CN107484461A - 一种利用次氯酸钠处理提高超低温保存的兜兰种子萌发率的方法 - Google Patents

一种利用次氯酸钠处理提高超低温保存的兜兰种子萌发率的方法 Download PDF

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吴坤林
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Abstract

本发明公开了一种利用次氯酸钠处理提高超低温保存的兜兰种子萌发率的方法。将超低温保存的兜兰种子迅速放入38℃‑42℃的水浴中解冻1‑3分钟，无菌条件下将种子放入无菌水中摇匀，用滤纸过滤后将种子用0.5％‑1.0％的有效氯的次氯酸钠溶液浸泡40‑80分钟，再用无菌水冲洗后播种到培养基中培养。利用本发明的利用次氯酸钠处理提高超低温保存的兜兰种子萌发率的方法，能显著提高超低温保存12‑24个月的兜兰种子萌发率，种子萌发率从0‑6％提高到30％‑60％，从而实现对兜兰种子的有效保护，为兜兰的种质资源保护和开发利用奠定基础。

Description

一种利用次氯酸钠处理提高超低温保存的兜兰种子萌发率的 方法
技术领域：
本发明属于植物保护生物学和生物技术领域，具体涉及一种利用次氯酸钠处理提高超低温保存的兜兰种子萌发率的方法。
背景技术：
兜兰(Paphiopedilum)又叫拖鞋兰、仙履兰等，全世界有90多个种，主要分布于亚洲热带地区至太平洋岛屿。兜兰由于其独特的花朵造型、绚丽的花朵色彩、持久的观赏花期而具有极高的观赏价值，是国际花卉市场上十分流行的高档花卉，在世界上具有大量的爱好者。但由于人们对兜兰的过度追逐而对野生资源进行了毁灭性的采挖，兜兰已成为世界上最濒危的植物物种之一，所有野生种类均被列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》(CITES)附录I而被禁止贸易。进行兜兰种质的保护是目前植物保护生物学的热点。兜兰种子的超低温保存是其种质保存最有效的方法之一，但经过低温保存的兜兰种子的萌发率极低。因此，如何对海伦兜兰种子进行保存以及提高海伦兜兰种子萌发率是目前亟需解决的技术难题。
发明内容：
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种利用次氯酸钠处理提高超低温保存的兜兰种子萌发率的方法。
本发明的利用次氯酸钠处理提高超低温保存的兜兰种子萌发率的方法，包括以下步骤：将超低温保存的兜兰种子迅速放入38℃-42℃的水浴中解冻1-3分钟，无菌条件下将种子放入无菌水中摇匀，用滤纸过滤后将种子用0.5％-1.0％的有效氯的次氯酸钠溶液浸泡40-80分钟，再用无菌水冲洗后播种到培养基中培养。
所述的播种到培养基中培养，其培养条件为：培养温度26℃-30℃，光照度2000-3000lx，光照12-14小时/天，所述的培养基为改良的H26基本培养基，其配方为：每升含有花宝1号1.0-2.0g、肌醇100mg、烟酸0.5mg、维生素B6 0.5mg、维生素B1 0.1mg、甘氨酸2mg、FeSO4·7H2O 27.8mg、Na2-EDTA·2H2O 37.3mg、萘乙酸0.5-1.5mg、椰子汁50-150mL、活性炭1.0-2.0g、琼脂5.5-6.5g和蔗糖15-25g，余量为水，其每升配制方法是将除水之外的各成分加入到少量水中，用水定容至1L。
