CN107638561B - 一种鲎素肽在制备防治肺纤维化药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种鲎素肽的新用途：用于制备防治肺纤维化药物，或作为防治肺纤维化药物的有效成分，或利用鲎素组份作为防治肺纤维化药物前体改造，或与治疗肺纤维化药物联合应用治疗肺纤维化。这种鲎素肽组份用鲎血细胞或鲎试剂生产废料制备，能够显著地抑制肺纤维化形成。

Description

一种鲎素肽在制备防治肺纤维化药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种鲎素肽在制备防治肺纤维化药物中的应用。

背景技术

肺纤维化(pulmonary fibrosis，PF)是常见的呼吸***并发症，对人类的健康造成极大威胁。基于美国胸科学会(ATS)、欧洲呼吸学会(ERS)、日本呼吸学会(JRS)和拉丁美洲胸科学会(ALAT)共同制定的《特发性肺纤维化诊治循证指南》指出，一些药物对PF患者有潜在作用，对于用药欲望强烈的患者可从以下4种防治方案中选择：①N-乙酰半胱氨酸，硫唑嘌呤，***；②N-乙酰半胱氨酸单药防治；③抗凝防治；④吡非尼酮。但以上药物的使用会产生严重的副作用，因此寻找防治肺纤维化有效天然药物，一直是国内外药物研究的热点。从天然活性物质中寻找新的防治肺纤维化药物或药物前体的一个重要策略。

鲎也称马蹄蟹，属肢口纲(Merostomata)剑尾目(Xiphosura)的海洋节肢动物，共4种，分布于亚洲和北美东海岸，具有很高的药用价值。鲎的血液中含有铜离子，它的血液是蓝色的。这种蓝色血液的提取物——“鲎试剂”，可以准确、快速地检测人体内部组织是否感染细菌；在制药和食品工业中，可用它对毒素污染进行监测。鲎的肉、卵均可食用，其壳、尾、卵、肉和血均可入药。

鲎素肽来源于鲎血细胞提取物，是含有17个氨基酸残基的多肽，氨基酸序列：NH₂-K-W-C-F-R-V-C-Y-R-G-I-C-Y-R-R-C-R-CONH₂。含两对二硫键：第三位半胱氨酸残基与第十六个半胱氨酸残基，第七位半胱氨酸残基与第十二个半胱氨酸残基各形成一对二硫键。化学性质稳定，耐高温。各种研究资料显示鲎素肽具有强烈抗菌作用，抑制革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌，真菌生长，同时还发现鲎素具有抗肿瘤作用,但是到目前为止还没有鲎素肽对肺纤维化的作用的相关报道。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种鲎素肽的新用途：用于制备防治肺纤维化药物，或作为防治肺纤维化药物的有效成分，或利用鲎素组份作为防治肺纤维化药物前体改造，或与治疗肺纤维化药物联合应用治疗肺纤维化。这种鲎素组份用鲎血细胞或鲎试剂生产废料制备，能够显著地抑制肺纤维化形成。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种鲎素肽在制备防治肺纤维化药物中的应用。

一种鲎素肽在制备防治肺纤维化药物的有效成分中的应用。

本发明还提供一种防治肺纤维化的药物，其包含鲎素肽。

作为进一步的方案，本发明所述的鲎素肽的用量为1mg/kg-10mg/kg。

作为进一步的方案，本发明所述的鲎素肽的用量为4mg/kg-6mg/kg.

