.6Hz,3H)；¹³C-NMR(100 MHz,D₂O)δ174.4,96.8,71.0,67.7,67.7,66.5,49.6,39.2,27.9,26.4,22.2,21.8, 15.3；HRMS(ESI):计算为C₁₃H₂₆N₂O₅Na⁺[M+Na]⁺313.1739,得到313.1750。

实施例52:叔己基二甲基甲硅烷基3,4,6-三-O-苄基-2-O-乙酰丙酰基-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)-3-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖苷(53*)的合成

将醇38*(100mg,0.268mmol,1.0当量)与2-O-乙酰丙酰基-3,4,6-三-O-苄基 -1-硫代-β-D-葡糖吡喃糖苷(190mg,0.321mmol,1.2当量)用甲苯共蒸发并在真空下干燥。将剩余物溶解在无水二氯甲烷中。加入分子筛

并将反应混合物冷却至-30℃。加入NIS(73mg,0.321mmol,1.2当量)和TfOH(3μL,0.032mmol, 0.12当量)并在1小时内使反应物升温至-20℃。用三乙胺将反应物淬灭并用二氯甲烷稀释。将有机相用Na₂S₂O₃饱和水溶液、NaHCO₃和盐水洗涤。将有机层通过Na₂SO₄干燥并浓缩。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到二糖53*(182mg, 0.201mmol,75％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.40–7.25(m,13H),7.15–7.12(m,2H),5.14(dd,J＝9.5,8.2Hz,1H),4.79(d,J＝10.8Hz,1H),4.76(s,2H),4.59– 4.35(m,5H),4.30(d,J＝8.1Hz,1H),3.93(d,J＝3.3Hz,1H),3.81(t,J＝9.3Hz, 1H),3.75–3.64(m,3H),3.57(dd,J＝10.9,7.7Hz,1H),3.52(dd,J＝12.9,6.4Hz, 1H),3.40–3.34(m,1H),2.93–2.42(m,4H),2.16(s,3H),2.09(s,3H),1.73–1.59 (m,1H),1.26(d,J＝6.5Hz,3H),0.93–0.85(m,12H),0.17(s,3H),0.15(m,3H)。

实施例53:叔己基二甲基甲硅烷基3,4,6-三-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基 -(1→4)-3-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖苷(54*)的合成

向二糖53*(180mg,0.199mmol,1当量)在DCM(11mL)中的溶液加入溶解在AcOH(0.22mL)和吡啶(0.33mL)中的水合肼(40μL,0.796mmol,4当量)并将溶液搅拌1h。然后通过加入丙酮将反应物淬灭并浓缩。经硅胶柱层析(己烷/ 乙酸乙酯)得到二糖54*(150mg,0.186mmol,93％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.38–7.21(m,13H),7.15–7.10(m,2H),5.02(d,J＝11.2Hz,1H),4.83(d,J＝ 11.0Hz,1H),4.81(d,J＝11.4Hz,1H),4.57–4.32(m,5H),4.20(d,J＝7.7Hz, 1H),4.00(d,J＝3.3Hz,1H),3.80–3.50(m,7H),3.44–3.30(m,1H),3.21(s,1H), 2.11(s,3H),1.74–1.63(m,1H),1.33(d,J＝6.5Hz,3H),0.94–0.85(m,12H),0.2(s,6H)。

实施例54:叔己基二甲基甲硅烷基3,4,6-三-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基 -(1→4)-3-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖苷(55*)的合成

向醇55*(50mg,0.062mmol,1当量)在DCM(0.5mL)中的溶液加入苄基溴 (0.074mL,0.620mmol,10当量)。然后将混合物冷却至0℃并加入在矿物油中为 60％的NaH(304mg,7.60mmol)。10min后,加入DMF(17μL)。将反应物升温至室温并搅拌30min。将反应混合物冷却到0℃并用AcOH(0.1mL)淬灭。将反应混合物升温至室温并将溶剂蒸发掉。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到二糖55*(55mg,0.061mmol,99％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.45–7.03(m, 20H),5.19(dd,J＝9.6,8.1Hz,1H),4.89(d,J＝12.6Hz,1H),4.82–4.75(m,2H), 4.70(d,J＝11.4Hz,1H),4.56–4.44(m,3H),4.40(d,J＝12.0Hz,1H),4.35(d,J＝ 12.0Hz,1H),4.31(d,J＝7.7Hz,1H),3.87(d,J＝3.0Hz,1H),3.73–3.43(m,6H), 3.34(q,J＝6.5Hz,1H),3.10(dd,J＝10.5,3.1Hz,1H),1.99(s,3H),1.72–1.59(m, 1H),1.28(d,J＝6.6Hz,3H),0.96–0.77(m,12H),0.13(m,6H)。

实施例55:叔己基二甲基甲硅烷基2,3,4,6-四-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基 -(1→4)-2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖苷(56*)的合成

向二糖55*(55mg,61μmol)在MeOH(1mL)中的溶液加入在MeOH(0.12 mL)中的0.5MNaOMe并搅拌16h。将混合物用

IR 120(H+)离子交换树脂中和并将所得醇过滤并浓缩。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到二糖 56*(43mg,50μmol,82％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.42–7.20(m,18H),7.18 –7.12(m,2H),5.00(d,J＝11.3Hz,1H),4.85(d,J＝11.4Hz,2H),4.76(d,J＝11.3 Hz,1H),4.63(d,J＝12.2Hz,1H),4.51(d,J＝10.9Hz,1H),4.48–4.32(m,4H), 3.93(d,J＝2.9Hz,1H),3.76–3.46(m,7H),3.40(q,J＝6.6Hz,1H),3.18(dd,J＝ 10.5,3.1Hz,1H),1.73–1.63(m,1H),1.32(d,J＝6.5Hz,3H),0.92–0.83(m,12H), 0.16(d,J＝2.4Hz,6H)。

实施例56:叔己基二甲基甲硅烷基[2,3,4,6-四-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基 -(1→4)]-3,4-二-O-苄基-6-O-苯甲酰基-2-乙酰丙酰基-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→3)-2- 叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖苷(57*)的合成

用甲苯将受体56*(40mg,0.047mmol,1.0当量)与6-O-苯甲酰基-3,4-二-O-苄基-2-O-乙酰丙酰基-1-硫代-β-D-葡糖吡喃糖苷(43mg,0.070mmol,1.5当量)共蒸发两次并在真空下干燥。将剩余物溶解在甲苯(2mL)和二氯甲烷(1mL)的混合物中。加入分子筛

并将反应混合物冷却至-45℃。加入NIS(21mg,0.094mmol, 2当量)和TfOH(0.5μL,5.6μmol,0.12当量)并在两小时内将反应物升温至-30℃。将反应物用三乙胺淬灭并用二氯甲烷稀释。将有机相用Na₂S₂O₃饱和水溶液、 NaHCO₃和盐水洗涤。将有机层通过Na₂SO₄干燥并浓缩。经硅胶柱层析(己烷/ 乙酸乙酯)得到三糖57*(52mg,0.037mmol,79％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.10–7.98(m,2H),7.57–7.50(m,1H),7.47–7.09(m,30H),7.07–7.00(m,2H),5.23(d,J＝8.1Hz,1H),5.14–5.05(m,1H),4.91(d,J＝5.1Hz,1H),4.88(d,J＝6.4 Hz,1H),4.84–4.76(m,2H),4.73–4.31(m,11H),4.28(d,J＝7.8Hz,1H),3.99(d, J＝2.9Hz,1H),3.96–3.87(m,2H),3.85–3.82(m,1H),3.71–3.34(m,8H),3.18 (dd,J＝10.4,3.1Hz,1H),2.66–2.14(m,4H),2.03(s,1H),1.60-1.48(m,1H),1.44 (d,J＝6.5Hz,3H),0.83(dd,J＝7.6,2.4Hz,12H),0.12(d,J＝10.5Hz,6H)。

实施例57:叔己基二甲基甲硅烷基3-O-对甲氧基苄基-2-叠氮基-2-脱氧-β-L- 岩藻吡喃糖苷(59*)的合成

将二醇59*(1.02g,3.07mmol,1.0当量)用无水甲苯共蒸发两次并在真空下干燥30min。然后加入无水甲苯(30mL)，随后加入Bu₂SnO(1.14g,4.60mmol,1.5 当量)和

MS。将反应物在回流下搅拌1小时。将反应物冷却到40℃，加入 PMBCl(1.25mL,9.20mmol,3当量)和TBAB(1.48g,4.60mmol,1.5当量)并在室温下搅拌过夜。将反应混合物过滤并将溶剂蒸发掉。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到构建嵌段59a*(1.01g,2.23mmol,73％).)。[α]_D ²⁰＝25.6(c＝2.00,CHCl₃)； IRν_max(膜)3494,2960,2870,2112,1515,1251,1073,829cm-¹；¹H NMR(400MHz, CDCl₃)δ7.36–7.28(m,2H),6.97–6.84(m,2H),4.63(s,2H),4.39(d,J＝7.7Hz, 1H),3.81(s,3H),3.71–3.63(m,1H),3.53–3.39(m,2H),3.24(dd,J＝10.1,3.3Hz, 1H),2.41–2.26(m,1H),1.67(hept,J＝6.8Hz,1H),1.31(d,J＝6.5Hz,3H),0.89(d,J＝7.0Hz,12H),0.17(d,J＝3.5Hz,6H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ159.6, 129.7,129.5,114.1,97.0,79.0,71.8,70.2,68.4,65.2,55.4,34.0,24.9,20.1,20.0,18.6, 18.5,16.5,-1.8,-3.2.LRMS(ESI+)计算为C₂₂H₃₇N₃O₅SiNa⁺[M+Na]⁺474.2400,得到474.2。

