CN107462708A - 抗原或抗体包被磁微粒的方法、应用及试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及抗原或抗体包被磁微粒的方法,以及由该方法制备的磁微粒在化学发光免疫分析中的应用。本发明还涉及一种试剂盒,包括抗原或抗体包被的磁微粒。本发明提供的抗原或抗体包被磁微粒的方法,具有抗原或抗体在包被上磁微粒后检测信号值高、稳定性好的特点。
Description
技术领域
本发明属于生物检测领域,具体涉及抗原或抗体包被磁微粒的方法。
背景技术
化学发光免疫分析法是在放射免疫分析和酶联免疫分析两种方法的基础上改进而来,它结合了上述两种方法的优点:灵敏度高,线性范围宽,操作简单,结果稳定,重复性好。因此,化学发光免疫分析法是目前体外诊断试剂检测方法中的佼佼者。该方法通过将抗原或抗体固定在某种特殊载体上,利用抗原抗体的特异性反应,并依靠直接或间接发光物质,将被检测物质浓度转化为光学信号反应出来。
磁微粒作为化学发光免疫分析中最常用的载体,适用于绝大多数体外检测项目,它依靠磁微粒表面的羧基和包被抗原或抗体的氨基结合,达到固定抗原或抗体的效果。目前,磁微粒常用的包被抗原或抗体的方法分为一步法和两步法。
公开号为CN106404757A的中国专利公开了一种RA33抗原包被的纳米磁珠制备方法,该专利采用一步法,即包被过程将EDC、磁微粒和抗原同时加入溶液中反应。一步法操作步骤简便,耗时较少,但存在某些抗原包被后检测不出信号值或信号值太低的问题。
公开号为CN101949943A的中国专利公开了一种抗促甲状腺激素单克隆抗体的磁微粒混悬液的制备方法,该专利采用两步法,即磁微粒先用EDC活化,静置后再加入待包被的抗体。两步法中,EDC只活化了磁微粒上的羧基,活化后的羧基针对性与待包被的抗原或抗体的氨基结合,效率较高,最后的检测信号值也相应提高。但在实验过程中我们发现,某些抗原或抗体包被在磁微粒上后,其稳定性较差,影响了试剂盒的校准周期和有效期。
因此,在使用抗原或抗体包被磁微粒时,需要一种方法既能保证其包被效率,使其最终的检测信号值较高,又要保证抗原或抗体在包被上磁微粒后的稳定性。
发明内容
本发明为克服上述现有技术的问题,提供一种抗原或抗体包被磁微粒的方法,包括以下步骤:
步骤一:取磁微粒,用缓冲液A重悬磁微粒;
步骤二:取活化液,加入到步骤一重悬好的磁微粒溶液中,混匀;
步骤三:将抗原或抗体加入到步骤二活化好的磁微粒溶液中,混匀;
步骤四:取活化液,加入到步骤三溶液中,混匀;
步骤五:取封闭液,加入到步骤四溶液中,混匀;
步骤六:取缓冲液B,清洗步骤五的磁微粒,完成抗原或抗体包被磁微粒。
进一步地:
步骤二、四中所述活化液为EDC.HCL或DCC溶液;
步骤一中所述缓冲液A为MES溶液;
步骤五中所述封闭液为Tris或BSA或酪蛋白溶液的一种或多种;
步骤六中所述缓冲液B为TBST或PBS或含有Tween的PBS溶液。
更进一步地:
步骤一中所述缓冲液A重悬磁微粒后的磁微粒浓度为2mg/ml~20mg/ml;
步骤二中所述活化液中EDC.HCL或DCC与磁微粒质量比为1:20~5:1;
步骤三中所述抗原或抗体与磁微粒质量比为1:2000~1:50;
步骤四中所述活化液中EDC.HCL或DCC与磁微粒质量比为1:20~5:1;
步骤一中的磁微粒在被缓冲液A重悬前已经被缓冲液A清洗过;
上述磁微粒平均粒径为1μm~3μm;
上述磁微粒质量均为步骤一中被缓冲液A清洗前的磁微粒质量。
本发明提供的抗原或抗体包被磁微粒的方法制备的磁微粒应用在化学发光免疫分析中,可以提高抗原或抗体在包被上磁微粒后的检测信号值,所述化学发光免疫分析包括用于人血清中各种特异性总抗体、特异性IgG、IgM类抗体、特异性抗原的化学发光免疫分析。
进一步地:所述化学发光免疫分析包括RNP抗原、SCL-70抗原、JO-1抗原、HIV抗原、HCV抗原、HBeAg抗体、胰岛素、FT3、FT4和Renin中的至少一种的化学发光免疫分析。
