CN107250354B - 用于包埋活大肠杆菌的经改进干基质、其制备方法及其用途 - Google Patents

用于包埋活大肠杆菌的经改进干基质、其制备方法及其用途 Download PDF

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Abstract

提供了包埋在基质中的活大肠杆菌(Escherichia coli，E.coli)，其中所述基质的水活度(aw)≤0.3，并且其中所述基质包含形成水胶体之多糖、不同于第一多糖的第二多糖和包含蔗糖、海藻糖或其组合的二糖。还提供了其制备方法及其用途。

Description

用于包埋活大肠杆菌的经改进干基质、其制备方法及其用途
相关申请
本申请要求Eric Nadeau于2015年2月11日提交的美国临时专利申请序列号62/114,829的权益。上述引用文件的内容通过引用整体并入本文。
技术领域
本申请一般地涉及用于包埋活大肠杆菌(E.coli)的经改进干基质、其制备方法及其用途的领域。
背景技术
细菌芽胞是可以以干燥和脱水状态无限期存在的休眠生命形式。对于人，细菌芽孢可以用作用于轻度胃肠病症(例如腹泻)的非处方预防剂或者用作健康食品或营养补充剂。在农业中，细菌芽孢作为抗生素作为生长促进剂的潜在替代品也受到越来越多的关注(Hong等，FEMSMicrobiology Reviews，2005，29：813-835)。然而，大肠杆菌(Escherichiacoli，E.coli)不形成芽孢并且因此与形成芽孢的细菌相比对干燥和/或脱水条件的抗性较低。在很多应用中，出于给定目的仍然需要以提供足够生存力和/或足够细菌生物活性的形式保存和储存大肠杆菌细菌。
在此方面，先前已提出了用于细菌的多种实际保存和储存条件。
冷冻干燥(还称为冻干)由于在干燥期间的低温暴露而常常用于细菌的保存和储存(Rhodes，E.xploitation of microorganisms编辑Jones，DG，1993，第411-439页，London：Chapman&Hall)。然而，其具有显著降低生存力以及时间和能量密集的不期望特征。已提出保护剂，但是在冷冻干燥期间由给定添加剂提供的保护随微生物的物种而变化(Font de Valdez等，Cryobiology，1983，20：560-566)。
空气干燥(例如与干燥一起)已用于细菌的保存和储存。尽管真空干燥是一种与冷冻干燥类似的方法，但是其发生在0℃至40℃下持续30分钟至数小时。这种方法的优势是产品不经冷冻，因此能量消耗及相关经济影响降低。从产品角度考虑，避免冷冻损害。然而，在低温或环境温度下的干燥缓慢，需要额外的预防措施以避免污染并且常常产生不令人满意的生存力(Lievense等，Adv Biochem Eng Biotechnol.，1994，51：71-89)。
将细菌包封在形成水胶体之多糖基质(例如藻酸钙(Ca-藻酸)珠)中已在广泛且增大范围的不同应用中用于细菌的保存和储存(Islam等，J.Microbiol.Biotechnol.，2010，20：1367-1377)。为了使细菌维持在代谢上和生理上具有活性的状态并由此获得期望的益处，已提出向这样的基质中添加合适的保存制剂。保存制剂通常含有在合适载体中的活性成分和帮助在储存、运输期间和在目标区域稳定化和保护微生物细胞的添加剂。
甘露醇已被描述为Ca-藻酸包封细菌在冷冻干燥期间的有效保存制剂组分，因为其提供室温下多至10周的高细菌生存力和小于0.2的水活度(wateractivity，aw)(Efiuvwevwere等，Appl.Microbiol.Biotechnol.，1999，51：100-104)。海藻糖和糖醇的协同混合物已被描述为用于经空气干燥的Ca-藻酸包封细菌的有效保存制剂，其中由于海藻糖具有显著更高的玻璃化转变温度而使用海藻糖代替蔗糖(即分别为110℃相对于仅65℃)(U.S.8,097,245)。羧酸盐和水解蛋白的协同混合物也已被描述为经冷冻干燥Ca-藻酸包封细菌的有效保存制剂组分(U.S.2013/0,296,165)。在这两种情况下，协同混合物均提供增强的玻璃质结构而无需起泡或在真空下煮沸以有利于有效干燥。
然而，开发新的制剂是一项有挑战的任务，并且不是所有的制剂对给定细菌都有效(Youg等，Biotechnol Bioeng.，2006年9月5日；95(1)：76-83)。
鉴于上述内容，需要提供用于大肠杆菌细菌的经改进的保存和储存条件。
发明内容
本公开内容广泛地涉及包埋在基质中的活大肠杆菌(E.coli)，其中所述基质的水活度(aw)≤0.3，并且其中所述基质包含作为形成水胶体之多糖的第一多糖、不同于第一多糖的第二多糖和包含蔗糖、海藻糖或其组合的二糖。
本公开内容还广泛地涉及用于形成基质的组合物，所述组合物包含作为形成水胶体之多糖的第一多糖、不同于第一多糖的第二多糖和包含蔗糖、海藻糖或其组合的二糖，以及大肠杆菌(E.coli)。
本公开内容还广泛地涉及用于提供包含活大肠杆菌(E.coli)的颗粒的方法。
本公开内容还广泛地涉及包含活大肠杆菌(E.coli)的基质，其中所述基质的水活度(aw)≤0.3，并且其中所述基质包含作为形成水胶体之多糖的第一多糖、不同于第一多糖的第二多糖和包含蔗糖、海藻糖或其组合的二糖。
本公开内容中描述的并且不相互排斥的实施方案的所有特征均可彼此组合。一个实施方案的要素无需进一步提及即可用于其他实施方案。在结合附图阅读具体实施方案的以下描述之后，本发明的其他方面和特征对本领域普通技术人员将变得明显。
