CN107427697A - 在非人动物中治疗腹泻和促进肠道健康的方法 - Google Patents

Abstract

提供了通过向有需要的动物施用从巴豆属某些种或胡桐属某些种分离的原花色素聚合物组合物来治疗患有腹泻和/或其症状的新生和幼年非人动物的方法。特别地，新生和幼年动物包括经常遭受各种病因的腹泻的幼仔，幼年马和幼年骆驼，并且施用的原花色素聚合物组合物分离自秘鲁巴豆。还提供了通过施用原花色素聚合物组合物来改善新生非人动物的体重增长和/或降低新生非人动物的死亡率的方法。肠溶或非肠溶的组合物可以是水溶性形式，并且口服施用至受影响的新生和幼年动物。本发明还提供了可用于促进有益肠道微生物群的巴豆属某些种或胡桐属某些种的植物提取物的益生元组合物。

Description

在非人动物中治疗腹泻和促进肠道健康的方法

技术领域

本发明涉及使用包含从植物巴豆属某些种或胡桐属某些种分离的原花色素聚合物的组合物或使用来源于其的乳液、提取物或食品添加剂治疗新生、未断奶和幼年的非人动物中的腹泻。更具体地，该组合物有效地治疗各种病因的分泌性腹泻，并降低新生和幼年非人类动物中腹泻的严重程度和持续时间。含有多酚的巴豆属(Croton)的种或胡桐属(Calophyllum)的种的植物提取物还可有效促进有益的肠道微生物群，并可用于促进肠道健康和预防非人动物的腹泻病。原花色素聚合物组合物可以施用至新生非人动物以改善体重增长和生存性。

发明背景

传染病是新生和幼年动物例如不同动物物种的幼仔最常见的问题。在幼仔中称为“家畜腹泻病”的腹泻经常发生在生命的前几天，并且是在美国幼仔生病和死亡的重要原因。新生和幼年农场或大型动物的由腹泻引起的脱水导致全世界数以百万计的动物中严重的发病率和死亡率。

各种传染和致病原(包括细菌、病毒和寄生虫)在动物中，特别是在与农业、食物和劳动相关的驯养牲畜中引起腹泻。许多这些肠道病原体在动物中引起一种或多种不良反应，例如严重的肠道损伤、脱水、酶活性的改变和/或营养物质运输机制的改变。由这些病原体引起的腹泻的临床表现可能不同；一些腹泻是自限性的，而其它的腹泻与高发病率或高死亡率相关(R.E.Holland,1990,Clin.Microbiol.Rev.,3(4):345-375)。

新生动物的传染性腹泻是动物农业和畜牧业面临的极其普遍和经济上破坏性的状况。当遇到一个畜群时，由于涉及大量的潜在的肠道病原体、畜群内动物之间的天然免疫力的差异、环境条件和应激、营养因素、动物群体的动力学，管理条件、以及难以确定病因诊断，急性感染性腹泻通常很难管理、遏制和治愈。因此，对于新生动物腹泻的大部分病例，这种诊断往往未被建立。此外，由于难以分娩、袒露、不良的母体营养和/或健康、母兽的育种能力差、或这些因素的组合，新生和幼年动物，如幼仔，可能易患腹泻。当发生这些情况中的一些或全部时，例如幼仔对感染性疾病的抵抗力降低，并且感染病原体的暴露和入侵在产生腹泻方面起关键作用。

导致新生动物特别是幼仔腹泻的一些最常见的感染病原体类型包括大肠杆菌，例如大肠杆菌K-99；轮状病毒和冠状病毒，隐孢子虫，沙门氏菌属某些种(Salmonella spp.)，空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)。在某些情况下，例如沙门氏菌属(其是人类病原体)的感染，动物的人类处理者以及治疗动物的人类处理者也可能处于患有感染和疾病的风险。

新生和幼年动物的腹泻也可能是由于非传染性原因引起的，例如喂养方案的变化，与怀孕成年雌性相关的能量缺乏和维生素短缺，其可能延伸到新生后代，造成虚弱和对感染的易感性。与新生动物出生相关的环境和卫生条件也可能与疾病爆发和由此引起的腹泻有关。例如，不干净的环境，例如在动物出生和哺乳的区域中的尿液和粪便的积累可能导致以腹泻为特征的疾病综合征。此外，与成年雌性分娩相关的问题，如产犊困难和初乳不足，可能导致虚弱的新生儿和初乳提供的被动免疫力的缺乏。因此，影响母亲及其新出生的后代的不利条件可能导致腹泻暴发，其需要新生和幼年动物的治疗。非感染性腹泻虽然常常不足以造成死亡，但可以削弱幼年动物，使其更容易感染腹泻，这使得新生和幼年动物不能存活。

新生和幼年非人动物中可用的和常用的腹泻治疗通常涉及重要的液体置换和电解质补充以对抗或阻止流体和电解质的损失。其它类型的治疗包括施用肠衬里保护剂，例如铋，口服抗生素和影响肠蠕动的药剂。根据腹泻的原因，时间，严重程度和过程和/或其相关的疾病或病症，各种已知的治疗可能有效也可能不是有效的，并且动物可能或不能充分地响应。由于腹泻及其相关条件对受影响的动物、其处理人员和照顾者的经济和人文影响如此之大，故迫切需要替代性的、安全和有效的以及具有成本效益的治疗和补救措施。

非人动物肠道中微生物平衡的破坏可引起肠道疼痛，可抑制体重增长或维持，并可导致肠道疾病和感染。这种破坏可能有许多原因，包括不良的饲养条件、疾病或应激源，例如非人动物的运输。促进和建立肠道中有益微生物的适当平衡可以改善非人动物的健康和活力，并可预防或改善肠道疾病。可以施用具有益生元效应的药剂以建立和促进有益微生物的这种平衡。本领域需要这种用于兽医用途的药剂。

发明概述

本发明涉及通过施用来自巴豆属物种或胡桐属物种的聚合的原花色素(即原花色素聚合物)来治疗有需要的新生、幼年或未成年动物的腹泻的方法。在一个实施方案中，施用了包含来自巴豆属物种或胡桐属物种的原花色素聚合物的药学上或生理上可接受的制剂或组合物。在具体实施方案中，施用来自秘鲁巴豆(Croton lechleri)的原花色素聚合物或包含来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物的药学上可接受的制剂或组合物。此外，巴豆属和胡桐属物种的含有多酚的植物提取物(包含原花色素聚合物组合物)具有益生元活性。因此，本发明提供了含有多酚的巴豆属和胡桐属物种的植物提取物(特别是秘鲁巴豆的植物提取物)的益生元组合物(prebiotic composition)。在一个实施方案中，来自秘鲁巴豆的原花色素产物(例如秘鲁巴豆的植物提取物或SB-300)对患有腹泻的非人类受试者(例如，未断奶幼仔)的治疗支持产品对被治疗受试者的肠道微生物群谱的优化的有益的益生元机制。在一个实施方案中，与未治疗的动物相比，用肠溶SB-300治疗导致在治疗停止后动物中包含许多益生菌物种的粪杆菌(Faecalibacterium)和双歧杆菌(Bifidobacterium)细菌属的较高相对丰度。

在一个实施方案中，原花色素聚合物组合物是来自巴豆属物种或胡桐属物种特别是秘鲁巴豆的胶乳或提取物。在另一个实施方案中，组合物是含有原花色素低聚物的秘鲁巴豆的植物提取物，或秘鲁巴豆的植物提取物的食品补充剂制剂。如本文所述，这种巴豆属物种或胡桐属物种胶乳或提取物组合物可以是更高度纯化的。在一个实施方案中，所述方法包括向有需要的非人动物施用包含来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物的药学上可接受的组合物。在一个实施方案中，所述方法包括施用来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物或包含来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物的药学上可接受的组合物，其中来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物或低聚物也被称为克罗来姆(crofelemer)(一种纯化的原花色素寡聚物)、SP 303或SB-300，如本文进一步描述的。在某些实施方案中，秘鲁巴豆原花色素聚合物或其组合物是保护原花色素聚合物免受非人动物的胃环境影响的肠溶形式。在其它实施方案中，秘鲁巴豆原花色素聚合物或其组合物为非肠溶形式。

本发明提供了一种治疗和预防新生和幼年非人动物中腹泻的虚弱作用的方法。特别地，该方法治疗和预防与患有腹泻的动物中的水、流体和电解质损失相关的脱水。本发明的方法进一步防止或减少新生和幼年非人动物中肠道损伤、虚弱和死亡的发生。在其它实施方案中，该方法在受影响的动物中治疗和预防与结肠炎(包括急性结肠炎)相关的腹泻。因此，在一个实施方案中，本发明的方法在新生和幼年的非人动物中提供针对腹泻，特别是分泌性或水样性腹泻的抗分泌治疗。

本发明更具体地涉及一种通过以有效量施用来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物来控制或治疗这些动物的腹泻以改善肠道健康并控制新生的牛或骆驼幼仔的腹泻的方法。在一个实施方案中，原花色素聚合物是来自秘鲁巴豆的制剂、组合物或提取物。在一个实施方案中，来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物是含有原花色素聚合物或低聚物的更高纯度的组合物，例如本文所述的克罗来姆或SB-300组合物。

本发明还更具体地涉及通过以有效量施用来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物来改善肠道健康状况、控制有需要的新生或幼年马(驹)中的腹泻和正常化粪便形成的方法，以控制或治疗这些动物的腹泻。在一个实施方案中，原花色素聚合物是来自秘鲁巴豆的制剂，组合物或植物提取物。在一个实施方案中，来自秘鲁巴豆的制剂、组合物或植物提取物是糊剂或凝胶的形式。在一个具体实施方案中，糊剂制剂包含含有肠溶SB-300或SP 303的珠粒(纳米颗粒或微粒)，并被口服施用至有需要的驹。在一个实施方案中，糊剂制剂包含含有肠溶SB-300的珠粒(纳米颗粒或微粒)。在一个具体实施方案中，包含SB-300肠溶珠粒的糊剂每天两次口服施用至驹，持续三天。在另一个具体实施方案中，将包含SB-300肠溶珠粒的糊剂每天三次口服施用至驹，持续三天。在另一个具体实施方案中，包含SB-300肠溶珠粒的糊剂每天四次口服施用至驹，持续三天。在一些实施方案中，糊剂每天口服两次或更多次，持续连续两天或更多天。在一些实施方案中，糊剂口服施用连续三天或更多天。在一个实施方案中，包含SB-300肠溶珠粒的糊剂以2-10mg/kg的剂量每天两次或每天三次或每天四次口服施用至有需要的驹，持续三天。在一个实施方案中，将包含SB-300肠溶珠粒的糊剂以2-4mg/kg的剂量每天两次或每天三次或每天四次口服施用至需要的驹，优选持续三天。在实施方案中，将包含SB-300肠溶珠粒的糊剂以2mg/kg的剂量持续三天每天两次或持续三天每天三次或持续三天每天四次口服施用至需要的驹。

一方面，本发明提供一种治疗患有与肠致病性感染相关的腹泻的新生或幼年非人动物的方法，所述方法包括向有需要的动物口服施用药学上可接受的组合物，所述药物组合物包含来自秘鲁巴豆的水溶性原花色素聚合物，其中所述组合物配制为大丸剂或重构粉末，并且以至少40mg至300mg的量施用至动物，持续大于一天的连续天数，从而治疗新生或幼年动物的腹泻。在该方法的各种实施方案中，新生或幼年动物选自牛幼仔，骆驼幼仔，水牛幼仔，野牛幼仔，羔羊，小山羊，驹或小猪。在具体实施方案中，新生或幼年动物是牛幼仔或骆驼幼仔。在其它实施方案中，新生或幼年动物是马驹。在一个实施方案中，原花色素聚合物组合物连续三天每天施用两次。在某些实施方案中，腹泻是与具有大肠杆菌、轮状病毒或冠状病毒的一种或多种的动物的肠道病原体感染相关的分泌性或水样性腹泻。在一些实施方案中，腹泻是偶发性的。在一些实施方案中，动物另外地被沙门氏菌属某些种和/或隐孢子虫属感染。在该方法的实施方案中，来源于秘鲁巴豆的原花色素聚合物组合物或植物提取物作为使用口服电解质、奶或奶替代物、生理盐水或水重构的粉末；或作为大丸剂；或作为糊剂或凝胶；或在动物饲料中施用。被治疗的动物，例如幼仔或驹，可以小于两周龄，或为2至4周龄。在该方法的实施方案中，组合物以至少30mg至350mg，或40mg，50mg或250mg的量施用至动物。在其它实施方案中，新生或幼年动物体重约为30至50kg；是约2至8公斤体重的羔羊、小山羊，体重约30至40公斤的牛幼仔或约40至50公斤重的骆驼幼仔。在一个具体的实施方案中，来源于秘鲁巴豆的原花色素聚合物组合物或植物提取物以2mg/kg的剂量在糊剂制剂中施用，其中一岁以下的驹的近似体重为60磅(lb.)。在实施方案中，原花色素聚合物作为肠溶药物组合物或非肠溶性药物组合物施用。此外，原花色素聚合物可以是SB-300，SP 303，克罗来姆及其药学上可接受的组合物。

在另一个方面，本发明提供了一种针对与肠致病性感染相关的腹泻治疗新生或未断奶的马科动物的方法，所述方法包括向动物口服施用药学上可接受的组合物，其包含来自秘鲁巴豆的水溶性原花色素聚合物，其中所述组合物以选自大丸剂、重构粉末或凝胶或糊剂的形式提供，并且以至少100mg的量施用至动物，持续超过一天的连续天数，由此治疗在新生或未断奶的马动物中的腹泻。在一个实施方案中，动物感染细菌、病毒和原生动物，其中感染引起腹泻。在各种实施方案中，原花色素聚合物组合物以至少250mg的量施用至动物，并且任选地可以是包含在可以是包含在递送装置(其可以是注射器)中的凝胶形式。在一个实施方案中，凝胶或糊剂包含含有该组合物的聚合物微粒或纳米颗粒，并且聚合物微粒或纳米颗粒任选是pH敏感的。在实施方案中，动物体重小于2周龄和/或重量为约30至50kg。在该方法的实施方案中，原花色素聚合物作为肠溶或非肠溶药物组合施用。此外，原花色素聚合物可以是SB-300，SP 303，克罗来姆及其药学上可接受的组合物。在一个具体实施方案中，原花色素聚合物是肠道保护的珠粒，包括包含SB-300或SP 303的肠溶珠粒。

在另一方面，本发明的方法提供对新生和幼年动物的预防性或防止性治疗，以防止腹泻疾病及其相关症状的虚弱作用(例如脱水和体重减轻)。根据本发明，可以在出生后的合适时间向新生和幼年动物施用秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物，以保护动物免受通常由感染和环境条件引起的腹泻爆发的或降低其发生或严重性。向新生和幼年动物施用秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物也可用于相对于没有提供秘鲁巴豆原花色素聚合物的动物改善或降低动物遭受比较严重或严重形式的疾病的风险。在某些实施方案中，将秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物在出生后1、2、3或4天内施用至新生动物，持续1、2、3、4或更多天，可以在动物群体(包括牛，骆驼，水牛，野牛，羔羊，山羊，马和猪)中增加体重增长和/或提高生存性在。秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物可以是肠溶或非肠溶的，并且可以是SB-300或SP303。秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物施用的剂量和方案在实践者的技能范围内，并且将取决于待治疗动物的环境条件。在非限制性实施方案中，可以预见的是，如果必要或需要，可以在出生后立即地，例如，一至四天，预防性地治疗动物，持续一至五天，或更短的时间。

在另一个方面，本发明提供了令人惊奇的结果，根据本发明的用秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物(例如秘鲁巴豆植物提取物产品)治疗非人类幼体动物提供了一种或多种有益效果，例如经治疗的动物中较少的脱水和较高的粪便干物质含量可以持续超过实际施用治疗产品到动物的时间段，即在停止向动物施用产品之后。这种意想不到的遗留效应表明，秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物或秘鲁巴豆植物提取物产品的施用(特别是对幼年动物的早期施用，随后是产品未施用至动物的时间段)可以诱导治疗动物肠道的有益变化，即益生元效应，其维持超过实际治疗过程。例如，早期施用秘鲁巴豆原花色素聚合物或秘鲁巴豆植物提取物产品的效果可以在动物停止治疗之后持续大于约一，二，三，四或更多周的时间段。在一方面，早期施用包括在出现家畜腹泻病(scours)(腹泻)的第一个迹象时治疗有需要的动物。在一个特定方面，在停止治疗动物后，遗留效应可持续2至3周，从而允许动物恢复并保持健康的正常胃肠状况和功能。在一方面，包含益生细菌物种的粪杆菌和双歧杆菌属的细菌在用肠溶秘鲁巴豆衍生的原花色素产品(例如，秘鲁巴豆植物提取物产品或SB-300)治疗腹泻后作为微生物群变得更加丰富。

因此，本发明的方法提供将秘鲁巴豆原花色素聚合物或秘鲁巴豆植物提取物产物定期施用至动物，使得可以给予初始治疗，随后是另一种治疗(如果有的话)之前的一段时间，例如几天或甚至几周(如1、2、3、4或更多周)的滞后。

还提供了一种治疗患有腹泻和脱水或处于发生腹泻和脱水的风险中的牛幼仔的方法，其中所述方法在停止治疗后进一步维持正常的粪便稠度(粪便形成)并且减少或防止幼仔脱水。该方法包括给未断奶的幼仔每天两次餐前口服施用药物组合物，持续2至3天，所述药物组合物包含来自秘鲁巴豆的肠溶水溶性原花色素聚合物或秘鲁巴豆来源的植物提取物。在一个具体实施方案中，幼仔用来自秘鲁巴豆的肠溶水溶性原花色素聚合物或秘鲁巴豆来源的植物提取物每天两次治疗三天。在一个实施方案中，幼仔被施用来自秘鲁巴豆的植物提取物。在一个实施方案中，将来自秘鲁巴豆的肠溶水溶性原花色素聚合物或秘鲁巴豆来源的植物提取物作为推剂施用至新生动物。在一个实施方案中，新生非人动物或幼仔的干粪便稠度、缺乏脱水和/或健康的胃肠道微生物群在使用包含来自秘鲁巴豆的肠溶水溶性原花色素聚合物或秘鲁巴豆来源的植物提取物的药物组合物的治疗停止后维持和持续至少两至三周。

所公开的方法和用于该方法的秘鲁巴豆来源的原花色素聚合物和植物提取物产品在治疗新生、断奶前的非人动物例如牛幼仔中的腹泻(家畜腹泻病)方面提供若干优点。这些优点包括减少药物和劳动力和兽医费用(其导致动物早期断奶和较重的断奶重量)。此外，根据本发明的方法和产品的幼体动物的治疗也可以减少用于治疗腹泻相关脱水和其它症状的护理标准中的电解质的量，这也是具有经济和商业效益的。

