CN107312047B

CN107312047B - 一种从红景天中同步分离制备红景天苷和络塞维的方法

Info

Publication number: CN107312047B
Application number: CN201710664786.0A
Authority: CN
Inventors: 刘永峰; 邸多隆
Original assignee: Lanzhou Institute of Chemical Physics LICP of CAS
Current assignee: Yunnan Olive Health Industry Innovation Research And Development Co ltd
Priority date: 2017-08-06
Filing date: 2017-08-06
Publication date: 2020-05-01
Anticipated expiration: 2037-08-06
Also published as: CN107312047A

Abstract

本发明公开了一种从红景天中同步分离制备红景天苷和络塞维的方法，包括以下步骤：1)以红景天为原料，用含低共熔溶剂的酒***溶液提取。低共熔溶剂具有乳化、湿润、助溶等作用，有利于红景天苷和络塞维的提取。2)将提取液利用混合大孔树脂膨胀床技术，结合梯度洗脱技术，分别制备得到红景天苷和络塞维粗提取液。3)将红景天苷和络塞维粗提取液分别再次利用混合大孔树脂膨胀床技术，制备得到红景天苷和络塞维提取物。经过HPLC的含量检测，红景天苷提取物中红景天苷含量为40％～80％，回收率为60％～88％；络塞维提取物中络塞维含量为30％～70％，回收率为65％～85％。

Description

一种从红景天中同步分离制备红景天苷和络塞维的方法

技术领域

本发明涉及红景天药材的深加工技术领域，尤其涉及一种从红景天中同步分离制备红景天苷和络塞维的方法。

技术背景

红景天(Rhodiola rosea L.)是景天科红景天属多年生草本或亚灌木植物的干燥根和根茎，别名：蔷薇红景天，扫罗玛布尔(藏名)等，全世界90多种，分布于东亚、中亚、西伯利亚及北美地区。红景天生长在高海拔高寒无污染地带，其生长环境恶劣，因而具有很强的生命力和特殊的适应性。其性寒，味甘，涩，具有活血止血，清肺止咳之功效，用于治疗肺炎咳嗽，妇女白带，外用治跌打损伤，烫伤烧伤，是一味作用广泛的中药。近年来研究表明红景天具有明显的抗氧化、抗缺氧、抗衰老、抗微波辐射、抗疲劳、保肝等功能，而且可以提高工作效率，延缓机体衰老，防治老年病等。因此在军事医学上有十分重要的意义，前苏联卫生保健部正式批准其进入市场，被视为黄金植物。

近年来，对红景天化学成分的研究表明，主要成分是红景天苷(Salidroside)、络塞维(Rosavin)等，结构式分别为：

红景天苷是红景天的主要有效成分之一，通常以其有无与含量的高低作为红景天质量优劣的判断标准。现代药理研究表明，其具有抗疲劳、抗辐射、抗衰老、抗肿瘤的功效，在保护心脑血管***，免疫***、内分泌***、调节神经等方面具有确切的作用。络塞维为苯丙素苷类化合物，主要用于抗疲劳、抗缺氧、缓解压力、提高工作效率和治疗神经***的功能型疾病。红景天中的络塞维含量较少，如何从红景天获得高收率和高纯度的络塞维是一个研究热点。

红景天苷和络塞维的纯度是衡量红景天提取物的关键指标，红景天药材中的含有的杂质不但会对制剂的口感和澄明度产生不良影响，还会造成恶心、呕吐等不良反应。去除红景天提取物中杂质的同时不影响提取液中红景天苷和络塞维等有效成分的含量，并实现同步分离红景天苷和络塞维，是工业生产中的难题。中国公开号为CN106699822A的发明专利提出了一种从玫瑰红景天中高效提取红景天苷和络塞维的方法，提取液80％乙醇溶液中加入十六烷基三甲基季胺溴化物和醋酸钾，进行动态逆流提取，浓缩后，加入酸水进行沉淀，最后喷雾干燥得到。该发明的方法利用pH为3.0～4.0的酸水，对设备要求较高，而且后期酸水的处理费用较高。最终的产品中红景天苷(6.1％左右)和络塞维(3.6％左右)的纯度较低，并未实现红景天苷和络塞维的分离。因此，要获得高纯度的红景天苷和络塞维就需要选择的合理、有效、成本低的纯化工艺来除去提取物中杂质，并实现红景天苷和络塞维的同步分离。

