CN107188965A - 抗dog1蛋白单克隆抗体及其用途 - Google Patents

抗dog1蛋白单克隆抗体及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN107188965A
CN107188965A CN201710535399.7A CN201710535399A CN107188965A CN 107188965 A CN107188965 A CN 107188965A CN 201710535399 A CN201710535399 A CN 201710535399A CN 107188965 A CN107188965 A CN 107188965A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dog1
monoclonal antibody
oti1c6
albumen
kit
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710535399.7A
Other languages
English (en)
Inventor
何为无
马东晖
魏海涛
陈才伟
褚伯阳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
WUXI ORIGENE BIO-TECHNOLOGY CO LTD
Original Assignee
WUXI ORIGENE BIO-TECHNOLOGY CO LTD
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by WUXI ORIGENE BIO-TECHNOLOGY CO LTD filed Critical WUXI ORIGENE BIO-TECHNOLOGY CO LTD
Priority to CN201710535399.7A priority Critical patent/CN107188965A/zh
Publication of CN107188965A publication Critical patent/CN107188965A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3046—Stomach, Intestines
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57446—Specifically defined cancers of stomach or intestine
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57488—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds identifable in body fluids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及生物技术领域，公开了一种杂交瘤细胞株(保藏编号为CGMCC No.13821)，以及由此杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体OTI1C6。本发明还涉及单克隆抗体OTI1C6在制备用于检测DOG1蛋白的免疫检测工具中的应用，含单克隆抗体OTI1C6的免疫组化试剂盒，以及单克隆抗体OTI1C6在制备用于标记肿瘤的试剂盒中的应用。本发明所述单克隆抗体可与DOG1蛋白特异性结合，而与细胞内其他蛋白无交叉反应，显著提高了DOG1蛋白免疫检测的特异性、准确性和可靠性。

Description

抗DOG1蛋白单克隆抗体及其用途
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及可特异结合DOG1蛋白的单克隆抗体OTI1C6、产生所述单克隆抗体的细胞株及应用该抗体用于诊断的方法和用途。
背景技术
DOG1(Discovered on gastrointestinal stromal tumors protein 1)是2004年由West等利用cDNA微阵列技术筛选出的一个特异性高表达于胃肠道间质瘤((gastrointestinal stromal tumor,GISTs)的基因，别名ORAOV2、TMEM16A、FLJ10261和ANO1，定位于人染色体11q13位点，含有26个外显子码产物为986个氨基酸组成，相对分子质量为114kD。该蛋白有8个穿膜的功能区，研究表明其可能是钙离子调控的氯离子通道蛋白。