鉴于秘鲁巴豆原花色素聚合物或植物提取物的益生元效应的证据，本发明还提供了通过向非人动物施用包含来自巴豆属物种或胡桐属物种特别是秘鲁巴豆的含多酚的提取物的组合物(包括来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物组合物或植物提取物)在任何非人动物中改善肠道微生物群，建立有利的肠道微生物群并重新平衡微生物群以有利于有益微生物的方法。所述方法包括向不具有肠道感染或疾病的症状或诊断标志的非人动物施用本发明的富含多酚的组合物，以预防肠道疾病或降低肠道疾病的发生率和/或严重程度，改善健康和活力，和/或增加体重增长。所述方法还包括将本发明的富含多酚的组合物施用至具有肠道疾病或病症的动物以促进肠道疾病或病症的治疗。本发明的组合物可以施用短时间的治疗，例如1、2或3天，1-10天或1-20天或1个月，以在非人动物中建立有益的肠道微生物群，或可以长期地(每天，每周或每月)施用以在非人动物中建立和/或维持有益的肠道微生物群。益生元制剂可以作为本文进一步详细描述的糊剂，凝胶，动物饲料或药用饲料块制剂施用。本发明的益生元组合物可以任选地与含有益生菌的有益微生物组合施用，以促进和改善有益肠道微生物群的发生和建立。具有益生元效应的本发明的组合物可以施用至非人动物以促进健康非人动物和具有某种形式肠道疾病(例如但不限于肠道感染)的非人动物中的正常粪便形成和规律性并改善肠道健康。非人动物可以是成年、幼年动物或新生儿。组合物可以作为益生元施用至家畜，种族动物，伴侣动物，外来动物等。动物可以是例如牛，马，羊，猪，家禽，骆驼，狗，猫，啮齿动物等。本文的实施例6描述了在利用秘鲁巴豆植物提取物产品(例如肠溶SB-300)治疗腹泻的非人动物中益生菌细菌(即双歧杆菌属和粪杆菌属中的)的丰度的增加。

特别地，提供了一种在患有腹泻及其伴随症状的新生非人动物中诱导有益于正常粪便稠度(粪便形成)和腹泻的减少或预防的肠道微生物群的方法，其中该方法包括向动物每天至少一次口服施用包含来自秘鲁巴豆的肠溶性水溶性原花色素聚合物或富含多酚的秘鲁巴豆来源的植物提取物的药物组合物，优选在餐前施用，持续至少两天。在一个具体的实施方案中，新生动物用来自秘鲁巴豆的肠溶水溶性原花色素聚合物或秘鲁巴豆来源的植物提取物每天两次治疗三天。在一个实施方案中，向新生动物施用秘鲁巴豆来源的植物提取物。在一个实施方案中，将来自秘鲁巴豆的肠溶水溶性原花色素聚合物或秘鲁巴豆来源的植物提取物作为推剂施用至新生动物。

另一方面，向非人类幼年动物或成年动物施用秘鲁巴豆原花色素聚合物、组合物或植物提取物可以与动物的肠道微生物群谱或肠道微生物组成提供交互式或协同效应，其补充和/或改善动物的整体肠道/肠健康，并提高体重增长。在一个实施方案中，动物是具有腹泻的非人断奶前的动物。在一个实施方案中，动物是不患有腹泻的非人断奶前的动物。在一个实施方案中，动物是具有腹泻的非人成年动物。在一个实施方案中，动物是不患有腹泻的非人成年动物。在一个实施方案中，在用秘鲁巴豆原花色素聚合物、组合物或植物提取物例如SB-300和肠溶SB-300治疗的动物中改善/增加了平均日增重，并且粪便干重评分增加。在一个实施方案中，在生命的第60天使用秘鲁巴豆原花色素聚合物、组合物或植物提取物例如SB-300和肠溶SB-300治疗的幼年动物中，平均日增重增加。不希望受理论束缚，由秘鲁巴豆原花色素聚合物、组合物或植物提取物治疗产生的有益的抗分泌作用可与秘鲁巴豆植物提取物、组合物或聚合物的活性协同作用，以增加、正面地增加调节或有利地改变治疗的动物的肠道微生物组/微生物群谱，以提供加强的、增强的、改善的、增加的或提高的对抗腹泻的作用和/或改善肠道微生物组，从而有助于并导致被治疗的动物中改善的体重增长。涉及施用秘鲁巴豆原花色素聚合物、组合物或植物提取物以在治疗的动物(例如乳犊牛)中有效调节、增强或改变肠道微生物群并改善/增加体重增长并增加粪便干物质的本方法的潜力也可能有益地影响被治疗动物的终身健康和生产力。

附图说明

图1显示了如本文实施例2所述的涉及根据本发明的来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物的施用的治疗方法对平均粪便评分数的效果。使用3级评分***，每天两次对幼仔进行三天的评分。如所观察到的，治疗后第二天，秘鲁巴豆原花色素聚合物(克罗来姆)治疗的幼仔表现出更快的腹泻分数改善。如图1所示，平均粪便分数显示在y轴上，治疗天数显示在x轴上。

图2显示了幼仔研究的结果，其中用肠溶或重构粉末形式的秘鲁巴豆原花色素聚合物SB-300或用安慰剂治疗经历由肠道细菌感染引起的腹泻和疾病的幼年幼仔。该图表示粪便分数(粪便稠度等级)相对治疗天数，如实施例3所述。

图3显示了实施例3的幼仔研究结果，其中用肠溶或重构粉末形式的秘鲁巴豆原花色素聚合物SB-300或用安慰剂治疗经历由肠道细菌感染引起的腹泻和疾病的幼年幼仔。显示了具有水样腹泻的幼仔百分比相对治疗天数。在用秘鲁巴豆原花色素聚合物SB-300(特别是肠溶形式)治疗的动物中，可以观察到幼仔发病率的降低。

图4显示了实施例3的研究结果，并显示了治疗对从攻击前(样品1)至第10天(样品20)每天两次测量的幼仔粪便分数的影响。图中的底线(蓝色)表示接受含有原花色素的肠溶秘鲁巴豆植物提取物的组(ECROF)中的幼仔；图上的顶线(红色)表示接受安慰剂的大丸剂的对照组(CTR)中的幼仔。误差条代表平均值的标准误差。治疗时期由图中左下部分的水平条(橙色)表示。

图5显示了实施例3的研究结果，并根据每天两次收集的粪便样品测量、平均并总结为以下类别的粪便稠度显示了治疗对幼仔粪便分数的影响：攻击前(第一次检查，基线)；治疗期间(第2至第7次检查)；治疗后(第8至24次检查)。误差条代表平均值的标准误差。图中每个部分中最右侧的条(蓝色)代表ECROF治疗的动物；图形的每个部分中最左侧的条(红色)表示CTR动物。所描绘的时间范围内的不同字母表示统计学差异(P值<0.05)。

图6显示了实施例3的研究结果，并显示了治疗对从攻击前(样品1)至第5天(样品10)每天两次收集的粪便样品测量的幼仔粪便干物质含量(干物质百分比)的影响。顶线(蓝色)表示接受含有原花色素的肠溶胆碱植物提取物的组(ECROF)中幼仔的结果；图表上的底线(红色)表示接受安慰剂的大丸剂的对照组(CTR)中的幼仔。误差条代表平均值的标准误差。

图7显示了实施例3的研究结果，并显示了通过评分幼仔的皮肤膨胀和眼睛衰退获得的脱水分数。误差条代表平均值的标准误差。图中每个部分中最右侧的条(蓝色)代表ECROF治疗的动物；图形的每个部分中最左侧的条(红色)表示CTR动物。所描绘的时间范围内的不同字母表示统计学差异(P值<0.05)。

图8给出了在攻击前(Pre，1)对照幼仔的粪便样本中发现的最普遍的属的相对丰度百分比。在治疗天数期间(2至7)和治疗停止后(8至24)，使用每个时间点的相对丰度减去初始(基线)相对丰度计算相对丰度变化。

图9显示了在攻击前(Pre，1)肠溶SB-300治疗的犊牛的粪便样品中发现的最普遍的属的相对丰度百分比。在治疗天数期间(2至7)和治疗停止后(8至24)，使用每个时间点的相对丰度减去初始(基线)相对丰度计算相对丰度变化。

图10A-C：对每只幼仔进行治疗停止后最为相关的属的数据进行平均，并计算对照组(CTR)中的幼仔和用肠溶SB-300治疗的幼仔(ECROF)之间的相关系数(在-1到+1之间变化)。(A)负值为对照组中与幼仔最相关的细菌属，而正值是与肠溶SB-300治疗的犊牛高度相关的细菌属。此外，将两种相关属(即粪杆菌属和双歧杆菌属)用于治疗组之间的个体比较(B，C)。

发明详述

本发明提供了有效降低有需要的新生的未断奶的非人动物的腹泻的发病率或严重度和/或缓解腹泻的治疗方法。特别地，这些方法涉及由新生和幼年(幼态的，未成年)动物中各种病原体和/或环境因素引起的腹泻，特别是分泌/水样腹泻或偶发性腹泻的治疗，特别是在这种不成熟动物的腹泻灾害对动物农业，食品和卫生行业可能产生深远的经济影响的情况下。本发明进一步提供适于治疗新生和幼年动物腹泻的制剂和组合物。除非另有说明，本文中使用术语“动物”是指许多不同物种的非人类、温血哺乳动物。此外，术语“幼年”，“未成年”，“未成熟”和“幼态”在本文中同义使用，通常是指一岁以下的动物。

本发明进一步提供了一种益生元组合物，其包含含有多酚的巴豆属或胡桐属物种特别是秘鲁巴豆的提取物，包括SB-300，SP-303和较少纯化的秘鲁巴豆植物提取物，其促进非人动物肠道中的有益微生物的生长，以改善消化健康，治疗、预防、降低腹泻病和其它肠道疾病的发病率和/或严重程度，增加体重增长，改善活力，降低兽群的死亡率和发病率。因此，本发明还提供了通过向非人动物施用含有巴豆属或胡桐属物种特别是秘鲁巴豆的提取物的益生元组合物来促进有益微生物生长，建立或重建有益的肠道微生物群，以及改善肠道健康的方法。这些有益生物包括但不限于乳杆菌属，双歧杆菌属，粪杆菌属和酵母属。动物可以是新生、幼态或幼年动物或成年动物。益生元组合物可以施用至任何非人动物，特别是放牧动物和牲畜，例如牛，绵羊，山羊，猪，野牛和水牛等，家禽，赛跑动物(racinganimal)如马和骆驼，伴侣动物，如狗，猫和啮齿动物，以及外来动物。动物可能不出现肠道疾病或病症的症状，或可能患有一种或多种肠道疾病或病症。在具体实施方案中，益生元组合物与含有对肠有益的微生物的益生菌组合物一起施用，并且益生菌组合物的生长由本发明的益生元组合物促进。

本发明的方法提供了动物工业，例如全世界牛肉和乳制品行业的显著需求的解决方案，其中新生幼仔腹泻代表最大的健康挑战之一以及造成经济损失。此外，本发明的方法提供了马驹中水样腹泻(包括偶发性腹泻)的常见问题的解决方案。本发明的方法和治疗改善了胃肠道/肠道健康状况，并且使患有腹泻病症的幼年动物中的粪便形成(包括例如马驹和牛幼仔中的水样腹泻)正常化。本发明的方法和治疗通过促进和维持有益的肠道微生物群，进一步改善了非人动物(包括新生、幼年动物和成年动物)的胃肠道/肠道健康。

本发明的方法和治疗特别适用于治疗年龄较小的动物。在一个实施方案中，动物是在驯养和/或农业环境中出生、繁殖、养殖和/或维持以用于商品例如食品、劳动、体育或其它商业或非商业性农业畜牧能力的新生(或初生)、未断奶、未成年动物，例如牲畜和农场动物。受腹泻影响并可通过本发明的方法和制剂治疗的动物的非限制性实例包括但不限于新生和幼年的牛(幼仔)，幼年的野牛或水牛，猪(仔猪)，绵羊(羔羊)，山羊(小山羊)，马(驹)和骆驼(幼仔)，如本文进一步描述的。在一个实施方案中，新生或幼年动物是家养的伴侣动物，例如但不限于任何物种的狗和猫。如本文所用，术语“新生”和“初生”是同义词，通常指两周龄或更小的动物。

本发明涉及用生理学和药学上可接受的制剂和组合物治疗新生、未断奶和幼年动物的腹泻，所述组合物包含治疗有效量的抗腹泻剂，其包含从巴豆属某些种优选秘鲁巴豆获得的原花色素聚合物。原花色素聚合物组合物也可以从胡桐属某些种特别是Calophyllum inophylum获得。在具体实施方案中，药学上可接受的组合物包含来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物。在一个具体实施方案中，药学上可接受的组合物包含富含多酚的来源于秘鲁巴豆的植物提取物。

一般来说，根据本发明方法“治疗”动物是指实现或获得期望的生理和/或药理作用，无论是预防性的、治疗性的还是两者。如本文中所用，“医治”或“治疗”可指改善、预防、抑制、逆转、弱化、缓解、消除、最小化、压抑、减轻、减少、减弱、稳定、根除、治愈或消除疾病或病状的不良效应或疾病或病状的进展或恶化。例如，成功的治疗可包括减轻疾病或病状的一个或多个症状，尽管不一定是疾病或病状的所有症状，或弱化疾病或病状的症状或进展。治愈或消除动物的疾病或病状是实施本发明方法的最佳结果。

根据本发明，对有此需要的动物的治疗通常涉及使用或施用有效量或治疗有效量的优选来自巴豆属某些种(特别是秘鲁巴豆)的原花色素聚合物或原花色素聚合物组合物或益生元组合物(作为肠溶或非肠溶制剂提供)。有效量是指在施用或递送至动物中时在动物受试者中诱导所需反应的组合物等的量(数量)。最佳地，有效量在动物中在不良影响或细胞毒性不存在，或几乎没有或实际上没有不良影响或细胞毒性的情况下产生治疗效果。或者，与有效量相关的任何不良影响最佳地被所获得的治疗益处超过。

治疗方法涉及改善、预防、抑制、逆转、弱化、缓解、消除、最小化、压抑、减轻、减少、减弱、稳定、根除、治愈或消除各种不同的病原体或环境因素和影响引起的腹泻和/或不良地影响新生和幼年动物的健康、生长和生存能力的其相关症状。在一个实施方案中，腹泻是分泌性腹泻/水泻。此类腹泻可以是动物的胃肠道(GI)疾病的临床体征；其还可反映消化***外的原发性疾病，诸如影响大肠或小肠的病症。本文所述的方法适用于治疗由病症发病机制所涉及的不同机制引起的腹泻(例如渗透性腹泻、分泌性腹泻、偶发性腹泻或炎性和感染性腹泻)的共病病状或病症。在一个实施方案中，新生和幼年动物可患有与结肠衬里的炎症诸如结肠炎或急性结肠炎相关的腹泻，其可由肠的感染或炎症引起。

渗透性腹泻与肠内水的吸收相关，其取决于溶质的充分吸收。如果过量的溶质保留在肠腔内，则水将不会被吸收，从而导致腹泻。渗透性腹泻通常由吸收不良的底物(例如碳水化合物或二价离子)的摄入，或由任何类型的吸收不良(诸如不能吸收某些碳水化合物)导致。当水至肠腔内的分泌超过吸收时，发生分泌性腹泻。在正常条件下，大量的水分泌至小肠腔中，但大部分的该水在到达大肠之前被高效地吸收。

分泌性腹泻可由动物对来自某种类型的细菌的毒素(肠毒素类)(诸如霍乱弧菌(Vibrio cholerae)的霍乱毒素和大肠杆菌(E.coli)的不耐热毒素)的暴露导致。由于此类微生物的毒素强烈激活腺(嘌呤核)苷酰环化酶，这导致隐窝肠细胞内的环AMP的细胞内浓度的持续增加，因此此类微生物引起大量腹泻。这种增加又导致氯化物通道的长时间打开，这促成水从隐窝分泌，从而允许不受控制的水分泌。这些细菌毒素还可影响肠神经***，导致独立的水分泌刺激。

炎性和感染性腹泻可由因微生物或病毒病原体而引起的肠上皮破裂导致。通常，通过构成胃肠屏障的多种机制来保护消化管的上皮免受损伤。然而，胃肠屏障可被破坏并导致腹泻。上皮的破坏不仅导致血清和血液渗漏至管腔中，而且通常与吸附性上皮的显著破坏有关。当这种情况发生时，水的吸收变得非常低效，从而导致腹泻。经常与感染性腹泻相关的病原体包括细菌，诸如大肠杆菌，弯曲杆菌属(Cam pylo ba cter)和沙门氏菌属(Salmonella)；病毒，诸如轮状病毒(rotaviruses)、冠状病毒(coronaviruses)、细小病毒(parvoviruses)和诺罗病毒(norovirus)；和原生动物，诸如球虫属某些种，隐孢子虫属(Cryptosporium)和贾第虫属(Giardia)。另外，免疫***对肠中的炎性病状的反应极大地促成了腹泻的发展。刺激活化的白细胞以产生和分泌刺激分泌的炎症介质和细胞因子。因此，分泌组分被强加并加剧炎性腹泻。此外，由白细胞产生的活性氧种类可以损害或破坏肠上皮细胞，所述细胞被营养物和水的吸收所必需的刷状缘酶和转运蛋白中通常缺少的未成熟细胞替代。因此，渗透性(吸收不良)腹泻的组分为受累动物提供了另外的病理学和问题。

因此，在各种实施方案中，待治疗的腹泻是由病原体的感染或入侵引起的，包括细菌，例如大肠杆菌，沙门氏菌，产气荚膜梭菌等；病毒，例如冠状病毒，轮状病毒，牛病毒性腹泻(BVD)病毒，感染性牛鼻气管炎(IBR)病毒等；原生动物，例如隐孢子虫，球虫等；以及酵母和霉菌。在某些情况下，腹泻可能由单一感染性微生物引起；然而，混合感染(诸如由大肠杆菌加隐孢子虫或冠状病毒加沙门氏菌引起)也不是罕见的。

革兰氏阴性细菌大肠杆菌通常存在于大多数动物的肠道中。虽然大多数大肠杆菌是非致病性的，但有些能够引起肠道和肠外感染。由于粪便污染，大量的大肠杆菌存在于农场环境中。病原性大肠杆菌的初次暴露可能发生在受污染的产犊棚中，但全身感染通常需要易感环境因素、不适当的被动免疫转移或其它感染免疫***受损。幼年动物中最常见的大肠杆菌病是由非侵入性肠毒素性大肠杆菌(ETEC)菌株例如K99STa引起的，这也是发展中国家旅客和儿童腹泻的主要原因(B.Nagy and P.Z.Fekete,2005,Int J Med Microbiol.,295:443-454)。