实施例58:叔己基二甲基甲硅烷基3,4,6-三-O-苄基-2-O-乙酰丙酰基-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)-3-O-对甲氧基苄基-2-叠氮基-2-脱氧-β-L-岩藻吡喃糖苷(61*) 的合成

将L-岩藻糖基受体59a*(200mg,0.443mmol,1.0当量)和硫代葡萄糖苷 60*(354mg,0.70mmol,1.35当量)用甲苯共蒸发两次并在真空下干燥。将剩余物溶解在DCM(15mL)中。加入分子筛酸洗液

并将反应混合物冷却至-40℃。在-40℃加入NIS(149mg,0.66mmol,1.5当量)和TfOH(2μL,0.02mmol,0.05当量)并搅拌1小时。将反应物用三乙胺淬灭并用DCM稀释。将有机相用饱和水溶液、NaHCO₃和盐水洗涤，通过干燥Na₂SO₄、过滤并浓缩。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到二糖61*(338mg,0.34mmol,78％)。[α]_D ²⁰＝-2.5(c＝1.00,CHCl₃)；IRν_max(膜)2959,2868,2112,1750,1721,1515,1250,1075,832cm^-1, ¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.41–7.19(m,15H),7.18-7.11(m,2H),6.82(d,J＝ 8.4Hz,2H),5.19(t,J＝8.8Hz,1H),4.83–4.74(m,4H),4.53–4.43(m,3H),4.39(d, J＝5.3Hz,2H),4.26(d,J＝7.7Hz,1H),3.85–3.82(m,1H),3.77(s,3H),3.73– 3.63(m,2H),3.60–3.43(m,4H),3.33(q,J＝6.6Hz,1H),3.08(dd,J＝10.5,3.0Hz, 1H),2.90–2.79(m,1H),2.65–2.55(m,2H),2.53–2.45(m,1H),2.14(s,3H),1.64 (h,J＝6.8Hz,1H),1.27(d,J＝6.6Hz,3H),0.91–0.81(m,12H),0.11(d,J＝12.5 Hz,6H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ206.6,171.3,159.2,138.4,137.9,130.2, 129.6,128.6,128.5,128.5,128.3,128.2,128.0,128.0,127.8,127.8,113.8,101.7,97.2, 83.2,78.0,75.3,75.2,75.0,74.0,73.9,73.6,70.3,70.0,69.7,64.7,55.4,38.2,34.1, 30.0,28.0,24.9,20.1,20.1,18.63,18.58,17.0,-1.8,-3.1.HRMS(ESI+)计算为 C₅₄H₇₁N₃O₁₂SiNa⁺[M+Na]⁺1004.4705,得到1004.4709。

实施例59:叔己基二甲基甲硅烷基3,4,6-三-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基 -(1→4)-3-O-对甲氧基苄基-2-叠氮基-2-脱氧-β-L-岩藻吡喃糖苷(62*)的合成

向二糖61*(970mg,0.99mmol,1当量)在DCM(11mL)中的溶液加入溶解在AcOH(1.1mL)和吡啶(1.7mL)中的水合肼(190μL,3.95mmol,4当量)溶液。将所得反应混合物在室温下搅拌1h-2h。通过加入丙酮将反应物淬灭并将溶剂蒸发掉。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到二糖62*(720mg,0.81mmol,82％)。 [α]_D ²⁰＝28.5(c＝0.10,CHCl₃)；IRν_max(膜)3470,2930,2870,2113,1515,1252, 1115,1069,832cm^-1，¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.40–7.36(m,2H),7.35–7.21 (m,13H),7.20–7.12(m,2H),6.80(d,J＝8.3Hz,2H),5.00(d,J＝11.4Hz,1H), 4.86(d,J＝10.9Hz,1H),4.80–4.72(m,2H),4.60(d,J＝11.6Hz,1H),4.53(d,J＝ 10.8Hz,1H),4.50–4.40(m,3H),4.36(d,J＝7.7Hz,1H),3.90(d,J＝3.0Hz,1H), 3.74(s,3H),3.69–3.44(m,8H),3.39(q,J＝6.4Hz,1H),3.18(dd,J＝10.5,3.1Hz, 1H),1.66(h,J＝6.8Hz,1H),1.29(d,J＝6.5Hz,3H),0.94–0.81(m,12H),0.17(d, J＝4.3Hz,6H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ159.6,139.2,138.3,138.1,130.3, 129.3,128.51,128.50,128.46,128.2,127.94,127.89,127.8,127.6,114.0,102.5,97.2, 84.6,78.0,77.0,75.4,75.2,75.1,73.8,73.6,72.2,72.1,70.7,69.6,65.7,55.4,34.1, 25.0,20.2,20.1,18.7,18.6,17.5,-1.7,-3.0.HRMS(ESI+)计算为C₄₉H₆₅N₃O₁₀SiNa⁺ [M+Na]⁺906.4337,得到906.4371。

实施例60:叔己基二甲基甲硅烷基2,3,4,6-四-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基 -(1→4)-3-O-对甲氧基苄基-2-叠氮基-2-脱氧-β-L-岩藻吡喃糖苷(63*)的合成

向醇62*(720mg,0.81mmol,1当量)在THF:DMF(1:1,17mL)中的溶液加入苄基溴(194μL,1.63mmol,2当量)。然后将混合物冷却到0℃并加入在矿物油中为60％的NaH(65mg,1.63mmol,2当量)。将反应混合物升温至室温并搅拌 3h。然后将其用DCM稀释并用NaHCO₃淬灭。将水层用DCM提取(3×)。将有机相用盐水洗涤、通过Na₂SO₄干燥、过滤并将溶剂蒸发掉。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到二糖63*(715mg,0.73mmol,90％)。[α]_D ²⁰＝-5.4(c＝2.44,CHCl₃)；IRν_max(膜)3066,3033,2957,2867,2112,1514,1249,1068,831,698 cm-¹，¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.47–7.07(m,22H),6.83(d,J＝8.2Hz,2H), 5.17(d,J＝10.4Hz,1H),5.04(d,J＝11.1Hz,1H),4.90-4.69(m,J＝25.2,21.0,11.5 Hz,5H),4.54–4.32(m,6H),3.97(d,J＝3.2Hz,1H),3.78(s,3H),3.73–3.36(m, 9H),3.15(dd,J＝10.5,3.1Hz,1H),1.68–1.56(h,J＝6.8Hz,1H),1.38(d,J＝6.5 Hz,3H),0.92–0.78(m,12H),0.15(s,6H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ159.2, 138.9,138.2,137.9,137.8,130.1,129.8,129.3,128.52,128.49,128.47,128.34, 128.32,128.03,127.97,127.8,127.7,113.7,104.5,97.1,85.0,81.8,77.9,76.6,75.8, 75.1,75.0,74.9,73.7,73.5,70.5,70.0,69.6,65.2,55.3,34.0,24.9,20.2,20.0,18.6, 18.5,17.3,-1.9,-3.2.HRMS(ESI+)计算为C₅₆H₇₁N₃O₁₀SiNa⁺[M+Na]⁺1004.4806, 得到996.4809。

实施例61:叔己基二甲基甲硅烷基2,3,4,6-四-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基 -(1→4)-2-叠氮基-2-脱氧-β-L-岩藻吡喃糖苷(64*)的合成

在0℃向二糖63*(630mg,0.65mmol,1当量)在DCM:H₂O(18:1,5.3mL)中的溶液加入2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(DDQ)(161mg,0.71mmol,1.1当量)。将反应物升温至室温并搅拌2.5h。反应未完成，然后加入10mg DDQ。30分钟后，将反应物用DCM稀释并加入NaHCO₃。将有机相用NaHCO₃稀释(3×)直到溶液无色。然后将有机相用盐水洗涤，通过Na₂SO₄干燥、过滤并将溶剂蒸发掉。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到二糖64*(460mg,0.54mmol,83％)。[α]_D ²⁰＝1.9 (c＝1.36,CHCl₃)；IRν_max(膜)3484,3034,2959,2869,2112,1254,1069,833,629 cm^-1，¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.43–7.19(m,18H),7.16-7.08(m,2H),5.08-4.97(m,2H),4.87–4.75(m,3H),4.59–4.44(m,4H),4.37(d,J＝7.7Hz,1H), 3.73–3.34(m,10H),1.66(h,J＝7.0Hz,1H),1.30(d,J＝6.4Hz,3H),0.93–0.78 (m,12H),0.20(s,6H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ138.6,137.9,137.85,137.81, 128.8,128.6,128.5,128.4,128.2,128.1,128.0,127.9,127.9,127.8,104.0,97.3,84.6, 81.5,80.6,77.6,77.4,75.9,75.3,75.0,73.8,71.4,70.3,68.8,67.7,34.1,24.9,20.2, 20.0,18.6,18.5,16.7,-1.9,-3.0.HRMS(ESI+)计算为C₄₈H₆₃N₃O₉SiNa⁺[M+Na]⁺ 876.4231,得到876.4234。

实施例62:叔己基二甲基甲硅烷基[2,3,4,6-四-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基 -(1→4)]-苄基-3,4-二-O-苄基-6-O-苯甲酰基-2-乙酰丙酰基-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-叠氮基-2-脱氧-β-L-岩藻吡喃糖苷(66*)的合成