本发明还提供一种试剂盒,所述试剂盒包括抗原或抗体包被的磁微粒,所述抗原或抗体包被的磁微粒由本发明抗原或抗体包被磁微粒的方法制备而成。本发明提供的抗原或抗体包被磁微粒的方法,具有以下优点:
1、抗原或抗体在包被上磁微粒后检测信号值高;
2、抗原或抗体在包被上磁微粒后稳定性好。
具体实施方式
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解这些实施例仅用于说明本发明不用于限制本发明的范围。
本发明提供的抗原或抗体包被磁微粒的方法中涉及各溶液配制方法如下:
1、0.1mol/L MES溶液配制:称取19.52g MES溶于1L纯化水中,用NaOH调PH值至6.0±0.2。
2、10mg/ml EDC.HCL溶液配制:称取10mg的EDC.HCL溶于1ml冷MES溶液中。
3、10mg/ml DCC溶液配制:称取10mg的10mg/ml DCC溶于1ml DMSO溶液中。
4、1mol/L Tris溶液配制:称取121.1g Tris溶于1L纯化水中。
5、10%BSA溶液配制:称取10g BSA溶于100ml纯化水中。
6、10%酪蛋白溶液配制:称取10g酪蛋白溶于100ml纯化水中。
7、TBST溶液配制:称取3.03g Tris溶于1L纯化水中,再向上述溶液中加入8.775gNaCl,用HCL溶液调PH值至7.3~7.4。
本发明提供的抗原或抗体包被磁微粒的方法中涉及材料及试剂来源如下:
磁微粒(四川迈克生物新材料技术有限公司LOT:XCL1137)
MES(苏州亚科Cat:M0006)
EDC.HCL(苏州亚科Cat:E0009)
DCC(Sigma Cat:BCBM3570V)
Tris(ANGUS)
BSA(BOVOGEN Cat:BSAS 1.0)
酪蛋白(Sigma Cat:SLBF5266V)
NaCl(成都科隆化学品有限公司分析纯)
NaOH(广东光华科技股份有限公司分析纯)
DMSO(成都长联化工试剂有限公司化学纯)
HCL(成都科隆化学品有限公司分析纯)
RNP抗原(四川迈克生物新材料技术有限公司Cat:XCL1104)
SCL-70抗原(四川迈克生物新材料技术有限公司Cat:XCL1105)
抗HBeAg单克隆抗体-1(四川迈克生物新材料技术有限公司Cat:XCL1006)
HRP-抗人IgG抗体(四川迈克生物新材料技术有限公司Cat:XCL1158)
Anti-RNP Control(Bio-Rad Laboratories Cat:LiquichekTMAutoimmuneControls116)
Anti-Scl-70 Control(Bio-Rad Laboratories Cat:LiquichekTMAutoimmuneControls117)
样本稀释液4号(迈克生物股份有限公司Cat:IM4212464)
HRP-HBeAb单抗(北京科跃中楷生物技术有限公司Cat:B311H005)
重组乙型肝炎病毒e抗原(四川迈克生物新材料技术有限公司Cat:XCL1367)
在以下实施例中,以RNP、SCL-70和HBeAg三个项目为例,分别采用一步法、两步法和本发明方法包被磁微粒,并配套三个项目各自试剂盒其它组分,分别检测对应项目的主校准品。比较一步法、两步法和本发明方法包被磁微粒的检测信号值,再将检测信号值相对较高的磁微粒37℃水浴后,比较磁微粒的信号保留率,本发明中,37℃水浴后磁微粒信号保留率定义如下:
信号保留率=(37℃水浴N天后磁微粒检测信号值/磁微粒刚包被好检测信号值)*100%
实施例1
分别采用一步法、两步法和本发明方法将RNP抗原包被磁微粒,配套HRP-抗人IgG抗体,分别检测RNP项目主校准品CAL1-CAL6。将检测信号值较高的抗原磁微粒放置于37℃水浴7天、14天后,再配套HRP-抗人IgG抗体,分别检测RNP项目主校准品CAL1-CAL6。计算37℃水浴7天、14天后,抗原磁微粒信号保留率。
