CN107586815B - 一种酵母蛋白胨及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物制品技术领域，具体涉及一种酵母蛋白胨及其制备方法和应用。所述酵母蛋白胨中总氮含量为13‑14.5％，氨基酸态氮的含量为2.0‑4.5％，蛋白胨含量为35‑60％，所述蛋白胨的分子量为500‑3000D。酵母蛋白胨的制备方法包括：(1)酵母浆料预处理：将酵母浆料在碱性条件下处理；(2)自溶酶解过程：向酵母浆料中加入蛋白酶进行自溶酶解，得到酶解液；(3)分离得到酵母蛋白胨。将本发明所述酵母蛋白胨应用到生物发酵领域，能提高生物发酵行业的生产效率，缩短发酵时间，提高发酵效价，降低客户的生产成本。

Description

一种酵母蛋白胨及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及生物制品技术领域，尤其涉及酵母蛋白胨的制备技术领域，具体涉及一种酵母蛋白胨及其制备方法和应用。

背景技术

酵母蛋白胨(yeast peptone)，是采用新鲜酵母为原料，利用现代生物技术手段外加某些外源酶类在适宜的条件下对酵母蛋白质进行降解，再经过一些精制工序得到的粉状、膏状或液体状的产品。它富含蛋白质、氨基酸类、肽类、核苷酸、B族维生素、微量元素，主要作用是提供微生物生长所需的氮源，各种维生素、氨基酸及生长因子，广泛用于发酵培养基行业，是一种新型的、清洁的、高效的有机氮源。

酵母蛋白胨是由安琪酵母股份有限公司首先发明的有机氮源，工艺步骤是：新鲜酵母乳调浆、自溶、酶解、离心分离、膜过滤富集以及浓缩干燥的步骤；其中所述酵母蛋白胨的分子量分布为500～3000Da，但是通过先前的工艺制备得到的酵母蛋白胨，其总氮含量和/或蛋白胨的含量较低，营养价值有待提高。

酵母蛋白胨与酵母浸出物的生产工艺的差别主要在于酵母自溶过程中酶解工艺，酶、温度等不一样，导致最终产品的分子量分布不一样。

发明内容

本发明人锐意研究后发现：现在市面上的酵母蛋白胨的总氮含量较低，基本上低于固形物含量的12.5％，虽然也有报道称酵母蛋白胨含量达到13％或以上，但是其在提高酵母蛋白胨总氮含量的同时，酵母蛋白胨中蛋白胨的含量却不高，造成营养价值不高，而蛋白胨是维持微生物对数期和稳定期的营养物质，普通酵母蛋白胨的蛋白胨含量低，微生物生长过快，出现只长菌而不产代谢表达产物的问题，因此需要开发总氮含量和蛋白胨含量均较高的酵母蛋白胨对发酵培养基领域至关重要。即，本发明解决的技术问题是：目前，普通酵母蛋白胨的总氮含量和/或蛋白胨含量较低，达不到动物源蛋白胨所具有的高蛋白质含量的要求。本发明通过对普通酵母蛋白胨的制备方法进行改进，得到了一种高蛋白酵母蛋白胨产品，其蛋白质含量达到了与动物源蛋白胨具有的高蛋白质水平。

本发明的目的在于通过对酵母蛋白胨的制备方法进行改进，得到了一种高蛋白含量的酵母蛋白胨，本发明所述酵母蛋白胨的生产方法，显著提高了酵母蛋白胨中的总氮含量和胨含量，打破了普通酵母蛋白胨总氮含量和/或胨含量较低的问题，能够提高生物发酵行业的生产效率，对微生物发酵行业具有重大的影响。

具体来说，针对现有技术的不足，本发明提供了如下技术方案：

一方面，本发明提供了一种酵母蛋白胨，所述酵母蛋白胨的总氮含量为13-14.5％，氨基酸态氮含量为2.0-4.5％，所述蛋白胨含量为35-60％，所述蛋白胨的分子量为500-3000Da。

优选的，所述酵母蛋白胨的总氮含量为13.8-14.5％；蛋白胨含量为40-60％。

更优选的，所述酵母蛋白胨的蛋白胨含量为50-60％。

另一方面，本发明提供了一种酵母蛋白胨的制备方法，包括如下步骤：

(1)酵母浆料预处理：将酵母浆料在碱性条件下处理；

(2)自溶酶解过程：向酵母浆料中加入蛋白酶进行自溶酶解，得到酶解液；

(3)分离得到酵母蛋白胨。

优选的，步骤(1)中酵母浆料预处理温度为45-55℃，pH值为10.0-12.0。

优选的，步骤(2)中所述蛋白酶占酵母干物质的质量浓度为0.2-0.8％。

优选的，步骤(2)中所述蛋白酶选自酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶中的一种或几种。

更优选的，步骤(2)中所述蛋白酶为木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、组织蛋白酶中的一种或几种。