研究证实，DOG1蛋白选择性高表达于GISTs，对上皮样胃间质瘤、PDGFRα突变间质瘤、胃肠道外间质瘤、转移性间质瘤以及儿童间质瘤都有良好的灵敏度及特异度，DOG1在GISTs中的表达率为90％～95％，是一种较敏感、特异的标志物且其表达并不依赖于KIT或PDGFRα基因突变情况。临床上常用免疫组织化学(IHC)病理实验检测肿瘤细胞中蛋白的表达状况，然而IHC实验的核心为特异性结合蛋白的单克隆抗体，其性能的优劣直接决定着整个检测的灵敏度和特异性。因此，研制出一种结合特异性较高的针对DOG1蛋白的单克隆抗体对IHC检测DOG1表达水平具有重要的意义。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种结合特异性较高的DOG1蛋白的单克隆抗体，及其在制备用于检测DOG1蛋白的免疫检测工具中的应用。
本发明提供了一种杂交瘤细胞株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称为CGMCC)，保藏日期为2017年4月6日，保藏编号为CGMCC No.13821。
本发明还提供了一种特异性结合DOG1蛋白的单克隆抗体OTI1C6，由上述杂交瘤细胞株产生。
本发明所述单克隆抗体的制备方法如下：
(1)重组表达载体的构建：根据DOG1 ORF核苷酸序列(DOG1 ORF核苷酸序列如SEQID NO.1所示，2961bp；DOG1氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示)
设计引物PCR扩增DOG1 ORF第1bp位到第999bp位序列，基因两侧分别引入限制性内切酶位点SgfI和MluI，***表达载体pET23a-N-His，构建DOG1氨基酸序列第1位到第333位的重组表达质粒pET23a-rDOG1；上游扩增引物序列，SEQ ID NO.3:CACGCGATCGCATGAGGGTCAACGAGAAGT下游扩增引物序列SEQ ID NO.4:ACCGACGCGTCTAGGCGAAGTACAGGCCGATC
(2)DOG1重组蛋白的表达与纯化：将DOG1重组表达质粒转化E.Coli细胞，裂解离心获得上清，镍柱亲和层析柱纯化，获得纯化的DOG1重组蛋白；
(3)单克隆抗体的筛选与制备：采用上述纯化的DOG1重组蛋白免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾脏细胞与SP2/0细胞进行融合，有限稀释法获得单克隆，ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞，获得能分泌抗DOG1特异性抗体的杂交瘤细胞株，命名为OTI1C6，亚型鉴定为IgG2a；通过无血清培养基制备抗体，通过亲和层析柱纯化获得DOG1单克隆抗体OTI1C6。分别通过Western Blot、免疫组化实验验证该单克隆抗体的灵敏度和特异性。
本发明还提供了单克隆抗体OTI1C6在制备用于检测DOG1蛋白的免疫检测工具中的应用。
具体地，所述免疫检测工具为试剂盒、芯片或试纸。
在具体的实施例中，本发明提供了一种免疫组化检测试剂盒，包括上述单克隆抗体OTI1C6，可检测组织细胞中DOG1的表达状况。
本发明还提供了上述单克隆抗体在制备用于标记肿瘤的试剂盒中的应用。其中所述肿瘤具体是指肿瘤细胞的增殖与DOG1的表达密切相关的肿瘤，包括但不限于胃肠道间质瘤、直肠癌。
与现有技术相比，本发明提供了一种杂交瘤细胞株(保藏编号为CGMCCNo.13821)，以及由此杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体OTI1C6。本发明还提供了单克隆抗体OTI1C6在制备用于检测DOG1蛋白的免疫检测工具中的应用，含单克隆抗体OTI1C6的免疫组化试剂盒，以及单克隆抗体OTI1C6在制备用于标记肿瘤的试剂盒中的应用。本发明所述单克隆抗体可与DOG1蛋白特异性结合，真实反映肿瘤细胞内DOG1蛋白表达水平，可应用于胃肠道间质瘤、直肠癌DOG1蛋白表达水平的检测。
保藏信息
用于保藏的杂交瘤细胞株OTI1C6的分类命名为：鼠抗人胃肠道间质瘤蛋白1(Dog-1)单克隆杂交瘤细胞株；
保藏单位全称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；
保藏单位简称：CGMCC；
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；
保藏日期：2017年4月6日；
保藏编号：CGMCC No.13821。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示实施例1克隆位点设计如图，其中底纹部分为ORF区；
图2示实施例4***固定、石蜡包埋的Human gastric stromal tumor免疫组化结果图(一抗为DOG1单克隆抗体OTI1C6)；
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1、DOG1重组表达质粒的构建
以从美国傲锐东源生物科技有限公司获得的质粒RC229400(含DOG1ORF 2961bp)为模板，设计两条引物并分别引入酶切位点SgfI和MluI，克隆入表达载体pET23a-N-His，建立DOG1重组表达质粒。克隆位点设计如图1所示。
实施例2、DOG1重组蛋白的表达与纯化
