CN107708445A - 竹发酵提取物的制造方法及免疫赋活剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种基于新功能的竹的新用途。竹发酵提取物的制造方法具有:粉碎工序,将竹粉碎而得到竹粉;发酵工序,利用乳酸菌使竹粉发酵而得到竹发酵物;以及提取工序,将竹发酵物进行热水提取而得到提取液。
Description
技术领域
本发明涉及一种将使竹进行乳酸发酵而形成的竹发酵物进行提取处理而得到的竹发酵提取物的制造方法及含有该竹发酵提取物作为有效成分的免疫赋活剂、免疫赋活用食品组合物。
背景技术
竹为主要在包含日本在内的亚洲地域中较多地看到的稻科植物。竹由于成长快且采伐也容易,因此,自古以来作为建筑材料或工艺品、日用品的材料被广泛使用。但是,由于合成树脂等化学材料的出现而产生竹材的利用减少,未采伐而仍旧留置的竹林侵蚀野山或农地的问题。另外,在所管理的竹林中,由于没有采伐竹的管理人,因此,存在耗费废弃费用的问题。
因此,为了有效利用竹,正在进行与竹的新用途有关的研究开发。例如,专利文献1中记载有:在竹材的表皮部分具有抗菌作用,将从竹材的表皮部分得到的竹微粉末用作脱臭抗菌材料。另外,本申请发明人的专利文献2~4中记载有使将竹材进行粉碎加工而得到的竹粉进行乳酸发酵而得到的乳酸发酵竹粉,且记载有该乳酸发酵竹粉可以适用于家畜饲料、植物肥料、土质改良剂、消臭制品及抗菌制品等。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本专利第2524944号
专利文献2:日本专利第5357459号
专利文献3:日本特开2014-64564号公报
专利文献4:日本特开2014-64565号公报
发明内容
发明所要解决的课题
提出了各种如上所述的竹的新用途,但为了进一步谋求竹的利用,期待基于提高竹的价值的新功能的用途。
本发明是鉴于上述方面而研究出的发明,其目的在于,提供一种基于新功能的竹的新用途。
另外,本发明的其它目的在于,提供一种竹的新用途,其基于与本申请发明人迄今为止提出的乳酸发酵竹粉有关的技术。
用于解决课题的技术方案
本申请发明人发现,通过对使竹进行乳酸菌发酵而得到的竹发酵物实施热水提取处理,可得到具有免疫赋活作用的提取物,完成了本发明。因此,解决上述课题的本发明的竹发酵提取物的制造方法具有:粉碎工序,将竹粉碎而得到竹粉;发酵工序,利用乳酸菌使竹粉发酵而得到竹发酵物;以及提取工序,将竹发酵物进行热水提取而得到提取液。由此,能够容易地得到具有免疫赋活作用的竹发酵提取物。通过将粉碎竹而得到的竹粉设为发酵原料,菌体接触的表面积增加,同时,通过粉碎而细胞内部所含的糖类、氨基酸、维生素等在竹粉中溶出,栖息于微细的蜂窝构造的柔组织等中的乳酸菌也在竹粉中分散,因此,乳酸菌有效地增殖,也促进发酵。而且,通过将该竹发酵物进行热水提取,可得到具有免疫赋活作用的竹发酵提取物,因此,安全性也高,以食品、饮料、化妆品及医药为主,可以安心地适用于畜产饲料、水产用添加剂或农业用制剂等各种各样的制品。
另外,本发明的竹发酵提取物的制造方法还优选还具有在提取液或其浓缩液中添加醇并得到沉淀的沉淀生成工序。由此,可得到具有提高的免疫赋活作用的竹发酵提取物。
另外,在上述的沉淀生成工序中,还优选以醇的最终浓度成为60~80重量%的方式添加醇。由此,选择为了形成沉淀而添加的醇的适合的浓度。
进而,在上述的提取工序中,还优选竹发酵物的热水提取在80℃~130℃、0.1~0.3MPa条件下进行。由此,选择适合的热水提取的温度及压力条件。
另外,本发明的竹发酵提取物的制造方法中的竹还优选为竹的茎部。通过仅将竹的茎部用于发酵材料,微生物的增殖变得活跃,并促进发酵。另外,用于发酵的水分调整也变得容易,因此,发酵状态稳定。