附图说明
在下文中参照附图提供了一些具体实施方案的详细描述，在附图中：
图1示出了根据本公开内容一个实施方案用于制备细菌培养物的非限制性流程图。
图2示出了根据本公开内容一个实施方案用于干燥具有经包埋大肠杆菌的珠的非限制性流程图。
图3示出了显示根据本公开内容一个实施方案在空气干燥之后保存溶液(preservation solution)S1、S2、S3和S4对细菌生存力的作用的非限制性条形图。
图4示出了显示根据本公开内容一个实施方案在空气干燥之后保存溶液S1、S5、S6和S7对细菌生存力的作用的非限制性条形图。
图5示出了显示根据本公开内容一个实施方案在空气干燥之后保存溶液S1、S0、S8和S9对细菌生存力的作用的非限制性条形图。
图6示出了显示根据本公开内容一个实施方案在空气干燥之后保存溶液S1、S10、S11和S12对细菌生存力的作用的非限制性条形图。
图7示出了显示根据本公开内容一个实施方案在空气干燥之后保存溶液S1、S13、S14和S15对细菌生存力的作用的非限制性条形图。
图8示出了显示根据本公开内容一个实施方案在空气干燥之后保存溶液S1、S16、S17和S18对细菌生存力的作用的非限制性条形图。
图9示出了显示根据本公开内容一个实施方案在空气干燥之后保存溶液S1和S19对细菌生存力的作用的非限制性条形图。
图10示出了关于图3至图9的原始数据。
在附图中，通过实例对一些实施方案进行举例说明。应清楚地理解，说明书和附图仅用于举例说明某些实施方案的目的并且有助于理解。权利要求书的范围不应受本公开内容中所示的实施方案的限制，而应赋予与说明书整体一致的最宽解释。
具体实施方式
现在将对一些具体实例进行描述以举例说明本公开内容的原理付诸实践的方式。
本文中所述的大肠杆菌细菌是活细菌，换言之，尽管包埋在干基质中的细菌可被认为处于非活性状态，但是在使基质暴露于潮湿之后，这些细菌可恢复至活性状态。
本文中所述的大肠杆菌细菌包含任何重组或野生的大肠杆菌菌株，或者其任意混合物。在一个实施方案中，大肠杆菌是非致病性菌株。在一个实施方案中，非致病性大肠杆菌菌株是于2005年1月21日以登记号IDAC210105-01保藏在加拿大国际保藏单位(International Depository Authority of Canada，IDAC)的菌株或于2013年6月20日保藏在加拿大国际保藏单位(IDAC)并且归于登记号200613-01的菌株，或者其组合。
本文中所述的基质包含形成水胶体之多糖。数种多糖单独地或以其任意组合适合如本文中所述使用。
高直链淀粉淀粉是能够在沸水中使淀粉颗粒水合，在高剪切混合器的帮助之下使颗粒分散并随后将溶液冷却至约0℃至10℃之后形成坚固凝胶的多糖。凝胶的坚固度和强度取决于溶液中淀粉的浓度，其中最大可工作浓度为多至10％w/v。经切片的淀粉凝胶基质还能够使活细菌保持在保存混合物中，并且由于其大部分不易被肠液或胃液消化，因此细菌在淀粉基质中的同时被保护免受胃破坏。受控的释放机理由以下事实提供：高直链淀粉淀粉容易被肠微生物群落消化，此时递送的活细菌随后以其完整形式释放。
果胶是另一种合适的多糖，其以与高直链淀粉淀粉非常类似的方式起作用。果胶由于可通过添加在糖聚合物的羧基之间形成桥接的二价阳离子(例如Ca2+)进一步提高果胶凝胶基质的强度而具有额外的优势。
藻酸类(alginate)是另一种合适的多糖，其可通过与二价阳离子交联而形成坚固的凝胶基质。藻酸类可通过使藻酸类多糖与双阳离子(例如Ca2+)内部交联，例如通过将藻酸类以细线状物、串或基本上球形的珠的形式挤出到Ca2+浴中而被硬化成坚固的凝胶基质。藻酸类在与Ca2+相互作用之后硬化。制备基质的替选方法是将混合物喷雾雾化到包含Ca2+的浴中。
在一个实施方案中，形成水胶体之多糖以按总干基质的重量计的0.1％至20％的百分比值存在于基质中。在一个实施方案中，形成水胶体之多糖以按总干基质的重量计的以下百分比值存在于基质中：0.1％至19％、或0.1％至18％、或0.1％至17％、或0.1％至16％、或0.1％至15％、或0.1％至14％、或0.1％至13％、或0.1％至12％、或1％至12％，包括其中的任意值。
本文中所述的基质还包含二糖和多糖。本公开内容公开了适于包含在基质中的数个浓度和比例。在一个实施方案中，二糖/多糖的重量％/重量％的合适比值小于10，或者更优选地小于5。在一个实施方案中，二糖/多糖的重量％/重量％的比值为约1。
在一个实施方案中，二糖以按总干基质的重量计的以下百分比值存在于基质中：0.1％至90％、或0.1％至75％、或0.1％至50％、或0.1％至35％、或0.1％至20％、或0.1％至15％、或0.1％至10％，包括其中的任意值。
在一个非限制性实施方案中，二糖包含蔗糖。
在另一个非限制性实施方案中，二糖包含海藻糖。
在一个非限制性实施方案中，多糖包含麦芽糖糊精(maltodextrine)。
在另一个非限制性实施方案中，多糖包含右旋糖酐。
在另一个非限制性实施方案中，右旋糖酐的分子量为20kDa至70kDa。
在一个实施方案中，基质还包含L-谷氨酸的盐。在一个非限制性实施方案中，所述盐是L-谷氨酸的钠盐。
本文中所述的基质的水活度(“aw”)为0.04≤aw≤0.3，例如0.04≤aw≤2.5、0.04≤aw≤2.0、0.04≤aw≤1.5等。在本公开内容的上下文中，“水活度”或“aw”是指水的可利用度并且表示水在***中的能量状态。水活度可根据本领域中已知的材料和操作，例如使用Aqualab水活度计4TE(Decagon Devices，Inc.，U.S.A.)来测量。