1、转化E.coli细胞：将100ul感受态细胞置于冰上融化后加入质粒DNA轻混匀，冰浴30min后42℃热激90s，然后将其继续冰浴1-2min。在超净台内加入500ul新鲜无抗LB培养基，于37℃摇床孵育45min后取适量菌液均匀涂布于含抗生素的平板上，将培养皿倒置于37℃恒温培养箱中培养过夜。
2、裂解细胞：挑取单克隆于新鲜培养基中，37℃、200rpm培养至OD值达到0.4～0.6时加入IPTG(终浓度1mM)诱导培养7h。离心收集菌体，然后用裂解缓冲液重悬菌体，超声破碎20min后于4℃下12000rpm离心20min，收集上清。取少量上清蛋白用anti-His抗体做WB鉴定。
3、镍柱亲和层析柱纯化：用缓冲液平衡镍柱，将上清用0.45μm滤膜过滤后上样并收集流出，用缓冲液淋洗去除未结合的蛋白，最后用含不同浓度咪唑的洗脱液洗脱，分别收集后进行SDS-PAGE鉴定，将符合要求的洗脱蛋白合并加入10％甘油，纯化后的重组DOG1蛋白用SDS-PAGE鉴定。
实施例3、DOG1单克隆抗体的制备与筛选
根据标准方法用重组产生的纯化的DOG1蛋白片段用于对Balb/c小鼠(北京维通利华实验动物技术有限公司)进行免疫。具体方法如下：
1、动物免疫：经过纯化的DOG1抗原以完全弗氏佐剂乳化，采用皮下或腹腔注射方法免疫6-8周龄Balb/c小鼠，免疫剂量为50μg/只，间隔两周后进行第二次免疫，以不完全弗氏佐剂乳化，免疫剂量为50μg/只。免疫两次后取尾血以ELISA法梯度稀释测定血清效价；根据结果确定是否加强免疫，选取抗体效价最高的小鼠进行细胞融合。
2、细胞融合：骨髓瘤细胞采用Balb/c来源的sp2/0，融合时处于对数生长期；取已免疫小鼠脾脏，制成淋巴细胞单细胞悬液；小鼠脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞以1:5-1:10混合，滴加37℃的50％PEG(PH 8.0)1mL，加入不完全培养基及其余终止液，离心弃上清后加入HAT培养基悬浮混匀，MC定容到50mL，分装到3.5cm培养皿中，放于湿盒中，置于37℃、5％CO2恒温培养箱中进行培养。
3、筛选和克隆：融合7-10天内挑选细胞克隆，使用DOG1纯化重组蛋白进行ELISA测试。标记细胞株号。对阳性孔细胞进行有限稀释，每次有限稀释后5-6天测定ELISA值，挑取OD280阳性值较高的单克隆孔进行有限稀释，直至ELISA测定96孔板全板结果为阳性。挑取阳性值高的单克隆定株。其对应融合板细胞株为OTI1C6。
4、腹水单抗的制备与纯化：10-12周龄的雄性Balb/c小鼠腹腔注射0.5ml降植烷，一周后每只小鼠用1mL注射器腹腔注射经PBS洗涤重悬的单克隆细胞悬液，细胞用量为5×106/只，每株抗体打2只小鼠。待小鼠腹水积聚后收集腹水，离心取上清，亲和层析法进行腹水纯化，根据抗体亚型选择相应柱料，细胞株OTI1C6产生的单抗为IgG2a，采用protein G进行纯化。纯化后的单抗浓度测定、WB检测、分装、冻存在-20℃。
实施例4、单克隆抗体OTI1C6为一抗的免疫组化检测
(1)、实验方法：
1、取***固定的人***组织与人扁桃体组织块进行石蜡包埋，使用Finesse组织切片机进行切片，组织厚度为6μm。
2、脱蜡与水化：分析纯二甲苯3×10min，无水乙醇3×10min，95％乙醇5min，85％乙醇5min，75％乙醇5min，去离子水浸泡3min×3次
3、加入抗原修复液(0.01M，pH6.0枸橼酸钠缓冲液)高压锅高压热修复3min，待高压锅温度降至约90℃时，打开高压锅，取出标本，然后自然冷却至室温。去离子水浸泡3min×3次。
4、使用3％过氧化氢灭活组织内源性过氧化物酶，室温静置10min。去离子水浸泡5min×3次。
5、加上封闭液(PBS+5％脱脂奶粉+5％正常山羊血清)，37℃孵育60min。
6、去除封闭液，勿冲洗，加入DOG1单抗(OTI1C6)，稀释比：1:150，使用封闭液进行稀释。置于湿盒中，37℃孵育60min。PBST(0.1％Tween-20)洗涤2次，每次洗涤5min。PBST(0.02％Tween-20)洗涤1次，每次洗涤5min。
7、滴加Polink-试剂盒2(Catlog No.D37-15)试剂1，37℃孵育10-20分钟。使用PBS洗涤3次，每次5min。滴加Polink-2试剂盒(Catlog No.D37-15)试剂2，37℃孵育10-20分钟，使用PBS洗涤3次，每次5min。
8、应用DAB溶液(中杉金桥ZLI-9019)显色，显色3～10min。蒸馏水洗涤。
9、苏木精复染细胞核2min，蒸馏水漂洗，1％盐酸分化。蒸馏水漂洗3次，室温静置1min。
10、脱水和透明：75％乙醇5min，100％乙醇5minx3次，85％乙醇5min，95％乙醇5min，100％乙醇3×5min；二甲苯3×5min，中性树胶封片。
11、镜检，见图2。
(2)、实验结果：
由图2结果可见，在Human gastric stromal tumor中可见到特异性胞膜染色。结果与DOG1在细胞内的定位及组织表达特异性一致，表明单克隆抗体OTI1C6可用于免疫组织化学检测DOG1蛋白的水平。
