CN107501270A

CN107501270A - 一种含有磺酰吖丙啶结构的化合物、药物组合物以及其应用

Info

Publication number: CN107501270A
Application number: CN201710780659.7A
Authority: CN
Inventors: 王若徐
Original assignee: Nanjing Hong Teng Construction Engineering Co Ltd
Current assignee: Nanjing Hong Teng Construction Engineering Co Ltd
Priority date: 2017-09-01
Filing date: 2017-09-01
Publication date: 2017-12-22
Anticipated expiration: 2037-09-01
Also published as: CN107501270B

Abstract

本发明提供了一种如通式(Ⅰ)所示含有磺酰吖丙啶结构的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，本发明还提供了一种包含其的药物组合物以及应用。本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药以及药物组合物具备优异的BTK抑制活性，可用于制备BTK抑制剂。

Description

一种含有磺酰吖丙啶结构的化合物、药物组合物以及其应用

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种含有磺酰吖丙啶结构的化合物、包含所述化合物的药物组合物以及它们作为布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂的应用。

背景技术

布鲁顿酪氨酸激酶(Bruton’s tyrosine kinase，BTK)是非受体酪氨酸激酶Tec家族成员。在前B淋巴细胞过渡为后期B细胞过程中，BTK为细胞分化和增殖所必须基因，且在B细胞淋巴瘤、急型淋巴细胞白血病(ALL)和浆细胞瘤中均有表达。

2006年之后，研究者发现磷酸化激活BTK为B细胞受体(BCR)信号通路的关键组成部分，是靶向治疗B细胞淋巴瘤等疾病的很好位点。BTK参与多种型号通路，与PI3K((磷脂酰肌醇-3-激酶)、G2蛋白双受体等结合后发生激活，通过PLCg2(磷脂酶Cg2)、PKC-βI(蛋白激酶C-βI)等下游信号分子，参与对血管生成、细胞增殖和凋亡以及细胞运动的调节。除此以外，BTK还参与到许多其他造血细胞信号途径，例如，参与巨噬细胞中Toll样受体和细胞因子受体介导的信号通路，参与肥大细胞中IgE受体的信号传导等。

近年来研究显示，BTK信号通路是目前非霍奇金淋巴瘤(NHL)，特别是慢性淋巴细胞白血病(CLL)、B细胞淋巴瘤及自身免疫疾病临床治疗研究中的新热点。

依鲁替尼(Ibrutinib)是一种口服BTK抑制剂的首创新药，该药通过与靶蛋白BTK活性位点半胱氨酸残基(Cys-481)选择性地共价结合，不可逆性地抑制BTK，从而有效地阻止肿瘤从B细胞迁移到适应于肿瘤生长环境的淋巴组织。此外，还有多个BTK抑制剂在研药物处于不同的临床阶段，如Spebrutinib、Acalabrutinib等等。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种新型化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，其具备优异的BTK抑制活性。

本发明的另一目的是提供一种药物组合物。

本发明的另一目的是提供新型化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药的应用。

本发明提供了如通式(Ⅰ)所示含有磺酰吖丙啶结构的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，

其中，环A选自以下基团：

环B选自含有至少一个杂原子的4～7元饱和杂环基团，且通过杂原子与基团Y相连，所述杂原子选自N、S或O；

Ar选自取代或未取代的单环或双环的芳基或杂芳基，取代基选自C_1-8烷基、C_1-8烷氧基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-7环烷基、C_2-9杂环基、芳基、杂芳基、羟基、羧基、巯基、氨基、氰基、卤素或C_1-8卤代烷氧基；

X选自单键、-O-、-S-、-CH₂-、-NH-、-S(＝O)-、-S(＝O)₂-、-C(＝O)-、-C(＝O)NH-或-NHC(＝O)-；

Y选自-S(＝O)₂-、-C(＝O)NH-或-C(＝O)-；

R₁-R₄分别独立地选自取代或未取代的以下基团：H、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、-(CH₂)_nC_3-7环烷基、-(CH₂)_nC_2-9杂环基、-(CH₂)_n-芳基、-(CH₂)_n-杂芳基、-(CH₂)_n-OH、-(CH₂)_n-(CHOH)_n-H、-(CH₂)_n-O-(CH₂)_nCH₃、-(CH₂)_n-NH₂、-(CH₂)_n-NH(C_1-8烷基)或-(CH₂)_n-N(C_1-8烷基)₂；n表示0～8的整数，取代基选自羟基、C_1-8烷基、C_1-8烷氧基、卤素或C_1-8卤代烷氧基。

进一步地，所述环B选自含有一个N原子的4～7元饱和杂环基团，且通过N原子与基团Y相连。可选地，所述环B选自含有一个N原子的5～6元饱和杂环基团。

更进一步地，所述环B选自以下杂环基团：

进一步地，R₁-R₄中的至多一个基团选自取代或未取代的以下基团，其余选自H：C_1-4烷基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、-(CH₂)_nC_3-5环烷基、-(CH₂)_nC_2-7杂环基、-(CH₂)_n-苯基、-(CH₂)_n-萘基、-(CH₂)_n-杂芳基、-(CH₂)_n-OH、-(CH₂)_n-(CHOH)_n-H、-(CH₂)_n-O-(CH₂)_nCH₃、-(CH₂)_n-NH₂、-(CH₂)_n-NH(C_1-4烷基)或-(CH₂)_n-N(C_1-4烷基)₂；n表示0～3的整数，含有取代基时，取代基定义同上。

进一步地，所述Ar选自取代或未取代的单环的芳基或杂芳基，取代基选自C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_3-5环烷基、C_2-7杂环基、F、Br、I或C_1-4卤代烷氧基。

本发明提供的化合物优选选自以下结构：

本发明还提供了一种药物组合物，其包含以上技术方案任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，以及药学可接受的载体。

所述药物组合物包括但不限于口服剂型、胃肠外给药剂型、外用剂型、直肠给药剂型等。在一些实施方式中，所述药物组合物可以是口服的片剂、胶囊、丸剂、粉剂、缓释制剂、溶液和悬浮液，用于胃肠外注射的无菌溶液、悬浮液或乳液，用于外用的软膏或乳膏，或者用于直肠给药的栓剂。

所述药物组合物还可以包括其他活性成分或药物，与所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药联合用药。

本发明提供的通式(Ⅰ)所示含有磺酰吖丙啶结构的化合物可与布鲁顿酪氨酸激酶、布鲁顿酪氨酸激酶同源物或布鲁顿酪氨酸激酶半胱氨酸同源物不可逆结合。具体来说，如下式所示，

其中，表示化合物与布鲁顿酪氨酸激酶之间的连接点。进一步地，所述化合物与布鲁顿酪氨酸激酶上的半胱氨酸残基共价结合。本发明的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，以及本发明的药物组合物可用于预防或治疗与过度BTK活性相关的疾病，包括但不限于癌症、自身免疫性疾病、异种免疫性疾病、炎性疾病、血栓性疾病等等，通过抑制布鲁顿酪氨酸激酶，可达到预防或治疗相关疾病的目的。

由此，本发明还提供了所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药在制备布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂中的应用。进一步地，本发明的应用是制备不可逆型的布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂。

本发明还提供了上述药物组合物在制备布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂中的应用。进一步地，本发明的应用是制备不可逆型的布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂。

本发明还提供了所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药在制备治疗或预防以下疾病的药物中的应用：癌症、自身免疫性疾病、异种免疫性疾病、炎性疾病或血栓性疾病。

