CN107177500A - 一种基于罗叶泵的仿生脉动生物反应器 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于罗叶泵的仿生脉动生物反应器,应用心脏辅助循环罗叶泵提供脉动流动力,驱动液体在胶管回路上以脉动流的方式流动。本发明包括脉动生物反应器动力装置,脉动生物反应器动力装置与人工心脏辅助装置(罗叶泵)连接,人工心脏辅助装置(罗叶泵)与生物反应器培养***连接,生物反应器培养***与储液瓶链接,储液瓶与人工心脏辅助装置(罗叶泵)连接。生物反应器培养***内的胶管可以形成一定幅度和频率的搏动流,参数(频率、正/负向压力及压差等)调节范围大,仿生能力强,机械稳定性好,运行可靠。
Description
技术领域
本发明涉及一种医疗和实验研究器械,尤其是涉及一种基于罗叶泵的仿生脉动生物反应器。
背景技术
心脑血管疾病发病率呈逐年上升趋势,其共同的病理生理学特征为血管功能失衡及损伤修复异常,继而引起血管重构。因此,组织工程血管置换术是心脑血管疾病的重要治疗方法。目前临床上应用的血管移植物主要有异体生物血管、自体血管、人工合成血管。异体生物血管因易致免疫排斥而最终导致血管阻塞;自体血管必需牺牲人体正常组织来修复病损组织,且长度和管径合适的自体非必需血管的来源有限。人工合成血管如涤纶、聚四氟乙烯等材料作为小血管的通畅率不能满足临床治疗的需要,且作为异物可引起慢性免疫排斥反应、感染和栓塞、随着时间的延长,管腔通常率下降,若长期应用抗凝药又有一定的副作用,因此寻找新的血管替代物成为新的研究热点。
自1986年,Weinberg CB等应用自体来源的平滑肌细胞、成纤维细胞、内皮细胞构建了复合的组织工程化血管,但血管强度无法满足回植要求,让人们看到了组织工程血管的希望。此后Kanayama、Jo等用天然胶原、脱细胞血管支架等天然生物材料作为支架材料构建组织工程血管,证明了构建TEBV的可行性。
此外,Matsumura和Roh等用人工合成可降解材料PGA(聚羟基乙酸)、PLA(聚乳酸)、聚L-乳酸(PLLA)及上述材料共聚物(PLGA),P4HB(聚-4-羟基丁酸)等作为支架材料也构建除了组织工程血管。
但是,上述组织工程血管均为体外静态构建,此时血管细胞会丧失部分分化功能,黏附力量低下,导致形成的TEBV弹性中膜的强度不够、内皮细胞层黏附不牢易脱落,而导致血栓形成。因此,在体外构建TEBV时,人为施加适宜的力学刺激成为人们的共识。合理运用脉动生物反应器在体外模拟体内血管的流体力学环境,在体外构建成能自我分泌细胞外基质、具有一定力学强度、能够自我重构的功能完整的TEBV。
由于心脏是搏动血流,频率低,压差大,故实现仿生的体外模拟比较困难。Niklason和Hoerstrup SP等有类似报道,将利用蠕动泵为动力源,设置一定搏动频率,在组织工程血管反应器中成功构建组织工程化小血管,并用于动物实验,得到的组织工程血管在形态学、组织学与正常血管相似,管腔较为通畅,且血管最大抗张强度相比静态培养大幅提升。
但总体上看,目前以蠕动泵为动力源使得力学参数(如血压和心率等)的调节范围受限,体外模拟的力学微环境仿生度不高,大部分的血管重构研究主要集中在细胞层次,研究结果较难在整体动物研究中得到重复,获得的TEBV的性能尚不满足临床使用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种仿生脉动生物反应器,此反应器具有参数(频率、正/负向压力及压差等)调节范围大,仿生能力强,机械稳定性好,运行可靠等优点,有利于组织工程血管研究平台的应用。
为实现上述目的,本发明采用的技术方案为:
一种仿生脉动生物反应器,包括脉动生物反应器动力装置,脉动生物反应器动力装置与人工心脏辅助装置罗叶泵连接,人工心脏辅助装置罗叶泵与生物反应器培养***连接,生物反应器培养***与储液瓶连接,储液瓶与人工心脏辅助装置罗叶泵连接。
上述仿生脉动生物反应器包括反应器器皿,器皿由玻璃反应器和硅胶盖两部分构成,玻璃反应器内缘处接有对称的细玻璃端口,分别为进液口和出液口,两端玻璃端口由薄壁硅胶管连接。
所述薄壁硅胶管采用外径4-6mm外径的硅胶管制作,薄壁硅胶管为中空的管状结构,外包裹一层可降解人工材料PGA,薄壁硅胶管由玻璃器皿内缘***细玻璃端口,外部管路为不同型号的接头与硅胶管构成,通过管道与压力传感器和动力装置连接,构成一套整体***。
