CN107661295B - 一种芹菜素的药物载体及制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种芹菜素的药物载体及制备方法。是由脱氧胆酸钠、硬脂酸蔗糖酯、异丙醇、乙酸乙酯和氯化钠水溶液混合制备的形成微乳液。本发明采用乙酸乙酯作为油相，芹菜素具有最高的抗氧化活性和最大的累积释放率。

Description

一种芹菜素的药物载体及制备方法
技术领域
本发明涉及一种芹菜素的药物载体及制备方法。
背景技术
芹菜素作为一种天然黄酮类的化合物，广泛分布于多种蔬菜和药用植物中，例如香菜，洋甘菊和豆芽中。由于芹菜素具有抗炎，抗氧化和抗癌等多种功效，因而在食品、生物、医学领域受到了广泛关注。但是芹菜素在水中的溶解度仅为2.16μg/mL，其水溶性差的缺点限制了在实际过程中的应用，导致生物利用度不高。近年来，以表面活性剂为主构筑的聚集体，例如，环糊精修饰的微乳液，脂质体，聚合物胶束，纳米粒子等作载体提高芹菜素的溶解度和利用度，而被广泛研究。
微乳液通常由表面活性剂，助表面活性剂，油和水等组成的透明或半透明的热力学稳定的自组装体系，主要包括W/O、双连续(B.C.)和O/W型微乳液。其中，双连续相微乳液以相互交织的水相和油相作为连续相，具有优良的溶解性能和较低的界面张力。郭等人利用微乳液包载杨梅素显著提高了杨梅素的的溶解度，提高了对癌细胞的抗增殖和抗氧化活性，赵等人将环糊精修饰的微乳液包载芹菜素，实现了对芹菜素缓释和控释的调控。
蔗糖酯是一种无毒，无味，无刺激，生物可降解的非离子表面活性剂，其中亲水基团为蔗糖的羟基，疏水基团为脂肪酸的碳氢链。它是世界上公认的食品,药品和化妆品的乳化剂。近年来，因其抗肿瘤和抗菌等生物活性而备受关注，但是蔗糖酯较高的相转变温度不利于其在制药领域应用。
芹菜素在微乳液中的体外释放行为和抗氧化活性不仅与本身的结构性质有关，同时与微乳液的微观结构有关，因而芹菜素在不同组分的微乳液中增溶位置和增溶能力不同。
发明内容
为了解决现有技术的不足，本发明的目的之一是提供一种芹菜素的药物载体，既能够增加芹菜素的溶解度，又能使芹菜素缓释，还能够增加芹菜素的抗氧化活性。
为了实现上述目的，本发明的技术方案为：
一种芹菜素的药物载体，是由脱氧胆酸钠、硬脂酸蔗糖酯、异丙醇、乙酸乙酯和氯化钠水溶液混合制备形成的微乳液。
本发明基于S1570/NaDC/异丙醇/乙酸异戊酯/5.0％NaCl水溶液的微乳液体系，将其应用于芹菜素的溶解及载药，发现S1570/NaDC/异丙醇/乙酸异戊酯/5.0％NaCl水溶液的微乳液能够增加芹菜素的溶解度，又能对芹菜素产生缓释效果，还能够增加芹菜素的抗氧化活性。然而在进一步研究各组分可替代方案时发现，当乙酸异戊酯替换为其他油相时，会影响芹菜素的缓释效果，而当乙酸异戊酯替换为乙酸乙酯时，芹菜素的缓释效果最好，其药物累积释放量最高。
本发明的目的之二是提供一种上述药物载体的制备方法，将脱氧胆酸钠、硬脂酸蔗糖酯、异丙醇、乙酸乙酯混合均匀加热溶解，再加入氯化钠水溶液搅拌至澄清。
本发明的目的之三是提供一种载体药物，将芹菜素载入至上述药物载体中。
本发明的目的之四是提供一种上述载体药物的制备方法，将脱氧胆酸钠、硬脂酸蔗糖酯、异丙醇、乙酸乙酯和芹菜素混合均匀加热溶解，再加入氯化钠水溶液搅拌至澄清。
本发明的有益效果为：
1.本发明既能够增加芹菜素的溶解度，又能使芹菜素缓释，还能够增加芹菜素的抗氧化活性。
