CN107206026A - 用于治疗bdnf依赖性失调的富含脯氨酸的多肽复合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及衍生自哺乳动物初乳的富含脯氨酸的多肽复合物(PRP)，用于治疗与脑源性神经营养因子水平改变以及其调节相关的失调和状况，特别是其中治疗策略基于提高血液的BDNF浓度的失调和状况。所述PRP复合物用于成年人、幼童/婴孩和婴儿的营养，来促进和保护免疫***和神经***的适当发育和功能。PRP可以用于补充改良奶和婴儿配方乳以使之更接近母乳。

Description

用于治疗BDNF依赖性失调的富含脯氨酸的多肽复合物
技术领域
本发明涉及衍生自哺乳动物初乳的富含脯氨酸的多肽复合物，用于治疗与脑源性神经营养因子水平的改变以及其调节相关的失调和状况。特别地，本发明涉及富含脯氨酸的多肽复合物在预防和辅助治疗响应BDNF水平提高的失调和状况中的用途。
富含脯氨酸的多肽复合物旨在用于成年人、幼童/婴孩和婴儿的营养，来促进免疫***和神经***的适当发育和功能。此外，所述复合物可以用于补充婴儿配方乳，从而使其更接近母乳。
背景技术
本领域中熟知哺乳动物初乳是包含免疫***支持因子的健康增强成分的丰富来源。初乳，一种哺乳动物在生产后最初72小时期间产生的前乳液，含有高浓度的各种成分，例如，营养因子、免疫球蛋白、生长因子、细胞因子和特定的免疫细胞，例如，淋巴细胞T、淋巴细胞B、嗜中性粒细胞和巨噬细胞(Borysewicz-Sanczyk and Szczepanski.Postejiyneonatologii.15(1),2009,in Polish)。
富含脯氨酸的多肽复合物(PRP)最初由Janusz等，FEBS Lett.49(2),1974从绵羊初乳中分离。初乳衍生的富含脯氨酸的多肽复合物已经被表征为具有18.000道尔顿的分子量，包括三个非共价连接的亚基。它具有约22％的脯氨酸含量，被称为初乳素(colostrinin)。后来，在其他类型的哺乳动物初乳中鉴定出PRP的类似物。
人类外周血单核细胞的研究证明，富含脯氨酸的多肽复合物刺激血细胞释放关键的免疫***细胞因子，例如，INF-γγ、TNF-α、IL-6和IL-1β，因而强化或抑制了免疫***(恢复稳态)。此外，PRP制品可以促进鼠胸腺细胞的成熟和分化成为活性的淋巴细胞。
富含脯氨酸的多肽复合物的明确定义的生物学活性以及关于阿尔茨海默氏病的病理的长期研究，特别证实了细胞因子和白细胞介素对淀粉样蛋白-β肽(Aβ)聚集的抑制作用(Griffin et al。Brain Pathol.8(1)，1998)，表明PRP可能在多种神经变性失调中起到作用。然而，PRP在阿尔茨海默病中的所谓神经保护作用的机理仍然是未知的。阿尔茨海默病是一种痴呆症，其特征在于广泛的病理状况，导致脑功能的进行性损害，包括记忆丧失症状、合理性、常规性。所有痴呆病例中约50-70％是由于脑中的神经***异常，包括由Aβ组成的老年斑的形成，其是涉及分泌酶活性的淀粉样蛋白β前体(βAPP)的蛋白水解裂解以及tau蛋白过磷酸化和随后的神经原纤维缠结(NFT)形成的结果。
体内研究还证明了富含脯氨酸的多肽复合物的精神活性。在老年大鼠中施用富含脯氨酸的多肽复合物强化了认知功能，显示了与在幼年动物中观察到的类似的方式，在老年啮齿动物中促进空间学习和改善偶然记忆(Popik et al.,Pharmacol.Biochem.Behav.64(1),1999)。
由于通过PRP介导的基因表达提高，富含脯氨酸的多肽复合物在刺激神经元的生长、增殖和分化方面的关键作用，PRP可能在组织再生和皮肤失调治疗方面发现用途。有一些迹象表明，富含脯氨酸的多肽复合物促进了中枢神经***受损神经元的生长和再生，这是神经变性疾病进展中典型的病理变化的关键过程。
还研究了富含脯氨酸的多肽复合物对改善认知功能的作用。与PRP的促认知活性相关的大多数信息获自动物模型、幼年和老年大鼠、鸡，以及阿尔茨海默氏病患者的三次临床试验。体外研究证明了，通过降低一种抗氧化酶，过氧化物歧化酶1(SOD1)的水平，在原代神经元细胞培养物中，富含脯氨酸的多肽复合物在降低淀粉样蛋白-β肽毒性方面的强活性(Froud et al.J.Alzheimers Dis.20(2),2010)。
此外，已经显示了富含脯氨酸的多肽复合物本身是非过敏原性的，甚至可以预防由环境过敏原诱导的炎症。
富含脯氨酸的多肽复合物的抗氧化活性有据可查。几项研究的结果表明，PRP抑制细胞培养物中的一氧化氮(NO)形成，降低细胞内活性氧物质(ROS)的产生和氧化刺激，延缓衰老过程和保护免受神经元损失。体外和体内研究均表明，PRP显著减缓培养细胞的衰老，并延长从快速衰老小鼠分离的细胞的寿命。有记录表明，PRP可以通过减少人类和中国仓鼠细胞培养物中的DNA序列改变来延缓细胞衰老过程。进一步的研究显示，PRP在氧化刺激或暴露于通常用于癌症治疗的两种化学有丝***剂甲基甲磺酸盐和丝裂霉素C的细胞中显示出抗诱变作用。值得注意的是，富含脯氨酸的多肽复合物降低分别导致恶性黑素瘤和鳞状细胞癌发生的UVA和UVB诱导突变的频率。