将受体64*(91mg,0.11mmol,1.0当量)和硫代葡萄糖苷65*(129mg,0.21mmol,2 当量)用甲苯共蒸发两次并在真空下干燥。将剩余物溶解在甲苯(4mL)和DCM(2 mL)的混合物中。加入分子筛酸洗液

并将反应混合物冷却至-30℃。加入NIS (53mg,0.23mmol,2.2当量)和TfOH(0.5μL,5.3μmol,0.05当量)并在2小时内使反应物升温至-15℃。将反应物用三乙胺淬灭并用DCM稀释。将有机相用 Na₂S₂O₃饱和水溶液、NaHCO₃和盐水洗涤，通过Na₂SO₄干燥、过滤并浓缩。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到三糖66*(114mg,0.08mmol,76％).[α]_D ²⁰＝- 26.6(c＝0.87,CHCl₃)；IRν_max(膜)3034,2929,2870,2116,1751,1720,1072,832,698cm^-1,¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.56–6.90(m,35H),5.21–5.06(m,5H), 5.02–4.94(m,2H),4.83–4.61(m,6H),4.53–4.32(m,6H),4.06–3.88(m,3H), 3.83–3.73(m,2H),3.65–3.33(m,8H),3.21(t,J＝9.2Hz,1H),2.78–2.57(m,2H), 2.50-2.37(m,2H),2.11(s,3H),1.68-1.53(m,1H),1.35(d,J＝6.5Hz,3H),0.94– 0.73(m,12H),0.15(d,J＝8.8Hz,6H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ206.3,171.3, 168.6,138.8,138.4,138.3,138.2,138.0,137.9,135.3,129.2,128.7,128.65,128.60, 128.56,128.55,128.53,128.4,128.20,128.18,128.1,128.0,127.9,127.8,127.73, 127.70,127.67,104.0,96.8,95.5,84.9,82.0,81.4,79.5,78.3,75.9,75.2,74.9,74.8, 74.4,74.3,74.1,73.4,73.4,73.0,72.4,70.5,69.2,67.3,64.6,37.9,34.1,30.1,28.2, 24.9,20.2,20.0,18.7,18.5,17.5,-1.9,-3.2.HRMS(ESI+)计算为C₈₀H₉₅N₃O₁₇SiNa⁺ [M+Na]⁺1420.6328,得到1420.6322。

实施例63:[2,3,4,6-四-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)]-苄基-3,4-二-O-苄基-6-O-苯甲酰基-2-乙酰丙酰基-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-叠氮基-2- 脱氧-α,β-L-岩藻吡喃糖苷(67*)的合成

在塑料离心管中将三糖66*(235mg,0.17mmol,1.0当量)溶解在吡啶(1mL) 和DCM(0.5mL)的混合物中。逐滴加入HF.py(0.15mL,1.70mmol,10当量)并将反应物在室温下搅拌48h-72h。将反应物用DCM稀释并用NaHCO₃淬灭。分离相并将有机相用盐水洗涤，通过Na₂SO₄干燥、过滤并浓缩。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到三糖乳醇67*(180mg,0.14mmol,85％)。α:β(1.4:1)mixture: clear oil.[α]_D ²⁰＝-36.8(c＝1.12,CHCl₃)；IRν_max(膜)3480,3033,2912,2870,2115, 1750,1720,1071,740,698cm^-1,¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.48–7.03(m,60H), 5.29(d,J＝3.5Hz,1H),5.21–5.05(m,9H),5.00–4.94(m,2H),4.82–4.76(m,4H),4.74–4.63(m,7H),4.53–4.43(m,9H),4.35(dd,J＝10.2,3.0Hz,1H),4.16(q,J＝ 6.7Hz,1H),4.07(d,J＝2.9Hz,1H),4.03–3.95(m,4H),3.90(dd,J＝10.2,3.5Hz, 1H),3.87(dd,J＝10.4,3.1Hz,1H),3.84–3.77(m,2H),3.67–3.59(m,4H),3.57 -3.48(m,3H),3.47–3.38(m,3H),3.31–3.25(m,2H),2.70–2.65(m,3H),2.56– 2.47(m,2H),2.45–2.36(m,2H),2.13(s,2H),2.11(s,3H),1.39(d,J＝6.6Hz,2H), 1.36(d,J＝6.7Hz,3H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ206.4,206.1,171.3,168.5, 168.4,138.7,138.40,138.38,138.3,138.1,138.00,137.98,135.3,135.2,129.0,128.9, 128.73,128.72,128.67,128.64,128.61,128.58,128.54,128.53,128.50,128.47, 128.39,128.37,128.19,128.16,128.1,128.05,127.98,127.93,127.92,127.88,127.86, 127.84,127.77,127.75,127.71,103.8,103.7,96.14,96.09,96.0,91.9,84.9,82.6,82.4, 81.44,81.40,79.7,79.5,78.3,75.9,75.2,75.14,75.13,75.06,74.96,74.94,74.6,74.5, 74.43,74.40,74.3,74.2,73.6,73.4,73.3,73.0,72.3,71.7,71.0,69.2,69.1,67.4,67.1, 63.6,59.9,37.8,30.10,30.07,28.3,17.5,17.2.HRMS(ESI+)计算为 C₇₂H₇₇N₃O₁₇Na⁺[M+Na]⁺1278.5151,得到1278.5177。

实施例64:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基[2,3,4,6-四-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)]-苄基-3,4-二-O-苄基-6-O-苯甲酰基-2-乙酰丙酰基-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖基-(1→3)-2-叠氮基-2-脱氧 -4-O-(2-萘基甲基)-β-D-岩藻吡喃糖苷(69*)的合成

在0℃向三糖乳醇67*(80mg,0.06mmol,1.0当量)在DCM(3mL)中的溶液加入Cs₂CO₃(42mg,0.12mmol,2.0当量)和2,2,2-三氟-N-苯基亚氨代乙酰氯(30 μL,0.19mmol,3.0当量)。在室温2h后，将产物(68*)过滤并将溶剂蒸发掉。使粗制的混合物通过少量二氧化硅塞并在下一反应中不经进一步纯化即使用。将受体 6*(81mg,0.13mmol,2.0当量)和三糖亚氨酸酯68*(90mg,0.06mmol,1.0当量) 用甲苯共蒸发两次并在真空下干燥。将剩余物溶解在DCM(3mL)中。加入分子筛酸洗液

并将反应混合物冷却至-35℃。加入TMSOTf(1μL,6μmol,0.1 当量)并在1h内使反应物升温至-20℃。将反应物用三乙胺淬灭、过滤并将溶剂蒸发掉。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到四糖69*(94mg,0.05mmol,79％)。 [α]_D ²⁰＝-52.6(c＝0.54,CHCl₃)；IRν_max(膜)3033,2929,2870,2116,1751,1699, 1361,1071,737,698cm^-1,¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.81–7.75(m,3H),7.72(s, 1H),7.51–7.48(m,1H),7.45–7.40(m,2H),7.39–7.07(m,43H),7.04(d,J＝7.5 Hz,2H),5.26(d,J＝3.6Hz,1H),5.20–5.14(m,2H),5.12–5.05(m,2H),4.99– 4.94(m,2H),4.91(d,J＝11.0Hz,1H),4.86(d,J＝12.2Hz,1H),4.83–4.71(m,4H), 4.69–4.59(m,4H),4.54–4.40(m,6H),4.35(d,J＝7.9Hz,1H),4.30(dd,J＝10.3, 3.0Hz,1H),4.22–4.12(m,1H),4.03(d,J＝9.9Hz,1H),3.95(t,J＝9.3Hz,1H), 3.88–3.82(m,3H),3.79–3.73(m,1H),3.73–3.65(m,2H),3.63–3.54(m,2H), 3.53–3.35(m,7H),3.32(t,J＝9.4Hz,1H),3.29–3.23(m,1H),3.22–3.16(m,1H), 2.63(t,J＝6.6Hz,2H),2.44(dt,J＝17.4,6.5Hz,1H),2.36(dt,J＝17.4,6.7Hz,1H), 2.08(s,3H),1.68–1.46(m,4H),1.43–1.27(m,2H),1.31(d,J＝6.4Hz,3H),1.00 (d,J＝6.5Hz,3H).¹³CNMR(151MHz,CDCl₃)δ206.2,171.3,168.1,138.7,138.4, 138.2,138.0,135.8,135.1,133.2,133.1,128.7,128.62,128.59,128.56,128.55, 128.52,128.51,128.46,128.4,128.3,128.21,128.20,128.1,128.03,127.99,127.97, 127.9,127.82,127.75,127.7,127.5,127.4,127.1,126.3,126.2,103.7,102.74,99.1, 97.0,85.0,82.4,81.4,79.7,79.0,78.3,75.8,75.2,74.9,74.8,74.72,74.68,74.4,73.7, 73.2,71.0,69.2,67.3,67.2,64.0,59.0,50.7,50.4,47.3,46.4,37.8,30.1,29.4,28.2, 23.4,17.4,16.8.HRMS(ESI+)计算为C₁₀₉H₁₁₇N₇O₂₂Na⁺[M+Na]⁺1900.1187,得到 1900.184。

实施例65:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基[2,3,4,6-四-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)]-苄基-3,4-二-O-苄基-6-O-苯甲酰基-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯 -(1→3)-2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖基-(1→3)-2-叠氮基-2-脱氧-4-O-(2-萘基甲基)-β-D-岩藻吡喃糖苷(70*)的合成