2.本发明采用乙酸乙酯作为油相，芹菜素具有最高的抗氧化活性和最大的累积释放率。
附图说明
构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。
图1为S1570/NaDC/异丙醇/乙酸异戊酯/5％NaCl水溶液体系拟三元相图(40℃)，表面活性剂/异丙醇为6:4(wt:wt)，其中S1570/NaDC质量比分别为8.5:1.5(a),8:2(b),7:3(c)；
图2(a)芹菜素在不同S1570/NaDC质量比构筑的样品(P1～P3)中的释放，实线为为一级动力学模型拟合曲线，图2(b)芹菜素在不同S1570/NaDC质量比构筑的样品(P1～P3)中抗氧化(ABTS)；
图3为S1570/NaDC/异丙醇/乙酸异戊酯/NaCl水溶液体系拟三元相图(40℃)，表面活性剂/异丙醇为6:4(wt:wt)，S1570/NaDC质量比为7:3，其中氯化钠质量浓度为0％(a),2.5％(b),5％(c),7.5％(d)
图4(a)芹菜素在不同NaCl浓度构筑的样品(S1-S3,P3)中的释放，图4(b)芹菜素在不同NaCl浓度构筑的样品(S1-S3,P3)中的抗氧化(ABTS)；
图5为S1570/NaDC/异丙醇/油相/5％NaCl水溶液体系拟三元相图(40℃)，表面活性剂/异丙醇为6:4(wt:wt)，S1570/NaDC质量比为7:3，其中油相分别为乙酸乙酯(a)，乙酸丁酯(b)，乙酸异戊酯(c)，乙酸正戊酯(d)
图6(a)芹菜素在不同油相构筑的样品(O1-O3,P3)中的释放，图6(b)芹菜素在不同NaCl浓度构筑的样品(O1-O3,P3)中的抗氧化(ABTS)。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或
“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
正如背景技术所介绍的，本申请提出了一种芹菜素的药物载体及制备方法。
本申请的一种典型实施方式，提供了一种芹菜素的药物载体，是由脱氧胆酸钠、硬脂酸蔗糖酯、异丙醇、乙酸乙酯和氯化钠水溶液混合制备形成的微乳液。
本申请基于S1570/NaDC/异丙醇/乙酸异戊酯/5.0％NaCl水溶液的微乳液体系，将其应用于芹菜素的溶解及载药，发现S1570/NaDC/异丙醇/乙酸异戊酯/5.0％NaCl水溶液的微乳液能够增加芹菜素的溶解度，又能对芹菜素产生缓释效果，还能够增加芹菜素的抗氧化活性。然而在进一步研究各组分可替代方案时发现，当乙酸异戊酯替换为其他油相时，会影响芹菜素的缓释效果，而当乙酸异戊酯替换为乙酸乙酯时，芹菜素的缓释效果最好，其药物累积释放量最高。
优选的，所述硬脂酸蔗糖酯与脱氧胆酸钠的质量比为8.5:1.5～7:3，进一步优选7:3。
优选的，所述脱氧胆酸钠和硬脂酸蔗糖酯的总质量与异丙醇的质量比为5.5:4.5～6.5:3.5，进一步优选6:4。
优选的，所述脱氧胆酸钠、硬脂酸蔗糖酯和异丙醇的总质量与乙酸乙酯的质量比为8.5:1.5～9.5:0.5，进一步优选9:1。
优选的，所述氯化钠水溶液中氯化钠的质量分数为2.5～7.5％。进一步优选的，所述氯化钠水溶液中氯化钠的质量分数为5％。
优选的，药物载体中的水含量为50±5％(wt％)。
本申请的另一种实施方式，提供了一种上述药物载体的制备方法，将脱氧胆酸钠、硬脂酸蔗糖酯、异丙醇、乙酸乙酯混合均匀加热溶解，再加入氯化钠水溶液搅拌至澄清。