SEQUENCE LISTING
<110>无锡傲锐东源生物科技有限公司
<120>抗DOG1蛋白单克隆抗体及其用途
<130> MP1502004
<160> 2
<170>PatentIn version 3.3
<210> 1
<211>2961
<212> DNA
<213>人工序列
<400> 1
ORIGIN
1 ATGAGGGTCA ACGAGAAGTA CTCGACGCTC CCGGCCGAGG ACCGCAGCGT CCACATCATC
61 AACATCTGCG CCATCGAGGA CATCGGCTAC CTGCCGTCCG AGGGCACGCT GCTGAACTCC
121 TTATCTGTGG ACCCTGATGC CGAGTGCAAG TATGGCCTGT ACTTCAGGGA CGGCCGGCGC
181 AAGGTGGACT ACATCCTGGT GTACCATCAC AAGAGGCCCT CGGGCAACCG GACCCTGGTC
241 AGGAGGGTGC AGCACAGCGA CACCCCCTCT GGGGCTCGCA GCGTCAAGCA GGACCACCCC
301 CTGCCGGGCA AGGGGGCGTC GCTGGATGCA GGCTCGGGGG AGCCCCCGAT GGACTACCAC
361 GAGGATGACA AGCGCTTCCG CAGGGAGGAG TACGAGGGCA ACCTCCTGGA GGCGGGCCTG
421 GAGCTGGAGC GGGACGAGGA CACTAAAATC CACGGAGTCG GGTTTGTGAA AATCCATGCC
481 CCCTGGAACG TGCTGTGCAG AGAGGCCGAG TTTCTGAAAC TGAAGATGCC GACGAAGAAG
541 ATGTACCACA TTAATGAGAC CCGTGGCCTC CTGAAAAAAA TCAACTCTGT GCTCCAGAAA
601 ATCACAGATC CCATCCAGCC CAAAGTGGCT GAGCACAGGC CCCAGACCAT GAAGAGACTC
661 TCCTATCCCT TCTCCCGGGA GAAGCAGCAT CTATTTGACT TGTCTGATAA GGATTCCTTT
721 TTCGACAGCA AAACCCGGAG CACGATTGTC TATGAGATCT TGAAGAGAAC GACGTGTACA
781 AAGGCCAAGT ACAGCATGGG CATCACGAGC CTGCTGGCCA ATGGTGTGTA CGCGGCTGCA
841 TACCCACTGC ACGATGGAGA CTACAACGGT GAAAACGTCG AGTTCAACGA CAGAAAACTC
901 CTGTACGAAG AGTGGGCACG CTATGGAGTT TTCTATAAGT ACCAGCCCAT CGACCTGGTC
961 AGGAAGTATT TTGGGGAGAA GATCGGCCTG TACTTCGCCT GGCTGGGCGT GTACACCCAG
1021 ATGCTCATCC CTGCCTCCAT CGTGGGAATC ATTGTCTTCC TGTACGGATG CGCCACCATG
1081 GATGAAAACA TCCCCAGCAT GGAGATGTGT GACCAGAGAC ACAATATCAC CATGTGCCCG
1141 CTTTGCGACA AGACCTGCAG CTACTGGAAG ATGAGCTCAG CCTGCGCCAC GGCCCGCGCC
1201 AGCCACCTCT TCGACAACCC CGCCACGGTC TTCTTCTCTG TCTTCATGGC CCTCTGGGCT
1261 GCCACCTTCA TGGAGCACTG GAAGCGGAAA CAGATGCGAC TCAACTACCG CTGGGACCTC
1321 ACGGGCTTTG AAGAGGAAGA GGAGGCTGTC AAGGATCATC CTAGAGCTGA ATACGAAGCC
1381 AGAGTCTTGG AGAAGTCTCT GAAGAAAGAG TCCAGAAACA AAGAGAAGCG CCGGCATATT
1441 CCAGAGGAGT CAACAAACAA ATGGAAGCAG AGGGTTAAGA CAGCCATGGC GGGGGTGAAA
1501 TTGACTGACA AAGTGAAGCT GACATGGAGA GATCGGTTCC CAGCCTACCT CACTAACTTG
1561 GTCTCCATCA TCTTCATGAT TGCAGTGACG TTTGCCATCG TCCTCGGCGT CATCATCTAC
1621 AGAATCTCCA TGGCCGCCGC CTTGGCCATG AACTCCTCCC CCTCCGTGCG GTCCAACATC
1681 CGGGTCACAG TCACAGCCAC CGCAGTCATC ATCAACCTAG TGGTCATCAT CCTCCTGGAC