向四糖69*(40mg,0.021mmol,1当量)在DCM(2mL)中的溶液加入溶解在AcOH(0.08mL)和吡啶(0.12mL)中的水合肼(13μL,0.26mmol,12当量)溶液。将所得反应混合物在室温搅拌1h-2h.通过加入丙酮将反应物淬灭并将溶剂蒸发掉。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到四糖70*(34mg,0.019mmol,90％)。[α]_D ²⁰＝-66.6(c＝1.00,CHCl₃)；IRν_max(膜)3501,3033,2928,2870,2116,1749,1698, 1070,735,698cm^-1，¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.87–7.74(m,3H),7.17(s,1H), 7.58–6.92(m,48H),5.29(d,J＝3.7Hz,1H),5.21–5.13(m,3H),5.08–4.71(m, 10H),4.59–4.38(m,6H),4.37–4.29(m,2H),4.27–4.18(m,2H),4.00–3.86(m, 5H),3.78–3.17(m,17H),1.72–1.47(m,4H),1.39(d,J＝6.4Hz,3H),1.43–1.27(m,2H),1.04(d,J＝6.6Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ168.0,156.8,156.3, 138.7,138.7,138.2,138.1,138.0,137.83,137.78,135.6,135.3,133.1,133.0,128.9, 128.7,128.62,128.61,128.51,128.49,128.47,128.44,128.40,128.35,128.26,128.2, 128.1,127.92,127.89,127.86,127.8,127.7,127.6,127.3,127.0,126.7,126.5,126.3, 104.1,103.4,102.8,100.7,84.6,83.9,82.3,79.0,78.8,78.2,77.6,75.8,75.7,75.3, 75.23,75.20,75.1,75.0,74.2,73.2,71.0,70.0,69.9,68.2,67.4,67.2,66.8,63.8,58.0, 50.6,50.3,47.2,46.3,29.3,28.0,27.5,23.3,17.5,16.8.HRMS(ESI+)计算为 C₁₀₄H₁₁₁N₇O₂₀Na⁺[M+Na]⁺1801.7815,得到1801.7992。

实施例66:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-叠氮基-3,4-二-O-苄基-2-脱氧-α-L-肺炎吡喃糖基-(1→2)-[2,3,4,6-四-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)]-苄基 -3,4-二-O-苄基-6-O-苯甲酰基-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖基-(1→3)-2-叠氮基-2-脱氧-4-O-(2-萘基甲基)-β-D-岩藻吡喃糖苷(71*)的合成

将受体70*(25mg,0.014mmol,1.0当量)和亚氨酸酯8a*(23mg,0.042mmol,3.0 当量)用甲苯共蒸发两次并在真空下干燥。将剩余物溶解在甲苯(2mL)中。将反应混合物冷却至-35℃。加入TMSOTf(0.25μL,1.4μmol,0.1当量)并在2h内使反应物升温至-20℃。将反应物用三乙胺淬灭、过滤并将溶剂蒸发掉。经硅胶柱层析 (己烷/乙酸乙酯)得到五糖71*(16mg,0.07mmol,53％)。[α]_D ²⁰＝-39.5(c＝ 0.30,CHCl₃)；IRν_max(膜)3034,2931,2870,2115,1750,1698,1455,1070,736,698 cm^-1,1H NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.87–7.73(m,3H),7.68(s,1H),7.62–7.02(m, 55H),7.02–6.86(m,3H),5.32(d,J＝3.9Hz,1H),5.28–5.22(m,2H),5.21–5.13 (m,2H),5.03–4.39(m,22H),4.33(d,J＝7.9Hz,1H),4.26(d,J＝10.9Hz,1H), 4.24–4.16(m,2H),4.06(d,J＝9.7Hz,1H),4.01–3.86(m,4H),3.85–3.79(m,2H),3.73(t,J＝8.3Hz,1H),3.67–3.54(m,4H),3.54–3.32(m,8H),3.31–3.12(m,4H), 1.74–1.46(m,4H),1.46–1.18(m,8H),0.97(d,J＝6.7Hz,3H).¹³C NMR(151 MHz,CDCl₃)δ168.1,138.7,138.4,137.7,137.60,135.58,134.9,133.2,128.73, 128.65,128.62,128.57,128.5,128.44,128.42,128.37,128.35,128.23,128.20,128.1, 128.03,127.97,127.91,127.87,127.8,127.7,127.6,127.5,127.4,127.2,127.1,126.7, 126.4,126.2,103.9,102.9,100.3,99.2,95.4,85.2,84.1,81.2,80.4,78.8,78.2,77.5, 76.8,76.5,75.6,75.1,74.9,74.84,74.77,74.5,74.2,73.2,72.5,71.1,70.5,70.0,69.92, 69.87,69.3,68.0,67.3,67.0,66.9,66.5,64.0,57.9,57.3,50.7,50.4,47.3,47.3,46.3, 32.1,29.8,29.5,29.4,28.0,27.60,23.4,23.3,22.8,17.5,17.1,17.0,14.7,14.3. HRMS(ESI+)计算为C₁₂₄H₁₃₂N₁₀O₂₃Na⁺[M+Na]⁺2152.9398,得到2152.9582。

实施例67:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-N-乙酰基-3,4-二-O-苄基 -α-L-肺炎吡喃糖基-(1→2)-[2,3,4,6-四-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)]-苄基 -3,4-二-O-苄基-6-O-苯甲酰基-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖基-(1→3)-2-N-乙酰基-4-O-(2-萘基甲基)-β-D-岩藻吡喃糖苷(72*) 的合成

向叠氮基五糖71*(32mg,0.015mmol,1当量)在吡啶(2mL)中的溶液加入硫代乙酸(0.5mL)并在室温搅拌5天。将反应混合物浓缩并通过硅胶柱层析(己烷 /丙酮)纯化得到乙酰胺五糖72*(32mg,0.015mmol,98％)。[α]_D ²⁰＝-26.6(c＝ 0.87,CHCl₃)；IRν_max(膜)3420,3330,3030,2935,2870,1677,1455,1364,1070,7, 698cm^-1，¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.92–7.67(m,5H),7.63–6.87(m,55H), 6.80(d,J＝7.5Hz,2H),6.09(bs,1H),5.76(bs,1H),5.51(bs,1H),5.46–5.36(m, 2H),5.28(s,1H),5.22–5.12(m,2H),5.07–4.96(m,3H),4.93–4.33(m,22H), 4.29–4.08(m,5H),3.96–3.58(m,11H),3.56–3.30(m,6H),3.28–3.16(m,3H),2.03–1.85(m,6H),1.65–1.45(m,7H),1.36–1.08(m,11H).¹³C NMR(151MHz, CDCl₃)δ171.6,170.7,169.7,169.4,138.6,138.3,138.2,138.02,137.98,137.8,137.7, 137.6,136.3,134.5,133.2,133.1,128.9,128.7,128.65,128.62,128.58,128.48, 128.43,128.36,128.33,128.29,128.2,128.1,128.02,127.97,127.94,127.89,127.69, 127.67,127.64,127.56,127.44,127.39,126.9,126.53,126.49,126.2,103.8,100.5, 99.7,97.0,95.0,85.3,84.5,80.9,80.6,78.8,78.3,77.8,76.2,75.8,75.3,75.1,74.4, 74.22,73.4,73.2,71.7,70.7,69.8,69.5,68.3,67.4,67.3,66.6,66.5,55.2,50.6,50.4, 49.6,48.0,47.4,46.2,29.3,27.99,27.5,24.0,23.6,23.3,17.6,17.5,16.5.HRMS (ESI+)计算为C₁₃₀H₁₄₄N₄O₂₆Na⁺[M+Na]⁺2201.0000,得到2201.0086。

实施例68:5-氨基-戊基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖基-(1→2)-[β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)]-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖基-(1→3)-2-N-乙酰基-β-D-岩藻吡喃糖苷(73*)的合成

将五糖72*溶解在CH₂Cl₂/tBuOH/水(1.5:16:8,1mL)中，用氩气净化并用在相同的溶剂混合物(1mL)中的Pd(OH)₂在碳上的悬浮液(20％(w/w)装载量,10 mg)处理。将悬浮液用氢气净化、在室温下在氢气气氛下搅拌。24h后，加入新制备的Pd(OH)₂(5mg,1mL)的悬浮液并将反应物再搅拌24h、过滤并浓缩。将剩余物通过固相萃取(Chromabond C18,Macherey-Nagel)以及Sephadex LH-20排阻色谱(MeOH:H₂O)净化并冻干得到五糖73*(3mg,2.99μmol,50％)，为白色固体。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ5.16(d,J＝4.0Hz,1H),5.07(s,1H),5.00(d,J＝7.6Hz, 1H),4.58–4.47(m,2H),4.44–4.28(m,3H),4.17–4.05(m,3H),4.00–3.61(m, 12H),3.56–3.27(m,7H),3.11(dd,J＝9.3,7.9Hz,1H),2.99–2.88(m,2H),2.00(s,3H),1.96(s,3H),1.95(s,3H),1.69–1.46(m,4H),1.41–1.26(m,5H),1.22(d,J＝ 6.4Hz,3H),1.05(d,J＝6.5Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,D₂O)δ176.0,174.01, 173.97,173.3,102.8,101.6,99.7,97.3,93.7,77.8,76.0,75.8,75.2,73.8,71.9,71.7, 71.0,70.9,70.6,70.3,69.9,69.8,67.0,66.9,63.8,60.6,51.4,50.8,49.0,39.2,28.1, 26.3,22.3,22.1,21.9,15.9,15.3,15.2.HRMS(ESI+)计算为C₁₄₁H₇₀N₄O₂₄Na⁺ [M+Na]⁺1026.4311,得到1026.4397。