RNP项目主校准品制备方法如下:
CAL1:样本稀释液4号
CAL2:样本稀释液4号将Anti-RNP Control高值点稀释4096倍
CAL3:样本稀释液4号将Anti-RNP Control高值点稀释512倍
CAL4:样本稀释液4号将Anti-RNP Control高值点稀释128倍
CAL5:样本稀释液4号将Anti-RNP Control高值点稀释32倍
CAL6:样本稀释液4号将Anti-RNP Control高值点稀释16倍
抗原包被磁微粒制备方法如下:
一步法包被RNP磁微粒:
1、清洗:取适量磁微粒,用0.1mol/L MES清洗磁微粒4次,再用0.1mol/L MES重悬磁微粒,使其浓度为10mg/ml;
2、活化包被:取现配EDC.HCL溶液,按EDC.HCL与磁微粒质量比1:20的比例向重悬好的磁微粒中加入EDC.HCL溶液,涡旋混匀;再按抗原与磁微粒质量比为1:2000的包被比例向上述活化好的磁微粒中加入需包被的RNP抗原,涡旋混匀后,室温水平混匀12小时;
3、封闭:向上述磁微粒中加入1mol/L Tris溶液,室温水平混匀3小时;
4、清洗:用TBST溶液清洗上述磁微粒5次,完成RNP抗原包被磁微粒。
两步法包被RNP磁微粒:
1、清洗:取适量磁微粒,用0.1mol/L MES清洗磁微粒4次,再用0.1mol/L MES重悬磁微粒,使其浓度为10mg/ml;
2、活化:取现配EDC.HCL溶液,按EDC.HCL与磁微粒质量比1:20的比例向重悬好的磁微粒中加入EDC.HCL溶液,涡旋混匀后,室温水平混匀30分钟;
3、包被:按抗原与磁微粒质量比为1:2000的包被比例向上述活化好的磁微粒中加入需包被的RNP抗原,涡旋混匀后,室温水平混匀12小时;
4、封闭:向上述磁微粒中加入1mol/L Tris溶液,室温水平混匀3小时;
5、清洗:用TBST溶液清洗上述磁微粒5次,完成RNP抗原包被磁微粒。
本发明方法包被RNP磁微粒:
1、清洗:取适量磁微粒,用0.1mol/L MES清洗磁微粒4次,再用0.1mol/L MES重悬磁微粒,使其浓度为10mg/ml;
2、活化:取现配EDC.HCL溶液,按EDC.HCL与磁微粒质量比1:20的比例向重悬好的磁微粒中加入EDC.HCL溶液,涡旋混匀后,室温水平混匀30分钟;
3、包被:按抗原与磁微粒质量比为1:2000的包被比例向上述活化好的磁微粒中加入需包被的RNP抗原,涡旋混匀后,室温水平混匀12小时;
4、再活化:取现配EDC.HCL溶液,按EDC.HCL与磁微粒质量比1:20的比例向包被好RNP抗原的磁微粒中再次加入EDC.HCL溶液,涡旋混匀后,室温水平混匀2小时;
5、封闭:向上述磁微粒中加入1mol/L Tris溶液,室温水平混匀3小时;
6、清洗:用TBST溶液清洗上述磁微粒5次,完成RNP抗原包被磁微粒。
采用上述三种包被工艺的RNP抗原磁微粒信号值及37℃水浴后信号保留率见表1。
表1
以上结果表明,采用一步法包被磁微粒,其RNP抗原磁微粒检测信号值较两步法及本发明方法低,因此未对一步法包被磁微粒进行37℃水浴。而将RNP抗原磁微粒检测信号值较高的两步法及本发明方法的抗原磁微粒放置于37℃水浴7天、14天后,本发明方法RNP抗原磁微粒信号保留率较两步法高。
实施例2
分别采用一步法、两步法和上述优化工艺将SCL-70抗原包被磁微粒,配套HRP-抗人IgG抗体,检测SCL-70项目主校准品CAL1-CAL6。将检测信号值较高的抗原磁微粒放置于37℃水浴7天、14天后,再配套HRP-抗人IgG抗体,检测SCL-70项目主校准品CAL1-CAL6。计算37℃水浴7天、14天后,抗原磁微粒信号保留率。
抗原包被磁微粒制备方法如下:
SCL-70项目主校准品制备方法如下:
CAL1:样本稀释液4号
CAL2:样本稀释液4号将Anti-Scl-70 Control高值点稀释4096倍
CAL3:样本稀释液4号将Anti-Scl-70 Control高值点稀释512倍