优选的，所述加热溶解的温度为50～60℃。
本申请的第三种实施方式，提供了一种载体药物，将芹菜素载入至上述药物载体中。
优选的，所述芹菜素与药物载体的比为0.3～0.4:1，mg:mL。
本申请的第四种实施方式，提供了一种上述载体药物的制备方法，将脱氧胆酸钠、硬脂酸蔗糖酯、异丙醇、乙酸乙酯和芹菜素混合均匀加热溶解，再加入氯化钠水溶液搅拌至澄清。
优选的，所述加热溶解的温度为50～60℃。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。
材料：脱氧胆酸钠(NaDC，Sigma Chemical Company)，硬脂酸蔗糖酯(S1570，日本三菱化学株式会社)，乙酸异戊酯，乙酸乙酯，乙酸丁酯，乙酸正戊酯，异丙醇，乙醇，氯化钠(NaCl)，磷酸二氢钠(NaH2PO4)，磷酸氢二钠(Na2HPO4)均由国药化学试剂有限公司提供，芹菜素由南京泽朗医药科技有限公司提供。2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)由麦克林生化科技有限公司提供，水为二次蒸馏水。
仪器:电子天平(AL104，梅特勒-托利多仪器有限公司)，集热式恒温加热搅拌器(DF-101S型，巩义市英峪仪器厂)，紫外分光光度计(UV-5500PC,上海元析仪器有限公司)，金叶牌自动双重纯水蒸馏水器(SZ-93A)，电导率仪(DDSJ-308A)，旋涡混匀器(金坛市医疗仪器厂)，离心机(eppendorf,5424R)，移液枪(大龙移液器)，透析袋(3500KDa,由北京索莱宝科技有限公司提供)。
相图的制备
首先，将一定量质量比的表面活性剂S1570/NaDC置于带塞比色管中，并按表面活性剂与助表面活性剂异丙醇为6:4的质量比加入异丙醇，形成混合表面活性剂体系(EM).其次，按照混合表面活性剂与油的质量比从10:0到0:10变化，依次称取油相于不同的比色管中，用旋涡混匀器搅拌混匀，然后在50-60℃下搅拌溶解。以2％的间隔向比色管中逐滴加入二次蒸馏水，最后于40℃恒温水浴中静置观察，并通过澄清透明，可流动的表观确定微乳液相区。
引入不同含量NaDC，研究了40℃下S1570/NaDC/异丙醇/乙酸异戊酯/5％NaCl水溶液体系的相行为，其拟三元相图如图1所示。可以看出，相图中主要分为透明均一，可流动，热力学稳定的单相微乳液区(1Ф)和浑浊的两相区(2Ф)。从图1中也可以看出，随着NaDC含量的增加，微乳液相区域逐渐增大，双连续微乳液区域也随之增大。说明NaDC的引入改善了S1570微乳液的相行为，可能由于NaDC和S1570之间形成氢键的作用所致。
氢键和疏水作用是NaDC构成聚集体的主要作用机制，而这两种机制除了与NaDC本身的浓度有关，还与溶液的性质有关，例如水相中NaCl的浓度。因而固定S1570与NaDC的质量比为7:3，进而探讨了NaCl的浓度对相行为的影响，如图3可以看出，随着NaCl含量的增加，微乳液的相区域先增加后减小，在NaCl浓度为5％时对应的相区域面积最大。主要由于NaCl的加入抑制离子表面活性剂NaDC的解离，疏水性增强，易于达到亲水亲油平衡，因而所需要的表面活性剂和助表面活性剂减少，形成微乳液的区域随之增加。但是在7.5％时，相区域开始减小，说明适量的NaCl含量(5％)可以增加体系形成微乳液的能力。在相区中选择NaCl含量分别为0％(S1),2.5％(S2),5％(P3),7.5％(S3)的样品点，配置载药样品，进一步研究对芹菜素体外释放和抗氧化行为的影响。