实施例69:N-(苄基)-苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-叠氮基-2-脱氧-4-O-(2-萘基甲基)-3-O-烯丙基-β-D-岩藻吡喃糖苷(74*)

向醇6*(150mg,0.24mmol,1当量)在THF:DMF(9:1,2.0mL)中的溶液加入烯丙基溴(30μL,0.35mmol,1.5当量)。然后将混合物冷却到0℃并加入在矿物油中为60％的NaH(19mg,0.47mmol,2当量)。将反应物升温至室温并搅拌过夜。将反应混合物用DCM稀释并用NaHCO₃淬灭。将有机相用盐水洗涤、通过Na₂SO₄干燥、过滤并将溶剂蒸发掉。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到烯丙基岩藻吡喃糖苷74*(145mg,0.21mmol,91％)。¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.41–7.19(m, 15H),7.18-7.11(m,2H),6.82(d,J＝8.4Hz,2H),5.19(t,J＝8.8Hz,1H),4.83–4.74 (m,4H),4.53–4.43(m,3H),4.39(d,J＝5.3Hz,2H),4.26(d,J＝7.7Hz,1H),3.85– 3.82(m,1H),3.77(s,3H),3.73–3.63(m,2H),3.60–3.43(m,4H),3.33(q,J＝6.6 Hz,1H),3.08(dd,J＝10.5,3.0Hz,1H),2.90–2.79(m,1H),2.65–2.55(m,2H), 2.53–2.45(m,1H),2.14(s,3H),1.64(h,J＝6.8Hz,1H),1.27(d,J＝6.6Hz,3H), 0.91–0.81(m,12H),0.11(d,J＝12.5Hz,6H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ156.8, 156.3,138.0,137.0,136.9,135.8,134.5,133.2,133.1,128.6,128.5,128.1,128.0, 127.9,127.8,127.3,127.2,126.7,126.1,126.0,117.6,102.3,81.0,74.7,71.6,70.6, 69.7,69.6,67.2,63.0,50.6,50.3,47.2,46.3,29.3,28.0,27.5,23.3,17.1.HRMS(ESI+) 计算为C₄₀H₄₆N₄O₆Na⁺[M+Na]⁺701.3315,得到701.3336。

实施例70:N-(苄基)-苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-叠氮基-2-脱氧-4-O-乙酰基 -3-O-烯丙基-β-D-异鼠李吡喃糖苷(quinovopyranoside)(77*)

在0℃向异鼠李吡喃糖苷74*(145mg,0.21mmol,1当量)在DCM:H₂O(18:1, 2mL)中的溶液加入2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(58mg,0.26mmol,1.2当量)。将反应物升温至室温并搅拌2.5h。将反应物用DCM稀释并加入NaHCO₃。将有机相用NaHCO₃洗涤(3×)直到溶液为无色。然后将有机相用盐水洗涤、通过Na₂SO₄干燥并将溶剂蒸发掉。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到异鼠李吡喃糖苷 75*(70mg,0.13mmol,61％)。在0℃向异鼠李吡喃糖苷75*(35mg,0.065mmol,1 当量)在DCM(1mL)中的溶液加入吡啶(32μL,0.390mmol,6当量)和三氟甲磺酸酐(22μL,0.130mmol,2当量)。在0℃将所得深紫色反应混合物搅拌30min。然后将反应物用DCM稀释并用NaHCO₃淬灭。分离相并将有机层用盐水洗涤、通过Na₂SO₄干燥、过滤并将溶剂蒸发掉。将所得的油用甲苯共蒸发、溶解在DMF (1mL)中并在下一步骤中不经进一步纯化即使用。将四丁基乙酸铵加入至三氟甲基磺酸盐(76*)在DMF中的溶液并在室温下搅拌过夜。将溶剂蒸发掉。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到异鼠李吡喃糖苷77*(26mg,0.044mmol,68％).[α]_D ²⁰＝-19.6(c＝0.56,CHCl₃)；IRν_max(膜)2939,2868,2111,1747,1698,1423,1230, 1066,699cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.45–7.08(m,10H),5.86(ddt,J＝ 17.2,10.4,5.7Hz,1H),5.30–5.10(m,4H),4.74(t,J＝9.5Hz,1H),4.56–4.41(m, 2H),4.32–4.15(m,2H),4.12–4.05(m,1H),3.94–3.76(m,1H),3.56–3.32(m, 3H),3.30–3.16(m,3H),2.09(s,3H),1.69–1.46(m,4H),1.42 1.26(m,2H),1.19(d, J＝6.2Hz,3H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ169.8,138.1,134.6,128.7,128.6, 128.04,127.97,127.4,117.3,102.0,80.1,74.9,73.7,70.2,67.3,66.2,50.7,50.4,47.2, 46.3,29.3,28.0,27.6,23.3,21.1,17.5.HRMS(ESI+)计算为C₃₁H₄₀N₄O₇Na⁺ [M+Na]⁺603.2795,得到603.2809。

实施例71:N-(苄基)-苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-叠氮基-2-脱氧-4-O-(2-萘基甲基)-3-O-烯丙基-β-D-异鼠李吡喃糖苷(79*)

向异鼠李吡喃糖苷77*(35mg,0.060mmol,1当量)在MeOH(0.5mL)中的溶液加入在MeOH中的0.5M NaOMe(0.362mL,0.181mmol,3当量)并搅拌过夜。将混合物用

IR120(H⁺)离子交换树脂中和、过滤并在真空下浓缩。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到醇(78*)(32mg,0.059mmol,99％)。向醇(78*) (32.5mg,0.060mmol,1当量)在THF:DMF(9:1,1.0mL)中的溶液加入2-萘基甲基溴(20mg,0.091mmol,1.5当量)。然后将混合物冷却到0℃并加入在矿物油中为60％的NaH(3mg,0.121mmol,2当量)。将反应物升温至室温。1.5h后加入2 当量的NaH并将反应物再搅拌1h。将反应混合物用DCM稀释并用NaHCO₃淬灭。然后将有机相用盐水洗涤、通过Na₂SO₄干燥、过滤并将溶剂蒸发掉。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到异鼠李吡喃糖苷79*(35mg,0.052mmol,82％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.78–7.71(m,3H),7.70(bs,1H),7.45–7.33(m,3H), 7.33–7.04(m,10H),5.92(ddt,J＝16.4,10.3,5.8Hz,1H),5.24(dd,J＝16.0,1.6Hz, 1H),5.18–5.03(m,3H),4.83(ABq,J＝11.0Hz,2H),4.42(d,J＝7.7Hz,2H),4.27 (qdt,J＝12.2,5.9,1.5Hz,2H),4.11(t,J＝8.7Hz,1H),3.83–3.69(tt,J＝15.6,6.3 Hz,1H),3.47–3.03(m,7H),1.62–1.37(m,4H),1.35–1.16(m,2H),1.22(d,J＝ 6.1Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ156.8,156.3,138.0,137.0,136.9,135.5,134.8,133.4,133.1,128.63,128.57,128.4,128.0,127.9,127.8,127.4,127.3,126.9,126.3,126.2,126.1,101.9,83.3,82.7,75.5,74.4,71.4,70.0,69.9,67.2,66.5,50.6,50.3,47.2,46.3,29.3,28.0,27.5,23.3,18.0.HRMS(ESI+)计算为C₄₀H₄₆N₄O₆Na⁺ [M+Na]⁺701.3315,得到701.3348。

实施例72:N-(苄基)-苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-叠氮基-2-脱氧-4-O-(2-萘基甲基)-β-D-异鼠李吡喃糖苷(80*)

将铱配合物(0.71mg,0.884μmol,0.02当量)放入无水物THF(2mL)中并在室温下用氮气鼓泡2分钟。然后将溶液再用氢气净化2分钟。使反应混合物颜色从红色变为无色并在氢气压力下将溶液搅拌15分钟。在氩气下通过注射器将活性催化剂的溶液加入至烯丙基异鼠李吡喃糖苷79*(30mg,0.044mmol,1当量) 在无水THF(1mL)中的溶液中并在室温下搅拌2小时。将反应混合物用NaHCO₃溶液淬灭并用DCM提取。将合并的有机层用盐水洗涤、通过Na₂SO₄干燥、过滤并蒸发得到异构化的化合物(通过¹H NMR确认异构化)。在室温下将基板放入 THF-水(2:1,1.5mL)中并加入碘(22mg,0.088mmol,2当量)。将褐色溶液搅拌2 小时，然后用10％的Na₂S₂O₃溶液淬灭。然后将水相用乙酸乙酯提取(3×)。将合并的有机相通过Na₂SO₄干燥、过滤并将溶剂蒸发掉得到棕色液体。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到异鼠李吡喃糖苷80*(30mg,0.053mmol,定量)。[α]_D ²⁰＝-8.4(c＝1.7,CHCl₃)；IRν_max(膜)3429,3032,2937,2868,2110,1698,1455,1424, 1093,698cm^-1；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.87–7.80(m,3H),7.79(s,1H),7.51 –7.45(m,3H),7.42–7.13(m,10H),5.18(d,J＝18.8Hz,2H),4.94(ABq,J＝11.4 Hz,2H),4.50(d,J＝12.8Hz,2H),4.31–4.18(m,1H),3.92–3.78(m,1H),3.54– 3.34(m,3H),3.34–3.12(m,4H),2.49(d,J＝2.8Hz,1H),1.60(q,J＝13.9,7.5Hz,4H),1.43–1.27(m,2H),1.36(d,J＝6.2Hz,3H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ 156.9,156.3,138.1,135.5,133.4,133.2,128.7,128.6,128.1,128.03,127.96,127.9, 127.3,127.0,126.4,126.2,126.0,101.9,83.2,75.3,71.4,70.0,67.3,66.7,50.7,50.3, 47.2,46.3,29.4,28.0,27.6,23.3,18.1.HRMS(ESI+)计算为C₃₇H₄₂N₄O₆Na⁺ [M+Na]⁺661.3002,得到661.3019。

