CN107667293A

CN107667293A - 用于阿茲海默氏病的诊断工具

Info

Publication number: CN107667293A
Application number: CN201680017119.7A
Authority: CN
Inventors: 丹尼尔·科亨; 伊利亚·楚马科夫; 谢尔盖·纳比罗钦; 迈克尔·盖杰; 鲁道夫·哈杰
Original assignee: Pharnext SA
Current assignee: Pharnext SA
Priority date: 2015-02-03
Filing date: 2016-02-02
Publication date: 2018-02-06
Also published as: WO2016124574A1; US20180275144A1; EP3254114A1

Abstract

本发明涉及使用新生物标志物或其组来检测阿茲海默氏病的方法。可以在生物体液或易于获得的活检提取物中测量新生物标志物。

Description

用于阿茲海默氏病的诊断工具

技术领域

本发明大体上涉及生物学和医学领域。本发明特别涉及检测阿茲海默氏病(AD)和相关病症的易感性或其诊断和/或预后的方法。更具体地，本发明涉及新生物标志物的开发、验证和应用，所述生物标志物可以用于检测AD和相关病症的存在、风险或预测其严重性。可以在生物体液或易于获得的活检提取物中测量所述新生物标志物，其可以用于辅助检测神经退化性病症，包括AD。本发明还涉及识别患有AD或相关病症的受试者的疾病阶段的方法。

背景技术

AD是目前最常见的痴呆原因。其在临床上特征为认知功能总体下降，其进展缓慢并且致使晚期患者卧病在床、失禁并且依赖于看护。平均在诊断后9年发生死亡[1]。AD的发病率随着年龄显著提高。***人口规划估计直至2050年，超过80岁的人的数量将接近3.7亿。当前，估计超过85岁的人中有50％罹患AD。因此，在50年内，全世界将有超过1亿人罹患痴呆。大量的人需要长期护理和其它服务，这将严重影响医疗、金融和人力资源[2]。

当前，AD的临床诊断基于结构性访谈(患者病史)和神经心理学检查结合成像或2次神经生理学扫描(CT、MRI、PET和/或SPECT扫描和EEG)来排除记忆丧失的其它解释(包括暂时性(抑郁或维生素B12缺乏)或永久性病状(中风))，并且基于NINCDS-ADRDA工作组标准[3]和美国精神病协会精神疾病诊断与统计手册(American Psychiatric AssociationDiagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders)[4]。

令人遗憾地，临床诊断方法并非十分安全。基于证据的现有文献综述显示65至90％的临床诊断准确性。较高准确率一般与集中于记忆病症的专业中心(记忆病症诊所)相关，而较低准确率可能与主要的护理医师相关。另外，在疾病早期，当症状难以与正常的年龄相关的认知下降区分时，临床诊断准确性可能降低。近年来，研究表明称为轻度认知障碍(MCI)的病状在一些情形下可以表示前驱期AD，并且如果早期诊断出，表示药物介入的最佳时机。用于诊断MCI的临床标准是Petersen等人[5]中的标准并且包括：1)告知者证实的记忆抱怨，2)对于年龄和教育的客观记忆障碍，3)正常的一般认知功能，4)完整的每日生活活动，和5)受试者不符合痴呆标准。MCI的这种临床标准可以通过识别如下生物标志物来实施，所述生物标志物如Albert等人[6]中所述的生物标志物，并且参与神经元损伤(如tau)和/或Aβ沉积(如脑脊髓液中的Aβ42)。这些生物标志物可以通过医学成像并且在CSF中定量。例如，Amyvid是一种FDA批准的放射性示踪剂，其通过用正电子发射断层摄影成像技术检测淀粉样斑块来辅助诊断AD。然而，这种测试既不能预测AD的发展，又不能测量对治疗的反应，只应用作进行这一操作的其它诊断性评价的辅助手段(FDA Press Release,2012年4月10日)。

AD的其它复杂诊断和治疗缺乏特异性识别AD受试者和特别在疾病前驱期的初期(MCI)具有MCI转化为AD的风险者的可靠生物标志物。鉴于AD造成的公众健康问题的严重性，已经进行大量研究工作来阐明AD的病因以及识别客观地测量为致病过程的指示物的生物标志物、特征蛋白质或代谢物，其可以用于诊断和/或预测一个人是否可能产生AD。

AD的大多数生物标志物研究集中于在脑脊髓液(CSF)中测量。因为CSF与脑密切接触，所以脑中引起蛋白质/肽改变的病原性变化可能会反映在CSF中。除众所周知的TAU、淀粉样前体蛋白质衍生物或神经元丝蛋白以外，文献中描述的一些CSF蛋白质生物标志物为α-(1)-抗凝乳蛋白酶、嗜铬粒蛋白A、β-2-小球蛋白、甲状腺素运载蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、转铁蛋白或***素-D-合成酶；其它研究测量了生物流体样品(如血液)中的蛋白质生物标志物(例如US2010124756)，但尝试重复这些研究的结果失败了[7]。因此，不可能从这些研究获得共同类别的生物标志物，这可能是考虑疾病的特征，当然部分是因为疾病的异质性和复杂性。

已经识别出一些遗传学生物标志物；其位于如下基因座的内部，所述基因座已经识别为负责家族性早发常染色体显性AD的大多数情形。关于偶发性AD，最重要的识别遗传风险因子为ApoEε4等位基因：在ApoEε4纯合者中，产生AD的风险为12倍多。

还搜寻了作为AD生物标志物的代谢物。例如，已经使用磁共振光谱学在患病患者的海马细胞中发现谷氨酸水平降低，因此提出此分子作为AD的潜在特异性生物标志物[9]。已经建议可从患者的血液样品直接测量的脂褐质样色素作为AD的可能的特异性标志物[10]。还考虑Aβ肽血液测试；然而，直到现在，测量血液中的Aβ肽的尝试主要由于Aβ肽的生物化学性质而产生矛盾和令人失望的结果。实际上，可以发现血浆中游离的Aβ、结合于血浆蛋白的Aβ、结合于血细胞的Aβ，其为可溶解或胞内形式或沉积物形式，并且还可以从CNS的外部产生Aβ。因此，使用Aβ血浆水平作为生物标志物需要进一步临床和发展研究[11-13]。

WO2010/066000公开从罹患数种精神疾病而非AD的患者识别的数种血液或尿液生物标志物。WO2011/012672公开一些来自AD中受干扰路径的代谢物。WO2012/168561特别公开一些含有2至5个碳原子的羧酸、磷脂酰胆碱衍生物和未识别的血清代谢物来预测受试者发展为AD的风险。

还描述了AD中的其它流体生物标志物、用于诊断AD的基于血液的蛋白质生物标志物和用于早期诊断AD的生物化学标志物[14-16]。

可靠的可检测生物标志化合物的可用性将允许快速诊断AD和相关疾病、进行患者监视并且由于容易地监视患者对药物治疗和疾病控制的个别反应来进行新药物功效的有效临床测试。

发明内容

本发明提供用于诊断AD和相关病症的新组合物和方法。本发明基于代表疾病的有效生物标志物的代谢物的识别。所述方法有效、可靠并且易于实施。其特别适用于从体液诊断AD或相关病症。

本发明的一个目的更特别地在于一种诊断AD或相关病症的方法，所述方法包括测定来自受试者的样品中一种或多种选自以下物质的生物标志物的差异存在：5α-雄甾烷-3α,17β-二醇单硫酸盐/酯1；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；4-雄甾烯-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰乙醇胺；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；C-糖基色氨酸；3-脱氢肉毒碱；羟基丁酰基肉毒碱；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯(taurocholenate sulfate)；孕烯-二醇二硫酸盐/酯(pregnen-diol disulfate)；HWESASLLR；胡椒碱；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸(3-[3-(sulfooxy)phenyl]propanoic acid)；3-羟基马尿酸盐/酯；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；麦角硫因；水杨酸盐/酯；3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸盐/酯(CMPF)；丙酮酸盐/酯；4-羟基马尿酸盐/酯；4-甲基儿茶酚硫酸盐/酯；甘油酸盐/酯；N-乙酰基酪氨酸；N2,N5-二乙酰基鸟氨酸；γ-谷氨酰基丙氨酸；丙酰基甘氨酸(C3)；鸟氨酸；N-乙酰基肌肽；丙酰基肉毒碱(C3)；N-乙酰基色氨酸；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；γ-谷氨酰基谷氨酸盐/酯；丙氨酸；异亮氨酰基苯丙氨酸；γ-谷氨酰基赖氨酸；赖氨酸；尿苷；组氨酸；甲硫氨酸；肉毒碱；尿酸盐/酯；亮氨酸；异亮氨酸；十九烷酸盐/酯(19:0)；2-羟基棕榈酸盐/酯；高香兰酸硫酸酯盐/酯(homovanillate sulfate)；3-甲基-2-氧代丁酸盐/酯；琥珀酸盐/酯；柠檬酸盐/酯；肌醇；甘油；富马酸盐/酯；5-羟基吲哚乙酸盐/酯；肾上腺酸盐/酯(adrenate)(22:4n6)；17-甲基硬脂酸盐/酯；乙酰基肉毒碱(C2)；腺嘌呤；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)；苯丙氨酰基丙氨酸；异油酸盐/酯(18:1n7)；硬脂酸盐/酯(18:0)；1-甲基鸟苷；十五烷酸盐/酯(15:0)；缬氨酰基缬氨酸；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；牛磺酸；N-乙酰基甘氨酸；棕榈酰基乙醇酰胺；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；棕榈酸盐/酯(16:0)；辛二酸盐/酯(suberate/octanedioate)；13-甲基肉豆蔻酸；1-磷酸鞘氨醇；13-HODE与9-HODE的混合物；苯基乙酸盐/酯；十八烷二酸盐/酯(C18)；天冬酰胺酰基亮氨酸；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；N-棕榈酰基牛磺酸；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；甘氨酰基脯氨酸；亚油酸盐/酯(18:2n6)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；十七酸盐/酯(17:0)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；月桂酸盐/酯(12:0)；油酰基肉毒碱(C18)；棕榈酰基肉毒碱(C16)；1-硬脂酰基甘油(18:0)；异亮氨酰基亮氨酸；核黄素(维生素B2)；6-氧代哌啶-2-甲酸；缬氨酰基谷氨酰胺；3-甲基戊二酰基肉毒碱(C6)；油酸盐/酯(18:1n9)；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；辛酸盐/酯(8:0)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；二氢阿魏酸；3-羟基辛酸盐/酯；苏氨酰基亮氨酸；半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；戊二酰基肉毒碱(C5)；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；月桂基肉毒碱(C12)；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；癸酸盐/酯(10:0)；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；肉豆蔻酰基肉毒碱；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；3-羟基癸酸盐/酯；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；L-***；3-羟基癸二酸盐/酯；十六烷二酸盐/酯(C16)；亮氨酰基甘氨酸；二氢鞘氨醇；三甲基胺N氧化物；亮氨酰基丙氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；牛磺石胆酸3-硫酸酯盐/酯(taurolithocholate 3-sulfate)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；焦磷酸盐/酯(PPi)；次黄嘌呤；马尿酸盐/酯；酪氨酸；色氨酸；十一烷二酸盐/酯；异戊酸盐/酯(C5)；1-棕榈酰基甘油(16:0)；十二烷二酸盐/酯(C12)；癸二酸盐/酯(sebacate/decanedioate)；肌苷，其中所述差异存在指示所述疾病的存在、风险、亚型、进展或严重性。

在优选实施方式中，方法包括组合(同时或依序)检测数种上列生物标志物，优选2、3、4、5、6、7、8、9、10种，更优选2或3种，来提供最有效的患者分析。在这方面，在一个具体实施方式中，本发明方法包括测定来自受试者的生物样品中以下物质的差异存在：

(i)一种或多种选自以下物质的生物标志物：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)、HWESASLLR、亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)和3-[3-(磺氧)苯基]丙酸，和

(ii)一种或多种选自以下物质的不同生物标志物：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱；月桂酸盐/酯(12:0)；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；赖氨酸；3-羟基癸酸盐/酯；棕榈酸盐/酯(16:0)；3-羟基马尿酸盐/酯；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；乙酰基肉毒碱(C2)；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；十五烷酸盐/酯(15:0)；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；肉豆蔻酰基肉毒碱；亚油酸盐/酯(18:2n6)；1-硬脂酰基甘油(18:0)；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；油酸盐/酯(18:1n9)；13-甲基肉豆蔻酸；十九烷酸盐/酯(19:0)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；17-甲基硬脂酸盐/酯；异油酸盐/酯(18:1n7)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)；腺嘌呤；3-羟基癸二酸盐/酯；N-乙酰基酪氨酸；十八烷二酸盐/酯(C18)；异亮氨酰基亮氨酸；麦角硫因；N-乙酰基甘氨酸；辛酸盐/酯(8:0)；柠檬酸盐/酯；N-乙酰基色氨酸；棕榈酰基乙醇酰胺；组氨酸；天冬酰胺酰基亮氨酸；4-甲基儿茶酚硫酸盐/酯；辛二酸盐/酯；甲硫氨酸；半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物；6-氧代哌啶-2-甲酸；戊二酰基肉毒碱(C5)；牛磺石胆酸3-硫酸酯盐/酯；鸟氨酸；棕榈酰基肉毒碱(C16)；5α-雄甾烷-3α,17β-二醇单硫酸盐/酯1；丙酮酸盐/酯；尿酸盐/酯；1-甲基鸟苷；C-糖基色氨酸；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰乙醇胺；3-羟基辛酸盐/酯；油酰基肉毒碱(C18)；1-磷酸鞘氨醇；苯丙氨酰基丙氨酸；丙氨酸；3-甲基戊二酰基肉毒碱(C6)；N-乙酰基肌肽；异亮氨酸；二氢阿魏酸；高香兰酸硫酸酯盐/酯；尿苷；4-羟基马尿酸盐/酯；亮氨酸；甘氨酰基脯氨酸；三甲基胺N氧化物；月桂基肉毒碱(C12)；丙酰基甘氨酸(C3)；丙酰基肉毒碱(C3)；富马酸盐/酯；L-***；甘油酸盐/酯；γ-谷氨酰基赖氨酸；肌醇；孕烯-二醇二硫酸盐/酯；5-羟基吲哚乙酸盐/酯；2-羟基棕榈酸盐/酯；3-甲基-2-氧代丁酸盐/酯；N2,N5-二乙酰基鸟氨酸；4-雄甾烯-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；牛磺酸；缬氨酰基缬氨酸；γ-谷氨酰基谷氨酸盐/酯；3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸盐/酯(CMPF)；肉毒碱；水杨酸盐/酯；琥珀酸盐/酯；异亮氨酰基苯丙氨酸；核黄素(维生素B2)；焦磷酸盐/酯(PPi)。