本发明还提供了上述药物组合物在制备治疗或预防以下疾病的药物中的应用：癌症、自身免疫性疾病、异种免疫性疾病、炎性疾病或血栓性疾病。

本发明所述的癌症、自身免疫性疾病、异种免疫性疾病、炎性疾病、血栓性疾病包括但不限于红斑狼疮、炎性肠病、移植物抗宿主病、哮喘、关节炎、弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性淋巴瘤、滤泡型淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、心肌梗塞等疾病类型。

本发明还提供了过度BTK活性相关的疾病的预防或治疗方法，包括向有需求的个体施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，或向有需求的个体施用治疗有效量的本发明的药物组合物。过度BTK活性相关的疾病，包括但不限于癌症、自身免疫性疾病、异种免疫性疾病、炎性疾病、血栓性疾病等等，通过抑制布鲁顿酪氨酸激酶，可达到预防或治疗相关疾病的目的。

上述的癌症、自身免疫性疾病、异种免疫性疾病、炎性疾病、血栓性疾病包括但不限于红斑狼疮、炎性肠病、移植物抗宿主病、哮喘、关节炎、弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性淋巴瘤、滤泡型淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、心肌梗塞等疾病类型。

上述的有需求的个体优选可以为哺乳动物，例如可以为人类。

根据本发明制备的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药或药物组合物可通过静脉注射、皮下注射、肌肉注射、直肠内给药、滴鼻、吸入、透皮或者口服。也可制成常规的药物制剂，如片剂、肠溶片、胶囊、粉末、悬浮液、溶液、计量式气溶胶或栓剂，如果合适，加入一种或多种常规惰性载体和/或稀释剂，例如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、微晶纤维素、硬脂酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、柠檬酸、酒石酸、水、水/甘油、水/山梨糖醇、水/聚乙二醇、丙二醇、十六烷基硬酯酰乙醇、羧甲基纤维素或脂肪物质，如硬化脂肪，或其他适当的混合物。

为获得必要的治疗效果的计量，当静脉给药时，便利的从1至200毫克/千克体重，优选从15到150毫克/千克的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，在口服给药时，从10至200毫克/千克体重，优选20至150毫克/千克体重，在各种情况下每日1-3次。

详述

除非另有定义，否则本文所有科技术语具有的涵义与权利要求主题所属领域技术人员通常理解的涵义相同。除非另有说明，本文全文引用的所有专利、专利申请、公开材料通过引用方式整体并入本文。如果本文对术语有多个定义，以本章的定义为准。在引用URL或其他此类标示符或地址时，应理解此类标示符可进行转变并可与互联网上的具体信息进行交换，也可通过互联网检索或其他适合的参考资料渠道获得等价的信息。所获得的参考资料证明此类信息的可获得性和公众传播性。

应理解，上述简述和下文的详述为示例性且仅用于解释，而不对本文发明主题做任何限制。在本申请中，除非另有具体说明，否则使用单数时也包括复数。必须注意，除非文中另有清楚的说明，否则在本说明书和权利要求书中所用的单数形式包括所指事物的复数形式。还应注意，除非另有说明，否则所用“或”、“或者”表示“和/或”。此外，所用术语“包括”以及其他形式，例如“包含”、“含”和“含有”并非限制性。

标准化学术语的定义可以在文献著作中找到，包括Carey和Sundberg的“AdvancedOrganic Chemistry 4^th Ed,Vol A(2000)and B(2001),Plenum Press,New York。除非另有说明，否则采用本领域技术范围内的常规方法，如质谱、NMR、HPLC、蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术和药理学方法。除非提出具体定义，否则本文在分析化学、有机合成化学以及医学和药物化学等化学上的相关的命名和实验室操作和技术，是本领域技术人员已知的。标准技术可以用于化学合成，化学分析，药物制备，制剂，递药和患者的治疗。标准技术可以用于重组DNA，寡核苷酸合成，以及组织培养和转化(例如电穿孔、脂质传染法)。举例来说，可以使用附有生厂商提供的说明书的试剂盒，或者按照本领域公知的方法，或者按照本发明表述的方法，来实施反应和纯化技术。一般而言，前述技术和步骤可以通过本领域众所周知的和在各种一般文献或更具体文献中描述的常规方法来实施，这些文献在本发明中被引用和讨论。

当通过从左向右书写的常规化学式描述取代基时，该取代基也同样包括从右向左书写结构式时所得到的在化学上等同的取代基。举例而言，CH₂O等同于OCH₂。

除非另有说明，否则所用的通用化学术语，例如但不限于，“烷基”、“芳基”等同与其任选取代的形式。例如，本文所用的“烷基”包括任选取代的烷基。

本文所述化合物可具有一个或多个立体异构中心，且各个异构中心可以以R或S构型或其组合的形式存在。类似的，本文所述化合物可具有一个或多个双键，且各双键可以以E(反式)或Z(顺式)构型或其组合的形式存在。一个特定的立体异构体、结构异构体、非对映异构体、对映异构体应被理解为包括所有可能的立体异构体、结构异构体、非对映异构体、对映异构体及其混合物。因此，本文所述化合物包括所有构型上不同的立体异构体、结构异构体、非对映异构体、对映异构体形式以及其相应的混合物。用于转化特定立体异构体或使特定立体异构体保持原状的技术，以及拆分立体异构体混合物的技术是本领域熟识的，本领域技术人员能够就具体情况选择适合的方法。参见，例如Fumisset，Vogel’sEncyclopedia of Practical Organic Chemistry 5^th ED.,Longman Scientific andTechnical Ltd.,Essex,1991,809-816；and Heller,Acc.Chem.Res.,1990,23,128。

应该理解的是，本发明描述的方法和组合物不被限制为本发明描述的特定的方法、法案、细胞系、构建体和试剂，就这一点而论可以进行改变。也可以理解的是，本发明使用的术语仅用于描述具体实施方式的目的，并且不意图限制本发明描述的方法和组合物的范围，其仅被所附的权利要求限制。

所有本发明提及的出版物和专利通过引用方式将其全部结合到本文中，用于描述和公开的目的，例如出版物中描述的构建体和方法，其可以用于与本发明描述的方法、组合物和化合物联用。仅仅提供本发明讨论的出版物在本申请日之前的公开内容。在此没有解释为一种许可本文所述发明人没有被授权因为在先发明或由于任何其他的原因提前这样的公开。

本文所用术语“部分”、“结构部分”、“化学部分”、“基团”、“化学基团”是指分子中的特定片段或官能团。化学部分通常被认为是嵌入或附加到分子上的化学实体。

术语“键”或“单键”是指通过键使两个原子或两个部分相连得到更大结构部分的化学键。

术语“任选/任意”或“任选的/任意的”是指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生，该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。例如，根据下文的定义，“任选取代的烷基”是指“未取代的烷基”或“取代的烷基”。此外，任选取代的基团可以使未被取代，完全取代，单取代或部分取代。

本文所用C₁-C_n包括C₁-C₂、C₁-C₃、……C₁-C_n。举例而言，所述“C₁-C₄”基团是指该部分中具有1-4个碳原子，即基团包含1个碳原子，2个碳原子、3个碳原子或4个碳原子。因此，举例而言“C₁-C₄烷基”是指在有1-4个碳原子的烷基，即所述烷基选自甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。本文中的数字范围，例如“1-8”是指给定范围中的各个整数，例如“1-8个碳原子”是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子、6个碳原子、7个碳原子或8个碳原子。