实施例73:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基[2,3,4,6-四-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)]-苄基-3,4-二-O-苄基-6-O-苯甲酰基-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯 -(1→3)-2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖基-(1→3)-2-叠氮基-2-脱氧-4-O-(2-萘基甲基)-β-D-异鼠李吡喃糖苷(82*)的合成

将受体80*(17mg,0.027mmol,1.9当量)和三糖亚氨酸酯68*(20mg,0.014 mmol,1.0当量)用甲苯共蒸发两次并在真空下干燥。将剩余物溶解在DCM(1mL) 中。加入分子筛酸洗液

并将反应混合物冷却至-35℃。加入TMSOTf(1μL, 5.5μmol,0.4当量)并在1h内使反应物升温至-20℃。将反应物用三乙胺淬灭、过滤并将溶剂蒸发掉。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到四糖(81*)(19.3mg,10.3 μmol,73％)。HRMS(ESI+)计算为C₁₀₉H₁₁₇N₇O₂₂Na⁺[M+Na]⁺1899.8183,得到 1899.8203。向四糖(81*)(17mg,0.009mmol,1当量)在DCM(1mL)中的溶液加入溶解在AcOH(0.04mL)和吡啶(0.06mL)中的水合肼(6μL,0.12mmol,13当量) 的溶液。将所得反应混合物在室温下搅拌1h-2h。通过加入丙酮将反应物淬灭并将溶剂蒸发掉。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到四糖82*(14mg,7.87μmol, 87％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.72(m,3H),7.66(bs,1H),7.41–7.35(m,2H), 7.31–7.12(m,41H),7.09–7.04(m,3H),6.98–6.90(m,2H),5.59(d,J＝3.7Hz, 1H),5.15–5.04(m,4H),4.97–4.87(m,2H),4.82–4.57(m,8H),4.47–4.40(m, 5H),4.35–4.28(m,3H),4.27–4.18(m,1H),4.13(d,J＝7.1Hz,1H),3.99–3.80(m, 5H),3.68–3.31(m,16H),3.25–3.10(m,4H),1.65–1.40(m,4H),1.37–1.22(m, 2H),1.31(d,J＝6.1Hz,3H),0.75(d,J＝6.6Hz,3H).HRMS(ESI+)计算为C₁₀₄H₁₁₁N₇O₂₀Na⁺[M+Na]⁺1801.7815,得到1801.7781。

实施例74:N-(苄基)苄氧基羰基-5-氨基-戊基2-叠氮基-3,4-二-O-苄基-2-脱氧-α-L-肺炎吡喃糖基-(1→2)-[2,3,4,6-四-O-苄基-β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)]-苄基 -3,4-二-O-苄基-6-O-苯甲酰基-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-叠氮基-2-脱氧-α-L-岩藻吡喃糖基-(1→3)-2-叠氮基-2-脱氧-4-O-(2-萘基甲基)-β-D-异鼠李吡喃糖苷(83*)的合成

将受体82*(13.5mg,7.6μmol,1.0当量)和亚氨酸酯8a*(10mg,0.019mmol,2.4当量)用甲苯共蒸发两次并在真空下干燥。将剩余物溶解在甲苯(1mL)中。将反应混合物冷却至-35℃。加入TMSOTf(0.25μL,1.4μmol,0.1当量)并在2h内将反应物升温至-20℃。将反应物用三乙胺淬灭、过滤并将溶剂蒸发掉。经硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯)得到五糖83*(13.5mg,6.34μmol,84％)。HRMS(ESI+)计算为 C₁₂₄H₁₃₂N₁₀O₂₃Na⁺[M+Na]⁺2152.9398,得到2152.9406。

实施例75:5-氨基-戊基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖基-(1→2)-[β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)]-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖基-(1→3)-2-N-乙酰基-β-D-异鼠李吡喃糖苷(85*)的合成

在室温下向叠氮基五糖83*(13mg,6.1μmol,1当量)在吡啶(1mL)中的溶液加入硫代乙酸(0.25mL)并搅拌5天。将反应混合物浓缩并通过硅胶柱层析(己烷/丙酮)纯化得到五糖(84*)(9.4mg,4.31μmol,71％)。HRMS(ESI+)计算为 C₁₃₀H₁₄₄N₄O₂₆Na⁺[M+Na]⁺2201.0000,得到2201.0027。将五糖(84*)(5.5mg,2.52 μmol,1当量)溶解在CH₂Cl₂/tBuOH/水(1.5:16:8,1mL)中，用氩气净化并用在相同的溶剂混合物(1mL)中的Pd(OH)₂在碳上的悬浮液(20％(w/w)装载量,10mg) 处理。将悬浮液用氢气净化、在室温下在氢气气氛下搅拌。24h后，加入新制备的Pd(OH)₂(5mg,1mL)的悬浮液并将反应物再搅拌24h、过滤并浓缩。将剩余物通过固相萃取(Chromabond C18,Macherey-Nagel)以及Sephadex LH-20排阻色谱 (MeOH:H₂O)净化并冻干得到五糖85*(1.5mg,1.49μmol,59％)为白色固体。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ5.20(d,J＝4.0Hz,1H),5.09(s,1H),5.01(d,J＝7.6Hz, 1H),4.52(d,J＝7.9Hz,1H),4.51–4.29(m,5H),4.18–4.13(m,1H),4.13–4.07(m, 1H),4.02–3.90(m,2H),3.86–3.62(m,6H),3.58(t,J＝9.4Hz,1H),3.54–3.30(m, 9H),3.25(t,J＝9.2Hz,1H),3.13(dd,J＝9.3,7.9Hz,1H),2.97–2.92(m,2H),2.01 (s,3H),1.97(s,3H),1.96(s,3H),1.68–1.49(m,4H),1.40–1.31(m,2H),1.31– 1.23(m,6H),1.07(d,J＝6.6Hz,3H).¹³C NMR(151MHz,D₂O)δ175.8,173.9,173.6,173.2,102.6,101.3,99.5,96.0,93.6,77.6,77.1,76.3,75.8,75.7,75.3,73.7,73.4,71.8,71.5,71.1,70.7,69.9,69.7,66.9,66.8,66.6,63.7,60.5,55.5,50.6,48.7,39.2,28.0,26.6,22.2,22.1,22.0,21.8,16.6,15.6,15.2.HRMS(ESI+)计算为C₁₄₁H₇₀N₄O₂₄Na⁺[M+Na]⁺1025.4278,得到1025.4309。

实施例76:5-氨基-戊基[β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)]-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖苷(基准1)

¹H NMR(400MHz,D₂O)δ4.93(d,J＝3.5Hz,1H),4.67–4.56(m,2H),4.30– 4.27(m,1H),4.26–4.03(m,3H),3.92–3.84(m,1H),3.76–3.60(m,3H),3.54– 3.25(m,8H),2.94(t,J＝7.6Hz,2H),1.97(s,3H),1.68–1.52(m,J＝20.7,7.0,6.4 Hz,4H),1.44–1.34(m,J＝7.6Hz,1H),1.31(d,J＝6.7Hz,3H),1.27–1..18(m, 1H).HRMS(ESI+)计算为C₂₅H₄₄N₂O₆Na⁺[M+Na]⁺651.2589,得到651.2598。

实施例77:5-氨基-戊基[β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)]-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖基-(1→3)-2-N-乙酰基-β-D-岩藻吡喃糖苷(基准2)

¹H NMR(400MHz,D₂O)δ5.04(d,J＝3.9Hz,1H),4.65–4.60(m,2H),4.38(d, J＝8.5Hz,1H),4.34–4.06(m,4H),3.95–3.24(m,16H),2.98–2.90(m,2H),1.98 (s,3H),1.96(s,3H),1.68–1.49(m,4H),1.41–1.17(m,2H),1.31(d,J＝6.8Hz, 3H),1.23(d,J＝6.5Hz,3H).HRMS(ESI+)计算为C₃₃H₅₇N₃O₂₀Na⁺[M+Na]⁺833. 3433,得到833.3441。

实施例78：聚糖微阵列制备和筛选-I

在

NHS活化载片(Surmodics)上使用Scienion S3微阵列印刷机印刷64孔多聚糖阵列。将所有化合物(含有氨基连接子的蛋白质和聚糖)溶解在印刷缓冲液(50mM磷酸钠，pH8.5)中。将印刷的载片在湿度饱和的室中储存过夜以完全反应，在1200g通过离心干燥，然后在4℃下储存。在使用之前，将载片用水洗涤、用淬灭溶液(50mM磷酸钠，100mM乙醇胺，pH7.4)在室温下淬灭2小时，用水洗涤并在室温下用在PBS中为1％的BSA处理1小时PBS。用PBS洗涤后，通过离心干燥载片。将64孔垫片应用于载片并在室温下进行一级抗体温育(将血清在1％BSA-PBS中稀释)1小时。用含有0.1％吐温-20的PBS 将孔洗涤3次，每次10分钟。将二级抗体稀释液移液至孔中。在黑暗中在室温下温育1小时后，将载片用含有0.1％Tween-20的PBS洗涤三次，每次10分钟，并立即用水洗涤一次。将垫片取出并通过离心将载片干燥。使用具有用于FITC 激发的488nm激光和用于AlexaFluor 594的594nm激光的GenePix 4300A微阵列扫描仪(Bucher Biotec，Basel，Switzerland)读出荧光。使用GenePix Pro 7(Bucher Biotec)进行分析。