1741 GAGGTGTATG GCTGCATAGC CCGATGGCTC ACCAAGATCG AGGTCCCAAA GACGGAGAAA
1801 AGCTTTGAGG AGAGGCTGAT CTTCAAGGCT TTCCTGCTGA AGTTTGTGAA TTCCTACACC
1861 CCCATCTTTT ACGTGGCGTT CTTCAAAGGC CGGTTTGTTG GACGCCCGGG CGACTACGTG
1921 TACATTTTCC GTTCCTTCCG AATGGAAGAG TGTGCGCCAG GGGGCTGCCT GATGGAGCTA
1981 TGCATCCAGC TCAGCATCAT CATGCTGGGG AAACAGCTGA TCCAGAACAA CCTGTTCGAG
2041 ATCGGCATCC CGAAGATGAA GAAGCTCATC CGCTACCTGA AGCTGAAGCA GCAGAGCCCC
2101 CCTGACCACG AGGAGTGTGT GAAGAGGAAA CAGCGGTACG AGGTGGATTA CAACCTGGAG
2161 CCCTTCGCGG GCCTCACCCC AGAGTACATG GAAATGATCA TCCAGTTTGG CTTCGTCACC
2221 CTGTTTGTCG CCTCCTTCCC CCTGGCCCCA CTGTTTGCGC TGCTGAACAA CATCATCGAG
2281 ATCCGCCTGG ACGCCAAAAA GTTTGTCACT GAGCTCCGAA GGCCGGTAGC TGTCAGAGCC
2341 AAAGACATCG GAATCTGGTA CAATATCCTC AGAGGCATTG GGAAGCTTGC TGTCATCATC
2401 AATGCCTTCG TGATCTCCTT CACGTCTGAC TTCATCCCGC GCCTGGTGTA CCTCTACATG
2461 TACAGTAAGA ACGGGACCAT GCACGGCTTC GTCAACCACA CCCTCTCCTC CTTCAACGTC
2521 AGTGACTTCC AGAACGGCAC GGCCCCCAAT GACCCCCTGG ACCTGGGCTA CGAGGTGCAG
2581 ATCTGCAGGT ATAAAGACTA CCGAGAGCCG CCGTGGTCGG AAAACAAGTA CGACATCTCC
2641 AAGGACTTCT GGGCCGTCCT GGCAGCCCGG CTGGCGTTTG TCATCGTCTT CCAGAACCTG
2701 GTCATGTTCA TGAGCGACTT TGTGGACTGG GTCATCCCGG ACATCCCCAA GGACATCAGC
2761 CAGCAGATCC ACAAGGAGAA GGTGCTCATG GTGGAGCTGT TCATGCGGGA GGAGCAAGAC
2821 AAGCAGCAGC TGCTGGAAAC CTGGATGGAG AAGGAGCGGC AGAAGGACGA GCCGCCGTGC
2881 AACCACCACA ACACCAAAGC CTGCCCAGAC AGCCTCGGCA GCCCAGCCCC CAGCCATGCC
2941 TACCACGGGG GCGTCCTGTA G
//
<210> 2
<211>986
<212> PRT
<213>人工序列
<400> 2
ORIGIN
1 MRVNEKYSTL PAEDRSVHII NICAIEDIGY LPSEGTLLNS LSVDPDAECK YGLYFRDGRR
61 KVDYILVYHH KRPSGNRTLV RRVQHSDTPS GARSVKQDHP LPGKGASLDA GSGEPPMDYH
121 EDDKRFRREE YEGNLLEAGL ELERDEDTKI HGVGFVKIHA PWNVLCREAE FLKLKMPTKK
181 MYHINETRGL LKKINSVLQK ITDPIQPKVA EHRPQTMKRL SYPFSREKQH LFDLSDKDSF
241 FDSKTRSTIV YEILKRTTCT KAKYSMGITS LLANGVYAAA YPLHDGDYNG ENVEFNDRKL
301 LYEEWARYGV FYKYQPIDLV RKYFGEKIGL YFAWLGVYTQ MLIPASIVGI IVFLYGCATM
361 DENIPSMEMC DQRHNITMCP LCDKTCSYWK MSSACATARA SHLFDNPATV FFSVFMALWA
421 ATFMEHWKRK QMRLNYRWDL TGFEEEEEAV KDHPRAEYEA RVLEKSLKKE SRNKEKRRHI
481 PEESTNKWKQ RVKTAMAGVK LTDKVKLTWR DRFPAYLTNL VSIIFMIAVT FAIVLGVIIY