术语“烷基”是指任选取代的直链或任选取代的支链的饱和脂肪族烃类。本文的“烷基”优选可具有1-约20个碳原子，例如具有1-约10个碳原子，更优选具有1-约8个碳原子，或1-约6个碳原子，或1-约4个碳原子或1-约3个碳原子。本文的烷基实施例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、2-甲基-l-丙基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-l-丁基、2-甲基-3-丁基、2,2-二甲基-1-丙基、2-甲基-1-戊基、3-甲基-1-戊基、4-甲基-l-戊基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、2,2-二甲基-l-丁基、3,3-二甲基-1-丁基、2-乙基-1-丁基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、己基等，以及更长的烷基基团，如庚基和辛基等。本文定义的基团，如“烷基”出现数字范围时，例如“C_1-8烷基”是指可由1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子、6个碳原子、7个碳原子、8个碳原子构成的烷基，本文的烷基也包含未指定数字范围的情况。

术语“烯基”是指任选取代的直链或任选取代的支链的一价烃基，其具有至少一个C＝C双键。所述烯基具有但不限于2-约8个碳原子，如2-约6个碳原子，2-约4个碳原子。这些基团中的双键可以为顺式或反式构象，并应被理解为包含所述两种异构体。烯基实施例包括但不限于乙烯基(CH＝CH₂)、1-丙烯基(CH₂CH＝CH₂)、异丙烯基(C(CH₃)＝CH₂)、丁烯基和1,3-丁二烯基等。本文定义的烯基出现数字范围时，例如“C_2-8烯基”是指可由2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子、6个碳原子、7个碳原子、8个碳原子构成的烯基，本文的烯基也涵盖未指定数字范围的情况。

术语“炔基”是指任选取代的直链或支链的一价烃基，其具有至少一个C≡C三键。所述炔基具有但不限于2-约8个碳原子，例如2-约6个碳原子，或2-约4个碳原子。本文的炔基实施例包括但不限于乙炔基、2-丙炔基、2-丁炔基和1,3-丁二炔基等。本文定义的炔基出现数字范围时，例如“C_2-8炔基”是指可由2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子、6个碳原子、7个碳原子、8个碳原子构成的炔基基团，本文的炔基也涵盖未指定数字范围的情况。

术语“卤代”或“卤素”是指任选被取代的基团(如烷基、烯基、炔基、烷氧基等)的其中至少一个氢原子被替换成卤素(如氟、氯、溴、碘或其组合)。在一些实施方式中，使用彼此相同的卤素替换两个或多个氢(例如二氟甲基、三氟甲基)；在其它实施方式中使用彼此并不完全相同的卤素替换两个或多个氢(例如1-氯-1-氟-1-碘乙基)。

术语“烷氧基”是指烷基醚基(O-烷基)，烷氧基的非限定性实施例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基等。

术语“芳基”是指任选取代的芳香烃基，其具有6-约20个，如6-12个或6-10个成环碳原子，其可以是单环芳基、双环芳基或更多环芳基。双环芳基或更多环芳基可以是一个单环芳基与其它独立环，如脂环、杂环、芳环、芳杂环相稠合。单环芳基的非限定性实施例包括6至约12个、6至约10个或6至约8个成环碳原子的单环芳基，例如苯基；双环芳基例如为萘基；多环芳基例如为菲基、蒽基、薁基。

术语“杂芳基”是指任意取代的杂芳基，其包含约5至约20个，如5至12个或5至10个骨架成环原子，其中至少一个(如1-4个、1-3个、1-2个)成环原子为杂原子，所述杂原子独立地选自氧、氮、硫、磷、硅、硒和锡中的杂原子，但不限于此。杂芳基包括单环杂芳基(具有一个环)、双环杂芳基(具有两个环)或多环杂芳基(具有两个以上的环)。在环中出现两个或更多杂原子的实施方式中，所述两个或更多杂原子可彼此相同，或者所述两个或更多杂原子中的一些或全部彼此不同。双环杂芳基或更多环杂芳基可以是一个单环杂芳基与其它独立环，如脂环、杂环、芳环、芳杂环相稠合(可统称为稠合环杂芳基)。

术语“环烷基”是指非芳香的含碳环，包括饱和碳环(如环烷基)或不饱和碳环(如环烯基)。碳环包括单碳环(具有一个环)，例如可以是单环环烷基；双碳环(具有两个环)，例如可以是双环环烷基；多碳环(具有两个以上的环)。环之间可以是桥合或螺环。碳环(如环烷基或环烯基)可以具有3至20个碳原子，例如具有3-约15个成环碳原子或3-约10个成环碳原子或3-7个成环碳原子。

术语“杂环基”是指非芳香杂环，其包括饱和杂环或不饱和杂环(含不饱和键)。其中一个或者多个(如1-4个、1-3个、1-2个)成环的原子是杂原子，如氧、氮或硫原子。杂环可以包括单杂环(具有一个环)或双杂环(具有两个桥合的环)或多杂环(具有两个以上桥合的环)；也包括螺环。杂环基可具有3至约20个，如3-约10个、3-约8个、4-8个、4-7个、5-约8个或5-约6个成环原子。

术语“元”是指构成环的骨架原子的个数。例如吡啶是六元环，吡咯是五元环。

术语“取代”意思是在一个特定的原子上一个或更多的氢被指定的基团所替代，如果指定的原子的正常化合价在现有的情况下没有超出，那么取代后结果是一个稳定的化合物。

药物术语

术语“布鲁顿酪氨酸激酶”是指来自智人(Homo Sapiens)的布鲁顿酪氨酸激酶，其已经公开在例如美国专利第6326469号。

术语“布鲁顿酪氨酸激酶同源物”是指布鲁顿酪氨酸激酶的直向同源物，例如来自小鼠、狗、大鼠、鸡、或斑马鱼的直向同源物，和前述任意的融合蛋白，其对一个或多个布鲁顿酪氨酸激酶底物展示出激酶活性。

术语“个体”是指患有疾病、病症或病况等的个体，包括哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物的实施例包括但不限于哺乳动物纲的任何成员：人，非人的灵长类动物(例如黑猩猩和其它猿类和猴)；家畜，例如牛、马、绵羊、山羊、猪；家养动物，例如兔、狗和猫；实验室动物，包括啮齿类动物，例如大鼠、小鼠和豚鼠等。非人哺乳动物的实施例包括但不限于鸟类和鱼类等。

术语“治疗”和其它类似的同义词包括缓解、减轻或改善疾病或病症症状，预防其它症状，改善或预防导致症状的潜在代谢原因，抑制疾病或病症，例如阻止疾病或病症的发展，缓解疾病或病症，使疾病或病症好转，缓解由疾病或病症导致的症状，或者中止疾病或病症的症状，此外，该术语还可包含预防的目的。该术语还包括获得治疗效果和/或预防效果。所述治疗效果是指治愈或改善所治疗的潜在疾病。此外，对与潜在疾病相关的一种或多种生理症状的治愈或改善也是治疗效果，例如尽管患者可能仍然受到潜在疾病的影响，但观察到患者情况改善。就预防效果而言，可向具有患特定疾病风险的患者施用所述组合物或化合物，或者即便尚未做出疾病诊断，但向出现该疾病的一个或多个生理症状的患者施用所述组合物或化合物。

术语“获得必要的治疗效果的计量”或“治疗有效量”是指施用后足以在某种程度上缓解所治疗的疾病或病症的一个或多个症状的至少一种药剂或化合物的量。其结果可以为迹象、症状或病因的消减和/或缓解，或生物***的任何其它所需变化。可使用诸如剂量递增试验的技术测定适合于任意个体病例中的有效量。

术语“施用”是指能够将化合物或组合物递送到进行生物作用的所需位点的方法。这些方法包括但不限于口服途径、经十二指肠途径、胃肠外注射(包括静脉内、皮下、腹膜内、肌内、动脉内注射或输注)、外用和经直肠给药。本领域技术人员熟知可用于本文所述化合物和方法的施用技术，例如在Goodman and Gilman,The Pharmacological Basis ofTherapeutics,current ed.；Pergamon；and Remington's,Pharmaceutical Sciences(current edition),Mack Publishing Co.,Easton,Pa中讨论的那些。