最优选的生物标志物选自：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱；月桂酸盐/酯(12:0)；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；赖氨酸；3-羟基癸酸盐/酯；棕榈酸盐/酯(16:0)；3-羟基马尿酸盐/酯；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；乙酰基肉毒碱(C2)；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；十五烷酸盐/酯(15:0)；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；肉豆蔻酰基肉毒碱；亚油酸盐/酯(18:2n6)；1-硬脂酰基甘油(18:0)；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；油酸盐/酯(18:1n9)；13-甲基肉豆蔻酸；十九烷酸盐/酯(19:0)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；17-甲基硬脂酸盐/酯；异油酸盐/酯(18:1n7)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)。

甚至更优选的生物标志物选自：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱。

在另一个优选实施方式中，生物标志物选自：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯。

所述方法可以用任何生物样品、通常生物流体(如血液、血浆或血清的样品)实施。可以在分析前对样品进行处理。

本发明的另一个目的在于一种评估受试者对AD或相关病症的治疗的反应的方法，所述方法包括在给予所述治疗后，测定来自受试者的生物流体样品中一种或多种如上文所定义的生物标志物的差异存在，其中所述差异存在指示受试者对AD或相关病症的治疗的反应。

本发明还涉及一种监视患有AD或相关病症的受试者中治疗作用的方法，所述方法包括在给予所述治疗后或在治疗过程期间的不同时间点，测定来自受试者的生物流体样品中一种或多种如上文所定义的生物标志物的差异存在，其中在治疗期间纠正这种差异存在指示有效的治疗。所述方法特别适用于测定患有AD的受试者对用乙酰胆碱盐/酯酶(AchE)抑制剂(例如多奈哌齐(donepezil)、他克林(tacrine)、雷司替明(rivastigmine)或加兰他敏(galantamine))或NMDA抑制剂(如美金刚胺(memantine))治疗的反应，或适用于监视所述治疗的功效。

本发明的另一个目的在于一种治疗患有或怀疑患有AD或相关病症的受试者的方法，所述方法包括(i)使用如上文所定义的方法测定受试者中所述疾病的存在、风险、亚型、进展或严重性，和(ii)给予有需要受试者针对AD或所述相关病症的治疗。

本发明的另一个目的为一种用于在受试者中诊断AD或相关病症的试剂盒，其包含对如上文所定义的任一生物标志物具有特异性的捕获/标记试剂。

本发明可以用于任何疾病阶段的任何哺乳动物，通常为任何人类受试者。

具体实施方式

本发明公开新生物标志物的识别和阿茲海默氏病(AD)和相关病症的诊断方法。本发明描述可以在组织和生物流体中检测到的生物标志物用于诊断AD和相关病症的新用途。更具体地，本发明涉及用于诊断AD和相关病症的新代谢生物标志物和其组合。

定义

在本发明的上下文中，“AD相关病症”包括AD型老年痴呆(SDAT)、前驱期AD、轻度认知障碍(MCI)、额颞叶痴呆(FTD)、血管性痴呆和年龄相关的记忆障碍(AAMI)。

然而，应该预期，本发明的生物标志物，尽管特别地专用于AD和相关病症，但还可以用于诊断与AD或相关病症共有一些代谢特征的其它神经障碍，其为例如多发性硬化、帕金森氏症(Parkinson's disease)或肌萎缩性侧索硬化。

在本发明的上下文中，诊断AD和相关病症意思是识别或检测或评估病理学病状的风险、存在、亚型、严重性或进展。更具体地，本发明的诊断方法可以用于预测疾病的发展，检测疾病的存在，识别疾病亚型，监视疾病进展，证实AD或相关病症，评估受试者对治疗的反应，促进临床试验中的患者分层步骤或评估治疗功效。

如本文使用的术语“生物标志物”指可以用于诊断受试者、优选人类受试者、最优选来自这种受试者的流体样品中的病症的任何代谢物或分子或分析物。

代谢物为生物***的基因组、转录组和蛋白质组变化性的下游端产物。因此，术语“代谢物”包括通过生物体代谢或通过生物体中的代谢过程产生的任何物质。例如，代谢物为如糖、胆固醇、核苷、脂质、氨基酸或甚至包含2至50个氨基酸、优选2、3、4、5、6、7、8或9个胺基酸的肽的小分子。

术语“差异存在”或“差异水平”指与对照相比，来自患病受试者的样品中生物标志物的存在、数量和/或频率和/或形式的变化。因此，差异存在反映存在不同于“正常”水平的水平(或频率或形式)。对照可以为来自健康受试者的类似样品中测定的生物标志物的数量和/或频率和/或形式，或来自疾病产生前和/或受试者的治疗/疾病早期的同一受试者的样品中生物标志物的参考值(例如中值、平均值)和/或水平，和/或来自作为对照的另一患病受试者或患病受试者群体的样品中生物标志物的水平。

“水平”和“数量”为可互换的术语。

目标生物标志物数量中的术语“变化”或“偏差”或“差异”可以指与对照样品或参考值相比，来自受试者的生物样品中目标生物标志物数量的增加或减少。通常，关于生物标志物水平的术语“减少”指来自受试者的生物样品中生物标志物的统计上显著的浓度或水平减少。在一个实施方式中，这种减少与对照样品或参考或平均值相比为至少0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％或1％。在另一个实施方式中，这种减少与对照样品或参考或平均值相比为至少1.5％、2％、2.5％、3.0％、3.5％、4％或4.5％。减少可以更多，如减少至少5％或甚至超过5％。在一个优选实施方式中，减少可以为约10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。在一个更优选实施方式中，减少可以为约2％、5％或15％或甚至超过15％。类似地，关于生物标志物水平的术语“增加”指来自受试者的生物样品中生物标志物的统计上显著的浓度或水平增加。在一个实施方式中，这种增加与对照样品或参考或平均值相比为至少0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％或1％。在另一个实施方式中，这种增加与对照样品或参考或平均值相比为至少1.5％、2％、2.5％、3.0％、3.5％、4％或4.5％。增加可以更多，如增加至少5％或甚至超过5％。在一个优选实施方式中，增加可以为约10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％(或甚至超过100％)。在一个更优选实施方式中，增加可以为约2％、5％或15％。替代地，另外可以观察到生物标志物的频率变化。与对照受试者的样品相比，所述生物标志物可以以较高频率或以较低频率在患者样品中检测到。生物标志物可以在数量、频率和/或形式方面差异地存在，并且指示受试者中的AD或相关病症。所述增加或减少的数量级可以依据生物标志物、患者、疾病的类型或阶段而变化。本申请中测定和公开的生物标志物的水平变化(增加或减少)的等级为疾病的特征。

“敏感性”、“特异性”和“AUC”为在讨论诊断试剂盒的预测能力时常用的统计学术语。“敏感性”反映在假设被证实时测试提供阳性结果的能力，并且“特异性”反映在假设被驳回时测试提供阴性结果的能力。因此，在本发明中，高敏感性意思是生物标志物的偏差高度指示疾病发病、存在或进展；高特异性意思是无生物标志物偏差与无疾病开始、存在或进展高度有关。ROC(接受者操作特征)曲线下面积(AUC)为在特异性范围内的生物标志物平均敏感性。其常用作表示生物标志物的总体性能的概括统计。无预测价值的生物标志物的AUC为0.5或小于0.5。如实验部分中所示，本发明者现在识别的生物标志物为AD和相关病症的特征。更具体地，尽管可以在CSF中分析本发明生物标志物，但其还为也可以从与CSF相比更容易从受试者获得的体液分析的代谢物。

采集有关AD和相关病症的数据、功能数据的新分析和实验首先允许本发明者识别疾病涉及的路径。这些功能单元接着被组合并且充当构建互相作用的路径的较大功能网络的起点。基于这些网络，作为候选生物标志物的代谢物可以被本发明者识别并且选择。这些生物标志物根据不同的标准优先考虑，所述标准包括：

-其参与与AD发病和发展相关的信号传递路径，和

-其确定参与以AD相关路径为代表的功能网络。

这使得可以识别参与或干涉数种路径从而发现在AD患者中变化的代谢物。

其它验证研究使得可以选择有价值的代谢物生物标志物，其可以单独使用、混合在一起或与诊断AD或相关病症的其它已知标志物组合。代谢物通过其单同位素质量(表1和表2)表征。表1中列出的代谢物为身份已经使用相应内标(当可商购时)进一步证实的代谢物。如实验部分所示，进一步测试这些代谢物生物标志物来证实其与AD的相关性。

下表1和下表2中公开代谢物以及其名称、单同位素质量和在可获得时，其(酸或碱形式的)化学式和其说明性CAS。

表1

N/A：未获得

表2

N/A：未获得

上述代谢物代表可以单独或以各种组合形式用于诊断AD或相关病症的有价值的生物标志物。检测和监视这些生物标志物的水平的能力通过如下提供提高的诊断能力：允许临床医师在早期检测产生疾病的风险，测定疾病严重性的水平，通过检查患者样品中的这些生物标志物来监视治疗效果，或准确地将患者归入亚型以例如调节治疗或预测患者对治疗的反应。与当前存在的产品相比，本发明提供数个优点和益处。与现有诊断方案相比，本文描述的生物标志物提供疾病或其进展的更快速、客观和准确的诊断。举例来说，神经心理学测试(如小型精神状态检查，MMSE)仅指示认知障碍和/或痴呆；其结果可能随社会文化因素而变化，并且在单独考虑时一般仅视为AD或相关疾病存在或不存在的指示。此外，如Amyvid的工具，即使被FDA批准，也既不能用作预测工具，又不能了解对治疗的反应，如这种给予所述。

本发明还可以用于在出现常用于诊断疾病的任何症状前预测AD和相关病症的发病。因此，本发明可以用于测试和监视认为具有产生AD或相关病症的风险的个体，例如具有该疾病家族史的个体，以便能够在早期介入来预防发病或症状的发展。这种测试和监视可能用来在AD和相关病症发病前数个月或数年识别或预测该疾病的产生。

在其它方面，本发明方法还包括管理个体治疗的步骤。例如，管理治疗包括给予相配的药物或药物组合来减缓、停止或逆转疾病的进展。在本发明的另一方面，方法还包括在治疗开始后测量生物标志物水平，监视疾病的进展、对治疗的反应或甚至所述所选治疗的效率。在一个具体实施方式中，监视对治疗的反应包括在给予所述治疗后或在治疗过程期间的不同时间点时，测定来自受试者的生物流体样品中一种或多种上述生物标志物的差异存在；与参考值相比显著的差异存在(无论变化等级是多少)指示对治疗有反应。

至于在涉及慢性疾病时，在一个具体实施方式中，监视对治疗的反应包括在治疗过程期间的不同时间点时测定来自受试者的生物流体中一种或多种上述生物标志物的差异存在。

在另一个具体实施方式中，监视疾病进展包括在治疗过程期间的不同时间点时测定来自受试者的生物流体中一种或多种上述生物标志物的差异存在。

在另一个具体实施方式中，监视治疗效率包括在给予所述治疗后或在治疗过程期间的不同时间点时，测定来自受试者的生物流体样品中一种或多种上述生物标志物的差异存在；在治疗期间纠正这种差异存在(即朝向“正常状态”的水平发展)指示有效的治疗。

本发明的一个目的为一种诊断AD或相关病症的方法，该方法包括检测、测量或测定获自哺乳动物的样品中、更优选获自人类样品中至少一种选自以下物质的生物标志物的差异存在，如指示该疾病的差异存在：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱；月桂酸盐/酯(12:0)；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；赖氨酸；3-羟基癸酸盐/酯；棕榈酸盐/酯(16:0)；3-羟基马尿酸盐/酯；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；乙酰基肉毒碱(C2)；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；十五烷酸盐/酯(15:0)；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；肉豆蔻酰基肉毒碱；亚油酸盐/酯(18:2n6)；1-硬脂酰基甘油(18:0)；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；油酸盐/酯(18:1n9)；13-甲基肉豆蔻酸；十九烷酸盐/酯(19:0)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；17-甲基硬脂酸盐/酯；异油酸盐/酯(18:1n7)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)；腺嘌呤；3-羟基癸二酸盐/酯；N-乙酰基酪氨酸；十八烷二酸盐/酯(C18)；异亮氨酰基亮氨酸；麦角硫因；N-乙酰基甘氨酸；辛酸盐/酯(8:0)；柠檬酸盐/酯；N-乙酰基色氨酸；棕榈酰基乙醇酰胺；组氨酸；天冬酰胺酰基亮氨酸；4-甲基儿茶酚硫酸盐/酯；辛二酸盐/酯；甲硫氨酸；半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物；6-氧代哌啶-2-甲酸；戊二酰基肉毒碱(C5)；牛磺石胆酸3-硫酸酯盐/酯；鸟氨酸；棕榈酰基肉毒碱(C16)；5α-雄甾烷-3α,17β-二醇单硫酸盐/酯1；丙酮酸盐/酯；尿酸盐/酯；1-甲基鸟苷；C-糖基色氨酸；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰乙醇胺；3-羟基辛酸盐/酯；油酰基肉毒碱(C18)；1-磷酸鞘氨醇；苯丙氨酰基丙氨酸；丙氨酸；3-甲基戊二酰基肉毒碱(C6)；N-乙酰基肌肽；异亮氨酸；二氢阿魏酸；高香兰酸硫酸酯盐/酯；尿苷；4-羟基马尿酸盐/酯；亮氨酸；甘氨酰基脯氨酸；三甲基胺N氧化物；月桂基肉毒碱(C12)；丙酰基甘氨酸(C3)；丙酰基肉毒碱(C3)；富马酸盐/酯；L-***；甘油酸盐/酯；γ-谷氨酰基赖氨酸；肌醇；孕烯-二醇二硫酸盐/酯；5-羟基吲哚乙酸盐/酯；2-羟基棕榈酸盐/酯；3-甲基-2-氧代丁酸盐/酯；N2,N5-二乙酰基鸟氨酸；4-雄甾烯-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；牛磺酸；缬氨酰基缬氨酸；γ-谷氨酰基谷氨酸盐/酯；3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸盐/酯(CMPF)；肉毒碱；水杨酸盐/酯；琥珀酸盐/酯；异亮氨酰基苯丙氨酸；核黄素(维生素B2)；焦磷酸盐/酯(PPi)。