优选的，步骤(2)中自溶酶解的温度为50-65℃、pH值为5.5-6.0，酶解时间为16-20小时。

优选的，步骤(3)进行离心分离，所述离心分离步骤包括：将酶解液在5000-10000rpm离心5-10min，得到离心上清液。

优选的，步骤(3)分离之后还包括浓缩步骤，所述浓缩步骤包括：将离心上清液在≤65℃浓缩，得到干基40-50％的浓缩液。

优选的，步骤(3)中分离之后还包括干燥步骤，所述干燥步骤包括：将浓缩液进行喷雾干燥，得到干基≥94％的酵母蛋白胨。

优选的，所述浓缩步骤之前还包括将离心上清液采用膜过滤器进行过滤，所述膜过滤器平均粒径为10μm-15μm。

优选的，酵母蛋白胨的原料来源于高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母，以干重计，所述高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母的蛋白质含量为55％-58％。

优选的，所述酵母浆料的制备过程包括如下步骤：

(1)脱色预处理过程：加水洗涤酵母发酵液，去糖脱色，得到酵母乳；

(2)制浆：将酵母乳加水调配成干物质重量含量为10％-15％的酵母悬浮液，然后控制温度为5-15℃，调节PH值为3.6-4.2，得到酵母浆料。

优选的，以干重计，所述酵母悬浮液的蛋白含量为57％-62％。

优选的，所述酵母发酵液通过包括下述步骤的方法得到：

(1)采用酵母制备酵母种子液；

(2)调节培养基PH为4.0-4.5，加入酵母种子液，在30-35℃下发酵得到所述酵母发酵液。

优选的，所述培养基包括碳源和氮源，其中，所述碳源为糖蜜，所述氮源包括15wt％-18wt％的氨水、10wt％-15wt％的磷酸二氢铵，和酵母浸粉；所述氨水和磷酸二氢铵的体积比为2-4:1。

更优选的，所述碳源为25wt％-35wt％的糖蜜。

本发明还提供了一种酵母蛋白胨，所述酵母蛋白胨采用以上任一项所述的制备方法制备而成。

同时，本发明还提供了以上所述的酵母蛋白胨在微生物发酵领域中的应用。

与现有技术相比，本发明的效果和益处在于：本发明所制备得到的酵母蛋白胨中总氮含量为13-14.5％，氨基酸态氮的含量为2.0-4.5％，蛋白胨(500-3000D)含量为35-60％。将本发明所述的制备方法应用到生产生物发酵专用的酵母蛋白胨工艺中，得到的是浅黄色至褐色的具有酵母的鲜香味的粘稠半流体、膏状体或粉体。提高生物发酵行业的生产效率，缩短发酵时间，提高发酵效价，降低客户的生产成本。

具体实施方式

为解决普通酵母蛋白胨总氮含量和/或蛋白胨含量较低的问题，本发明提供一种高总氮高蛋白的酵母蛋白胨及其制备方法和应用。

本发明在自溶酶解之前对酵母浆料进行了预处理，碱性条件下处理酵母浆料可以使酵母细胞壁通透性变大，而且在酶解之前不加入表面活性剂或不再进行其他处理，仅在碱性条件下处理，可以省去去除表面活性剂的过程，节省处理时间。

本发明采用蛋白酶进行处理，酶浓度为酵母干物质的0.2％-0.8％(wt)。

具体地，一种优选的实施方式中，本发明所述酵母蛋白胨的制备方法包括下述方案：

新鲜酵母乳→酸碱处理→过滤→重相重调酵母乳悬浮液→酶解→离心去壁→浸出上清液→过滤→减压压缩→喷雾干燥→高蛋白酵母蛋白胨成品

其中，所述酵母蛋白胨的原料酵母是以糖蜜为培养基专门培养的酿酒酵母或假丝酵母，培养过程包括下述步骤：

1.用酿酒酵母制备酿酒酵母种子液；

2.调节培养基pH为4.0-4.5，加入酿酒酵母种子液，在30-35℃下发酵得到所述酵母发酵液。

本发明另一种优选的实施方式中，所述酵母蛋白胨制备方法的工艺参数为：

预处理温度：45-55℃，处理时间：1-3小时；自溶酶解温度：50-65℃，自溶酶解作用时间：16-20小时，自溶酶解pH 5.5-6.0。其中，添加外源酶为蛋白酶(添加量控制：酶的浓度达到0.5wt％)，在自溶阶段开始的第0-1小时加入；浓缩阶段温度不高于65℃，超过该范围容易产生因美拉德反应引起的颜色反应，最终降低酵母浸出物色泽要求。

本发明另一种优选的实施方式中，本发明所述酵母蛋白胨的制备方法包括下述步骤：高蛋白酵母乳定溶干物质10-15％，升温50-65℃，加入蛋白酶，整个自溶酶解达16-20小时，分离，蒸发、干燥。