CAL4:样本稀释液4号将Anti-Scl-70 Control高值点稀释256倍
CAL5:样本稀释液4号将Anti-Scl-70 Control高值点稀释64倍
CAL6:样本稀释液4号将Anti-Scl-70 Control高值点稀释32倍
一步法包被SCL-70磁微粒:
1、清洗:取适量磁微粒,用0.1mol/L MES清洗磁微粒4次,再用0.1mol/L MES重悬磁微粒,使其浓度为2mg/ml;
2、活化包被:取现配DCC溶液,按DCC与磁微粒质量比1:1的比例向重悬好的磁微粒中加入DCC溶液,涡旋混匀;再按抗原与磁微粒质量比为1:200的包被比例向上述活化好的磁微粒中加入需包被的SCL-70抗原,涡旋混匀后,室温水平混匀12小时;
3、封闭:向上述磁微粒中加入1mol/L Tris溶液、10%BSA溶液以及10%酪蛋白溶液的混合封闭液,室温水平混匀3小时;
4、清洗:用PBS溶液清洗上述磁微粒5次,完成SCL-70抗原包被磁微粒。
两步法包被SCL-70磁微粒:
1、清洗:取适量磁微粒,用0.1mol/L MES清洗磁微粒4次,再用0.1mol/L MES重悬磁微粒,使其浓度为2mg/ml;
2、活化:取现配DCC溶液,按DCC与磁微粒质量比1:1的比例向重悬好的磁微粒中加入DCC溶液,涡旋混匀后,室温水平混匀30分钟;
3、包被:按抗原与磁微粒质量比为1:200的包被比例向上述活化好的磁微粒中加入需包被的SCL-70抗原,涡旋混匀后,室温水平混匀12小时;
4、封闭:向上述磁微粒中加入1mol/L Tris溶液、10%BSA溶液以及10%酪蛋白溶液的混合封闭液,室温水平混匀3小时;
5、清洗:用PBS溶液清洗上述磁微粒5次,完成SCL-70抗原包被磁微粒。
本发明方法包被SCL-70磁微粒:
1、清洗:取适量磁微粒,用0.1mol/L MES清洗磁微粒4次,再用0.1mol/L MES重悬磁微粒,使其浓度为20mg/ml;
2、活化:取现配DCC溶液,按DCC与磁微粒质量比1:1的比例向重悬好的磁微粒中加入DCC溶液,涡旋混匀后,室温水平混匀30分钟;
3、包被:按抗原与磁微粒质量比为1:200的包被比例向上述活化好的磁微粒中加入需包被的SCL-70抗原,涡旋混匀后,室温水平混匀12小时;
4、再活化:取现配DCC溶液,按DCC与磁微粒质量比1:1的比例向包被好SCL-70抗原的磁微粒中再次加入DCC溶液,涡旋混匀后,室温水平混匀2小时;
5、封闭:向上述磁微粒中加入1mol/L Tris溶液、10%BSA溶液以及10%酪蛋白溶液的混合封闭液,室温水平混匀3小时;
6、清洗:用PBS溶液清洗上述磁微粒5次,完成SCL-70抗原包被磁微粒。
采用上述三种包被工艺的SCL-70抗原磁微粒信号值及37℃水浴后信号保留率见表2。
表2
以上结果表明,采用一步法包被磁微粒,其SCL-70抗原磁微粒检测信号值较两步法及本发明方法低,因此未对一步法包被磁微粒进行37℃水浴。而将SCL-70抗原磁微粒检测信号值较高的两步法及本发明方法的抗原磁微粒放置于37℃水浴7天、14天后,本发明方法SCL-70抗原磁微粒信号保留率较两步法高。
实施例3
分别采用一步法、两步法和上述优化工艺将抗HBeAg单克隆抗体-1包被磁微粒,配套HRP-HBeAb单抗,检测重组乙型肝炎病毒e抗原主校准品CAL1-CAL7。将检测信号值较高的磁微粒放置于37度水浴7天、14天后,再配套HRP-HBeAb单抗,检测重组乙型肝炎病毒e抗原主校准品CAL1-CAL7。计算37度水浴7天、14天后,抗体磁微粒信号保留率。
重组乙型肝炎病毒e抗原主校准品制备方法如下:
CAL1:样本稀释液4号
CAL2:样本稀释液4号将重组乙型肝炎病毒e抗原稀释30000倍
CAL3:样本稀释液4号将重组乙型肝炎病毒e抗原稀释8000倍
CAL4:样本稀释液4号将重组乙型肝炎病毒e抗原稀释1250倍
CAL5:样本稀释液4号将重组乙型肝炎病毒e抗原稀释225倍
