CN107513086A - 一种从黄芩茎叶中提取分离高纯度野黄芩苷的方法及野黄芩苷 - Google Patents
一种从黄芩茎叶中提取分离高纯度野黄芩苷的方法及野黄芩苷 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种从黄芩茎叶中提取分离高纯度野黄芩苷的方法及野黄芩苷,该方法包括以下步骤:将黄芩茎叶原料粉碎;加入乙醇,加热至沸腾;将提取液过滤后,减压浓缩;将浓缩液加热至沸腾后,调节pH为7至8,趁热过滤;调节滤液pH为1至2,静置后得到棕色沉淀物和土黄色沉淀物,过滤,滤饼先用蒸馏水洗,再用溶剂洗至中性,干燥得到野黄芩苷粗品;加入溶剂及活性炭,加热,将提取液过滤,将滤液浓缩,静置使其析出晶体,过滤后用溶剂洗涤,得到野黄芩苷晶体;向野黄芩苷晶体中加入溶剂,摇匀,调节pH为1至2,静置后过滤,将沉淀物水洗至中性,干燥得到高纯度的野黄芩苷。通过本发明的方法野黄芩苷的提取率大于90%,纯度大于98%。
Description
技术领域
本发明涉及中草药有效成分提取分离技术领域,特别涉及一种从黄芩茎叶中提取分离高纯度野黄芩苷的方法及野黄芩苷。
背景技术
野黄芩苷又名灯盏花乙素,化学名为3',5,6-三羟基-7-O-葡萄糖醛酸苷,分子式为C21H18O12,结构式见式I。
野黄芩苷目前主要从灯盏花中得到,现因灯盏花野生资源不断减少和种植成本的不断增加,因此需要寻找新的替代资源来制备野黄芩苷(灯盏花乙素)。
黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)为唇形科多年生草本植物,黄芩的根是一种草药,该药味苦、性寒,具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效,用于治疗湿温、暑湿、胸闷呕恶、湿热痞满、泻痢、黄疸、肺热咳嗽、高热烦渴、血热吐衄、痈肿疮毒、胎动不安等疾病。目前黄芩主要以其根作为传统药用,而产量数倍于根的茎叶部分被视为非药用部位而被弃去,有研究表明,黄芩茎叶中主要成分为野黄芩苷,将黄芩的茎叶直接丢弃的做法造成药用资源的浪费。
现今存在从黄芩的茎叶中提取野黄芩苷研究多为实验室阶段,尚未进入工业化生产阶段,本发明提供了一种工业化生产野黄芩苷的方法,具有操作工艺简单,成本低,易于工业化生产等优点。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种从黄芩茎叶中提取野黄芩苷的工业化生产方法,该方法提取的野黄芩苷不仅收率高,而且纯度高。
本发明的另一目的是提供一种高纯度的野黄芩苷。
为了实现上述目的,本发明提供一种从黄芩茎叶中提取分离高纯度野黄芩苷的方法,包括以下步骤:(1)将黄芩茎叶原料粉碎,得到原料粗粉末;(2)按照重量比1:4至1:20向原料粗粉末中加入浓度为30%至70%的乙醇,加热至沸腾,得到第一提取液;(3)将第一提取液过滤后得到第一滤液,将第一滤液在温度为60℃至70℃、压强为0.08MPa至0.10MPa的条件下减压浓缩,去除第一滤液中的乙醇,得到野黄芩苷浓缩液;(4)将野黄芩苷浓缩液,用碱金属的弱酸盐溶液调节pH为7至8,过滤,得到第二滤液;(5)向第二滤液中加入酸溶液,调节pH为1至2,然后静置24h至48h,析出棕色沉淀物,倾出上层溶液;(6)将上层溶液静置18h至24h,析出土黄色沉淀物;(7)将棕色沉淀物和土黄色沉淀物合并后过滤,滤饼先用蒸馏水洗,再用第一溶剂洗至中性,然后在50℃至60℃的温度下进行干燥处理,得到野黄芩苷粗品;(8)向野黄芩苷粗品中加入第二溶剂及活性炭,加热,得到第二提取液,将第二提取液过滤,得到第三滤液,将第三滤液浓缩至原体积的60%至80%,静置使其析出晶体,将晶体过滤后用第二溶剂洗涤,得到野黄芩苷晶体;(9)向野黄芩苷晶体中加入第三溶剂,摇匀,加入酸溶液调节pH为1至2,静置后过滤,将沉淀物水洗至中性,干燥得到高纯度的野黄芩苷。