另外,本发明的免疫赋活用食品组合物含有通过上述的工序而得到的竹发酵提取物作为有效成分。本发明的免疫赋活用食品组合物特别是具有使自然免疫功能活化的作用,因此,通过作为食品摄取,可以经由肠管免疫机构而将自然免疫功能、即对病毒或细菌等的迅速的感染防御或对恶性肿瘤的攻击等作用进行活化并增强。
进而,本发明的免疫赋活剂含有依次经过以下工序而得到的竹发酵提取物作为有效成分:将竹粉碎而得到竹粉的粉碎工序、利用乳酸菌使竹粉发酵而得到竹发酵物的发酵工序、将竹发酵物进行热水提取而得到提取液的提取工序及在提取液或其浓缩液中添加醇并得到沉淀的沉淀生成工序。本发明的免疫赋活剂特别是具有使自然免疫功能活化的作用。由此,可以将自然免疫功能、即对病毒或细菌等的迅速的感染防御或对恶性肿瘤的攻击等作用进行活化并增强。
另外,本发明的竹发酵提取物的制造方法还优选在上述的发酵工序中添加至少含有魏斯氏菌(Weissella)属的乳酸菌的培养物。由此,作为启动物,添加用于得到本发明的竹发酵提取物的适合的微生物种,因此,在发酵工序中耗费的时间被缩短。
另外,本发明的竹发酵提取物的制造方法还优选具备在上述的发酵工序之前利用乳酸菌使竹粉发酵而得到竹发酵物的种菌准备工序,在发酵工序中,添加种菌准备工序中得到的竹发酵物。由此,作为启动物,添加在竹粉的发酵中驯化的发酵微生物,因此,发酵工序中耗费的时间被缩短。
发明效果
根据本发明,能够提供具有如下的优异的效果的竹发酵提取物的制造方法、免疫赋活剂及免疫赋活用食品组合物。
(1)具有免疫赋活作用、特别是将自然免疫功能进行活化的作用。另外,由于具有诱导IL-12及IFN-γ的产生的作用,因此,具有对病毒或细菌的感染防御效果、免疫功能降低的改善、抗肿瘤效果等。
(2)由于使用原料为竹,使用水或醇提取,因此,安全性高,可以安心地适用于食品、功能性食品、饮料、化妆品、医药品、畜产饲料、水产用添加剂或农业用制剂等各种各样的制品。
(3)由于使竹进行乳酸菌发酵之后,通过进行热水提取而得到,因此,可以比较简单地制造。
(4)能够有助于竹材的有效利用。
附图说明
图1是概略地表示本发明的第一实施方式的竹发酵提取物的制造方法的流程图。
图2是概略地表示本发明的第二实施方式的竹发酵提取物的制造方法的流程图。
图3是表示实施例5中的本发明的竹发酵提取物的免疫功能活性测定结果的曲线图。
图4是表示比较例1中的乳酸发酵竹液的免疫功能活性测定结果的曲线图。
图5是表示实施例8中的竹发酵提取物的免疫功能活性测定结果的曲线图。
图6是表示实施例10中的竹发酵提取物的IL-12产生诱导结果的曲线图。
图7是表示实施例10中的竹发酵提取物的IFN-γ产生诱导结果的曲线图。
具体实施方式
首先,参照图1,对本发明的第一实施方式的竹发酵提取物的制造方法进行说明。
如图1所示,本发明的竹发酵提取物P1的制造方法由以下工序概略构成:准备作为原料的竹的工序S0;将竹粉碎而制成竹粉的粉碎工序S1;使竹粉发酵而得到竹发酵物的发酵工序S2;以及将竹发酵物进行热水提取的热水提取工序S3。
(竹的准备)
首先,对图1所示的准备竹的工序S0进行说明。成为本发明的竹发酵提取物的原料的竹一般而言广泛包含竹、细竹及被称为竹子的稻科的植物。具体而言,没有特别限定,可举出:毛竹(Phyllostachys heterocycla f.pubescence)、桂竹(Phyllostachys bambusoides)、紫竹(Phyllostachys nigra)、四方竹(Tetragonocalamus quadrangularis)、苦竹(Pleioblastus Simonii)、矢竹(Pseudosasa japonica)、维氏熊竹(Sasa veitchii)等,优选使用毛竹。竹可以直接以生竹使用,因此,除进行附着于竹的土等清洗之外,可以不进行前处理等而将采伐的竹直接用于本发明的竹发酵提取物的使用。通过生竹进行粉碎而制成粉状或切断而制成片状,存在于竹的茎内部、特别微细的蜂窝状的柔组织内的乳酸菌表露出而分散,进行利用源自竹的乳酸菌的发酵。竹中,在细竹的叶那样的叶部中较多地含有抗菌性物质,由于妨碍后述的发酵工序S2中的乳酸菌发酵的可能性高,因此,优选叶部切掉而在以下工序中仅使用茎部(干)。