还提供了用于形成基质的组合物，所述组合物包含第一形成水胶体之多糖、不同于第一多糖的第二多糖和包含蔗糖、海藻糖或其组合的二糖以及大肠杆菌(E.coli)。
还提供了用于提供包含活大肠杆菌(E.coli)的颗粒的方法，所述方法包括提供包含第一形成水胶体之多糖、不同于第一多糖的第二多糖和包含蔗糖、海藻糖或其组合的二糖以及大肠杆菌的颗粒，以及将所述颗粒干燥至水活度(aw)≤0.3。
在一个非限制性实施方案中，活大肠杆菌在颗粒中维持至少0.4、或至少0.5、或至少0.6、或至少0.7的aw倍数减小。
实施例
在以下每个实施例中，与保存溶液S1一起测试了三种保存溶液。测试一式三份地进行并且一个标准偏差根据下式计算：
Figure BDA0001376655590000061
其中n：样品的数量，且
Figure BDA0001376655590000062
样品群体的平均值。
在以下每个实施例中，细菌生存力通过根据本领域中已知的方案测量菌落形成单位(colony-forming unit，CFU)的数量来评估。
以下实施例中使用的保存溶液示于表1中。
表1
Figure BDA0001376655590000071
1x意指不存在
2N/A意指不适用
1.实施例1
a.大肠杆菌培养
参照图1，在第一步骤100中将大肠杆菌菌株在非动物来源的胰蛋白酶大豆琼脂上培养。然后，将六(6)个分离的菌落用于在第二步骤200中在30mL非动物来源的胰蛋白酶大豆肉汤培养基(Tryptic Soy Broth，TSB)(对于1L TSB：20g大豆蛋白胨A3SC-(Organotechnie)、2.5g无水右旋糖USP-(J.T.Baker)、5g氯化钠USP-(J.T.Baker)和2.5g磷酸氢二钾USP-(Fisher Chemical))中在37℃和200rpm搅拌下培养大肠杆菌菌株2小时。将所得培养物1在TSB中稀释10倍并随后用于在第三步骤300中在100mL非动物来源TSB中在37℃和200rpm搅拌下培养大肠杆菌菌株2小时。将所得培养物2在TSB中稀释10倍并随后用于在第四步骤400中在1L非动物来源TSB中在37℃和200rpm搅拌下培养大肠杆菌菌株5小时。然后，将所得培养物3用于将大肠杆菌包埋在基质中。可对本文中所述的培养方案作出变化和改进并且根据本发明的教导，其对本领域技术人员将变得明显。例如，还可根据本领域中已知的方案在厌氧条件下培养非致病性大肠杆菌(Son和Taylor，Curr.Protoc.Microbiol.，2012，27：5A.4.1-5A.4.9)。在制备后续实施例的珠中，可选择于2005年1月21日以登记号IDAC 210105-01保藏在加拿大国际保藏单位(IDAC)的非致病性大肠杆菌菌株。
b.基质制备
将BactoTM蛋白胨(1.5g，BD，Mississauga，Canada)与1.5L的经加热的水混合以获得混合物。在用磁棒以360rpm混合的同时向混合物中缓慢添加藻酸类(30g
Figure BDA0001376655590000081
DuPontTM
Figure BDA0001376655590000082
Mississauga，Canada)。在约3小时内获得藻酸类的完全溶解以获得2％藻酸类(m/v)溶液。然后，包括磁棒在内将溶液在标准条件下高压灭菌。可对本文中所述的基质制备方案作出变化和改进并且根据本发明的教导，其对本领域技术人员将变得明显。
c.将大肠杆菌包埋在基质中
按顺序并且在用磁棒混合的同时向经高压灭菌的基质溶液中添加以下以获得浆料：1L非动物来源TSB，并且参照图1，在1L非动物来源TSB中的大肠杆菌的0.5L所得培养物3。使用由Thermo ScientificTMReacti-VapTM蒸发器改造的9出口注射器***将浆料挤出到聚合浴(在水中的300mM CaCl2、0.1重量/体积％BactoTM胰蛋白胨、0.1重量/体积％BactoTM蛋白胨和0.05重量/体积％g BactoTM酵母提取物)中形成珠。在注射浆料的同时轻轻搅拌浴。使基质珠交联约30分钟，并随后收获所得的硬化珠。可对本文中所述的包埋方案作出变化和改进并且根据本发明的教导，其对本领域技术人员将变得明显。
d.经包埋大肠杆菌的干燥和测试
对于每种保存溶液，至少一式三份地进行干燥和测试。参照图2，在第一步骤500中，在轻轻搅拌下将在基质中具有经包埋大肠杆菌的珠在保存溶液S1、保存溶液S2、保存溶液S3或保存溶液S4中放置约20分钟。在每种情况下，在浸泡在保存溶液中之后进行总CFU550的确定。随后在第二步骤600中，将珠在室温下在空气干燥器中的盘式干燥器上放置约24小时以获得半干珠。在每种情况下，使用Aqualab水活度计4TE(Decagon Devices，Inc.，U.S.A.)对半干珠进行水活度aw650的测量。随后在第三步骤700中，将半干珠在其中吹入干燥的经过滤空气的干燥器中放置约64小时。根据本公开内容的一个实施方案，干燥过程800包括至少两个步骤：步骤600，其包括将珠在室温下在空气干燥器中放置24小时以获得半干珠；和步骤700，其包括将半干珠在干燥器中放置64小时以获得干燥的珠。在每种情况下，对干燥珠进行总CFU 750的确定和水aw760的测量。获得水活度aw≤0.3的干燥珠。