通过本发明所述制备方法制备得到的酵母蛋白胨可达到以下感官质量、理化指标和微生物指标，具体如下所述：

1.感官质量

颜色：棕褐色(液体、膏体)、浅黄至黄色(粉体)；

香气：肉香浓郁，无其他不良气味；

口味：鲜味强烈，味醇厚，无苦味等异味。

2.理化指标

表1本发明所述酵母蛋白胨的理化指标

3.微生物指标

表2本发明所述酵蛋白胨的微生物指标

本发明经过了严格的前期试验，证明该方法切实可行。

由此可知，本发明所述制备方法可提高酵母蛋白胨的总氮含量和蛋白胨含量，此生产工艺可打破普通酵母浸出物或普通酵母蛋白胨总氮含量和/或蛋白胨含量较低的问题，提高生物发酵行业的生产效率。

下面通过具体实施例来进一步说明本发明所述酵母蛋白胨的制备方法。本发明所用到的酵母原料，包括啤酒酵母，假丝酵母或者酿酒酵母等，本发明所用到的酵母原料均可以通过商购得到。

以下的实施例中，所用试剂的厂家和规格如表3所示。

表3本发明制备酵母蛋白胨所用原料及厂家信息

实施例一

制备高蛋白的酵母蛋白胨粉体，步骤如下：

1.以糖蜜为培养基专门培养酿酒酵母

(1)制备酿酒酵母种子液

称取5g酿酒酵母，加入50mL 2wt％的葡萄糖溶液，在28℃活化30min，得到酿酒酵母种子液。

(2)制备酵母发酵液

以30wt％的糖蜜为碳源，以16wt％的氨水、10wt％的磷酸二氢铵以及酵母浸粉为混合氮源，加入到50L发酵罐中配成30L培养基，其中，所述氨水和磷酸二氢铵体积比为2:1，酵母浸出粉的添加量为培养基总重量的2％，最终培养基中碳氮比为10:1。用硫酸调节pH至4.0。在上述培养基中加入300mL酿酒酵母种子液，30℃发酵24h，得到酵母发酵液。

2.酵母发酵液预处理

向上述发酵液中加入水，水洗直至无糖色，离心分离，重复操作两次，直至达到色度为30，得到酵母乳。

3.酵母乳调浆

在10℃下，向酵母乳中加水调配成酵母干物质重量含量为10％的酵母悬浮液，用乳酸将其pH值调至3.6，得到酵母浆料。

4.酵母浆料预处理

将酵母浆料升温至50℃，调节pH为10.0，搅拌2h，在10μm的膜过滤器(厂家：海宁市正大过滤设备有限公司)过滤处理，取截留相调成干物质重量含量10％的酵母浆料。

5.自溶酶解阶段

将酵母浆料温度升高至65℃，调节pH为6.0，添加木瓜蛋白酶，使酶占酵母干物质的浓度达到0.2wt％，自溶酶解18h，得到酶解液。

6.调浆

将酶解产物离心分离，得到沉淀物，向沉淀物中加入水，使酵母蛋白胨干物质重量含量为8％，在5000r/min条件下离心10min，得到上清液。

7.精制阶段

用平均粒径为10μm的膜过滤器过滤上清液，得到分子量为5000Da以下的酵母蛋白胨。

8.浓缩阶段

在65℃下浓缩上述酵母蛋白胨，浓缩至干物质质量浓度40wt％。

9.干燥阶段

将上述的液状酵母蛋白胨在喷雾干燥塔中干燥，得到水分小于6％的粉体酵母蛋白胨。

10.粉状酵母蛋白胨成品各项指标检测

(1)水分的测定

采用国家标准GB/T 23530-2009中6.2的方法，取一定质量的样品，在103℃下烘干4小时至恒重，称重计算得到水分的含量。

(2)总氮的测定

采用国家标准GB/T 23530-2009中6.4的凯式定氮法：取样品(相当于总氮30mg-40mg)，在混合催化剂a(硫酸钾与无水硫酸铜按97:3比例混合)5g和催化剂b(硒粉与硫酸钾按0.1:100比例混合)2.5g作用下，加入20ml浓硫酸进行消煮；再进行蒸馏，用硼酸吸收产物氨；再用0.1mol/L的盐酸滴定，读取数据，计算得到总氮含量，用总氮量×6.25，计算得到粗蛋白含量。

(3)氨氮的测定

采用国家标准GB/T 23530-2009中6.5所述的氨基酸态氮的检测方法：取5g样品，稀释后用0.5mol/L的氢氧化钠溶液滴定至pH为8.20，并保持1min。缓慢加入36％的甲醛溶液10mL，与中性氨基酸中的非解离型氨基反应，生成单羟甲基和二羟甲基诱导体，此反应完全定量进行。此时放出的氢离子用上述氢氧化钠滴定，根据碱液的消耗量，计算出氨基态氮的含量。

(4)灰分的测定

采用国家标准GB/T 23530-2009中6.8的方法：样品经550℃灼烧后所残留的物质，以百分数表示，即为该样品的灰分。

(5)蛋白胨含量的测定

采用安琪酵母公司企业标准检测。HP1050高效液相色谱仪，配有多波长紫外检测器及色谱数据处理***。色谱柱：TSk3000SW(7.5×600)。

流速：0.6mL/min；流动相：PH6.86磷酸缓冲液+0.1mol/LNa₂SO₄+0.5％(v/v)NaN₃，检测波长为280nm。

分子量计算方法：对保留体积与分子量对数值进行线性回归，得回归方程。将待测蛋白质的保留体积代入方程，求出分子量。

由上述检测方法检测得到本实施例所用酵母发酵液中的蛋白质重量含量为58.2％，本实施例所得粉体高蛋白酵母蛋白胨关键参数的结果如下：

表4实施例一所述酵母蛋白胨的关键参数(wt％)