芹菜素为油溶性药物，因而芹菜素在微乳液中增溶能力和位置受到油相分子链长的影响，进而选择具有较高累积释放率和抗氧化活性组成(S1570和NaDC质量比为7:3,NaCl含量为5％)，研究了不同分子链长的油相对芹菜素释放行为的影响。由图5可以看出，随着油相分子链长的增加，相区域逐渐减小，这主要归因于油相分子的渗透性和疏水性。油相分子链长越长，越难渗透到表面活性剂的栅栏层，因而就需要更多的表面活性剂和助表面活性剂来维持界面层的亲水亲油平衡，相区域随之减小。由于乙酸异戊酯中含有支链，导致其相区域大小介于乙酸正戊酯和乙酸丁酯之间。
电导率的测定
为了确定微乳液从W/O，双连续微乳液(B.C.)到O/W的微观结构变化，利用电导率仪测定不同含水量微乳液的电导率。首先，按一定质量比将表面活性剂(S1570和NaDC)和助表面活性剂(异丙醇)置于不同的比色管中。然后，按照表面活性剂与油的质量比从10:0到0:10变化加入油相(乙酸异戊酯)，在50-60℃下搅拌混匀。以2％的间隔分别向比色管中逐滴加入二次蒸馏水，搅拌混匀。最后，将电极置于比色管中，静置，平衡后读数，得到电导率随水含量变化的曲线。
根据滤渗电导模型研究微乳液体系微观结构的变化，对微乳液区域进行电导率分区，在水含量较低时(水含量约为0-25％～35％)，连续相为油相，依靠水滴之间的碰撞而导电，体系的电导率极低，形成的是W/O型微乳液。随着水含量的增加(水含量约为25％～35％-65％～70％),导电微粒的间距逐渐减小并且相互连接成导电链，此时的电导率开始急剧成线性增大，形成了双连续相微乳液(B.C.).水含量继续增加(>70％)，电导率开始下降，形成了O/W微乳液。由电导率分区结果可知，微乳液体系经历了从W/O,B.C到O/W的转变。
饱和溶解度的测定
将过量的芹菜素加入到双连续微乳液中，在40℃恒温水浴中搅拌12h,使芹菜素充分溶解。悬浮液通过高速离心机离心两次(14000r/min),每次2min，然后取上层清液，利用紫外-可见分光光度计测量吸光度，并计算增溶芹菜素的浓度。
芹菜素的水溶性较差(在水中的溶解度仅为2.16μg/mL),为了提高其溶解度，进而在相区中固定水含量为50％,表面活性剂(S1570和NaDC)与助表面活性剂(异丙醇)质量比6:4，构筑了一系列不同组成的双连续微乳液包载芹菜素(0.35mg/mL)。通过饱和溶解度实验可知，芹菜素在微乳液中的饱和溶解度约为0.94mg/mL，说明本申请构筑的双连续微乳液不仅提高了芹菜素的稳定性，还显著提高了芹菜素的溶解度，提高了芹菜素的利用率。
实施例1
将2.295g硬脂酸蔗糖酯，0.405g脱氧胆酸钠，1.8g异丙醇和0.5g乙酸异戊酯置于带塞的比色管中，利用旋涡混匀器将其混匀，在50-60℃的恒温水浴中充分搅拌使其溶解。然后向该比色管中逐滴加入5g质量分数为5％NaCl水溶液，置于水浴锅中搅拌混匀，最后在40℃恒温水浴中静置以达到相平衡，获得微乳液即为载药微乳液，记为P1.
实施例2
将2.16g硬脂酸蔗糖酯，0.54g脱氧胆酸钠，1.8g异丙醇和0.5g乙酸异戊酯置于带塞的比色管中，利用旋涡混匀器将其混匀，在50-60℃的恒温水浴中充分搅拌使其溶解。然后向该比色管中逐滴加入5g质量分数为5％NaCl水溶液，置于水浴锅中搅拌混匀，最后在40℃恒温水浴中静置以达到相平衡，获得微乳液即为载药微乳液，记为P2.