根据本发明的方法，新生和幼年动物的治疗是特别重要的，因为这种不成熟的动物最容易受多种类型的许多病原体的感染；随着动物年龄的增长，发展对感染的抵抗性。此外，幼年动物由于感染和腹泻而经历更严重的临床疾病。例如，一至五天的幼年动物(羔羊)经受较严重的肠道隐孢子虫感染，引起长时间的腹泻、消瘦和死亡，而已经感染的三十天的羔羊没有出现临床疾病的严重体征。一般来说，由于成年动物如马的胃肠道的解剖学结构，影响大肠和盲肠的病症通常会引起腹泻。然而，小于三个月大的幼体动物，例如驹，也不具备与成年动物一样的完全能力的大肠和盲肠；因此，幼年的动物往往更容易因小肠病况引起腹泻。一般来说，驹是年龄在一岁或以下的马科动物，特别是马。

在一个实施方案中，待治疗的腹泻是由非感染性原因引起的，例如但不限于，新生或幼年动物在母亲方面的营养不足和/或照顾不足，暴露于恶劣环境，或这些事件的组合。在另一个实施方案中，腹泻是由感染性微生物的侵入和非感染因子的组合引起的。通常，幼年动物腹泻的非感染性原因被认为是导致动物易感染传染性物质和引起腹泻的因素。无论动物腹泻的原因是感染性的还是非感染性的，体液从肠的吸收都被改变，并且危及生命的电解质失衡可发生。受累动物会失去体液，迅速脱水，并遭受电解质损失和酸中毒。虽然感染剂可对动物的肠道造成初步的损害，但动物由腹泻(严重腹泻)造成的实际死亡通常是脱水、酸中毒和电解质损失的结果，这可能难以以足够的量在足够的时间内补充。因此，本发明的方法和制剂适用于治疗腹泻以及腹泻的症状，诸如脱水，体重损失和电解质损失，以努力防止更严重的脱水和动物死亡。

因为新生的非人动物(如幼仔)在没有功能性免疫***并且没有可以与引起这些未成熟动物中的疾病和腹泻的感染因子相抗衡的大多数抗体的情况下出生，所以应当注意这些幼年动物的身体状况和健康，特别是在严酷或恶劣天气条件下和/或难以分娩时。新生和幼年动物从初乳中获得抗体，这些动物在它们两到四小时大之前接受初乳是最佳。随着幼年动物的年龄增长，它们迅速丧失了吸收初乳抗体的能力。因此，例如，提供给超过24至36小时大的幼仔的初乳可能不会有效，因为抗体在动物生命的这段时间后很少被吸收。

由于独特的生理学和对新生动物腹泻病的易感性，预防性施用秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物可以降低新生动物腹泻病的发生率，改善新生动物群体的健康、体重增长和生存能力。

在一个实施方案中，根据本方法使用秘鲁巴豆原花色素聚合物、组合物或植物提取物治疗非人动物(例如未断奶的幼仔)在动物的整个一生中提供了在动物中增加体重增长和支持多样和健康的肠道微生物的有益效果。在一个具体的实施方案中，涉及向具有腹泻(例如，患有家畜腹泻病)的新生幼仔施用秘鲁巴豆原花色素聚合物、组合物或植物提取物的治疗方法在约10天的生命至约60天的生命(可能更长)的未断奶幼仔中支持体重增长。在另一个实施方案中，用秘鲁巴豆原花色素聚合物、组合物或植物提取物(例如肠溶SB-300)治疗动物特别是未断奶的动物和在生命的最初几周(例如生命的两周至八周)的动物可以增加治疗的动物的粪便微生物多样性，这可能导致在断奶前期间体重增长的相应增加。在另一个实施方案中，除了本文方法提供的抗分泌作用之外，根据本发明方法用秘鲁巴豆原花色素聚合物、组合物或植物提取物治疗动物可以补充或协同治疗的动物的肠道微生物群谱的改变，导致动物的肠道微生物群谱和/或组成的增强和积极的改善，从而有助于动物的整体健康和改善和/或增加体重增长。

根据本方法用秘鲁巴豆原花色素聚合物、组合物或植物提取物治疗的动物中增加的粪便微生物多样性可能反映了生理适宜的动物的肠道微生物群的多样性，从而导致整体肠道健康和动物肠道微生物群谱的持续改善。正如本领域技术人员将理解的那样，乳幼仔的肠道微生物群影响动物产后生命的重要方面，例如免疫***的发展，其可能潜在地改变和改善动物的生理学。断奶前乳幼仔的低疾病发生率和有效生长对于最佳断奶后的表现很重要。此外，平均日增重可能会影响非人动物(如奶牛)的终生生产力，因为断奶前营养可对乳腺发育、***的时机和奶牛首先产奶的年龄有显著影响。因此，在一个实施方案中，将秘鲁巴豆原花色素聚合物，组合物或植物提取物施用至具有腹泻病症(例如家畜腹泻病)的新生、断奶前的动物，以改善体重增长并提供有利于和支持动物的长期肠道健康(例如在断奶期后的动物的生命中)的肠道微生物群。在另一个实施方案中，将秘鲁巴豆原花色素聚合物，组合物或植物提取物施用至不具有腹泻病症的新生、断奶前的动物，以有效地促进体重增长，并提供或补充动物中的肠道微生物群，其有利于和支持动物的长期肠道健康(例如在断奶期后的动物的生命中)。

获自植物提取物的原花色素和单宁

原花色素是缩合单宁的类型，其在大量植物中被发现，并且被分类为可水解的或缩合的。在传统医学中用于腹泻的治疗或预防的许多植物中包含单宁，特别是原花色素(参见，例如，Yoshida等人,1993,Phytochemistry,32:1033；Yoshida等人,1992,Chem.Pharm.Bull.,40:1997；Tamaka等人,1992,Chem.Pharm.Bull.,40:2092)。

原花色素由至少两个或更多个可具有相同或不同单体结构的单体单元组成。单体单元(通常称为“无色花色素”)通常是单体类黄酮化合物，其包括儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素(没食子儿茶精)、表没食子儿茶素(表没食子儿茶精)、黄烷醇、黄酮醇、黄烷-3,4-二醇、无色矢车菊素和花青素。因此，聚合物链基于不同的结构单元，产生聚合物原花色素的大量变型和大量可能的异构体(Hemingway等，1982,J.C.S.Perkin,1:1217)。类黄酮(黄碱素)(flavonoid)3-醇单元的较大聚合物在大多数植物中占主体，并且通常具有高于2,000道尔顿(Da)的平均分子量，包含6个或更多个单元(Newman等，1987,Mag.Res.Chem.,25:118)。

原花色素聚合物和原花色素存在于各种各样的植物中，特别是具有木本生长习性的那些植物(例如，巴豆属某些种和红厚壳属某些种)。许多不同的巴豆属树的种，包括南美洲特有的Croton sakutaris、Croton gossypifolius、Croton palanostima、秘鲁巴豆、树皮红唇巴豆(Croton erythrochilus)和拟龙血巴豆(Croton draconoides)，产生被称为墨西哥紫檀(Sangre de Drago)或“血竭(Dragon’s Blood)”的红色粘稠胶乳树液。红色粘稠胶乳因其药用性质而闻名。例如，美国专利第5,211,944号描述了从巴豆属某些种分离水溶性原花色素聚合物组合物。(也参见，Ubillas等，1994,Phytomedicine,1:77)。在美国专利第5,211,944号中描述了从红厚壳分离水溶性原花色素聚合物组合物和这种组合物用作抗病毒剂的用途。

在一个实施方案中，来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物或其组合物是克罗来姆。克罗来姆(CAS 148465-45-6)是具有不同链长度的寡聚原花色素，源自秘鲁巴豆(一种大戟科的树，其在亚马逊在公平的贸易工作实践下可被持续收获)的血竭。其具有为约1900Da至约2700Da的平均分子量。包含克罗来姆的单体包括儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素(没食子儿茶精)和表没食子儿茶素(表没食子儿茶精)。克罗来姆的链长范围为约3个至约30个单元，平均链长为约个7或8个单位。克罗来姆具有化学式：(C₁₅O_6,7H₁₂)_n，分子质量为860-9100g/mol。克罗来姆的抗分泌作用机制涉及靶向和抑制两种不同的肠氯化物通道，即作为cAMP刺激的Cl^-通道的囊性纤维化跨膜调节剂传导(C F T R)通道和钙激活的氯化物通道(Ca C C)，如例如，由Tradtrantip,L等人,2010,“Crofelemer,an AntisecretoryAntidiarrheal Proanthocyanidin Oligomer Extracted from Croton lechleri,Targets Two Distinct Intestinal Chloride Channels”,Mol.Pharmacol.,77(1):69-78)报导的。下面显示克罗来姆的一般结构。在所述结构中，结构的R位上的H表示原花色素；结构的R位上的OH表示原翠雀素(原翠雀定)。

根据本发明的一个实施方案，在治疗方法中将克罗来姆或包含克罗来姆的药学上可接受的制剂或组合物用作来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物。

在一个实施方案中，SP 303(一种来自秘鲁巴豆的寡聚原花色素，(也称为克罗来姆))是来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物，或者包含SP303的药学上可接受的制剂或组合物，其适用于本发明的治疗方法。SP-303(R.Ubillas等，1994,Phytomedicine,1:77-106)主要由纯化的原花色素寡聚物(-)-表没食子儿茶素(表没食子儿茶精)和(+)-没食子儿茶素(没食子儿茶精)、(-)-表儿茶素和(+)-儿茶素组成，并且适合用于肠溶和非肠溶制剂和组合物(用于在本文所述的治疗方法中施用)。也可以根据专利申请公开US2007/0254050的实施例2或专利申请公开US2005/0019389分离秘鲁巴豆原花色素，其全部内容通过引用并入本文。

在另一个实施方案中，SB 300是来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物，或者包含SB300的药学上可接受的制剂或组合物，其适用于本发明的治疗方法。SB 300，如例如由Fischer，H.等，(2004,J.Ethnopharmacol.,93(2-3):351-357)所述，提供天然产物提取物，其特别适用于肠溶和非肠溶制剂和组合物，并且在本文所述的治疗方法中具有高度功能性和成本效益。

用于本发明治疗方法的包含来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物的药学上可接受的组合物可从秘鲁巴豆获得(例如，如属于Shaman Pharmaceuticals，Inc.的WO 00/47062(其内容通过引用并入本文)中所述的)，并被配制为食物或膳食补充剂或营养制剂。

在其它实施方案中，用于本发明的方法的组合物包含获自巴豆属某些种或红厚壳属的种的生胶乳，或获自巴豆属某些种或红厚壳属某些种的提取物，其不专门是聚合的原花色素聚合物组合物。示例性提取物描述于Persinos等，1979,J.Pharma.Sci.,68:124和Sethi,1977,Canadian J.Pharm.Sci.,12:7中。这样的提取物可以富含多酚，并具有有益的抗氧化和益生元特性。

在一个实施方案中，以本领域已知的多种剂型用肠溶包衣或基质配制来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物(参见，例如，WO 00/47062和美国专利第7,441,744号和第7,323,195号，其内容并入本文，并且如下文中简要描述的)。在另一个实施方案中，原花色素聚合物是没有肠溶包衣或基质的制剂，来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物的肠溶和非肠溶形式例如SB300均旨在用于本发明的方法。

原花色素聚合物组合物和制剂的制备

根据本发明的有效治疗分泌性腹泻的原花色素聚合物组合物由无色花色素的单体单元组成或包括无色花色素的单体单元。更具体地，该组合物由具有2个至30个类黄酮单元，优选2个至15个类黄酮单元，更优选2个至11个类黄酮单元，最优选平均7至8个类黄酮单元的原花色素聚合物组成(数均分子量为约2500Da)。原花色素聚合物组合物优选溶于水溶液。优选用于根据本发明的方法是来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物；此类秘鲁巴豆原花色素聚合物可呈药学上可接受的组合物的形式。

优选通过本领域已知的任何方法从巴豆属某些种(即，秘鲁巴豆)或红厚壳属某些种分离或纯化用于本发明的原花色素聚合物组合物的实例。例如，通过美国专利第 5,211,944号或Ubillas等(1994,Phytomedicine,1:77-106,在本文中称为SP 303)(所述两者均通过引用并入本文)中公开的方法从巴豆属某些种或红厚壳属某些种分离原花色素聚合物组合物。美国专利第7,556,831号和第8,067,041号(实施例2)中描述了其它分离方法，所述美国专利的内容并入本文。作为WO 00/47062公开的PCT申请PCT/US00/02687(其内容并入本文)也公开了制备从巴豆属某些种或红厚壳属某些种分离的原花色素聚合物组合物的方法和原花色素聚合物膳食补充剂的肠溶制剂，以及它们的制备方法。用于从秘鲁巴豆分离原花色素聚合物(例如克罗来姆)的另一种说明性方法见于美国专利第7,341,744号和第7,323,195号(其内容明确地并入本文)。如上所述，来自秘鲁巴豆的寡聚原花色素聚合物的SP303和SB 300纯化形式适用于本发明的治疗方法。

在一个实施方案中，原花色素聚合物组合物通常可通过以下方法(诸如美国专利第7,341,744号(中提供的)分离。将从秘鲁巴豆植物收集的胶乳与纯水(优选一份胶乳对两份纯水)混合。使胶乳溶液中的任何不溶物质沉降，例如通过将混合物在4℃下放置过夜(12小时)。将上清液从残余物中泵出并用短链醇诸如正丁醇提取。提取优选进行多次，诸如三次。每次提取后，弃去醇相并保留水相。浓缩水相，例如，使用具有1kD截止膜的超滤装置。该膜可以是低蛋白结合纤维素膜，或可选地，可使用聚丙烯、特氟隆或尼龙膜。使用的膜应与丙酮相容。超滤的目的是从材料中除去水分。

然后将来自超滤的渗余物浓缩至干，例如使用约37℃(±2℃)的盘式干燥器。随后将干燥的材料溶解在水中，然后在阳离子交换柱(例如，CM-琼脂糖凝胶柱)和尺寸排阻柱(例如，LH-20柱)上进行色谱分离。在优选的两个柱***中，将材料在CM-琼脂糖凝胶上运行，然后在一系列LH-20柱上运行。具体来说，将溶解的材料装载至阳离子交换柱上，然后用纯水洗涤。原花色素聚合物材料用丙酮水溶液(优选30％丙酮)从阳离子交换柱洗脱，从而将原花色素聚合物材料装载至尺寸测量柱(sizing column)上。将尺寸测量柱与阳离子交换柱断开，然后用丙酮水溶液(优选45％丙酮)将材料从尺寸测量柱上洗脱出来。收集级分并例如在460nm的波长处用UV检测器监测。将含有原花色素聚合物材料的级分合并并浓缩，例如通过使用例如1kD截止膜(如上文中针对色谱步骤之前的超滤步骤所描述的)的超滤进行浓缩。然后可使用合适的干燥方法(诸如，但不限于，旋转蒸发器)，在约37℃(±2℃)的温度下将渗余物浓缩至干。其它合适的干燥方法包括但不限于盘式干燥和喷雾干燥。美国专利第7,341,744号的实施例10提供了另外的非限制性的制备包含原花色素聚合物的组合物的方法，其可根据本发明来使用。用于分离适用于本发明方法的富集的原花色素聚合物提取物的详细方案描述于如上所述的WO 00/47062中。

治疗方法及应用

本发明涉及治疗与病原性感染和非致病性原因相关的腹泻(特别是在新生儿和幼年动物中)的方法，包括对需要这种治疗的动物施用有效治疗腹泻的量的药学上可接受的组合物，其包含来自巴豆属物种或胡桐属物种的原花色素聚合物。在优选的实施方案中，原花色素聚合物来自巴豆属物种，即秘鲁巴豆。治疗腹泻可以减少动物腹泻的严重程度和持续时间。治疗腹泻也可能涉及提高动物，特别是接受治疗的新生或幼年动物的生存能力，活力和体重。在一个实施方案中，腹泻是分泌性或水样腹泻。

本发明的方法涉及非人动物的治疗，特别是但不限于新生和幼年的牲畜，家畜和农场动物，包括通常尺寸相对较大的放牧动物。在一个实施方案中，施用来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物治疗的未成熟动物是新生(初生)或婴儿动物，例如，出生后1至10小时，出生后1至15小时，出生后12至24小时，出生后二十四到三十六小时，出生后一至三天，出生后一至四天，出生后一至六天，出生后一至七天或出生后最多两周。新生动物通常是两周龄以下的动物。在一个实施方案中，在出生后的第一天和第四天之间治疗动物。在一些实施方案中，治疗新生或幼年动物持续一至五天龄，少于一周龄，或仅几周龄。在一个实施方案中，治疗发生在生命的前几周，例如一至六周龄。在一个实施方案中，动物为2至10周龄，例如小于1，2，3，4，5，6，7，8，9或10周龄。正在接受治疗的动物也可以是一至四周龄，一至六周龄或二至四周龄。在一些实施方案中，动物年龄是1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，十二，十三，十四，十五，十六，十七，十八，十九，二十，二十一，二十二，二十三，二十四，二十五，二十六，二十七，二十八，二十九，三十天。在其它实施方案中，动物是三十到四十天年龄。在其它实施方案中，动物是幼年动物，一般至多一岁。在许多情况下，动物不会断奶(未断奶的)，即他们仍在喝奶。例如，奶牛幼仔通常在60-80天断奶，而肉牛可以在3-8个月龄断奶，猪为3周龄，狗为7-8周龄，马为4-6个月龄。同样在许多情况下，新生儿是未断奶的同义词。在某些情况下，动物是刚断奶的或断奶的，但仍然是少年、幼年和未成年的。这些幼年动物也很容易受到各种感染和/或环境因素的腹泻的影响。

根据本发明的方法，新生和幼年动物可以用来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物(例如SB-300)或来自秘鲁巴豆的植物提取物治疗，持续一，二，三，四，五，六，七，八，九，十天等。秘鲁巴豆原花色素聚合物可以连续几天或间歇地施用至动物，例如每隔一天，每两天，每三天，每四天一次等等。在一个实施方案中，将秘鲁巴豆原花色素聚合物连续三天施用至动物。在实施方案中，将秘鲁巴豆原花色素聚合物每天两次，每天三次，或每天四次，连续三天施用。在一个实施方案中，将秘鲁巴豆原花色素聚合物在出生后一至四天之间施用至新生动物连续三天。如技术从业者所理解的，新生和幼年动物的环境(例如农场)条件可能决定了治疗方案的开始和进程，使得秘鲁巴豆原花色素聚合体的施用在动物的生命中更早发生，并且进行更长的持续时间，特别是因为腹泻病在大约生命的头七天或生命的大约一天或四天之间通常会影响新生和幼年动物。在前述实施方案中，动物是牛或骆驼幼仔。