由表4可以看出，本实施例制备得到的酵母蛋白胨总氮含量可达13.2％，氨氮含量可达2.9％，胨含量可达52.15％，由此可预测，将本实施例所述酵母蛋白胨应用与生物发酵领域，将为微生物提供丰富的营养。

实施例二

制备高蛋白的酵母蛋白胨粉体，步骤如下：

1.以糖蜜为培养基专门培养酿酒酵母

(1)制备酿酒酵母种子液

称取5g酿酒酵母，加入50mL 2wt％的葡萄糖溶液，在28℃活化30min，得到酿酒酵母种子液。

(2)制备酵母发酵液

以35wt％的糖蜜为碳源，以18wt％的氨水、15wt％的磷酸二氢铵以及酵母浸粉为混合氮源，加入到50L发酵罐中配成30L培养基，其中，所述氨水和磷酸二氢铵体积比为4:1，酵母浸出粉的添加量为培养基总重量的5％，最终培养基中碳氮比为8:1。用硫酸调节pH至4.0。在上述培养基中加入300mL酿酒酵母种子液，30℃发酵24h，得到酵母发酵液。

2.酵母发酵液预处理

向上述发酵液中加入水，水洗直至无糖色，离心分离，重复操作两次，直至达到色度为30，得到酵母乳。

3.酵母乳调浆

在10℃下，向酵母乳中加水调配成酵母干物质重量含量为15％的酵母悬浮液，用乳酸将其pH值调至4.2，得到酵母浆料。

4.酵母浆料预处理

将酵母浆料升温至45℃，调节pH为12.0，搅拌3h，在15μm的膜过滤器过滤处理，取截留相调成干物质重量含量15％的酵母浆料。

5.自溶酶解阶段

将酵母浆料温度升高至50℃，调节pH为5.5，添加碱性蛋白酶，使酶占酵母干物质的浓度达到0.8wt％，自溶酶解16h，得到酶解液。

6.调浆

将酶解产物离心分离，得到沉淀物，向沉淀物中加入水，使酵母蛋白胨干物质重量含量为10％，在10000r/min条件下离心5min，得到上清液。

7.精制阶段

用平均粒径为15μm的膜过滤器过滤上清液，得到分子量为5000Da以下的酵母蛋白胨。

8.浓缩阶段

在65℃下浓缩上述酵母蛋白胨，浓缩至干物质质量浓度50wt％。

9.干燥阶段

将上述的液状酵母蛋白胨在喷雾干燥塔中干燥，得到水分小于6％的粉体酵母蛋白胨。

实施例三

制备高蛋白的酵母蛋白胨粉体，步骤如下：

1.以糖蜜为培养基专门培养酿酒酵母

(1)制备酿酒酵母种子液

称取5g酿酒酵母，加入50mL 2wt％的葡萄糖溶液，在28℃活化30min，得到酿酒酵母种子液。

(2)制备酵母发酵液

以25wt％的糖蜜为碳源，以15wt％的氨水、10wt％的磷酸二氢铵以及酵母浸粉为混合氮源，加入到50L发酵罐中配成30L培养基，其中，所述氨水和磷酸二氢铵体积比为3:1，酵母浸出粉的添加量为培养基总重量的4％，最终培养基中碳氮比为12:1。用硫酸调节pH至4.0。在上述培养基中加入300mL酿酒酵母种子液，30℃发酵24h，得到酵母发酵液。