CAL6:样本稀释液4号将重组乙型肝炎病毒e抗原稀释90倍
CAL7:样本稀释液4号将重组乙型肝炎病毒e抗原稀释20倍
抗体包被磁微粒制备方法如下:
一步法包被抗HBeAg单克隆抗体-1磁微粒:
1、清洗:取适量磁微粒,用0.1mol/L MES清洗磁微粒4次,再用0.1mol/L MES重悬磁微粒,使其浓度为20mg/ml;
2、活化包被:取现配制EDC.HCL溶液,按EDC.HCL与磁微粒质量比1:5的比例向重悬好的磁微粒中加入EDC.HCL溶液,涡旋混匀;再按抗体与磁微粒质量比为1:50的包被比例向上述活化好的磁微粒中加入需包被的抗HBeAg单克隆抗体-1抗体,涡旋混匀后,室温水平混匀12小时;
3、封闭:向上述磁微粒中加入1mol/L Tris溶液、10%BSA溶液混合封闭液,室温水平混匀3小时;
4、清洗:用含有Tween的PBS溶液清洗上述磁微粒5次,完成抗HBeAg单克隆抗体-1抗体包被磁微粒。
两步法包被抗HBeAg单克隆抗体-1磁微粒:
1、清洗:取适量磁微粒,用0.1mol/L MES清洗磁微粒4次,再用0.1mol/L MES重悬磁微粒,使其浓度为20mg/ml;
2、活化:取现配EDC.HCL溶液,按EDC.HCL与磁微粒质量比1:5的比例向重悬好的磁微粒中加入EDC.HCL溶液,涡旋混匀后,室温水平混匀30分钟;
3、包被:按抗体与磁微粒质量比为1:50的包被比例向上述活化好的磁微粒中加入需包被的抗HBeAg单克隆抗体-1抗体,涡旋混匀后,室温水平混匀12小时;
4、封闭:向上述磁微粒中加入1mol/L Tris溶液、10%BSA溶液混合封闭液,室温水平混匀3小时;
5、清洗:用含有Tween的PBS溶液清洗上述磁微粒5次,完成抗HBeAg单克隆抗体-1抗体包被磁微粒。
本发明方法包被抗HBeAg单克隆抗体-1磁微粒:
1、清洗:取适量磁微粒,用0.1mol/L MES清洗磁微粒4次,再用0.1mol/L MES重悬磁微粒,使其浓度为20mg/ml;
2、活化:取现配EDC.HCL溶液,按EDC.HCL与磁微粒质量比1:5的比例向重悬好的磁微粒中加入EDC.HCL溶液,涡旋混匀后,室温水平混匀30分钟;
3、包被:按抗体与磁微粒质量比为1:50的包被比例向上述活化好的磁微粒中加入需包被的抗HBeAg单克隆抗体-1抗体,涡旋混匀后,室温水平混匀12小时;
4、再活化:取新鲜配制EDC.HCL溶液,按EDC.HCL与磁微粒质量比1:5的
比例向包被好抗HBeAg单克隆抗体-1抗体的磁微粒中再次加入EDC.HCL溶液,
涡旋混匀后,室温水平混匀2小时;
5、封闭:向上述磁微粒中加入1mol/L Tris溶液、10%BSA溶液混合封闭
液,室温水平混匀3小时;
6、清洗:用含有Tween的PBS溶液清洗上述磁微粒5次,完成抗HBeAg单
克隆抗体-1抗体包被磁微粒。
采用上述三种包被工艺的抗HBeAg单克隆抗体-1抗体磁微粒,检测重组乙
型肝炎病毒e抗原信号值及37℃水浴后信号保留率见表3。
表3
以上结果表明,采用一步法包被抗HBeAg单克隆抗体-1磁微粒检测信号值较两步法及本发明方法低,因此未对一步法包被磁微粒进行37℃水浴。而将抗HBeAg单克隆抗体-1磁微粒检测信号值较高的两步法及本发明方法的抗原磁微
粒放置于37℃水浴7天、14天后,本发明方法包被的抗HBeAg单克隆抗体-1磁微粒信号保留率较两步法高。
实施例4
采用本发明方法将RNP抗原包被磁微粒,在包被过程中,步骤二中所述活化液与磁微粒质量比为1:21;步骤三中所述抗原或抗体与磁微粒质量比为1:2200;步骤四中所述活化液与磁微粒质量比为1:21。再配套HRP-抗人IgG抗体,检测RNP项目主校准品。
采用上述的包被比例包被RNP磁微粒,配套HRP-抗人IgG抗体,检测RNP项目主校准品信号值见表4:
表4
主校准品 | RNP主校准品信号 |
CAL1 | 210 |
CAL2 | 8913 |
CAL3 | 67584 |