在每种情况下并且参照图2，根据以下计算aw倍数减小：
Figure BDA0001376655590000091
在每种情况下并且参照图2，根据以下计算生存力损失：
CFU损失＝log10(550)-log10(750)。
在每种情况下，计算平均生存力损失和相对于用保存溶液S1获得的结果的经归一化平均生存力损失。
结果示于图3中。保存溶液S4显示出0.32的经归一化平均生存力损失，同时维持0.142±0.004的水活度。
实施例1的结果的汇编示于表2和3中。这些结果表明保存溶液S4的成分对包埋在经干燥基质中的大肠杆菌的生存力提供显著作用以及其针对干燥过程700的抗性。
表2
Figure BDA0001376655590000101
表3
Figure BDA0001376655590000102
e.将经干燥的包埋大肠杆菌掺入饲料中(“粒化”)
用于将经干燥的基质掺入饲料中(例如以饲料添加剂的形式)掺入饲料中的方案是本领域中已知的。这样做的一个举例说明性实例可例如通过向一吨饲料中掺入500g至1000g经干燥的基质珠来进行。如果期望的话，饲料还可包含适量的灭活酵母产品。例如，将经干燥的包含经包埋大肠杆菌的基质珠与所有其他成分一起在均化罐中混合。优选地，在粒化过程期间持续地混合混合物。然后，将混合的材料泵向挤出机。然后向即将进入挤出机的混合材料施加蒸气(即，因此混合物的温度在该阶段升高)。然后，在混合物通入挤出机内期间向混合物施加合适的压力(压力和温度升高，最高温度达到约75℃的点)。然后，将形成粒料从挤出机排出到冷却罐中(温度快速降低至30℃至40℃，之后再次冷却以达到环境温度)。然后，可将包含饲料添加剂(包含经包埋大肠杆菌的基质)的经粒化饲料储存在例如袋/容器中。可对本文中所述的粒化方案作出改变和改进并且根据本发明的教导，其对本领域技术人员将变得明显。
2.实施例2
对于每种保存溶液，至少一式三份地进行干燥和测试。参照图2，在第一步骤500中，在轻轻搅拌下将实施例1中制备的珠在保存溶液S1、保存溶液S5、保存溶液S6或保存溶液S7中放置约20分钟。在每种情况下，在浸泡在保存溶液中之后进行总CFU 550的确定。随后在第二步骤600中，将珠在室温下在空气干燥器中的盘式干燥器上放置约24小时以获得半干珠。在每种情况下，使用Aqualab水活度计4TE(Decagon Devices，Inc.，U.S.A.)对半干珠进行水活度aw650的测量。随后在第三步骤700中，将半干珠在其中吹入干燥的经过滤空气的干燥器中放置约64小时。根据本公开内容的一个实施方案，干燥过程800包括至少两个步骤：步骤600，其包括将珠在室温下在空气干燥器中放置24小时以获得半干珠；和步骤700，其包括将半干珠在干燥器中放置64小时以获得干燥的珠。在每种情况下，对干燥珠进行总CFU 750的确定和水aw760的测量。获得水活度aw≤0.3的干燥珠。
在每种情况下并且参照图2，根据以下计算aw倍数减小：
Figure BDA0001376655590000111
在每种情况下并且参照图2，根据以下计算生存力损失：
CFU损失＝log10(550)-log10(750)。
在每种情况下，计算平均生存力损失和相对于用保存溶液S1获得的结果的经归一化平均生存力损失。
结果示于图4中。保存溶液S7显示出0.38的经归一化平均生存力损失，同时维持0.298±0.013的水活度。
实施例2的结果的汇编示于表4和5中。这些结果表明保存溶液S7的成分对包埋在经干燥基质中的大肠杆菌的生存力提供显著的保护作用以及其针对干燥过程700的抗性。
表4
Figure BDA0001376655590000121
表5
Figure BDA0001376655590000122
3.实施例3
对于每种保存溶液，至少一式三份地进行干燥和测试。参照图2，在第一步骤500中，在轻轻搅拌下将实施例1中制备的珠在保存溶液S1、保存溶液S0、保存溶液S8或保存溶液S9中放置约20分钟。在每种情况下，在浸泡在保存溶液中之后进行总CFU 550的确定。随后在第二步骤600中，将珠在室温下在空气干燥器中的盘式干燥器上放置约24小时以获得半干珠。在每种情况下，使用Aqualab水活度计4TE(Decagon Devices，Inc.，U.S.A.)对半干珠进行水活度aw650的测量。随后在第三步骤700中，将半干珠在其中吹入干燥的经过滤空气的干燥器中放置约64小时。根据本公开内容的一个实施方案，干燥过程800包括至少两个步骤：步骤600，其包括将珠在室温下在空气干燥器中放置24小时以获得半干珠；以及步骤700，其包括将半干珠在干燥器中放置64小时以获得干燥珠。在每种情况下，对干燥珠进行总CFU 750的确定和水aw760的测量。获得水活度aw≤0.3的干燥珠。
在每种情况下并且参照图2，根据以下计算aw倍数减小：
Figure BDA0001376655590000123
在每种情况下并且参照图2，根据以下计算生存力损失：
CFU损失＝log10(550)-log10(750)。
在每种情况下，计算平均生存力损失和相对于用保存溶液S1获得的结果的经归一化平均生存力损失。
结果示于图5中。
实施例3的结果的汇编示于表6和7中。
表6
Figure BDA0001376655590000131
表7
Figure BDA0001376655590000132
4.实施例4
