CN107693802A - 一种验证具有改善营养性贫血功能的组合物有效性的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种验证具有改善营养性贫血功能的组合物有效性的方法，包括以下步骤：步骤1，选SD大鼠60只，低铁饲料及去离子水喂养，至90％大鼠Hb＜100g/L，开始实验；随机分为1.5g/kg·bw、3.0g/kg·bw、4.5g/kg·bw三个试验组和低铁对照组，每组10只，每组单笼喂养；具有改善营养性贫血功能的组合物作为样品，按样品喂养量分低、中、高剂量组，对照组给予等体积的去离子水，各组继续给予低铁饲料和去离子水喂养，持续30天，取各组大鼠的尾血，测定血红蛋白浓度和红细胞内游离原卟啉浓度，比照，得出结论；本发明中的验证方法，严谨科学，且易于实施验证，可以用来验证具有改善营养性贫血功能的组合物有效性。

Description

一种验证具有改善营养性贫血功能的组合物有效性的方法
技术领域
本发明涉及中医药领域，具体涉及一种验证具有改善营养性贫血功能的组合物有效性的方法。
背景技术
营养性贫血是指因机体生血所必须的营养物质，如铁、叶酸、维生素等物质相对或绝对的减少，使血红蛋白形成或红细胞的生成不足，以致造血功能低下的一种疾病。
现代医学把本病分为小细胞性贫血及大细胞性贫血两种。前者也叫缺铁性贫血，多发于6个月至1岁的婴儿。主要由于婴儿生长发育快，需铁量很多。而人乳和牛乳含铁量都很低不能满足婴儿的生长需要，此时若未及时添加含铁的辅食，就会发生缺铁性贫血。后者也叫巨幼红细胞性贫血，多发生于2岁以下的小儿，主要是由于小儿饮食中的维生素D2与叶酸的含量不足，或肠道细菌合成量不足，使红细胞成熟的因素缺乏而发病。中医学把本病归属“虚劳”、“血虚”等范畴。认为血液来源于脾，根本在肾并涉及心、肝两脏。如果脾胃虚弱，不能运化水谷精微，气血生化之源不足，产生贫血。血虚五脏失养，便可出现心血不足，肝肾两亏等症。常见症状为本病起病比较缓慢，轻者表现为皮肤、粘膜苍白或苍黄，以***、牙床、眼睑、指甲等部位更为明显。严重贫血可见头晕，全身乏力，烦躁不安，食欲不振等，患儿往往伴有营养不良。有的还出现吃土块、煤渣、墙泥等。贫血过久，可导致生长发育障碍。
目前市场有很多产品都宣称具有改善贫血的功效，对于是否真的具体的该功效需要有科学合理的评价方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种验证具有改善营养性贫血功能的组合物有效性的方法，可以科学有效的验证该类产品的有效性。
具有改善营养性贫血功能的组合物的制备：称取黄芪30千克、当归20千克、白芍20千克、大枣20千克、熟地黄20千克，转入一般生产区；按配方量称取葡萄糖酸亚铁0.3千克、蔗糖20千克、淀粉1.2千克、硬脂酸镁0.3千克，转入洁净区，备用；
将黄芪、当归、白芍、大枣、熟地黄混合，用混合药材10倍量水回流提取2次，每次2h，200目筛网过滤，合并滤液；
将滤液在温度为70～80℃，真空度为-0.08～-0.06Mpa条件下，减压浓缩至相对密度为1.20～1.25，得浸膏；
将浸膏在温度为70℃，真空度为-0.08～-0.06Mpa条件下，真空干燥，粉碎，过60目筛，得干浸膏；
将葡萄糖酸亚铁、蔗糖、淀粉、硬脂酸镁分别过60目筛；用等量递增法将葡萄糖酸亚铁与干浸膏混合，即将葡萄糖酸亚铁与等量的干浸膏混合至均匀，所得粉末再与等量的干浸膏混合至均匀，如此反复，至干浸膏用完，得混合粉；再将混合粉与淀粉、蔗糖混合均匀，得总混合粉；
将总混粉用95％乙醇制软材，14目筛制粒，得湿颗粒；将湿颗粒60℃干燥至水分≤3％，16目筛整粒，得干颗粒；
加入硬脂酸镁，混合均匀，得总混颗粒，包装即得。
一种验证具有改善营养性贫血功能的组合物有效性的方法，所述验证方法包括以下步骤：