发明内容

本发明提供一种从红景天中同步分离制备红景天苷和络塞维的方法，本发明所提供的方法成本低、试剂用量少、步骤简单、环保、适合于工业化生产，能同步获得高收率和高纯度的红景天苷和络塞维提取物。

本发明的从红景天中同步分离制备红景天苷和络塞维的方法，包括以下步骤：

1)提取：将红景天根粉碎，过筛，粒度大于60目，得到红景天粉末；在得到的红景天粉末中加入5～30倍红景天重量的乙醇水溶液(添加有0.5％～10％的低共熔溶剂)进行回流提取，获得提取液；

2)一次分离纯化：将步骤1)的提取液浓缩后，离心获得上清液，上清液通过填充有混合大孔树脂的膨胀床，从下而上进行吸附；吸附完成后，从下而上进行水洗，直至流出液澄清，再用5％～40％乙醇溶液自上而下洗脱出红景天苷，收集洗脱液，浓缩至无醇味，得到红景天苷粗提取液；再用40％～95％乙醇溶液自上而下洗脱出络塞维，收集洗脱液，浓缩至无醇味，得到络塞维粗提取液；

3)二次分离纯化：将红景天苷粗提取液通过填充有混合大孔树脂的膨胀床，从下而上进行吸附；吸附完成后，从下而上进行水洗，直至流出液澄清，5％～40％乙醇溶液自上而下洗脱出红景天苷，收集洗脱液，浓缩，干燥后得到红景天苷提取物；

将络塞维粗提取液通过另一个填充有混合大孔树脂的膨胀床，从下而上进行吸附；吸附完成后，从下而上进行水洗，直至流出液澄清，用30％～95％乙醇溶液自上而下洗脱出络塞维，收集洗脱液，浓缩，干燥后得到络塞维提取物。

所述步骤1)中的低共熔溶剂是由氢键受体(四乙基氯化铵)与氢键给体(木糖醇、葡萄糖)组合而成的。

所述步骤2)中的混合大孔树脂是由HPD400A、LSA10、DA201-CIII两种或以上组成的；更优选的，混合大孔树脂以HPD400A:LSA10:DA201-CIII为1:1:3的比例组成。

所述步骤2)中的吸附流速为1～5BV/h。

所述步骤2)中的水洗流速为2～6BV/h，用量为2～4BV。

所述步骤2)中的红景天苷洗脱流速为2～6BV/h，乙醇溶液用量为1～4BV。

所述步骤2)中的络塞维洗脱流速为1～4BV/h，乙醇溶液用量为1～4BV。

所述步骤3)中的混合大孔树脂是由LX-28、HPD300、XDA-8两种或或以上组成的。更优选的，混合大孔树脂以LX-28:HPD300:XDA-8为2:1:1的比例组成。

所述步骤3)中的吸附流速均为0.5～4BV/h。

所述步骤3)中的水洗流速均为2～5BV/h，用量均为1～5BV。

所述步骤3)中的红景天苷洗脱流速为1～5BV/h，乙醇溶液用量为1～5BV。

所述步骤3)中的络塞维洗脱流速为1～5BV/h，乙醇溶液用量为1～6BV。

所述步骤3)中的干燥方式为真空干燥、鼓风干燥、喷雾干燥、冷冻干燥、微波干燥、玻态干燥、红外干燥、高压静电干燥、气流干燥、流化床干燥等。

本发明提供了一种从红景天中同步分离制备红景天苷和络塞维的方法所制得的红景天苷和络塞维可以应用于药品、保健品和食品。

本发明的有益效果为：

1、制备方法分析：

1.1所述步骤1)中添加低共熔溶剂有利于浸润，加速有效成分渗出，有利于红景天苷、络塞维等的提取；低共熔溶剂可以沉淀部分鞣质、脂肪、蛋白质和多糖类胶质等成分，减少大分子物质进入提取液。

1.2所述步骤2)和3)采用混合大孔树脂进行分离富集，利用不同大孔树脂的多重作用力，通过大孔树脂的不同组合来有效的去除杂质，可以增强大孔树脂对红景天苷和络塞维的选择性，提高大孔树脂的吸附容量。在保持较高提取率的情况下，提高了红景天苷和络塞维的纯度，从而达到提高分离富集效率的目的。