对于每种保存溶液，至少一式三份地进行干燥和测试。参照图2，在第一步骤500中，在轻轻搅拌下将实施例1中制备的珠在保存溶液S1、保存溶液S10、保存溶液S11或保存溶液S12中放置约20分钟。在每种情况下，在浸泡在保存溶液中之后进行总CFU 550的确定。随后在第二步骤600中，将珠在室温下在空气干燥器中的盘式干燥器上放置约24小时以获得半干珠。在每种情况下，使用Aqualab水活度计4TE(Decagon Devices，Inc.，U.S.A.)对半干珠进行水活度aw650的测量。随后在第三步骤700中，将半干珠在其中吹入干燥的经过滤空气的干燥器中放置约64小时。根据本公开内容的一个实施方案，干燥过程800包括至少两个步骤：步骤600，其包括将珠在室温下在空气干燥器中放置24小时以获得半干珠；以及步骤700，其包括将半干珠在干燥器中放置64小时以获得干燥的珠。在每种情况下，对干燥珠进行总CFU 750的确定和水aw 760的测量。获得水活度aw≤0.3的干燥珠。
在每种情况下并且参照图2，根据以下计算aw倍数减小：
Figure BDA0001376655590000141
在每种情况下并且参照图2，根据以下计算生存力损失：
CFU损失＝log10(550)-log10(750)。
在每种情况下，计算平均生存力损失和相对于用保存溶液S1获得的结果的经归一化平均生存力损失。
结果示于图6中。保存溶液S7显示出0.58的经归一化平均生存力损失。
实施例4的结果的汇编示于表8和9中。
表8
Figure BDA0001376655590000142
表9
Figure BDA0001376655590000143
5.实施例5
对于每种保存溶液，至少一式三份地进行干燥和测试。参照图2，在第一步骤500中，在轻轻搅拌下将实施例1中制备的珠在保存溶液S1、保存溶液S13、保存溶液S14或保存溶液S15中放置约20分钟。在每种情况下，在浸泡在保存溶液中之后进行总CFU 550的确定。随后在第二步骤600中，将珠在室温下在空气干燥器中的盘式干燥器上放置约24小时以获得半干珠。在每种情况下，使用Aqualab水活度计4TE(Decagon Devices，Inc.，U.S.A.)对半干珠进行水活度aw650的测量。随后在第三步骤700中，将半干珠在其中吹入干燥的经过滤空气的干燥器中放置约64小时。根据本公开内容的一个实施方案，干燥过程800包括至少两个步骤：步骤600，其包括将珠在室温下在空气干燥器中放置24小时以获得半干珠；以及步骤700，其包括将半干珠在干燥器中放置64小时以获得干燥的珠。在每种情况下，对干燥珠进行总CFU 750的确定和水aw 760的测量。获得水活度aw≤0.3的干燥珠。
在每种情况下并且参照图2，根据以下计算aw倍数减小：
Figure BDA0001376655590000151
在每种情况下并且参照图2，根据以下计算生存力损失：
CFU损失＝log10(550)-log10(750)。
在每种情况下，计算平均生存力损失和相对于用保存溶液S1获得的结果的经归一化平均生存力损失。
结果示于图7中。保存溶液S7显示出0.35的经归一化平均生存力损失。
实施例5的结果的汇编示于表10和11中。
表10
Figure BDA0001376655590000161
表11
Figure BDA0001376655590000162
6.实施例6
对于每种保存溶液，至少一式三份地进行干燥和测试。参照图2，在第一步骤500中，在轻轻搅拌下将实施例1中制备的珠在保存溶液S1、保存溶液S16、保存溶液S17或保存溶液S18中放置约20分钟。在每种情况下，在浸泡在保存溶液中之后进行总CFU 550的确定。随后在第二步骤600中，将珠在室温下在空气干燥器中的盘式干燥器上放置约24小时以获得半干珠。在每种情况下，使用Aqualab水活度计4TE(DecagonDevices，Inc.，U.S.A.)对半干珠进行水活度aw650的测量。随后在第三步骤700中，将半干珠在其中吹入干燥的经过滤空气的干燥器中放置约64小时。根据本公开内容的一个实施方案，干燥过程800包括至少两个步骤：步骤600，其包括将珠在室温下在空气干燥器中放置24小时以获得半干珠；以及步骤700，其包括将半干珠在干燥器中放置64小时以获得干燥的珠。在每种情况下，对干燥珠进行总CFU 750的确定和水aw760的测量。获得水活度aw≤0.3的干燥珠。
在每种情况下并且参照图2，根据以下计算aw倍数减小：
Figure BDA0001376655590000163
在每种情况下并且参照图2，根据以下计算生存力损失：
CFU损失＝log10(550)-log10(750)。
在每种情况下，计算平均生存力损失和相对于用保存溶液S1获得的结果的经归一化平均生存力损失。
结果示于图8中。
实施例6的结果的汇编示于表12和13中。
表12
Figure BDA0001376655590000171
表13
Figure BDA0001376655590000172
7.实施例7
对于每种保存溶液，至少一式三份地进行干燥和测试。参照图2，在第一步骤500中，在轻轻搅拌下将实施例1中制备的珠在保存溶液S1或保存溶液S19中放置约20分钟。在每种情况下，在浸泡在保存溶液中之后进行总CFU 550的确定。随后在第二步骤600中，将珠在室温下在空气干燥器中的盘式干燥器上放置约24小时以获得半干珠。在每种情况下，使用Aqualab水活度计4TE(Decagon Devices，Inc.，U.S.A.)对半干珠进行水活度aw650的测量。随后在第三步骤700中，将半干珠在其中吹入干燥的经过滤空气的干燥器中放置约64小时。根据本公开内容的一个实施方案，干燥过程800包括至少两个步骤：步骤600，其包括将珠在室温下在空气干燥器中放置24小时以获得半干珠；以及步骤700，其包括将半干珠在干燥器中放置64小时以获得干燥的珠。在每种情况下，对干燥珠进行总CFU 750的确定和水aw760的测量。获得水活度aw≤0.3的干燥珠。