术语“药学上可接受的”是指不影响本发明化合物的生物活性或性质的物质，并且相对无毒，即该物质可施用于个体而不造成不良的生物反应或以不良方式与组合物中包含的任意组分相互作用。

术语“药物组合物”是指任选的混合有至少一种药学上可接受的化学成分的生物活性化合物，所述药学上可接受的化学成分包括但不限于载体、稳定剂、稀释剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂。

术语“载体”是指相对无毒的化学化合物或试剂，其有助于将化合物引入到细胞或组织中。

术语“药学上可接受的盐”是指保留了指定化合物的游离酸和游离碱的生物效力，并且在生物学或其它方面上没有不良作用的盐。本申请化合物还包括药学上可以接受的盐。药学上可接受的盐是指把母体化合物中的碱基基团转换成盐的形式。药学上可接受的盐包括，但不仅限于，碱基基团例如胺(氨)基的无机或有机酸盐类。本申请药学上可接受的盐可以由母体化合物合成，即母体化合物中的碱性基团与1-4当量的酸在一个溶剂***中反应。合适的盐列举在Remingtong’s Pharmaceutical Scicences,17^th ed.,MackPublishing Company,Easton,Pa.,1985,p.1418和Journal of Pharmaceutical Science,66,2(1977)中。

除特别指示外，本申请中的盐指用有机酸/无机酸形成的酸式盐，以及用有机碱/无机碱形成的碱式盐。

术语“溶剂化物”是指通过溶剂化作用形成的本申请化合物与溶剂分子的组合。在某些情况下，溶剂化物指水合物，即溶剂分子为水分子，本申请化合物与水的组合形成水合物。本申请中的一个或多个化合物可能以溶剂化物的形式存在，就像与医药学上可接受的水、乙醇等溶剂形成的溶剂化物形式一样，因此，本申请包括溶剂化物和非溶剂化物两种形式。“溶剂化物”指本申请中的一个化合物与一个或多个溶剂分子形成的物理聚集体，这个物理聚集体包括离子的不同程度和共价键，例如氢键。已证实这个溶剂化物可以被分离，例如，当晶体的晶格中混有一个或多个溶剂分子时。“溶剂化物”包括溶剂相和可分离的溶剂化物两部分。相应的溶剂化物例子有很多，包括乙醇溶剂化物、甲醇溶剂化物等。“水合物”是一种以水(H₂O)分子为溶剂的溶剂化物。

本申请中的一个或多个化合物都可以随意的制备成溶剂化物。溶剂化物的制备众所周知。例如M.Caira et al,J.Pharmaceutical Sci.,93(3),601-611(2004)中描述了抗真菌药氟康唑的溶剂化物的制备，即用乙酸乙酯和水制备。E.C.van Tonder et al,AAPSPharmSciTech.,5(1),article 12(2004)；和A.L.Bingham et al,Chem.Commun.,603-604(2001)中也描述了溶剂化物、水合物的类似制备方法。一种典型的、非限制性的制备过程是在高于常温的温度时将发明的化合物溶解于所需要量的理想溶剂中(有机溶剂或水或它们的混合溶剂)，降温，放置析晶，然后用标准的方法分离挑出晶体。用I.R.光谱学分析技术可以证实结晶中形成溶剂化物(水合物)的溶剂(水)的存在。

术语“活性代谢物”是指在化合物代谢时形成的该化合物的具有活性的衍生物。

术语“多晶型物”是指以不同的晶格形式存在的本申请化合物。

术语“同位素标记物”是指有同位素标记的本申请化合物。例如本申请的化合物中的同位素包括H,C,N,O,P,F,S的各种同位素,如²H,³H,¹³C,¹⁴C,¹⁵N,¹⁸O,¹⁷O,³¹P,³²P,³⁵S,¹⁸F和³⁶S。

术语“药学上可接受的前药”或“前药”是指本申请化合物的任何药学上可接受的盐、酯、酯的盐或其它衍生物，其在向受体施用后能够直接或间接地提供本申请的化合物或其具有药学活性的代谢物或残基。特别优选的衍生物或前药是在施用于患者时可以提高本申请化合物生物利用度的那些化合物(例如，可以使口服的化合物更易于被吸收到血液中)，或者促进母体化合物向生物器官或作用位点(例如脑部或淋巴***)递送的那些化合物。

各种前药形式是本领域熟知的。参见，在T.Higuchi和V.Stella所著的Pro-drugsas Novel Delivery Systems(1987)Vol.14of the A.C.S.Symposium Series,Bioreversible Carriers in Drug Design,(1987)Edward B.Roche,ed.,AmericanPharmaceutical Association和在Pergamon Press中提供了有关前药的讨论。Design ofProdrugs,Bundgaard,A.Ed.,Elseview,1985and Method in Enzymology,Widder,K.etal.,Ed.；Academic,1985,vol.42,p.309-396；Bundgaard,H."Design and Application ofProdrugs"in A Textbook of Drug Design and Development,Krosgaard-Larsen andH.Bundgaard,Ed.,1991,第五章，113-191页；以及Bundgaard,H.,Advanced Drug DeliveryReview,1992,8,1-38，以上文献通过引用并入本文。

术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体。式I化合物含有不对称或手性中心，因此，存在不同的立体异构形式。分子式I的所有立体结构和混合物一样，包括外消旋混合物，作为目前申请的一部分。非对映体混合物能够分离成单独的非对映体，基于它们不同的物理化学性质，采用众所周知的手段，例如，对映异构体的拆分可通过与适当的光学活性物质(例如手性醇或Mosher`s莫氏酰氯)反应转换为非对映异构体，将其分离并转化(如水解)为相对应的单一的异构体。式I中的一些化合物可能是阻转异构体(如取代芳基)也是本申请中的一部分。对映异构体也可利用手性色谱柱分离。式I中的化合物可能存在着不同的互变异构形式，这些形式都包含在本申请范围内。例如，酮-烯醇和亚胺-烯胺形式的化合物。

术语“IC₅₀”是指在测量这样的效应的分析中获得最大效应的50％抑制，例如BTK的抑制的特定测试化合物的量、浓度或剂量。

附图说明

图1为本发明所述测试例3的测试结果图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将进一步描述本发明的示例性实施例的技术方案。

本发明可以通过下述方法制备本发明所述的化合物。以下方法和实施例是为了说明这些方法。这些流程和实施例不应以任何方式被解释为对本发明的限制。也可使用本领域技术人员已知的标准合成技术合成本文所述的化合物，或者组合使用本领域已知方法和本文所述方法。

实施例

合成路线：

可按照上述合成路线制备本发明式(1)所示化合物。路线图中反应所得的每一个产物都可以通过传统分离技术来得到，这种传统技术包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱分离等。合成所需要的起始原料都可以自己合成或从商业机构购买获得。这些原料可以使用常规手段进行表征，比如物理常数和光谱数据。本发明所描述的化合物可以使用合成方法得到单一的异构体或者是异构体的混合物。