1.3所述步骤2)和3)采用膨胀床模式进行吸附，具有如下优点：上柱前不需要过滤，可以减小提取液中固体对吸附过程的影响，不易污染堵塞大孔树脂柱床，因此可以大大简化操作和工艺过程，降低生产成本。

2、相对于现有技术，本发明提供的提取方法具有以下技术效果的优势：

2.1原料设备成本优势：本发明方法中使用的原料、设备均为常见的普通原料、设备，避免了工业化生产过程中对于昂贵原材料、设备的依赖，大大地降低了生产成本。

2.2低毒环保经济高效的技术路线：本发明采取的是一种绿色环保经济的技术路线，该技术路线中采用的提取、分离、干燥全部使用安全环保低毒无害的水、乙醇等。

2.3产品市场优势：由于本发明可同时提取红景天中红景天苷和络塞维两种活性成分，且经过HPLC的含量检测，利用含低共熔溶剂的乙醇溶液提取后，提取物中红景天苷含量为2～5％，回收率为80％～98％，络塞维含量为1～4％，回收率为85％～95％；一次分离纯化后，红景天苷粗提物含量为15～40％，回收率为80％～90％，络塞维粗提物含量为10～30％，回收率为75％～90％；二次分离纯化后，红景天苷提取物中红景天苷含量为40％～80％，回收率为60％～88％；络塞维提取物中络塞维含量为30％～70％，回收率为65％～85％，因此提高了红景天的利用率，增加了红景天的利用价值，具有明显的竞争优势。

3、本发明提供的生产方法为利用含低共熔溶剂的乙醇溶液进行提取，采用了混合大孔树脂膨胀床技术进行分离富集，操作步骤简单、提取效率高、时间短、能耗低、工艺简单、管理人员少、易于形成产业化、绿色安全，所以成本较低，而且产品回收率显著提高，为红景天苷和络塞维的同时制备提供了一条切实可行的方法，具有较好的应用前景。

具体实施方式

申请人研究发现，红景天中主要含有红景天苷、苷元、酪醇和红景天多糖，并含有脂肪、甾醇、酚类化合物、有机酸、鞣质、多种微生素和水溶性挥发油；此外，还包括天门冬氨酸、苏氨酸丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、脯氨酸等18种氨基酸；镁、钙、钾、磷等35种无机元素；15种人体必需的常量和微量元素铁、铝、锌、钴、镉、钛、铜、锰等。其苷类物质主要有红景天苷、熊果苷、芦丁苷、异槲皮苷、云杉素等；黄酮类有槲皮素、山奈酚花色苷；香豆素类有香豆素、7-羟基香豆素、莨菪亭。通过分析红景天提取液成分的基础上，对膨胀床所使用的大孔树脂的组成及配比进行优化，从而能在保证红景天苷和络塞维的提取率和纯度的情况下，同步分离制备红景天苷和络塞维。

下面以实施例作进一步描述，但本发明不同限于这些实施例。

实施例1

1)提取：将红景天根1kg粉碎，过筛，粒度大于60目，得到红景天粉末；在得到的红景天粉末中加入8倍红景天重量的10％乙醇水溶液，其中含低共熔溶剂(四乙基氯化铵:木糖醇＝1:1)9％，回流提取，提取时间为8小时，连续提取2次，合并提取液。

2)一次分离纯化：将提取液浓缩至原体积的1/4，离心，上清液通过填充有0.8kg混合大孔树脂(HPD400A:LSA10:DA201-CIII＝1:1.6:3)的膨胀床，从下而上进行吸附，流速为1.5BV/h；吸附完成后，从下而上进行水洗，水洗流速为2BV/h，用量为2.2BV；先用5％乙醇溶液自上而下洗脱出红景天苷，流速为2BV/h，用量为1.5BV，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，得到红景天苷粗提取液；再用40％乙醇溶液自上而下洗脱出络塞维，流速为1BV/h，用量为1BV，收集洗脱液，浓缩至无醇味，得到络塞维粗提取液。