实施例3
将1.89g硬脂酸蔗糖酯，0.81g脱氧胆酸钠，1.8g异丙醇和0.5g乙酸异戊酯置于带塞的比色管中，利用旋涡混匀器将其混匀，在50-60℃的恒温水浴中充分搅拌使其溶解。然后向该比色管中逐滴加入5g质量分数为5％NaCl水溶液，置于水浴锅中搅拌混匀，最后在40℃恒温水浴中静置以达到相平衡，获得微乳液即为载药微乳液，记为P3.
实施例4
将1.89g硬脂酸蔗糖酯，0.81g脱氧胆酸钠，1.8g异丙醇和0.5g乙酸异戊酯置于带塞的比色管中，利用旋涡混匀器将其混匀，在50-60℃的恒温水浴中充分搅拌使其溶解。然后向该比色管中逐滴加入5g二次蒸馏水，置于水浴锅中搅拌混匀，最后在40℃恒温水浴中静置以达到相平衡，获得微乳液即为载药微乳液，记为S1.
实施例5
将1.89g硬脂酸蔗糖酯，0.81g脱氧胆酸钠，1.8g异丙醇和0.5g乙酸异戊酯置于带塞的比色管中，利用旋涡混匀器将其混匀，在50-60℃的恒温水浴中充分搅拌使其溶解。然后向该比色管中逐滴加入5g质量分数为2.5％NaCl水溶液，置于水浴锅中搅拌混匀，最后在40℃恒温水浴中静置以达到相平衡，获得微乳液即为载药微乳液，记为S2.
实施例6
将1.89g硬脂酸蔗糖酯，0.81g脱氧胆酸钠，1.8g的异丙醇和0.5g乙酸异戊酯置于带塞的比色管中，利用旋涡混匀器将其混匀，在50-60℃的恒温水浴中充分搅拌使其溶解。然后向该比色管中逐滴加入5g质量分数为7.5％NaCl水溶液，置于水浴锅中搅拌混匀，最后在40℃恒温水浴中静置以达到相平衡，获得微乳液即为载药微乳液，记为S3.
实施例7
将1.89g硬脂酸蔗糖酯，0.81g脱氧胆酸钠，1.8g异丙醇和0.5g乙酸乙酯置于带塞的比色管中，利用旋涡混匀器将其混匀，在50-60℃的恒温水浴中充分搅拌使其溶解。然后向该比色管中逐滴加入5g质量分数为5％NaCl水溶液，置于水浴锅中搅拌混匀，最后在40℃恒温水浴中静置以达到相平衡，获得微乳液即为载药微乳液，记为O1.
实施例8
将1.89g硬脂酸蔗糖酯，0.81g脱氧胆酸钠，1.8g异丙醇和0.5g乙酸丁酯置于带塞的比色管中，利用旋涡混匀器将其混匀，在50-60℃的恒温水浴中充分搅拌使其溶解。然后向该比色管中逐滴加入5g质量分数为5％NaCl水溶液，置于水浴锅中搅拌混匀，最后在40℃恒温水浴中静置以达到相平衡，获得微乳液即为载药微乳液，记为O2.
实施例9
将1.89g硬脂酸蔗糖酯，0.81g脱氧胆酸钠，1.8g的丙醇和0.5g乙酸正戊酯置于带塞的比色管中，利用旋涡混匀器将其混匀，在50-60℃的恒温水浴中充分搅拌使其溶解。然后向该比色管中逐滴加入5g质量分数为5％NaCl水溶液，置于水浴锅中搅拌混匀，最后在40℃恒温水浴中静置以达到相平衡，获得微乳液即为载药微乳液，记为O3.