更具体地，本发明的一个目的为一种诊断哺乳动物中的AD或相关病症的方法，该方法包括测定来自受试者的样品中至少一种选自以下物质的生物标志物的差异存在，这种差异存在指示该疾病：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱；月桂酸盐/酯(12:0)；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；赖氨酸；3-羟基癸酸盐/酯；棕榈酸盐/酯(16:0)；3-羟基马尿酸盐/酯；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；乙酰基肉毒碱(C2)；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；十五烷酸盐/酯(15:0)；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；肉豆蔻酰基肉毒碱；亚油酸盐/酯(18:2n6)；1-硬脂酰基甘油(18:0)；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；油酸盐/酯(18:1n9)；13-甲基肉豆蔻酸；十九烷酸盐/酯(19:0)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；17-甲基硬脂酸盐/酯；异油酸盐/酯(18:1n7)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)。

甚至更具体地，本发明的一个目的为一种诊断哺乳动物中的AD或相关病症的方法，该方法包括测定来自受试者的样品中至少一种选自以下物质的生物标志物的差异存在，这种差异存在指示该疾病：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱。

最具体地，本发明的一个目的为一种诊断哺乳动物中的AD或相关病症的方法，该方法包括测定来自受试者的样品中至少一种选自以下物质的生物标志物的差异存在，这种差异存在指示该疾病：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯。

样品可以为或可以来源于从受试者获得的任何含代谢物样品，如生物流体、气体、呼出气体和/或气雾(aerosol)、活检物、组织提取物、粪便等。样品优选为或来源于生物流体，如间隙、细胞外或细胞内流体，更优选来自血液(或来源于血液的血浆和/或血清)、尿液、CSF等。

在这方面，根据一个优选实施方式，方法包括测定来自受试者的生物流体中至少一种选自以下物质的生物标志物的差异存在，这种差异存在指示该疾病：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱；月桂酸盐/酯(12:0)；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；赖氨酸；3-羟基癸酸盐/酯；棕榈酸盐/酯(16:0)；3-羟基马尿酸盐/酯；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；乙酰基肉毒碱(C2)；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；十五烷酸盐/酯(15:0)；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；肉豆蔻酰基肉毒碱；亚油酸盐/酯(18:2n6)；1-硬脂酰基甘油(18:0)；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；油酸盐/酯(18:1n9)；13-甲基肉豆蔻酸；十九烷酸盐/酯(19:0)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；17-甲基硬脂酸盐/酯；异油酸盐/酯(18:1n7)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)；腺嘌呤；3-羟基癸二酸盐/酯；N-乙酰基酪氨酸；十八烷二酸盐/酯(C18)；异亮氨酰基亮氨酸；麦角硫因；N-乙酰基甘氨酸；辛酸盐/酯(8:0)；柠檬酸盐/酯；N-乙酰基色氨酸；棕榈酰基乙醇酰胺；组氨酸；天冬酰胺酰基亮氨酸；4-甲基儿茶酚硫酸盐/酯；辛二酸盐/酯；甲硫氨酸；半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物；6-氧代哌啶-2-甲酸；戊二酰基肉毒碱(C5)；牛磺石胆酸3-硫酸酯盐/酯；鸟氨酸；棕榈酰基肉毒碱(C16)；5α-雄甾烷-3α,17β-二醇单硫酸盐/酯1；丙酮酸盐/酯；尿酸盐/酯；1-甲基鸟苷；C-糖基色氨酸；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰乙醇胺；3-羟基辛酸盐/酯；油酰基肉毒碱(C18)；1-磷酸鞘氨醇；苯丙氨酰基丙氨酸；丙氨酸；3-甲基戊二酰基肉毒碱(C6)；N-乙酰基肌肽；异亮氨酸；二氢阿魏酸；高香兰酸硫酸酯盐/酯；尿苷；4-羟基马尿酸盐/酯；亮氨酸；甘氨酰基脯氨酸；三甲基胺N氧化物；月桂基肉毒碱(C12)；丙酰基甘氨酸(C3)；丙酰基肉毒碱(C3)；富马酸盐/酯；L-***；甘油酸盐/酯；γ-谷氨酰基赖氨酸；肌醇；孕烯-二醇二硫酸盐/酯；5-羟基吲哚乙酸盐/酯；2-羟基棕榈酸盐/酯；3-甲基-2-氧代丁酸盐/酯；N2,N5-二乙酰基鸟氨酸；4-雄甾烯-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；牛磺酸；缬氨酰基缬氨酸；γ-谷氨酰基谷氨酸盐/酯；3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸盐/酯(CMPF)；肉毒碱；水杨酸盐/酯；琥珀酸盐/酯；异亮氨酰基苯丙氨酸；核黄素(维生素B2)；焦磷酸盐/酯(PPi)。

在一个更优选实施方式中，方法包括测定来自受试者的血液、血浆和/或血清中至少一种选自以下物质的生物标志物的差异存在，这种差异存在指示该疾病：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱；月桂酸盐/酯(12:0)；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；赖氨酸；3-羟基癸酸盐/酯；棕榈酸盐/酯(16:0)；3-羟基马尿酸盐/酯；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；乙酰基肉毒碱(C2)；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；十五烷酸盐/酯(15:0)；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；肉豆蔻酰基肉毒碱；亚油酸盐/酯(18:2n6)；1-硬脂酰基甘油(18:0)；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；油酸盐/酯(18:1n9)；13-甲基肉豆蔻酸；十九烷酸盐/酯(19:0)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；17-甲基硬脂酸盐/酯；异油酸盐/酯(18:1n7)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)；腺嘌呤；3-羟基癸二酸盐/酯；N-乙酰基酪氨酸；十八烷二酸盐/酯(C18)；异亮氨酰基亮氨酸；麦角硫因；N-乙酰基甘氨酸；辛酸盐/酯(8:0)；柠檬酸盐/酯；N-乙酰基色氨酸；棕榈酰基乙醇酰胺；组氨酸；天冬酰胺酰基亮氨酸；4-甲基儿茶酚硫酸盐/酯；辛二酸盐/酯；甲硫氨酸；半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物；6-氧代哌啶-2-甲酸；戊二酰基肉毒碱(C5)；牛磺石胆酸3-硫酸酯盐/酯；鸟氨酸；棕榈酰基肉毒碱(C16)；5α-雄甾烷-3α,17β-二醇单硫酸盐/酯1；丙酮酸盐/酯；尿酸盐/酯；1-甲基鸟苷；C-糖基色氨酸；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰乙醇胺；3-羟基辛酸盐/酯；油酰基肉毒碱(C18)；1-磷酸鞘氨醇；苯丙氨酰基丙氨酸；丙氨酸；3-甲基戊二酰基肉毒碱(C6)；N-乙酰基肌肽；异亮氨酸；二氢阿魏酸；高香兰酸硫酸酯盐/酯；尿苷；4-羟基马尿酸盐/酯；亮氨酸；甘氨酰基脯氨酸；三甲基胺N氧化物；月桂基肉毒碱(C12)；丙酰基甘氨酸(C3)；丙酰基肉毒碱(C3)；富马酸盐/酯；L-***；甘油酸盐/酯；γ-谷氨酰基赖氨酸；肌醇；孕烯-二醇二硫酸盐/酯；5-羟基吲哚乙酸盐/酯；2-羟基棕榈酸盐/酯；3-甲基-2-氧代丁酸盐/酯；N2,N5-二乙酰基鸟氨酸；4-雄甾烯-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；牛磺酸；缬氨酰基缬氨酸；γ-谷氨酰基谷氨酸盐/酯；3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸盐/酯(CMPF)；肉毒碱；水杨酸盐/酯；琥珀酸盐/酯；异亮氨酰基苯丙氨酸；核黄素(维生素B2)；焦磷酸盐/酯(PPi)。

在一个甚至更优选实施方式中，本发明的一个目的为一种诊断哺乳动物中的AD或相关病症的方法，该方法包括测定来自受试者的血液、血浆和/或血清中至少一种选自以下物质的生物标志物的差异存在，这种差异存在指示该疾病：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱；月桂酸盐/酯(12:0)；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；赖氨酸；3-羟基癸酸盐/酯；棕榈酸盐/酯(16:0)；3-羟基马尿酸盐/酯；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；乙酰基肉毒碱(C2)；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；十五烷酸盐/酯(15:0)；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；肉豆蔻酰基肉毒碱；亚油酸盐/酯(18:2n6)；1-硬脂酰基甘油(18:0)；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；油酸盐/酯(18:1n9)；13-甲基肉豆蔻酸；十九烷酸盐/酯(19:0)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；17-甲基硬脂酸盐/酯；异油酸盐/酯(18:1n7)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)。

在一个最优选实施方式中，本发明的一个目的为一种诊断哺乳动物中的AD或相关病症的方法，该方法包括测定来自受试者的血液、血浆和/或血清中至少一种选自以下物质的生物标志物的差异存在，这种差异存在指示该疾病：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱。

在另一个优选实施方式中，本发明的一个目的为一种诊断哺乳动物中的AD或相关病症的方法，该方法包括测定来自受试者的血液、血浆和/或血清中至少一种选自以下物质的生物标志物的差异存在，这种差异存在指示该疾病：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯。

在另一个优选实施方式中，本发明的一个目的为一种诊断哺乳动物中的AD或相关病症的方法，该方法包括测定来自受试者的呼出气体和/或气雾中至少一种选自以下物质的生物标志物的差异存在，这种差异存在指示该疾病：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱；月桂酸盐/酯(12:0)；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；赖氨酸；3-羟基癸酸盐/酯；棕榈酸盐/酯(16:0)；3-羟基马尿酸盐/酯；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；乙酰基肉毒碱(C2)；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；十五烷酸盐/酯(15:0)；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；肉豆蔻酰基肉毒碱；亚油酸盐/酯(18:2n6)；1-硬脂酰基甘油(18:0)；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；油酸盐/酯(18:1n9)；13-甲基肉豆蔻酸；十九烷酸盐/酯(19:0)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；17-甲基硬脂酸盐/酯；异油酸盐/酯(18:1n7)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)；腺嘌呤；3-羟基癸二酸盐/酯；N-乙酰基酪氨酸；十八烷二酸盐/酯(C18)；异亮氨酰基亮氨酸；麦角硫因；N-乙酰基甘氨酸；辛酸盐/酯(8:0)；柠檬酸盐/酯；N-乙酰基色氨酸；棕榈酰基乙醇酰胺；组氨酸；天冬酰胺酰基亮氨酸；4-甲基儿茶酚硫酸盐/酯；辛二酸盐/酯；甲硫氨酸；半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物；6-氧代哌啶-2-甲酸；戊二酰基肉毒碱(C5)；牛磺石胆酸3-硫酸酯盐/酯；鸟氨酸；棕榈酰基肉毒碱(C16)；5α-雄甾烷-3α,17β-二醇单硫酸盐/酯1；丙酮酸盐/酯；尿酸盐/酯；1-甲基鸟苷；C-糖基色氨酸；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰乙醇胺；3-羟基辛酸盐/酯；油酰基肉毒碱(C18)；1-磷酸鞘氨醇；苯丙氨酰基丙氨酸；丙氨酸；3-甲基戊二酰基肉毒碱(C6)；N-乙酰基肌肽；异亮氨酸；二氢阿魏酸；高香兰酸硫酸酯盐/酯；尿苷；4-羟基马尿酸盐/酯；亮氨酸；甘氨酰基脯氨酸；三甲基胺N氧化物；月桂基肉毒碱(C12)；丙酰基甘氨酸(C3)；丙酰基肉毒碱(C3)；富马酸盐/酯；L-***；甘油酸盐/酯；γ-谷氨酰基赖氨酸；肌醇；孕烯-二醇二硫酸盐/酯；5-羟基吲哚乙酸盐/酯；2-羟基棕榈酸盐/酯；3-甲基-2-氧代丁酸盐/酯；N2,N5-二乙酰基鸟氨酸；4-雄甾烯-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；牛磺酸；缬氨酰基缬氨酸；γ-谷氨酰基谷氨酸盐/酯；3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸盐/酯(CMPF)；肉毒碱；水杨酸盐/酯；琥珀酸盐/酯；异亮氨酰基苯丙氨酸；核黄素(维生素B2)；焦磷酸盐/酯(PPi)。

在一个实施方式中，诊断AD和相关病症包括测定哺乳动物的生物流体样品中一种或多种选自以下物质的代谢物的差异存在：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯。