起始原料1可以通过商业途径直接购买或通过有机合成得到，通过两种途径可以得到中间体4。具体使用哪种途径得到中间体4，视具体反应可行性，原料获得难易程度而定。一个途径是通过商业化试剂氯磺酰异氰酸酯和叔丁醇作用得到中间体2。利用中间体2结构中磺酰基和羰基中间的氨基的酸性，和氯乙醇或者取代的氯乙醇在偶氮二甲酸二异丙酯和三苯基膦作用下发生Mitsunobu反应，可以得到中间体3。中间体3在酸性条件下，脱去叔丁氧羰基，得到化合物4。另一个途径是先通过两步反应合成得到反应试剂6，再利用起始原料1中裸露氨基的亲核性，进攻试剂6中的磺酰基，同时试剂6中的噁唑啉酮片段离去，可以得到中间体4。中间体4在碱性条件下关环，可以最终得到产物5。

实施例1(R)-1-(1-(磺酰环乙胺)哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4- d]并嘧啶-4-胺

流程1：

步骤A：(R)-1-(1-(N-叔丁氧羰基磺酰胺)哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

100mL反应瓶中，加入(R)-1-(哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺10g、二氯甲烷60mL，搅拌下再加入三乙胺4.4mL，氮气保护下冰浴降温至0℃左右待用。另一50mL反应瓶中加入二氯甲烷20mL，氮气保护下加入氯磺酰异氰酸酯4.4g，后滴加叔丁醇的二氯甲烷溶液(3mL叔丁醇溶于16mL二氯甲烷)。滴完搅拌20分钟后，将此反应液滴入前述100mL反应瓶中，控温0℃左右，滴完继续保温反应30分钟，而后将反应液浓缩，用硅胶进行柱层析纯化，得6.5g油状物产品，m/z＝566[M+H]⁺。

步骤B：(R)-1-(1-(N-2-氯乙基-N-叔丁氧羰基磺酰胺)哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

50mL反应瓶中加入(R)-1-(1-(N-叔丁氧羰基磺酰胺)哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺3.4g、2-氯乙醇1.5g、四氢呋喃30mL、三苯基膦4.87g，氮气保护，冰盐浴下滴加偶氮二甲酸二异丙酯3.8g，滴完自然回温，待反应完毕后，将反应液浓缩后加入硅胶柱层析，得到3g类白色固体，m/z＝628[M+H]⁺。

步骤C：(R)-1-(1-(N-2-氯乙基磺酰胺)哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

50mL反应瓶中加入(R)-1-(1-(N-2-氯乙基-N-叔丁氧羰基磺酰胺)哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺3g、25mL二氯甲烷，冰浴下滴加3mL三氟乙酸，室温搅拌2小时，减压浓缩溶剂，粗品加入硅胶柱进行柱层析纯化，得到2.3g黄色固体，m/z＝528[M+H]⁺。

步骤D：(R)-1-(1-(磺酰环乙胺)哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

在50mL反应瓶中加入(R)-1-(1-(N-2-氯乙基磺酰胺)哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺2.3g和丙酮25mL，再加入25mL水，搅拌下加入无水碳酸钾2.5g，于室温搅拌反应过夜，反应完成后，加水稀释，用二氯甲烷萃取产品三次，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩后加入硅胶柱层析，得到白色固体1.5g，m/z＝492[M+H]⁺,¹HNMR(400MHz,CDCl₃),δ8.37(s,1H),7.64(d,J＝6.4Hz,2H),7.39(t,J＝5.6Hz,2H),7.17(m,3H),7.08(d,J＝5.6Hz,2H),5.55(br,2H),5.05(m,1H),4.08(m,1H),3.92(br d,1H),3.55(t,J＝7.2Hz,1H),3.01(t,J＝7.2Hz,1H),2.31(br s,4H),2.25(m,2H),1.98(m,2H)。

或采用以下流程2：

步骤A：N-(2-氯乙氧羰基)-N’-(2-氯乙基)磺酰二胺

在250mL的反应瓶中加入二氯甲烷60mL、氯磺酰异氰酸酯17.6g，冰浴降温至0℃左右，滴加2-氯乙醇的二氯甲烷溶液(10g 2-氯乙醇溶于60mL二氯甲烷)。滴加完毕，10分钟后撤去冰水浴，自然回温至室温，反应完成后放置备用。另取500mL反应瓶，加入二氯甲烷150mL和2-氯乙胺盐酸盐14.4g，冰水浴降温，滴加三乙胺26.4g，继续滴加前述所得二氯甲烷溶液，滴完自然回温。反应完成后加入50mL水，抽滤得粗产品，用乙酸乙酯和石油醚体系做重结晶，得17.8g类白色固体。

步骤B：N-(2-氯乙基)-2-恶唑啉酮-3-磺酰胺

在100mL反应瓶中加入二氯甲烷45mL，再加入N-(2-氯乙氧羰基)-N’-(2-氯乙基)磺酰二胺15g，搅拌下加入三乙胺15mL。加毕，先于室温下反应1小时后，再于50℃水浴下回流反应。约1小时后反应完毕，浓缩掉部分二氯甲烷后搅拌降温，滤除固体，母液浓缩干得无色油状物，冷至室温结晶得10.7g类白色固体。

步骤C：(R)-1-(1-(N-氯乙基磺酰胺)哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

100mL反应瓶中加入(R)-1-(哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺2.3g、乙腈45mL、三乙胺2g和N-(2-氯乙基)-2-恶唑啉酮-3-磺酰胺2.5g，搅拌升温至回流，30分钟后反应完成，浓缩溶剂后，加入硅胶柱层析，得到2.1g黄色固体，m/z＝528[M+H]⁺。

实施例2(R)-1-(1-(磺酰环乙胺)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3, 4-d]并嘧啶-4-胺

流程3：

步骤A：(R)-1-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

100mL反应瓶中加入3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺3g、干燥四氢呋喃30mL、三苯基膦3.89g、(S)-N-叔丁氧羰基-3-羟基吡咯烷5.74g，氮气保护下，冰盐浴降温，搅拌下滴加偶氮二甲酸二异丙酯8.0g。滴完，自然升温过夜，反应完毕后，浓缩溶剂加入硅胶柱层析得到3g浅黄色油状物，m/z＝473[M+H]⁺。

步骤B：(R)-1-(吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

50mL反应瓶中加入(R)-1-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺3g，乙醇25mL搅拌溶解，再加入盐酸乙醇25mL，于室温下搅拌反应过夜，有固体析出，浓缩反应液，残留物加水，搅拌溶解后，用甲基叔丁基醚洗涤两次，水相用氢氧化钠溶液调节pH＝9，再用二氯甲烷萃取产品，浓缩得1.75g土黄色固体，m/z＝373[M+H]⁺。

步骤C：(R)-1-(1-(N-氯乙基磺酰胺)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

通过类似实施例1中流程2的步骤C中的所述操作，得到产品为黄色固体，m/z＝514[M+H]⁺。

步骤D：(R)-1-(1-(磺酰环乙胺)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

通过类似实施例1中流程1的步骤D中的所述操作，得到产品为白色固体，m/z＝478[M+H]⁺，¹HNMR(400MHz,CDCl₃),δ8.37(s,1H),7.64(d,J＝6.4Hz,2H),7.39(t,J＝7.6Hz,2H),7.16(m,3H),7.09(d,J＝7.6Hz,2H),5.62(m,1H)，5.53(br,2H),4.03(m,1H),3.92(m,2H),3.72(m,1H),2.67(m,1H),2.53(m,1H),2.30(br s,4H)。

实施例3(R)-1-(1-(磺酰环乙胺)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-5-氨基吡唑- 4-甲酰胺

流程4：

步骤A：(R)-1-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-5-氨基吡唑-4-甲酰胺

2000mL反应瓶中加入(R)-1-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-5-氨基吡唑-4-甲腈42.3g、二甲基亚砜570mL、碳酸钾40g，搅拌升温至60℃左右，维持60℃左右缓慢的滴加双氧水400mL。滴加完继续保温反应，反应完毕后加水稀释，加二氯甲烷萃取，有机相用亚硫酸钠水溶液洗涤，干燥后浓缩，加入硅胶柱层析，得到19.2g油状物，m/z＝464[M+H]⁺。