进一步的方案是,步骤(1)中,原料粗粉末的目数为10目至200目。
优选地,步骤(4)中,碱金属的弱酸盐溶液的为碳酸氢钾、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸钠等中的一种或多种的水溶液,碱金属的弱酸盐溶液的浓度范围为10%至30%。
优选地,步骤(5)中,酸溶液为盐酸、硫酸、磷酸等中的一种或几种的水溶液,酸溶液的浓度范围为10%至30%。
优选地,步骤(7)中,第一溶剂为水、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇中的一种或多种混合物。
优选地,步骤(8)中,第二溶剂为水、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等中的一种或多种混合物,活性炭的用量为野黄芩苷粗品的重量的0.1%至20%。
优选地,步骤(9)中,第三溶剂为水、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等中的一种或多种混合物。
优选地,步骤(9)中,酸溶液为盐酸、硫酸、磷酸中的一种或几种的水溶液,酸溶液的浓度范围为10%至30%。
优选地,步骤(9)中获得的高纯度的野黄芩苷的纯度大于98%。
本发明的方法具有操作简单、成本低、易于工业化生产等优点,实验表面,野黄芩苷的提取率达到90%以上,纯度达到98%以上。
为了实现上述另一目的,本发明提供一种野黄芩苷,该野黄芩苷通过以下步骤获得:(1)将黄芩茎叶原料粉碎,得到原料粗粉末;(2)按照重量比1:4至1:20向原料粗粉末中加入浓度为30%至70%的乙醇,加热至沸腾,得到第一提取液;(3)将第一提取液过滤后得到第一滤液,将第一滤液在温度为60℃至70℃、压强为0.08MPa至0.10MPa的条件下减压浓缩,去除第一滤液中的乙醇,得到野黄芩苷浓缩液;(4)将野黄芩苷浓缩液,用碱金属的弱酸盐溶液调节pH为7至8,过滤,得到第二滤液;(5)向第二滤液中加入酸溶液,调节pH为1至2,然后静置24h至48h,析出棕色沉淀物,倾出上层溶液;(6)将上层溶液静置18h至24h,析出土黄色沉淀物;(7)将棕色沉淀物和土黄色沉淀物合并后过滤,滤饼先用蒸馏水洗,再用第一溶剂洗至中性,然后在50℃至60℃的温度下进行干燥处理,得到野黄芩苷粗品;(8)向野黄芩苷粗品中加入第二溶剂及活性炭,加热,得到第二提取液,将第二提取液过滤,得到第三滤液,将第三滤液浓缩至原体积的60%至80%,静置使其析出晶体,将晶体过滤后用第二溶剂洗涤,得到野黄芩苷晶体;(9)向野黄芩苷晶体中加入第三溶剂,摇匀,加入酸溶液调节pH为1至2,静置后过滤,将沉淀物水洗至中性,干燥得到高纯度的野黄芩苷。
具体实施方式
本发明中,野黄芩苷的含量测定方法为:高效液相色谱法(High PerformanceLiquid Chromatography,HPLC),仪器型号为Agilent1260,高效液相色谱的条件如下:
色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5um)。
流动相:以乙腈为流动相A,以甲醇为流动相B,以0.5%甲酸为流动相D,按表1中的规定进行梯度洗脱。
表1
时间/min | 流动相A/% | 流动相B/% | 流动相D/% |
0 | 3 | 5 | 92 |
0~15 | 3→11.5 | 5→15 | 92→73.5 |
15~45 | 11.5→11.5 | 15→15 | 73.5→73.5 |