CAL4 | 217485 |
CAL5 | 484758 |
CAL6 | 675886 |
以上方案检测出的信号值远低于在实施例1中,采用本发明方法检测校准品的信号值。
实施例5
采用本发明方法将SCL-70抗原包被磁微粒,在包被过程中,步骤二中所述活化液与磁微粒质量比为6:1;步骤三中所述抗原或抗体与磁微粒质量比为1:48;步骤四中所述活化液与磁微粒质量比为6:1。再配套HRP-抗人IgG抗体,检测SCL-70项目主校准品。
采用上述的包被比例包被SCL-70磁微粒,配套HRP-抗人IgG抗体,检测SCL-70项目主校准品信号值见表5:
表5
主校准品 | SCL-70主校准品信号 |
CAL1 | 117 |
CAL2 | 6775 |
CAL3 | 57859 |
CAL4 | 94754 |
CAL5 | 191457 |
CAL6 | 347584 |
以上方案检测出的信号值远低于在实施例2中,采用本发明方法检测校准品的信号值。
Claims (15)
1.抗原或抗体包被磁微粒的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
步骤一:取磁微粒,用缓冲液A重悬磁微粒;
步骤二:取活化液,加入到步骤一重悬好的磁微粒溶液中,混匀;
步骤三:将抗原或抗体加入到步骤二活化好的磁微粒溶液中,混匀;
步骤四:取活化液,加入到步骤三溶液中,混匀;
步骤五:取封闭液,加入到步骤四溶液中,混匀;
步骤六:取缓冲液B,清洗步骤五的磁微粒,完成抗原或抗体包被磁微粒。
2.如权利要求1所述抗原或抗体包被磁微粒的方法,其特征在于,所述步骤二、四中活化液为EDC.HCL或DCC溶液。
3.如权利要求1所述抗原或抗体包被磁微粒的方法,其特征在于,所述步骤一中缓冲液A为MES溶液。
4.如权利要求1所述抗原或抗体包被磁微粒的方法,其特征在于,所述步骤五中封闭液为Tris或BSA或酪蛋白溶液的一种或多种。
5.如权利要求1所述抗原或抗体包被磁微粒的方法,其特征在于,所述步骤六中缓冲液B为TBST或PBS或含有Tween的PBS溶液。
6.如权利要求1至5任一项所述抗原或抗体包被磁微粒的方法,其特征在于,所述磁微粒平均粒径为1μm~3μm。
7.如权利要求1所述抗原或抗体包被磁微粒的方法,其特征在于,所述步骤一中缓冲液A重悬磁微粒后的磁微粒浓度为2mg/ml~20mg/ml。
8.如权利要求1所述抗原或抗体包被磁微粒的方法,其特征在于,所述步骤二中活化液中EDC.HCL或DCC与磁微粒质量比为1:20~5:1。
9.如权利要求1所述抗原或抗体包被磁微粒的方法,其特征在于,所述步骤三中抗原或抗体与磁微粒质量比为1:2000~1:50。
10.如权利要求1所述抗原或抗体包被磁微粒的方法,其特征在于,所述步骤四中活化液中EDC.HCL或DCC与磁微粒质量比为1:20~5:1。
11.如权利要求1所述抗原或抗体包被磁微粒的方法,其特征在于,所述步骤一中的磁微粒在被缓冲液A重悬前已经被缓冲液A清洗过。
12.一种试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括抗原或抗体包被的磁微粒,所述抗原或抗体包被的磁微粒由权利要求1-11任一项所述抗原或抗体包被磁微粒的方法制备而成。
13.权利要求1-11任一项所述抗原或抗体包被磁微粒的方法制备的磁微粒在化学发光免疫分析中的应用。
14.如权利要求13所述的应用,其特征在于,所述磁微粒用于人血清中各种特异性总抗体、特异性IgG、IgM类抗体、特异性抗原的化学发光免疫分析。
15.如权利要求13所述的应用,其特征在于,所述磁微粒用于对RNP抗原、SCL-70抗原、JO-1抗原、HIV抗原、HCV抗原、HBeAg抗体、胰岛素、FT3、FT4和Renin中的至少一种的化学发光免疫分析。
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