步骤1，选SPF级初断乳的雌性SD大鼠60只，低铁饲料及去离子水喂养，采用不锈钢笼具及食罐，实验过程中避免铁污染，自第3周开始，每周选取一半大鼠采尾血测得血红蛋白Hb，直至90％大鼠Hb＜100g/L，开始实验；
步骤2，选取步骤1喂养的Hb＜100g/L大鼠作为试验模型动物，测所有大鼠的体重和Hb，根据贫血大鼠的Hb水平和体重，将其随机分为1.5g/kg·bw、3.0g/kg·bw、4.5g/kg·bw三个试验组和低铁对照组，每组10只，每组单笼喂养；具有改善营养性贫血功能的组合物作为样品，低、中、高剂量组分别取样品30.0g、60.0g、90.0g加去离子水至200mL，对照组给予等体积的去离子水，灌胃量1.0mL/100g·bw；各组继续给予低铁饲料和去离子水喂养，每10天测一次大鼠的体重；持续30天，造模结束；
步骤3，取步骤2中三个试验组和低铁对照组的大鼠的尾血，测定血红蛋白浓度和红细胞内游离原卟啉浓度，并记录两个指标的浓度；
步骤4，将每个指标列表比照，试验组指标相对于对照组的指标如果符合血红蛋白浓度增高和红细胞内游离原卟啉浓度下降则可以得出所验证的样品具有改善营养性贫血功能。
优选的，所述验证方法还包括以下验证试验：
步骤1，选SPF级初断乳的雌性SD大鼠20只，将其随机分为试验组和对照组，每组10只，每组单笼喂养；对照组给予基础喂养料喂养；具有改善营养性贫血功能的组合物作为样品，试验组给予基础饲料加10％样品的混合饲料喂养，每组每次喂养给予的饲料总量相等，每10天测一次大鼠的体重；持续喂养40天；
步骤2，取步骤1中试验组和对照组的大鼠的尾血，测定血清铁蛋白的浓度，并记录指标的浓度；
步骤3，将每个指标列表比照，试验组指标相对于对照组的指标如果符合血红蛋白浓度增高、红细胞内游离原卟啉浓度下降和血清铁蛋白浓度增高则可以得出所验证的样品具有改善营养性贫血功能。
优选的，所述测定血红蛋白浓度使用氰化高铁法。
优选的，所述测定红细胞内游离原卟啉浓度使用RF-540荧光光度计检测。
优选的，所述测定血清铁蛋白的浓度采用ACS180全自动化学发光免疫分析仪测定。
本发明中的验证方法，严谨科学，且易于实施验证，可以用来验证具有改善营养性贫血功能的组合物有效性。
具体实施方式
以下结合具体实施方式对本发明做进一步详细说明。
实施例
一种验证具有改善营养性贫血功能的组合物有效性的方法，所述验证方法如下：
选SPF级初断乳的雌性SD大鼠60只，低铁饲料及去离子水喂养，采用不锈钢笼具及食罐，实验过程中避免铁污染，自第3周开始，每周选取一半大鼠采尾血测得血红蛋白Hb，直至90％大鼠Hb＜100g/L，开始实验；
选取喂养的Hb＜100g/L大鼠作为试验模型动物，测所有大鼠的体重和Hb，根据贫血大鼠的Hb水平和体重，将其随机分为1.5g/kg·bw、3.0g/kg·bw、4.5g/kg·bw三个试验组和低铁对照组，每组10只，每组单笼喂养；具有改善营养性贫血功能的组合物作为样品，低、中、高剂量组分别取样品30.0g、60.0g、90.0g加去离子水至200mL，对照组给予等体积的去离子水，灌胃量1.0mL/100g·bw；各组继续给予低铁饲料和去离子水喂养，每10天测一次大鼠的体重；持续30天，造模结束；
取三个试验组和低铁对照组的大鼠的尾血；
测定血红蛋白浓度：取尾血10μL加入2.5mL含铁***的试剂中，混匀，放置15分钟，选用0.5里面光径比色杯，于540nm波长下，以试剂调零，将所得样品管光密度乘以736，即为血红蛋白浓度(g/L),具体见表1；
表1 样品对大鼠血红细胞的影响
由表1可见，试验前各组大鼠的血红蛋白含量无明显差异，试验后，各剂量组血红蛋白与对照组比较均有升高，高剂量组与对照组比较差异有显著性(P＜0.05),三个剂量组血红蛋白前后升高幅度平均为12.07g/L。
