CN107158452A

CN107158452A - 一种骨创面止血组合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN107158452A
Application number: CN201710309890.8A
Authority: CN
Inventors: 任芳; 李波; 王月月; 张林林; 刘长凤; 张春霞; 赵成如
Original assignee: Shandong Saikesaisi Biological Technology Co Ltd
Current assignee: Shandong Saikesaisi Biological Technology Co Ltd
Priority date: 2017-05-05
Filing date: 2017-05-05
Publication date: 2017-09-15
Anticipated expiration: 2037-05-05
Also published as: CN107158452B

Abstract

本发明公开了一种骨创面止血组合物及其制备方法和应用，由溶剂基质、增稠剂、赋形剂和离子盐组成，所述溶剂基质为多羟基醇，所述离子盐为无机钙盐和无机铁盐中的一种或多种。本发明止血组合物骨粘附性良好、可塑性好，能机械填塞骨创面裂隙和血窦，还能加速自然凝血过程，止血效果好；在人体或动物体内易降解，可被吸收代谢，生物相容性好、对机体无刺激、无毒副作用、安全性高，不影响创面愈合，临床使用方便，在人或动物的骨创面止血方面有很好的应用前景。

Description

一种骨创面止血组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种骨创面止血组合物及其制备方法和应用，具体涉及一种可塑性强、粘附性好、可吸收、不影响创面愈合的骨创面止血组合物及其制备方法和应用，属于骨止血技术领域。

背景技术

临床上，松质骨结构松散、血运丰富，创面出血多为渗血，松质骨创面出血不止或难以彻底止血，是因为骨创面组织结构松散，血运丰富形成密布的血窦，组织中血管收缩性差，血小板聚集，血凝块难以粘附于骨创面。骨创面出血难以靠血管收缩自行止血，术中亦难以靠电凝、钳夹、止血纱布、明胶海绵填塞等常规方法止血。临床常用骨蜡进行松质骨创面止血。骨蜡的主要成分为蜂蜡、麻油等，骨蜡是经消毒的蜂蜡和凡士林的混合物，具有良好的软化性能，用手搓揉***后能塑型，无毒。骨蜡的作用原理是用物理方法堵住骨髓部毛细血管渗血，可用于各种急救病人骨渗血时止血。目前临床常用的骨蜡正是通过封闭骨间的出血通路，控制骨损伤出血这一机械填塞的原理进行止血，其止血作用快速、有效，但其生物相容性差且难以被机体降解、吸收，应用后将作为异物长期存留体内，一方面降低了组织的抗感染能力，使术后感染发生的风险增加；另一方面也阻碍骨创面的修复，形成异物肉芽肿引起局部疼痛、渗液等症状。国内外学者已经从人工合成高分子材料、生物制剂等方面进行了骨蜡替代产品的研究工作，如胶原纤维，明胶海绵，氧化纤维素、聚乳酸和多聚糖等。动物实验和临床应用表明：虽然这些物质生物相容性较好、具有可降解性，但大多数为粉状、胶状，与创面黏合性较差，术中不易操作，易被血流冲走。此外，此类高分子替代物质还存在原料昂贵、物理性状不易改性、材料安全性等尚未解决的实际问题，因此，目前尚未能将其转变为适宜于骨创面止血的理想材料，仍需进一步深入研究和改进。目前，还有一些关于此类产品的专利公开，如下：

申请号201210067344.5的专利公开了一种在人体或动物体内完全降解、可替代骨蜡、不改变医生使用习惯的骨创面止血和促进骨组织愈合的材料，该材料包括低聚糖、多聚糖或低聚糖与多聚糖的混合物，赋形剂为多羟基醇中的一种或多种，植物油中的一种或多种，乳化剂中的一种或多种。该材料糖类基质含量大，亲水性的糖类和多羟基醇与疏水性的植物油组成的膏体稳定性欠佳，若开发成上市产品则存在有效期较短、稳定性较差、吸水性较低的缺陷。并且，该产品制备过程需要在真空条件下共混后立即放入0-4℃条件下冷却后制得。该专利公开的止血材料是目前可降解材料中性能较为优良一种骨止血剂，但该止血剂的制备工艺较为复杂，工艺中既涉及高温制备，还涉及真空反应，还涉及低温冷却，且亲水性和疏水性介质组成的膏体稳定性欠佳，若开发成上市产品则效期较短。同时，考虑生产批量生产难度较大，生产成本较高，恐难以实现批量生产，不能较好的解决骨蜡市场目前存在的问题。