在一个具体的实施方案中，包含衍生自秘鲁巴豆的植物提取物、SB-300或SP 303的制剂或组合物以凝胶或糊剂制剂的形式提供，其每天两次经口施用至新生或幼年动物，如马驹，或成年动物，持续三天，最好连续三天。在一个具体的实施方案中，相隔十二小时每天两次施用至动物。糊剂制剂特别适合作为肠道局部作用并最小程度地吸收的产品。糊剂产品专门针对粪便形成和新生儿和幼年动物(如马驹)的肠腔中的离子和水流的正常化，并且不改变胃肠蠕动，即不便秘。作为口服递送的一种模式，糊剂制剂可以放置在动物口腔的顶部。在一个具体实施方案中，糊剂制剂包含含有肠溶SB-300或SP 303的珠粒(纳米或微粒)，并且经口施用至动物。在一个具体实施方案中，将包含SB-300肠溶珠粒的糊剂每天两次经口施用至需要的动物，例如驹，持续三天。在另一个具体实施方案中，将包含SB-300肠溶珠粒的糊剂每天四次经口施用至需要的动物，例如驹，持续三天。在一些实施方案中，将糊剂口服施用连续三天。在一个具体实施方案中，包含SB-300肠溶珠粒的糊剂以2mg/kg的剂量每天两次口服施用三天，或每天三次或每天四次，持续三天。该制剂特别适用于在患有腹泻并进行治疗幼年动物中或在成年动物中，在短时间内例如少于一周或少于两周的粪便形成的正常化；体重损失的减轻；和减少支持性护理成本，再水化疗法，例如口服再水化。

在其它实施方案中，本发明的原花色素聚合物组合物或益生元组合物通过药物饲料块施用至动物，特别是反刍动物家畜。药物块是含有本发明组合物的压缩饲料，通常包装在用于饲养牲畜的纸板箱中。动物可以自由地食用块体，因此，可在不关心精确剂量时使用。动物摄入的活性成分的量可以通过改变制剂来改变药物块的适口性和/或硬度来调节。例如，糖蜜增加适口性，氯化钠降低适口性。此外，通过压缩制成的块中的粘合剂如木质素磺酸盐或通过化学反应制造的块中氧化镁的加入增加了硬度。制剂中糖蜜的吸湿性质也可能影响药物块的硬度，并通过使用适当的包装来解决。药物饲料块可以特别适合施用本发明的益生元组合物。

治疗方法适合的非人动物的类型对于动物类型、属或种类没有特别限制。一般来说，新生或幼年农场动物，食源动物，牲畜，饲养或喂养用于各种用途的动物，如运动(如赛跑，骑马)，运输，家养，伴侣，工业用途(如拖运，犁，耕)等特别适合于根据本发明的方法的治疗。例如，本发明的方法包括新生或幼年的非人动物或成年动物如母牛(幼仔)，牛或阉牛(幼仔)，骆驼(幼仔)，公羊和绵羊(羔羊)，马(驹)，猪(小猪)，山羊(小山羊)，野牛/水牛(幼仔)，美洲驼，驴，骡子，牦牛等。新生或幼年外来动物或成年动物，如各种动物园动物，也被本发明的治疗所覆盖。在一个实施方案中，动物是放牧动物。所描述的方法特别包括新生儿和未断奶的动物(例如，牛，骆驼，水牛/野牛)，羔羊，仔猪和驹(马)的腹泻治疗。

根据所描述的方法，秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物减少肠上皮细胞中的氯通量，并减少流体进入肠腔，其导致与分泌性腹泻相关的液体流失和脱水。因此，本发明的药学上可接受的制剂和方法可用于治疗分泌性腹泻的预防和治疗应用，特别是在防止伴随分泌/水样腹泻的脱水和电解质损失方面。

在一个具体实施方案中，本发明的方法使用有效量的来自巴豆属物种或胡桐属物种的聚合原花色素聚合物组合物或用其衍生的胶乳、提取物或食品补充剂植物提取物治疗由沙门氏菌微生物感染引起的腹泻。用来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物组合物或用由其衍生的胶乳、提取物或食品补充剂植物提取物治疗由沙门氏菌引起的腹泻与是本发明的意想不到的和惊人的方面，因为沙门氏菌属通过作用机制并通过影响与原花色素聚合物组合物的活性相关的作用机制不同而不同的细胞途径和反应引起腹泻。

更具体地，聚合的原花色素聚合物组合物例如克罗来姆的作用机理是通过抑制囊性纤维化跨膜电导调节蛋白(CFTR)氯离子通道和钙激活的氯离子通道(CaCC)两者进行。聚合物原花色素聚合物组合物通过阻断氯离子通道分泌和伴随的腹泻中发生的大量水分损失起作用，从而使胃肠道(GI)中的氯离子和水的流动正常化。然而，沙门氏菌微生物通过产生几种毒力因子来引发感染宿主腹泻。一个这样的因素是称为SopE的蛋白质，其被注射到肠上皮细胞中，一旦细菌进入胃肠道就触发细胞内信号传导事件的级联。(参见例如S.Zhang等，2003，Infection and Immunity，71(1)：1-12；AJ Mueller等，2009，Cell Hostand Microbe，6(2)：125-136)。SopE蛋白与两种特异性GTPase蛋白的结合改变细胞膜并允许细菌穿透细胞。此外，两种GTP酶蛋白激活细胞内的半胱天冬酶-1，这是炎症反应的关键因素。反过来，胱天蛋白酶-1导致产生吸引巨噬细胞的促炎介质(细胞因子)，其吞噬已渗入肠组织和细胞的细菌；然而，残留在肠腔中的沙门菌细菌没有受到严重的影响。感染动物存在的增高的免疫反应导致宿主动物发生严重炎症，液体积聚和疼痛。

由于导致引起腹泻的疾病病理学和炎症免疫应答而不显著影响CTRF或CaCC的沙门氏菌，通过抑制这些通道起作用的原花色素聚合物组合物在治疗由沙门氏菌微生物引起的腹泻中是有效的是非常出人意料和不可预见的。然而，根据本发明的方法，用含有原花色素聚合物组合物(例如，SB-300)治疗沙门氏菌感染的新生和幼年动物例如牛犊和小猪中的腹泻证明组合物对由与不同病因相关的来源产生的腹泻的未预期的有效性。

在一个实施方案中，通过本发明的方法治疗的幼年动物是两至四周龄。在一个实施方案中，动物是两至四周龄的幼仔，例如但不限于牛或骆驼幼仔，其具有由沙门氏菌感染引起的腹泻，或其组合。在一个实施方案中，动物是两至四周龄的幼仔，例如但不限于牛或骆驼幼仔，其具有未知来源的未分化的腹泻。在一个实施方案中，动物是具有与某些不利的环境条件和/或感染相关的腹泻的马驹。在其它实施方案中，通过本发明的方法治疗的动物的重量约为3-1000kg；或约5-900kg重量，或约10-350kg重量；或约15-150kg重量；或约25-60kg重量，或约30-50kg重量，或约30-40kg重量。在一个具体实施方案中，正在治疗腹泻的幼年动物是约20-40kg重量的牛犊。在一个具体实施方案中，正在治疗腹泻的幼年动物是重量约30-50kg的骆驼幼仔。

在一个实施方案中，新生和幼年动物用肠杆菌原花色素聚合物组合物如SB-300或SP 303(以肠肠保护或非肠道保护形式)预防性治疗，以预防腹泻病及其相关症状(如脱水和体重减轻)对新生儿和幼年动物的衰弱作用或降低其风险或严重程度。根据该治疗方法，在出生后的合适时间向新生和幼年动物施用秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物，以保护动物免受通常由感染和不利环境条件引起的腹泻爆发。向新生和幼年动物施用秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物还可用于在疾病或感染爆发之前相对于未提供秘鲁巴豆原花色素聚合物的动物改善或降低患有更严重或严重形式的腹泻的动物的风险。秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物可以是肠溶性或非肠溶性的，并且可以是例如SB-300或SP 303。秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物施用的剂量和方案在本领域技术人员的技能范围内和将取决于待治疗的新生和幼年动物的环境条件和健康状况。动物可用根据本发明的秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物预防性治疗，例如但不限于在出生后1至7天，1至6天，1至4天，1至3天，或1或2天。治疗方案可以涉及一天，两天，三天，四天，五天，六天，七天或更多天的秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物施用至动物，根据需要或期望进行修饰或调整，每天施用一次或多次，例如两次，三次，或四次。可以定期观察和监测动物的健康状况和体重增长。本发明的这些预防方法可以在头15，20，25或30天内改善至少5％，至少10％，至少15％，或甚至至少20％的体重增长。

益生元组合物和方法

鉴于秘鲁巴豆原花色素聚合物或植物提取物的益生元效应的证据，本发明还提供在任何非人动物中通过施用包含巴豆或胡桐属物种特别是秘鲁巴豆的含多酚提取物的益生元组合物(并且包括本发明的秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物或含多酚的秘鲁巴豆植物提取物)改善肠道微生物群，建立有利的肠道微生物群并重新平衡微生物群以有利于有益微生物的方法。所述方法包括将组合物施用至不具有肠道感染或疾病的症状或诊断标记的非人动物，以预防或减少肠道疾病的发生率或严重程度，改善健康和活力，和/或增加体重增长。益生元组合物还可以施用至具有一种或多种肠道疾病或病症(包括腹泻疾病，炎性肠道疾病，肠道疼痛等)的非人动物，以促进和促进肠道疾病或病症的治疗。本发明的组合物可以进行短期治疗，例如1-10天或1-20天或一个月，以在非人动物中建立有益的肠道微生物群，或者可以每天，每周或每月长期施用以在非人动物中建立和/或维持有益的肠道微生物群。在一个实施方案中，无限制地提供益生元组合物，例如作为药物饲料块。本发明的组合物可以任选地与含有益生菌的有益微生物组合施用以促进和促成有益的肠道微生物群体的发育和建立。具有益生元效应的本发明的组合物可以施用至非人动物以促进健康非人动物和具有某种形式肠道疾病(例如但不限于肠道感染)的非人动物中的正常粪便形成和规律性并改善肠道健康。非人动物可以是成年人，幼年动物或新生儿。组合物可以作为家畜，种族动物，伴侣动物，外来动物等的益生元来施用。动物可以是例如牛，马，羊，猪，家禽，骆驼，狗，猫，啮齿动物等。

根据本发明的方法，非人动物可以用本发明的含多酚提取物(优选来自秘鲁巴豆)(包括来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物组合物，例如SB-300，或衍生自秘鲁巴豆的植物提取物)治疗，持续一，二，三，四，五，六，七，八，九或十天等。秘鲁巴豆原花色素聚合物可以连续施用至动物或间歇地施用，例如每隔一天，每两天，每三天，每四天一次等施用。在一个实施方案中，将组合物连续施用至动物三天。在一个实施方案中，将组合物在出生后一至四天之间施用至新生动物连续三天。在某些实施方案中，施用本发明的益生元组合物以维持非人动物的有益的肠道微生物，并且因此可以向动物长期和/或周期地施用。例如，益生元组合物可以每天，每周或每月或以适当的频率施用以维持有益的肠道微生物群。

益生元组合物可以以任何方便的形式施用，包括作为糊剂，凝胶或大丸剂或在如本文所述的饲料块中。益生元组合物可以在动物饲料中、作为动物饲料组合物、在牛奶代用品中或用于口服施用的动物可接受以鼓励食用的其它形式中施用。

本发明的益生元组合物可以与促进有益的肠道微生物群落的建立和维持的任何其它试剂组合施用。例如，本发明的益生元组合物可以与含有有益微生物的益生菌组合物一起施用，有益微生物的生长可以通过本发明的益生元组合物促进或维持。这些生物体包括但不限于乳杆菌属，双歧杆菌属，粪杆菌属和酵母属物种。

生理和药学上可接受的制剂

本发明提供了来自巴豆属和胡桐属物种，特别是秘鲁巴豆的原花色素聚合物组合物和含多酚植物提取物的制剂。原花色素聚合物组合物或含有多酚的提取物可被配制来用于口服施用，举例说明性地如(但不限于)粉剂；晶体；颗粒；小颗粒，包括粒径为微米级的颗粒，例如微球和微胶囊；尺寸为毫米级的颗粒，尺寸为纳米级的颗粒，例如纳米颗粒；珠粒；微珠；微丸；丸剂；片剂；微片剂；压缩片剂或片剂研磨剂；模塑片剂或片剂研磨剂；以及在胶囊中，其是硬的或软的并且以粉末、颗粒、珠粒、溶液或混悬剂形式包含组合物。药学上可接受的组合物还可被配制来作为水性液体中的溶液或混悬剂、作为包含在凝胶胶囊内的液体、作为凝胶、作为糊剂或凝胶糊剂、或作为任何其它方便的施用制剂用于口服施用。所述组合物可被配制来作为栓剂、灌肠剂或其它方便的形式用于直肠给药。还可将原花色素聚合物组合物作为受控释放***来提供(参见，例如，Langer,1990,Science249:1527-1533)。组合物可被配制来作为例如如WO 00/47062中所述的膳食补充剂或食品补充剂，以用于根据本发明向有此需要的动物施用。

药学上可接受的制剂还可包括任何类型的药学上可接受的赋形剂、添加剂、载体或媒介物。通过非限制性实例举例，可将稀释剂或填充剂诸如葡聚糖结合剂(dextrates)、磷酸二钙、硫酸钙、乳糖、纤维素、高岭土、甘露醇、氯化钠、干淀粉、山梨糖醇、蔗糖、肌醇、糖粉、膨润土、微晶纤维素或羟基丙基甲基纤维素添加至原花色素聚合物组合物中以增加组合物的体积。另外，可将粘合剂(诸如但不限于淀粉、明胶、蔗糖、葡萄糖、右旋糖、糖蜜、乳糖、***树胶、藻酸钠(海藻酸钠)、爱尔兰苔藓的提取物、潘瓦尔胶(panwar gum)、印度树胶、车前子壳粘胶、羧甲基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、硅酸镁铝和淀粉***半乳聚糖、聚乙二醇、乙基纤维素和蜡)添加至制剂中以增加其内聚性质。另外，可将润滑剂，诸如但不限于滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、氢化植物油、聚乙二醇、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠、亮氨酸、碳蜡、月桂基硫酸钠和月桂基硫酸镁添加至制剂中。此外，可添加助流剂，诸如但不限于胶体二氧化硅或滑石，以改善粉末制剂的流动特性。还可添加崩解剂，诸如但不限于淀粉、粘土、纤维素、藻朊(藻胶)、树胶、交联聚合物(例如，交联羧甲基纤维素、交聚维酮和羟基乙酸淀粉钠)、硅酸铝镁、甲基纤维素、琼脂、膨润土、纤维素和木制品、天然海绵、阳离子交换树脂、藻酸(海藻酸)、瓜尔胶、柑橘浆、羧甲基纤维素或十二烷基硫酸钠与淀粉以促进制剂在肠中的崩解。

在一些实施方案中，除了另一种药学上可接受的媒介物以外，药学上可接受的制剂还含有具有肠溶包衣的原花色素聚合物组合物。在一个实施方案中，原花色素聚合物组合物可被直接压制成片剂。片剂可以不含赋形剂和具有药学上可接受的硬度和脆性，任选地具有润滑剂，例如但不限于硬脂酸镁，以及是肠溶包衣的。在另一个实施方案中，含有原花色素聚合物组合物的药学上可接受的组合物可选择地包括中和胃酸和/或酶或者具有防止胃酸分泌的活性的一种或多种物质。这些制剂可通过本领域已知的方法制备(参见，例如，Remington's“The Science and Practice of Pharmacy,”第22版，主编：LloydV.Allen,Jr.,Pharmaceutically acceptable Press,RoyalPharmaceuticallyacceptable Society,London,UK,2013；和美国专利第7,323,195号中描述的方法)。

在一个实施方案中，用保护原花色素聚合物和/或聚合物组合物免受胃环境破坏的物质配制原花色素聚合物组合物。对于此类保护，可将原花色素聚合物组合物包被肠溶包衣。肠溶包衣是在胃中保持完整的那些涂层，但一旦其到达小肠，就会溶解并释放剂型的内容物。使用具有酸性基团的成分制备大量肠溶包衣，以使得在胃中存在的极低的pH即pH1.5至2.5，酸性基团不被离子化，并且涂层保持为未离解的不溶形式。在较高的pH值下，诸如在肠的环境中，肠溶包衣被转化成离子化形式，其可被溶解以释放原花色素聚合物组合物。其它肠溶包衣在它们被小肠中的酶降解之前保持完整，并且其它肠溶包衣在确定的对水分暴露后分解，以使得涂层在通过进入小肠中之前保持完整。多种聚合物可用于制备肠溶包衣，并且可通过本领域已知的用于施用肠溶包衣的任何方法来实现肠衣对原花色素聚合物组合物的应用，如可以例如(但不限于)在美国专利第7,323,195号和第7,341,744号(通过引用并入本文)中找到的。

在另一个实施方案中，将原花色素聚合物组合物的药学上可接受的组合物配制为于硬壳明胶胶囊中提供的或悬浮于用于儿科施用的口服溶液中的肠溶包衣颗粒或粉末(直径为300-500微米的微球)。还可将肠溶包衣原体花青素聚合物组合物粉末或颗粒与食物混合，特别地用于向新生或年幼动物施用。可使用本领域熟知的技术制备此类制剂。另外，原花色素聚合物组合物颗粒和粉末可使用本领域已知的任何方法来制备，所述方法是例如但不限于结晶、喷雾干燥或任何粉碎方法，优选使用高速混合器/造粒机，如例如(但不限于)美国专利第7,323,195号(通过引用并入本文)中描述的。

在其它实施方案中，原花色素聚合物组合物或益生元组合物呈与适当赋形剂混合的水性混悬剂的形式。适用于制备水性混悬剂的赋形剂的非限制性实例包括悬浮剂，例如甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟基-丙基甲基纤维素、藻酸钠(海藻酸钠)、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和***胶；分散剂或润湿剂，其可以是天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或环氧乙烷与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯或盐，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，例如十七碳乙烯氧基鲸蜡醇，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物，诸如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物，诸如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。水性混悬剂还可含有一种或多种防腐剂，例如乙基或正丙基对羟基苯甲酸酯，一种或多种着色剂，一种或多种调味剂和一种或多种甜味剂，例如蔗糖、糖精或阿斯巴甜。

适用于通过加水制备水性混悬剂的可分散性粉末和颗粒提供与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的原花色素聚合物组合物或益生元组合物。合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂通过上述的那些来举例。另外的赋形剂，例如甜味剂、调味剂和着色剂也可存在。