这些数据以及患有许多失调的患者的血液样品中详细记载的初乳素的体外高免疫活性可能表明，富含脯氨酸的多肽复合物作为活性试剂的可能的用途，如波兰专利PL185442 B1中阐述的，用于治疗化疗和放疗之后细菌和病毒病因的慢性疾病以及获得性免疫缺陷。
公开号WO 98/14473的国际专利申请公开了初乳素用于CNS失调治疗的用途，例如神经失调、精神障碍、痴呆、神经变性疾病、精神病、神经症，以及特别是阿尔茨海默氏病。已经提出初乳素可以用于改善婴儿的免疫***发育，以及在婴孩中对抗免疫缺陷。WO 98/14473的说明书公开了作为膳食补充的初乳素的口服药物组合物，用于治疗婴儿、接受化疗的儿童和成年人、和/或患有恶病质或慢性失调引起的过度体重损耗的成年人。
公开号WO 00/75173的国际专利申请提供了衍生初乳素的肽序列，特别地，所述肽在治疗免疫***和中枢神经***的失调方面是有用的。
欧洲专利说明书EP 1238058 B1公开了初乳素的组成肽作为体外的神经细胞分化促进因子的用途。
在国际专利申请WO 02/13851中，初乳素、其成分肽、以及初乳素的富含脯氨酸的活性类似物被描述为体内和体外的神经细胞分化的促进因子，例如，神经***的多能细胞。利用PC12细胞，已经研究了初乳素和它的类似物将受损的神经元细胞转化为功能性神经元的影响，这一过程与伴随神经营养因子生产，包括神经生长因子(NGF)的神经元细胞分化强烈相关。
美国专利申请US2011/0098216公开了初乳素用于预防和/或治疗肥胖症和肥胖症相关的并发症，包括II型糖尿病、高胆固醇血症、动脉粥样硬化、冠心病、中风、炎症状况，例如但不限于，肠易激综合征、炎症性肠病，包括克罗恩氏病的用途。这些有益的治疗效果被指配给细胞中瘦素和抵抗素的基因表达的初乳素依赖性调节。
借助于波兰专利PL 218693 B1中描述的创新技术，从出生后最初48小时期间产生的牛初乳中分离了富含脯氨酸的多肽复合物的另一种组合物。所述技术包括从初乳中丙酮提取多肽混合物，来获得称为COLOCO prp的独特的复合物物质。COLOCO prp复合物的结构稍微不同于现有技术的富含脯氨酸的多肽复合物组成，是指含有约20％的脯氨酸、重达10kDa低分子量的肽混合物，其特征在于存在高比例的酸性氨基酸(～18％)，非生物学活性的β-乳球蛋白(17kDa)部分，以及不发挥它们自己的生物学活性的相关的非肽成分。
利用外周血单核细胞的体外研究显示了COLOCO prp刺激细胞因子例如IL-1β和IL-6生产的能力，这种作用类似于根据Janusz等人(FEBS LETTERS,49,276-279,1974)早先描述的方法从初乳分离的参照初乳素的作用。
进一步的体外研究显示，在外周血单核细胞的模型中，与参照产品(牛和/或羊初乳素)可比较地，COLOCO prp抑制NO产生并减弱氧化刺激。利用Trolox当量抗氧化剂容量(TEAC)方法评估了这种作用。
我们的研究已经证明了在非生物条件下COLOCO prp减弱Aβ聚集的能力。Aβ单体与COLOCO prp孵育以浓度依赖性的方式有效地阻断了Aβ纤维形成，并破坏了预先聚集的Aβ纤维结构，因而使得它在预防阿尔茨海默氏病典型的早期和晚期神经变性改变方面是有效的。
考虑到早先公开的数据，初乳衍生的富含脯氨酸的多肽复合物具有调节免疫***功能的能力，具有与它们的神经保护性质相组合的抗炎和抗氧化活性。然而，这些有益治疗效果与PRP制剂的纯粹医疗机制之间的相关性的任何经验研究结果迄今尚未知晓。
发明公开
本发明基于本发明人进行的实验研究的结果，证明了富含脯氨酸的多肽复合物治疗对于健康个体中脑源性神经营养因子血清水平的作用。
脑源性神经营养因子(BDNF)是神经生长因子家族的成员，其在神经元和胶质细胞的成熟和分化方面具有显著的作用。已经充分证明，BDNF表达响应于毒性试剂例如Aβ而显著提高，提供了神经保护。就其在适当的神经***活动方面的作用而言，BDNF似乎是最好被表征的神经营养素。因此，BDNF被认为是研究自身免疫性疾病，例如，多发性硬化症和许多其他神经障碍，包括阿尔茨海默氏病，亨廷顿病和帕金森病的脑部病理学的合适的生物标志物。
BDNF水平与免疫缺陷症，包括人类免疫缺陷病毒(HIV)高度相关。已经表明，近年来被批准用于阿尔茨海默氏病治疗的美金刚胺阻止了脑部认知缺陷的发作，这种效果与美金刚胺介导的BDNF表达的增量调节相关。此外，脑内BDNF的提高表达引起了脑中多巴胺和5-羟基色胺浓度的增加。因而，BDNF合成被认为是一种抗抑郁活动。一些数据显示，伴有前炎症性细胞因子的扩大生产的炎症与抑郁样行为的病理有关。在这些状况中，在选定的脑区域中BDNF水平强烈降低，加速了抑郁样症状。因而，用BDNF治疗抑郁患者构成了情绪相关的神经精神疾病的有效治疗。
在几种非神经组织中也观察到BDNF分泌，主要响应于脑部的病理学的状况而表达。BDNF作为免疫***细胞例如淋巴细胞和单核细胞的活动的特异诱导物起作用，刺激巨噬细胞迁移到有病变的脑部区域来活化再生过程。