使用如上所述制备的含有十一个SP5CPS亚结构的聚糖微阵列来鉴定在兔子中产生的商业抗SP5特异性分型血清的结合表位(参见图4)。

如图4A所示，11个聚糖中只有3个被特异性抗SP5IgG结合，即四糖33* (位置1)、α-PneNAc-(1→2)-Glc二糖27*(位置8)和α-PneNAc单糖36*(位置 10)。所有三个被识别的寡糖均含有α-PneNAc残基，表明该基序是所识别的表位的一部分。还观察到，IgG以相当的水平结合四糖33*和二糖27*，表明α-PneNAc-(1→2)-GlcA实际上是由特异性SP5分型血清的IgG识别的表位。图 4B示出了微阵列样品，其中分型血清被用天然SP5CPS的溶液预温育。与图4A 的样品相比，抗聚糖IgG水平显著降低。这意味着在预温育期间与天然CPS结合的抗体不再可用于与合成聚糖结合。因此，天然CPS和合成聚糖的结合表位是相同的。

此外，检测到低水平的抗-21*(位置5)IgG和抗-51*(位置6)IgG和非常低水平的抗-20*(位置4)IgG、抗-44*(位置7)IgG、抗-52*(位置9)IgG和抗-37*(位置11)IgG。完全没有检测到针对D-FucNAc 15*(位置3)和含有Sug 的样品14*(位置2)的抗体。有趣的是，检测到比含有L-FucNAc-(1→3)-β-Sug 20* 的样品更高水平的抗二糖21*抗体。这将表明酮的存在实际上对于抗体结合是有害的。如图5B所示，用天然SP5CPS对人血清的预温育导致抗四糖33*IgG水平的显著降低。这证明结合33*的抗体是SP5特异性的，因为它们也结合SP5CPS。

实施例79：四糖33*与CRM₁₉₇的缀合：缀合物58*a、58*b和58*c的合成

使用如在此详细描述的两步过程制备缀合物。

步骤1：形成对硝基苯基(PNP)酰胺

向在玻璃小瓶中的四糖33*(0.5mg，0.6μmol，1当量)和己二酸二苯酯(1.6mg， 4.2μmol，7当量)加入吡啶和DMSO的混合物(1：1，0.24mL)并将混合物搅拌5分钟以完全溶解。然后，加入三乙胺(0.83μL，6μmol，10当量)并搅拌20 分钟。TLC显示起始物质完全消耗。在真空下除去溶剂。将剩余物用二氯甲烷 (3×1mL)洗涤以除去过量PNP酯，并将获得的白色固体真空干燥。

步骤2：与CRM₁₉₇缀合

将步骤1中获得的化合物(40当量)溶于DMSO(10μL)中，将CRM₁₉₇(1 当量)加入到磷酸钠缓冲液(0.1NaPi，pH～8.0)中，并将混合物搅拌18小时。然后，将反应混合物用400μL缓冲液(pH～8.0)洗涤两次，然后使用超滤过滤器(10000KDa)用400μL高压灭菌水洗涤三次。用PBS缓冲液将材料转移到 Eppendorf小瓶中，并在-20℃储存(400μL)。

用pH～8.5的缓冲液重复相同的过程。

通过将五糖73*与CRM₁₉₇缀合得到五糖缀合物87*。

Maldi(马尔迪)分析：

1)缀合物58*a(图6B中的缀合物1)：pH8.0、0.9mg CRM197、四糖装载平均值＝7

2)缀合物58*b(图6B中的缀合物2)：pH 8.5、0.6mg CRM₁₉₇、四糖装载平均值＝8

3)缀合物58*c(图7A中的缀合物2)：四糖装载平均值＝11.2

4)缀合物87*(图7B中的缀合物)：pH8.0、五糖装载平均值＝12

缀合物的表征

MALDI分析：使用CRM₁₉₇作为标准物，通过基质辅助激光解吸/电离 (MALDI)分析测定缀合物58*a和58*b的平均分子大小，并计算每个CRM₁₉₇分子附接的平均四糖数。

SDS-PAGE：在变性条件下通过SDS-PAGE(10％)分离缀合物。在6X SDS-PAGE样品装载染料中制备样品。在电极缓冲液中在120V和25mA进行1 小时30分钟的电泳，将凝胶用考马斯亮蓝R250染色。

蛋白质估算

使用Micro BCA蛋白质测定试剂盒(Thermo-scientific，USA)按照制造商的说明估算蛋白质浓度。在PBS中制备样品并将其与等体积的试剂混合物(B:C:A 为24:1:25)混合。将板在37℃温育，并在560nm测定吸光度。用随试剂盒提供的已知浓度的BSA绘制标准曲线。

小鼠免疫和多克隆血清的产生

在第0天、14天和28天，将10周龄至12周龄的雌性ZIKA兔子(n＝3) 用明矾中的缀合物(在明矾(氢氧化铝)中的10μg缀合物)制剂进行皮下免疫。在第0天、14天、21天和35天收集免疫前血清和超免疫血清。对照组仅接受在明矾制剂中的CRM₁₉₇。通过聚糖微阵列和ELISA分析免疫应答。

实施例80：聚糖微阵列制备和筛选-II

制备微阵列载片：制备低聚糖、多糖、CRM₁₉₇和载有间隔物的玻璃载片；淬灭；用1％BSA-PBS封闭并在4℃储存备用。

通过使用配备有4型涂布喷嘴的S3压电微阵列印刷机(Scienion)，在印刷缓冲液(50mM磷酸钠，pH8.5)中，用合成聚糖和天然多糖以两种不同浓度(100μM 和200μM)的滴涂CodeLink NHS活化的载片(Surmodics)。将滴涂室的相对湿度始终保持在65％。将经滴涂的载片在室温下在加湿室中温育过夜。在室温下将载片上的非反应性基团用50mM磷酸钠、100mM乙醇胺在pH9.0封闭1小时。随后将载片用水洗涤三次，每次5分钟；通过在300g离心5分钟(CombiSlide ***，Eppendorf)干燥并在4℃下储存备用。

微阵列结合测定法：将FlexWell 64(Grace Bio-Labs,Bend,OR,USA)网格应用于微阵列载片(如上所述将网格施加在印刷的载片上)。在室温下将载片与在兔子中针对不同稀释度(在1％BSA-PBS(w/v)中稀释)的SP-5四糖和五糖缀合物培养的多克隆血清在加湿室中一起温育1h，用PBS(v/v)中的0.1％吐温 -20洗涤三次并通过离心(300×g，5分钟)干燥。在室温在加湿室中将载片与荧光标记的二级抗体、用(PBS)中的1％BSA(w/v)稀释的山羊抗小鼠IgG 635nm (红色；1:400稀释)、山羊抗小鼠IgM 594nm(黄色；1:200稀释)和山羊抗兔子 FITC488(1:200稀释)一起温育1h，用PBS中的0.1％Tween-20(v/v)洗涤三次，用去离子水淋洗一次并通过离心(300×g，5分钟)干燥，然后用GenePix 4300A 微阵列扫描仪(分子设备，Sunnyvale，CA，USA)进行扫描。使用GenePix Pro 7软件(分子设备)进行图像分析。调整光电倍增管(PMT)电压，使得扫描没有饱和信号(图8)。

为了确定CPS-5多糖的最小聚糖结构，还制备了另外的微阵列，我们将微阵列载片与在兔子中培养的ST5型血清一起温育(图8)。通过聚糖微阵列分析针对印刷聚糖和多糖的血清型的反应性模式。微阵列数据表明，血清型与CPS-5多糖一起识别出多种合成聚糖(图8B)。然而，血清型还以高亲和力识别四糖33* 和五糖73*，并被认为是已经被MHCII分子呈递的B细胞表位。因此，以下结果表明这些寡糖对免疫力是至关重要的。

实施例81：具有在兔子中产生的针对ST5合成聚糖缀合物的抗体的聚糖微阵列

为了分析ST5合成聚糖特异性免疫应答，我们将在经ST5四糖(58*c)和五糖缀合物(87*)免疫的兔子(n＝3)中产生的超免疫血清施加到微阵列载片上。微阵列数据表明合成聚糖特异性抗体与在载片上印刷的结构和天然多糖具有交叉反应性(图9B和图9D)。该结果表明四糖33*和五糖73*在兔中具有免疫原性并诱导交叉反应性抗体。

实施例82：ELISA：通过ELISA分析兔血清的终点效价。在4℃将高度结合的96孔聚苯乙烯微量滴定板(Corning，USA)用PBS中的CSP-5(50μl，10μg/ ml/孔)(pH7.2)涂布过夜。将板用含有0.1％Tween-20的PBS(PBST)洗涤三次，并用PBS中的10％FCS在37℃封闭1小时。用PBST洗涤三次后，将板与不同稀释度的单独兔血清和合并兔血清(n＝3)以一式两份或一式三份在37℃温育1小时。将板用PBST洗涤4-5次，并与缀合有HRP的山羊抗兔子IgG抗体一起温育(在含有在10％FCS中稀释的血清的PBS中以1:10000稀释，然后在37℃温育1小时)。将板用PBST彻底洗涤并用3,3',5,5'-四甲基联苯胺(Thermo Fisher Scientific，USA)显色。通过加入2％H₂SO₄终止反应，在450nm处记录吸光度。