测定红细胞内游离原卟啉浓度，取尾血20μL，经肝素抗凝处理后，使用RF-540荧光光度计测定，具体见表2；
表2 样品对大鼠红细胞内游离原卟啉的影响
由表2可见，试验前各组大鼠的红细胞内游离原卟啉浓度与对照组比较有降低趋势，高剂量组与对照组比较差异有显著性(P＜0.05)。
选SPF级初断乳的雌性SD大鼠20只，将其随机分为试验组和对照组，每组10只，每组单笼喂养；对照组给予基础喂养料喂养；具有改善营养性贫血功能的组合物作为样品，试验组给予基础饲料加10％样品的混合饲料喂养，每组每次喂养给予的饲料总量相等，每10天测一次大鼠的体重；持续喂养40天；
取试验组和对照组的大鼠的尾血，采用ACS180全自动化学发光免疫分析仪测定血清铁蛋白的浓度，具体见表3；
表3 样品对大鼠血清铁蛋白的影响
注*与试验前比较P＜0.05 #与对照组比较P＜0.05
由表3可见，试验前未使用样品饲养血清铁蛋白无显著性差异；试验组使用样品饲养后血清铁蛋白显著升高，自身前后及试食后对照比较差异均有显著性(P＜0.05)。
综上所述，样品具有改善营养性贫血功能。

Claims (5)

1.一种验证具有改善营养性贫血功能的组合物有效性的方法，其特征在于，所述验证方法包括以下步骤：
步骤1，选SPF级初断乳的雌性SD大鼠60只，低铁饲料及去离子水喂养，采用不锈钢笼具及食罐，实验过程中避免铁污染，自第3周开始，每周选取一半大鼠采尾血测得血红蛋白Hb，直至90％大鼠Hb＜100g/L，开始实验；
步骤2，选取步骤1喂养的Hb＜100g/L大鼠作为试验模型动物，测所有大鼠的体重和Hb，根据贫血大鼠的Hb水平和体重，将其随机分为1.5g/kg·bw、3.0g/kg·bw、4.5g/kg·bw三个试验组和低铁对照组，每组10只，每组单笼喂养；具有改善营养性贫血功能的组合物作为样品，低、中、高剂量组分别取样品30.0g、60.0g、90.0g加去离子水至200mL，对照组给予等体积的去离子水，灌胃量1.0mL/100g·bw；各组继续给予低铁饲料和去离子水喂养，每10天测一次大鼠的体重；持续30天，造模结束；
步骤3，取步骤2中三个试验组和低铁对照组的大鼠的尾血，测定血红蛋白浓度和红细胞内游离原卟啉浓度，并记录两个指标的浓度；
步骤4，将每个指标列表比照，试验组指标相对于对照组的指标如果符合血红蛋白浓度增高和红细胞内游离原卟啉浓度下降则可以得出所验证的样品具有改善营养性贫血功能。
2.根据权利要求1所述的验证具有改善营养性贫血功能的组合物有效性的方法，其特征在于，所述验证方法还包括以下验证试验：
步骤1，选SPF级初断乳的雌性SD大鼠20只，将其随机分为试验组和对照组，每组10只，每组单笼喂养；对照组给予基础喂养料喂养；具有改善营养性贫血功能的组合物作为样品，试验组给予基础饲料加10％样品的混合饲料喂养，每组每次喂养给予的饲料总量相等，每10天测一次大鼠的体重；持续喂养40天；
步骤2，取步骤1中试验组和对照组的大鼠的尾血，测定血清铁蛋白的浓度，并记录指标的浓度；
步骤3，将每个指标列表比照，试验组指标相对于对照组的指标如果符合血红蛋白浓度增高、红细胞内游离原卟啉浓度下降和血清铁蛋白浓度增高则可以得出所验证的样品具有改善营养性贫血功能。
3.根据权利要求1所述的验证具有改善营养性贫血功能的组合物有效性的方法，其特征在于，所述测定血红蛋白浓度使用氰化高铁法。
4.根据权利要求1所述的验证具有改善营养性贫血功能的组合物有效性的方法，其特征在于，所述测定红细胞内游离原卟啉浓度使用RF-540荧光光度计检测。
5.根据权利要求2所述的验证具有改善营养性贫血功能的组合物有效性的方法，其特征在于，所述测定血清铁蛋白的浓度采用ACS180全自动化学发光免疫分析仪测定。
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