申请号200410040076.3的专利公开了一种外科或骨科手术中用的可吸收骨止血剂，其材料包括壳聚糖或改性壳聚糖及其他物质，壳聚糖为止血材料中较为常见的材料，其止血原理主要是利用其本身所带的正电荷，能够加快凝血，富集血小板从而达到止血效果，再就是此材料为生物材料可降解可吸收。但是壳聚糖类材料属于动物源性材料，对人体有一定的潜在危害。以壳聚糖为主要成分形成的胶泥作为骨止血剂，其吸水性、粘附力、生物相容性等其他性能均未见报道。一般壳聚糖类材料的皮内刺激较高，处理不好则具有较大的生物刺激。再就是该材料受热、辐照易变质，灭菌、储存和运输都需要特殊设计，从而材料成本会大大增加。

申请号200910076033.3的专利公开了一种可降解型骨腔隙内止血材料及其制备方法，包括海藻酸钠、医用淀粉和无机粒子，海藻酸钠水凝胶的粘附力较差。该材料吸水性、粘附力、生物相容性、可塑性、止血效果、降解特性等其他性能均未见报道。

申请号201410780581.5的专利公开了一种壳聚糖止血纱布及其制备方法，该止血纱布含有壳聚糖、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、羟乙基淀粉、角鲨烷、中药成分、水，采用静电纺丝法纺织成纤维。该发明中，首先壳聚糖为动物源性材料，对人体有一定的潜在危害。以壳聚糖为主要成分形成的纱布作为骨创面的止血材料，其吸水性、粘附力、生物相容性等其他性能均未见报道。一般壳聚糖类材料的皮内刺激较高，处理不好则具有较大的生物刺激，再就是纱布形态的止血材料一般很难在出血骨创面粘附牢固。再就是该材料受热、辐照易变质，灭菌、储存和运输都需要特殊设计，从而材料成本会大大增加。

申请号200510117740.4的专利公开了一种可生物降解及吸收的聚合物纳米纤维膜材料及其制备方法和用途，该产品为纳米纤维膜，含有明胶，透明质酸、壳聚糖、胶原蛋白、肝素、聚乙交酯、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、纤维素类、淀粉类等高分子材料中的一种或多种，碳酸钙、铬酸钾、磷酸氢该等无机增强剂成分。该发明用作止血材料时骨创面血窦；其次，塑性较差，对于不同形状的骨创面无法差异性填塞和涂抹；另外，该发明中很多成分如明胶、壳聚糖、胶原蛋白为动物源性材料，有潜在生物危害；最后，该发明中很多高分子成分，用于骨创面止血时，降解时间较长，阻碍骨组织愈合。

另外很多报道中公开了利用聚合物如聚氧乙烯、聚氧丙烯、聚乳酸等聚合物制备骨止血剂，该类材料是具有一定分子量的高分子聚合物，虽能降解吸收，但降解速度慢，降解周期比较长，阻碍骨愈合；另外，吸水性较差，不能较好的吸收血液，粘附力和可塑性较差，临床操作不方便。

理想的骨止血材料应具有如下优点：①质地柔软、可塑性强，能迅速填充创面的裂隙及血窦；②具有骨粘附性，能够牢固黏附创面，一定时间内不脱落；③生物相容性好、无毒副作用、组织反应小；④止血作用完成后可逐渐降解、被机体组织吸收，不影响创面愈合。从上面现有技术的了解看，目前还没有很好的能满足理想的骨止血材料出现，需要进一步研究和改进。

发明内容

针对现有骨止血材料存在的不足，本发明提供了一种骨创面止血组合物，该止血组合物骨粘附性良好、可塑性好，能机械填塞骨创面裂隙和血窦，还能加速自然凝血过程，止血效果好。组合物在人体或动物体内易降解，可被吸收代谢，生物相容性好、对机体无刺激、无毒副作用、安全性高，不影响创面愈合。