通过ELISA分析抗体反应

在第0天、14天和28天，用10μg聚糖等效缀合物对三组兔子(n＝3)进行皮下免疫，并在不同的时间点分析抗体应答。测定各个兔子血清的CSP-5(Life Technologies，USA)多糖特异性终点抗体滴度。用四糖缀合物和五糖缀合物的免疫诱导高抗体滴度(图10A)。我们进一步通过终点对多糖特异性免疫球蛋白进行了定量(图10B)。终点滴度计算为最高血清稀释度的倒数，其给出用免疫前血清(以1:1000稀释)获得的吸光度值。以第35天的倍数变化对每组的各个动物的抗体应答作图。该分析表明，与四糖33*或缀合物58*c相比，五糖73*或缀合物87*具有更高的免疫原性。

实施例83：抗ST5聚糖缀合物血清的表面结合

针对肺炎球菌的保护性免疫力主要是抗体介导的，并且对于有效的候选疫苗，B细胞表位应该对抗体来说容易进入。为了研究B细胞表位的可进入性，我们进行了流式细胞术表面染色。将UV灭活的肺炎球菌细胞与免疫前血清和超免疫血清一起温育随后与FITC缀合的山羊抗兔子抗体温育。通过流式细胞术分析染色的细菌。流式细胞术数据表明与超免疫血清一起温育的肺炎球菌细胞表现出表面染色(四糖：黑色直方和五糖：灰色直方)。我们没有观察到用免疫前血清(黑色虚线直方)的染色。这表明针对抗ST5聚糖的抗体定位在肺炎球菌表面上的表位上(图11)并被认为是新型合成候选疫苗。

流式细胞术分析：将肺炎链球菌血清型5细胞如前所述用少量改性物染色 (Khan等；2015,Clin Vaccine Immunol.22(1):99-107)。简单地，通过以6000×g 离心收集对数生长期(A₆₀₀＝0.3-0.4)肺炎球菌细胞。将细胞用PBS(pH 7.4) 洗涤并用UV灭活10分钟。通过铺在血琼脂板上确认细胞失活。用在PBS中制备的2％BSA将细胞在室温封闭30分钟，然后与免疫前血清和超免疫合并血清 (n＝3)(1:100稀释)在室温一起温育1小时。使用在0.5％BSA-PBS中以1:200 稀释度稀释的缀合有FITC的山羊抗兔子IgG(Life Technologies,USA)作为二级抗体。通过流式细胞术(BD Bioscience)分析染色的细胞。

实施例84：体外调理素吞噬杀伤测定：如上述进行调理素吞噬杀伤测定 (Romero-Steiner等,CLINICAL AND DIAGNOSTIC LABORATORY IMMUNOLOGY 1997,415-422)。简单地，在进行测定之前，使用0.8％二甲基甲酰胺(DMF)将约4×10⁵个细胞/ml的HL-60细胞分化成吞噬细胞5-6天。分化后，收集细胞并用血球计计数并以1×10⁷个细胞/ml的密度重悬在调理素吞噬缓冲液(含有Ca⁺⁺和Mg⁺⁺以及0.1％明胶的HBSS)中。将在20μl调理素吞噬缓冲液中的血清型5菌株(1000cfu)与10μl合并的(n＝3)抗SP-5四糖缀合物(58*c) 多克隆血清(第35天)一起温育。将免疫前血清(第0天)、抗CRM₁₉₇和抗Prevnar

血清用作阳性对照和阴性对照，并在37℃将细菌预调理5分钟。预调理后，在37℃和5％CO₂下，向8μl幼兔补体和40μl分化的HL-60细胞(比例为1:400)，间歇振荡。通过在TSA板上以一式三份连续稀释进行平板培养来测定活的细胞外肺炎球菌。将3个独立实验的平均值绘制为相对于“无血清”对照的杀伤百分比。

抗ST5(四糖)抗体通过HL-60细胞增加对肺炎球菌的摄取

抗ST5(四糖)可通过吞噬作用促进肺炎球菌的清除。我们进行了调理素吞噬杀伤测定以评估对用ST5(四糖)缀合物58*c免疫的应答所诱导的抗体的功能相关性。将分化的HL-60细胞与用抗ST5(四糖)或免疫前血清预调理的血清型5细菌一起温育。如材料和方法中所述，通过平板培养法评估对肺炎球菌的杀伤。与免疫前血清相比，针对ST5(四糖)的多克隆抗体获得的相对杀伤百分比大于50％(图12)。我们观察到免疫前血清的一些基础水平的杀伤(～25％)。使用抗prevnar

兔子血清作为阳性对照。OPKA数据表明，ST5(四糖)结合物(58*c)产生中和抗体并促进分化的HL-60细胞杀伤肺炎球菌。

Claims

1.一种通式为(I)的糖及其药学上可接受的盐：

其中，

R¹选自–R²、–R⁴、

R²表示

R³选自–H、–CH₃、–C₂H₅、–C₃H₇、–C₄H₉和–CF₃；

R⁴表示R⁶或

R⁵表示–H或

R⁶表示–O–L–NH₂；

R⁷和R⁸彼此独立地选自–H和–OH但不同时为–H；

R⁷和R⁸能够与它们所连接的碳原子共同形成羰基C＝O；

R²³选自–H、–C(O)CH₃、–C(O)CF₃和–C(O)CCl₃；

–L–表示–(CH₂)_m–，并且m是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数。

2.根据权利要求1所述的糖，其中，R¹表示

并且R²和R³具有如权利要求1所定义的含义。

3.根据权利要求1所述的糖，其中，R⁴表示R⁶。

4.根据权利要求1所述的糖，通式为(III)：

其中，R³、R⁵、R⁶和R²³具有如权利要求1所定义的含义。

5.根据权利要求1所述的糖，其为式72：

其中，L、R⁷、R⁸和R²³具有如权利要求1所定义的含义。

6.根据权利要求1所述的糖，其中，R³表示–H并且R²³表示–C(O)CH₃。

7.根据权利要求1所述的糖，选自由以下所组成的组：

5-氨基-戊基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯(27*)；

5-氨基-戊基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-2-N-乙酰基-β-D-岩藻吡喃糖胺糖苷(33*)；

5-氨基-戊基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-[β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)]-2-N-乙酰基-β-D-岩藻吡喃糖胺糖苷(73*)；

5-氨基-戊基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-[β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)]-2-N-乙酰基-β-D-吡喃异鼠李糖胺糖苷(85*)；以及

5-氨基-戊基2-N-乙酰基-α-L-肺炎吡喃糖胺基-(1→2)-β-D-葡糖吡喃糖基糖醛酸酯-(1→3)-2-N-乙酰基-α-L-岩藻吡喃糖胺基-(1→3)-[β-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)]-2-乙酰胺基-2,5-二脱氧-β-D-木-己-4-糖苷(88*)。

8.一种式为(IX)、36、41、63、68*、70或70a的中间体化合物：

其中，

R²⁴选自

–F、–Cl、–Br、–I、–SR²⁸、–SeR²⁹、–OPO₃R³⁰ ₂；

R²⁵选自：–N₃、–NBn₂、–NBnCbz；

R²⁶和R²⁷彼此独立地选自：–H、–Bn、

–Si(CH₃)₃、–Si(CH₂CH₃)₃、–C(O)CH₃、–C(O)Ph、

或R²⁶和R²⁷能够共同形成

R²⁸选自：–CH₃、–CH₂CH₃、–Ph、

R²⁹表示–Ph；

R³⁰表示–CH₂CH₂CH₂CH₃；

其中，L具有如权利要求1所定义的含义；

其中，L和R²³具有如权利要求1所定义的含义；

其中，L具有如权利要求1所定义的含义；

其中，L具有如权利要求1所定义的含义；或者

其中，L具有如权利要求1所定义的含义。

9.根据权利要求8所述的中间体，选自由36、41、63、70、70a所组成的组，其中，L是–C₅H₁₀–和/或R²³是CH₃CO–。

10.一种缀合物，包括根据权利要求1-7中任一项的所述糖。

11.根据权利要求10所述的缀合物，选自由式为(X)、(XI)和(XII)的缀合物所组成的组：

其中，x、y和z各自独立地为1至20的整数。

12.根据权利要求10所述的缀合物，选自由58*a、58*b、58*c和87*所组成的组：

13.根据权利要求10所述的缀合物，用于在人和/或动物宿主中产生保护性免疫应答。

14.根据权利要求10所述的缀合物，用于预防和/或治疗与其荚膜多糖中含有N-乙酰基-L-肺炎糖胺的细菌相关的疾病。

15.根据权利要求14所述的缀合物，其中，所述细菌是肺炎链球菌血清型5。

16.根据权利要求14所述的缀合物，其中，所述与细菌有关的疾病包括肺炎、脑膜炎、中耳炎、菌血症；以及慢性支气管炎的急性加重、鼻窦炎、关节炎和结膜炎。

17.一种药物组合物，包括根据权利要求10所述的缀合物和/或根据权利要求1-7中任一项所述的糖以及至少一种药学上可接受的冷冻保护剂、冻干保护剂、赋形剂和/或稀释剂。

18.根据权利要求17所述的药物组合物，还包括至少一种其它肺炎链球菌血清型的抗原。

19.根据权利要求17所述的药物组合物，用于在人和/或动物宿主中产生保护性免疫应答。

20.一种根据权利要求1-7中任一项所述的糖，用于在检测针对其荚膜多糖中含有N-乙酰基-L-肺炎糖胺的细菌的抗体的免疫学测定中作为标志物。