已经显示了BDNF调节摄食行为、葡萄糖和脂质代谢以及体重维持。降低的血液BDNF浓度常与进食失调相关。
一些数据表明，海马中BDNF水平的降低在衰老期间发生，与认知下降相关，而运动和饮食看起来都提高了海马BDNF表达，并阻止年龄相关的记忆缺陷。
如同其他神经营养因子一样，BDNF介导了哺乳动物脑中的许多活动依赖性过程，包括神经元分化和生长、突触形成和塑性，以及髓鞘形成(Park and Poo,Nat.Rev.Neurosci.14(1),2013)。与这些功能一起，BDNF与包括多发性硬化的各种疾病的发病高度相关。早先的发现表明，BDNF对于病灶性脱髓鞘神经是保护性的，多发性硬化症中脑BDNF表达的提高与髓鞘再生过程的增强有关。
根据Nassar等人的研究(Matern.Child.Nutr.7(2),2011)，按照婴儿发育的Bayley量表-第二版(BSID-II)来评估，血液BDNF水平可能取决于婴儿喂养模式而变化。这项研究显示，母乳组具有更高的BSID-II分值，随后是混合喂养组，然后是配方喂养组，然而这些结果仅在总体行为评分量表(TBRS)和运动质量百分位数值上达到了统计显著性。此外，与接受配方奶的婴儿相比，母乳喂养的婴儿具有显著更高的血清BDNF值，这种正相关性被认为是由于母乳喂养是可能触发BDNF分泌的过程的益处，因为它是婴儿的最快乐平和的情境。
某些证据表明，BDNF在哺乳女性的乳汁中自然发生，由某些类型的细胞例如白细胞产生。这项研究报告了哺乳期间BDNF水平的改变，在哺乳的第3到90天是恒定。另外，BDNF水平在母亲的乳汁中比在哺乳女性的血清中更高，表明它在婴儿膳食中的关键作用。
考虑到这些知识，市场上可获得的常规婴儿配方乳似乎不能满足婴儿的适当发育。
可以积极刺激发育并维持免疫***和神经***的功能的特殊生物制剂的社会需求日益增长，由于它们的天然来源对于使用和同时标准化将是安全的，因而对成年人和儿童都提供了有益的效果。
通过使用根据本发明的生物试剂可以满足该需求，所述生物试剂在以特定的给药方式施用时可以影响关键的免疫***支持，并组合了神经保护作用。
本发明提供衍生自哺乳动物初乳的富含脯氨酸的多肽复合物，用于治疗与脑源性神经营养因子水平的改变以及其调节相关的失调和状况。
如本文使用的，“治疗(treatment)”包括响应脑源性神经营养因子水平调节的状况和失调的治疗性、预防性和辅助性治疗。
如本文使用的，术语“脑源性神经营养因子的调节”是指将由富含脯氨酸的多肽复合物诱导的BDNF血清浓度提高到维持免疫和神经***的适当功能所必需的水平，以及防止由环境因素，例如营养不足、疲倦或慢性刺激所触发的临时性BDNF波动。
本发明人对健康成年个体进行的研究证明，施用富含脯氨酸的多肽复合物引起人血清中BDNF水平的显著提高。
基于本说明书的实验部分描述的关于PRP诱导BDNF水平增加的我们的研究结果，以及确认了耗尽的外周BDNF水平与各种状况与失调发作的强相关性的一般科学知识，假定施用富含脯氨酸的多肽复合物可以防止成年人和儿童的这些病理学状况和失调的发展。
在本发明的一个方面中，富含脯氨酸的多肽复合物旨在用于选自下组的失调的治疗，无限制地包括：精神失调，包括情绪失调、强迫症、重性抑郁症；帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病；脊髓小脑共济失调；由人类免疫缺陷病毒(HIV)诱导的失调；糖尿病；饮食障碍，包括神经性厌食症和神经性贪食症；肥胖症和肥胖症相关失调；青光眼；视网膜异常；中枢神经***脱髓鞘疾病，包括多发性硬化；周围神经病；脑血管疾病，包括中风；偏头痛和其他头痛综合征，心血管疾病等。
本发明的另一个方面提供了富含脯氨酸的多肽复合物在治疗与神经***的功能失常或临时密集脑力劳动、抑郁情绪、记忆下降、专注和记忆困难以及疲倦相关的失调中的用途，来确保神经***的正常功能和维持BDNF依赖性神经元的活动。
富含脯氨酸的多肽复合物的抗自由基保护活性与它调节血液中BDNF水平的能力一起，表明PRP可以用作认知和注意力增强因子，特别适合于有轻微认知缺陷的个体。
本发明的另一方面提供了用于预防用途的富含脯氨酸的多肽复合物，来改善认知功能和增强婴儿和幼童的神经***发育。BDNF在婴儿发育，特别是在生命早期方面的明确作用，以及PRP提高BDNF水平的能力表明，富含脯氨酸的多肽复合物可以充当婴儿和幼童的髓鞘质形成的特异性激活物，从而促进神经***发育。
在本发明的这个方面的特定的实施方式中，所述富含脯氨酸的多肽复合物旨在用作婴儿和幼童的营养添加物/补充剂，特别是对于从出生开始没有母乳喂养的配方乳喂养的、缺乏富含脯氨酸的多肽复合物的婴儿。作为单独的奶源或与母乳喂养组合，用富含PRP的改良的配方乳喂养婴儿，提高了婴孩血液中BDNF的水平，比得上在仅母乳喂养的婴儿中检测到的BDNF水平。