3)二次分离纯化：将红景天苷粗提取液通过填充有0.5kg混合大孔树脂(LX-28:HPD300＝1:3)的膨胀床，从下而上进行吸附，吸附流速均为0.5BV/h；吸附完成后，从下而上进行水洗，水洗流速均为3BV/h，用量均为1BV；用5％乙醇溶液自上而下洗脱出红景天苷，洗脱流速为2BV/h，乙醇溶液用量为1BV，收集洗脱液，浓缩，喷雾干燥后得到红景天苷提取物；将络塞维粗提取液通过填充有0.3kg混合大孔树脂(HPD300:XDA-8＝3:1)的膨胀床，从下而上进行吸附，吸附流速均为1BV/h；吸附完成后，从下而上进行水洗流速均为3.5BV/h，用量均为2BV；用30％乙醇溶液自上而下洗脱出络塞维，洗脱流速为2BV/h，乙醇溶液用量为3BV，收集洗脱液，浓缩，喷雾干燥后得到络塞维提取物。

4)检验：经过HPLC的含量检测，利用含低共熔溶剂的乙醇溶液提取后，提取物中红景天苷含量为2.5％，回收率为95％，络塞维含量为1.6％，回收率为93％；一次分离纯化后，红景天苷粗提物含量为20％，回收率为89％，络塞维粗提物含量为15％，回收率为86％；二次分离纯化后，红景天苷提取物中红景天苷含量为45％，回收率为85％；络塞维提取物中络塞维含量为36％，回收率为81％。

实施例2

1)提取：将红景天根5kg粉碎，过筛，粒度大于60目，得到红景天粉末；在得到的红景天粉末中加入12倍红景天重量的50％乙醇水溶液，其中含低共熔溶剂(四乙基氯化铵:葡萄糖＝1:2)5％，回流提取，提取时间为6小时，连续提取2次，合并提取液。

2)一次分离纯化：将提取液浓缩至原体积的1/4，离心，上清液通过填充有5kg混合大孔树脂(HPD400A:DA201-CIII＝1:5)的膨胀床，从下而上进行吸附，流速为2BV/h；吸附完成后，从下而上进行水洗，水洗流速为3BV/h，用量为3BV；先用10％乙醇溶液自上而下洗脱出红景天苷，流速为3BV/h，用量为2BV，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，得到红景天苷粗提取液；再用50％乙醇溶液自上而下洗脱出络塞维，流速为2BV/h，用量为1.5BV，收集洗脱液，浓缩至无醇味，得到络塞维粗提取液。

3)二次分离纯化：将红景天苷粗提取液通过填充有1kg混合大孔树脂(HPD300:XDA-8＝1:5)的膨胀床，从下而上进行吸附，吸附流速均为1BV/h；吸附完成后，从下而上进行水洗，水洗流速均为4BV/h，用量均为2BV；用10％乙醇溶液自上而下洗脱出红景天苷，洗脱流速为3BV/h，乙醇溶液用量为2BV，收集洗脱液，浓缩，冷冻干燥后得到红景天苷提取物；将络塞维粗提取液通过填充有0.6kg混合大孔树脂(LX-28:XDA-8＝4:1)的膨胀床，从下而上进行吸附，吸附流速均为2BV/h；吸附完成后，从下而上进行水洗流速均为4BV/h，用量均为2.5BV；用40％乙醇溶液自上而下洗脱出络塞维，洗脱流速为3BV/h，乙醇溶液用量为2BV，收集洗脱液，浓缩，冷冻干燥后得到络塞维提取物。

4)检验：经过HPLC的含量检测，利用含低共熔溶剂的乙醇溶液提取后，提取物中红景天苷含量为2.9％，回收率为91％，络塞维含量为2.4％，回收率为89％；一次分离纯化后，红景天苷粗提物含量为30％，回收率为84％，络塞维粗提物含量为19％，回收率为87％；二次分离纯化后，红景天苷提取物中红景天苷含量为68％，回收率为73％；络塞维提取物中络塞维含量为46％，回收率为79％。

实施例3

1)提取：将红景天根10kg粉碎，过筛，粒度大于60目，得到红景天粉末；在得到的红景天粉末中加入20倍红景天重量的75％乙醇水溶液，其中含低共熔溶剂(四乙基氯化铵:木糖醇:葡萄糖＝2:1:3)2％，回流提取，提取时间为4小时，连续提取2次，合并提取液。