2.酵母发酵液预处理

向上述发酵液中加入水，水洗直至无糖色，离心分离，重复操作两次，直至达到色度为30，得到酵母乳。

3.酵母乳调浆

在10℃下，向酵母乳中加水调配成酵母干物质重量含量为10％的酵母悬浮液，用乳酸将其pH值调至3.6，得到酵母浆料。

4.酵母浆料预处理

将酵母浆料升温至55℃，调节pH为11.0，搅拌1h，在10μm的膜过滤器过滤处理，取截留相调成干物质重量含量10％的酵母浆料。

5.自溶酶解阶段

将酵母浆料温度升高至55℃，调节pH为6.0，添加中性蛋白酶，使酶占酵母干物质的浓度达到0.6wt％，自溶酶解20h，得到酶解液。

6.调浆

将酶解产物离心分离，得到沉淀物，向沉淀物中加入水，使酵母蛋白胨干物质重量含量为8％，在8000r/min条件下离心8min，得到上清液。

7.精制阶段

用平均粒径为10μm的膜过滤器过滤上清液，得到分子量为5000Da以下的酵母蛋白胨。

8.浓缩阶段

在65℃下浓缩上述酵母蛋白胨，浓缩至干物质质量浓度45wt％。

9.干燥阶段

将上述的液状酵母蛋白胨在喷雾干燥塔中干燥，得到水分小于6％的粉体酵母蛋白胨。

实施例四

制备高蛋白的酵母蛋白胨粉体，步骤如下：

1.按照实施例一相同的方法培养酿酒酵母，得到酵母发酵液。

2.按照实施例一相同的方法对酵母发酵液进行预处理，得到酵母乳。

3.按照实施例一相同的方法对酵母乳调浆，得到酵母浆料。

4.酵母浆料预处理

将酵母浆料升温至50℃，调节pH为10.0，搅拌2h，在10μm的膜过滤器过滤处理，取截留相调成干物质重量含量10％的酵母浆料。

5.自溶酶解阶段

将酵母浆料温度升高至60℃，调节pH为6.0，添加酸性蛋白酶，使酶占酵母干物质的浓度达到0.5wt％，自溶酶解18h，得到酶解液。

6.按照实施例一相同的方法进行调浆、精制、浓缩和干燥，得到水分小于6％的酵母蛋白胨粉体。

对比例一

制备酵母蛋白胨粉体，步骤如下：

1.以糖蜜为培养基专门培养酿酒酵母

(1)制备酿酒酵母种子液

称取5g酿酒酵母，加入50mL 2wt％的葡萄糖溶液，在28℃活化30min，得到酿酒酵母种子液。

(2)制备酵母发酵液

以40wt％的糖蜜为碳源，以10wt％的氨水、8wt％的磷酸二氢铵、和酵母浸粉为混合氮源，加入到50L发酵罐中配成30L培养基，其中，所述氨水和磷酸二氢铵体积比为5:1，酵母浸出粉的添加量为培养基总重量的8％，最终培养基中碳氮比为10:1。用硫酸调节pH至4.0。在上述培养基中加入300mL酿酒酵母种子液，30℃发酵24h，得到酵母发酵液。

2.酵母发酵液预处理

向上述发酵液中加入水，水洗直至无糖色，离心分离，重复操作两次，直至达到色度为30，得到酵母乳。

3.酵母乳调浆

在10℃下，向酵母乳中加水调配成酵母干物质重量含量为15％的酵母悬浮液，用乳酸将其pH值调至3.6，得到酵母浆料。

4.酵母浆料预处理

将酵母浆料升温至35℃，调节pH为9.0，搅拌5h，在10μm的膜过滤器过滤处理，取截留相调成干物质重量含量10％的酵母浆料。

5.自溶酶解阶段

将酵母浆料温度升高至45℃，调节pH为5.0，添加碱性蛋白酶，使酶占酵母干物质的浓度达到0.1wt％，自溶酶解30h，得到酶解液。

6.按照实施例一相同的方法进行调浆、精制、浓缩和干燥，得到水分小于6％的粉体酵母蛋白胨。

对比例二

制备酵母蛋白胨粉体，步骤如下：

1.以糖蜜为培养基专门培养酿酒酵母

(1)制备酿酒酵母种子液

称取5g酿酒酵母，加入50mL 2wt％的葡萄糖溶液，在28℃活化30min，得到酿酒酵母种子液。

(2)制备酵母发酵液

以20wt％的糖蜜为碳源，以20wt％的氨水、20wt％的磷酸二氢铵、和酵母浸粉为混合氮源，加入到50L发酵罐中配成30L培养基，其中，所述氨水和磷酸二氢铵体积比为1:1，酵母浸出粉的添加量为培养基总重量的1％，最终培养基中碳氮比为10:1。用硫酸调节pH至4.0。在上述培养基中加入300mL酿酒酵母种子液，30℃发酵24h，得到酵母发酵液。

2.酵母发酵液预处理

向上述发酵液中加入水，水洗直至无糖色，离心分离，重复操作两次，直至达到色度为30，得到酵母乳。

3.酵母乳调浆

在10℃下，向酵母乳中加水调配成酵母干物质重量含量为10％的酵母悬浮液，用乳酸将其pH值调至4.2，得到酵母浆料。

4.酵母浆料预处理

将酵母浆料升温至60℃，调节pH为12.0，搅拌3h，在10μm的膜过滤器过滤处理，取截留相调成干物质重量含量10％的酵母浆料。

5.自溶酶解阶段

将酵母浆料温度升高至55℃，调节pH为4.5，添加碱性蛋白酶，使酶占酵母干物质的浓度达到1wt％，自溶酶解12h，得到酶解液。

6.按照实施例一相同的方法进行调浆、精制、浓缩和干燥，得到水分小于6％的粉体酵母蛋白胨。

对比例三

制备酵母蛋白胨粉体，步骤如下：

1.按照实施例一相同的方法培养酿酒酵母，得到酵母发酵液。

2.按照实施例一相同的方法对酵母发酵液进行预处理，得到酵母乳。

3.按照实施例一相同的方法对酵母乳调浆，得到酵母浆料。

4.自溶酶解阶段

对酵母浆料不进行预处理，直接进行自溶酶解。将酵母浆料温度升高至50℃，调节pH为5.5，添加木瓜蛋白酶，使酶占酵母干物质的浓度达到0.8wt％，自溶酶解16h，得到酶解液。