表1.各样品的组成和命名
其中EM为表面活性剂(S1570/NaDC)与助表面活性剂(异丙醇)按6:4(wt:wt)组成的混合物，微乳液体系中水含量为50％(wt％)。
将上述样品进行体外释放和抗氧化研究
首先，将2mL的包载芹菜素的微乳液置于透析袋中(3500kDa).其次，将透析袋置于80mL含20％乙醇的磷酸盐缓冲介质(pH＝7.4)中，于40℃恒温水浴中搅拌。然后，每隔一定时间，取出3mL的释放介质，同时再补入3mL的释放介质保持体积恒定，直到药物释放达到平衡。最后，使用紫外分光光度计在芹菜素最大吸收波长340nm处测定芹菜素的吸光度，并通过如下公式计算芹菜素的累积释放率。
通过测定芹菜素清除ABTS·+的能力评价芹菜素的抗氧化活性，首先，将ABTS(7mmol)和过硫酸钾(K2S2O8,2.45mmol)混合并置于黑暗环境中反应12-16h得到ABTS·+.然后用磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)稀释ABTS·+(25/1,v/v)得到ABTS·+溶液。将3mL的ABTS·+溶液与120μL去离子水混合，避光恒温20min。最后用紫外-可见光见分光光度计测定734nm波长下得到均相溶液的吸光度(A0)。用空白微乳液(含芹菜素的微乳液)代替蒸馏水，测定吸光度Ae(A).按如下公式计算清除ABTS·+的活性：
微乳液体系的形成过程中主要受到范德华力，疏水作用，氢键和立体效应的影响。不同组分的微乳液在形成过程中的作用力大小不同，导致微乳液结构不同，所以芹菜素在不同组分构筑的微乳液中的增溶位置和增溶量不同，因而芹菜素在样品中表现出不同的体外释放行为和抗氧化活性。
首先研究了S1570和NaDC质量比对芹菜素在微乳液中体外释放行为的影响。芹菜素在不同NaDC含量的S1570/NaDC/异丙醇/乙酸异戊酯/NaCl水溶液体系中的释放曲线如图2a所示，可以看出微乳液样品对芹菜素具有良好的缓释性能，说明双连续微乳液可以作为芹菜素的载体，实现对芹菜素缓释和控释的作用。在480min之前(释放前期I)，芹菜素的释放速率较快，主要由于吸附在油水界面层的芹菜素的释放，使累积释放量迅速上升。在480-3050min时(释放中期II)，释放速率减慢，可能是溶于油相中的芹菜素先与油相分离，然后再向油水界面层中扩散。在3050min之后(释放后期III)，芹菜素的累积释放率不再变化，释放达到平衡。
从图2a中可以看出，随着NaDC含量的增加，释放速率和累积释放率增加。微乳液的界面层主要由S1570、NaDC以及调节亲水亲油平衡的异丙醇分子排列组成。其中，NaDC特殊的面型结构，导致其亲水界面与疏水界面分区不明显，因而随着NaDC含量增加，界面层的疏水作用减弱。因而可以推断出，芹菜素主要增溶在油相中，还有部分增溶在表面活性剂的疏水链中。随着体系疏水作用的减弱，微乳液对芹菜素的增溶能力减小，从而使芹菜素的释放速率加快，累积释放率提高。
为探讨芹菜素在微乳液中的释放行为，以样品P3为例，使用不同的模型，包括零级动力学，一级动力学，Higuchi模型，Hixson-Crowell模型和Korsmeyer-Peppas模型，对芹菜素的释放曲线进行拟合，拟合的方程及相关参数见表2。对比得到的相关系数(R2)发现，一级动力学模型拟合得到的相关度最高(0.9946),说明芹菜素的体外释放曲线与一级动力学模型较为符合，说明体外释放过程是受浓度扩散控制的。
表2.芹菜素在P3样品中的释放动力学方程和参数
其中，Qt为t时间内芹菜素的累积释放量
芹菜素可以提供氢使自由基变成稳定的状态，从而起到抗氧化的作用。因而通过测定清除自由基的量与初始自由基量的比值，可得到芹菜素的抗氧化活性大小。其中，ABTS·+法由于简单，快速，灵敏，重现性好等优点，而被广泛用于评价一些化合物的抗氧化活性。