2)一次分离纯化：将提取液浓缩至原体积的1/4，离心，上清液通过填充有8kg混合大孔树脂(HPD400A:LSA10:DA201-CIII＝1:1:3)的膨胀床，从下而上进行吸附，流速为4BV/h；吸附完成后，从下而上进行水洗，水洗流速为4BV/h，用量为4BV；先用25％乙醇溶液自上而下洗脱出红景天苷，流速为4BV/h，乙醇溶液用量为3BV，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，得到红景天苷粗提取液；再用80％乙醇溶液自上而下洗脱出络塞维，流速为3.5BV/h，用量为4BV，收集洗脱液，浓缩至无醇味，得到络塞维粗提取液。

3)二次分离纯化：将红景天苷粗提取液通过填充有5kg混合大孔树脂(LX-28:HPD300:XDA-8＝1:3:8)的膨胀床，从下而上进行吸附，吸附流速均为4BV/h；吸附完成后，从下而上进行水洗，水洗流速均为5BV/h，用量均为4.5BV；用20％乙醇溶液自上而下洗脱出红景天苷，洗脱流速为4BV/h，乙醇溶液用量为3BV，收集洗脱液，浓缩，减压真空干燥后得到红景天苷提取物；将络塞维粗提取液通过填充有4kg混合大孔树脂(LX-28:HPD300:XDA-8＝2:1:1)的膨胀床，从下而上进行吸附，吸附流速均为4BV/h；吸附完成后，从下而上进行水洗流速均为5BV/h，用量均为3BV；用90％乙醇溶液自上而下洗脱出络塞维，洗脱流速为5BV/h，乙醇溶液用量为5BV，收集洗脱液，浓缩，减压真空干燥后得到络塞维提取物。

4)检验：经过HPLC的含量检测，利用含低共熔溶剂的乙醇溶液提取后，提取物中红景天苷含量为4.6％，回收率为87％，络塞维含量为3.3％，回收率为85％；一次分离纯化后，红景天苷粗提物含量为36％，回收率为82％，络塞维粗提物含量为28％，回收率为77％；二次分离纯化后，红景天苷提取物中红景天苷含量为78％，回收率为76％；络塞维提取物中络塞维含量为66％，回收率为68％。

上述的实施例表明本发明的方法能有效的从红景天中同步分离制备红景天苷和络塞维。

Claims

1.一种从红景天中同步分离制备红景天苷和络塞维的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：

1)提取：将红景天根粉碎，过筛，粒度大于60目，得到红景天粉末；在得到的红景天粉末中加入5～30倍红景天重量的添加有0.5％～10％的低共熔溶剂的乙醇水溶液中进行回流提取，获得提取液；

所述的低共熔溶剂是由氢键受体与氢键给体组合而成的；其中氢键受体为四乙基氯化铵；氢键给体为木糖醇或葡萄糖；

2)一次分离纯化：将步骤1)的提取液浓缩后，离心获得上清液，上清液通过填充有混合大孔树脂的膨胀床，从下而上进行吸附；吸附完成后，从下而上进行水洗，直至流出液澄清，再用5％～25％乙醇溶液自上而下洗脱出红景天苷，收集洗脱液，浓缩至无醇味，得到红景天苷粗提取液；再用40％～80％乙醇溶液自上而下洗脱出络塞维，收集洗脱液，浓缩至无醇味，得到络塞维粗提取液；

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤2)中的混合大孔树脂是由HPD400A、LSA10、DA201-CIII两种或两种以上组成的。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的步骤2)中的混合大孔树脂是以HPD400A:LSA10:DA201-CIII为1:1:3的比例组成的。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤2)中的吸附流速为1～5BV/h；水洗流速为2～6BV/h，用量为2～4BV；红景天苷洗脱流速为2～6BV/h，乙醇溶液用量为1～4BV；络塞维洗脱流速为1～4BV/h，乙醇溶液用量为1～4BV。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤3)中的混合大孔树脂是由LX-28、HPD300、XDA-8两种或以上组成的。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤3)中的混合大孔树脂以LX-28:HPD300:XDA-8为2:1:1的比例组成。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤3)中吸附流速均为0.5～4BV/h；水洗流速均为2～5BV/h，用量均为1～5BV；红景天苷洗脱流速为1～5BV/h，乙醇溶液用量为1～5BV；络塞维洗脱流速为1～5BV/h，乙醇溶液用量为1～6BV。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的所述步骤3)中的干燥方式为真空干燥、鼓风干燥、喷雾干燥、冷冻干燥、微波干燥、玻态干燥、红外干燥、高压静电干燥、气流干燥或流化床干燥。