CN107375961A - 一种去除生物医药制剂中内毒素的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种去除生物医药制剂中内毒素的方法，其采用光度测定法检测内毒素，并且通过预处理可初步去除外接微生物、病毒，内毒素检测可以初步判定内毒素的含量，通过调节PH值，可以去除内毒素，非常方便，去除内毒素过程中加热，提高了内毒素的去除速率。

Description

一种去除生物医药制剂中内毒素的方法

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种去除生物医药制剂中内毒素的方法。

背景技术

目前，疫苗、注射液、大输液、放射性药品、化学药品、抗生素药品、生物制品(血液制品、疫苗)、中草药注射剂、透析液等生物医药制剂中都含有内毒素，而如何有效地去除医药制剂中的内毒素以及研究适用于大批量医药制剂生产过程的内毒素去除材料和方法是今后生物医药领域研究的热点。

内毒素是产生于革兰氏阴性细菌细胞外壁层的脂多糖类物质，亦即细菌尸体的碎片。内毒素一般以聚体形式存在，其磷酸基团与二价金属离子螯合可进一步稳定内毒素分子间的聚合，促成更大的内毒素复合体，这类复合体的分子量可由几千至数千万不等。内毒素具有体积小、热稳定性强、化学稳定性强等特性，使其在被去除方面有一定难度。

人体对内毒素极为敏感。如有微量内毒素混入药剂中注入人体血液***，会导致严重发热，甚至引起死亡。如极微量(1～5ng/kg体重)内毒素就能引起体温上升，发热反应持续约4小时后逐渐消退。自然感染时，因革兰氏阴性菌不断生长繁殖，同时伴有陆续死亡、释出内毒素，故发热反应将持续至体内病原菌完全消灭为止。当受感病人(或动物)的血液或病灶中的细菌向血液中释放了很多内毒素，或者相当大量的被内毒素污染的液体输入了病人(或动物)体内时，易患上内毒素血症。因此，尽可能降低制剂中内毒素的含量是十分必要的，特别当注射液(如大输液)用量较大时，对内毒素的含量要求应更为严格，国家药典中规定注射品中内毒素应小于1EU/mL。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，而提供了一种去除生物医药制剂中内毒素的方法。

本发明是通过以下技术方案实现：

一种去除生物医药制剂中内毒素的方法，包括如下步骤：

1)、将生物医药制剂原料液放置在医疗金属杯内，质量为3-10克，医疗金属杯提前进行杀菌消毒，然后将装有生物医药制剂原料液的医疗金属杯放入高压蒸汽灭菌箱内处理，温度130-160摄氏度，时间为25-40分钟；

2)、采用光度测定法检测内毒素，向高压蒸汽后的医疗金属杯内加入细菌内毒素检查用水，然后向医疗金属杯内加入鲎试剂0.5-0.8毫升，充分搅拌后产生凝胶；

3)、将步骤2)处理后的生物医药制剂原料液清洗、过滤干净，使原料液中没有混合凝胶；

4)、向医疗金属杯内加入再生缓冲液1-3毫升平衡缓冲液，滴加速度为每分钟4滴，再按此操作重复两次；

5)、另配0.5-0.9M的NaCl溶液、0.3M的氢氧化钠溶液和0.3M盐酸溶液以备使用，向医疗金属杯内加入0.5-0.9M的NaCl溶液15-20毫升，再向医疗金属杯内加入0.3M的氢氧化钠溶液，逐滴加入，调节溶液PH值至8-9,0.3M盐酸溶液用于微调PH值；

6)、取出步骤5)中处理后的生物医药制剂原料液3-5克，使用缓冲液平衡该生物医药制剂原料液的PH值，然后向原料液中加入细菌内毒素检查用水，然后向医疗金属杯内加入鲎试剂0.5-0.8毫升，观察是否产生凝胶，若产生凝胶则将剩余原料液重复步骤5)。