45~55 | 11.5→3 | 15→5 | 73.5→92 |
柱温:35℃,检测波长:335nm,流速:1mL/min。
下述实施例中,提取率的计算方法为:提取率=黄芩茎中野黄芩苷的含量与得到高纯度野黄芩苷的质量百分比。
下述实施例中,野黄芩苷的纯度计算方法为:采用面积归一化法,即野黄芩苷的峰面积占总峰面积的百分率。
实施例一
本实施例从黄芩茎叶中提取分离高纯度野黄芩苷的方法,包括以下步骤:
(1)将50kg黄芩茎叶(野黄芩苷的含量大约为0.5kg)粉碎至10目至200目,得到黄芩茎叶粗粉末;
(2)按重量比1:8向黄芩茎叶粉末中加入浓度为50%的乙醇,加热至沸腾,提取2次,每次1.5h,合并得到第一提取液;
(3)将上述第一提取液用滤布过滤后得到第一滤液,在温度为60℃、压力为0.08MPa的条件下减压浓缩,去除第一滤液中的乙醇,即得到不含乙醇的野黄芩苷浓缩液;
(4)将野黄芩苷浓缩液,用10%的碳酸钠溶液调节pH值至7,过滤,得第二滤液,弃去沉淀物;
(5)向第二滤液中加入10%的盐酸溶液,调节pH值至1,静置36h,析出棕色沉淀物,倾出上层溶液;
(6)将倾出的上层溶液继续静置18h,析出土黄色沉淀物;
(7)分别取棕色沉淀和土黄色沉淀物合并后过滤,滤饼先用蒸馏水,再用乙酸乙酯洗至中性,得到混合沉淀物,然后在50℃的低温下干燥,即得到野黄芩苷粗品;
(8)向野黄芩苷粗品中加入20倍体积的浓度为95%的乙醇及野黄芩苷粗品重量的1%的活性炭,加热至沸腾,提取1h,得到第二提取液,将第二提取液过滤,得到第三滤液,将第三滤液浓缩至原体积的80%,静置使析出晶体,过滤,将所得晶体用浓度为45%的乙醇洗涤5次,得野黄芩苷晶体;
(9)向上述野黄芩苷晶体中加入10倍体积的浓度为30%至50%的丙酮水溶液,摇匀,加入10%的盐酸调节pH值为2,静置后过滤,将沉淀物水洗至中性,干燥得到0.453kg高纯度的野黄芩苷。
本实施例中野黄芩苷的提取率为90.6%,通过HPLC检测图谱进行纯度分析得到本实施例获得的野黄芩苷的纯度为98.31%,实施例二
本实施例从黄芩茎叶中提取分离高纯度野黄芩苷的方法,包括以下步骤:
(1)将50kg黄芩茎叶(野黄芩苷的含量大约为1.2kg)粉碎至10目至200目,得到黄芩茎叶粗粉末;
(2)按重量比1:15向黄芩茎叶粉末中加入浓度为70%的乙醇,加热至沸腾,提取3次,每次1.5h,合并得到第一提取液;
(3)将上述第一提取液用滤布过滤后得到第一滤液,在温度为65℃,压力为0.10MPa的条件下减压浓缩,去除第一滤液中的乙醇,即得到不含乙醇的野黄芩苷浓缩液;
(4)将野黄芩苷浓缩液,用15%的碳酸氢钠溶液调节pH值至8,过滤,得第二滤液,弃去沉淀物;
(5)向第二滤液中加入10%的硫酸溶液,调节pH值至2,60℃下保温30min,静置48h,析出棕色沉淀物,倾出上层溶液;
(6)将倾出的上层溶液继续静置18h,析出土黄色沉淀物;
(7)分别取棕色沉淀和土黄色沉淀物合并后过滤,滤饼先用蒸馏水,再用乙醇洗至中性,然后在60℃的低温下干燥,即得到野黄芩苷粗品;
(8)向野黄芩苷粗品中加入20倍体积的浓度为85%乙醇及野黄芩苷粗品重量的2%的活性炭,加热至沸腾,提取1h,得到第二提取液,将第二提取液过滤,得到第三滤液,将第三滤液浓缩至原体积的60%,静置使析出晶体,过滤,将所得晶体用浓度为45%的乙醇洗涤5次,得野黄芩苷晶体;
(9)向上述结晶物中加入10倍体积的浓度为30%至50%的丙酮水溶液,摇匀,加入10%的硫酸溶液调节pH值为2,静置后过滤,将沉淀物水洗至中性,干燥得到1.09kg高纯度的野黄芩苷。
本实施例中野黄芩苷的提取率为90.8%,通过HPLC检测图谱进行纯度分析得到本实施例获得的野黄芩苷的纯度为98.53%。
实施例三