在一个优选实施方式中，本发明方法为诊断AD或相关病症的体外方法，该方法包括测定来自受试者的生物流体样品中至少一种选自以下物质的生物标志物的差异存在，其中所述差异存在指示所述疾病的存在、风险、亚型、进展或严重性：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱；月桂酸盐/酯(12:0)；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；赖氨酸；3-羟基癸酸盐/酯；棕榈酸盐/酯(16:0)；3-羟基马尿酸盐/酯；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；乙酰基肉毒碱(C2)；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；十五烷酸盐/酯(15:0)；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；肉豆蔻酰基肉毒碱；亚油酸盐/酯(18:2n6)；1-硬脂酰基甘油(18:0)；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；油酸盐/酯(18:1n9)；13-甲基肉豆蔻酸；十九烷酸盐/酯(19:0)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；17-甲基硬脂酸盐/酯；异油酸盐/酯(18:1n7)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)；腺嘌呤；3-羟基癸二酸盐/酯；N-乙酰基酪氨酸；十八烷二酸盐/酯(C18)；异亮氨酰基亮氨酸；麦角硫因；N-乙酰基甘氨酸；辛酸盐/酯(8:0)；柠檬酸盐/酯；N-乙酰基色氨酸；棕榈酰基乙醇酰胺；组氨酸；天冬酰胺酰基亮氨酸；4-甲基儿茶酚硫酸盐/酯；辛二酸盐/酯；甲硫氨酸；半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物；6-氧代哌啶-2-甲酸；戊二酰基肉毒碱(C5)；牛磺石胆酸3-硫酸酯盐/酯；鸟氨酸；棕榈酰基肉毒碱(C16)；5α-雄甾烷-3α,17β-二醇单硫酸盐/酯1；丙酮酸盐/酯；尿酸盐/酯；1-甲基鸟苷；C-糖基色氨酸；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰乙醇胺；3-羟基辛酸盐/酯；油酰基肉毒碱(C18)；1-磷酸鞘氨醇；苯丙氨酰基丙氨酸；丙氨酸；3-甲基戊二酰基肉毒碱(C6)；N-乙酰基肌肽；异亮氨酸；二氢阿魏酸；高香兰酸硫酸酯盐/酯；尿苷；4-羟基马尿酸盐/酯；亮氨酸；甘氨酰基脯氨酸；三甲基胺N氧化物；月桂基肉毒碱(C12)；丙酰基甘氨酸(C3)；丙酰基肉毒碱(C3)；富马酸盐/酯；L-***；甘油酸盐/酯；γ-谷氨酰基赖氨酸；肌醇；孕烯-二醇二硫酸盐/酯；5-羟基吲哚乙酸盐/酯；2-羟基棕榈酸盐/酯；3-甲基-2-氧代丁酸盐/酯；N2,N5-二乙酰基鸟氨酸；4-雄甾烯-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；牛磺酸；缬氨酰基缬氨酸；γ-谷氨酰基谷氨酸盐/酯；3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸盐/酯(CMPF)；肉毒碱；水杨酸盐/酯；琥珀酸盐/酯；异亮氨酰基苯丙氨酸；核黄素(维生素B2)；焦磷酸盐/酯(PPi)。

在一个更优选实施方式中，诊断AD或相关病症包括测量哺乳动物的生物流体样品中至少一种选自以下物质的生物标志物的增加：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；月桂酸盐/酯(12:0)；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；3-羟基癸酸盐/酯；棕榈酸盐/酯(16:0)；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；乙酰基肉毒碱(C2)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；十五烷酸盐/酯(15:0)；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；肉豆蔻酰基肉毒碱；亚油酸盐/酯(18:2n6)；1-硬脂酰基甘油(18:0)；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；油酸盐/酯(18:1n9)；13-甲基肉豆蔻酸；十九烷酸盐/酯(19:0)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；17-甲基硬脂酸盐/酯；异油酸盐/酯(18:1n7)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)；腺嘌呤；3-羟基癸二酸盐/酯；十八烷二酸盐/酯(C18)；异亮氨酰基亮氨酸；N-乙酰基甘氨酸；辛酸盐/酯(8:0)；柠檬酸盐/酯；棕榈酰基乙醇酰胺；天冬酰胺酰基亮氨酸；辛二酸盐/酯；半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物；6-氧代哌啶-2-甲酸；戊二酰基肉毒碱(C5)；牛磺石胆酸3-硫酸酯盐/酯；棕榈酰基肉毒碱(C16)；1-甲基鸟苷；C-糖基色氨酸；3-羟基辛酸盐/酯；油酰基肉毒碱(C18)；1-磷酸鞘氨醇；苯丙氨酰基丙氨酸；3-甲基戊二酰基肉毒碱(C6)；二氢阿魏酸；高香兰酸硫酸酯盐/酯；甘氨酰基脯氨酸；三甲基胺N氧化物；月桂基肉毒碱(C12)；富马酸盐/酯；L-***；肌醇；孕烯-二醇二硫酸盐/酯；5-羟基吲哚乙酸盐/酯；2-羟基棕榈酸盐/酯；3-甲基-2-氧代丁酸盐/酯；牛磺酸；缬氨酰基缬氨酸；琥珀酸盐/酯；核黄素(维生素B2)；焦磷酸盐/酯(PPi)，和/或至少一种选自以下物质的生物标志物的减少：HWESASLLR；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱；赖氨酸；3-羟基马尿酸盐/酯；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；N-乙酰基酪氨酸；麦角硫因；N-乙酰基色氨酸；组氨酸；4-甲基儿茶酚硫酸盐/酯；甲硫氨酸；鸟氨酸；5α-雄甾烷-3α,17β-二醇单硫酸盐/酯1；丙酮酸盐/酯；尿酸盐/酯；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰乙醇胺；丙氨酸；N-乙酰基肌肽；异亮氨酸；尿苷；4-羟基马尿酸盐/酯；亮氨酸；丙酰基甘氨酸(C3)；丙酰基肉毒碱(C3)；甘油酸盐/酯；γ-谷氨酰基赖氨酸；N2,N5-二乙酰基鸟氨酸；4-雄甾烯-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；γ-谷氨酰基谷氨酸盐/酯；3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸盐/酯(CMPF)；肉毒碱；水杨酸盐/酯；异亮氨酰基苯丙氨酸。

在一个极优选实施方式中，诊断AD或相关病症包括测量哺乳动物的生物流体样品中至少一种选自以下物质的生物标志物的增加：亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯，和/或至少一种选自HWESASLLR；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸的生物标志物的减少。

在一个具体实施方式中，本发明涉及一种诊断选自以下疾病的神经疾病的体外方法：阿茲海默氏病(AD)、AD型老年痴呆、前驱期AD、轻度认知障碍、年龄相关的记忆障碍、血管性痴呆或额颞叶痴呆，所述方法包括以下步骤：

-从罹患或怀疑罹患所述疾病或具有罹患所述疾病的风险的受试者收集血液、血清或血浆样品，

-处理样品以通过LC/MS和/或GC/MS对其进行进一步分析，

-通过LC/MS和/或GC/MS测量与对照值相比至少一种选自以下物质的生物标志物的增加：亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；月桂酸盐/酯(12:0)；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；3-羟基癸酸盐/酯；棕榈酸盐/酯(16:0)；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；乙酰基肉毒碱(C2)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；十五烷酸盐/酯(15:0)；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；肉豆蔻酰基肉毒碱；亚油酸盐/酯(18:2n6)；1-硬脂酰基甘油(18:0)；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；油酸盐/酯(18:1n9)；13-甲基肉豆蔻酸；十九烷酸盐/酯(19:0)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；17-甲基硬脂酸盐/酯；异油酸盐/酯(18:1n7)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)；腺嘌呤；3-羟基癸二酸盐/酯；十八烷二酸盐/酯(C18)；异亮氨酰基亮氨酸；N-乙酰基甘氨酸；辛酸盐/酯(8:0)；柠檬酸盐/酯；棕榈酰基乙醇酰胺；天冬酰胺酰基亮氨酸；辛二酸盐/酯；半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物；6-氧代哌啶-2-甲酸；戊二酰基肉毒碱(C5)；牛磺石胆酸3-硫酸酯盐/酯；棕榈酰基肉毒碱(C16)；1-甲基鸟苷；C-糖基色氨酸；3-羟基辛酸盐/酯；油酰基肉毒碱(C18)；1-磷酸鞘氨醇；苯丙氨酰基丙氨酸；3-甲基戊二酰基肉毒碱(C6)；二氢阿魏酸；高香兰酸硫酸酯盐/酯；甘氨酰基脯氨酸；三甲基胺N氧化物；月桂基肉毒碱(C12)；富马酸盐/酯；L-***；肌醇；孕烯-二醇二硫酸盐/酯；5-羟基吲哚乙酸盐/酯；2-羟基棕榈酸盐/酯；3-甲基-2-氧代丁酸盐/酯；牛磺酸；缬氨酰基缬氨酸；琥珀酸盐/酯；核黄素(维生素B2)；焦磷酸盐/酯(PPi)，和/或与对照值相比至少一种选自以下物质的生物标志物的减少：HWESASLLR；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱；赖氨酸；3-羟基马尿酸盐/酯；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；N-乙酰基酪氨酸；麦角硫因；N-乙酰基色氨酸；组氨酸；4-甲基儿茶酚硫酸盐/酯；甲硫氨酸；鸟氨酸；5α-雄甾烷-3α,17β-二醇单硫酸盐/酯1；丙酮酸盐/酯；尿酸盐/酯；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰乙醇胺；丙氨酸；N-乙酰基肌肽；异亮氨酸；尿苷；4-羟基马尿酸盐/酯；亮氨酸；丙酰基甘氨酸(C3)；丙酰基肉毒碱(C3)；甘油酸盐/酯；γ-谷氨酰基赖氨酸；N2,N5-二乙酰基鸟氨酸；4-雄甾烯-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；γ-谷氨酰基谷氨酸盐/酯；3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸盐/酯(CMPF)；肉毒碱；水杨酸盐/酯；异亮氨酰基苯丙氨酸，

-从前述步骤推断所述疾病的存在、风险、亚型、进展或严重性。

在一个甚至更优选实施方式中，本发明的用于诊断AD或相关病症的方法包括测定本发明的数种生物标志物的组合(称为生物标志物组)的差异存在。一个组优选含有2、3、4或5种(或甚至超过5种)来自上列生物标志物的生物标志物，样品中的所述生物标志物可以同时或依序测定。

在另一个实施方式中，这种生物标志物组由至少两种代谢物构成，所述代谢物选自：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱；月桂酸盐/酯(12:0)；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；赖氨酸；3-羟基癸酸盐/酯；棕榈酸盐/酯(16:0)；3-羟基马尿酸盐/酯；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；乙酰基肉毒碱(C2)；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；十五烷酸盐/酯(15:0)；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；肉豆蔻酰基肉毒碱；亚油酸盐/酯(18:2n6)；1-硬脂酰基甘油(18:0)；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；油酸盐/酯(18:1n9)；13-甲基肉豆蔻酸；十九烷酸盐/酯(19:0)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；17-甲基硬脂酸盐/酯；异油酸盐/酯(18:1n7)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)；腺嘌呤；3-羟基癸二酸盐/酯；N-乙酰基酪氨酸；十八烷二酸盐/酯(C18)；异亮氨酰基亮氨酸；麦角硫因；N-乙酰基甘氨酸；辛酸盐/酯(8:0)；柠檬酸盐/酯；N-乙酰基色氨酸；棕榈酰基乙醇酰胺；组氨酸；天冬酰胺酰基亮氨酸；4-甲基儿茶酚硫酸盐/酯；辛二酸盐/酯；甲硫氨酸；半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物；6-氧代哌啶-2-甲酸；戊二酰基肉毒碱(C5)；牛磺石胆酸3-硫酸酯盐/酯；鸟氨酸；棕榈酰基肉毒碱(C16)；5α-雄甾烷-3α,17β-二醇单硫酸盐/酯1；丙酮酸盐/酯；尿酸盐/酯；1-甲基鸟苷；C-糖基色氨酸；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰乙醇胺；3-羟基辛酸盐/酯；油酰基肉毒碱(C18)；1-磷酸鞘氨醇；苯丙氨酰基丙氨酸；丙氨酸；3-甲基戊二酰基肉毒碱(C6)；N-乙酰基肌肽；异亮氨酸；二氢阿魏酸；高香兰酸硫酸酯盐/酯；尿苷；4-羟基马尿酸盐/酯；亮氨酸；甘氨酰基脯氨酸；三甲基胺N氧化物；月桂基肉毒碱(C12)；丙酰基甘氨酸(C3)；丙酰基肉毒碱(C3)；富马酸盐/酯；L-***；甘油酸盐/酯；γ-谷氨酰基赖氨酸；肌醇；孕烯-二醇二硫酸盐/酯；5-羟基吲哚乙酸盐/酯；2-羟基棕榈酸盐/酯；3-甲基-2-氧代丁酸盐/酯；N2,N5-二乙酰基鸟氨酸；4-雄甾烯-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；牛磺酸；缬氨酰基缬氨酸；γ-谷氨酰基谷氨酸盐/酯；3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸盐/酯(CMPF)；肉毒碱；水杨酸盐/酯；琥珀酸盐/酯；异亮氨酰基苯丙氨酸；核黄素(维生素B2)；焦磷酸盐/酯(PPi)。

在一个优选实施方式中，这种生物标志物组由至少两种选自以下物质的代谢物构成：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱。

在另一个优选实施方式中，生物标志物组由至少三种选自以下物质的代谢物构成：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱。

在一个更优选实施方式中，生物标志物组由以下物质构成：(i)至少一种选自HWESASLLR和肌氨酸(N-甲基甘氨酸)的生物标志物，和(ii)至少一种选自以下物质的不同生物标志物：HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；肌氨酸(N甲基甘氨酸)；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱；月桂酸盐/酯(12:0)；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；赖氨酸；3-羟基癸酸盐/酯；棕榈酸盐/酯(16:0)；3-羟基马尿酸盐/酯；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；乙酰基肉毒碱(C2)；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；十五烷酸盐/酯(15:0)；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；肉豆蔻酰基肉毒碱；亚油酸盐/酯(18:2n6)；1-硬脂酰基甘油(18:0)；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；油酸盐/酯(18:1n9)；13-甲基肉豆蔻酸；十九烷酸盐/酯(19:0)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；17-甲基硬脂酸盐/酯；异油酸盐/酯(18:1n7)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)，其中所述存在、数量、频率或形式的变化指示所述疾病的存在、风险、亚型、进展或严重性。