541 RISMAAALAM NSSPSVRSNI RVTVTATAVI INLVVIILLD EVYGCIARWL TKIEVPKTEK
601 SFEERLIFKA FLLKFVNSYT PIFYVAFFKG RFVGRPGDYV YIFRSFRMEE CAPGGCLMEL
661 CIQLSIIMLG KQLIQNNLFE IGIPKMKKLI RYLKLKQQSP PDHEECVKRK QRYEVDYNLE
721 PFAGLTPEYM EMIIQFGFVT LFVASFPLAP LFALLNNIIE IRLDAKKFVT ELRRPVAVRA
781 KDIGIWYNIL RGIGKLAVII NAFVISFTSD FIPRLVYLYM YSKNGTMHGF VNHTLSSFNV
841 SDFQNGTAPN DPLDLGYEVQ ICRYKDYREP PWSENKYDIS KDFWAVLAAR LAFVIVFQNL
901 VMFMSDFVDW VIPDIPKDIS QQIHKEKVLM VELFMREEQD KQQLLETWME KERQKDEPPC
961 NHHNTKACPD SLGSPAPSHA YHGGVL

Claims (7)

1.一种特异性结合DOG1蛋白的单克隆抗体OTI1C6，由保藏编号为CGMCC No.13821的杂交瘤细胞株产生。
2.一种杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCC No.13821。
3.如权利要求1所述的单克隆抗体在制备用于检测DOG1蛋白的免疫检测工具中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，所述免疫检测工具为试剂盒、芯片或试纸。
5.一种免疫组化检测试剂盒，包括权利要求1所述的单克隆抗体。
6.如权利要求1所述的单克隆抗体在制备用于标记组织细胞的试剂盒中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，所述组织细胞为胃肠道间质瘤、直肠癌。
CN201710535399.7A 2017-07-06 2017-07-06 抗dog1蛋白单克隆抗体及其用途 Pending CN107188965A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710535399.7A CN107188965A (zh) 2017-07-06 2017-07-06 抗dog1蛋白单克隆抗体及其用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710535399.7A CN107188965A (zh) 2017-07-06 2017-07-06 抗dog1蛋白单克隆抗体及其用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107188965A true CN107188965A (zh) 2017-09-22

Family

ID=59880539

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710535399.7A Pending CN107188965A (zh) 2017-07-06 2017-07-06 抗dog1蛋白单克隆抗体及其用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107188965A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113045652A (zh) * 2021-04-09 2021-06-29 福州迈新生物技术开发有限公司 抗dog1蛋白的单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用
CN113754764A (zh) * 2021-08-20 2021-12-07 四川大学华西医院 抗dog-1抗体、缀合物、药物组合物、药物制剂及其用途
CN113801231A (zh) * 2021-08-20 2021-12-17 四川大学华西医院 抗dog-1抗体或其抗原结合片段及其用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105131114A (zh) * 2015-10-26 2015-12-09 无锡傲锐东源生物科技有限公司 抗p16蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗p16单克隆抗体和应用
CN106854245A (zh) * 2016-12-28 2017-06-16 无锡傲锐东源生物科技有限公司 抗cd30蛋白单克隆抗体及其用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105131114A (zh) * 2015-10-26 2015-12-09 无锡傲锐东源生物科技有限公司 抗p16蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗p16单克隆抗体和应用