(粉碎)
下面,对竹的粉碎工序S1进行说明。作为竹的粉碎方法,只要可以将竹制成粉状,则可以为任一种方法,没有特别限定,例如可以利用具备在生竹的筒端面抵接时工作的旋转刀的竹粉化装置。该种竹粉化装置中,通过将生竹的筒端面在相对于筒端面大致平行方向连续地切削,将生竹粉碎成规定的大小的竹粉。通过用旋转刀削掉生竹的筒端面而将竹进行粉碎,在竹的茎部的柔组织或维管束鞘等中存在许多的乳酸菌表露出,促进后面的发酵工序S2中的发酵。另外,通过将竹进行粉碎,细胞壁被破坏,细胞中所含的葡萄糖等糖类、氨基酸、维生素类也分散于粉体中,满足发酵工序S2中的乳酸菌的营养要求而有效地进行发酵。
作为竹粉的粉粒的大小,没有特别限定,其过细时,处理变得困难,其过大时,发酵速度降低,从该观点出发,优选设为粒径50μm~1mm左右,更优选粒径200μm~600μm。另外,也优选将通过粉碎处理而得到的竹粉导入于金属除去装置,将利用竹粉化装置的旋转刀的卷刃等的异物吸附除去。进而,也可以将通过粉碎处理而得到的竹粉导入于筛装置,使得到的竹粉的粒度范围一致,或除去在粉碎工序S1中未粉碎的未切削片。
(发酵)
下面,对发酵工序S2进行说明。竹粉的发酵通过源自竹的乳酸菌而进行。具体而言,例如将通过上述的粉碎工序S1得到的竹粉装入于发酵容器、例如透明树脂袋等发酵袋各规定量,尽可能除去发酵袋内部的空气之后,将发酵袋的口部侧进行封口而将容器内部设为大致厌氧状态。用席子等遮光性片材覆盖该发酵袋,在20~30℃的环境下静置5~20天左右,由此得到竹粉的乳酸发酵物。发酵状态可以根据竹粉的pH值而把握。即,随着乳酸发酵进行而在竹粉中产生乳酸,竹粉呈现的pH成为酸性,因此,在100mL的精制水中放入竹粉40g并搅拌5分钟后,静置2分钟,在用滤纸进行了过滤的滤液的pH成为4.3以下的时刻判断为发酵充分地进行,可以结束发酵工序S2。
对发酵工序S2中得到的竹发酵物,进行利用改性剂浓度梯度凝胶电泳法(DGGE法)的微生物群落分析,结果是,在发酵初期阶段,主要观察明串珠菌(Leuconostoc)属及魏斯氏菌(Weissella)属的乳酸菌,在发酵结束的竹发酵物中,确认魏斯氏菌(Weissella)属的乳酸菌成为微生物群落的主体。由此,在发酵工序S2中,也优选将含有魏斯氏菌(Weissella)属的乳酸菌的培养物用作启动物。由此,将竹粉中的微生物群落的优势种迅速地作为魏斯氏菌(Weissella)属促进发酵,可以缩短发酵工序S2中的发酵天数3成左右,可以设为3~15天左右。另外,根据气温的变动或竹的含水量或种类等,微生物群落或微生物数发生变动,但通过使用启动物,通过一年时间可得到稳定的竹发酵物。启动物优选另外以每竹粉1kg成为0.5mL~5mL的方式添加含有在液体培养基中进行了培养的魏斯氏菌(Weissella)属乳酸菌的启动物。
另外,在发酵工序S2中,也优选将预先使竹粉发酵而得到的竹发酵物用作启动物。这样,通过预先设置种菌准备工序,将得到的竹发酵物用作启动物,竹发酵物中所含的优势种的魏斯氏菌(Weissella)属促进刚经过粉碎工序S1的新的竹粉的发酵,可以缩短发酵工序S2中的发酵天数3成左右,可以设为3~15天左右。另外,通过使用启动物,不控制在气候或竹的状态,可得到稳定的竹发酵物。这样,在将预先准备的竹发酵物用作启动物的情况下,优选以每新的竹粉1kg成为5g~20g的方式添加。进而,将在本发酵工序S2中得到的竹发酵物的一部分用作下次的发酵工序的时的启动物也是有效的。