在一个实施方案中，原花色素聚合物组合物或益生元组合物是凝胶或凝胶制剂。在一个实施方案中，原花色素聚合物组合物或益生元组合物是糊剂制剂。在一个实施方案中，糊剂制剂含有源自秘鲁巴豆的纯化的植物提取物。在另一个实施方案中，糊剂制剂含有包含SB300或SP 303的肠溶包衣珠粒。在一个实施方案中，糊剂制剂含有肠溶保护的SB 300珠粒。在一个实施方案中，凝胶或糊剂被包含或预加载在递送装置(诸如注射器，例如无针注射器或其它类型的涂药器或递送***(尤其是用于口服递送的))中。凝胶或糊剂制剂特别适用于向新生或年幼驹施用，但也适用于其它成年和新生动物，例如本文描述的那些动物。在一个实施方案中，不将凝胶或糊剂包含在递送装置中，而将其施用于动物(特别是失能或病得太重以至不能进食或饮水的动物)口腔的顶部，从而避免口服或其它施用模式。在一个实施方案中，凝胶或糊剂包含pH敏感性聚合物颗粒，诸如微粒或纳米颗粒，以允许活性化合物至细胞内的pH依赖性摄取和/或活性化合物在动物中的不同pH环境中的pH依赖性释放。用于生成包含秘鲁巴豆植物提取物、原花色素聚合物组合物的粒剂(颗粒剂)和颗粒或其可压缩形式的方法是如本领域已知的和实践的，并且是如例如在美国专利第7,341,744号(其内容通过引用并入本文)中提供的。在一个实施方案中，制备用于口服递送并含有共聚物，诸如不同类型的泊洛沙姆和普朗尼克(普流尼克)(例如普朗尼克(普流尼克)F)的凝胶。

在其它实施方案中，原花色素聚合物组合物或益生元组合物存在于糊剂制剂中(优选用于口服施用)。例如，口服糊剂可包含但不限于油性媒介物或赋形剂，诸如疏水性油性媒介物、碱化剂、调味剂和着色剂。疏水性油性媒介物的举例说明性和非限制性实例包括植物油、甘油三酯或聚丙二醇，以及增稠剂，例如硬脂酸铝。调味剂可包括例如本领域技术人员已知的水果香料(水果风味剂，水果调味剂)、薄荷香料(薄荷风味剂，薄荷调味剂)、蜂蜜香料(蜂蜜风味剂，蜂蜜调味剂)、和其它天然及有机调味剂。着色剂可包括例如氧化铁或二氧化钛。或者，油性媒介物可以是液体石蜡或其它合适的蜡，包括增稠剂。

油性混悬剂可通过将秘鲁巴豆原花色素聚合物作为活性成分悬浮在植物油(例如，花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油诸如液体石蜡中来配制。油性混悬剂可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。口服制剂可包含如上所述的甜味剂和调味剂以改善适口性。还可将药学上可接受的防腐剂，例如抗氧化剂诸如抗坏血酸添加至此类组合物中。

用于本发明的方法的秘鲁巴豆原花色素聚合物药物组合物或益生元组合物也可呈水包油乳剂的形式。油相可以是植物油诸如橄榄油或花生油，或矿物油诸如液体石蜡或这些油的混合物。乳化剂的实例包括但不限于天然存在的磷脂，例如大豆卵磷脂和衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，例如脱水山梨糖醇单油酸酯，以及偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如，聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯。可将增甜剂、着色剂和调味剂包含在乳剂中。

还可用甜味剂，例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖配制含有秘鲁巴豆原花色素聚合物或益生元组合物的糖浆和酏剂。此类制剂还可含有缓和剂、防腐剂以及调味剂和着色剂。药物组合物可呈无菌的、口服递送的或可施用的水性或油性混悬剂的形式。可根据本领域已知的方法使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂(例如上述那些试剂)来配制该混悬剂。无菌药物制剂还可以是无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌溶液或混悬剂，例如1,3-丁二醇溶液中的溶液。可用于制剂中的举例说明性、可接受的载体和溶剂包括水、林格溶液和等渗氯化钠溶液。还可包括共溶剂，例如乙醇、丙二醇或聚乙二醇。另外，无菌不挥发油，例如任何温和的不挥发油诸如合成的甘油单酯或甘油二酯还可被常规地用作溶剂或悬浮介质，以及可被使用。另外，脂肪酸，诸如油酸等可用于可注射制剂中。

剂型和施用

在用于治疗新生动物(例如但不限于牛和骆驼幼仔，驹，小山羊，羔羊等)的腹泻的具体实施方案中，原花色素聚合物组合物或益生元组合物为粉末例如可重构粉末形式。组合物可以是肠溶或非肠溶的。在一个实施方案中，新生儿的年龄小于一周。在一个实施方案中，新生动物是牛或骆驼幼仔。在一个实施方案中，新生动物受到大肠杆菌诱导的分泌性腹泻的折磨。在一个实施方案中，大肠杆菌致病因子是大肠杆菌K99Sta。在一个实施方案中，除了感染大肠杆菌之外，动物经历由轮状病毒和/或冠状病毒引起的病毒感染，其作用机制涉及感染并随后破坏肠道内的细胞。这种细胞参与动物肠道中乳的消化和吸收。通过治疗新生动物中的腹泻和相关的脱水并允许动物存活，本发明的方法还提供了待治疗的新生儿和待修复的幼年动物的肠中细胞损伤的手段。

在一个实施方案中，用于治疗的原花色素聚合物组合物或益生元组合物的粉末形式被重新配制或与液体如口服电解质、乳或乳替代物，水，生理盐水混合以产生液体形式或悬液。乳替代品通常是给予幼仔或其它动物以代替来自母体的乳的来自不同来源的蛋白质源(例如，来自不同物种、大豆或蛋的乳)和能量(乳糖和脂肪)。在一个具体的实施方案中，将组合物在重构之前以200-800mg/kg粉末乳替代物混合。在一个实施方案中，组合物的粉末形式以包装中的单个剂量的形式提供，例如包装的剂型，其中提供了一些单独的包装用于治疗方案。在某些实施方案中，包装的剂型含有50-500mg的原花色素聚合物组合物或含多酚的提取物，优选200-300mg的原花色素聚合物组合物或含多酚的提取物。根据使用、处理效率和商业功效，可以包装并提供在一起的单个剂量的数量不是限制性的，并且可以包括例如一至二十个包装剂量；一至十个包装剂量；两个，四个，六个，八个，十个或更多个包装的剂量，以及上述之间的包装剂量的数量。本领域技术人员将理解，由于诸如SP-303或克罗来姆和SB-300的组合物的较高纯度，需要在制剂中使用比SP-303更多重量的SB-300以达到相同的量的原花色素聚合物组合物的活性成分。SB-300通常具有原始花色素聚合物组合物的约67重量％，而SP-303具有较高的纯度，例如99-100％。

在另一个实施方案中，组合物的粉末形式被提供在容器中，例如袋，盒，槽或桶(例如，5磅至25磅的桶)中，其中粉末可以为例如100克(g)或更多的量，并且可任选地包括诸如勺，杯，匙，抹刀，长柄勺或杓子的测量装置。这样的容器包含例如组合物的单独日剂量；或适用于多次治疗的量，例如两天治疗，三天治疗，四天治疗等。有效量的粉末也可以与幼年动物(例如幼仔)或有需要的成年动物食用的饲料混合以供。剂量可以是每天200-800毫克。

在一个实施方案中，原花色素聚合物组合物或益生元组合物通过提供化合物作为大丸剂施用或递送至患有腹泻的有需要的新生动物。在一个实施方案中，原花色素聚合物组合物配制为大丸剂，即药丸，胶囊或片剂，在口中直接口服施用给患有腹泻或其症状的新生动物，例如犊牛，驹，羔羊和小山羊。在一个具体实施方案中，治疗方案包括在预定的时间段(例如一天，两天或三天或更多天)施用250mg的产品剂量，例如每个病态动物一个大丸剂所涵盖的。该产品可以作为完整剂量的部分提供给有需要的动物，其中每天一次或两次或更多次施用所述完整剂量的部分。或者，可将完整剂量每天一，二，三，四或更多次施用至有需要的动物。在一个具体实施方案中，治疗包括每天两次给予的250mg的剂量。在一个具体实施方案中，治疗包括每天两次或每天四次给予三天的2-10mg/kg的剂量。在另一个实施方案中，治疗包括每天两次给予3天或每天三次给予3天或每天四次给予3天的口服大丸剂量。在另一个实施方案中，治疗包括250mg的口服大丸剂量，每天两次，持续3天。在一个实施方案中，该剂量是肠溶形式或非肠溶形式(例如重构粉末形式)的秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物SB-300。

在一个实施方案中，组合物是凝胶或凝胶制剂。在一个实施方案中，凝胶被包含或预加载在递送装置中，例如注射器或其它类型的进样器或递送***，特别是用于口服递送。在一个实施方案中，凝胶包含pH敏感的聚合物颗粒，例如微粒或纳米颗粒，以允许活性化合物在细胞中的pH依赖性摄取和/或活性化合物在动物的不同pH环境中的pH依赖性释放。凝胶制剂特别适用于新生和幼年驹的施用，但也适用于其它新生动物，例如本文所述的那些。在一个实施方案中，凝胶不包含在递送装置中，而是施用至动物口腔的顶部，特别是对于过于失能或病态而不能食用或饮食的动物，从而避免口服或其它施用方式。在一个实施方案中，制备用于口服递送的凝胶，并且其含有共聚物，例如不同类型的泊洛沙姆和Pluronic，例如Pluronic F。用于产生包含原花色素聚合物组合物或其可压缩形式的粒剂和颗粒的方法在本领域是已知和经实践的，并且例如在美国专利No.7,341,744中提供，其内容通过引用并入本文。

在另一个实施方案中，组合物为糊剂制剂，优选用于口服施用。例如，口服糊剂可以包含但不限于油性媒介物或赋形剂，例如疏水性油性媒介物，碱化剂，调味剂和着色剂。疏水性油性媒介物的举例说明性和非限制性实例包括植物油，甘油三酯或聚丙二醇，以及增稠剂，例如硬脂酸铝。调味剂可以包括例如本领域技术人员已知的水果香料，薄荷香料，蜂蜜香料和其它天然和有机调味剂。着色剂可以包括例如氧化铁或二氧化钛。或者，油性媒介物可以是液体石蜡或其它合适的蜡，包括增稠剂。在一个实施方案中，糊剂制剂含有具有肠溶SB-300或SP 303的珠粒，其以2mg/kg的剂量施用至动物，例如马驹。更具体地，含有肠溶SB-300珠粒的糊剂制剂以2mg/kg的剂量施用至驹，每天两次，持续三天。更特别地，含有肠溶SB-300的方法的糊剂制剂以2mg/kg的剂量施用至驹，每天三次，持续三天。更具体地，将包含肠溶SB-300珠粒的糊剂制剂以2mg/kg的剂量施用至驹，每天四次，持续三天。在一个实施方案中，含有肠溶SB-300珠粒的糊剂以十二小时的间隔每天施用两次。

在其它实施方案中，将本发明的原花色素聚合物组合物或含多酚的提取物配制在用于施用至幼年或成年动物的动物饲料组合物中。

向受影响动物施用秘鲁巴豆原花色素聚合物产品的途径并不旨在是限制性的。举例说明性地，施用可以通过任何合适的，方便的或优选的施用途径，包括口服、经颊、经牙、牙周、通过食物来源(动物饲料)、营养来源或释放源、经耳、吸入、子宫颈内、肌内、皮下、真皮内、颅内、淋巴内、眼内、腹膜内、胸膜内、鞘内、气管内、子宫内、血管内、静脉内、膀胱内、鼻内、经眼、胆道灌注、心脏灌注、经脊髓、舌下、局部、经皮肤、***内、经直肠、经输尿管或尿道。在某些实施方案中，口服、经颊和食物和/或饮料补充剂是特别合适的途径。在一个实施方案中，产品是水性制剂，并且以浸液的形式，或直接从定向至食管腔的即用型(RTU)瓶提供给动物，以便更有效地到达动物的肠/肠道以获得最佳活性。在相关实施方案中，施用也可以通过包含在动物的常规或特殊饮食中，诸如在用于动物或伴侣动物的功能性食物中。

剂量形式可包括但不限于口服、可注射、经皮肤、气溶胶(包括计量气雾剂)、可咀嚼型产品或微丸、胶囊剂、含包衣颗粒的胶囊、纳米颗粒或微丸、含延迟释放颗粒的胶囊剂、含有延长释放颗粒的胶囊剂、浓缩物、霜剂和增强霜剂、栓剂软膏、圆盘剂(discs)、敷料、酏剂、乳剂、灌肠剂、延长释放膜或纤维、气体、凝胶、计量凝胶、颗粒、延迟释放颗粒、泡腾颗粒、植入物、吸入剂、可注射脂质复合物、可注射脂质体、***物或装置、延长释放***物、宫内避孕装置(intrauterine device)、果冻(胶冻剂)、液体、延长释放液体、洗剂、增强洗剂、油、软膏、增强软膏、糊剂、锭片(锭剂,软锭剂)(pastilles)、微丸、粉剂、重构粉剂、延长释放粉剂、计量粉剂、溶液、滴剂、浓缩溶液、凝胶形成溶液/滴剂、海绵、喷雾剂、计量喷雾剂、栓剂、混悬剂、混悬剂/滴剂、延长释放混悬剂、糖浆剂、片剂/丸剂、咀嚼片/丸剂、含有包衣颗粒的片剂/丸剂、延迟释放片剂/丸剂、可分散片剂/丸剂、泡腾片/丸剂、延长释放片剂/丸剂、口服崩解片剂/丸剂、胶带或糖锭/锭剂。剂量可以作为制剂、组合物、药学上可接受的制剂和组合物、生理上可接受的制剂和组合物提供，并且包括本领域已知和使用的药学上和生理上可接受的载体、赋形剂、稀释剂或媒介物。

对于口服施用，优选利用合适的载体等，以固体剂型包封和配制秘鲁巴豆原花色素聚合物产物或益生元产物或其组合物。合适的载体、赋形剂、稀释剂和媒介物的非限制性实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、***树胶、磷酸钙、藻酸盐(海藻酸盐)、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、明胶、糖浆、甲基纤维素、甲基-和丙基羟基苯甲酸酯、滑石、镁、硬脂酸酯或盐、水、矿物油、食用油等。制剂还可包括润滑剂、润湿剂、乳化剂和悬浮剂、防腐剂、甜味剂或调味剂。可通过使用本领域熟知的方案和方法将组合物配制来在向动物施用后提供活性成分的快速、持续、延长或延迟释放。制剂还可包括减少蛋白水解降解和促进吸收的化合物或物质，诸如，例如表面活性剂。

如本领域技术人员将理解的，可以根据动物的近似重量、体重或身体表面积或要占据的体间隙和质量的体积来计算具体剂量。剂量还取决于由实施者选择的特定施用途径。本领域普通技术人员例如使用适当的测定和分析程序(诸如已针对某些化合物所描述的测定和分析程序(例如Howitz等，Nature,425:191-196,2003))，常规地进行确定用于治疗的适当剂量所需的计算的进一步改进。可基于标准剂量-反应研究确定精确剂量。用于治疗受累动物的治疗有效剂量可以通过滴定给予动物的活性产物的量至达到所需的治疗效果，同时使副作用降至最低来确定。

为了用于根据本发明的方法治疗新生和幼年动物或成年动物的腹泻，例如分泌性或水样性腹泻及其症状，治疗上可接受的形式的秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物(包括秘鲁巴豆植物提取物)被施用，特别是口服施用，其量为每天0.1-100mg/kg，每日一次、两次或更多次。在其它实施方案中，该量可以为约0.1至约10mg/kg/天，每天一次，两次或更多次；或约0.1至约25mg/kg/天，每日一次，两次，三次，四次或更多次；或约0.1至约30mg/kg/天，每天一次，两次或更多次；或约0.1至约40mg/kg/天，每天一次，两次或更多次。在其它实施方案中，剂量可以为0.1mg/kg，0.2mg/kg，0.3mg/kg，0.4mg/kg，0.5mg/kg，0.6mg/kg，0.7mg/kg，0.8mg/kg，0.9mg/kg，1mg/kg等，以及其之间的递增剂量。在其它实施方案中，该量可以为约1至约10mg/kg/天，一次，两次，三次，四次或更多次；或约1至约5mg/kg/天，约1至约8mg/kg/天，约1至约10mg/kg/天或约2至约4mg/kg/天，每天一次，两次，三次，四次或更多次。在一个实施方案中，用于施用的秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物的量为2mg/kg，每天两次。在另一个实施方案中，用于施用的秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物的量为2mg/kg，每天三次。在另一个实施方案中，用于施用的秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物的量为2mg/kg，一天四次。在一个实施方案中，每天两次施用2mg/kg剂量三天。在一个实施方案中，每天3次施用2mg/kg剂量三天。在一个实施方案中，每天4次施用2mg/kg剂量3天。在更具体的实施方案中，SB-300肠溶珠粒被配制成糊剂，其被施用至新生或幼年动物，例如，马驹或成年动物，剂量为2mg/kg，每天两次，持续三天，或每天三次，持续三天，或每天四次，持续三天或多于三天。在其它实施方案中，上述量以及1-10mg/kg或2-4mg/kg的秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物被施用，例如每天两次，每天三次，每天四次，或每天超过四次，而不是每天一次。根据需要，可能需要更高的剂量，例如每天50mg/kg或100mg/kg或每天两次或更多次，以治疗新生和幼年动物的腹泻和伴随的脱水。

在其它实施方案中，对于这些治疗方法，用于秘鲁巴豆原花色素聚合物产物或秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物(例如SP 303或SB-300)或植物提取物的合适剂量可以为约1mg至约1000mg，每天一次或每天多次。在一个实施方案中，合适的剂量可以为约10mg至约500mg，每天一次或每天多次。在一个实施方案中，合适的剂量可以为约50mg至约350mg，每天一次或每天多次。在一个实施方案中，合适的剂量可以为约30mg至约400mg，每天一次或每天多次。在一个实施方案中，合适的剂量可以为约100mg至约250mg，每天一次或每天多次。在一个实施方案中，合适的剂量可以为约50mg至约300mg，每天一次或每天多次。应当理解，本文所述的量和剂量范围包括指定的较低和较高量以及其之间的量。在一些实施方案中，每天多次施用的剂量可以给予连续多天，例如两天，三天，四天，五天，六天，七天或更长时间。每天多次施用的剂量可以包括每天两次，三次，四次，五次，六次或更多次。本发明涵盖了其它剂量计划，例如每隔一天，或每三天，每四天等。此外，本领域技术人员将理解，施用至动物的剂量和量可以变化，考虑到正在进行治疗的动物的广泛范围的重量，以及动物种类和消化***的类型，例如反刍动物或非反刍动物。在一个实施方案中，秘鲁巴豆原花色素聚合物是SB-300。在一个实施方案中，秘鲁巴豆原花色素聚合物是肠溶SB-300。在一个实施方案中，秘鲁巴豆原花色素聚合物是非肠溶SB-300。

在一些实施方案中，秘鲁巴豆原花色素聚合物产物或益生元组合物的每日剂量(包括每天多次剂量，例如每天两次或三次)可为每只动物2mg，5mg，10mg，15mg，20mg，25mg，50mg，100mg，150mg，175mg，200mg，225mg，250mg，275mg，300mg，325mg，350mg，375mg，400mg，500mg(或其之间)。还可以改变施用方案以实现秘鲁巴豆原花色素聚合物的治疗有效浓度以治疗如本文所述的腹泻及其症状。通过具体但非限制性的实例，用于根据本发明的方法的合适的剂量是250mg，每天施用一次或两次。在一些实施方案中，化合物可以每天一次，每天两次，每天三次，每天四次，每天5次，每天7次或每天10次施用。通常将剂量分为在全天中施用的相等部分，然而在涉及治疗更严重或根深蒂固的症状的一些实施方案中，可能有用的是定制剂量施用方案，使得大部分日常治疗在一天的预定时间处施用，例如，在一天的前半天。在一些实施方案中，约50％，60％，70％或80％的剂量在一天的前半天施用。在其它实施方案中，在一天的后半天施用大部分剂量可能更合适，使得在一半的后半天施用约50％，60％，70％或80％的剂量。