本发明进一步提供了富含衍生自牛初乳的所述富含脯氨酸的多肽复合物的改良的婴儿配方乳，优选地富含包含16％～22％的脯氨酸的所述富含脯氨酸的多肽复合物。
富含牛衍生的富含脯氨酸的多肽复合物、使之更接近母乳的改良的婴儿配方乳的独特组合物在下文中被称为Coloco Mathernized配方(Coloco Mathernized Formula，CMF)。CMF的新的组合物显示了提高婴儿血液中BDNF水平的独特性质。
在本发明的优选的实施方式中，所述改良的婴儿配方乳旨在以PRP在每1公斤体重1～5微克范围内、满足婴儿日常需求的数量施用。
本发明公开的CMF组合物提供了与母乳喂养的婴孩的血液中检测到的水平相当或甚至更高的循环BDNF水平，从而支持了神经***的发育。婴儿配方乳中富集富含脯氨酸的多肽复合物，特别是不含IgG的富含脯氨酸的多肽复合物，决定了它对婴孩的免疫***的额外的有益效果，涉及免疫调节、一般性免疫改善、抗过敏作用、以及保护免于自体免疫过盛。
根据本发明的CMF的营养组合物比市场上可获得的常规配方乳对于婴孩的健康更有益得多，因为婴儿配方富集PRP提高了循环BDNF浓度，其与仅母乳喂养的婴孩的血液中检测到的BDNF水平类似。
本发明的另一方面提供了用作孕妇的营养添加物的所述富含脯氨酸的多肽复合物，以提高母亲和婴孩的血液中的BDNF水平。富含PRP的孕妇膳食促进了免疫调节的活化和抗过敏过程，以及引起了一般免疫的改善。
本发明的进一步的方面提供了富含脯氨酸的多肽复合物用作用于母乳喂养之后和/或配方乳喂养之后较大的婴孩以及用于成年人的营养添加物，以诱导和/或增强神经***的活动和/或实现促认知效果，即，记忆和专注改善。
发明详细说明
根据本发明使用的衍生自哺乳动物初乳的富含脯氨酸的多肽复合物一般是指包含16％～24％的脯氨酸氨基酸残基、优选地20％的脯氨酸的复合物。
富含脯氨酸的多肽复合物分离自大的动物的初乳，优选的分离自牛初乳。它还可获自其他哺乳动物，包括绵羊、山羊和其他农场动物。
在本发明的优选的实施方式中，所述富含脯氨酸的多肽复合物根据波兰专利PL218693 B1中描述的方法获自牛初乳，以下称为COLOCO prp。如本文使用的，术语“COLOCOprp”是指达10kDa的低分子量、含有18％～20％的脯氨酸，优选地20％的脯氨酸的多肽混合物，其特征在于存在高比例的酸性氨基酸(～18％)、非生物学活性的β-乳球蛋白(17kDa)部分以及相伴的非蛋白成分。
在本发明的另一个优选的实施方式中，所述富含脯氨酸的多肽复合物是没有β-乳球蛋白部分的多肽混合物，通过基于分子量的分离从所述COLOCO prp中分离出。
在本发明的又一个优选的实施方式中，所述富含脯氨酸的多肽复合物是根据PL218708 B1中描述的方法从牛初乳分离的乳清蛋白复合物。所述乳清蛋白复合物含有低于1kDa分子量的截断部分以及7％～12.5％的脯氨酸。使用乳清蛋白复合物替代COLOCO prp需要参考本发明中提供的脯氨酸的标准含量(16％～24％)重新计算脯氨酸残基的含量，并且需要与相伴的载体一起标准化为正确的蛋白质水平。
在根据本发明的用途中，所述富含脯氨酸的多肽复合物旨在以治疗或预防有效的剂量水平、根据预定的剂量方案，施用于响应BDNF水平的提高或其调节的个体。
所述富含脯氨酸的多肽复合物的治疗或预防有效的日剂量可以取决于要治疗的特定状况或失调、个体的年龄、体重、一般健康状况以及预期的治疗效果而变化，可以由本领域的技术人员(健康专家或营养学家)在临床研究结果的基础上确定。
在成年人中所述富含脯氨酸的多肽复合物的治疗或预防有效的日剂量优选地在50～1000微克的范围内，更优选的在80～160微克的范围内，可以每天一次施用，或可以以分剂量每天几次地提供。
在建议的优选的给药方案中，所述富含脯氨酸的多肽复合物可以在约2～4周期间内施用给成年人，优选的持续4周，随后是不建议施用所述富含脯氨酸的多肽复合物的时期。无PRP的时期可以是1～4周，最优选地2周。所述剂量循环优选地重复至少一次，更优选的超过一次。
用于补充婴儿配方乳和婴儿食品的所述富含脯氨酸的多肽复合物的日剂量优选地在每千克体重1～5微克的范围内。
用于补充孕妇的膳食的所述富含脯氨酸的多肽复合物的日剂量优选地在50～140微克的范围内。
所述富含脯氨酸的多肽复合物可以以从液体或冻干初乳直接分离的天然形式直接施用，或作为制剂的成分施用，所述制剂包含与生理学可接受的载体和/或其他赋形剂相关联的治疗或预防有效剂量的PRP。
根据本发明使用的富含脯氨酸的多肽复合物可以取决于一般健康状况、失调/疾病的严重度或接受者的目标群体以各种形式提供。所述富含脯氨酸的多肽复合物可以以药物产品、营养保健物、营养增补剂、用于专门医学目的的食品、用于专门营养用途的食品、或膳食增补剂的形式施用。
根据本发明使用的所述药物产品组合物包含活性试剂，所述富含脯氨酸的多肽复合物，与惰性成分和生理学上可接受的载体和/或赋形剂相关联，推荐在给定的制剂内使用，并且不发挥它们自己的治疗作用也不消极干扰所述活性试剂。