在每种情况下并且参照图2，根据以下计算aw倍数减小：
Figure BDA0001376655590000181
在每种情况下并且参照图2，根据以下计算生存力损失：
CFU损失＝log10(550)-log10(750)。
在每种情况下，计算平均生存力损失和相对于用保存溶液S1获得的结果的经归一化平均生存力损失。
结果示于图9中。
实施例7的结果的汇编示于表14和15中。
表14
Figure BDA0001376655590000182
表15
Figure BDA0001376655590000183
8.实施例8
对于每种保存溶液，至少一式三份地进行干燥和测试。在轻轻搅拌下将实施例1中制备的珠在保存溶液S1、保存溶液S2、保存溶液S3和保存溶液S4中放置约20分钟。随后，将珠在室温下在空气干燥器中的盘式干燥器上放置约24小时以获得半干珠。随后，将半干珠在其中吹入干燥的经过滤空气的干燥器中放置约64小时。获得水活度aw≤0.3的干燥珠。
在每种情况下，在4℃的储存条件下在四(4)周的时间内通过测量经干燥珠的CFU/g来测试菌株生存力。至少一式三份地进行测试并且计算一个标准偏差。
实施例8的结果示于表16中，其中当储存在4℃下时，所有的受试保存溶液在4周期间均提供饲料添加剂菌株稳定性。
表16
保存溶液 4周后的CFU/g差(log)
S1 0.2
S2 0.1
S3 0.1
S4 0
9.实施例9
对于每种保存溶液，至少一式三份地进行干燥和测试。在轻轻搅拌下将实施例1中制备的珠在保存溶液S1、保存溶液S5、保存溶液S6和保存溶液S7中放置约20分钟。随后，将珠在室温下在空气干燥器中的盘式干燥器上放置约24小时以获得半干珠。随后，将半干珠在其中吹入干燥的经过滤空气的干燥器中放置约64小时。获得水活度aw≤0.3的干燥珠。
在每种情况下，在4℃的储存条件下在四(4)周的时间内通过测量经干燥珠的CFU/g来测试菌株生存力。至少一式三份地进行测试并且计算一个标准偏差。
实施例9的结果示于表17中，并且当储存在4℃下时，所有的受试保存溶液在4周期间均提供饲料添加剂菌株稳定性。
表17
保存溶液 4周后的CFU/g差(log)
S1 0.2
S5 0.1
S6 0
S7 0.1
10.实施例10
对于每种保存溶液，至少一式三份地进行干燥和测试。在轻轻搅拌下将实施例1中制备的珠在保存溶液S1、保存溶液S0、保存溶液S8和保存溶液S9中放置约20分钟。随后，将珠在室温下在空气干燥器中的盘式干燥器上放置约24小时以获得半干珠。随后，将半干珠在其中吹入干燥的经过滤空气的干燥器中放置约64小时。获得水活度aw≤0.3的干燥珠。
在每种情况下，在4℃的储存条件下在四(4)周的时间内通过测量经干燥珠的CFU/g来测试菌株生存力。至少一式三份地进行测试并且计算一个标准偏差。
实施例10的结果示于表18中，并且当储存在4℃下时，所有的受试保存溶液在4周期间均提供饲料添加剂菌株稳定性。
表18
保存溶液 4周后的CFU/g差(log)
S1 0
S0 2.4
S8 0.1
S9 0
11.实施例11
对于每种保存溶液，至少一式三份地进行干燥和测试。在轻轻搅拌下将实施例1中制备的珠在保存溶液S1、保存溶液S10、保存溶液S11和保存溶液S12中放置约20分钟。随后，将珠在室温下在空气干燥器中的盘式干燥器上放置约24小时以获得半干珠。随后，将半干珠在其中吹入干燥的经过滤空气的干燥器中放置约64小时。获得水活度aw≤0.3的干燥珠。
在每种情况下，在4℃的储存条件下在四(4)周的时间内通过测量经干燥珠的CFU/g来测试菌株生存力。至少一式三份地进行测试并且计算一个标准偏差。
实施例11的结果示于表19中，并且当储存在4℃下时，所有的受试保存溶液在4周期间均提供饲料添加剂菌株稳定性。
表19
保存溶液 4周后的CFU/g差(log)
S1 0.1
S10 0.1
S11 0.4
S12 0.2
12.实施例12
对于每种保存溶液，至少一式三份地进行干燥和测试。在轻轻搅拌下将实施例1中制备的珠在保存溶液S1、保存溶液S13、保存溶液S14和保存溶液S15中放置约20分钟。随后，将珠在室温下在空气干燥器中的盘式干燥器上放置约24小时以获得半干珠。随后，将半干珠在其中吹入干燥的经过滤空气的干燥器中放置约64小时。获得水活度aw≤0.3的干燥珠。
在每种情况下，在4℃的储存条件下在四(4)周的时间内通过测量经干燥珠的CFU/g来测试菌株生存力。至少一式三份地进行测试并且计算一个标准偏差。
实施例12的结果示于表20中，并且当储存在4℃下时，所有的受试保存溶液在4周期间均提供饲料添加剂菌株稳定性。
表20
保存溶液 4周后的CFU/g差(log)
S1 0
S13 0
S14 0.1
S15 0.1
13.实施例13
对于每种保存溶液，至少一式三份地进行干燥和测试。在轻轻搅拌下将实施例1中制备的珠在保存溶液S1、保存溶液S16、保存溶液S17和保存溶液S18中放置约20分钟。随后，将珠在室温下在空气干燥器中的盘式干燥器上放置约24小时以获得半干珠。随后，将半干珠在其中吹入干燥的经过滤空气的干燥器中放置约64小时。获得水活度aw≤0.3的干燥珠。