在一个特别优选实施方式中，所述生物标志物组含有至少HWESASLLR。

在另一个优选实施方式中，所述生物标志物组含有至少肌氨酸(N-甲基甘氨酸)。

在一个更优选实施方式中，生物标志物组包含至少亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)。

在另一个特别优选实施方式中，所述生物标志物组含有至少3-[3-(磺氧)苯基]丙酸。

在另一优选实施方式中，生物标志物组包含与选自以下物质的代谢物组合使用的HWESASLLR：戊二酰基肉毒碱(C5)；甘油酸盐/酯；苏氨酰基亮氨酸；半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物；次黄嘌呤；缬氨酰基缬氨酸；棕榈酸盐/酯(16:0)；二氢鞘氨醇；肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；高香兰酸硫酸酯盐/酯；亮氨酰基甘氨酸；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；13-HODE与9-HODE的混合物；棕榈酰基乙醇酰胺；乙酰基肉毒碱(C2)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；核黄素(维生素B2)；尿苷；孕烯-二醇二硫酸盐/酯；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；硬脂酸盐/酯(18:0)；羟基丁酰基肉毒碱；赖氨酸；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)；亚油酸盐/酯(18:2n6)；γ-谷氨酰基丙氨酸；亮氨酰基丙氨酸；甘氨酰基脯氨酸；油酸盐/酯(18:1n9)；γ-谷氨酰基赖氨酸；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；琥珀酸盐/酯；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；异亮氨酰基苯丙氨酸；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；水杨酸盐/酯；腺嘌呤；异亮氨酸；甲硫氨酸；6-氧代哌啶-2-甲酸；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；组氨酸；焦磷酸盐/酯(PPi)；肌醇；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；辛二酸盐/酯；甘油；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰乙醇胺；3-脱氢肉毒碱；1-磷酸鞘氨醇；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；1-甲基鸟苷；1-硬脂酰基甘油(18:0)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；二氢阿魏酸；3-甲基戊二酰基肉毒碱(C6)；三甲基胺N氧化物；丙氨酸；尿酸盐/酯；十五烷酸盐/酯(15:0)；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；5α-雄甾烷-3α,17β-二醇单硫酸盐/酯1；富马酸盐/酯；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；异油酸盐/酯(18:1n7)；亮氨酸；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；丙酰基肉毒碱(C3)；3-羟基癸酸盐/酯；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；胡椒碱；3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸盐/酯(CMPF)；2-羟基棕榈酸盐/酯；鸟氨酸；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；N2,N5-二乙酰基鸟氨酸；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；4-雄甾烯-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；牛磺石胆酸3-硫酸酯盐/酯；月桂基肉毒碱(C12)；N-棕榈酰基牛磺酸；L-***；麦角硫因；γ-谷氨酰基谷氨酸盐/酯；月桂酸盐/酯(12:0)；十七酸盐/酯(17:0)；棕榈酰基肉毒碱(C16)；油酰基肉毒碱(C18)；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；缬氨酰基谷氨酰胺；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；丙酮酸盐/酯；癸酸盐/酯(10:0)；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；辛酸盐/酯(8:0)；17-甲基硬脂酸盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；十九烷酸盐/酯(19:0)；十四烷二酸盐/酯(C14)；N-乙酰基肌肽；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；柠檬酸盐/酯；N-乙酰基甘氨酸；十六烷二酸盐/酯(C16)；丙酰基甘氨酸(C3)。

在另一个优选实施方式中，生物标志物组包含与选自以下物质的代谢物组合使用的肌氨酸(N-甲基甘氨酸)：N-油酰基牛磺酸；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；十七酸盐/酯(17:0)；亚油酸盐/酯(18:2n6)；辛二酸盐/酯；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；13-甲基肉豆蔻酸；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；甲硫氨酸；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；十四烷二酸盐/酯(C14)；17-甲基硬脂酸盐/酯；油酸盐/酯(18:1n9)；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；γ-谷氨酰基丙氨酸；γ-谷氨酰基谷氨酸盐/酯；棕榈酰基肉毒碱(C16)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；异亮氨酸；苯基乙酸盐/酯；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；6-氧代哌啶-2-甲酸。

在一个具体实施方式中，生物标志物组包含至少一个选自以下组合的组合：

-γ-谷氨酰基赖氨酸与亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)，

-次黄嘌呤与十四烷二酸盐/酯(C14)，

-γ-谷氨酰基甲硫氨酸与亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)，

-亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)与异亮氨酸，和

-3-[3-(磺氧)苯基]丙酸与肌醇。

在一个实施方式中，生物标志物组包含HWESASLLR、戊二酰基肉毒碱(C5)和甲硫氨酸。

在一个具体实施方式中，与对照样品或参考位点中的浓度水平相比，患病受试者中的HWESASLLR浓度减少约1％至50％，优选约5％至25％，并且更优选约16％。

在一个具体实施方式中，与对照样品或参考位点中的浓度水平相比，患病受试者中的肌氨酸(N-甲基甘氨酸)浓度增加约1％至50％，优选约1％至10％，并且更优选约3％。

在一个具体实施方式中，与对照样品或参考位点中的浓度水平相比，患病受试者中的3-[3-(磺氧)苯基]丙酸浓度减少约1％至50％，优选约5％至25％，并且更优选约10％。

在一个具体实施方式中，与对照样品或参考位点中的浓度水平相比，患病受试者中的亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)浓度增加约1％至50％，优选约1％至10％，并且更优选约5％。

在另一个实施方式中，生物标志物组包含肌氨酸(N-甲基甘氨酸)和HWESASLLR。

在另一个优选实施方式中，生物标志物组由至少两种选自以下物质的化合物构成：肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯。

优选生物标志物组选自包含以下组的组：

-戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR，

-甘油酸盐/酯与HWESASLLR，

-HWESASLLR与苏氨酰基亮氨酸，

-半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物与HWESASLLR，

-HWESASLLR与次黄嘌呤，

-HWESASLLR与缬氨酰基缬氨酸，

-HWESASLLR与棕榈酸盐/酯(16:0)，

-HWESASLLR与二氢鞘氨醇，

-HWESASLLR与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-高香兰酸硫酸酯盐/酯与HWESASLLR，

-HWESASLLR与亮氨酰基甘氨酸，

-二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)与HWESASLLR，

-13-HODE与9-HODE的混合物与HWESASLLR，

-HWESASLLR与棕榈酰基乙醇酰胺，

-乙酰基肉毒碱(C2)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯，

-HWESASLLR与核黄素(维生素B2)，

-HWESASLLR与尿苷，

-HWESASLLR与孕烯-二醇二硫酸盐/酯，

-1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与硬脂酸盐/酯(18:0)，

-HWESASLLR与羟基丁酰基肉毒碱，

-HWESASLLR与赖氨酸，

-二高亚油酸盐/酯(20:2n6)与HWESASLLR，

-二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与亚油酸盐/酯(18:2n6)，

-γ-谷氨酰基丙氨酸与HWESASLLR，

-HWESASLLR与亮氨酰基丙氨酸，

-甘氨酰基脯氨酸与HWESASLLR，

-HWESASLLR与油酸盐/酯(18:1n9)，

-γ-谷氨酰基赖氨酸与HWESASLLR，

-HWESASLLR与亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)，

-HWESASLLR与琥珀酸盐/酯，

-HWESASLLR与亮氨酰基谷氨酸盐/酯，

-HWESASLLR与异亮氨酰基苯丙氨酸，

-HWESASLLR与亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)，

-乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与水杨酸盐/酯，

-腺嘌呤与HWESASLLR，

-HWESASLLR与异亮氨酸，

-HWESASLLR与甲硫氨酸，

-6-氧代哌啶-2-甲酸与HWESASLLR，

-γ-谷氨酰基甲硫氨酸与HWESASLLR，

-组氨酸与HWESASLLR，

-HWESASLLR与焦磷酸盐/酯(PPi)，

-HWESASLLR与肌醇，

-10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与辛二酸盐/酯，

-甘油与HWESASLLR，

-1-二十碳五烯酰基甘油磷酰乙醇胺与HWESASLLR，

-3-脱氢肉毒碱与HWESASLLR，

-HWESASLLR与1-磷酸鞘氨醇，

-5α-雄甾烷-3，17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)与HWESASLLR，

-二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)与HWESASLLR，

-N-油酰基牛磺酸与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-1-甲基鸟苷与HWESASLLR，

-1-硬脂酰基甘油(18:0)与HWESASLLR，

-二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)与HWESASLLR，

-二氢阿魏酸与HWESASLLR，

-3-甲基戊二酰基肉毒碱(C6)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与三甲基胺N氧化物，

-丙氨酸与HWESASLLR，

-HWESASLLR与尿酸盐/酯，

-HWESASLLR与十五烷酸盐/酯(15:0)，

-10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)与HWESASLLR，

-5α-雄甾烷-3α,17β-二醇单硫酸盐/酯1与HWESASLLR，

-富马酸盐/酯与HWESASLLR，

-二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与棕榈油酸盐/酯(16:1n7)，

-HWESASLLR与异油酸盐/酯(18:1n7)，

-HWESASLLR与亮氨酸，

-HWESASLLR与甲基棕榈酸盐/酯(15或2)，

-HWESASLLR与丙酰基肉毒碱(C3)，

-3-羟基癸酸盐/酯与HWESASLLR，

-3-[3-(磺氧)苯基]丙酸与HWESASLLR，

-HWESASLLR与胡椒碱，

-3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸盐/酯(CMPF)与HWESASLLR，

-2-羟基棕榈酸盐/酯与HWESASLLR，

-HWESASLLR与鸟氨酸，

-3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与N2,N5-二乙酰基鸟氨酸，

-HWESASLLR与肉豆蔻酸盐/酯(14:0)，

-4-雄甾烯-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2与HWESASLLR，

-HWESASLLR与牛磺石胆酸3-硫酸酯盐/酯，

-HWESASLLR与月桂基肉毒碱(C12)，

-HWESASLLR与N-棕榈酰基牛磺酸，

-HWESASLLR与L-***，

-麦角硫因与HWESASLLR，

-γ-谷氨酰基谷氨酸盐/酯与HWESASLLR，

-HWESASLLR与月桂酸盐/酯(12:0)，

-HWESASLLR与十七酸盐/酯(17:0)，

-HWESASLLR与棕榈酰基肉毒碱(C16)，

-HWESASLLR与油酰基肉毒碱(C18)，

-5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2与HWESASLLR，

-HWESASLLR与缬氨酰基谷氨酰胺，

-5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与丙酮酸盐/酯，

-癸酸盐/酯(10:0)与HWESASLLR，

-2-羟基丁酸盐/酯(AHB)与HWESASLLR，

-辛酸盐/酯(8:0)与HWESASLLR，

-17-甲基硬脂酸盐/酯与HWESASLLR，

-HWESASLLR与苯基乙酸盐/酯，

-肾上腺酸盐/酯(22:4n6)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与十九烷酸盐/酯(19:0)，

-HWESASLLR与十四烷二酸盐/酯(C14)，

-HWESASLLR与N-乙酰基肌肽，

-HWESASLLR与甲基-β-吡喃葡萄糖苷，

-柠檬酸盐/酯与HWESASLLR，

-HWESASLLR与N-乙酰基甘氨酸，

-十六烷二酸盐/酯(C16)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与丙酰基甘氨酸(C3)，

-γ-谷氨酰基甲硫氨酸与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-γ-谷氨酰基赖氨酸与亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)，

-十七酸盐/酯(17:0)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-亚油酸盐/酯(18:2n6)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-γ-谷氨酰基甲硫氨酸与亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)，

-肌氨酸(N-甲基甘氨酸)与辛二酸盐/酯，

-次黄嘌呤与十四烷二酸盐/酯(C14)，

-10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-13-甲基肉豆蔻酸与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-甲硫氨酸与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-肌氨酸(N-甲基甘氨酸)与十四烷二酸盐/酯(C14)，

-17-甲基硬脂酸盐/酯与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-油酸盐/酯(18:1n9)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-二高亚油酸盐/酯(20:2n6)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-甲基棕榈酸盐/酯(15或2)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)与异亮氨酸，

-γ-谷氨酰基丙氨酸与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-γ-谷氨酰基谷氨酸盐/酯与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-棕榈酰基肉毒碱(C16)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-棕榈油酸盐/酯(16:1n7)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-异亮氨酸与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-3-[3-(磺氧)苯基]丙酸与肌醇，

-苯基乙酸盐/酯与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-肾上腺酸盐/酯(22:4n6)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-6-氧代哌啶-2-甲酸与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR与苯丙氨酰基丙氨酸，

-戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR与异亮氨酰基亮氨酸，

-戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR与肉豆蔻酰基肉毒碱，

-戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR与十八烷二酸盐/酯(C18)，

-肉毒碱与戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR，

-天冬酰胺酰基亮氨酸与戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR，

-3-羟基辛酸盐/酯与戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR，

-戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR与牛磺酸，

-5-羟基吲哚乙酸盐/酯与戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR，

-3-羟基癸二酸盐/酯与戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR，

-3-羟基癸二酸盐/酯与半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物与HWESASLLR，

-HWESASLLR与肉豆蔻酰基肉毒碱与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物与HWESASLLR与异亮氨酰基亮氨酸，

-半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物与HWESASLLR与牛磺酸，

-天冬酰胺酰基亮氨酸与半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物与HWESASLLR，

-3-甲基-2-氧代丁酸盐/酯与HWESASLLR与二氢鞘氨醇，

-半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物与HWESASLLR与十八烷二酸盐/酯(C18)，

-HWESASLLR与苯丙氨酰基丙氨酸与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-3-甲基-2-氧代丁酸盐/酯与HWESASLLR与苏氨酰基亮氨酸，

-3-羟基辛酸盐/酯与HWESASLLR与苏氨酰基亮氨酸，

-5-羟基吲哚乙酸盐/酯与HWESASLLR与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-肉毒碱与HWESASLLR与苏氨酰基亮氨酸，