根据本发明使用的富含脯氨酸的多肽复合物的药物产品组合物可以以适合于全身施用的任何形式来配制。例如，对于口服施用，它可以被配制为片剂、胶囊剂、淀粉胶囊剂、薄膜包衣片或肠溶包衣片的形式；作为粉末或颗粒剂；作为溶液、口服悬浮液或乳剂。用口服施用的片剂或胶囊剂包含常规使用的赋形剂，例如粘合剂、填料、润湿剂和崩解剂。片剂可以根据通常使用的方法来包被。口服液体形式可以作为水性或油性悬浮液、溶液和乳剂；糖浆、酏剂；用水或其他液体载体临时重构的粉末或冻干物来制备。口服液体制剂可以包括其他成分，例如悬浮试剂、乳化剂、非水性载体(例如可食用的油)或防腐剂。载体/赋形剂的类型和数量取决于药物形式及其施用途径。适合的制剂将利用任何生理学可接受的载体、稀释剂、填料和其他赋形剂，使用本领域公知的技术来制备。
根据本发明使用的富含脯氨酸的多肽复合物的药物制剂还可以配制为营养保健物。营养保健物可以用作膳食补充或提供健康效益的任何其他功能食品。营养保健物通常用于为人的食物摄取补充来自天然食物来源、旨在提供额外的健康效益的营养物。尽管营养保健物在食品中以非常少的数量天然存在，这些物质的生物学重要性对于支持身体的功能是关键的。
根据本发明使用的药物制剂还可以用做专门医学目的的食品，即，用于患有某些疾病、失调或医学状况，其营养需求不能被正常食物满足的个体的食物。
进一步地，根据本发明使用的制剂可以被包括在用于特定营养用途的食物中。术语“用于特定营养用途的食物”是指一类食物，由于它们特别的组成或制造过程，清楚地区分于用于正常消费的食物，并旨在用于患有特定疾病、失调或医学状况的个体。特别地，营养用途必须满足消化过程或新陈代谢被干扰的个体、或处于特定生理状况并将受益于某些物质的受控消费的个体、或健康的婴儿或幼童的特定营养需求。
根据本发明使用的制剂可以用作营养增补剂，其旨在提供在膳食中不能以足够数量消费的营养物。
作为普通扩散或通过免疫调节物的细胞受体跨越上皮的结果，富含脯氨酸的多肽复合物成分，包括COLOCO prp的体积小，结构简单容许多肽容易地穿过粘膜，特别是口腔和咽喉的。因而，所述富含脯氨酸的多肽复合物可以优选地被配制用于口服施用，可以以液体或固体形式提供，用于通过口腔/鼻咽腔的粘膜吸收和/或在消化道中吸收。
对于根据本发明的用途选定的合适的制剂类型将取决于目标群体和具体的治疗用途。根据本发明最优选的剂型可以以片剂、锭剂、舌下片剂、丸剂、胶囊剂、粉末、颗粒剂、蜜汁/饮料或糖浆的形式制备。用于较大儿童的适当剂型可以是，例如，咀嚼胶、糖块、糖果或棒棒糖。用于孕妇的适当剂型可以是，例如，片剂、胶囊剂、滴剂、奶饮料、饮料、咀嚼胶、糖块、糖果或其他。
在本发明的优选的实施方式中，根据本发明使用的富含脯氨酸的多肽复合物是一岁、最优选的6～12个月年龄的婴儿配方乳中的添加物。
根据我们在健康成年受试者中的临床研究结果，所述富含脯氨酸的多肽复合物预计在婴儿群体中发挥相似的活性，包括调节血液BDNF水平。假定的是，向婴儿配方乳中添加富含脯氨酸的多肽复合物以BDNF依赖性的方式提供了婴儿和幼童的神经***的适当发育和功能。动物毒性研究显示了PRP的低毒性(LD50>1.25kg/kg体重)，从而确认了向婴儿配方乳添加PRP是完全安全的。
根据波兰共和国***长关于特定营养用途的食品的法令，衍生自牛源性初乳的富含脯氨酸的多肽复合物被包括在推荐用于婴儿和幼童营养的乳清蛋白的组中，另外表明了富含PRP的制剂的高安全性。
在本发明中公开的Coloco Mathernized配方(CMF)奶的组成富含一定数量的所述富含脯氨酸的多肽复合物，其满足了1到5微克每1公斤体重的范围内对PRP的婴儿每日需求。这一剂量水平预计有效提高婴儿的血液BDNF水平到与母乳喂养的婴孩血液中检测到的水平相当或更高的水平。
所述富含脯氨酸的多肽复合物可以用做单独的治疗或预防活性试剂，或可以与任何治疗试剂或膳食补充剂组合施用。
在本发明的一个方面中，适合的药物组合物中含有的所述富含脯氨酸的多肽复合物可以以每天0.9mg～1.5mg，优选地1.1mg的剂量与B族维生素，特别是与维生素B1共同施用。
在本发明的另一个方面中，所述富含脯氨酸的多肽复合物可以以250mg～2000mg，优选地1000mg的剂量与抗氧化试剂，包括线粒体抗氧化剂，例如N-乙酰基-L-肉碱组合施用。
在本发明的另一个方面中，所述富含脯氨酸的多肽复合物可以与α硫辛酸组合使用。
进一步地，所述富含脯氨酸的多肽复合物可以与二十二碳六烯酸(DHA)组合施用。作为婴儿食品中最常用的成分之一，DHA被包括在omega-3脂肪酸组中，具有一系列健康效益，例如，支持神经***发育和促进髓鞘形成过程。DHA缺乏可能与儿童的神经失调发作和发展例如ADHD相关。PRP与DHA的组合可以有益地用于婴儿配方乳中，为神经元提供髓鞘质形成和细胞膜修复的建筑材料(DHA)，以及提供髓鞘形成过程的特异性启动因子。
在本发明的另一方面中，所述富含脯氨酸的多肽复合物可以与显示了溶解预先存在的tau聚集物(神经纤丝缠结，NFT)的能力的试剂，或与tau蛋白聚集的抑制物例如次甲基蓝组合施用。