所述的超低温保存具体为：选择生长健壮的兜兰植株在花期进行人工自交授粉，授粉后5-9个月内采集成熟还未开裂的蒴果，将蒴果进行消毒处理，无菌条件下切开蒴果，将粉末状成熟的种子脱水至种子含水量为8％-20％，然后将种子装入冷冻管中再投入液氮中保存。
所述的将蒴果进行消毒处理具体为：在超净工作台上将蒴果用体积分数70％-80％的酒精浸泡30-60秒后用质量分数0.1％-0.2％的升汞溶液消毒10-20分钟，无菌水漂洗4～6次。
所述的将粉末状成熟的种子脱水至种子含水量为8％-20％具体为：将经过干燥处理的变色硅胶放入已灭菌的培养皿中，然后在变色硅胶上面放上无菌滤纸，再将粉末状成熟的种子放到无菌滤纸上，用封口膜封好培养皿后脱水48-96小时。
所述的兜兰优选为杏黄兜兰(Paphiopedilum armeniacum S.C.Chen&F.Y.Liu)、白花兜兰(Paphiopedilum emersonii Koop.&P.J.Cribb)或海伦兜兰(Paphiopedilumhelenae Aver.)。
利用本发明的利用次氯酸钠处理提高超低温保存的兜兰种子萌发率的方法，能显著提高超低温保存12-24个月的兜兰种子萌发率，种子萌发率从0-6％提高到30％-60％，从而实现对兜兰种子的有效保护，为兜兰的种质资源保护和开发利用奠定基础。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
(1)种子的采集和超低温保存
选择生长健壮的杏黄兜兰(Paphiopedilum armeniacum S.C.Chen&F.Y.Liu)植株在花期进行人工自交授粉，授粉后4个月内采集完全成熟还未开裂的蒴果，在超净工作台上将蒴果用体积分数70％的酒精浸泡30秒后用质量分数0.1％的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水漂洗4次后切开蒴果，将8克粉末状成熟的种子放入已灭菌的直径15厘米培养皿中的直径12厘米无菌滤纸上进行脱水，每个培养皿中的滤纸下已放入了15克经过干燥处理的变色硅胶。放入种子后用封口膜封好培养皿脱水96小时。种子经脱水处理后，将种子装入2mL冷冻管中再投入-196℃液氮中保存，取部分未保存的经脱水处理的种子用于测定含水量，种子含水量为8％。
(2)超低温保存种子解冻、次氯酸钠处理和无菌播种
将步骤(1)超低温保存12个月的兜兰种子迅速放入38℃的水浴中解冻3分钟。然后在超净工作台上将种子放入具有10mL无菌水的小锥形瓶中，摇匀、用滤纸过滤后将种子用0.5％的有效氯的次氯酸钠溶液中浸泡80分钟，再用无菌水冲洗3次后播种到改良的H26基本培养基上培养，培养温度26℃，光照度2000lx，光照12小时/天，种子萌发率30％，而未经次氯酸钠处理的超低温保存12个月的兜兰种子的萌发率为0。改良的H26基本培养基的配方为：每升含有花宝1号1.0g、肌醇100mg、烟酸0.5mg、维生素B6 0.5mg、维生素B1 0.1mg、甘氨酸2mg、FeSO4·7H2O 27.8mg、Na2-EDTA·2H2O 37.3mg、萘乙酸0.5mg、椰子汁50mL、活性炭1.0g、琼脂5.5g和蔗糖15g，余量为水。