-3-甲基-2-氧代丁酸盐/酯与4-甲基儿茶酚硫酸盐/酯与HWESASLLR，和

-13-甲基肉豆蔻酸与4-甲基儿茶酚硫酸盐/酯与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)。

主要的脂肪酸酰胺(PFAM)代表有价值的生物标志物，其包含PFAM(22:1)、PFAM(20:1)和PFAM(22:2)。这些PFAM具有式NH₂-CO-R，其中R i)在PFAM(20:1)的情形下为具有一个顺式或反式双键并且具有19个碳原子的烯烃，或ii)在PFAM(22:1)的情形下为具有一个顺式或反式双键并且具有21个碳原子的烯烃，或iii)在PFAM(22:2)的情形下为具有独立地为顺式或反式的两个双键并且具有21个碳原子的烯烃。PFAM(20:1)表示一种单一异构体或PFAM(20:1)异构体的混合物，PFAM(22:1)表示一种单一异构体或PFAM(22:1)异构体的混合物，并且PFAM(22:2)表示一种单一异构体或PFAM(22:2)异构体的混合物。

在一个具体实施方式中，将上文公开的生物标志物或其组与一种或多种选自以下物质的代谢物组合：PFAM(22:1)、PFAM(20:1)、PFAM(22:2)、马尿酸盐/酯、酪氨酸、色氨酸、十一烷二酸盐/酯、异戊酸盐/酯(C5)、1-棕榈酰基甘油(16:0)、十二烷二酸盐/酯(C12)、癸二酸盐/酯和肌苷。

因此，在一个具体实施方式中，生物标志物组选自：

-HWESASLLR与PFAM(22:1)，

-HWESASLLR与PFAM(20:1)，

-HWESASLLR与PFAM(22:2)，

-肌氨酸(N-甲基甘氨酸)与PFAM(22:1)，

-肌氨酸(N-甲基甘氨酸)与PFAM(20:1)，

-肌氨酸(N-甲基甘氨酸)与PFAM(22:2)，

-亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)与PFAM(22:1)，

-亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)与PFAM(20:1)，

-亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)与PFAM(22:2)，

-3-[3-(磺氧)苯基]丙酸与PFAM(22:1)，

-3-[3-(磺氧)苯基]丙酸与PFAM(20:1)，

-3-[3-(磺氧)苯基]丙酸与PFAM(22:2)，

-HWESASLLR与肌苷，

-HWESASLLR与色氨酸，

-HWESASLLR与酪氨酸，

-马尿酸盐/酯与HWESASLLR，

-HWESASLLR与异戊酸盐/酯(C5)，

-1-棕榈酰基甘油(16:0)与HWESASLLR，

-十二烷二酸盐/酯(C12)与HWESASLLR，

-戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR与癸二酸盐/酯，

-戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR与十一烷二酸盐/酯，

-半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物与HWESASLLR与癸二酸盐/酯，

-HWESASLLR与苏氨酰基亮氨酸与十一烷二酸盐/酯，

-HWESASLLR与N-乙酰基色氨酸与色氨酸，

-HWESASLLR与N-乙酰基色氨酸与酪氨酸，

-C-糖基色氨酸与HWESASLLR与肌苷，

-3-羟基马尿酸盐/酯与HWESASLLR与肌苷，

-HWESASLLR与肌苷与N-乙酰基酪氨酸，

-C-糖基色氨酸与HWESASLLR与色氨酸，

-4-羟基马尿酸盐/酯与HWESASLLR与肌苷，

-HWESASLLR与N-乙酰基酪氨酸与色氨酸，

-4-羟基马尿酸盐/酯与HWESASLLR与癸二酸盐/酯，和

-1-棕榈酰基甘油(16:0)+3-羟基马尿酸盐/酯+HWESASLLR。

在一个具体实施方式中，诊断AD和相关病症包括在来自哺乳动物样品的LC/MS或GC/MS质量分布中识别确定为特异于AD或相关病症的代谢物质量分布，所述分布由2、3、4或5个对应于表1和表2中识别的代谢物的主要离子的质量峰构成。

在一个具体实施方式中，上述生物标志物或其组合中的任一种与用于AD或相关病症的至少一种其它诊断测试或生物标志物结合用于诊断AD或相关病症的方法中，所述其它诊断测试或生物标志物优选选自核酸、蛋白质、代谢物、神经生理学(例如脑电图学)、遗传、脑成像、临床和认知测试或生物标志物。这些诊断测试或生物标志物可以在测量本发明生物标志物的同时、之前或之后进行或测量。所述其它诊断生物标志物可以在便于分析的任何样品中检测。

可以用于诊断AD或相关病症的所述其它蛋白质生物标志物可以选自WO2011/012672中列出的蛋白质。作为本领域中已知辅助诊断AD的蛋白质生物标志物的其它候选物为Aβ₄₂、Tau或P-Tau₁₈₁，其可以根据LCR来给予。注意到AD患者的LCR中Aβ₄₂减少以及Tau和P-Tau₁₈₁增加。在讨论血浆生物标志物时，Aβ肽的有效性至少是有争议的[17]，但Aβ₄₂/Aβ₄₀比率似乎在某种程度上有用，因为低Aβ₄₂/Aβ₄₀血浆比率已经与更快速的认知下降风险相关[17]。

因此，在一个实施方式中，本发明生物标志物的任一种或其组合与在LCR中测定Aβ₄₂、Tau和/或P-Tau₁₈₁的手段结合用于诊断AD或相关病症的方法中。

在另一个实施方式中，本发明生物标志物或其组合中的任一种与测量血浆Aβ₄₂/Aβ₄₀比率结合用于诊断AD或相关病症或快速认知下降的风险的方法中。

可以与本发明生物标志物中的任一种结合实施的脑成像测试可以为例如：

-通过成像方法(如正电子发射断层摄影术)进行的脑中Aβ沉积和/或纤丝状Aβ负荷或其沉积模式的检测和定量测试，可以指示AD或AD进展，

-形态学脑成像，例如测量海马的体积，其可以指示AD或AD进展。

在一个更具体实施方式中，使用本发明的生物标志物诊断识别为具有产生AD的风险或怀疑罹患前驱期AD的患者的AD或相关病症。例如，据诊断这种患者可能具有ApoE的ApoEε4等位基因。

本发明的生物标志物还可以用于其它任何认知测试中来评估患者的认知状况。这些测试为例如小型精神状态检查(MMSE)、改进的小型精神状态检查(3MS)、简化的精神测试评分(AMTS)、精神发育迟缓者的痴呆调查问卷(DMR)、认知能力筛选仪器(CASI)、连线测试、画钟测试、阿茲海默氏病评估量表-认知(ADAS-Cog)、全科医师认知评估(GPCOG)、蒙特利尔认知评估(MoCA)或罗兰通用痴呆评估量表(Rowland Universal Dementia AssessmentScale；RUDAS)。

在一个优选实施方式中，将本发明生物标志物中的任一种与MMSE结合使用。

在另一个优选实施方式中，使用本发明的生物标志物诊断因为患者在MMSE中获得的结果而识别为具有产生AD的风险或怀疑罹患前驱期AD的患者的AD或相关病症。如上文所指出，MMSE评分受受试者的年龄和文化水平的影响。因此，这些评分必须在其解释前根据这些标准校正。作为指示依据，根据建立阿茲海默氏病登记协会(CERAD)，包含在19与24之间的评分与轻度痴呆相关，10与18之间的评分与中度痴呆相关，并且最后低于10的评分对应于严重痴呆。

本发明的另一方面涉及一种或多种选自本文公开的生物标志物的生物标志物在于哺乳动物受试者中进行AD诊断的方法中的用途。

本发明方法适用于待测试的哺乳动物的任何生物样品。这些样品的实例包括血液、血浆、血清、唾液、尿液、腹水、痰液、气雾、汗液等。由其获得的代谢物的水平还可以由组织活检物或粪便测量。样品可以通过本领域中自身已知的任何技术获得，例如通过使用例如非侵入性技术收集来获得，或从样品的集合或组等获得。可以将样品另外进行预处理来促进目标生物标志物的可及性、允许通过专用方法给予所述生物标志物(例如将氨基酸衍生化来允许通过分光光度测定法进行其后续给予)或富集目标生物标志物，例如通过裂解(机械、化学、酶法等)、纯化、提取、离心、分离、沉淀等。可以如实验部分中所示从血液进行血清制备。可以使用数种其它样品制法，如液液提取、蛋白质沉淀和固相提取[18]。

在一个优选实施方式中，从血液、血浆、血清、唾液或尿液样品测定本发明生物标志物的水平。

在另一个实施方式中，可以从来自同一个哺乳动物的不同样品定量生物标志物。

本发明适用于任何哺乳动物，优选人类。

在一个实施方式中，所述人类在与相同年龄和文化水平的人相比时尚未罹患严重认知障碍。

在另一个实施方式中，所述人类在脑中呈现Aβ聚集物沉积或纤丝状Aβ负荷，其与认知障碍相关或不相关。

已知患有唐氏综合征(Down's syndrome)的患者展现极高的早发型AD的发病率[19]。因此，在另一个实施方式中，所述人类罹患唐氏综合征。

所述生物标志物的水平可以通过本领域中自身已知的任何方法测定，如(但不限于)免疫学方法、生化法、色谱法、酶法、基于细胞的分析、体外测试、LC/MS、GC/MS等。这些分析在本领域中是常规并且众所周知的。可以将测定的生物标志物的水平与参考值、对照或平均值相比，其中与所述值的偏差指示AD或相关病症的存在、风险、进展和/或严重性。偏差通常应该超过1％，优选超过2％，更优选超过2.5％，甚至更优选超过5％。在其它实施方式中，偏差可以为约10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。

在另一个实施方式中，定量了与同一代谢途径有关的除本发明生物标志物以外的其它代谢物的差异存在。

另一方面，本发明提供一种包含固体载体的试剂盒，所述固体载体包含至少一种与其连接的捕获试剂，其中所述至少一种捕获试剂与本发明的一种生物标志物结合或反应。通常，试剂盒可以包含数种结合于不同生物标志物的不同捕获试剂。至少一种结合剂优选对生物标志物具有选择性，如抗体或其衍生物、适体等。

在一个优选实施方式中，本发明的试剂盒包含固体载体，所述固体载体包含至少一种与其连接的捕获试剂(例如抗体或适体)，其中捕获试剂与来自本文公开的生物标志物中的一种生物标志物结合或反应。在一个优选实施方式中，本发明的试剂盒包含至少一种与至少一种如下生物标志物结合或反应的化合物，所述生物标志物选自本文公开的用于诊断、预后和/或用于评估治疗功效或追踪AD或相关病症的发展的生物标志物。

除用于分析本发明生物标志物的LC/MS方法以外，还存在如下文以说明方式论述的其它分析。

氨基酸(或其衍生物)定量

HPLC-分光光度测定法测定全氨基酸谱

氨基酸血液测试是本领域中众所周知的。其例如常用于测定儿童的氨基酸谱以便诊断氨基酸病。

HPLC/分光光度测定法为用于从生物流体立即分析全氨基酸(或其衍生物)的最常用方法。其更经常是自动的。氨基酸需要被衍生成可通过吸光分光光度测定法检测。衍生可以在HPLC氨基酸分离之前或之后进行。

衍生在于使氨基酸共价连接于发色部分，从而使修饰的氨基酸容易被UV、可见光或荧光测定分光光度测定法检测。衍生可以用以下物质进行，例如：硫氰酸苯盐/酯(PTC，UV分光光度测定法)、邻苯二甲醛(OPA；UV或荧光测定分光光度测定法)、二甲基氨基-1-萘砜YL(DANSYL；可见光分光光度测定法)或9-芴基甲氧基羰基(FMOC；荧光测定分光光度测定法)。

使用OPA衍生定量氨基酸的方案广泛描述于Babu等人[20]中。

还出售用于进行HPLC分析来测量人类流体中的氨基酸数量的商购试剂盒，例如购自Eagle biosciences的“Phenylalanine,Tyrosine&Tryptophan HPLC Assay”(目录号：PNL31-H100)。

专用于定量特定氨基酸的试剂盒

本发明的氨基酸生物标志物还可以从生物样品使用现成的专用检测和定量试剂盒特定地定量。

天冬氨酸可以使用例如“天冬氨酸盐/酯分析试剂盒”(Biovision，ref K552-100)来分析，其为一种基于天冬氨酸盐/酯酶法转化为丙酮酸盐/酯的酶法比色分析。L-色氨酸可以使用“L-色氨酸荧光分析”(Mediomics)测量，其基于色氨酸阻抑蛋白的活性并且可以检测例如人类尿液或血清中的色氨酸。

脂肪酸检测和定量

本发明的脂肪酸和相关化合物(即十二烷二酸；癸二酸；壬二酸、己酸、十一烷二酸、9,12-二氧代-十二烷酸、壬烯二酸、十八碳二烯酰基-甘油基-3-磷酸盐/酯)还可以通过本领域人士众所周知的HPLC(Lima和Abdalla,2002和Chen和Chuang,2002评述)[21,22]或GC方法(参见例如Bondia-Pons等人,2004[23])识别。这些方法通常需要如脂质提取、纯化和衍生的样品制备步骤；依据已经使用的衍生方法而定，所述步骤可以与不同检测和定量方法偶合或不偶合。可以容易地发现参考化合物来允许正确地识别搜寻的脂肪酸。

基于免疫学和适体的方法

免疫学方法为使用抗体来特异性结合抗原(例如生物标志物、其片段和衍生物)的方法。免疫学方法特别用于分离、靶向和/或定量抗原。例如，免疫学方法包括(但不限于)使用如下技术的竞争性和非竞争性分析***，如：western印迹法、放射免疫分析、ELISA、“夹心”免疫分析、免疫沉淀分析、免疫扩散分析、荧光免疫分析。

抗体指基本上由一个或多个免疫球蛋白基因编码的多肽配位体或其片段，其特异性结合并且识别表位(例如抗原)。如本文使用的术语“抗体”还包括通过修饰完整抗体产生的抗体片段或使用重组DNA方法重新合成的抗体片段。其还包括多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人类化抗体或单链抗体。

用于分析本发明代谢物的检测方法可以使用特异性结合于所搜寻代谢物的适体。适体为以高特异性和亲和力识别配位体的合成ssDNA或RNA分子；在无免疫原性或具有低免疫原性的代谢物的情形下，其可以代表抗体的有价值备选物。其可以用于分析任何种类的代谢物，并且其特异性允许区分紧密相关的分子。其可以通过本领域中众所周知[24]或选自商购文库(例如Aptagen的商购文库(www.aptagen.com))的selex技术和其变化形式容易地合成。检测或定量用与用于众所周知的免疫学方法或专用方法[25]略相同的方式进行。