另外,也优选将发酵工序S2中的发酵在低真空或中真空条件下、或在氮气那样的不活泼气体气氛下进行。由此,可以妨碍竹粉中的汉森氏酵母属(Hansenula)或毕赤酵母属(Pichia)等酵母的增殖,防止由利用酵母生成的醋酸和乙醇产生的醋酸乙酯的产生。
(热水提取)
下面,对热水提取工序S3进行说明。在该热水提取工序S3中,将发酵工序S2中得到的竹发酵物进行热水提取而得到竹发酵提取物P1。作为热水提取方法,可举出利用了回流加热提取或高压釜装置等的加压热水提取等。具体而言,例如,将竹发酵物和水放入反应容器中,进行规定时间的回流加热处理等而提取竹发酵物提取物。优选相对于竹发酵物1kg添加4~15升水,更优选添加4~10升。作为提取溶剂,可使用水,但不妨碍提取效率,也可以在对得到的竹发酵提取物的作用不产生影响的范围内含有其它成分。作为提取温度,优选设为80℃以上,更优选80℃~130℃,特别优选100℃~121℃。提取在大气压下或加压下进行,作为加压条件,优选为0.1MPa~0.5MPa,更优选为0.1MPa~0.3MPa。提取时间优选为10分钟~5小时,更优选为20分钟~2小时。热水提取处理后,通过除去残渣而得到竹发酵提取物P1。作为本发明的竹发酵提取物P1,除热水提取工序S3中得到的竹发酵提取物P1本身之外,可举出将竹发酵提取物P1通过减压浓缩等浓缩处理而制成浓缩液的物质、对竹发酵提取物P1实施冻结干燥处理等干燥处理而制成固体状、粉末状的物质等。
下面,参照图2,对本发明的第二实施方式的竹发酵提取物的制造方法进行说明。
如图2所示,本发明的竹发酵提取物P2的制造方法由以下工序概略构成:准备作为原料的竹的工序S0;将竹粉碎而制成竹粉的粉碎工序S1;使竹粉发酵而得到竹发酵物的发酵工序S2;将竹发酵物进行热水提取的提取工序S3及由热水提取液得到沉淀的沉淀生成工序S4。这些工序S0~S4中,由于竹的准备工序S0、粉碎工序S1、发酵工序S2及热水提取工序S3与上述的第一实施方式中的工序S0~S3分别同样,其作用效果也同样,因此省略说明。
(沉淀生成)
对沉淀生成工序S4进行说明。在该沉淀生成工序S4中,在热水提取工序S3中得到的提取液中加入醇而生成沉淀,通过回收该沉淀而得到竹发酵提取物P2。作为所使用的醇,可举出例如乙醇、异丙醇等,但从安全性优异的观点出发,优选乙醇。醇以在提取液中产生不溶性的沉淀生成的程度的量及浓度添加即可,但从有效地促进沉淀形成的观点出发,具体而言,优选以由提取液和醇构成的混合液中的醇的最终浓度成为50重量%~85重量%的方式添加,优选以醇的最终浓度成为60重量%~80重量%的方式添加,特别优选以成为65重量%~75重量%的方式添加。另外,从可以减量在提取液中添加的醇的量的观点出发,也优选对添加醇之前的提取液实施减压浓缩处理等,制成浓缩液。该情况下,作为提取液的浓缩比例,根据在热水提取工序S3中添加于竹发酵物的水的量而变动,优选浓缩成3~20倍,更优选浓缩成5~15倍。通过在热水提取液或其浓缩液中添加规定量的醇,选择性地沉淀生成提取液中所含的具有免疫赋活作用的成分,除去无用成分,可得到经精制的竹发酵提取物P2。得到的沉淀、即竹发酵提取物P2通过过滤处理或离心分离处理等而进行固液分离并被回收。竹发酵提取物P2其后进行干燥,作为固体状、粉末状被保存。