实施例2：
(1)种子的采集和超低温保存
选择生长健壮的白花兜兰(Paphiopedilum emersonii Koop.&P.J.Cribb)植株在花期进行人工自交授粉，授粉后7个月内采集完成成熟还未开裂的蒴果，在超净工作台上将蒴果用体积分数75％的酒精浸泡45秒后用质量分数0.15％的升汞溶液中消毒15分钟，无菌水漂洗5次后切开蒴果，将10克粉末状成熟的种子放入已灭菌的直径15厘米培养皿中的直径12厘米无菌滤纸上进行脱水，每个培养皿中的滤纸下已放入了20克经过干燥处理的变色硅胶。放入种子后用封口膜封好培养皿脱水72小时。种子经脱水处理后，将种子装入2mL冷冻管中再投入-196℃液氮中保存，取部分未保存的经脱水处理的种子用于测定含水量，种子含水量为20％。
(2)超低温保存种子解冻、次氯酸钠处理和无菌播种
将步骤(1)超低温保存18个月的兜兰种子迅速放入40℃的水浴中解冻2分钟。然后在超净工作台上将种子放入具有10mL无菌水的小锥形瓶中，摇匀、用滤纸过滤后将种子用0.75％的有效氯的次氯酸钠溶液中浸泡60分钟，再用无菌水冲洗4次后播种到改良的H26基本培养基上培养，培养温度28℃，光照度2500lx，光照13小时/天，种子萌发率45％，而未经次氯酸钠处理超低温保存18个月的兜兰种子的萌发率为3％。改良的H26基本培养基的配方为：每升含有花宝1号1.5g、肌醇100mg、烟酸0.5mg、维生素B6 0.5mg、维生素B1 0.1mg、甘氨酸2mg、FeSO4·7H2O 27.8mg、Na2-EDTA·2H2O 37.3mg、萘乙酸1.0mg、椰子汁100mL、活性炭1.5g、琼脂6.0g和蔗糖20g，余量为水。
实施例3：
(1)种子的采集和超低温保存
选择生长健壮的海伦兜兰(Paphiopedilum helenae Aver.)植株在花期进行人工自交授粉，授粉后9个月内采集完成成熟还未开裂的蒴果，在超净工作台上将蒴果用体积分数80％的酒精浸泡30秒后用质量分数0.2％的升汞溶液中消毒10分钟，无菌水漂洗6次后切开蒴果，将14克粉末状成熟的种子放入已灭菌的直径15厘米培养皿中的直径12厘米无菌滤纸上进行脱水，每个培养皿中的滤纸下已放入了22克经过干燥处理的变色硅胶。放入种子后用封口膜封好培养皿脱水48小时。种子经脱水处理后，将种子装入2mL冷冻管中再投入-196℃液氮中保存，取部分未保存的经脱水处理的种子用于测定含水量，种子含水量为20％。
(2)超低温保存种子解冻、次氯酸钠处理和无菌播种
将步骤(1)超低温保存24个月的兜兰种子迅速放入42℃的水浴中解冻1分钟。然后在超净工作台上将解冻后的种子放入具有10mL无菌水的小锥形瓶中，摇匀、用滤纸过滤后将种子用1.0％的有效氯的次氯酸钠溶液浸泡40分钟，再用无菌水冲洗5次后播种到改良的H26基本培养基上培养，培养温度30℃，光照度3000lx，光照14小时/天，种子萌发率60％，而未经次氯酸钠处理的超低温保存24个月的兜兰种子的萌发率为6％。改良的H26基本培养基的配方为：每升含有花宝1号2.0g、肌醇100mg、烟酸0.5mg、维生素B6 0.5mg、维生素B10.1mg、甘氨酸2mg、FeSO4·7H2O 27.8mg、Na2-EDTA·2H2O 37.3mg、萘乙酸1.5mg、椰子汁150mL、活性炭2.0g、琼脂6.5g和蔗糖25g，余量为水。