6.按照实施例一相同的方法进行调浆、精制、浓缩和干燥，得到水分小于6％的酵母蛋白胨粉体。

对比例四

制备酵母蛋白胨粉体，步骤如下：

1.按照实施例一相同的方法培养酿酒酵母，得到酵母发酵液。

2.按照实施例一相同的方法对酵母发酵液进行预处理，得到酵母乳。

3.按照实施例一相同的方法对酵母乳调浆，得到酵母浆料。

4.酵母浆料预处理

将酵母浆料升温至45℃，调节pH为12.0，搅拌3h，在10μm的膜过滤器过滤处理，取截留相调成干物质重量含量10％的酵母浆料。

5.自溶酶解阶段

将酵母浆料温度升高至55℃，调节pH为5.5，添加胰蛋白酶，使酶占酵母干物质的浓度达到0.6wt％，自溶酶解20h，得到酶解液。

6.按照实施例一相同的方法进行调浆、精制、浓缩和干燥，得到水分小于6％的酵母蛋白胨粉体。

其中，表5列出了实施例二、三、四以及对比例一、二、三、四所制得的酵母蛋白胨经过实施例一的测定方法所测得的结果。

表5实施例二～四以及对比例一～四所述酵母蛋白胨的关键参数(wt％)

从表4以及表5的检测结果可以看出，采用本发明的制备方法制得的酵母蛋白胨，其总氮含量和蛋白胨含量均较高，普遍高于对比例一到四制得的酵母蛋白胨的总氮含量和蛋白胨含量，尤其是对比例三对酵母浆料不进行预处理，而直接进行自溶酶解，制得的酵母蛋白胨的总氮含量仅为10.2％，本发明通过对酵母浆料进行碱性预处理以及自溶酶解，得到高总氮含量和高蛋白胨含量的酵母蛋白胨，将极大的应用于微生物发酵领域，维持微生物对数期和稳定期的营养需求，既能满足菌体量的需求，也能满足代谢表达的需要，具有重要的价值。

以上所述仅为本发明较佳实施例，并不用于局限本发明，凡在本发明的精神和原则之内所做的修改、等同替换和改进等，均需要包含在本发明的保护范围之内。

Claims (61)

1.一种酵母蛋白胨，其特征在于，所述酵母蛋白胨的总氮含量为13-14.5%，氨基酸态氮含量为2.0-4.5%，所述蛋白胨含量为40-60%，所述蛋白胨的分子量为500-3000Da；其中，所述蛋白胨的制备方法包括如下步骤：

（1）酵母浆料预处理：将酵母浆料在碱性条件下处理；

（2）自溶酶解过程：向酵母浆料中加入蛋白酶进行自溶酶解，得到酶解液；

（3）分离得到酵母蛋白胨；

其中，步骤（1）中酵母浆料预处理温度为45-55℃，pH值为10.0-12.0；

步骤（2）中所述蛋白酶占酵母干物质的质量浓度为0.2-0.8%；

步骤（2）中所述蛋白酶选自酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶中的一种或几种；

步骤（2）中自溶酶解的温度为50-65℃；pH值为5.5-6.0，酶解时间为16-20小时。

2.根据权利要求1所述的酵母蛋白胨，其特征在于，所述酵母蛋白胨的总氮含量为13.8-14.5%；蛋白胨含量为50-60%。

3.一种权利要求1所述的酵母蛋白胨的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）酵母浆料预处理：将酵母浆料在碱性条件下处理；

（2）自溶酶解过程：向酵母浆料中加入蛋白酶进行自溶酶解，得到酶解液；

（3）分离得到酵母蛋白胨。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中酵母浆料预处理温度为45-55℃，pH值为10.0-12.0。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述蛋白酶占酵母干物质的质量浓度为0.2-0.8%。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述蛋白酶占酵母干物质的质量浓度为0.2-0.8%。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述蛋白酶选自酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶中的一种或几种。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述蛋白酶选自酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶中的一种或几种。

9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述蛋白酶选自酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶中的一种或几种。

10.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述蛋白酶为木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、组织蛋白酶中的一种或几种。

11.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述蛋白酶为木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、组织蛋白酶中的一种或几种。

12.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述蛋白酶为木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、组织蛋白酶中的一种或几种。

13.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中自溶酶解的温度为50-65℃、pH值为5.5-6.0，酶解时间为16-20小时。

14.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中自溶酶解的温度为50-65℃、pH值为5.5-6.0，酶解时间为16-20小时。

15.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中自溶酶解的温度为50-65℃、pH值为5.5-6.0，酶解时间为16-20小时。

16.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中自溶酶解的温度为50-65℃、pH值为5.5-6.0，酶解时间为16-20小时。

17.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中自溶酶解的温度为50-65℃、pH值为5.5-6.0，酶解时间为16-20小时。

18.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中自溶酶解的温度为50-65℃、pH值为5.5-6.0，酶解时间为16-20小时。