健康志愿者中进行的研究的结果证明了，分离自哺乳动物初乳的所述富含脯氨酸的多肽复合物在健康成年人群体中是安全的，并强化了血液BDNF水平。因而，根据本发明，所述富含脯氨酸的多肽复合物可以有益地用于与BDNF水平波动或其调节相关的失调和状况的预防性和辅助性治疗。特别地，由于使用所述富含脯氨酸的多肽复合物作为成年人和儿童的膳食成分，以及用于婴儿的食品增补剂和改善的配方乳，获得了有益的治疗效果。由于其对婴儿血液中BDNF水平提高的作用，用所述富含脯氨酸的多肽复合物补充婴儿配方乳使其配方更接近母乳，从而对于儿童健康实现比市场上可获得的没有PRP的常规配方更有益的营养效果。对于不能母乳喂养的婴孩的健康和发育，Coloco Mathernized配方(CMF)营养组合物将是最有价值的。
通过以下实施例说明本发明。
实施例
生物学研究
在该生物学研究中，测试的富含脯氨酸的多肽复合物是通过PL 218693 B1中描述的方法从牛初乳中分离的COLOCO prp。
通过PL 218693 B1中描述的方法从牛初乳分离的富含脯氨酸的多肽复合物COLOCO prp，与M.Janusz等人(FEBS LETTERS 1974,49,276-279)的羊初乳素的组成比较在表1中示出。COLOCO prp的氨基酸分布通过反相HPLC测定。
表1
氨基酸残基 Janusz等人的羊初乳素(％) COLOCO prp复合物(％)
Asp/Asn 2,56 4,81
Ser 5,27 6,57
Glu/Gln 14.90 14.01
Gly 2.32 3.76
His 1.94 2.78
Arg 1.80 2.96
Thr 6.55 4.28
Ala 1.38 3.27
Pro 22.90 20.68
Tyr 1.62 2.18
Val 12.85 9.85
Met 3.93 3.24
Lys 7.16 4.47
He 2.48 6.36
Leu 9.60 8.24
Phe 4.72 4.31
Trp - -
Cys 1.05 -
人类证据
对根据年龄分配到3个组(范围18～75岁)的361个个体进行了COLOCO prp对认知功能的作用评估的双盲随机的研究。在治疗组中，COLOCO prp按照以下日程以120μg/天的单次剂量施用：COLOCO prp治疗(4周)；2周间断；COLOCO prp治疗(4周)；2周间断；COLOCOprp治疗(4周)，产生16周的研究时间。相同模式的施用也用于对照(安慰剂)组。
神经心理学评估
使用选定的神经心理学测试评估COLOCO prp影响健康受试者的认知技能的能力。在3个亚群的受试者中评估COLOCO prp治疗的作用，预计他们在COLOCO prp治疗之后获得最大的健康益处。
《多任务(MT)组》，被定义为青年成年人，男性和女性，年龄18-25岁的群体。在这个组中，根据以下参数评估了完成研究的122名受试者：治疗组或对照(安慰剂)组；研究的中心：波兹南或华沙。在第1次就诊期间，研究中包括的所有受试者完成了多任务介质问卷(MMQ)。根据MMQ，产生经验性的指数MMI。
《注意力缺陷性状(ADT)组》，被定义为成年人，男性和女性，年龄25-55岁的群体。在这个组中，根据以下参数评估了完成研究的116名受试者：治疗组或对照(安慰剂)组；研究的中心：波兹南或华沙。为了包括在该研究中，在第1次就诊期间，所有的受邀受试者完成了成年人ADHD自我报告量表(ASRS-v1.1)症状清单。
《年龄相关的记忆损伤组》，被定义为年龄>55岁、男性和女性的群体。在这个组中，根据以下参数评估了完成研究的123名受试者：治疗组或对照(安慰剂)组；研究的中心：波兹南或华沙。在第1次和第3次就诊期间，所有受试者完成了MoCA(蒙特利尔认知评估)。在第1次就诊期间，所有受试者被评估为患有轻微的认知损伤(MCI)。根据MoCA测试，分值低于26点的受试者未被包括在该研究中。还考虑了在第1次和第3次就诊时记录的MoCA测试的值之间的差异，来评估AAMI组中COLOCO prp方案的效力。
为了评估认知表现，特别是记忆和注意力技能，在所有三次就诊期间，将来自CANTAB神经心理学小组的4个认知测试应用于所有参加研究的受试者。
为了比较研究受试者的平均分值，使用了混合效应模型中重复测量的多因素方差分析。如果结果不符合变量分布的正态性假说，并且由于对照组数量较少，则用非参数检验确认MANOVA结果。
图1说明了DMS(对样本的延迟匹配)的变化的差异。对于AAMI组，在就诊之间组内测量的***中的正确百分比。在安慰剂组中，第1次就诊的平均值是82.5，标准偏差1,483，而在治疗组中是78.333，标准偏差1.508。在第3次就诊时，这些值是：84；安慰剂组194，标准偏差1.359；治疗组84.083，标准偏差1.381(第1次就诊vs第3次就诊，F＝3.005；p＝0.086，eta2＝0.24)。
图2显示了PAL(配对相关学习)方面的差异。对于MT组的就诊之间的组内测量的***中的总误差(调节的)(充分测量的影响F＝5.072；p＝0.007，eta2＝0.43)。