步骤B：(R)-1-(吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-5-氨基吡唑-4-甲酰胺

500mL单口反应瓶中加入(R)-1-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-5-氨基吡唑-4-甲酰胺15.5g和乙醇45mL，搅拌溶清，常温下再加入盐酸乙醇200mL，液封，搅拌2小时反应完毕，固体过滤，加水搅拌溶解，用甲基叔丁基醚洗涤两次，水相用氢氧化钠溶液调节pH＝9，再用二氯甲烷萃取产品，浓缩得7.8g黄色固体，m/z＝364[M+H]⁺。

步骤C：(R)-1-(1-(N-氯乙基磺酰胺)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-5-氨基吡唑-4-甲酰胺

通过类似实施例1中流程2的步骤C中的所述操作，得到产品为棕黄色油状液体，m/z＝505[M+H]⁺。

步骤D：(R)-1-(1-(磺酰环乙胺)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-5-氨基吡唑-4-甲酰胺

通过类似实施例1中流程1的步骤D中的所述操作，所得产品为白色固体，m/z＝469[M+H]⁺，¹HNMR(400MHz,CDCl₃),δ7.49(d,J＝6.8Hz,2H),7.38(t,J＝7.2Hz,2H),7.16(t,J＝7.2Hz,1H),7.07(m,4H),5.62(br,2H),4.77(m,1H),3.91(m,1H),3.84(m,2H),3.62(m,1H),2.62(m,1H),2.44(m,1H),2.30(br s,4H)。

实施例4(R)-1-(1-(磺酰(2-甲基环乙胺))哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

流程5：

实施例4中的合成以1-甲基-2-氯乙胺为原料，通过类似实施例1中流程2的步骤A，步骤B，步骤C以及实施例1中流程1的步骤D中的所述操作完成(见流程5)，所得产品为类白色固体，m/z＝506[M+H]⁺，¹HNMR(400MHz,CDCl₃),δ8.37(s,1H),7.63(d,J＝6.4Hz,2H),7.38(t,J＝6.0Hz,2H),7.17(m,3H),7.08(d,J＝6.0Hz,2H),5.54(br,2H),5.04(m,1H),4.08(m,1H),3.92(br d,1H),3.55(t,J＝7.2Hz,1H),3.00(t,J＝7.2Hz,1H),2.56(m,1H),2.40(m,2H),2.25(m,2H),1.98(m,2H),1.35(d,J＝7.2Hz,3H)。

实施例5(R)-1-(1-(磺酰(2-甲基环乙胺))吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H- 吡唑[3，4-d]并嘧啶-4-胺

流程6：

实施例5的合成以(R)-1-(吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺(见实施例2步骤B)为原料，通过类似实施例4中所述步骤完成，得到产品为白色固体，m/z＝492[M+H]⁺，¹HNMR(400MHz,CDCl₃),δ8.37(s,1H),7.64(d,J＝6.4Hz,2H),7.39(t,J＝7.6Hz,2H),7.16(m,3H),7.09(d,J＝7.6Hz,2H),5.62(m,1H)，5.53(br,2H),4.03(m,1H),3.92(m,2H),3.72(m,1H),2.67(m,1H),2.54(m,2H),2.40(m,2H)，1.37(d,J＝7.2Hz,3H)。

实施例6(R)-1-(1-(磺酰环乙胺)吡咯烷-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑 [3,4-d]并嘧啶-4-胺

流程7：

步骤A：3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

100mL反应瓶中加入3-碘-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺5g、二氧六环50mL、4-对氟苯基苯硼酸4.8g、碳酸钾2g和四三苯基膦钯0.5g，反应体系抽真空后用氮气保护，随后反应加热至90℃过夜，反应完毕后，过滤，滤液浓缩后，加入硅胶柱层析，得到4.5g棕色固体，m/z＝322[M+H]⁺。

步骤B：(R)-1-(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

通过类似实施例2中步骤A中的所述操作，得到产品为浅黄色固体，m/z＝491[M+H]⁺。

步骤C：(R)-1-(吡咯烷-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

通过类似实施例2中步骤B中的所述操作，得到产品为黄色固体，m/z＝391[M+H]⁺。

步骤D：(R)-1-(1-(N-氯乙基磺酰胺)吡咯烷-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

通过类似实施例1中流程2的步骤C中的所述操作，得到产品为浅黄色固体，m/z＝532[M+H]⁺。

步骤E：(R)-1-(1-(磺酰环乙胺)吡咯烷-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

通过类似实施例1中流程1的步骤D中的所述操作，得到产品为类白色固体，m/z＝496[M+H]⁺，¹HNMR(400MHz,CDCl₃),δ8.37(s,1H),7.64(d,J＝6.4Hz,2H),7.45(dd,J＝7.6Hz,6.4Hz,2H),7.22(dd,J＝9.6Hz,7.6Hz,2H),7.16(d,J＝6.4Hz,2H),5.62(m,1H),5.53(br,2H),4.04(m,1H),3.91(m,2H),3.72(m,1H),2.66(m,1H),2.52(m,1H),2.30(br s,4H)。

实施例7(R)-1-(1-(磺酰环乙胺)哌啶-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑 [3,4-d]并嘧啶-4-胺

流程9：

步骤A：(R)-1-(1-叔丁氧羰基哌啶-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

以(S)-N-叔丁氧羰基-3-羟基哌啶为原料，通过类似实施例2中步骤A中的所述操作，得到产品为浅黄色固体，m/z＝505[M+H]⁺。

步骤B：(R)-1-(哌啶-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

通过类似实施例2中步骤B中的所述操作，得到产品为浅黄色固体，m/z＝405[M+H]⁺。

步骤C：(R)-1-(1-(N-氯乙基磺酰胺)哌啶-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

通过类似实施例1中流程2的步骤C中的所述操作，得到产品为浅黄色固体，m/z＝546[M+H]⁺。

步骤D：(R)-1-(1-(磺酰环乙胺)哌啶-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

通过类似实施例1中流程1的步骤D中的所述操作，得到产品为类白色固体，m/z＝510[M+H]⁺，¹HNMR(400MHz,CDCl₃),δ8.36(s,1H),7.63(d,J＝6.4Hz,2H),7.45(dd,J＝7.6Hz,6.4Hz,2H),7.22(dd,J＝9.6Hz,7.6Hz,2H),7.16(d,J＝6.4Hz,2H),5.55(br,2H),5.05(m,1H),4.07(m,1H),3.92(br d,1H),3.55(t,J＝7.2Hz,1H),3.01(t,J＝7.2Hz,1H),2.31(br s,4H),2.24(m,2H),1.98(m,2H)。

实施例8(R)-1-(1-(磺酰(2-甲基环乙胺))哌啶-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)- 1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

实施例8中的合成以(R)-1-(哌啶-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺(见实施例7步骤B)为原料，通过类似实施例4中所述步骤完成，所得产品为类白色固体，m/z＝524[M+H]⁺，¹HNMR(400MHz,CDCl₃),δ8.37(s,1H),7.62(d,J＝6.4Hz,2H),7.45(dd,J＝7.2Hz,6.4Hz,2H),7.22(dd,J＝9.6Hz,7.2Hz,2H),7.16(d,J＝6.4Hz,2H),5.54(br,2H),5.04(m,1H),4.08(m,1H),3.92(br d,1H),3.55(t,J＝7.2Hz,1H),3.00(t,J＝7.2Hz,1H),2.55(m,1H),2.40(m,2H),2.25(m,2H),1.97(m,2H),1.34(d,J＝7.2Hz,3H)。