本发明的竹发酵提取物具有免疫赋活作用。本发明中所说的免疫赋活作用是指使自然免疫和获得免疫这两者的功能提高的作用,但含有本发明的竹发酵提取物作为有效成分的免疫赋活剂特别具有将自然免疫功能赋活化的作用,具有IL-12及IFN-γ产生诱导作用。由此,能够将自然免疫功能、即对病原体的迅速的感染防御或对恶性肿瘤的攻击等作用活化并增强。另外,在因老化或紧张、疲劳等原因而免疫功能降低的情况下,也具有使免疫反应活化的作用、或即使暴露于老化或紧张、疲劳等原因也稳定地维持免疫功能的作用。另外,由于本发明的竹发酵提取物具有IL-12及IFN-γ产生诱导作用,因此,不仅使Th1细胞活化而使细胞性免疫亢进,而且,也期待通过细胞性免疫的亢进,也具有使液性免疫抑制而使过敏反应抑制的作用。
本发明的免疫赋活剂以食品、饮料、化妆品、医药部外品及医药品为主,可以用于畜产饲料、水产用添加剂或农业用制剂等各种各样的制品。发现作为有效成分的竹发酵提取物也用作竹笋等食用的竹的新功能,安全性高,可以日常地摄取。因此,优选用作食品或饮料用组合物。含有该竹发酵提取物作为有效成分的免疫赋活用食品组合物可以以药片或胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂等辅助食品形态、饮料、点心、面包、粥、谷物、面类、果子冻、汤、乳制品、调味料、食用油等所有的形态使用。另外,在用作食品组合物时,也可以在对本发明的有效成分的功效不产生影响的范围内组合各种其它有效成分、或维生素、矿物质或氨基酸等营养素等。在从本发明的食品组合物展开的食品中包含辅助食品、健康食品、功能性食品、特定保健用食品等。另外,也可以对人以外的其它动物(宠物、家畜、水产养殖动物等)使用,此时,可以以饲料、供宠物吃的食品、动物用辅助食品或动物用饮料等形态使用。
在将本发明的免疫赋活剂用作医药品或医药部外品的情况下,可以通过以往惯用的方法制备成各种形态。该情况下,通常可以使用制剂用的药理学上允许的载体或赋形剂、润滑剂、分散剂、崩解剂、缓冲剂、溶剂、增量剂、保存剂、香料或稳定化剂等作为医药品的添加剂允许的添加剂进行制剂化。进而,为了使生物利用率或稳定性提高,也可以采用含有使用有微胶囊、脂质体制剂、微粉末化或环糊精等的包接化等制剂技术的药物传递***。作为剂型,可以列举药片、颗粒剂、胶囊剂、糖浆剂等,但并不特别限定于这些。
含有本发明的免疫赋活剂的医药品或食品组合物等作为一天的摄取量,优选将竹发酵提取物以干燥重量换算设为1mg~10g,更优选设为1mg~1g。
以下,示出本发明的实施例,但本发明并不限定于这些实施例。
实施例
[实施例1]
1.竹发酵提取物(1)的制造
采伐茎高为4m左右的毛竹,用柴刀切掉叶部而仅设为茎部后,用水清洗而除掉泥或污垢等。使用竹粉化装置(丸大铁工株式会社制品、型号:PA-Z)将该毛竹的茎部约4m粉碎,得到500μm以下的竹粉约10kg。接着,在15kg容量的树脂袋中放入经粉碎处理的竹粉10kg,挤压树脂袋的外周而尽可能除去袋内部的空气并进行封口。用遮光性片材覆盖树脂袋,在25℃环境下静置14天。取经过了14天的竹发酵物的一部分,利用改性剂浓度梯度凝胶电泳法(DGGE法)进行微生物群落分析,结果,确认魏斯氏菌属的乳酸菌(Weissella cibaria或confusa)成为微生物群落的主体。将得到的竹发酵物1kg放入回流加热用的反应容器中而注入水5L,通过加热回流进行热水提取。反应时间设为60分钟。反应结束后,过滤反应容器内的混合物,将滤液(约4.5L)作为提取液回收。相对于该提取液4.5L,添加15%乙醇水溶液6L,使成为不溶性的成分沉淀并回收沉淀。使回收的沉淀进行冻结干燥,得到约30g的竹发酵提取物(1)。
[实施例2]
2.竹发酵提取物(2)的制造