本实施例从黄芩茎叶中提取分离高纯度野黄芩苷的方法,包括以下步骤:
(1)将50kg黄芩茎叶(野黄芩苷的含量大约为1.2kg)粉碎至10目至200目,得到黄芩茎叶粗粉末;
(2)按重量比1:10向黄芩茎叶粗粉末中加入浓度为50%的乙醇,加热至沸腾,提取3次,每次1.5h,合并得到第一提取液;
(3)将上述第一提取液用滤布过滤后得到第一滤液,在温度为70℃,压力为0.10MPa的条件下减压浓缩,去除第一滤液中的乙醇,即得到不含乙醇的野黄芩苷浓缩液;
(4)将野黄芩苷浓缩液,用20%的碳酸氢钾溶液调节pH值至7,过滤,得第二滤液,弃去沉淀物;
(5)向第二滤液中加入20%的盐酸溶液,调节pH值至1,70℃下保温30min,静置24h,析出棕色沉淀物,倾出上层溶液;
(6)将倾出的上层溶液继续静置24h,析出土黄色沉淀物;
(7)分别取棕色沉淀和土黄色沉淀物合并后过滤,滤饼先用蒸馏水,再用乙酸乙酯洗至中性,得到混合沉淀物然后在60℃的低温下干燥,即得到野黄芩苷粗品;
(9)向野黄芩苷粗品中加入20倍体积的浓度为85%的乙醇及野黄芩苷粗品重量的2%的活性炭,加热至沸腾,提取1h,得到第二提取液,将第二提取液过滤,得到第三滤液,将第三滤液浓缩至原体积的60%,静置使析出晶体,过滤,将所得晶体用浓度为45%的乙醇洗涤5次,得野黄芩苷晶体;
(10)向上述野黄芩苷晶体中加入5倍体积的浓度为30%至50%的丙酮水溶液,摇匀,加入20%的盐酸溶液调节pH值为1,静置后过滤,将沉淀物水洗至中性,干燥得到1.12kg高纯度的野黄芩苷。
本实施例中野黄芩苷的提取率为91.3%,通过HPLC检测图谱进行纯度分析得到本实施例获得的野黄芩苷的纯度为98.76%。
当然,上述实施例仅是本发明较佳的实施方案,实际应用时还可以有更多的变化,例如,调节PH值的酸性溶液还可以是磷酸,或者多种酸的混合物;调节PH值的碱性溶液还可以是碳酸钾,或者多种碱金属的弱酸盐的混合物;步骤(7)中清洗滤饼至中性的溶剂还可以是丙酮或甲醇,或者水、乙酸乙酯、丙酮、甲醇或乙醇中的一种或多种混合物。凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明权利要求的保护范围内。
Claims (10)
1.一种从黄芩茎叶中提取分离高纯度野黄芩苷的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将黄芩茎叶原料粉碎,得到原料粗粉末;
(2)按照重量比1:4至1:20向所述原料粉末中加入浓度为30%至70%的乙醇,加热至沸腾,得到第一提取液;
(3)将所述第一提取液过滤后得到第一滤液,将所述第一滤液在温度为60℃至70℃、压强为0.08MPa至0.10MPa的条件下减压浓缩,去除所述第一滤液中的乙醇,得到野黄芩苷浓缩液;
(4)将所述野黄芩苷浓缩液,用碱金属的弱酸盐溶液调节pH值为7至8,搅拌使其完全溶解,过滤,得到第二滤液;
(5)向所述第二滤液中加入酸溶液,调节pH值为1至2,然后静置24h至48h,析出棕色沉淀物,倾出上层溶液;
(6)将所述上层溶液静置18h至24h,析出土黄色沉淀物;
(7)将所述棕色沉淀物和所述土黄色沉淀物合并后过滤,滤饼先用蒸馏水洗,再用第一溶剂洗至中性,然后在50℃至60℃的温度下进行干燥处理,得到野黄芩苷粗品;
(8)向所述野黄芩苷粗品中加入第二溶剂及活性炭,加热至沸腾,得到第二提取液,将所述第二提取液过滤,得到第三滤液,将所述第三滤液浓缩至原体积的60%至80%,静置使其析出晶体,将所述晶体过滤后用第二溶剂洗涤,得到野黄芩苷晶体;
(9)向所述野黄芩苷晶体中加入第三溶剂,摇匀,加酸溶液调节pH值为1至2,静置后过滤,将沉淀物水洗至中性,干燥得到高纯度的野黄芩苷。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:
步骤(1)中,所述原料粗粉末的目数为10目至200目。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:
步骤(4)中,所述碱金属的弱酸盐溶液为碳酸氢钾、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸钠中的一种或多种的水溶液,所述碱金属的弱酸盐溶液的浓度范围为10%至30%。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:
步骤(5)中,所述酸溶液为盐酸、硫酸、磷酸中的一种或多种的水溶液,所述酸溶液的浓度范围为10%至30%。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:
步骤(7)中,所述第一溶剂为水、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇中的一种或多种混合物。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:
步骤(8)中,所述第二溶剂为水、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇中的一种或多种混合物,所述活性炭的用量为所述野黄芩苷粗品的重量的0.1%至20%。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:
步骤(9)中,所述第三溶剂为水、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇中的一种或多种混合物。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:
步骤(9)中,所述酸溶液为盐酸、硫酸、磷酸中的一种或多种的水溶液,所述酸溶液的浓度范围为10%至30%。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:
步骤(9)中获得的高纯度的野黄芩苷的纯度大于98%。
10.一种野黄芩苷,其特征在于,使用以下步骤制取:
(1)将黄芩茎叶原料粉碎,得到原料粗粉末;
(2)按照重量比1:4至1:20向所述原料粉末中加入浓度为30%至70%的乙醇,加热至沸腾,得到第一提取液;
(3)将所述第一提取液过滤后得到第一滤液,将所述第一滤液在温度为60℃至70℃、压强为0.08MPa至0.10MPa的条件下减压浓缩,去除所述第一滤液中的乙醇,得到野黄芩苷浓缩液;
(4)将所述野黄芩苷浓缩液,用碱金属的弱酸盐溶液调节pH值为7至8,搅拌使其完全溶解,过滤,得到第二滤液;
(5)向所述第二滤液中加入酸溶液,调节pH值为1至2,然后静置24h至48h,析出棕色沉淀物,倾出上层溶液;
(6)将所述上层溶液静置18h至24h,析出土黄色沉淀物;
(7)将所述棕色沉淀物和所述土黄色沉淀物合并后过滤,滤饼先用蒸馏水洗,再用第一溶剂洗至中性,然后在50℃至60℃的温度下进行干燥处理,得到野黄芩苷粗品;
(8)向所述野黄芩苷粗品中加入第二溶剂及活性炭,加热至沸腾,得到第二提取液,将所述第二提取液过滤,得到第三滤液,将所述第三滤液浓缩至原体积的60%至80%,静置使其析出晶体,将所述晶体过滤后用溶剂溶液洗涤,得到野黄芩苷晶体;
(9)向所述野黄芩苷晶体中加入第三溶剂,摇匀,加酸溶液调节pH值为1至2,静置后过滤,将沉淀物水洗至中性,干燥得到高纯度的野黄芩苷。
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