实施例9(R)-1-(1-(磺酰(2-甲基环乙胺))吡咯烷-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

实施例9的合成以(R)-1-(吡咯烷-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺(见实施例6步骤C)为原料，通过类似实施例4中所述步骤完成，得到产品为白色固体，m/z＝510[M+H]⁺，¹HNMR(400MHz,CDCl₃),δ8.37(s,1H),7.62(d,J＝6.4Hz,2H),7.44(dd,J＝7.2Hz,6.4Hz,2H),7.20(dd,J＝9.6Hz,7.2Hz,2H),7.15(d,J＝6.4Hz,2H),5.62(m,1H)，5.53(br,2H),4.03(m,1H),3.92(m,2H),3.72(m,1H),2.67(m,1H),2.54(m,2H),2.40(m,2H)，1.37(d,J＝7.2Hz,3H)。

实施例10(R)-1-(1-(磺酰(2-甲基环乙胺))吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-5- 氨基吡唑-4-甲酰胺

实施例10的合成以(R)-1-(吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-5-氨基吡唑-4-甲酰胺(见实施例3步骤B)为原料，通过类似实施例4中的所述步骤完成，得到产品为类白色固体，m/z＝483[M+H]⁺，¹HNMR(400MHz,CDCl₃),δ7.49(d,J＝6.8Hz,2H),7.38(t,J＝7.2Hz,2H),7.17(t,J＝7.2Hz,1H),7.07(m,4H),5.61(br,2H),4.77(m,1H),3.92(m,1H),3.85(m,2H),3.62(m,1H),2.58(m,2H),2.44(m,3H),1.36(d,J＝7.6Hz,3H)。

实施例11(R)-1-(1-(磺酰(2-二甲氨基甲基环乙胺))哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

流程10：

步骤A：1-氯-3-二甲氨基异丙醇

25mL反应瓶中加入乙醇15mL、环氧氯丙烷4g，氮气保护下，冰盐浴降温至-5℃以下，滴加二甲胺溶液(30％乙醇溶液)7.2g，滴完继续-5℃保温反应2小时，撤去冰盐浴自然升温至室温。反应完毕后，直接浓缩干得5.8g无色透明油状液体。

步骤B：(R)-1-(1-(N-(1-氯乙基-3-二甲氨基丙基-2-基)-N-叔丁氧羰基磺酰胺)哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

以1-氯-3-二甲氨基异丙醇为原料，通过类似实施例1中流程1的步骤B中的所述操作，得到产品为黄色固体，m/z＝685[M+H]⁺。

步骤C：(R)-1-(1-(N-(1-氯乙基-3-二甲氨基丙基-2-基)磺酰胺)哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

通过类似实施例1中流程1的步骤C中的所述操作，得到产品为棕黄色固体，m/z＝585[M+H]⁺。

步骤D：(R)-1-(1-(磺酰(2-二甲氨基甲基环乙胺))哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

通过类似实施例1中流程1的步骤D中的所述操作，得到产品为淡黄色固体，m/z＝549[M+H]⁺，¹HNMR(400MHz,CDCl₃),δ8.37(s,1H),7.63(d,J＝6.4Hz,2H),7.38(t,J＝6.0Hz,2H),7.17(m,3H),7.08(d,J＝6.0Hz,2H),5.54(br,2H),5.04(m,1H),4.08(m,1H),3.92(brd,1H),3.55(t,J＝7.2Hz,1H),3.00(t,J＝7.2Hz,1H),2.75(m,1H),2.54(m,2H),2.42(m,2H),2.36(s,6H),2.25(m,2H),1.98(m,2H)。

实施例12(R)-1-(1-(磺酰(2-二甲氨基甲基环乙胺))吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

实施例12的合成以(R)-1-(吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺(见实施例2步骤B)为原料，通过类似实施例1中流程1的步骤A，以及实施例11中的步骤B，步骤C和步骤D中所述操作完成，得到产品为类白色固体，m/z＝535[M+H]⁺，¹HNMR(400MHz,CDCl₃),δ8.37(s,1H),7.64(d,J＝6.4Hz,2H),7.39(t,J＝7.6Hz,2H),7.16(m,3H),7.09(d,J＝7.6Hz,2H),5.62(m,1H),5.53(br,2H),4.03(m,1H),3.92(m,2H),3.72(m,1H),2.77(m,1H),2.67(m,1H),2.52(m,3H),2.40(m,2H),2.35(s,6H)。

实施例13(R)-1-(1-(磺酰(2-二甲氨基甲基环乙胺))哌啶-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

实施例13的合成以(R)-1-(哌啶-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺(见实施例7步骤B)为原料，通过类似实施例1中流程1的步骤A，以及实施例11中的步骤B，步骤C和步骤D中所述操作完成，得到产品为类白色固体，m/z＝567[M+H]⁺，¹HNMR(400MHz,CDCl₃),δ8.37(s,1H),7.62(d,J＝6.4Hz,2H),7.45(dd,J＝7.2Hz,6.4Hz,2H),7.22(dd,J＝9.2Hz,7.2Hz,2H),7.17(d,J＝6.4Hz,2H),5.56(br,2H),5.04(m,1H),4.08(m,1H),3.92(br d,1H),3.55(t,J＝7.2Hz,1H),3.00(t,J＝7.2Hz,1H),2.75(m,1H),2.53(m,2H),2.40(m,2H),2.35(s,6H),2.25(m,2H),1.96(m,2H)。

实施例14(R)-1-(1-(磺酰(2-二甲氨基甲基环乙胺))吡咯烷-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺

实施例14的合成以(R)-1-(吡咯烷-3-基)-3-(4-对氟苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]并嘧啶-4-胺(见实施例6步骤C)为原料，通过类似实施例1中流程1的步骤A，以及实施例11中的步骤B，步骤C和步骤D中所述操作完成，得到产品为类白色固体，m/z＝553[M+H]⁺，¹HNMR(400MHz,CDCl₃),δ8.37(s,1H),7.62(d,J＝6.4Hz,2H),7.44(dd,J＝7.2Hz,6.4Hz,2H),7.20(dd,J＝9.6Hz,7.2Hz,2H),7.15(d,J＝6.4Hz,2H),5.62(m,1H)，5.53(br,2H),4.03(m,1H),3.92(m,2H),3.72(m,1H),2.78(m,1H),2.66(m,1H),2.52(m,3H),2.40(m,2H),2.34(s,6H)。

实施例15

实施例15的合成以(R)-1-(吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-5-氨基吡唑-4-甲酰胺(见实施例3步骤B)为原料，通过类似实施例1中流程1的步骤A，以及实施例11中的步骤B，步骤C和步骤D中所述操作完成，得到产品为类白色固体，m/z＝526[M+H]⁺，¹HNMR(400MHz,CDCl₃),δ7.48(d,J＝6.8Hz,2H),7.38(t,J＝7.2Hz,2H),7.17(t,J＝7.2Hz,1H),7.07(m,4H),5.61(br,2H),4.77(m,1H),3.92(m,1H),3.85(m,2H),3.62(m,1H),2.77(m,1H),2.59(m,2H),2.51(m,1H),2.43(m,3H),2.35(s,6H)。

测试例1BTK酶学活性测试

在酶活反应中测定实施例化合物和不可逆BTK抑制剂(PCI-32765)对BTK激酶活性的抑制能力，采取匀相时间分辨荧光(HTRF)方法建立了BTK的激酶活性检测平台，进行化合物活性的测定。