所述培养器器皿主体,反应器高120cm,直径为110mm。
与现有技术相比,本发明具有的优点和效果如下:
1)本发明的仿生脉动生物反应器用于TEBV的构建。本发明由脉动反应器动力装置、人工心脏辅助装置(罗叶泵)、组织工程血管反应器、储液瓶和连接管道组成。罗叶泵是一种模仿心脏左室舒缩做功的特殊的容量(容积)泵,驱动一定容积液体在密闭管道上脉动形式流动。此外,罗叶泵的参数(频率、正/负向压力及压差等)调节范围大,仿生能力强,有利于组织工程血管研究平台的应用。
2)脉动反应器动力装置构建的中心环节是两个泵——空压泵和真空泵,分别制造正压和负压。在收缩时,正压***开放产生正压将培养液压出人工心脏辅助装置;在舒张时,负压***开放产生负压使培养液回流入人工心脏辅助装置,形成搏动性液体。整个动力装置在无负载情况下可以实现正压50-300mmHg,负压-10mmHg,频率40-110次/分,基本上能够满足要求。
附图说明
图1是本发明的仿生脉动生物反应器的构成示意图。
图2是本发明的仿生脉动生物反应器的结构组成图。
图3是罗叶泵的结构示意图。
图4是生物反应器培养***的构成示意图。
图5是生物反应器培养***的另一结构图。
图6是薄壁硅胶管的结构示意图
10:脉动动力装置20:罗叶泵
21:气相腔体22:液相腔体23:隔膜
30:生物反应器培养***31:玻璃反应器
32:硅胶盖33:进液口34:出液口
35:薄壁硅胶管36:PGA(聚羟基乙酸)
40:储液瓶50:压力检测仪
具体实施方式
请参阅图1-2所示,本发明的整体仿生脉动生物反应器培养分为四个部分,从左到右分别是:脉动(生物反应器)动力装置10、罗叶泵20、生物反应器培养***30、PBSRESERVOIR(储液瓶40)。该生物反应器培养***30还可以连接一压力监测仪50,其连接在罗叶泵20与生物反应器培养***30连接的管路上,实时监测流场压力,让其处于适宜范围内。
本发明在收缩时,正压***开放产生正压将水流压出人工心脏辅助装置(罗叶泵20),在舒张时负压***开放产生负压使水流回流入人工心脏辅助装置(罗叶泵20),形成搏动性液体,将罗叶泵20形成的搏动流能量转化成硅胶管35形变的能量形式,最终以硅胶管35的扩张收缩形成力学刺激,刺激接种在硅胶管外可降解人工材料PGA36上的种子细胞增殖、分泌胞外基质,形成组织工程血管。
该脉动(生物反应器)动力装置10提供仿生的压力、频率,压力波形与心电图近似。且多参数可调,例如:收缩压、舒张压、收缩时间比、频率等。收缩压范围从50到300mmHg,舒张压-10mmHg频率可以从40次/分到110次/分。所以,该脉动动力装置10可以提供多种培养条件,从而方便的在不同条件下培养TEBV,从而找出最具有优势的培养条件。未来还可以在培养***中加入剪切力,对于研究内皮细胞以及平滑肌细胞的机制是很重要的。
请参阅图3所示,该罗叶泵20是一种心室辅助泵,泵内分为气相腔体21、液相两个腔体22,由隔膜23隔开。该脉动动力装置10通过将气体泵入气相腔体21内,通过压力的增加促使隔膜23运动,从而改变液相腔体的体积,使得泵的喷射端可以形成射流,且是仿生的流场。当压力降为负压时,隔膜恢复到初始位置,同时罗叶泵20回流端因为隔膜运动的关系,将PBS RESERVIOR(储液瓶40)里的液体抽吸入罗叶泵20的液相腔体21内,为下一个周期的运动做好准备。
所以,运用罗叶泵20的优势就是可以提供仿生流场,而不是其他形式的泵如蠕动泵产生一种高频高压的流场,从而对平滑肌细胞的增殖和迁移可能更有利。我们也对罗叶泵20的流场进行过详细的计算流体力学分析,包括有限元建模与整个周期内不同时刻的流场分析如压力、泵的形变、流速、流线、迹线等。在培养过程中,我们实际可以灵活选用不同的罗叶泵的规格,泵体容量从10cc到80cc,所以流量可选择的范围也很宽。所以实际上,综合多种参数可调,我们最终可以找到组织工程血管的最适培养参数,从而更高效率的培养组织工程血管。
如图4-6所示,该生物反应器培养***30包括由玻璃反应器31和硅胶盖32两部分构成,玻璃反应器31内缘处接有对称的等长细小玻璃管道,分别为进液口33和出液口34,两端玻璃管道由薄壁硅胶管35连接。该薄壁硅胶管35采用5mm孔径硅胶管制作而成,薄壁硅胶管35为中空的管状结构,外包裹一层1mm可降解人工材料PGA(36),薄壁硅胶管的内径和外径均可调,由玻璃器皿内缘***细玻璃端口,外侧套硅胶接头固定。该反应器31采用玻璃材料制作,进液口33和出液口34的外径为9mm,反应器31的内径为110mm,高120mm。