抗氧化性能不仅与抗氧化物质本身的性质有关，也受到微乳液结构的影响。因而本申请首先通过测定不同浓度的芹菜素微乳液样品清除ABTS·+的能力，探讨不同S1570和NaDC质量比的微乳液对芹菜素抗氧化性能的影响，结果如图2b所示。从图中可以看出，在芹菜素浓度低于20μg/mL时，抗氧化活性很小，此时芹菜素微乳液的抗氧化活性主要受芹菜素浓度的控制。芹菜素浓度在20-100μg/mL时，抗氧化活性与芹菜素浓度之间保持线性关系。芹菜素浓度大于100μg/mL时，抗氧化活性趋于平缓，在经过临界点S(Cs，Rs)之后，抗氧化活性达到最大值。Cs表示清除过程中的效率，其大小为P3>P1>P2,Rs表示清除过程中的效能，其大小为P3>P2>P1。IC50(清除率在50％时所需的芹菜素的浓度)可以用来衡量体系的抗氧化能力。IC50值越小，抗氧化活性越好。
由图2b可知，随着S1570和NaDC质量比的减小，芹菜素的抗氧化活性增强，这是由于脱氧胆酸钠特殊的面型结构导致疏水链减少，体系对芹菜素的增溶能力减小，使芹菜素易于与ABTS·+结合，导致抗氧化活性增加。可以发现，在S1570和NaDC质量比为7:3时，体系具有较高的累计释放率和抗氧化活性。
芹菜素在不同NaCl浓度构筑的样品中释放曲线如图4a，从图中可以看出，体系对芹菜素具有良好的缓释作用。引入NaCl后，芹菜素的累积释放率和释放速率都明显高于无NaCl的体系。主要由于在向体系中引入NaCl之后，NaCl会压缩极性头基周围的双电层的厚度，抑制了离子表面活性剂NaDC的解离，导致极性减弱，体系的疏水性增强。另外，部分Na+与NaDC分子的COO-通过静电作用和配位作用结合，导致S1570与NaDC之间的氢键减少，界面层结构疏松，释放速率和累积释放率加快。因而推断出，部分芹菜素是增溶在微乳液的栅栏层中。随着NaCl含量增加，体系对芹菜素的增溶能力减弱，使药物释放加快。但是随着NaCl浓度的增加，芹菜素的累积释放率和释放速率先增大后减小。说明过量NaCl的加入，导致其疏水性增加，大量的异丙醇进入到界面层维持亲水亲油平衡，使界面层结构紧密，不利于芹菜素的释放。只有在NaCl含量为5％时，芹菜素的累积释放率和释放速率达到最大值。
NaCl浓度对芹菜素抗氧化行为的影响，结果如图4b所示。从图中可以发现，随着盐含量的增加，IC50先减小后增大，说明芹菜素的抗氧化活性先增强后减弱。随着盐浓度的增加，Cs分别为138.89,136.87,142.56,146.01,Rs分别为0.81,0.85,0.95,0.84.主要由于随着NaCl含量增加，NaDC与S1570之间的氢键减少，界面层结构疏松，对芹菜素的溶解能力减小，易于与ABTS·+接触。由此可见，固定S1570和NaDC质量比为7:3，当NaCl浓度为5％时，芹菜素在体系中的累积释放率和抗氧化活性最高。
芹菜素在不同油相组成的样品中释放曲线如图6a所示。其中芹菜素在样品O1中具有最高的释放速率和累积释放率(88％)，说明随着油相分子链长的增加，累积释放率和释放速率减小。主要由于油相分子链长越长，尺寸越大，就越难渗透到表面活性剂的栅栏层中，同时油相分子在类管道的油相中得以伸展，从而阻碍了芹菜素的释放。说明了油溶性药物芹菜素主要增溶在油相中。芹菜素在P3中的释放速率和累积释放率高于样品O3，说明含有支链的分子能够提高累积释放率。而且芹菜素在样品O2中的释放速率高于P3，但是两者的累积释放率基本相同，主要由于乙酸丁酯和乙酸异戊酯主链链长接近，因而具有相同的累积释放率。
表3芹菜素在各样品中的一级释放动力学方程和参数