将待测试的化合物从1mM开始用100％DMSO进行3倍的梯度稀释(共11个浓度)，每个浓度取4μL加入到96μL的反应缓冲液中(50mM Hepes，pH 7.0，5mM MgCl₂，0.1mMOrthovanadate，0.01％BSA)，取2.5μL加入到384孔板(OptiPlate-384，购买于PerkinElmer)然后加入2μL的BTK激酶(购买于Millipore)，离心混匀，再加入2μL的ATP与2μL TK-peptide(KinEASE^TM-TK，购买于Cisbio)混合物启动反应。将384孔板放于孵育箱中23℃反应90分钟，然后加入5μL TK-Antibody(购买于Cisbio)，5μL XL-665(KinEASE^TM-TK，购买于Cisbio)停止反应。在孵育箱中孵育1小时后，在Envision(购买于PerkinElmer)上读取荧光值(320nm激发，检测665nm与615nm的发射光，二者比值为酶活性)。每个化合物分别在11个浓度下测定酶的活性，数据使用GraFit6.0软件(ErithacusSoftware)计算得到该化合物的IC₅₀值。

测试例2ITK酶学活性测试

在酶活反应中测定实施例化合物和不可逆BTK抑制剂(PCI-32765)对ITK激酶活性的抑制能力，采取匀相时间分辨荧光(HTRF)方法建立了ITK的激酶活性检测平台，进行化合物活性的测定。

将待测试的化合物从1mM开始用100％DMSO进行3倍的梯度稀释(共11个浓度)，每个浓度取4μL加入到96μL的反应缓冲液中(50mM Hepes，pH 7.0，5mM MgCl₂，0.1mMOrthovanadate，0.01％BSA)，取2.5μL加入到384孔板(OptiPlate-384，购买于PerkinElmer)然后加入1μL的ITK激酶(购买于Millipore)，离心混匀，再加入2μL的ATP与2μL TK-peptide(KinEASE^TM-TK，购买于Cisbio)混合物启动反应。将384孔板放于孵育箱中23℃反应60分钟，然后加入5μL TK-Antibody(购买于Cisbio)，5μL XL-665(KinEASE^TM-TK，购买于Cisbio)停止反应。在孵育箱中孵育1小时后，在Envision(购买于PerkinElmer)上读取荧光值(320nm激发，检测665nm与615nm的发射光，二者比值为酶活性)。每个化合物分别在11个浓度下测定酶的活性，数据使用GraFit6.0软件(ErithacusSoftware)计算得到该化合物的IC₅₀值。

测试例1和测试例2所得的BTK体外抑制活性及针对ITK的选择性测试结果如表1所示。

表1

测试例3不可逆作用机理研究

将BTK激酶(40nM)与待测的BTK抑制剂(20nM)在25℃下共同孵育2.5hrs，然后将该混合物稀释100倍，并与酶反应底物(ATP+TK peptide)进行反应。然后在不同的时间点加入的乙腈(150μL)终止反应，测定酶活性。酶与BTK抑制剂的混合物在稀释100倍之后，在远远低于IC₅₀值的浓度条件下，可逆性BTK抑制剂(CGI1746)处理的样品酶活性得到恢复，而不可逆BTK抑制剂(PCI-32765)处理的样品则没有得到恢复。和PCI-32765一致，实施例1化合物处理的样品的酶活性也没有恢复，如图1所示。说明实施例1(即化合物1)化合物和BTK酶发生了不可逆的结合作用，也说明磺酰环乙胺是一个可以和BTK Cys485共价结合的新型官能团。

测试例4药物(代谢)动力学研究

研究分为两组：第一组动物(6只大鼠，雌雄各半)单次静脉给药，给药剂量为1mg/kg，药物溶于由10％EtOH，40％PEG400，50％H₂O(v/v/v)混合溶剂中，浓度为2mg/mL，给药前通过0.2-μm的滤膜过滤，给药体积为2.5mL/kg。第二组(6只大鼠，雌雄各半)单次灌胃给药，剂量为5mg/kg，药物混悬于20％SBE，混悬液浓度分别为0.6mg/mL，给药体积为5mL/kg。灌胃给药组的动物在实验前禁食过夜，禁食时间从给药前10小时至给药后4小时；静脉给药组的动物不禁食。

静脉给药组在给药前和给药后0.083、0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12和24小时采血，灌胃给药组在给药前和给药后0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12和24小时采血。使用小动物麻醉机经异氟烷麻醉后通过眼底静脉丛采取0.3mL全血，放于肝素抗凝管中，样品于4℃、4000rpm离心5min，血浆转移至离心管中，并放于-80℃保存。

血浆样品中药物的浓度分析使用液相色谱-串联质谱联用方法(LC-MS/MS)。分析前将混悬液与稀释质控样品(稀释后相当于质控样品浓度的新鲜配制的口服给药的混悬液和静脉给药的溶液)用乙腈稀释100倍，再用大鼠空白血浆稀释10倍。标准曲线范围为1至1000ng/mL，定量下限分别为1ng/mL。

个体动物的血浆浓度-时间数据用WinNonlin软件进行分析。药代动力学结果如表2所示。

表2

按照相同的测试方法得出实施例其他化合物的药代动力学结果，与实施例1化合物结果相近。

由图1、表1和表2结果可知，本发明提供的化合物具有优异的BTK抑制活性和针对ITK的选择性，同时具有良好的代谢特性，可作为一种非常具有潜力的不可逆BTK抑制剂。

虽然为了说明本发明，已经公开了本发明的优选实施方案，但是本领域的技术人员应当理解，在不脱离权利要求书所限定的本发明构思和范围的情况下，可以对本发明做出各种修改、添加和替换。

Claims

1.一种如通式(Ⅰ)所示含有磺酰吖丙啶结构的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，

其中，环A选自以下基团：

Y选自-S(＝O)₂-、-C(＝O)NH-或-C(＝O)-；

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，其中，所述环B选自含有一个N原子的4～7元饱和杂环基团，且通过N原子与基团Y相连。

3.根据权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，其中，所述环B选自以下杂环基团：

4.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，其中，所述R₁-R₄中的至多一个基团选自取代或未取代的以下基团，其余选自H：C_1-4烷基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、-(CH₂)_nC_3-5环烷基、-(CH₂)_nC_2-7杂环基、-(CH₂)_n-苯基、-(CH₂)_n-萘基、-(CH₂)_n-杂芳基、-(CH₂)_n-OH、-(CH₂)_n-(CHOH)_n-H、-(CH₂)_n-O-(CH₂)_nCH₃、-(CH₂)_n-NH₂、-(CH₂)_n-NH(C_1-4烷基)或-(CH₂)_n-N(C_1-4烷基)₂；n表示0～3的整数。

5.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，其中，所述Ar选自取代或未取代的单环的芳基或杂芳基，取代基选自C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_3-5环烷基、C_2-7杂环基、F、Br、I或C_1-4卤代烷氧基。

6.根据权利要求1-5任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，其中，所述化合物选自以下结构：

7.一种药物组合物，其包含权利要求1-6任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，以及药学可接受的载体。

8.权利要求1-6任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，以及权利要求7所述的药物组合物在制备布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂中的应用。

9.权利要求1-6任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，以及权利要求7所述的药物组合物在制备治疗或预防以下疾病的药物中的应用：癌症、自身免疫性疾病、异种免疫性疾病、炎性疾病或血栓性疾病。

10.根据权利要求9所述的应用，其中，所述疾病为红斑狼疮、炎性肠病、移植物抗宿主病、哮喘、关节炎、弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性淋巴瘤、滤泡型淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病或心肌梗塞。