作为进一步的方案，本发明所述的防治肺纤维化的药物还包含葡萄糖溶液或生理盐水

作为进一步的方案，本发明所述的防治肺纤维化的药物为粉剂、注射针剂或口服液中的一种。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：

1.本发明所述的鲎素肽的新用途是用于防治肺纤维化，可以用作制备防治肺纤维化药物，或作为防治肺纤维化药物的有效成分，或利用鲎素组份作为防治肺纤维化药物前体改造，或与治疗肺纤维化药物联合应用治疗肺纤维化；这种鲎素组份用鲎血细胞或鲎试剂生产废料制备，能够显著地抑制肺纤维化形成；

2.本发明所述的防治肺纤维化的药物含有鲎素肽，能够制成粉剂或注射针剂或口服液等多种形式，可以单独作为成品使用，也可以作为有效成分与生理盐水、葡萄糖溶液等佐剂配合成组合物，还可以与目前使用的治疗肺纤维化药物联合使用。

下面结合附图及具体实施方式对本发明作进一步详细说明。

附图说明

图1-图5为肺组织病理学石蜡切片结果图；其中图1为正常组的切片结果，图2为模型组切片结果，图3为低剂量组1mg/kg切片结果，图4为中剂量组5mg/kg切片结果，图5为高剂量组10mg/kg切片结果，图6为糖皮质激素5mg/kg治疗组对照组切片结果。

具体实施方式

本发明提供一种鲎素肽的新用途：用于制备防治肺纤维化药物，或作为防治肺纤维化药物的有效成分，或利用鲎素组份作为防治肺纤维化药物前体改造，或与治疗肺纤维化药物联合应用治疗肺纤维化。这种鲎素组份用鲎血细胞或鲎试剂生产废料制备，能够显著地抑制肺纤维化形成。

本发明还提供一种防治肺纤维化的药物，其包含鲎素肽。

作为进一步的方案，本发明所述的鲎素肽的用量为1mg/kg-10mg/kg。

作为进一步的方案，本发明所述的鲎素肽的用量为4mg/kg-6mg/kg.

作为进一步的方案，本发明所述的防治肺纤维化的药物还包含葡萄糖溶液或生理盐水

作为进一步的方案，本发明所述的防治肺纤维化的药物为粉剂、注射针剂或口服液中的一种。

本发明所采用的鲎素肽是通过以下方法制备而成：

1)从鲎血细胞的裂解产物或鲎试剂生产的废料中用20mmol/L HCl溶液匀浆制备成粗制液；

2)将步骤1)所得粗制液用8000转/分钟离心15分钟，收集上清液，将上清液用三层纱布过滤，用葡聚糖G-50(Sephadex G-50)(1.5cm×90cm)分离，20mmol/L HCl溶液洗脱，流速1.0mL/min，洗脱峰有三组，收集第三组洗脱产物，调节溶液酸碱度至pH6.0～7.0，10000转/分钟离心15分钟，上清液冷冻干燥备用；高效液相色谱分离纯化，经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实是单一电泳条带，分子量约在2KDa。

本发明所述的鲎素肽用于防止肺纤维化时，可在室温条件下使用，剂量为：1-10mg/kg/每天，服用35天以上；按蛋白多肽组份类食品或药物的条件使，同时可参照目前市面的防治肺纤维化药物的适用范围。