图3说明了ADT组的就诊之间组内测量的***中RVP.A(快速视觉信息处理)值的变化中的差异。在安慰剂组中，第1次就诊的平均值是0.888，标准偏差0.006，而在治疗组中是0.892，标准偏差0.006。在第3次就诊时，这些值是：安慰剂组0.918，标准偏差0.007；治疗组0.936，标准偏差0.007(第1次就诊vs第3次就诊，F＝3.039；p＝0.084，eta2＝0.26)。
在华沙中心的年龄>55岁的9人中(AAMI/OLD组)在募集就诊期间发现低比例的MoCA(小于20点)，表明显著的认知缺陷，其可能意味着痴呆—所谓的MCI(轻微认知损伤)的早期阶段。服用COLOCO prp 4个月之后，重新检查了这些人。与分配到AAMI/OLD组并服用COLOCO prp产品的其他研究参与者相比，上述9名参与者展现了最高程度的认知改善。在该组中，改善的平均值是5点(对于某些人，其多达9点)，相比较其他测试为3.5点。这个组中的少数参与者没有容许全面的解释，但这可能表明，在强缺陷的情况下，COLOCO prp的有益性质最有效地自我显示。
确认了这一推理的是与MT组(最年轻的组)相关的观察。使用介质多任务问卷(MMQ)并计算介质多任务指数(MMI)，有可能将这个组区分为所谓的重多任务者和轻多任务者(它们的差异为一个标准偏差)。再一次，在华沙，来自治疗组的重多任务者中，，第1次和第3次就诊之间的改善的平均值高于轻多任务者(Light Multitaskers)的情况。这适用于认知表现指数(CPI)，其在CANTAB测试组中包括的四项测试(PAL、RTI、DMS、RVP)的基础上计算。观察集中于4个人。
图4显示了CPI值的变化，其用于评估MT组中的认知功能。
神经心理学测试的结论：
研究的神经心理学(认知)部分表明，在相对短的观察期(16周)内，COLOCO prp可以：
·在最老年的组即AAMI(“OLD”)中提高短期视觉记忆的效率，如DMS测试结果(变量：正确百分比，第1次就诊vs第3次就诊，F＝3.005；p＝0.086，eta2＝0.24)所指示的。
·在最年轻的组-MT中改善学习能力和空间记忆，通过PAL测试结果证明(变量：调节的总误差，组内效应的分析；F＝5.072；p＝0.007，eta2＝0.43)。
·在平均组即ADT中提高响应刺激的反应速度，组间分析的***中RTI测试结果所指示的(变量：单一反应时间，可重复的组内分析安慰剂vs.治疗，F＝2.793；p＝0.097，eta2＝0.24)。
·积极影响集中(关注)能力，RVP测试结果所指示的(变量：RVP.A；第1次就诊vs第3次就诊，F＝3.039；p＝0.084，eta2＝0.26)。
生物化学分析：
为了阐明COLOCO prp的促认知性质，测量了大脑活动的特异性生物标记物BDNF的浓度。BDNF在突触可塑性、诱导长期增强作用(LTP)和神经元分化和存活(神经保护)方面具有显著作用。评估基线时(第1次就诊)和研究末尾(第3次就诊)采集的血液样品中的BDNF水平。
图5显示了研究结果的图形，显示为相应的年龄组中95％置信区间内的平均值和标准偏差，以及显著性的水平。考虑年龄组，在用COLOCO prp治疗的MT、ADT和OLD组中，分别78％、44％和62.5％的受试者有血清BDNF水平的提高。在对照(安慰剂)组中，在18％的MT受试者、23.5％的ADT受试者和30％的OLD个体中发现BDNF水平更高。另外，生物化学分析显示某些参与者中BDNF浓度的显著降低。在用COLOCO prp治疗的36.9％的受试者中血清BDNF水平降低，在对照组的75.8％的受试者中血清BDNF水平降低。
在表2中，实验组的值显示为治疗组和安慰剂组的百分比的平均值。研究结果显示了，与安慰剂组相比，在用COLOCO prp治疗的所有参与者的血清中统计学上显著更高的BDNF水平(F(l,125)＝27.2；p<0.001,eta2＝0.55)。
表2.相对于对照(安慰剂)组，COLOCO prp治疗的受试者的血清BDNF浓度。
(1)改善/恶化/相同的BDNF水平的参与者的数量；
(2)改善/恶化/相同的BDNF水平的参与者相对于所有参与者(n＝125)的百分比。
在表3中呈现了形态学的测试结果。在两个实验组之间，对于所有白细胞的水平，淋巴细胞的百分比稍微不同。
表3.在COLOCO prp治疗的组中和在安慰剂组中，对于白细胞的总水平，淋巴细胞的百分比的改变。
(1)改善/恶化/相同的淋巴细胞水平的参与者的数量；
(2)改善/恶化/相同的淋巴细胞水平的参与者相对于所有参与者(n＝125)的百分比。
生物化学分析的结论：
生物化学分析显示用COLOCO prp治疗的63.1％的受试者中BDNF水平提高(chi2(l)＝19.46；p<0.001；OR＝0.1868，95％CI＝0.0866-0.4031)。在COLOCO prp治疗组中，在13％的受试者中淋巴细胞的水平回到了被认为是生理学水平的浓度范围(chi2(2)＝9.977；p＝0.006814)，表明COLOCO prp调节和恢复免疫***稳态的能力。