19.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）进行离心分离，所述离心分离步骤包括：将酶解液在5000-10000rpm离心5-10min，得到离心上清液。

20.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）进行离心分离，所述离心分离步骤包括：将酶解液在5000-10000rpm离心5-10min，得到离心上清液。

21.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）进行离心分离，所述离心分离步骤包括：将酶解液在5000-10000rpm离心5-10min，得到离心上清液。

22.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）进行离心分离，所述离心分离步骤包括：将酶解液在5000-10000rpm离心5-10min，得到离心上清液。

23.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）进行离心分离，所述离心分离步骤包括：将酶解液在5000-10000rpm离心5-10min，得到离心上清液。

24.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）进行离心分离，所述离心分离步骤包括：将酶解液在5000-10000rpm离心5-10min，得到离心上清液。

25.根据权利要求13所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）进行离心分离，所述离心分离步骤包括：将酶解液在5000-10000rpm离心5-10min，得到离心上清液。

26.根据权利要求19所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）分离之后还包括浓缩步骤，所述浓缩步骤包括：将离心上清液在≤65℃浓缩，得到干基40-50%的浓缩液。

27.根据权利要求26所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中分离之后还包括干燥步骤，所述干燥步骤包括：将浓缩液进行喷雾干燥，得到干基≥94%的酵母蛋白胨。

28.根据权利要求26所述的制备方法，其特征在于，所述浓缩步骤之前还包括将离心上清液采用膜过滤器进行过滤，所述膜过滤器平均粒径为10μm-15μm。

29.根据权利要求27所述的制备方法，其特征在于，所述浓缩步骤之前还包括将离心上清液采用膜过滤器进行过滤，所述膜过滤器平均粒径为10μm-15μm。

30.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，酵母蛋白胨的原料来源于高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母，以干重计，所述高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母的蛋白质含量为55%-58%。

31.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，酵母蛋白胨的原料来源于高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母，以干重计，所述高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母的蛋白质含量为55%-58%。

32.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，酵母蛋白胨的原料来源于高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母，以干重计，所述高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母的蛋白质含量为55%-58%。

33.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，酵母蛋白胨的原料来源于高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母，以干重计，所述高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母的蛋白质含量为55%-58%。

34.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，酵母蛋白胨的原料来源于高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母，以干重计，所述高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母的蛋白质含量为55%-58%。

35.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，酵母蛋白胨的原料来源于高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母，以干重计，所述高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母的蛋白质含量为55%-58%。

36.根据权利要求13所述的制备方法，其特征在于，酵母蛋白胨的原料来源于高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母，以干重计，所述高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母的蛋白质含量为55%-58%。

37.根据权利要求19所述的制备方法，其特征在于，酵母蛋白胨的原料来源于高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母，以干重计，所述高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母的蛋白质含量为55%-58%。

38.根据权利要求26所述的制备方法，其特征在于，酵母蛋白胨的原料来源于高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母，以干重计，所述高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母的蛋白质含量为55%-58%。

39.根据权利要求27所述的制备方法，其特征在于，酵母蛋白胨的原料来源于高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母，以干重计，所述高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母的蛋白质含量为55%-58%。

40.根据权利要求28所述的制备方法，其特征在于，酵母蛋白胨的原料来源于高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母，以干重计，所述高蛋白的酿酒酵母，啤酒酵母或假丝酵母的蛋白质含量为55%-58%。