采伐茎高为4m左右的毛竹,用柴刀切掉叶部而仅设为茎部后,用水清洗而除掉泥或污垢等。使用竹粉化装置(丸大铁工株式会社制品、型号:PA-Z)将该毛竹的茎部约4m粉碎,得到500μm以下的竹粉约10kg。相对于竹粉10kg,添加实施例1中得到的竹发酵物100g,并充分混合。接着,在15kg容量的树脂袋中放入该竹粉,挤压树脂袋的外周而尽可能除去袋内部的空气并进行封口。用遮光性片材覆盖树脂袋,在25℃环境下静置9天。将得到的竹发酵物1kg放入于回流加热用的反应容器并注入水5L,通过加热回流进行热水提取。反应时间设为60分钟。反应结束后,将反应容器内的混合物进行过滤,将滤液(约4.5L)作为提取液回收。相对于该提取液4.5L,添加15%乙醇水溶液6L而使成为不溶性的成分沉淀并回收沉淀。使回收的沉淀进行冻结干燥,得到约30g的竹发酵提取物(2)。
[实施例3]
3.用于免疫功能活性试验的竹发酵提取物(3)的制造
将实施例1中得到的竹发酵物以成为样品浓度100mg/mL的方式悬浮于灭菌的生理食盐水(0.9%NaCl)。将该悬浮物在高压釜内在121℃下进行竹发酵物的热水提取处理20分钟。将热水提取液进行离心分离而回收上清液,得到竹发酵提取物(3)。将该上清液用于免疫赋活试验。另外,使回收的上清液1mL用离心蒸发器进行干固,由得到的干燥重量算出上清液中的竹发酵提取物(3)的浓度。
[实施例4]
4.用于免疫功能活性试验的竹发酵提取物(4)的制造
将实施例2中得到的竹发酵物以成为样品浓度100mg/mL的方式悬浮于灭菌的生理食盐水(0.9%NaCl)。将该悬浮物在高压釜内在121℃下进行竹发酵物的热水提取处理20分钟。将热水提取液进行离心分离而回收上清液,得到竹发酵提取物(4)。将该上清液用于免疫赋活试验。另外,使回收的上清液1mL用离心蒸发器进行干固,由得到的干燥重量算出上清液中的竹发酵提取物(4)的浓度。
[实施例5]
5.免疫功能活性试验
作为免疫功能活性试验,进行以蚕肌肉收缩为指标的自然免疫促进活性试验。即,本试验方法而言基于如下见解:在对蚕等完全***型昆虫的幼虫给药被检试样的情况下,在被检试样中存在神经传递物质时,引起急剧的肌肉收缩,但在将具有自然免疫功能活化作用的物质给药于完全***型昆虫的幼虫的情况下,在其结束时引起需要10分钟左右的缓慢的肌肉收缩(缓行性肌肉收缩)。将实施例3中得到的竹发酵提取物(3)及实施例4中得到的竹发酵提取物(4)作为被检试样进行以下试验。
蚕的缓行性肌肉收缩的测定如下进行(参照Hamamoto H.,Kamimura M.,SekimizuK.,J.Biol.Chem.、2008年、283(4)、pp.2185-91)。对5日龄蚕的断头肌肉肉标本体腔内注射被检试样50μL,测定蚕的体长,求出肌肉收缩值(Contraction Value、C值=([收缩前(注射前)的长度]-[收缩后(注射后)的长度])/[收缩前的长度])的最大值(约10分钟后)。被检试样用0.9%生理食盐液以以下表1所示的方式系列阶段稀释成规定浓度,对各稀释液分别测定C值。将C值=0.15时的缓行性肌肉收缩活性定义为1单元,由得到的用量应答曲线求出赋予C值=0.15的被检试样量,算出每被检试样1mg的活性。另外,将生理食盐液50μL设为负对照,将空气0.2mL设为正对照。将结果示于以下表1及图2。图3的(a)示出竹发酵提取物(3)的结果,图3的(b)示出竹发酵提取物(4)的结果。
[表1]
[比较例1]
6.用于免疫功能活性试验的乳酸发酵竹液的制造及免疫功能活性试验
将实施例1中得到的竹发酵物1kg放入于10L容量的塑料容器,加入竹炭粉20g及番木瓜酶6g并充分混合。进一步注入水8L并盖上盖,在25℃环境下静置14天。14天后,将容器内的混合物进行过滤,将滤液(约8L)作为乳酸发酵竹液回收。取该乳酸发酵竹液10mL,用pH试验值研究pH,用NaOH进行中和。另外,将乳酸发酵竹液1mL用离心蒸发器进行干固,由得到的干燥重量算出乳酸发酵竹液中所含的成分的浓度。将该乳酸发酵竹液作为被检试样,进行与实施例5同样的免疫功能活性试验。将结果示于以下表2及图4。