应当理解，实际施用的剂量可由实施者根据相关情况(包括所治疗的疾病、病状或其症状的严重度、待施用的产品的形式、接受治疗的个体动物的年龄、体重和反应以及选择的施用途径)来确定实际施用的剂量。对于所有量或剂量范围，意图是将剂量的下限和上限包括在该范围内

本发明的方法还包括单独地或与用于治疗或改善分泌性腹泻的症状的其它补充剂或药剂组合地施用原花色素聚合物组合物或益生元组合物的药学上可接受的制剂，所述其它补充剂或药剂是诸如复水(重构)剂、电解质(例如，氯化钠、氯化钾、氯化镁及其制剂)、抗生素、肠衬里保护剂诸如高岭土、果胶或铋液，以及体液吸附剂，例如绿坡缕石。其它药剂可以包括抗能动剂，尽管由于与新生和幼年动物中的腹泻诱导有关的许多微生物和病原体伴随地减少肠蠕动，抗能动剂的使用可能是禁忌的。还可以使用天然生物产品(例如乳酸杆菌属、双歧杆菌属或屎链球菌(Streptococcus faecium)或酵母菌属或益生菌)作为添加剂，以恢复受影响的新生动物的肠道菌群的自然平衡。

实施例

实施例1

用含有来自秘鲁巴豆的原花色素聚合物或低聚物提取物的组合物治疗的新生儿骆驼幼仔中的腹泻的控制

新生儿腹泻仍然是幼年骆驼中最常见的死亡原因之一。产肠毒素大肠杆菌(ETEC)和轮状病毒在新生骆驼生命的第一周内似乎是腹泻的最重要的感染原因。沙门氏菌也是较大幼仔的一个问题。病理生理学包括毒素诱导的小肠中水的分泌，导致分泌性腹泻。不管疾病进程中涉及的病原体如何，治疗旨在防止和纠正所产生的流体和电解质缺乏症。在一天的腹泻中，幼仔可以损失5至10％的体重的水。因此，限制失水是至关重要的。

本研究的目的是确认来自Napo Pharmaceuticals Inc.的秘鲁巴豆原花色素聚合物提取物组合物(NSF)在初步研究中控制幼年骆驼幼仔(<6周龄)中的分泌性腹泻的功效。

动物：研究中有三十(30)只的年龄介于(1至6周)之间的两个性别的幼年幼仔，其患有腹泻临床症状。它们被随机分配到治疗组或对照组。二十(20)只用NSF治疗，十(10)只作为对照。

排除/包含标准：具有腹泻的临床症状的只有小于6周龄的幼仔包括在研究中。具有呼吸***疾病或关节炎迹象的幼仔以及显示腹泻迹象超过四(4)天的动物不包括在研究中。

除了测试对象以外的治疗：口服或IV的电解质和液体由主治医师或看守者酌情施用。数量和频率记录在数据表中。抗生素和NSAIDS也可以由兽医酌情使用，如果它们是“护理标准”治疗。其使用的数量和频率记录在数据表中。不应使用肠道保护剂和吸收剂如高岭土，活性硅镁土，活性炭，或者应将动物从研究中撤出。在本研究中不使用胃肠道形态调节剂(如洛哌丁胺，东莨菪碱，阿托品，dipryrone)。

测试对象：将小量大丸剂(药丸)形式的秘鲁巴豆提取物(NSF)直接在口中施用至幼仔。病态动物用剂量为每只幼仔250mg的产品(一药丸)以及“护理标准治疗”每天治疗两次持续3天(每天两次2升的口服电解质或每天4升的静脉注射液)。治疗组按时间顺序分配，包括：前2只动物被治疗(第1组)，第3只为对照(第2组)，2只治疗的动物，1只对照，以此类推。对照接受无NSF药丸的护理标准治疗。两组的“护理标准”治疗是相同的。

临床检查：研究中的动物每天检查两次，持续3天，并使用下表1中详述的参数进行评分。

表1

实施例2

口服施用秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物对患有腹泻的鼠伤寒沙门氏菌感染的新生牛幼仔的粪便评分的影响的评价

腹泻仍然是新生幼仔发病和死亡的重要原因(P.Constable,2004,J Vet InternMed.,18:8-17)。与这种疾病相关的经济损失不仅归因于死亡率，还包括动物的延缓生长，兽医护理和用于治疗感染的药物的成本以及涉及的增加的劳动力(D.C.de Graaf等人,1999a和1999b,Int J Parasitol.,29:1269-1287和1289-1306)。几种肠道病原体与新生幼仔腹泻相关，最常见的是大肠杆菌，产气荚膜梭菌，沙门氏菌属的某些种，隐孢子虫属的某些种，轮状病毒和冠状病毒，其相对重要性因地理区域而异(D.R.Snodgrass等人,1986,Veterinary Record,119:31-34；E.E.Younis等人,2009,Res Vet Sci.,87:373-379)。

进行小型的完全随机化的研究以评价口服施用250mg秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物(即口服SB-300)对感染鼠伤寒沙门氏菌和每天两次接受治疗连续3天的牛幼仔的粪便稠度的影响。在整个治疗期间确定粪便稠度评分。共有82只幼仔被随机分配到两个治疗组之一；对照组分配了39只幼仔，43只幼仔被分配到治疗组。所有幼仔临床上受到沙门氏菌感染引起的腹泻的影响，并根据农场标准操作程序接受姑息治疗。另外，分配治疗组的幼仔接受相同的姑息治疗，并且如上所述用秘鲁巴豆原花色素聚合物SB-300组合物口服治疗。

使用三级评分***对幼仔进行粪便稠度评分；0＝固体/正常良好成形的粪便，1＝糊状粪便，2＝水样腹泻。腹泻诊断后，每只幼仔在三天内共接受6次粪便评分(每天两次，早晨和下午)。使用重复测量ANOVA来分析数据。

使用用秘鲁巴豆原花色素聚合物提取物组合物(SB-300)的治疗具有改善(即降低)粪便分数的强烈倾向(P值＝0.05)。总体而言，对照幼仔的平均粪便分数为1.46，治疗幼仔的平均粪便分数为1.34(P值＝0.05)。研究开始时治疗组之间的粪便稠度分数相似。用巴豆属物种原花色素聚合物提取物组合物治疗的幼仔在治疗第二天时开始表现出对腹泻评分的更快改善(参见图1)。

由于进行研究的商业农场正在经历严重的鼠伤寒沙门氏菌爆发，本研究中登记的幼仔被确定为感染沙门氏菌细菌，其主要导致吸收不良性腹泻。因此，如果评估的是高分泌性腹泻而不是沙门氏菌引起的吸收不良型腹泻，则SB-300组合物对研究幼仔的粪便分数的影响可能会增加，因为前一种类型的腹泻可以更容易地被秘鲁巴豆原花色素聚合物的典型作用机制治疗。

实施例3

用秘鲁巴豆原花色素聚合物提取物组合物SB-300治疗大肠杆菌攻击的幼仔

本实施例描述了在Cornell University,Ithaca,NY的隔离间中进行的另一项牛幼仔研究，其中幼仔用克罗来姆(秘鲁巴豆原花色素聚合物提取物组合物)的肠溶或非肠溶制剂治疗。所有幼仔都是来自纽约州北部同一个奶牛场的雄性Holstein。出生时的幼仔重量从57磅到106磅不等。

在本研究中，幼仔被干净利落地抓住，并在两小时内被运送到用于研究动物的隔离设施(Cornell Animal Research Facility，Ithaca，NY)。幼仔被分别安置在16平方米的房间内，温度和湿度可控。对于临床试验，使用产肠毒素大肠杆菌血清型O9:K35:K99(ATCC#31616)对幼仔进行攻击。在标准细菌活化后，将大肠杆菌血清型O9:K35:K99在胰蛋白酶大豆肉汤(BBL Microbiology Systems)中生长8小时，然后在Minca-IsoVitaleX(BBL)琼脂上于37℃培养18小时。将细菌悬浮于含10％二甲基亚砜的磷酸缓冲盐水中，并储存在-70℃的10mL等分试样中。平均接种滴度为每10毫升4x 10¹⁰个菌落形成单位(CFU)(CFU/10mL)。

所有幼仔在出生的5小时内(例如出生后1至5小时)在研究设施处进行攻击。将新鲜制备的1升(L)无抗生素的初乳替代物加上述10mL解冻的大肠杆菌接种物(如上所述的)的混合物通过食管给料器施用至幼仔。幼仔按照每日10％体重基础喂食非药用乳替代物(22-20)，每天两次，例如在0600h和1800h。在无限制地获得水分的情况下，所有的幼仔都被保留在研究中，直到生命的25天。此外，幼仔开食料(calf starter)(Calf starter 18％CP,Tractor Supply Co.)也在生命的第七天开始可无限制地获得。

在这项研究中，共有60只幼仔分为3组。组1：二十(20)只幼仔每天两次接受250毫克作为肠溶片剂的秘鲁巴豆原花色素聚合物提取物组合物SB-300，持续三天。组2：二十一(21)只幼仔每天两次接受作为在乳或口服电解质中重构(溶解)的非肠溶粉末的250mg SB-300，持续三天。组3：十九(19)只幼仔每天两次接受作为片剂或重构粉末的安慰剂(含糖和氧化铁的肠溶片)，持续三天，作为对照。

在每餐之前每天两次施用治疗(每只幼仔总共6次治疗)，在第一顿饭之前(细菌攻击后约12小时)施用第一次治疗。幼仔在出生时称重，并在生命的第10、15和25天再次称重。对于从出生到第10天，第15天，第25天的每只幼仔，粪便评分(收集了另外的20克粪便样本)、皮肤膨胀和眼睛衰退(指示脱水)每天评价两次。

在腹泻发作时治疗幼仔。一般来说，根据幼仔的脱水水平和姿态对腹泻进行治疗。给患有腹泻和轻度脱水但食欲正常的幼仔提供口服电解质(Re-sorb,Pfizer)；给患有腹泻、脱水和食欲不振但能走动的幼仔喂2升口服电解质混合物；并且用4升静脉内注射液(Plasma-lyte148和5％葡萄糖注射液；Baxter Corporation)治疗不能站立和严重脱水的幼仔。

仔细监测幼仔的脱水，食欲，姿态，粪便稠度和任何不良健康障碍(表2)。在攻击后12小时内从所有研究幼仔收集第一个血液样本。对于每只幼仔，每天收集粪便样品两次，以分析粪便的干物质，并进行每日血液样品采集以精确监测水化状态(总蛋白质，红细胞压积(PCV)，化学)。在整个研究期间记录每日起始摄入量和乳摄入量。使用ELISA试剂盒(BethylLaboratories，(Montgomery，TX))测定出生后48小时采集的血液的免疫球蛋白-G水平。对于所有日常血液样品，血清总蛋白、PCV和酸碱血清状态(全血化学)在临床病理实验室(Cornell University,Ithaca,NY)进行。用作动物健康的临床诊断和评估的标准的幼仔健康相关事件见下表2。

粪便评分(表2)如下进行评估：它们基于腹泻严重程度和5分量表来视觉评估喂养乳的幼仔上的幼仔腹泻。粪便分数如下分类：0＝形成正常颜色的粪便；1＝糊状(半成形)正常颜色的粪便；2＝正常颜色的液体(水样)粪便；3＝具有正常颜色(和/或粘液)的水样粪便；和4＝具有异常颜色(和/或粪便中的血液)的水样粪便。

表2

本研究的初步结果显示安慰剂治疗的幼仔与用SB-300治疗的幼仔之间的响应差异。此外，如图2所示，在施用肠溶形式的SB-300的幼仔和施用非肠溶性溶解粉末形式的幼仔之间观察到响应的差异，如在治疗结束之前所观察到的。图2显示，在治疗结束之前，用肠溶片剂SB-300治疗的幼仔组的平均值与来自安慰剂组的幼仔组的平均值之间的差异是统计学显著的。(第4天AM，p<0.002，ANOVA)。因此，用肠溶SB-300治疗的幼仔随着治疗时间显示出粪便稠度的显著改善。

关于动物发病率，具有水样腹泻的幼仔的百分比(评分为2及以上)在图3中示出。每只幼仔每天评分两次。在第4天AM，用肠溶片形式的SB-300治疗的组中的幼仔和用安慰剂治疗的组中的幼仔之间的差异是统计学显著的(P<0.05Fischer检验)。因此，肠溶SB-300治疗的幼仔比评估时接受非肠溶形式的幼仔表现出更好的响应(改善腹泻状况，较少幼仔具有水样腹泻)。(参见图3)。

此外，与用重构粉末形式的SB-300或安慰剂治疗的动物相比，用肠溶形式的SB-300秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物治疗的幼仔在25天观察期间显示更大的平均体重增长。(表3)。这是一个意想不到的发现，特别是因为与其它动物物种的胃中的低酸性pH相比，幼仔胃中的pH值相对较高，例如在喂食时它可以达到约pH6.0。鉴于在用乳喂养时用SB-300秘鲁巴豆原花青素聚合物组合物治疗时，幼仔胃中的较低酸性pH，出人意料的是相对于组合物的非肠溶形式，肠溶制剂会为幼仔提供治疗益处，或者可以改善动物的腹泻状况。肠溶秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物(SB-300)在其施用后在幼仔中提供更好响应的发现是与本研究相关的惊人和有益的发现。

在本实施例中描述的研究进展期间监测的幼仔的分析显示以磅计的在第1天和第25天之间的动物的平均体重增长，如表3所示。还在25天研究期间监测动物死亡率。表3还显示，在研究的25天内，六十只幼仔中有十只(10/60)死亡。在使用SB-300粉末或安慰剂治疗的幼仔组中都发现死亡。在用肠溶片剂形式的SB-300治疗的幼仔组中仅发生一例死亡。

表3

上述研究结果的初步分析显示，用安慰剂治疗的动物的死亡率百分比为21.5％，这与研究完成时确定并列于表3的值非常接近；该组动物死亡数相同。在初步分析中，用SB-300肠溶片剂治疗的动物25天后的平均体重增长测定为11.94磅，对于用安慰剂治疗的动物，测定25天后的平均体重增长为9.30磅。因此，初步值和结果与表3所示的研究结果高度一致。本研究的结果表明了使用肠溶形式的SB-300预防患有由大肠杆菌感染引起的腹泻的动物中的幼仔死亡率的明显益处。此外，当用SB-300的肠溶片剂治疗时，幼仔体重增长。用SB-300秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物，特别是肠溶形式的SB-300治疗的动物的死亡率降低和体重增长阐明了本发明的治疗方法的优点。研究动物的体重增长使得动物在用SB-300秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物治疗期间变得更健康和更强壮。以减少数量的治疗减少动物发病率，增加体重增长和生产更健康的动物都影响全球动物重点行业中动物的健康、营养和整体品质。这进一步转化为幼仔生产行业的商业、金融和经济优势和利益。

将本实施例中描述的试验的显著结果与组1的治疗幼仔的粪便分数和粪便干物质含量结合观察。结果的多变量方差分析(MANOVA)显示出治疗组之间在生命的头10天的粪便分数的显著差异。参见，例如图4，20个连续样品；p值＝0.018)。从图4可以看出，与CTR组中的幼仔相比，ECROF组的幼仔具有显著降低的粪便分数。如从图5看出，治疗组之间的攻击前粪便分数无显著差异；CTR、ECROF分别为0.61(SEM 0.16)，0.6(0.15)(P值＝0.90)。与对照组(2.13±0.16，p值＝0.018)相比，ECROF组(1.61±0.15)的幼仔在治疗期间的粪便分数显著降低。治疗停止后，与对照幼仔相比，ECROF组的幼仔粪便分数显著降低(P值＝0.012)。

图4和图5的粪便评分数据通过反映粪便中的干物质的数据来确认(参见例如图6)。在图6中，与CTR中的幼仔相比，ECROF组幼仔的粪便干物质含量显著更高(p值＝0.03)。

此外，在攻击前(P值＝0.80)以及治疗天数后(图7，p值＝0.67)治疗组之间的脱水评分中没有观察到差异。然而，治疗停止后，与对照组的脱水评分相比，用ECROF治疗的幼仔组(P值＝0.03)观察到较低的脱水评分。

由该试验产生的令人惊奇和意想不到的发现是，含有秘鲁巴豆原花色素提取物的产品的施用对腹泻和脱水的作用的持续时间比产品施用至幼仔的时间长得多。虽然以前认为秘鲁巴豆衍生产品的活性成分不具有遗留效应，但是从临床研究获得的结果令人惊奇地证明，产品的早期施用可以诱导ECROF治疗的动物的肠中的有益变化。例如，产品的施用可能有利于发育更健康的胃肠道微生物群。

实施例4

用秘鲁巴豆原花色素聚合物提取物组合物SB-300治疗腹泻幼仔-实地研究

对200只新生Holstein母牛幼仔作为研究动物进行了实地试验研究。本研究的一个目的是检查用秘鲁巴豆原花色素聚合物提取物组合物例如SB-300治疗幼仔与治疗导致的治疗动物中断奶前体重增长和每日粪便干重的变化之间的关系。

在腹泻发作时，将幼仔随机登记入两个治疗组。一组100只幼仔接受安慰剂。另外一组100只幼仔以250mg的量接收了秘鲁巴豆原花色素聚合物提取物组合物(例如Neonorm^TM)。幼仔在腹泻开始时进行治疗，每天两次，持续三天。收集数据：(i)出生时、腹泻发作、治疗结束时和断奶时的体重；(ii)粪便分数和样品-在发作和每次治疗后收集；和(iii)死亡率和发病率-直到生命的第45天。

该研究的初步结果表明，与安慰剂治疗的幼仔(703.4克/天)相比，用秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物治疗的幼仔显示出在60天生命时更高的平均日增重(723.3克/天)的强统计趋势。P值＝0.07。在每个治疗组中，对于参数出生体重、治疗时体重、死亡率、产棚中的出生、难产、发病率(中耳炎和呼吸***疾病)、断奶年龄和初始粪便干物质均没有观察到治疗的显著影响。结果表明，根据本发明的秘鲁巴豆原花色素聚合物组合物或植物提取物，例如SB-300，在维持60天生命时，能够有效地支持断奶前幼仔中的体重增长。