CN106854245A (zh) * 2016-12-28 2017-06-16 无锡傲锐东源生物科技有限公司 抗cd30蛋白单克隆抗体及其用途

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
EMD MILLIPORE CORPORATION: "《Anti-Dog1, clone 1.1 Monoclonal Antibody》", 31 December 2013, EMD MILLIPORE CORPORATION *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113045652A (zh) * 2021-04-09 2021-06-29 福州迈新生物技术开发有限公司 抗dog1蛋白的单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用
CN113045652B (zh) * 2021-04-09 2022-04-12 福州迈新生物技术开发有限公司 抗dog1蛋白的单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用
CN113754764A (zh) * 2021-08-20 2021-12-07 四川大学华西医院 抗dog-1抗体、缀合物、药物组合物、药物制剂及其用途
CN113801231A (zh) * 2021-08-20 2021-12-17 四川大学华西医院 抗dog-1抗体或其抗原结合片段及其用途

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106978400A (zh) 抗pd‑l1蛋白单克隆抗体及其用途
CN107188962A (zh) 抗ck7蛋白单克隆抗体及其用途
CN113234161B (zh) 抗cd3蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用
CN103694355A (zh) 抗人心肌肌钙蛋白i的重组抗体及其构建方法和应用
CN110903389B (zh) 抗gfap蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用
CN108467432A (zh) 抗E-cadherin蛋白的单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用
CN113265003B (zh) 抗TdT蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用
CN113045652B (zh) 抗dog1蛋白的单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用
CN107188965A (zh) 抗dog1蛋白单克隆抗体及其用途
CN111454360A (zh) 抗cd61蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用
CN105131114B (zh) 抗p16蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗p16单克隆抗体和应用
CN106188292B (zh) 抗cd4蛋白单克隆抗体及其用途
CN111848750A (zh) 一种快速富集和检测2019-nCoV的方法及试剂盒
CN105254759A (zh) 抗cd56蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗cd56单克隆抗体和应用
CN108997501A (zh) 抗vwf蛋白单克隆抗体及其用途
CN106749666B (zh) 一种人源程序性死亡受体hPD-1单克隆抗体
CN109096400A (zh) 抗pdpn蛋白单克隆抗体及其用途
CN107446046A (zh) 抗cd20蛋白单克隆抗体及其用途
CN106854245A (zh) 抗cd30蛋白单克隆抗体及其用途
CN106977605A (zh) 抗cd19蛋白单克隆抗体及其用途
CN113831410B (zh) 抗cd56蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用
CN106749668A (zh) 抗ido1蛋白单克隆抗体及其用途
CN107236040A (zh) 抗msh6蛋白单克隆抗体及其用途
CN109021102A (zh) 抗sma蛋白单克隆抗体及其用途
CN109021101A (zh) 抗pax8蛋白单克隆抗体及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20170922