[表2]
如表1所示,竹发酵提取物(3)的浓度为15mg/mL,竹发酵提取物(4)的浓度为11mg/mL。另外,测定这些提取物的免疫功能活性,结果,可看到图3所示的用量应答曲线,可知本发明的竹发酵提取物具有自然免疫促进活性。竹发酵提取物(3)的比活性为2.1units/mg,竹发酵提取物(4)的比活性为2.7units/mg。另一方面,关于比较例所示的乳酸发酵竹液,如图4所示,无法看到用量应答曲线,无法观察自然免疫促进活性。由这些结果得知:通过将竹发酵物进行热水提取而得到的竹发酵提取物具有免疫赋活作用。
[实施例6]
7.竹发酵提取物(5)的制造
使实施例1中得到的竹发酵物10g悬浮于灭菌的生理食盐水(0.9%NaCl)100mL中。将该悬浮物在高压釜内在121℃、2气压下进行竹发酵物的热水提取处理20分钟。将热水提取液进行离心分离而回收上清液,用离心蒸发器进行干固,得到粉末的竹发酵提取物(5)440mg。另外,利用苯酚硫酸法定量得到的竹发酵提取物(5)中所含的糖类的量,结果可知:竹发酵提取物(5)的中的7重量%为糖类(参照表4)。
[实施例7]
8.竹发酵提取物(6)的制造
使实施例1中得到的竹发酵物10g悬浮于灭菌的生理食盐水(0.9%NaCl)100mL中。将该悬浮物在高压釜内、在121℃、2气压下进行竹发酵物的热水提取处理20分钟。将热水提取液进行离心分离而回收上清液。在回收的上清液中添加95%乙醇,加入乙醇至乙醇的最终浓度成为68%。回收生成的沉淀并进行干燥,得到粉末的竹发酵提取物(6)27mg。另外,利用苯酚硫酸法定量得到的竹发酵提取物(6)中所含的糖类的量,结果可知:竹发酵提取物(6)中的52重量%为糖类(参照表4)。
[实施例8]
9.对竹发酵提取物(5)及(6)的免疫功能活性试验
将实施例7及实施例8中得到的竹发酵提取物(5)及竹发酵提取物(6)作为被检试样,用与实施例5同样的方法进行免疫功能活性试验。将结果示于以下表3及图5。图5的(a)示出竹发酵提取物(5)的结果,图5的(b)示出竹发酵提取物(6)的结果。
[表3]
测定实施例6及实施例7中得到的竹发酵提取物的免疫功能活性,结果可看到图5所示的用量应答曲线,可知本发明的竹发酵提取物具有自然免疫促进活性。就由该用量应答曲线求出的比活性的值而言,竹发酵提取物(5)为7.3units/mg,经过乙醇沉淀形成工序的竹发酵提取物(6)为230units/mg(参照表4)。由此得知:通过将竹发酵物进行热水提取而得到的竹发酵提取物具有免疫赋活作用,具有免疫赋活作用的成分可以通过乙醇沉淀而被浓缩,或选择性地得到,经过沉淀生成工序的竹发酵提取物(6)显示更高的免疫赋活作用。另外,如以下表4所示,竹发酵提取物(6)的糖类的含量上升至52重量%。这样,伴随糖类的含量的上升,比活性也上升,因此,竹发酵提取物中所含的多糖认为是具有免疫赋活作用的活性成分之一。
[表4]
[实施例9]
10.竹发酵提取物(7)的制造
将实施例1中得到的竹发酵物1kg放入于回流加热用的反应容器并注入水10L,通过加热回流而在100℃下进行热水提取。反应时间设为120分钟。反应结束后,将反应容器内的混合物进行过滤,回收滤液约9L。将该滤液浓缩至约10倍而制成浓缩液。相对于该浓缩液添加95%乙醇,加入乙醇至乙醇的最终浓度成为70%。将该混合液进行过滤而回收生成的沉淀并进行干燥,得到粉末的竹发酵提取物(7)。
[实施例10]
11.使用有小鼠脾脏细胞的免疫应答试验