本发明的其它方面和优点将在以下实验部分中公开，其仅应被认为是说明性的。

实施例

A)代谢物组分析

1.样品制备

1.1.人血浆样品

收集来自28位健康的对照受试者和28位阿茲海默氏病(AD)患者的血浆(表3)。AD样品来自记忆研究资源中心神经科(Department of Neurology,Memory ResearchResources Center)(Montpellier University Hospital Gui de Chauliac,法国)，并且年龄匹配的对照的血浆样品由公共卫生流行病与发展研究所(Institut de SantéPublique d'Epidémiologie et de Développement)(ISPED,University of Bordeaux,法国)收集。

表3

数据	AD(n＝28)	CTRL(n＝28)
			性别(F/M)	13/15	20/8
年龄	76.81和/-5.78	78.88和/-1.93
			MMSE	18和/-4.26	N/A

1.2.样品加工

在室温下解冻深冻样品，用甲醇进行蛋白质沉淀步骤来在最大程度地回收小分子的同时去除蛋白质。将所得提取物分成四部分；两个用于通过LC分析，一个用于通过GC分析，并且一个备用。将样品短暂地置于(Zymark)上来去除有机溶剂。在真空下干燥各样品。接着制备用于适当仪器，即LC/MS或GC/MS的样品。以随机方式操作样品。

2.获得代谢谱

2.1.LC-MS/MS

在Waters ACQUITY超高效液相色谱(UPLC)和由加热的电喷雾电离(HESI)源和Orbitrap质量分析器组成的在30,000质量分辨率下操作的ThermoFisher ScientificOrbitrap Elite高分辨率/准确性质谱仪上进行LC/MS。干燥样品提取物，接着在酸性或碱性LC相容溶剂中重新溶解，所述溶剂各自含有固定浓度的8种或超过8种注射标准物来确保注射和色谱一致性。在两次独立的注射中使用单独的专用柱，使用酸性阳离子优化条件分析一个等分试样，并且使用碱性阴离子优化条件分析另一个等分试样。使用水和含有0.1％甲酸的甲醇梯度洗脱在酸性条件下重新溶解的提取物，而也使用水/甲醇的碱性提取物含有6.5mM碳酸氢铵。MS分析在MS与数据相关的MS2扫描之间使用动态排除交替进行。

2.2.GC/MS.

将送往GC/MS分析的样品在真空干燥下再干燥至少24小时，接着在干氮气下使用双三甲基-甲硅烷基-三氟乙酰胺(BSTFA)衍生。GC柱为5％苯基柱，并且温度在16分钟内从40℃匀变为300℃。在Thermo-Finnigan Trace DSQ快速扫描单一四极质谱仪上使用电子碰撞电离分析样品。每天针对质量分辨率和质量准确性对仪器进行调节和校准。

3.LC/MS和/或GC/MS原始数据处理

通过原始质谱数据文件的数据提取获得载入关系数据库中的信息。在检查了数据库中的信息后施加适当的QC极限，并且识别到峰。

4.生物标志物识别

通过与纯化的标准物的文库条目或再现的未知实体比较来根据各信号的质谱m/z进行原始变量的注解。色谱特性与质谱的组合指示与特定化合物或同重元素实体的匹配性。其它实体可以通过其再现性质识别(色谱和质谱两者)。进行各种治疗程序以便确保可以获得高质量的数据集来用于统计分析和数据解释。QC和治疗方法被设计成确保准确并一致地识别真实化学实体，并且去除代表***人为因素、错误分配和背景噪声的实体。

B)结果分析-识别目标生物标志物

1.识别判别阿茲海默氏病与对照样品的代谢物

1.1一般原理

使用R 3.1.2版进行统计分析。对代谢变量进行对数变换(log10)以便控制方差和用于正态目的。进行双尾统计测试，其显著性水平为5％。

1.2AD与对照样品之间的代谢物水平比较

为了识别判别AD与对照组的代谢物，使用线性模型(lm()R函数)计算AD与对照组之间的差异水平的p值，该线性模型针对通过质量控制处理的866个变量(y_i)中的每一个关于年龄和性别协变量进行调节：

y_i～状况和年龄和性别。

分析显示AD患者和对照受试者的血浆样品之间有220种代谢物(下表4)显著不同。通过与标准化学品比较确定地识别这些代谢物中的129种，而有11种仅根据公共数据库进行了注解(参看表2)。

1.3识别的代谢物的分类性能

基于用来避免过度拟合的线性-判别-分析(LDA)重复随机二次取样验证(caret R程序包[26])用AUC、敏感性和特异性来评价来自单个变量或变量的组合的分类模型。

使用部分最小二乘方判别分析(PLS-DA)来进行监督分类，其中最具判别能力的变量通过产生VIP评分的能力确定[27](DiscriMiner R程序包)。这些VIP评分估算了各预测变量的重要性，并且常用于选择在所给输出响应中最具影响力的这些预测物[28,29]。认为VIP评分接近1或大于1的变量在所给模型中是重要的[28,30]。

测定了本发明生物标志物的VIP评分并且在表4中示出。

表4

阴影区域将VIP评分>1的代谢物归类。

1.4本发明的生物标志物组允许准确并有效地诊断AD和相关病症。

生物标志物或生物标志物组目前以其AUC、敏感性和特异性表征。AUC通过呈现诊断和疾病状态的一致性来提供关于所给生物标志物的效率的全局观点。AUC值在0.5(不能判别)至1.0(充分判别)范围内。敏感性为真实地患有疾病的受试者中正确地归为患有疾病的受试者的比例。类似地，特异性为真实地未患疾病的所有受试者中正确地归为未患疾病的受试者的比例。

为了识别用于诊断AD和相关病症的有效分类物(生物标志物或生物标志物组)，进行线性判别分析[31]。以1000次再取样迭代的平均值形式计算AUC、敏感性和特异性。对于每次迭代，使用2/3的样品训练分类物，使用剩余1/3测试分类物并且提供AUC、敏感性和特异性估算值。

在所有识别的单一生物标志物中，13种明显突出，展现VIP>1，p值<0.001并且敏感性>80％(表5)。

表5

尽管本发明的生物标志物在单独使用时特别有效地用于诊断AD和相关病症，但使用至少两种生物标志物的组来提高诊断测试的敏感性和/或特异性备受关注。

本发明者能够选择数个具有极令人满意的敏感性和特异性的本发明生物标志物组，其在表6中列出。值得注意的是，所有这些组都展现超过80％的敏感性和特异性。所有这些组都展现高于0.84的AUC。

表6

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31 McLachlan GJ(2004)Discriminant Analysis and Statistical PatternRecognition(J.Wiley,ed.)Wiley Interscience.

Claims

1.一种在受试者中诊断选自以下疾病的神经疾病的体外方法：阿茲海默氏病(AD)、AD型老年痴呆(SDAT)、前驱期AD、轻度认知障碍(MCI)、年龄相关的记忆障碍(AAMI)、血管性痴呆或额颞叶痴呆(FTD)，所述方法包括测定来自所述受试者的血液、血清和/或血浆的样品中一种或多种选自以下物质的生物标志物的存在、数量、频率或形式：亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱；月桂酸盐/酯(12:0)；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；赖氨酸；3-羟基癸酸盐/酯；棕榈酸盐/酯(16:0)；3-羟基马尿酸盐/酯；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；乙酰基肉毒碱(C2)；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；十五烷酸盐/酯(15:0)；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；肉豆蔻酰基肉毒碱；亚油酸盐/酯(18:2n6)；1-硬脂酰基甘油(18:0)；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；油酸盐/酯(18:1n9)；13-甲基肉豆蔻酸；十九烷酸盐/酯(19:0)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；17-甲基硬脂酸盐/酯；异油酸盐/酯(18:1n7)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)；腺嘌呤；3-羟基癸二酸盐/酯；N-乙酰基酪氨酸；十八烷二酸盐/酯(C18)；异亮氨酰基亮氨酸；麦角硫因；N-乙酰基甘氨酸；辛酸盐/酯(8:0)；柠檬酸盐/酯；N-乙酰基色氨酸；棕榈酰基乙醇酰胺；组氨酸；天冬酰胺酰基亮氨酸；4-甲基儿茶酚硫酸盐/酯；辛二酸盐/酯；甲硫氨酸；半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物；6-氧代哌啶-2-甲酸；戊二酰基肉毒碱(C5)；牛磺石胆酸3-硫酸酯盐/酯；鸟氨酸；棕榈酰基肉毒碱(C16)；5α-雄甾烷-3α,17β-二醇单硫酸盐/酯1；丙酮酸盐/酯；尿酸盐/酯；1-甲基鸟苷；C-糖基色氨酸；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰乙醇胺；3-羟基辛酸盐/酯；油酰基肉毒碱(C18)；1-磷酸鞘氨醇；苯丙氨酰基丙氨酸；丙氨酸；3-甲基戊二酰基肉毒碱(C6)；N-乙酰基肌肽；异亮氨酸；二氢阿魏酸；高香兰酸硫酸酯盐/酯；尿苷；4-羟基马尿酸盐/酯；亮氨酸；甘氨酰基脯氨酸；三甲基胺N氧化物；月桂基肉毒碱(C12)；丙酰基甘氨酸(C3)；丙酰基肉毒碱(C3)；富马酸盐/酯；L-***；甘油酸盐/酯；γ-谷氨酰基赖氨酸；肌醇；孕烯-二醇二硫酸盐/酯；5-羟基吲哚乙酸盐/酯；2-羟基棕榈酸盐/酯；3-甲基-2-氧代丁酸盐/酯；N2,N5-二乙酰基鸟氨酸；4-雄甾烯-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；牛磺酸；缬氨酰基缬氨酸；γ-谷氨酰基谷氨酸盐/酯；3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸盐/酯(CMPF)；肉毒碱；水杨酸盐/酯；琥珀酸盐/酯；异亮氨酰基苯丙氨酸；核黄素(维生素B2)；焦磷酸盐/酯(PPi)，其中与对照相比所述一种或多种生物标志物的存在、数量、频率或形式的变化指示所述疾病的存在、风险、亚型、进展或严重性。

2.根据权利要求1所述的体外方法，其中所述一种或多种生物标志物选自：亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱；月桂酸盐/酯(12:0)；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；赖氨酸；3-羟基癸酸盐/酯；棕榈酸盐/酯(16:0)；3-羟基马尿酸盐/酯；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；乙酰基肉毒碱(C2)；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；十五烷酸盐/酯(15:0)；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；肉豆蔻酰基肉毒碱；亚油酸盐/酯(18:2n6)；1-硬脂酰基甘油(18:0)；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；油酸盐/酯(18:1n9)；13-甲基肉豆蔻酸；十九烷酸盐/酯(19:0)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；17-甲基硬脂酸盐/酯；异油酸盐/酯(18:1n7)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)。

3.根据权利要求1所述的体外方法，所述方法包括测定来自所述受试者的血液、血清和/或血浆的样品中以下物质的存在、数量、频率或形式：(i)一种或多种选自HWESASLLR和肌氨酸(N-甲基甘氨酸)的生物标志物，和(ii)一种或多种选自以下物质的不同的生物标志物：亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)；肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；HWESASLLR；3-[3-(磺氧)苯基]丙酸；亮氨酰基甘氨酸；十四烷二酸盐/酯(C14)；3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)；十六烷二酸盐/酯(C16)；3-脱氢肉毒碱；癸酸盐/酯(10:0)；苏氨酰基亮氨酸；亮氨酰基谷氨酸盐/酯；亮氨酰基丙氨酸；N-油酰基牛磺酸；2-羟基丁酸盐/酯(AHB)；13-HODE与9-HODE的混合物；二氢鞘氨醇；次黄嘌呤；乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)；牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯；苯基乙酸盐/酯；肉豆蔻酸盐/酯(14:0)；十七酸盐/酯(17:0)；缬氨酰基谷氨酰胺；硬脂酸盐/酯(18:0)；N-棕榈酰基牛磺酸；羟基丁酰基肉毒碱；甘油；γ-谷氨酰基丙氨酸；胡椒碱；月桂酸盐/酯(12:0)；10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)；二高亚油酸盐/酯(20:2n6)；二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)；赖氨酸；3-羟基癸酸盐/酯；棕榈酸盐/酯(16:0)；3-羟基马尿酸盐/酯；5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)；乙酰基肉毒碱(C2)；5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2；甲基-β-吡喃葡萄糖苷；1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)；二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)；γ-谷氨酰基甲硫氨酸；甲基棕榈酸盐/酯(15或2)；十五烷酸盐/酯(15:0)；二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)；肉豆蔻酰基肉毒碱；亚油酸盐/酯(18:2n6)；1-硬脂酰基甘油(18:0)；肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)；油酸盐/酯(18:1n9)；13-甲基肉豆蔻酸；十九烷酸盐/酯(19:0)；10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)；5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)；17-甲基硬脂酸盐/酯；异油酸盐/酯(18:1n7)；棕榈油酸盐/酯(16:1n7)；肾上腺酸盐/酯(22:4n6)；亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)；二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)；二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)，其中所述存在、数量、频率或形式的变化指示所述疾病的存在、风险、亚型、进展或严重性。

4.根据权利要求1所述的体外方法，其中所述一种或多种生物标志物包含由至少两种生物标志物构成的组，所述生物标志物选自：亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)、肌氨酸(N-甲基甘氨酸)、HWESASLLR、3-[3-(磺氧)苯基]丙酸、亮氨酰基甘氨酸、十四烷二酸盐/酯(C14)、3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)、十六烷二酸盐/酯(C16)、3-脱氢肉毒碱、癸酸盐/酯(10:0)、苏氨酰基亮氨酸和亮氨酰基谷氨酸盐/酯。

5.根据权利要求1所述的体外方法，其中所述生物标志物选自：亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)、肌氨酸(N-甲基甘氨酸)、HWESASLLR和3-[3-(磺氧)苯基]丙酸。