实施例5

用SB-300的糊剂制剂治疗具有水样腹泻的断奶前马驹

本实施例描述了一项随机、盲对照的先导研究，以评估SB-300的糊剂制剂在具有水样腹泻的断奶前驹中的安全性和有效性。该研究是根据“良好科学实践”进行的一项探索性研究。研究的目的是为了当以2-4mg/kg/剂量每天两次口服施用进行六次治疗(BID组)或每天四次口服(QID组)进行12次治疗时，确定SB-300的糊剂配方对断奶前驹的安全性、耐受性和功效。从筛选到最终观察和样本收集的研究时间为5至6天。

背景和理论

幼年的马中的腹泻是非常常见的，并且存在在这些驹中表现水性腹泻的临床体征的许多致病因子和条件(病毒，细菌，原生动物，寄生虫，相关的药物或饮食，毒素和肠道菌群的变化)。这些因子触发分泌性腹泻的病理生理机制，导致肠上皮细胞异常离子转运。这些异常介质的存在导致细胞内环腺苷酸单磷酸(cAMP)，环鸟苷酸(cGMP)，钙和/或蛋白激酶的变化，这又导致氯化物分泌增加。水遵循氯离子。肠水分泌的这种增加压制肠道的吸收能力，导致腹泻。针对致病因子的具体治疗包括施用抗菌药物和抗神经药物；而支持性护理可能包括输液和抗炎剂。症状治疗包括亚硫酸铋，益生菌和膳食修该，所有治疗法主要目的是恢复和维持液体和电解质的平衡。

目前，还没有具有抗分泌性质的商业上可获得的产品来使幼年的马中的水的肠分泌正常化。SB-300是秘鲁巴豆的纯化植物提取物，并且含有具有强的抗分泌性质和通过调控和调节环磷酸腺苷(cAMP)刺激的囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)和钙刺激的(CaCC)氯化物肠通道的独特作用模式的成分。该化合物局部地作用于小肠的内腔。化合物没有被***吸收，并且这是有助于产品安全的关键因素。SB-300对肠道运动没有影响，迄今没有明显的药物相互作用。

当以足够的浓度施用时，益生菌，即活生物体，提供超过其营养价值的有益效果，广泛用于治疗人、小动物和马中的腹泻。益生菌使用的剂量方案和用于腹泻治疗的益生菌品种是高度可变的。在一些实施方案中，秘鲁巴豆原花色素产物(例如克罗来姆或SB-300)包含益生菌，例如DIGESTIVE^TM。可以将益生菌加入到秘鲁巴豆原花色素产物中以提供治疗腹泻的标准治疗方法。

研究执行

潜在的研究受试者在研究兽医在每个场所进行筛选评估，以确定入选研究的资格。如果断奶前驹可入选研究，则根据分配的随机分组对其随机分组。使驹进入治疗期，其后是治疗后观察期。从治疗期开始到观察期结束，研究兽医或指定人员在病例报告表(CRF)执行和记录进行的粪便评分、临床评估(如不良事件和并发药物)。每只驹的研究时间总共为5至6天。

第一剂量的时间记录在受试者的研究CRF中，作为时间0(t＝0)(治疗期开始至t＝0时间点后72小时)，随后观察期>t＝0后72小时，结束于t＝0时间点后144小时。研究兽医和/或指定的现场工作人员在CRF上记录施用和评估时间。在基线和治疗期结束时收集粪便和血液样本以及在观察期间进行超声波评估。在基线时进行腹部超声，直到在治疗期和观察期完成后最多12小时。驹和母马的居住环境按照每个研究场所的护理标准，并在治疗和观察期间保持。饲料以提供营养和能量需求的数量和方式提供，以确保研究对象的健康和舒适度。驹饲养时间表按照其通常的频率进行维护。母马饲料每天给予一次或两次，或者无限制地给予。水也无限制地提供。

试验设计

试验是在出生和16周龄之间的断奶前的驹中进行的多地点随机、盲对照的探索、安全和功效研究。招募了约80只断奶前的驹，以确保至少60只可评估的驹。该研究由3个治疗组组成。每个治疗组纳入了二十只驹。纳入的驹接受1)有效的研究用兽医产品(IVP)，如SB-300，每日4次，2)每日两次的有效IVP和安慰剂，或3)每日4次安慰剂。注射器含有IVP或安慰剂。研究场所的兽医确定了当前患者群的用于试验的潜在候选者，潜在的研究对象进行了资格评估的基准评估。根据包含/排除标准的资格确定，将驹随机分配，从指定的治疗组中的最低数开始，随后对该场所可用的下一个治疗选项进行连续编号。按照协议要求指导现场兽医和工作人员，包括研究产品(IVP)的施用和所需的研究程序和评估。腹部超声是由赞助兽医指定的兽医进行的

将大约80只断奶前驹随机分配到3个不同的治疗组，以确保完成60只可评估的病例用于统计学分析。从出生到16周龄的患有水样腹泻(粪便分数为3或4)的断奶驹前包括分布在每个治疗组和安慰剂组中的相同数量的这些驹的研究群体。研究动物的动物特征和入选标准见下表4。

表4

物种:	断奶前驹
		品种:	全部
来源:	委托人所有
		数量:	～80
性别:	雄性或雌性
		体重范围:	35-200kg
年龄范围:	出生-16周龄
		生理状态:	具有3或4的筛选粪便分数的断奶前驹

在这项随机、加盲和安慰剂对照研究中，有两种测试材料：一种包含研究性兽用产品SB-300(IVP)和益生菌(Digestiv^TM)；第二种是安慰剂。将两种测试材料配制成糊剂并包装在相同的30ml计量注射器中。两种测试材料都包含相同的配制剂(formulant)。所有制剂组分都被认为安全用于动物。IVP和安慰剂注射器之间的区别对于施用该剂量的人是不知道的。研究中有三个臂。每个臂对每只驹使用相同数量的注射器。每个注射器都有一个独特的字母数字代码，它与研究中的三个臂之一相关联。注射器作为测试套件制备；在研究中每只驹施用一个测试套件。测试套件在QC监督下在制造工厂进行组装，并运送到研究场所，并将其与三个臂之一相连。

非安慰剂注射器含有400mg的克罗来姆。研究中体重最小的驹(例如35公斤)接受了10mg/kg的剂量。研究中最重的驹(例如200公斤)的剂量为2mg/kg。该剂量范围(2-10mg/kg)基于在5x 2-4mg/kg典型剂量下在驹中进行的安全性研究是合理的。在每个给药时间点，所有参加研究的所有驹不管体重如何，施用30mL注射器的全部内容物。

筛选和治疗期

在筛选期间，进行用于分析的医学史、完整身体检查和初始粪便收集以及血液样本收集以建立每个驹的基线参数。收集并储存额外的粪便样品和直肠擦拭物。在施用第一剂量之前进行腹部的初始超声检查以评估肠壁厚度和肠内容物的稠度。在治疗施用前基线期间的任何发现被记录为医学史，并记录在医学史表格上。由于每只驹被认为有资格参与研究，将其盲随机分入安慰剂QID，治疗BID和安慰剂BID或治疗QID组。一个研究场所对研究筛选的任何驹均完成了筛选日志，无论驹随后随机化进入治疗期还是筛选失败。每个场所都提供筛选日志。

在确定资格后，治疗期在第一次剂量(t＝0)开始，并且在初始剂量后持续至72小时(+/-2)。每只驹随机分配到3个治疗组中的1个。下表5中列出了简要的给药和活动时间表。

表5

用于分析的粪便收集仅在基线时进行，除了沙门氏菌分析，其在基线，t＝0后的24和48小时(+/-6)进行。从所有组中收集粪便(10克)并进行分析。轮状病毒抗原试验和梭菌毒素试验与粪便培养分析一起进行，包括筛选致病性大肠杆菌，沙门氏菌，志贺氏菌和其它有氧病原体。在基线和在以下描述的治疗和观察期间每日两次收集用于粪便干重的采样并储存。本研究没有进行粪便干重分析。

在0-6小时，>6-12小时，>12-18小时，>18-24小时，>24-30小时，>30-36小时，>36-42小时，>42-48h，>48-54h，>54-60h，>60-66h，>66-72h的每6小时(h)期间进行粪便评分。在每次评估中，粪便数量登记、评分和记录在CRF上。每次评估后，清除畜栏的任何粪便。除了每天收集直肠擦拭样品外，还尝试每天两次收集用于粪便干重的额外粪便样品。这些样品中的每一个被处理并存储。用于检测沙门氏菌的粪便培养物在筛选中进行，并在t＝0后24和48(+/-6)小时重复进行。在最后一次治疗的12小时内进行出血超声检查。在治疗期间，任何新增的伴随药物和观察到的AE都适当地记录在各自的病例报告表(CRF)上。

观察期从治疗期完成开始(t＝0后>72)，并持续至t＝0(+/-2小时)后的144小时。在此期间，粪便评分在72-84h，>84-96h，>96-108h，>108-120h，>120-132h，>132-144h每天进行两次。每个分数都记录在每个驹的适当CRF上。在计划的评估时间内没有出现粪便也记录在CRF上。观察期间粪便干重每天评估两次，粪便擦拭(Fecal Swap)每日进行一次。在观察期结束时(例如，“第144小时”)，进行完整的物理和超声检查以及采集血样。完成这些任务后，将驹从研究中排除。对基线实验室价值或临床评估的任何变化通过现场研究兽医进行临床意义评估，并且如果合适，则在不良事件CRF上注明。

由于该研究旨在确定SB-300在具有腹泻的断奶前驹中的安全性和有效性，结果评估如下：1)从基线到观察期粪便稠度的变化；2)比较基线和治疗后的临床评估、血浆化学和血液学；3)比较对照组和治疗组之间的临床评估、血浆化学和血液学；和4)基线和治疗后超声检查结果的比较。

活动时间表

下表6总结了研究活动的时间表。

表6

1.治疗期可能在完成筛选程序后立即开始，而实验室结果尚待审查。

2.医学史仅在筛选中进行。身体检查是在筛选和治疗和观察期结束时进行的。筛选期间的所有实验室和身体检查结果均被视为医学史。

3.体重在筛选中进行，以确定组分配。

4.粪便分析在筛选中进行。沙门氏菌的培养在筛选和t＝0后24和48小时进行。

5.腹部超声是在基线和治疗期间给予的最后剂量后的12小时内和观察期结束时进行的。

6.施用的第一剂量记为t＝0。在t＝0时间点后，最后一次施用剂量为t＝0时间点后72小时(+/-2小时)。每个完成的驹分别接受其组分配的12个剂量。

7.观察期开始于t＝0后>72小时，结束于144小时。

8.在筛选时进行粪便评分，以确定资格，并在治疗期间加上最后一次治疗后24小时持续至少4次/天，此后至少每天两次，直到观察期结束。畜栏在每次评估后都被清理。

9.在基线进行粪便干重抽样，在治疗和观察期间每天进行两次。在基线进行擦拭抽样，在治疗和观察期间每天进行一次。

10.在初始治疗剂量后和在治疗和观察期间注明的任何变化被视为研究兽医自行决定的不良事件。

粪便评分和腹部超声

使用以下评分指南确定基线粪便评分。对于资格性，驹必须有3或4的分数。粪便评分在治疗期间的每个6小时内进行，开始于0-6h，>6-12h，>12-18h，>18-24h，>24-30h，>30-36h，>36-42h，>42-48h，>48-54h，>54-60h，>60-66h，>66-72h，>60-66h，>66-72h，结合给药时间(评估之间最少4小时)，此后在>72-84h,>84-96h,>96-108h,>108-120h,>120-132h,>132-144h每天进行至少两次，直到观察期结束。与粪便分数相关的粪便特征见表7。

表7

由赞助兽医在基线时进行腹部超声，直到在治疗期结束时的12小时，在观察期结束时再次进行。表8示出了用于确定超声分数的腹部特征。

表8

利用腹部超声的探索结果评估

使用腹部超声进行额外的探索结果评估，并在治疗前和治疗后进行评估。在治疗前和治疗后对每个驹和在治疗组之间进行研究结果的评估。

腹部器官的疾病代表在马新生医学中遇到的很大比例的疾病。超声波是非侵入性的，并且驹表现出良好的耐受性，并且由于动物体积小以及许多腹部器官相互靠近，所以它是内脏超声评估的理想选择。

小肠疾病如肠炎，十二指肠炎和大肠疾病如结肠炎是幼驹腹泻的常见原因。与成年动物相比，腹部疾病的超声检查结果在驹中较少描述，但常见的发现包括扩张性、充满流体的肠道，伴随运动模式的变化。肠液的超声波外观可能与代表很少的颗粒物质的无回声和具有大量浓度的颗粒物质的高回声不同。运动障碍可能在肠梗阻(缺乏运动性)到运动过度上变化。

虽然临床上使用超声波来评估疾病进程的进展或改善，但是连续的变化尚未得到充分的证实。可以使用超声评估来评估肠内容物的稠度和肠壁增厚/水肿的变化，作为在没有粪便产生的情况下的改善指标。在本研究中使用腹部超声的理由是用于同时评估临床和临床病理参数，并将其与超声发现的变化相关联，以期将这些发现作为本研究的探索性终点和未来研究的终点。

在本研究中，禁用的药物包括额外的益生菌，口服电解质(允许的IV液体)，口服抗腹泻治疗(在第一次施用的7天内和在研究内)。在研究期间，根据调查员的判断，可以使用救援药物进行治疗。记录治疗期间施用的救援药物和使用指征。如果疑似不良事件需要救援药物，将事件记录在不良事件(AE)表格上。对每一项通过治疗组的总结不良事件。此外，不良事件通过严重程度和与研究药物的关系进行总结。对于治疗组之间的可能差异，通过ANOVA分析连续的安全性参数。在治疗组中，AE通过配对t检验或Wilcoxon标记秩检验进行评估。

安全监控

根据方案要求每天进行一般健康观察。然而，在研究过程中的任何时间点的任何观察结果进行评估并在必要时进行医学治疗。如果马死亡，进行尸体解剖。如果马濒临死亡，确保进行人道主义安乐死的所有努力。研究兽医或合格的指定人员就不良事件(AE)证据检查驹。AE是在被治疗的动物中的不利和非预期的，并且在使用研究性兽医产品(IVP)(无论是否被认为是产品)期间或之后发生的观察结果。AE可能包括现有疾病的恶化，新出现的疾病，意外事故，临床实验评估中的新发现，或身体检查期间的生理发现。研究兽医在研究过程中自行决定的任何AE(从基线的变化)均报告于不良事件病例报告表上。研究过程中发生的所有不良事件得到适当治疗，以保护和保证驹的健康。对于被认为是AE的事件，它必须发生在驹首次接触IVP期间或之后。研究兽医或合格的指定人员负责确定AE是否足够严格，以便要求驹脱离治疗。如果发生这种情况，驹获得适当的医疗护理，研究兽医确保最终方案的访问和评估。立即报告导致从研究治疗永久性退出的所有AE(严重或不严重)。

身体评分指南

下表9给出了用于研究的身体评分指南。

表9

*Henneke身体条件评分***根据1-9量表描述了每匹马的病况：

结果参数

评估以下结果参数：粪便稠度(随着时间的推移从基线变化；临床响应者是形成成形粪便或没有粪便粪便分数≤3)，并在72小时治疗期(T₀hr–T₇₂hr)内24小时内至少连续16小时维持成形的粪便或无粪便(即无粪便分数4、5或6)的任何动物；腹泻的解决被定义为在任何基线后评估的粪便分数≤3(成形的粪便)；至最后未成形粪便的时间(TLUS)；超声(从基线到治疗期结束和观察期结束的变化)。

结果参数分析

通过治疗组和时间点就连续变量提供描述性统计学(受试者数量，平均值，标准偏差，最小值，中位数和最大值)。对于分类参数，每个治疗组列出了每个类别的数量和百分比。通过重复测量方差分析(ANOVA)评估基线变化。模型包括用于治疗组、时间点、通过时间点与部位相互作用的治疗组和通过部位相互作用作为随机效应的治疗组的固定项。基线值作为协变量包含在模型中。每个24小时治疗块的平均值通过治疗组绘制。

对于响应者分析，在治疗期间计算每只动物的成形的粪便分数(1或2)的数量与未形成的粪便分数(3,4或5)之间的差异。为了评估治疗组之间的可能差异，采用利用治疗组作为固定效应和利用部位和通过部位相互作用的治疗作为随机效应的ANOVA建模。使用Kaplan-Meier分析报道了至最后未成形粪便的时间。至最后一次未成形粪便的时间是从第一次剂量的时间到最后一次未成形粪便分数(3、4或5)计算出来的。未达到1或2的成形粪便分数的受试者在最后评估时被审查。对数秩检验用于比较治疗组。如果可用，提供了第25个四分位数，平均时间，中位数和第75个四分位数。除非另有说明，所有分析均以α＝0.0 5的显著水平双侧进行。没有就多重比较进行调整。比较包括每个IVP组与安慰剂和IVP:BID与IVP:QID。

研究结果

在研究结束时分析治疗组的驹的粪便分数和腹泻解决，即BID和QID治疗组。如上所述，通过以治疗部位、时间点和通过时间点相互作用的治疗作为固定效应的重复测量ANCOVA得出成对比较。治疗组分析结果见下表。表10给出了在研究的0-72小时和0-96小时的时间段内用研究活性SB-300的BID治疗的驹相对用安慰剂治疗的驹的粪便评分响应者分析结果。如上所述，0-72小时研究时间段为治疗期；0-96小时研究时间段为治疗期加24小时观察期。在分析时分数(粪便分数)为1或2的动物被认为是应答者。

表10

粪便分数：响应者分析(活动BID)

响应者(1或2分)

*通过以治疗部位、时间点和通过时间点相互作用的治疗作为固定效应的重复测量ANCOVA得出成对比较。

通过假设二项分布和对数链接的广义线性混合模型导出的P值

表11给出了在研究的0-72小时和0-96小时时间段内用研究活性SB-300的BID治疗的驹相对用安慰剂治疗的驹的腹泻解决结果。如表10所示，0-72小时研究时间段为治疗期；0-96小时研究时间段为治疗期加24小时观察期。分析时分数为1或2的动物被认为是解决腹泻的响应者。

表11

腹泻的解决:活动BID相对安慰剂

相对安慰剂

由Fisher's Exact(2-尾)测试得出的P值

表12显示了在0-120小时研究时间段内使用研究活性SB-300的QID治疗的驹相对用安慰剂治疗的驹的粪便分数和响应者分析结果。0-120小时的研究时间是治疗期加48小时的观察期。在分析时分数为1或2的动物被认为是响应者。

表12

粪便分数:粪便分数(QID)

响应者(1或2分)

*通过以治疗部位、时间点和通过时间点相互作用的治疗作为固定效应的重复测量ANCOVA得出成对比较。

通过假设二项分布和对数链接的广义线性混合模型导出的P值

表13显示了在0-120小时研究时间段内用研究活性SB-300的QID治疗的驹相对用安慰剂治疗的驹的腹泻解决结果。如表12所示，0-120小时研究时间段为治疗期加48小时观察期。在分析时分数为1或2的动物被认为是解决腹泻的响应者。