选择拟合相关度较高的一级动力学模型，对上述芹菜素在所有微乳液样品中的释放曲线进行拟合。得到的拟合方程和相关系数如表3。可以看出，拟合得到的相关系数较高(0.9917-0.9996)，说明芹菜素在双连续微乳液中的释放基本符合一级动力学，表明芹菜素在微乳液样品中的释放是受浓度扩散控制的过程。
不同油相的样品对芹菜素的抗氧化活性影响结果如图6b所示，可以发现，随着油相分子链长的增加，IC50值分别为42.23,42.40,42.60,46.90μg/mL，表明抗氧化活性减小。可能由于油相分子在类管道的油相中得以伸展，从而阻碍了芹菜素与ABTS·+的结合，导致抗氧化活性减小。可以看出，当体系油相为乙酸乙酯时，芹菜素具有最高的抗氧化活性和最大的累积释放率。
为了进一步证明当体系油相为乙酸乙酯时芹菜素具有更高的抗氧化活性和更大的累积释放率，通过以下实施例进行对比证明。
实施例10
本实施例与实施例1相同，不同之处在于：将乙酸异戊酯改为乙酸乙酯。通过抗氧化活性实验和体外释放实验证明，与实施例1相比，本实施例的芹菜素具有更高的抗氧化活性和更大的累积释放率。
实施例11
本实施例与实施例2相同，不同之处在于：将乙酸异戊酯改为乙酸乙酯。通过抗氧化活性实验和体外释放实验证明，与实施例2相比，本实施例的芹菜素具有更高的抗氧化活性和更大的累积释放率。
实施例12
本实施例与实施例4相同，不同之处在于：将乙酸异戊酯改为乙酸乙酯。通过抗氧化活性实验和体外释放实验证明，与实施例4相比，本实施例的芹菜素具有更高的抗氧化活性和更大的累积释放率。
实施例13
本实施例与实施例5相同，不同之处在于：将乙酸异戊酯改为乙酸乙酯。通过抗氧化活性实验和体外释放实验证明，与实施例5相比，本实施例的芹菜素具有更高的抗氧化活性和更大的累积释放率。
实施例14
本实施例与实施例6相同，不同之处在于：将乙酸异戊酯改为乙酸乙酯。通过抗氧化活性实验和体外释放实验证明，与实施例6相比，本实施例的芹菜素具有更高的抗氧化活性和更大的累积释放率。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种芹菜素的药物载体，其特征是，是由脱氧胆酸钠、硬脂酸蔗糖酯、异丙醇、乙酸乙酯和氯化钠水溶液混合制备形成的微乳液；
所述硬脂酸蔗糖酯与脱氧胆酸钠的质量比为8.5:1.5～7:3；所述脱氧胆酸钠和硬脂酸蔗糖酯的总质量与异丙醇的质量比为5.5:4.5～6.5:3.5；所述脱氧胆酸钠、硬脂酸蔗糖酯和异丙醇的总质量与乙酸乙酯的质量比为8.5:1.5～9.5:0.5；所述氯化钠水溶液中氯化钠的质量分数为2.5～7.5％；药物载体中的水含量为50±5％(wt％)。
2.如权利要求1所述的药物载体，其特征是，所述硬脂酸蔗糖酯与脱氧胆酸钠的质量比为7:3。
3.如权利要求1所述的药物载体，其特征是，所述脱氧胆酸钠和硬脂酸蔗糖酯的总质量与异丙醇的质量比为6:4。
4.如权利要求1所述的药物载体，其特征是，所述脱氧胆酸钠、硬脂酸蔗糖酯和异丙醇的总质量与乙酸乙酯的质量比为9:1。
5.如权利要求1所述的药物载体，其特征是，所述氯化钠水溶液中氯化钠的质量分数为5％。
6.一种权利要求1～5任一所述的药物载体的制备方法，其特征是，将脱氧胆酸钠、硬脂酸蔗糖酯、异丙醇、乙酸乙酯混合均匀加热溶解，再加入氯化钠水溶液搅拌至澄清。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征是，所述加热溶解的温度为50～60℃。
8.一种载体药物，其特征是，将芹菜素载入至权利要求1～5任一所述的药物载体中。
9.一种权利要求8所述的载体药物的制备方法，其特征是，将脱氧胆酸钠、硬脂酸蔗糖酯、异丙醇、乙酸乙酯和芹菜素混合均匀加热溶解，再加入氯化钠水溶液搅拌至澄清。
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