该薄壁硅胶管35连接生物反应器30培养***的两个小端口,通过脉动流场的压力,促使反应器内薄壁硅胶管发生形变,从而让贴附于硅胶管上的平滑肌细胞收到力学刺激,而我们通过调整收缩压、舒张压、收缩时间比、脉动频率这几个参数,就可以有效控制脉动流场,从而改变生物反应器内硅胶管的形变规律。
该PBS RESERVIOR(储液瓶40)采用柔性袋,而非直接与外界空气接触的刚性收集器,整个培养体系除了反应器本身给平滑肌细胞供氧(无菌)以外,其他部分均与外界隔绝,处于自身密闭体系中,但是柔性袋又保证了整套体系能够处于大气压的基础下。
本发明的生物反应器***完全自主设计,主要材料为透明玻璃,外形经过特殊设计,最终手工吹制而成。其外形、尺寸设计考虑到细胞接种密度、细胞总数、所需培养基、所需无菌空气的比例等因素。封口处的盖子也是经过特殊考虑,有良好的密封性,并可以过滤空气,保证反应器内空气无菌,并可以通过其进行培养液的更换。外部管路为不同型号的接头与硅胶管构成,通过硅胶管连接生物反应器与脉动动力装置,构成一套整体***。
此外,我们的反应器是适用于不同口径的硅胶管,所以可以培养出不同直径的组织工程血管。本发明因为本身是血管生物反应器,培养参数可调范围大,所以不仅适用于组织工程血管培养,其他应用如药物的测试,动脉疾病的病理过程(通过调整培养参数达到类似病人血压与血流状态),干细胞力学研究平台等多方面重要应用。
在性能测试中,我们的整个培养体系能够稳定运行至少长达4周。各个部位紧密结合,未出现污染以及漏液。反应器内的硅胶管形变控制在2%到5%之间,超过这个范围对于组织工程血管的培养都是不利的。由于所有管路连接都是医用级硅胶管,对细胞均无毒性。且力学性能好,在脉动流场下并不会跟随反应器内硅胶管形变,所以整个流场的动能并不会因为外部管路而损失,流体本身就是水,粘度最低的液体,所以动力源、罗叶泵的动力可以准确传递给反应器内硅胶管。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非对本发明作任何形式上的限制,故凡是未脱离本发明技术方案内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (8)
1.一种基于罗叶泵的仿生脉动生物反应器,其特征在于:包括脉动生物反应器动力装置,脉动生物反应器动力装置与人工心脏辅助装置罗叶泵连接,人工心脏辅助装置罗叶泵与生物反应器培养***连接,生物反应器培养***与储液瓶连接,储液瓶与人工心脏辅助装置罗叶泵连接。
2.根据权利要求1所述的基于罗叶泵的仿生脉动生物反应器,其特征在于:所述脉动动力装置提供仿生的压力、频率,压力波形与心电图近似,且多参数可调,收缩压范围从50到300mmHg,舒张压-10mmHg频率可以从40次/分到110次/分。
3.根据权利要求1所述的基于罗叶泵的仿生脉动生物反应器,其特征在于:所述人工心脏辅助装置罗叶泵其结构包括:分别设置在心室辅助泵内的气相腔体和液相腔体,由隔膜隔开;罗叶泵回流端因为隔膜运动的关系,将储液瓶里的液体抽吸入罗叶泵的液相腔体内。
4.根据权利要求1所述的基于罗叶泵的仿生脉动生物反应器,其特征在于:所述生物反应器培养***包括玻璃反应器和硅胶盖两部分构成,玻璃反应器内缘处接有对称的等长细小玻璃管道,分别为进液口和出液口,两端玻璃管道由薄壁硅胶管连接。
5.根据权利要求4所述的基于罗叶泵的仿生脉动生物反应器,其特征在于:所述薄壁硅胶管采用5mm孔径硅胶管制作,薄壁硅胶管为中空的管状结构,外包裹一层1mm可降解人工材料PGA,薄壁硅胶管的内径和外径均可调,由玻璃器皿内缘***细玻璃端口,外侧套硅胶接头固定。
6.根据权利要求4所述的基于罗叶泵的仿生脉动生物反应器,其特征在于:所述进液口和出液口的外径为4-6mm,玻璃反应器器皿的内径为110mm。
7.根据权利要求1所述的基于罗叶泵的仿生脉动生物反应器,其特征在于:该储液瓶采用柔性袋。
8.根据权利要求1所述的基于罗叶泵的仿生脉动生物反应器,其特征在于:还包括一用于实时监测流场压力的压力监测仪,其设置在罗叶泵与生物反应器培养***连接的管路上。
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