在每种情况下，在4℃的储存条件下在四(4)周的时间内通过测量经干燥珠的CFU/g来测试菌株生存力。至少一式三份地进行测试并且计算一个标准偏差。
实施例13的结果示于表21中，并且当储存在4℃下时，所有的受试保存溶液在4周期间均提供饲料添加剂菌株稳定性。
表21
保存溶液 4周后的CFU/g差(log)
S1 0
S16 0
S17 0
S18 0.1
14.实施例14
对于每种保存溶液，至少一式三份地进行干燥和测试。在轻轻搅拌下将实施例1中制备的珠在保存溶液S1和保存溶液S19中放置约20分钟。随后，将珠在室温下在空气干燥器中的盘式干燥器上放置约24小时以获得半干珠。随后，将半干珠在其中吹入干燥的经过滤空气的干燥器中放置约64小时。获得水活度aw≤0.3的干燥珠。
在每种情况下，在4℃的储存条件下在四(4)周的时间内通过测量经干燥珠的CFU/g来测试菌株生存力。至少一式三份地进行测试并且计算一个标准偏差。
结果示于表22中，并且当储存在4℃下时，所有的受试保存溶液在4周期间均提供饲料添加剂菌株稳定性。
表22
保存溶液 4周后的CFU/g差(log)
S1 0.1
S19 0.1
简言之，本发明的发明人已令人吃惊且出乎意料地观察到，如本文中所述包含经包埋活大肠杆菌的基质能够在给定时间(例如4周)内保存足够细菌CFU的生存力用于其商业用途。例如，基质成功地掺入经粒化的动物饲料中使得动物饲料可储存/运输/处理并最终施用于动物，同时保留足够的活CFU/g动物饲料以提供与细菌正常相关的有益效果。
注意，为了方便读者，可在本公开内容通篇使用标题或小标题，但是这些不应以任何方式限制本发明的范围。此外，本文中可提出和公开某些理论；然而，其不管正确还是错误均不应以任何方式限制本发明的范围，只要本发明是根据本公开内容实施的即可，不考虑任何特定理论或作用方案。
本说明书通篇引用的所有参考文献出于所有目的均在此通过引用整体并入。
本领域技术人员应了解，在本说明书通篇，没有数量词修饰的名词涵盖包含一个/种或更多个/种的实施方案。本领域技术人员还应了解，在本说明书通篇，与“包括”、“含有”或“以...为特征”同义的术语“包含”是包括性的或开放式的，并且不排除另外的未记载的要素或方法步骤。
除非另外限定，否则本文中使用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。如有冲突，以包含定义的本发明文件为准。
本公开内容中使用的术语“约”、“大约”或“近似”应通常意指在本领域中普遍接受的误差容限内。因此，本文中提供的数量通常包括这样的误差容限，使得术语“约”、“大约”或“近似”即使没有明确说明也可推断出。
虽然已经在相当详细的某些实施方案中对本公开内容进行了描述，但是变化和改进是可能的并且根据本发明的教导对于本领域技术人员将变得明显。

Claims (11)

1.用于提供颗粒形式的包埋在基质中的活大肠杆菌(Escherichia coli，E.coli)的方法，所述基质包含藻酸类，麦芽糖糊精或右旋糖酐，以及蔗糖或海藻糖，所述方法包括：将大肠杆菌与藻酸类混合，形成颗粒，使所述颗粒与包含麦芽糖糊精或右旋糖酐以及蔗糖或海藻糖的保存溶液接触，并且干燥以获得≤0.3的水活度。
2.权利要求1所述的方法，其中所述干燥包括空气干燥。
3.权利要求2所述的方法，其中所述干燥包括在空气干燥器中干燥所述颗粒。
4.权利要求2所述的方法，其中所述干燥包括在干燥器中干燥所述颗粒。
5.权利要求4所述的方法，其中所述干燥包括在空气干燥器中的第一干燥和在干燥器中的第二干燥。
6.权利要求1所述的方法，其中所述干燥包括冷冻干燥。
7.权利要求1所述的方法，其中所述基质包含的所述蔗糖或海藻糖/麦芽糖糊精或右旋糖酐的比值小于10，其中所述比值为重量％/重量％。
8.权利要求7所述的方法，其中所述比值小于5。
9.权利要求7所述的方法，其中所述比值为约1。
10.权利要求1所述的方法，其中所述基质还包含L-谷氨酸的盐。
11.权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述大肠杆菌为非致病性大肠杆菌。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017214727A1 (en) * 2016-06-14 2017-12-21 Prevtec Microbia Inc. Animal feed pellets including a feed additive, method of making and of using same

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102223788A (zh) * 2008-10-22 2011-10-19 由卫生福利和体育大臣代表的荷兰王国 保存混合物及其用途
CN102725393A (zh) * 2010-01-28 2012-10-10 先进生物营养公司 包含生物活性材料的干燥玻璃质组合物
CN104244985A (zh) * 2012-03-23 2014-12-24 先进生物营养公司 生物材料的稳定化组合物