Claims (6)

1.一种利用次氯酸钠处理提高超低温保存的兜兰种子萌发率的方法，其特征在于，包括以下步骤：将超低温保存的兜兰种子放入38℃-42℃的水浴中解冻1-3分钟，无菌条件下将种子放入无菌水中摇匀，用滤纸过滤后将种子用0.5％-1.0％的有效氯的次氯酸钠溶液浸泡40-80分钟，再用无菌水冲洗后播种到培养基中培养。
2.根据权利要求1所述的利用次氯酸钠处理提高超低温保存的兜兰种子萌发率的方法，其特征在于，所述的播种到培养基中培养，其培养条件为：培养温度26℃-30℃，光照度2000-3000lx，光照12-14小时/天，所述的培养基为改良的H26基本培养基，其配方为：每升含有花宝1号1.0-2.0g、肌醇100mg、烟酸0.5mg、维生素B6 0.5mg、维生素B1 0.1mg、甘氨酸2mg、FeSO4·7H2O 27.8mg、Na2-EDTA·2H2O 37.3mg、萘乙酸0.5-1.5mg、椰子汁50-150mL、活性炭1.0-2.0g、琼脂5.5-6.5g和蔗糖15-25g，余量为水。
3.根据权利要求1所述的利用次氯酸钠处理提高超低温保存的兜兰种子萌发率的方法，其特征在于，所述的超低温保存具体为：选择生长健壮的兜兰植株在花期进行人工自交授粉，授粉后5-9个月内采集成熟还未开裂的蒴果，将蒴果进行消毒处理，无菌条件下切开蒴果，将粉末状成熟的种子脱水至种子含水量为8％-20％，然后将种子装入冷冻管中再投入液氮中保存。
4.根据权利要求3所述的利用次氯酸钠处理提高超低温保存的兜兰种子萌发率的方法，其特征在于，所述的将蒴果进行消毒处理具体为：在超净工作台上将蒴果用体积分数70％-80％的酒精浸泡30-60秒后用质量分数0.1％-0.2％的升汞溶液消毒10-20分钟，无菌水漂洗4～6次。
5.根据权利要求3所述的利用次氯酸钠处理提高超低温保存的兜兰种子萌发率的方法，其特征在于，所述的将粉末状成熟的种子脱水至种子含水量为8％-20％具体为：将经过干燥处理的变色硅胶放入已灭菌的培养皿中，然后在变色硅胶上面放上无菌滤纸，再将粉末状成熟的种子放到无菌滤纸上，用封口膜封好培养皿后脱水48-96小时。
6.根据权利要求1-5任一项所述的利用次氯酸钠处理提高超低温保存的兜兰种子萌发率的方法，其特征在于，所述的兜兰为杏黄兜兰(Paphiopedilum armeniacum S.C.Chen&F.Y.Liu)、白花兜兰(Paphiopedilum emersonii Koop.&P.J.Cribb)或海伦兜兰(Paphiopedilum helenae Aver.)。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108633376A (zh) * 2018-04-21 2018-10-12 云南省林业科学院 一种格力兜兰种子非共生萌发的培养方法
CN111557138A (zh) * 2020-06-04 2020-08-21 中国科学院华南植物园 一种提高桃金娘种子组培萌发和降低污染率的处理方法
CN116897831A (zh) * 2023-06-06 2023-10-20 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 一种天伦兜兰的种子组织培养繁殖方法及培养基

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103548669A (zh) * 2013-10-22 2014-02-05 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 一种促进建兰种子非共生萌发的方法
CN104365584A (zh) * 2014-10-17 2015-02-25 中国科学院昆明植物研究所 用n-酰基乙醇胺提高植物种子超低温保藏后存活率的方法及其应用
CN106472308A (zh) * 2016-09-30 2017-03-08 中国科学院华南植物园 一种兰花种子的保存及育苗方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103548669A (zh) * 2013-10-22 2014-02-05 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 一种促进建兰种子非共生萌发的方法
CN104365584A (zh) * 2014-10-17 2015-02-25 中国科学院昆明植物研究所 用n-酰基乙醇胺提高植物种子超低温保藏后存活率的方法及其应用
CN106472308A (zh) * 2016-09-30 2017-03-08 中国科学院华南植物园 一种兰花种子的保存及育苗方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘其府，等: "同色兜兰种子非共生萌发试验", 《广东农业科学》 *
姚昕，等: "兰科植物种子及圆球茎的超低温保存研究进展", 《云南农业大学学报》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108633376A (zh) * 2018-04-21 2018-10-12 云南省林业科学院 一种格力兜兰种子非共生萌发的培养方法
CN108633376B (zh) * 2018-04-21 2021-01-12 云南省林业和草原科学院 一种格力兜兰种子非共生萌发的培养方法
CN111557138A (zh) * 2020-06-04 2020-08-21 中国科学院华南植物园 一种提高桃金娘种子组培萌发和降低污染率的处理方法
CN116897831A (zh) * 2023-06-06 2023-10-20 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 一种天伦兜兰的种子组织培养繁殖方法及培养基

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