表13

腹泻的解决:活动QID相对安慰剂QID

相对安慰剂*

*只有最病态的动物进入粪便分数为4

由Fisher's Exact(2-尾)测试得出的P值

这项研究的结果表明，对于活性BID和活性QID治疗组，与安慰剂治疗的动物相比，用SB-300活性物质治疗的较高比例的驹对治疗有反应，并解决了其腹泻(粪便分数为1或2)。更具体地说，对于粪便评分应答者分析，在0-72小时研究时间段内用活性BID治疗的驹的68.4％有响应(得分为1或2)，而安慰剂治疗的动物为35.3％，在0-96小时研究时间段内用活性BID治疗的驹的78.9％有响应(得分为1或2)，而安慰剂治疗的动物为47.1％。类似地，在0-120小时研究时间段内用活性QID治疗的驹的93.8％有响应(得分为1或2)，而安慰剂治疗的驹为46.2％。

在0-72小时的研究期间，用活性BID治疗的驹的73.7％具有腹泻解决(应答者得分为1或2)，而用安慰剂治疗的驹为41.2％。在0-96小时的研究期间，用活性BID治疗的驹的84.2％具有腹泻解决，而用安慰剂治疗的驹的比例为52.9％。对于在0-120小时研究期间用活性QID治疗的驹的93.8％具有腹泻解决，而用安慰剂治疗的驹为61.5％。研究结果表明，用活性研究剂SB-300治疗的驹在解决腹泻方面具有高水平疗效。

实施例6

秘鲁巴豆原花色素聚合物提取物组合物Neonorm^TM对优化断奶前的幼仔中的肠道微生物谱的益处

本实施例描述了进行的一项研究，以表征经历肠致毒大肠杆菌诱导的腹泻的新生幼仔的粪便微生物群(微生物组)，并鉴定用来源于秘鲁巴豆的标准化的肠溶植物提取物(即产品Neonorm^TMCalf)进行治疗与改变幼仔的肠道微生物群谱之间的可能关系。微生物组是一种微生物群落，也称为微生物群，其通常在肠道中生活，对维持肠道健康至关重要。Neonorm^TMCalf专门解决了新生幼仔小肠肠腔粪便形成和离子和水流动的正常化。

微生物组研究的目的在于表征经历肠毒素性大肠杆菌诱导的腹泻的新生幼仔的粪便微生物群，并且鉴定用来源于秘鲁巴豆的标准化的肠溶植物提取物(Neonorm^TMCalf的关键组分)进行治疗与改变幼仔的肠道微生物群谱之间的可能关系。如上所述，Neonorm^TMCalf被配制并已经进行临床测试以解决新生幼仔小肠肠腔中粪便形成和离子和水流动的正常化。

微生物组研究旨在分析康奈尔大学兽医学院进行的2013年挑战研究(标题为“Effect of Crofelemer Extract on Severity”)期间收集的随机选择的粪便样本的一个子集。2013年研究结果建议Neonorm^TMCalf显著增加具有实验诱导的肠毒性大肠杆菌腹泻的新生幼仔的粪便干物质，并指出Neonorm^TMCalf在支持幼仔体重增长方面的益处。上述实施例3和4中也描述了类似的发现。这些研究支持Neonorm^TM在断奶前乳幼仔中减少与腹泻相关的水分流失和支持体重增长的好处。

如上文所述，来自秘鲁巴豆的原花色素提取物产品Neonorm^TM，例如Neonorm^TMCalf，是一种肠溶片剂，其设计为经口施用至断奶前乳幼仔，每天两次，持续三天。产品在肠道中局部作用；最小限度地全身吸收；并且不改变胃肠蠕动。迄今为止，该产品对正常功能的肠道离子通道和电解质或液体运输没有显示出显著影响，也没有显示与安慰剂不同的任何副作用。结果，粪便形成在短时间内正常化，减轻了体重减轻，并且减少了支持性护理成本和补液疗法如口服补液(ORS)。

对于微生物组研究，从2013年研究的Holstein新生牛犊中随机选择总共28只幼仔，如下：15例安慰剂(CTR)和13例肠溶SB-300(ECROF)。粪便样品每天两次收集如下：攻击前(第1天)，治疗期间(第2至7天)和治疗停止后(第8至24天)。该研究利用下一代测序来表征实验用肠毒素型大肠杆菌攻击的腹泻乳牛幼仔的粪便微生物群，以确定SB-300治疗是否改变或以其它方式影响经治疗的动物的肠道微生物群谱。下一代测序或高通量测序是本领域已知和实践的，例如如A.Grada和K.Weinbrecht，2013，Journal of InvestigativeDermatology，133：1-4。

更具体地说，微生物组的分析表明，不管治疗组如何，最普遍的门是厚壁菌门，变形菌门，拟杆菌属，梭菌属和放线菌属。收集的基线样本在细菌DNA中惊人地丰富。对于本研究报告的每一头幼仔，首先采集样本，幼仔被剥夺喂食。发现变形菌在肠溶Co-SB-300组(ECROF)中的幼仔中更为普遍。然而，在整个研究期间，治疗组之间没有检测到该门的显著差异。在生命第三天(第7样本)和第二天(第4样本)，分别发现放线菌和无壁菌在肠溶SB-300治疗的幼仔中更丰富。

在整个研究期间收集的粪便样品中30种最普遍的细菌属也被确定。基线样本在对照组和肠溶SB-300组中的幼仔相对丰度略有不同。因此，从基线丰度的相对丰度变化的测量被用于启发治疗可能影响肠微生物谱变化的机制。

对照组中的幼仔呈现分别具有链球菌，乳杆菌属，拟杆菌属，Akkermansia，Blautia和肠球菌属的高普遍性的基线样品。然而，入选肠溶性SB-300组的幼仔微生物组略有差异；微生物分别由链球菌，拟杆菌属，沙雷氏菌属，埃希氏杆菌属，肠球菌属和乳杆菌属主导。

有趣的是，在研究过程之后，一些细菌属的相对丰度具有不同的进化。与对照幼仔相比，用肠溶SB-300治疗的幼仔呈现相对增加的粪杆菌(Fecalibacterium，一种对宿主有利的细菌属)。此外，用肠溶SB-300治疗的幼仔在治疗停止后具有较高的粪细菌属的相对丰度。与对照幼仔相比，双歧杆菌也是包含大量益生菌的属，与对照幼仔相比，肠溶SB-300治疗的幼仔的基线水平的相对丰度增加更高。

在这项研究中，所有新生的Holstein牛犊用肠毒素型大肠杆菌的接种物进行攻击。因此，对照动物用大肠杆菌攻击，但没有接受肠溶SB-300。因此，大肠杆菌的攻击可能改变了喂奶幼仔的微生物群进化的自然过程。也可能的是，攻击不同地改变了初始细菌群落，并且一些细菌属之间的后期相互作用在其作为肠道微生物群的一部分的呈现中被改变。

微生物组研究的结果表明，与未用Neonorm^TM治疗的对照幼仔相比，在Neonorm^TM治疗的幼仔中，作为被认为对宿主有益的细菌属的粪杆菌的相对丰度增加。此外，Neonorm^TM治疗的幼仔在停止治疗后具有较高的粪杆菌相对丰度。结果进一步支持Neonorm^TM的有益益生元机制和/或性质可以补充产品的抗分泌和增重益处并且与产品的抗分泌和增重益处有潜在的地协同作用。

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应当理解，本文描述的实施方案和实施例是出于说明的目的，并且对相关领域的技术人员将提出其各种修改或改变，并且将被包括在本申请的精神和范围内和所附权利要求的范围内。应当理解，本文描述了适用于实施方案的方法和材料；然而，类似于或等同于本文所述的方法和材料可以用于本发明和所描述的实施方案的实践或测试。

Claims (82)

1.一种治疗患有与肠致病性感染相关的腹泻的新生或幼年非人动物的方法，所述方法包括向有需要的新生或幼年非人动物口服施用药物组合物，所述药物组合物包含来自秘鲁巴豆(秘鲁巴豆)的水溶性原花色素聚合物，其中所述组合物被配制为大丸剂或重构粉末，并且以每天至少40mg至300mg的量连续两天或更多天施用至新生或幼年非人动物。

2.权利要求1的方法，其中所述新生或幼年非人动物选自牛幼仔，骆驼幼仔，水牛幼仔，野牛幼仔，羔羊，小山羊，驹或小猪。

3.权利要求2的方法，其中所述新生或幼年非人动物是牛幼仔。

4.权利要求2的方法，其中所述新生或幼年非人动物是骆驼幼仔。

5.权利要求1至4中任一项的方法，其中所述非人动物未断奶的。

6.权利要求1至5中任一项的方法，其中所述原花色素聚合物组合物连续三天每天施用两次。

7.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述肠致病性感染是大肠杆菌、轮状病毒或冠状病毒中的一种或多种的感染。

8.权利要求7的方法，其中所述肠致病性感染还是沙门氏菌属某些种和/或隐孢子虫属的感染。

9.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述原花色素聚合物组合物作为使用口服电解质、奶或奶替代物、生理盐水或水重构的粉末施用。

10.权利要求1至9中任一项的方法，其中所述原花色素聚合物组合物作为大丸剂施用。

11.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述原花色素聚合物组合物在动物饲料中施用。

12.权利要求1至11中任一项的方法，其中所述非人动物小于两周龄。

13.权利要求1至11中任一项的方法，其中所述非人动物为2至4周龄。

14.权利要求1至13中任一项的方法，其中所述组合物以至少30mg至350mg的量施用至新生或幼年非人动物。

15.权利要求1至14中任一项的方法，其中所述组合物以250mg的量施用至新生或幼年非人动物。

16.权利要求1至13中任一项的方法，其中所述新生或幼年非人动物是羔羊或小山羊，并且所述组合物以40mg或50mg的量施用。

17.权利要求1至16中任一项的方法，其中所述新生或幼年非人动物的重量为约30至50kg。

18.权利要求3的方法，其中所述牛幼仔的重量为约30至40kg。

19.权利要求4的方法，其中所述骆驼幼仔的重量为约40至50kg。

20.权利要求1至19中任一项的方法，其中所述原花色素聚合物作为肠溶药物组合物施用。

21.权利要求1至19中任一项的方法，其中所述原花色素聚合物作为非肠溶药物组合物施用。

22.权利要求1至21中任一项的方法，其中所述原花色素聚合物选自SB-300、SP 303和克罗来姆(crofelemer)。

23.一种改善新生非人动物的体重增长或降低新生非人动物的死亡率的方法，所述方法包括向所述新生非人动物施用药物组合物，所述药物组合物包含来自秘鲁巴豆的水溶性原花色素聚合物，其中所述组合物配制为大丸剂或重构粉末，并且以有效改善体重增长或降低死亡率的量在所述新生非人动物出生后的第一天至第四天施用至新生或幼年非人动物至少一天。

24.权利要求23的方法，其中所述新生非人动物选自牛幼仔，骆驼幼仔，水牛幼仔，野牛幼仔，羔羊，小山羊，驹或小猪。

25.权利要求24的方法，其中所述新生非人动物是牛幼仔。

26.权利要求24的方法，其中所述新生非人动物是骆驼幼仔。

27.权利要求23至26中任一项的方法，其中所述原花色素聚合物组合物施用至少连续三天。

28.权利要求23至27中任一项的方法，其中所述原花色素聚合物组合物作为使用口服电解质、奶或奶替代物、生理盐水或水重构的粉末施用。

29.权利要求23至28中任一项的方法，其中所述组合物以30mg至350mg的量施用至新生非人动物。

30.权利要求23至28中任一项的方法，其中所述组合物以250mg的量施用至新生动物。

31.权利要求23至30中任一项的方法，其中所述原花色素聚合物作为肠溶药物组合物施用。

32.权利要求23至30中任一项的方法，其中所述原花色素聚合物作为非肠溶药物组合物施用。

33.权利要求23至32中任一项的方法，其中所述原花色素聚合物选自SB-300、SP 303和克罗来姆。

34.一种针对与肠致病性感染相关的腹泻治疗新生或未断奶的马科动物的方法，所述方法包括向所述动物口服施用药物组合物，所述药物组合物包含来自秘鲁巴豆的水溶性原花色素聚合物，其中所述组合物以选自大丸剂、重构粉末或凝胶的形式提供，并且以至少100mg的量连续两天或更多天施用至所述动物。

35.权利要求34的方法，其中所述动物感染了细菌、病毒和原生动物，所述感染引起腹泻。

36.权利要求34或35的方法，其中所述原花色素聚合物组合物以至少250mg的量施用至所述动物。

37.权利要求34至36中任一项的方法，其中所述原花色素聚合物组合物是包含在递送装置中的凝胶形式。

38.权利要求37的方法，其中所述递送装置是注射器。

39.权利要求37或38的方法，其中所述凝胶包含含有所述组合物的聚合物微粒或纳米颗粒。

40.权利要求39的方法，其中所述聚合物微粒或纳米颗粒是pH敏感的。

41.权利要求34至40中任一项的方法，其中所述动物小于两周龄。

42.权利要求34至41中任一项的方法，其中所述动物的重量为约30至50kg。

43.权利要求34至42中任一项的方法，其中所述原花色素聚合物作为肠溶药物组合物施用。

44.权利要求34至42中任一项的方法，其中所述原花色素聚合物作为非肠溶药物组合物施用。

45.权利要求34至44中任一项的方法，其中所述原花色素聚合物选自SB-300、SP 303和克罗来姆。

46.一种治疗或预防新生或幼年马驹的腹泻的方法，所述方法包括向有需要的驹口服施用药物组合物，所述药物组合物包含来自秘鲁巴豆的水溶性原花色素聚合物，其中所述组合物被配制成糊剂，并且以每天2mg/kg的量连续两天或更多天每天两次，或连续两天或更多天每天三次，或连续两天或更多天每天四次口服施用至驹。

47.权利要求46的方法，其中所述组合物被配制成糊剂，并且以每天2mg/kg的量连续三天每天两次，或每天三次，或每天四次口服施用至驹。

48.权利要求46或47的方法，其中所述糊剂连续三天以十二小时间隔每天两次，或连续三天每天四次施用。

49.权利要求46至48中任一项的方法，其中所述原花色素聚合物选自SB-300、SP 303和克罗来姆。

50.权利要求46至49中任一项的方法，其中所述糊剂包含含有肠溶SB-300的珠粒。

51.权利要求46至50中任一项的方法，其中所述糊剂包含在递送装置中。

52.权利要求51的方法，其中所述递送装置是注射器。

53.权利要求46至52中任一项的方法，其中所述口服施用包括将所述糊剂施用到所述驹的口的顶部。

54.一种诱导患有腹泻及其伴随的症状的新生非人动物中的有利于正常粪便形成的肠道微生物群、粪便稠度和腹泻的减少或预防的方法，所述方法包括给新生非人动物至少两天每天至少一次餐前口服施用药物组合物，所述药物组合物包含来自秘鲁巴豆的肠溶水溶性原花色素聚合物或秘鲁巴豆来源的植物提取物。

55.一种治疗患有腹泻和脱水或处于发生腹泻和脱水的风险中的牛幼仔，并且在停止治疗后保持幼仔的正常粪便稠度和防止幼仔的脱水的方法，所述方法包括给未断奶的幼仔在2至3天内每天两次餐前口服施用药物组合物，所述药物组合物包含来自秘鲁巴豆的肠溶水溶性原花色素聚合物或秘鲁巴豆来源的植物提取物。

56.权利要求54的方法，其中新生非人动物是牛幼仔。

57.权利要求56的方法，其中新生非人动物是未断奶的。

58.权利要求54、56或57中任一项的方法，其中新生非人动物每天两次，或每天三次，或每天四次口服施用药物组合物，所述药物组合物来自秘鲁巴豆的肠溶水溶性原花色素聚合物或秘鲁巴豆来源的植物提取物。

59.权利要求54至58中任一项的方法，其中新生非人动物或幼仔被施用肠溶的秘鲁巴豆来源的植物提取物。

60.权利要求54至59中任一项的方法，其中新生非人动物或幼仔在三天内每天两次，或三天内每天三次，或三天内每天四次施用肠溶的秘鲁巴豆来源的植物提取物。

61.权利要求54至60中任一项的方法，其中新生非人动物或幼仔的干粪便稠度、缺乏脱水和/或健康的胃肠道微生物群在使用包含来自秘鲁巴豆的肠溶水溶性原花色素聚合物或秘鲁巴豆来源的植物提取物的药物组合物的治疗停止后维持和持续至少两至三周。

62.权利要求54至61中任一项的方法，其中将来自秘鲁巴豆的肠溶水溶性原花色素聚合物或秘鲁巴豆来源的植物提取物作为推剂施用至新生非人动物或幼仔。

63.权利要求54至62中任一项的方法，其中将来自秘鲁巴豆的肠溶水溶性原花色素聚合物或秘鲁巴豆来源的植物提取物在出现腹泻的第一个迹象或指征时施用至新生非人动物或幼仔。

64.一种促进或维持非人动物中的有益肠道微生物群的方法，所述方法包括以有效促进或维持有益肠道微生物群的量向所述非人动物施用益生元组合物，所述益生元组合物包含含有多酚的来源于巴豆属或胡桐属物种的植物提取物。

65.权利要求64的方法，其中所述益生元组合物包含含有多酚的来源于秘鲁巴豆的植物提取物。

66.权利要求65的方法，其中所述益生元组合物包含SB-300或SP-303。

67.权利要求64至66中任一项的方法，其中所述非人动物选自牛，骆驼，水牛，野牛，绵羊，山羊，马或猪。

68.权利要求64至66中任一项的方法，其中所述非人动物选自家禽，狗，猫，啮齿动物或外来哺乳动物。

69.权利要求64至68中任一项的方法，其中所述非人动物是新生的。

70.权利要求64至68中任一项的方法，其中所述非人动物是幼年的。

71.权利要求64至68中任一项的方法，其中所述非人动物是成年的。

72.权利要求64至71中任一项的方法，其导致改善的肠道健康，增加的体重增长，降低的发病率，降低的死亡率或改善的粪便形成。

73.权利要求64至72中任一项的方法，其中所述益生元组合物被施用至少连续三天。

74.权利要求64至73中任一项的方法，其中所述益生元组合物被长期施用以维持肠道健康。

75.权利要求64至74中任一项的方法，其中所述益生元组合物被配制为动物饲料。

76.权利要求64至74中任一项的方法，其中所述组合物配制在药物饲料块中。

77.权利要求64至76中任一项的方法，其中所述植物提取物作为肠溶益生元组合物施用。

78.权利要求64至76中任一项的方法，其中所述植物提取物作为非肠溶益生元组合物施用。

79.权利要求77或78的方法，其中所述施用导致肠生物群落中双歧杆菌属和/或粪杆菌属的水平增加。

80.权利要求64至79中任一项的方法，还包括向所述非人动物施用益生菌。

81.权利要求64至80中任一项的方法，其中所述益生元组合物的施用与非人动物的微生物组中益生菌属的增加相关。

82.权利要求81的方法，其中所述益生菌属包括双歧杆菌属和粪杆菌属。