从C57B6小鼠中采取脾脏细胞,脾脏细胞以在RPMI-1640液体培养基中以5×106个/mL存在的方式进行调整。在被检试样中,使用实施例9中制造的竹发酵提取物(7)。另外,有时在源自天然物的提取物中经常含有LPS,因此,作为比较试样,使用脂多糖(LPS),对本发明的竹发酵提取物导致的细胞活素的产生是否为LPS引起进行确认。在C57B6小鼠的脾脏细胞(5×106个/mL)中以最终浓度成为2μg/mL、5μg/mL及10μg/mL的方式加入竹发酵提取物(7),培养48小时。同样地,在C57B6小鼠的脾脏细胞(5×106个/mL)中以最终浓度成为0.1μg/mL的方式加入LPS,培养48小时。培养48小时后,利用ELISA法测定培养基中的IL-12(p70)和IFN-γ的产生量。将IL-12(p70)产生量的结果示于图6,将IFN-γ的产生量的结果示于图7。如图6及图7所示,可知:本发明的竹发酵提取物诱导IL-12及IFN-γ的产生。另外,由添加有LPS的脾脏细胞,既没有看到IL-12的产生,也没有看到IFN-γ的产生,因此,本发明的竹发酵提取物导致的这些细胞活素的产生并不是LPS引起的,而认为是竹发酵提取物中所含的LPS以外的成分引起的作用。
本发明并不限定于上述的实施方式或实施例,不脱离权利要求书中所记载的发明的宗旨的范围内的各种、设计变更的形态也包含在技术的范围中。
工业上的可利用性
本发明的竹发酵提取物除作为食品或饮料、医药品被利用之外,可以在畜产或水产养殖领域中被利用。
Claims (8)
1.一种竹发酵提取物的制造方法,其特征在于,具有以下工序:
粉碎工序,将竹粉碎而得到竹粉;
发酵工序,利用乳酸菌使所述竹粉发酵而得到竹发酵物;以及
提取工序,将所述竹发酵物进行热水提取而得到提取液。
2.根据权利要求1所述的竹发酵提取物的制造方法,其特征在于,
所述制造方法还具有在所述提取液或其浓缩液中添加醇并得到沉淀的沉淀生成工序。
3.根据权利要求2所述的竹发酵提取物的制造方法,其特征在于,
在所述沉淀生成工序中,以所述醇的最终浓度成为60~80重量%的方式添加所述醇。
4.根据权利要求1~3中任一项所述的竹发酵提取物的制造方法,其特征在于,
所述提取工序中的热水提取在80℃~130℃、0.1MPa~0.3MPa条件下进行。
5.根据权利要求1~4中任一项所述的竹发酵提取物的制造方法,其特征在于,
所述竹为竹的茎部。
6.一种免疫赋活用食品组合物,其含有依次经过以下工序而得到的竹发酵提取物作为有效成分:将竹粉碎而得到竹粉的粉碎工序、利用乳酸菌使该竹粉发酵而得到竹发酵物的发酵工序、和将该竹发酵物进行热水提取而得到提取液的提取工序。
7.一种免疫赋活用食品组合物,其含有依次经过以下工序而得到的竹发酵提取物作为有效成分:将竹粉碎而得到竹粉的粉碎工序、利用乳酸菌使该竹粉发酵而得到竹发酵物的发酵工序、将该竹发酵物进行热水提取而得到提取液的提取工序、和在该提取液或其浓缩液中添加醇并得到沉淀的沉淀生成工序。
8.一种免疫赋活剂,其含有依次经过以下工序而得到的竹发酵提取物作为有效成分:将竹粉碎而得到竹粉的粉碎工序、利用乳酸菌使该竹粉发酵而得到竹发酵物的发酵工序、将该竹发酵物进行热水提取而得到提取液的提取工序、和在该提取液或其浓缩液中添加醇并得到沉淀的沉淀生成工序。
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REG | Reference to a national code |
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WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
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