7)、将检测合格的生物医药制剂原料液存储在消毒杀菌后的玻璃瓶内，保存温度5-10摄氏度且放置在无阳光直射的位置。

与现有的技术相比，本发明的有益效果是：本发明预处理可初步去除外接微生物、病毒，内毒素检测可以初步判定内毒素的含量，通过调节PH值，可以去除内毒素，非常方便，去除内毒素过程中加热，提高了内毒素的去除速率。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

一种去除生物医药制剂中内毒素的方法，包括如下步骤：

1)、将生物医药制剂原料液放置在医疗金属杯内，质量为3-10克，医疗金属杯提前进行杀菌消毒，然后将装有生物医药制剂原料液的医疗金属杯放入高压蒸汽灭菌箱内处理，温度130-160摄氏度，时间为25-40分钟；

2)、采用光度测定法检测内毒素，向高压蒸汽后的医疗金属杯内加入细菌内毒素检查用水，然后向医疗金属杯内加入鲎试剂0.5-0.8毫升，充分搅拌后产生凝胶；

3)、将步骤2)处理后的生物医药制剂原料液清洗、过滤干净，使原料液中没有混合凝胶；

4)、向医疗金属杯内加入再生缓冲液1-3毫升平衡缓冲液，滴加速度为每分钟4滴，再按此操作重复两次；

5)、另配0.5-0.9M的NaCl溶液、0.3M的氢氧化钠溶液和0.3M盐酸溶液以备使用，向医疗金属杯内加入0.5-0.9M的NaCl溶液15-20毫升，再向医疗金属杯内加入0.3M的氢氧化钠溶液，逐滴加入，调节溶液PH值至8-9,0.3M盐酸溶液用于微调PH值；

6)、取出步骤5)中处理后的生物医药制剂原料液3-5克，使用缓冲液平衡该生物医药制剂原料液的PH值，然后向原料液中加入细菌内毒素检查用水，然后向医疗金属杯内加入鲎试剂0.5-0.8毫升，观察是否产生凝胶，若产生凝胶则将剩余原料液重复步骤5)。

7)、将检测合格的生物医药制剂原料液存储在消毒杀菌后的玻璃瓶内，保存温度5-10摄氏度且放置在无阳光直射的位置。

综上所述，本发明预处理可初步去除外接微生物、病毒，内毒素检测可以初步判定内毒素的含量，通过调节PH值，可以去除内毒素，非常方便，去除内毒素过程中加热，提高了内毒素的去除速率。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种去除生物医药制剂中内毒素的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)、将生物医药制剂原料液放置在医疗金属杯内，质量为3-10克，医疗金属杯提前进行杀菌消毒，然后将装有生物医药制剂原料液的医疗金属杯放入高压蒸汽灭菌箱内处理，温度130-160摄氏度，时间为25-40分钟；

2)、采用光度测定法检测内毒素，向高压蒸汽后的医疗金属杯内加入细菌内毒素检查用水，然后向医疗金属杯内加入鲎试剂0.5-0.8毫升，充分搅拌后产生凝胶；

3)、将步骤2)处理后的生物医药制剂原料液清洗、过滤干净，使原料液中没有混合凝胶；

4)、向医疗金属杯内加入再生缓冲液1-3毫升平衡缓冲液，滴加速度为每分钟4滴，再按此操作重复两次；

5)、另配0.5-0.9M的NaCl溶液、0.3M的氢氧化钠溶液和0.3M盐酸溶液以备使用，向医疗金属杯内加入0.5-0.9M的NaCl溶液15-20毫升，再向医疗金属杯内加入0.3M的氢氧化钠溶液，逐滴加入，调节溶液PH值至8-9,0.3M盐酸溶液用于微调PH值；

6)、取出步骤5)中处理后的生物医药制剂原料液3-5克，使用缓冲液平衡该生物医药制剂原料液的PH值，然后向原料液中加入细菌内毒素检查用水，然后向医疗金属杯内加入鲎试剂0.5-0.8毫升，观察是否产生凝胶，若产生凝胶则将剩余原料液重复步骤5)。

7)、将检测合格的生物医药制剂原料液存储在消毒杀菌后的玻璃瓶内，保存温度5-10摄氏度且放置在无阳光直射的位置。