以下是本发明具体的实施例，在下述实施例中所采用的原料、试剂等除在本发明中有特殊限定的，均为现有技术。

实施例1

将鲎素肽与葡萄糖溶液制成口服液，其中鲎素肽的浓度为1-10mg/kg，每天口服一次。

实施例2

将鲎素肽与生理盐水制成注射针剂，其中鲎素肽的浓度为1-10mg/kg，每天注射一次。

实施例3

将鲎素肽与糖皮质激素联合使用，服用糖皮质激素后，口服浓度为1-10mg/kg的鲎素肽口服液。

效果评价

1.评价方法

动物及分组SPF级KM小鼠，22g±2g，60只，雌性。小鼠随机数字表法分为对照组、模型组、糖皮质激素组(5mg/kg)和鲎素肽低(1mg/kg)中(5mg/kg)、高(10mg/kg)剂量组，每组10只。用1％戊巴比妥钠按照50mg/Kg的剂量腹腔注射麻醉小鼠后，仰卧固定于操作台，用镊子拉出舌头暴露气管，在冷光源放大镜下缓慢注入5mg/kg博莱霉素。注射完毕后迅速竖起鼠板，旋转3分钟，使药液在肺内均匀分布，对照组同前方法气管内注入等体积等渗盐水，10天后开始以0.1ml/10g进行灌胃给药，对照组及模型组灌胃等体积的等渗盐水，其余各组灌胃相应剂量的药物，连续给药至35天，每天1次；给药35天后将小鼠麻醉取血处死，分离得到完整的两肺组织，称重，取右肺上叶同一部位，用4％的多聚甲醛固定48小时，石蜡切片，进行苏木精-伊红染色法(HE)染色供组织病理学观察，记过参见图1-图5；取左肺中叶同一部位进行肺组织HYP含量的检测，收集血浆，检测T-SOD、MDA、GSH-PX含量。统计学分析应用SPSS 17.0软件进行统计分析，计量资料用均数±标准差

表示，多个样本均数的比较采用单因素方差分析，组间比较采用t检验，以P≤0.05表示为差异有统计学意义。

2.结果与分析

1)小鼠肺组织HYP含量分析

各组小鼠肺组织HYP含量

与对照组相比，各组小鼠肺组织HYP含量上升(P<0.01)；与模型组相比，各组HYP含量明显下降(P<0.01)。结果见表1。

表1：小鼠肺组织HYP含量分析

表1与正常组比较：*P<0.01；与模型组比较：#p<0.01

2)小鼠血浆T-SOD、MDA、GSH-PX含量分析

各组小鼠血浆T-SOD、MDA、GSH-PX含量

与对照组相比，模型、低中、高剂量组小鼠血浆MDA含量上升(P<0.01)；与对照组相比，各组小鼠血浆T-SOD、GSH-PX含量下降(P<0.01)。与模型组相比，各组小鼠血浆MDA含量明显下降(P<0.01)；与模型组相比，各组小鼠血浆T-SOD、GSH-PX含量上升(P<0.01)。见表2。

表2：小鼠血浆T-SOD、MDA、GSH-PX含量分析

表2与正常组比较：*P<0.01；与模型组比较：#p<0.01,

3)肺组织病理变化分析

注射BLM 4W后，肺泡结构紊乱，肺泡壁增厚，部分肺泡塌陷融合，并有炎性细胞浸润，可见细胞外基质大量沉积，成纤维细胞过度增殖，肺组织可见大片实变，纤维化程度严重；治疗组肺泡结构破坏，肺泡腔缩小，肺组织炎性细胞浸润较少，纤维组织增生减弱，肺组织实变少，较模型组有明显差异。

上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。

Claims (6)

1.一种鲎素肽在制备防治肺纤维化药物中的应用，其特征在于，鲎素肽为所制备的防治肺纤维化药物的有效成分。

2.根据权利要求1所述的一种鲎素肽在制备防治肺纤维化药物中的应用，其特征在于，鲎素肽作为防治肺纤维化药物前体改造。

3.根据权利要求1所述的一种鲎素肽在制备防治肺纤维化药物中的应用，其特征在于，所制备的防治肺纤维化药物，可以单独使用；或者与生理盐水或葡萄糖溶液配合成组合物使用；或者与其他治疗肺纤维化药物联合使用。

4.根据权利要求1所述的一种鲎素肽在制备防治肺纤维化药物中的应用，其特征在于，所制备的防治肺纤维化药物中，鲎素肽的用量为1mg/kg-10mg/kg。

5.根据权利要求4所述的一种鲎素肽在制备防治肺纤维化药物中的应用，其特征在于，所制备的防治肺纤维化药物中，鲎素肽的用量为4mg/kg-6mg/kg。

6.根据权利要求1所述的一种鲎素肽在制备防治肺纤维化药物中的应用，其特征在于，所制备的防治肺纤维化药物为粉剂、注射针剂或口服液中的一种。

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