41.根据权利要求3所述的制备方法， 其特征在于，所述酵母浆料的制备过程包括如下步骤：

（1）脱色预处理过程：加水洗涤酵母发酵液，去糖脱色，得到酵母乳；

（2）制浆：将酵母乳加水调配成干物质重量含量为10%-15%的酵母悬浮液，然后控制温度为5-15℃，调节pH值为3.6-4.2，得到酵母浆料。

42.根据权利要求4所述的制备方法， 其特征在于，所述酵母浆料的制备过程包括如下步骤：

（1）脱色预处理过程：加水洗涤酵母发酵液，去糖脱色，得到酵母乳；

（2）制浆：将酵母乳加水调配成干物质重量含量为10%-15%的酵母悬浮液，然后控制温度为5-15℃，调节pH值为3.6-4.2，得到酵母浆料。

43.根据权利要求5所述的制备方法， 其特征在于，所述酵母浆料的制备过程包括如下步骤：

（1）脱色预处理过程：加水洗涤酵母发酵液，去糖脱色，得到酵母乳；

（2）制浆：将酵母乳加水调配成干物质重量含量为10%-15%的酵母悬浮液，然后控制温度为5-15℃，调节pH值为3.6-4.2，得到酵母浆料。

44.根据权利要求6所述的制备方法， 其特征在于，所述酵母浆料的制备过程包括如下步骤：

（1）脱色预处理过程：加水洗涤酵母发酵液，去糖脱色，得到酵母乳；

（2）制浆：将酵母乳加水调配成干物质重量含量为10%-15%的酵母悬浮液，然后控制温度为5-15℃，调节pH值为3.6-4.2，得到酵母浆料。

45.根据权利要求7所述的制备方法， 其特征在于，所述酵母浆料的制备过程包括如下步骤：

（1）脱色预处理过程：加水洗涤酵母发酵液，去糖脱色，得到酵母乳；

（2）制浆：将酵母乳加水调配成干物质重量含量为10%-15%的酵母悬浮液，然后控制温度为5-15℃，调节pH值为3.6-4.2，得到酵母浆料。

46.根据权利要求10所述的制备方法， 其特征在于，所述酵母浆料的制备过程包括如下步骤：

（1）脱色预处理过程：加水洗涤酵母发酵液，去糖脱色，得到酵母乳；

（2）制浆：将酵母乳加水调配成干物质重量含量为10%-15%的酵母悬浮液，然后控制温度为5-15℃，调节pH值为3.6-4.2，得到酵母浆料。

47.根据权利要求13所述的制备方法， 其特征在于，所述酵母浆料的制备过程包括如下步骤：

（1）脱色预处理过程：加水洗涤酵母发酵液，去糖脱色，得到酵母乳；

（2）制浆：将酵母乳加水调配成干物质重量含量为10%-15%的酵母悬浮液，然后控制温度为5-15℃，调节pH值为3.6-4.2，得到酵母浆料。

48.根据权利要求19所述的制备方法， 其特征在于，所述酵母浆料的制备过程包括如下步骤：

（1）脱色预处理过程：加水洗涤酵母发酵液，去糖脱色，得到酵母乳；

（2）制浆：将酵母乳加水调配成干物质重量含量为10%-15%的酵母悬浮液，然后控制温度为5-15℃，调节pH值为3.6-4.2，得到酵母浆料。

49.根据权利要求26所述的制备方法， 其特征在于，所述酵母浆料的制备过程包括如下步骤：

（1）脱色预处理过程：加水洗涤酵母发酵液，去糖脱色，得到酵母乳；

（2）制浆：将酵母乳加水调配成干物质重量含量为10%-15%的酵母悬浮液，然后控制温度为5-15℃，调节pH值为3.6-4.2，得到酵母浆料。

50.根据权利要求27所述的制备方法， 其特征在于，所述酵母浆料的制备过程包括如下步骤：

（1）脱色预处理过程：加水洗涤酵母发酵液，去糖脱色，得到酵母乳；

（2）制浆：将酵母乳加水调配成干物质重量含量为10%-15%的酵母悬浮液，然后控制温度为5-15℃，调节pH值为3.6-4.2，得到酵母浆料。

51.根据权利要求28所述的制备方法， 其特征在于，所述酵母浆料的制备过程包括如下步骤：

（1）脱色预处理过程：加水洗涤酵母发酵液，去糖脱色，得到酵母乳；

（2）制浆：将酵母乳加水调配成干物质重量含量为10%-15%的酵母悬浮液，然后控制温度为5-15℃，调节pH值为3.6-4.2，得到酵母浆料。

52.根据权利要求30所述的制备方法， 其特征在于，所述酵母浆料的制备过程包括如下步骤：

（1）脱色预处理过程：加水洗涤酵母发酵液，去糖脱色，得到酵母乳；

（2）制浆：将酵母乳加水调配成干物质重量含量为10%-15%的酵母悬浮液，然后控制温度为5-15℃，调节pH值为3.6-4.2，得到酵母浆料。

53.根据权利要求41所述的制备方法，其特征在于，以干重计，所述酵母悬浮液的蛋白含量为57%-62%。

54.根据权利要求41所述的制备方法，其特征在于，所述酵母发酵液通过包括下述步骤的方法得到：

（1）采用酵母制备酵母种子液；

（2）调节培养基pH为4.0-4.5，加入酵母种子液，在30-35℃下发酵得到所述酵母发酵液。

55.根据权利要求53所述的制备方法，其特征在于，所述酵母发酵液通过包括下述步骤的方法得到：

（1）采用酵母制备酵母种子液；

（2）调节培养基pH为4.0-4.5，加入酵母种子液，在30-35℃下发酵得到所述酵母发酵液。

56.根据权利要求54或55所述的制备方法，其特征在于，所述培养基包括碳源和氮源，其中，所述碳源为糖蜜，所述氮源包括15wt%-18wt%的氨水、10wt%-15wt%的磷酸二氢铵，和酵母浸粉；所述氨水和磷酸二氢铵的体积比为2-4:1。

57.根据权利要求54或55所述的制备方法，其特征在于，所述培养基包括碳源和氮源，其中，所述碳源为25wt%-35wt%的糖蜜，所述氮源包括15wt%-18wt%的氨水、10wt%-15wt%的磷酸二氢铵，和酵母浸粉；所述氨水和磷酸二氢铵的体积比为2-4:1。

58.一种酵母蛋白胨，其特征在于，所述酵母蛋白胨采用权利要求3-57中任一项所述的制备方法制备而成。

59.权利要求1所述的酵母蛋白胨在微生物发酵领域中的应用。

60.权利要求2所述的酵母蛋白胨在微生物发酵领域中的应用。

61.权利要求58所述的酵母蛋白胨在微生物发酵领域中的应用。