在研究末尾的最后就诊期间，询问所有参与者来给出在治疗期间可能发生的出乎意料和不舒服的症状。接受COLOCO prp的患者都没有报告副作用，表明COLOCO prp可以被人类安全地使用。
实施例1
药物组合物(片剂)：
含有以下成分的片剂的总重量是530mg。
富含COLOCO prp的阶段1婴儿配方乳(GM-1C)
阶段1配方乳是用于0-5个月婴孩的婴儿配方，商业上可获得的MAMI LAC 1，补充数量为每100mg配方乳粉中20μg的COLOCOprp，提供每100ml即饮产品中2.7μg的COLOCO prp剂量。
富含COLOCO prp的阶段2第二代配方乳(GM-2C)
阶段2配方乳是用于6-12个月婴孩的第二代配方，商业上可获得的MAMI LAC 2，补充数量为每100mg配方乳粉中40μg的COLOCO prp，提供每100mL即饮产品中5.6μg的COLOCOprp剂量。

Claims (19)

1.一种衍生自哺乳动物初乳的富含脯氨酸的多肽复合物，所述富含脯氨酸的多肽复合物用于治疗与脑源性神经营养因子水平的改变以及其调节相关的失调和状况。
2.如权利要求1所述的富含脯氨酸的多肽复合物，其中，所述富含脯氨酸的多肽复合物用于治疗选自由以下失调和状况组成的组：精神失调，包括情绪失调、强迫症、重性抑郁症；帕金森氏病；亨廷顿氏病，阿尔茨海默氏病；脊髓小脑共济失调；由人类免疫缺陷病毒(HIV)诱导的失调；糖尿病；饮食障碍，包括神经性厌食症和神经性贪食症；肥胖症和肥胖症相关失调；青光眼；视网膜异常；中枢神经***脱髓鞘疾病，包括多发性硬化；周围神经病；脑血管疾病，包括中风；偏头痛和其他头痛综合征，心血管疾病。
3.如权利要求1所述的富含脯氨酸的多肽复合物，其中，所述富含脯氨酸的多肽复合物用于治疗与神经***的功能失常相关的疾病或临时密集脑力劳动、抑郁情绪、记忆下降、专注和记忆困难以及疲倦相关的失调。
4.如权利要求1所述的富含脯氨酸的多肽复合物，其中，所述富含脯氨酸的多肽复合物向个体施用有效日剂量，以保护脑中的神经活动。
5.如权利要求1～4任一项所述的富含脯氨酸的多肽复合物，其中，所述富含脯氨酸的多肽复合物以药物产品、营养保健物、营养增补剂、用于专门医学目的的食品、用于特定营养用途的食品或膳食补充剂的形式进行配制。
6.如权利要求1所述的富含脯氨酸的多肽复合物，其中，所述富含脯氨酸的多肽复合物用于配方乳的营养添加物，特别是用于从出生起没有母乳喂养的婴儿，以使得它更接近母乳。
7.如权利要求1所述的富含脯氨酸的多肽复合物，其中，所述富含脯氨酸的多肽复合物用于母乳喂养之后和/或配方乳喂养之后较大的婴孩和用于成年人的营养添加物，以诱导和/或增强神经***的活动和/或实现促认知效果。
8.如权利要求1所述的富含脯氨酸的多肽复合物，其中，所述富含脯氨酸的多肽复合物用于孕妇的营养添加物，以提高母亲和婴孩的血液中的BDNF水平。
9.如权利要求1所述的富含脯氨酸的多肽复合物，其中，所述富含脯氨酸的多肽复合物从牛或任何其他农场动物的初乳中分离。
10.如权利要求9所述的富含脯氨酸的多肽复合物，其中，所述富含脯氨酸的多肽复合物包括16％～22％的脯氨酸，以及任选地，18％的酸性氨基酸和β-乳球蛋白部分。
11.如权利要求9所述的富含脯氨酸的多肽复合物，其中，所述富含脯氨酸的多肽复合物不含β-乳球蛋白部分。
12.如权利要求9所述的富含脯氨酸的多肽复合物，其中，所述富含脯氨酸的多肽复合物是从牛初乳分离出的乳清蛋白复合物，包括分子量低于1kDa的截断部分和7％～12.5％的脯氨酸。
13.如权利要求1所述的富含脯氨酸的多肽复合物，其中，所述富含脯氨酸的多肽复合物以适合于口服施用的形式配制。
14.如权利要求1所述的富含脯氨酸的多肽复合物，用作单独的治疗或预防活性试剂，或与任何治疗试剂或膳食补充剂的组合。
15.一种组合物，包括如权利要求1所述的从哺乳动物初乳分离出的富含脯氨酸的多肽复合物，其中，所述富含脯氨酸的多肽复合物以药物组合物、营养保健物、营养增补剂、用于专门医学目的的食品、用于特定营养用途的食品或膳食补充剂的形式进行配制。
16.如权利要求15所述的组合物，包括在50～1000微克的范围内有效日剂量的用于成年人的所述富含脯氨酸的多肽复合物，优选地，在80～160微克的范围内有效日剂量。
17.如权利要求1所述的从牛初乳分离出的富含脯氨酸的多肽复合物，其中，所述富含脯氨酸的多肽复合物是改进的配方乳或婴儿营养的配方乳的添加物，以使婴儿血液中的BDNF水平提高到与母乳喂养的婴孩血液中检测到的水平相当或更高的水平。
18.一种改进的婴儿配方乳，所述婴儿配方乳富含有衍生自牛初乳的包含16％～22％的脯氨酸的富含脯氨酸的多肽复合物。
19.如权利要求19所述的改进婴儿配方乳，包括PRP在每1公斤体重1～5微克范围内的满足婴儿日常需求的数量的富含脯氨酸的多肽复合物。
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