6.根据权利要求1所述的体外方法，其中所述一种或多种生物标志物中的至少一种为肌氨酸(N-甲基甘氨酸)。

7.根据权利要求1所述的体外方法，其中所述一种或多种生物标志物中的至少一种为HWESASLLR。

8.根据权利要求1所述的体外方法，其中所述一种或多种生物标志物中的至少一种为亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)。

9.根据权利要求1所述的体外方法，其中所述一种或多种生物标志物中的至少一种为3-[3-(磺氧)苯基]丙酸。

10.根据前述权利要求中任一项所述的体外方法，其还包括同时或依序测定至少一种其它生物标志物或诊断测试的数量、频率或形式的变化。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述至少一种其它诊断测试或生物标志物选自核酸、蛋白质、代谢物、神经生理学、遗传、脑成像、临床和认知测试或标志物。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述代谢物选自PFAM(20:1)、PFAM(22:1)、PFAM(22:2)、马尿酸盐/酯、酪氨酸、色氨酸、十一烷二酸盐/酯、异戊酸盐/酯(C5)、1-棕榈酰基甘油(16:0)、十二烷二酸盐/酯(C12)、癸二酸盐/酯和肌苷。

13.根据前述权利要求中任一项所述的体外方法，其包括同时或依序测定选自以下的生物标志物组的数量、频率或形式的变化的存在：

-亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)与PFAM(22:1)，

-亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)与PFAM(20:1)，

-亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)与PFAM(22:2)，

-戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR，

-甘油酸盐/酯与HWESASLLR，

-HWESASLLR与苏氨酰基亮氨酸，

-半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物与HWESASLLR，

-HWESASLLR与次黄嘌呤，

-HWESASLLR与缬氨酰基缬氨酸，

-HWESASLLR与棕榈酸盐/酯(16:0)，

-HWESASLLR与二氢鞘氨醇，

-HWESASLLR与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-高香兰酸硫酸酯盐/酯与HWESASLLR，

-HWESASLLR与亮氨酰基甘氨酸，

-二十二碳三烯酸盐/酯(22:3n3)与HWESASLLR，

-13-HODE与9-HODE的混合物与HWESASLLR，

-HWESASLLR与棕榈酰基乙醇酰胺，

-乙酰基肉毒碱(C2)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与牛磺胆烯酸硫酸酯盐/酯，

-HWESASLLR与核黄素(维生素B2)，

-HWESASLLR与尿苷，

-HWESASLLR与孕烯-二醇二硫酸盐/酯，

-1-二十碳五烯酰基甘油磷酰胆碱(20:5n3)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与硬脂酸盐/酯(18:0)，

-HWESASLLR与羟基丁酰基肉毒碱，

-HWESASLLR与赖氨酸，

-二高亚油酸盐/酯(20:2n6)与HWESASLLR，

-二高亚麻酸盐/酯(20:3n3或3n6)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与亚油酸盐/酯(18:2n6)，

-γ-谷氨酰基丙氨酸与HWESASLLR，

-HWESASLLR与亮氨酰基丙氨酸，

-甘氨酰基脯氨酸与HWESASLLR，

-HWESASLLR与油酸盐/酯(18:1n9)，

-γ-谷氨酰基赖氨酸与HWESASLLR，

-HWESASLLR与亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)，

-HWESASLLR与琥珀酸盐/酯，

-HWESASLLR与亮氨酰基谷氨酸盐/酯，

-HWESASLLR与异亮氨酰基苯丙氨酸，

-HWESASLLR与亚麻酸盐/酯(18:3n3或3n6)，

-乙醇酸盐/酯(羟基乙酸盐/酯)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与水杨酸盐/酯，

-腺嘌呤与HWESASLLR，

-HWESASLLR与异亮氨酸，

-HWESASLLR与甲硫氨酸，

-6-氧代哌啶-2-甲酸与HWESASLLR，

-γ-谷氨酰基甲硫氨酸与HWESASLLR，

-组氨酸与HWESASLLR，

-HWESASLLR与焦磷酸盐/酯(PPi)，

-HWESASLLR与肌醇，

-10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与辛二酸盐/酯，

-甘油与HWESASLLR，

-1-二十碳五烯酰基甘油磷酰乙醇胺与HWESASLLR，

-3-脱氢肉毒碱与HWESASLLR，

-HWESASLLR与1-磷酸鞘氨醇，

-5α-雄甾烷-3,17-二醇单硫酸盐/酯(α,β或β,α)与HWESASLLR，

-二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)与HWESASLLR，

-N-油酰基牛磺酸与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-1-甲基鸟苷与HWESASLLR，

-1-硬脂酰基甘油(18:0)与HWESASLLR，

-二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)与HWESASLLR，

-二氢阿魏酸与HWESASLLR，

-3-甲基戊二酰基肉毒碱(C6)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与三甲基胺N氧化物，

-丙氨酸与HWESASLLR，

-HWESASLLR与尿酸盐/酯，

-HWESASLLR与十五烷酸盐/酯(15:0)，

-10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)与HWESASLLR，

-5α-雄甾烷-3α,17β-二醇单硫酸盐/酯1与HWESASLLR，

-富马酸盐/酯与HWESASLLR，

-二十二碳五烯酸盐/酯(DPA；22:5n3)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与棕榈油酸盐/酯(16:1n7)，

-HWESASLLR与异油酸盐/酯(18:1n7)，

-HWESASLLR与亮氨酸，

-HWESASLLR与甲基棕榈酸盐/酯(15或2)，

-HWESASLLR与丙酰基肉毒碱(C3)，

-3-羟基癸酸盐/酯与HWESASLLR，

-3-[3-(磺氧)苯基]丙酸与HWESASLLR，

-HWESASLLR与胡椒碱，

-3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸盐/酯(CMPF)与HWESASLLR，

-2-羟基棕榈酸盐/酯与HWESASLLR，

-HWESASLLR与鸟氨酸，

-3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与N2,N5-二乙酰基鸟氨酸，

-HWESASLLR与肉豆蔻酸盐/酯(14:0)，

-4-雄甾烯-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2与HWESASLLR，

-HWESASLLR与牛磺石胆酸3-硫酸酯盐/酯，

-HWESASLLR与月桂基肉毒碱(C12)，

-HWESASLLR与N-棕榈酰基牛磺酸，

-HWESASLLR与L-***，

-麦角硫因与HWESASLLR，

-γ-谷氨酰基谷氨酸盐/酯与HWESASLLR，

-HWESASLLR与月桂酸盐/酯(12:0)，

-HWESASLLR与十七酸盐/酯(17:0)，

-HWESASLLR与棕榈酰基肉毒碱(C16)，

-HWESASLLR与油酰基肉毒碱(C18)，

-5α-雄甾烷-3β,17β-二醇单硫酸盐/酯2与HWESASLLR，

-HWESASLLR与缬氨酰基谷氨酰胺，

-5-十二碳烯酸盐/酯(12:1n7)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与丙酮酸盐/酯，

-癸酸盐/酯(10:0)与HWESASLLR，

-2-羟基丁酸盐/酯(AHB)与HWESASLLR，

-辛酸盐/酯(8:0)与HWESASLLR，

-17-甲基硬脂酸盐/酯与HWESASLLR，

-HWESASLLR与苯基乙酸盐/酯，

-肾上腺酸盐/酯(22:4n6)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与十九烷酸盐/酯(19:0)，

-HWESASLLR与十四烷二酸盐/酯(C14)，

-HWESASLLR与N-乙酰基肌肽，

-HWESASLLR与甲基-β-吡喃葡萄糖苷，

-柠檬酸盐/酯与HWESASLLR，

-HWESASLLR与N-乙酰基甘氨酸，

-十六烷二酸盐/酯(C16)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与丙酰基甘氨酸(C3)，

-γ-谷氨酰基甲硫氨酸与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-γ-谷氨酰基赖氨酸与亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)，

-十七酸盐/酯(17:0)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-亚油酸盐/酯(18:2n6)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-γ-谷氨酰基甲硫氨酸与亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)，

-肌氨酸(N-甲基甘氨酸)与辛二酸盐/酯，

-次黄嘌呤与十四烷二酸盐/酯(C14)，

-10-十九碳烯酸盐/酯(19:1n9)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-二十二碳二烯酸盐/酯(22:2n6)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-13-甲基肉豆蔻酸与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-二十碳烯酸盐/酯(20:1n9或1n11)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-甲硫氨酸与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-肉豆蔻油酸盐/酯(14:1n5)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-肌氨酸(N-甲基甘氨酸)与十四烷二酸盐/酯(C14)，

-17-甲基硬脂酸盐/酯与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-油酸盐/酯(18:1n9)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-二高亚油酸盐/酯(20:2n6)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-甲基棕榈酸盐/酯(15或2)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)与异亮氨酸，

-γ-谷氨酰基丙氨酸与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-γ-谷氨酰基谷氨酸盐/酯与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-棕榈酰基肉毒碱(C16)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-棕榈油酸盐/酯(16:1n7)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-10-十七碳烯酸盐/酯(17:1n7)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-异亮氨酸与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-3-[3-(磺氧)苯基]丙酸与肌醇，

-苯基乙酸盐/酯与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-肾上腺酸盐/酯(22:4n6)与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-6-氧代哌啶-2-甲酸与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR与苯丙氨酰基丙氨酸，

-戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR与异亮氨酰基亮氨酸，

-戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR与肉豆蔻酰基肉毒碱，

-戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR与十八烷二酸盐/酯(C18)，

-肉毒碱与戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR，

-天冬酰胺酰基亮氨酸与戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR，

-3-羟基辛酸盐/酯与戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR，

-戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR与牛磺酸，

-5-羟基吲哚乙酸盐/酯与戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR，

-3-羟基癸二酸盐/酯与戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR，

-HWESASLLR与肉豆蔻酰基肉毒碱与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物与HWESASLLR与牛磺酸，

-3-甲基-2-氧代丁酸盐/酯与HWESASLLR与二氢鞘氨醇，

-HWESASLLR与苯丙氨酰基丙氨酸与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-3-甲基-2-氧代丁酸盐/酯与HWESASLLR与苏氨酰基亮氨酸，

-3-羟基辛酸盐/酯与HWESASLLR与苏氨酰基亮氨酸，

-5-羟基吲哚乙酸盐/酯与HWESASLLR与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-肉毒碱与HWESASLLR与苏氨酰基亮氨酸，

-3-甲基-2-氧代丁酸盐/酯与4-甲基儿茶酚硫酸盐/酯与HWESASLLR，

-13-甲基肉豆蔻酸与4-甲基儿茶酚硫酸盐/酯与肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，

-HWESASLLR与PFAM(22:1)，

-HWESASLLR与PFAM(20:1)，

-HWESASLLR与PFAM(22:2)，

-肌氨酸(N-甲基甘氨酸)与PFAM(22:1)，

-肌氨酸(N-甲基甘氨酸)与PFAM(20:1)，

-肌氨酸(N-甲基甘氨酸)与PFAM(22:2)，

-3-[3-(磺氧)苯基]丙酸与PFAM(22:1)，

-3-[3-(磺氧)苯基]丙酸与PFAM(20:1)，

-3-[3-(磺氧)苯基]丙酸与PFAM(22:2)，

-HWESASLLR与肌苷，

-HWESASLLR与色氨酸，

-HWESASLLR与酪氨酸，

-马尿酸盐/酯与HWESASLLR，

-HWESASLLR与异戊酸盐/酯(C5)，

-1-棕榈酰基甘油(16:0)与HWESASLLR，

-十二烷二酸盐/酯(C12)与HWESASLLR，

-戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR与癸二酸盐/酯，

-戊二酰基肉毒碱(C5)与HWESASLLR与十一烷二酸盐/酯，

-半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物与HWESASLLR与癸二酸盐/酯，

-HWESASLLR与苏氨酰基亮氨酸与十一烷二酸盐/酯，

-HWESASLLR与N-乙酰基色氨酸与色氨酸，

-HWESASLLR与N-乙酰基色氨酸与酪氨酸，

-C-糖基色氨酸与HWESASLLR与肌苷，

-3-羟基马尿酸盐/酯与HWESASLLR与肌苷，

-HWESASLLR与肌苷与N-乙酰基酪氨酸，

-C-糖基色氨酸与HWESASLLR与色氨酸，

-4-羟基马尿酸盐/酯与HWESASLLR与肌苷，

-HWESASLLR与N-乙酰基酪氨酸与色氨酸，

-4-羟基马尿酸盐/酯与HWESASLLR与癸二酸盐/酯，或

-1-棕榈酰基甘油(16:0)与3-羟基马尿酸盐/酯与HWESASLLR。

14.一种治疗患有或怀疑患有神经疾病的受试者的方法，所述神经疾病选自阿茲海默氏病(AD)、AD型老年痴呆、前驱期AD、轻度认知障碍、年龄相关的记忆障碍、血管性痴呆或额颞叶痴呆，所述方法包括(i)使用根据权利要求1至13中任一项所述的方法测定受试者中所述疾病的存在、风险、亚型、进展或严重性，和(ii)给予有需要的受试者针对所述疾病的治疗。

15.一种诊断神经疾病的体外方法，所述神经疾病选自阿茲海默氏病(AD)、AD型老年痴呆、前驱期AD、轻度认知障碍、年龄相关的记忆障碍、血管性痴呆或额颞叶痴呆，所述方法包含以下步骤：

-处理样品以通过LC/MS和/或GC/MS对其进行进一步分析，

-通过LC/MS和/或GC/MS测量与对照值相比至少一种选自以下物质的生物标志物的增加：亚氨基二乙酸盐/酯(IDA)、肌氨酸(N-甲基甘氨酸)、亮氨酰基甘氨酸、十四烷二酸盐/酯(C14)、3-羟基丁酸盐/酯(BHBA)、十六烷二酸盐/酯(C16)、3-脱氢肉毒碱、癸酸盐/酯(10:0)、苏氨酰基亮氨酸和亮氨酰基谷氨酸盐/酯，和/或与对照值相比至少一种选自HWESASLLR和3-[3-(磺氧)苯基]丙酸的生物标志物的减少，