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5389532A (en) * 1988-07-07 1995-02-14 Champagne Moet & Chandon Process of producing a dehydrated polysaccharide gel containing microorganisms for preparing fermented drinks
DE19539574A1 (de) * 1995-10-25 1997-04-30 Boehringer Mannheim Gmbh Zubereitungen und Verfahren zur Stabilisierung biologischer Materialien mittels Trocknungsverfahren ohne Einfrieren
GB9815634D0 (en) * 1998-07-17 1998-09-16 Mars Uk Ltd Animal food composition
JP2007518463A (ja) * 2003-10-02 2007-07-12 ザ バイオ バランス コーポレイション 乾燥した生物学的治療用組成物、その使用、及びその投与のための装置及び方法
CA2552811C (en) * 2004-02-03 2016-11-08 Universite De Montreal Use of f4+ non-pathogenic escherichia coli for growth promotion in animals
DK1973406T3 (da) * 2005-12-28 2014-06-23 Advanced Bionutrition Corp Fremføringsmiddel til probiotiske bakerier omfattende en tør blanding af polysaccharider, saccharider, polyoler i glasform
US8277798B2 (en) * 2006-05-10 2012-10-02 Institut National De La Recherche Agronomique Use of cells containing a specific DNA molecule as cytopathic agents to inhibit the proliferation of cells
US20090041727A1 (en) * 2007-08-08 2009-02-12 Conjugon, Inc. Compositions and Methods for Microbe Storage and Delivery
CN106987525B (zh) * 2009-05-26 2020-10-27 先进生物营养公司 包含生物活性微生物和/或生物活性材料的稳定干粉组合物及其制造方法
US9504750B2 (en) 2010-01-28 2016-11-29 Advanced Bionutrition Corporation Stabilizing composition for biological materials
JP5727611B2 (ja) * 2010-08-13 2015-06-03 アドバンスド バイオニュートリション コーポレイション 生体物質用の乾燥貯蔵安定化組成物
JP6278960B2 (ja) * 2012-07-20 2018-02-14 プレヴテック マイクロビア インコーポレイテッド 非病原性ｆ１８ｅ．ｃｏｌｉ株及びその使用
KR20150012445A (ko) * 2013-07-25 2015-02-04 한국식품연구원 마늘 파쇄물 및 유산균이 포집되어 있는 알지네이트 비드를 포함하는, 생존율이 증진된 식품 발효용 미생물 첨가제 조성물 및 이의 제조방법
KR20150012449A (ko) * 2013-07-25 2015-02-04 한국식품연구원 동결보호제로서 콩가루를 이용하는 생존율이 증진된 식품 발효용 미생물 첨가제 조성물 및 이의 제조방법

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102223788A (zh) * 2008-10-22 2011-10-19 由卫生福利和体育大臣代表的荷兰王国 保存混合物及其用途
CN102725393A (zh) * 2010-01-28 2012-10-10 先进生物营养公司 包含生物活性材料的干燥玻璃质组合物
CN104244985A (zh) * 2012-03-23 2014-12-24 先进生物营养公司 生物材料的稳定化组合物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《Recombinant Escherichia coli cells immobilized in Ca-alginate beads for metabolite production》;Wynant Inneke等;《BIOCATALYSIS AND BIOTRANSFORMATION》;20091231;第27卷(第5-6期);第349页右栏第3段和第351页右栏第5段-352页左栏第1段 *

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