本发明还提供了上述骨创面止血组合物的制备方法，该方法制备简单，易于实施，成本低，所得产品具有理想的硬度、韧性及粘度，可塑形可涂抹好、止血效果好，无毒副作用、组织反应小，不影响创面愈合，临床使用方便。

本发明还提供了上述骨创面止血组合物在制备人或动物骨创面止血制品中的应用，该产品可以用于在手术操作中人或动物的所有骨创面出血的止血。

进一步的，本发明提供的骨创面止血组合物，由溶剂基质、增稠剂、赋形剂和离子盐组成，所述溶剂基质为多羟基醇，所述离子盐为无机钙盐和无机铁盐中的一种或多种。

上述骨创面止血组合物中，所述溶剂基质为多羟基醇，该溶剂基质的作用是为增稠剂和赋形剂提供一个基础环境，可是使粉料或液体形成一种粘附力较强、可塑性较好的膏剂或胶剂。此外，溶剂基质含量的变化会引起可塑性、粘附力、吸水特性和降解时间等性能的变化。所述多羟基醇为丙三醇、聚乙二醇-400、聚乙二醇-300和丙二醇中的一种或两种，优选为丙三醇和聚乙二醇-400中的一种或两种。

上述骨创面止血组合物中，溶剂基质在骨创面止血组合物中的重量百分含量为30％～80％，优选为50-70％。

上述骨创面止血组合物中，所述增稠剂的作用是提高组合物的粘附力和可塑性，所述增稠剂为羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、卡拉胶和卡波姆中的一种或两种。当增稠剂选择特殊的粘度时，所得产品性能更优。羧甲基纤维素钠按黏度分为：超高黏羧甲基纤维素钠、高黏羧甲基纤维素钠、中黏羧甲基纤维素钠、低黏羧甲基纤维素钠，本发明优选医用级的高黏羧甲基纤维素钠、中黏羧甲基纤维素钠或低黏羧甲基纤维素钠。羟丙基甲基纤维素优先选用标称黏度为6～15000cps的羟丙基甲基纤维素，更优选选用50～1500cps的羟丙基甲基纤维素。羟乙基纤维素优先选用标称黏度为250-400cps、1500-2500cps、3500-5500cps或4500-6500cps的羟乙基纤维素，更优选选用标称黏度为1500-2500cps和3500-5500cps的羟乙基纤维素中的一种；卡拉胶优先选用医用级别。卡波姆优先选用卡波姆910、卡波姆934、卡波姆940或卡波姆941，更优选选用卡波姆934和卡波姆940中的一种。所述标称黏度为采用旋转粘度计测得到的黏度。

上述骨创面止血组合物中，增稠剂在骨创面止血组合物中的重量百分含量为0.5％～10％，优选为5-7％。

上述骨创面止血组合物中，所述赋形剂的作用是提高产品的可塑性、粘附力和吸水性，赋形剂为羧甲基淀粉钠、马铃薯淀粉、可溶性淀粉、海藻酸钠、糊精和糊精衍生物中的一种或多种。

上述骨创面止血组合物中，赋形剂在骨创面止血组合物中的重量百分含量为10％～55％，优选为20-45％。

上述骨创面止血组合物中，所述离子盐的作用是作为凝血剂，加速和辅助止血。离子盐为无机钙盐、无机铁盐，或者为无机钙盐和无机铁盐的混合物。所述无机钙盐为硫酸钙、氯化钙、硝酸钙，所述无机铁盐为氯化铁、硝酸铁、硫酸铁，所述离子盐可以从这些无机钙盐和无机铁盐中进行选择，例如可以选择无机钙盐中的一种或多种，可以选择无机铁盐中的一种或多种，可以无机钙盐和无机铁盐各选一种，可以无机钙盐和无机铁盐各选多种，可以无机钙盐选择一种无机铁盐选择多种，也可以无机铁盐选择一种无机钙盐选择多种。

上述骨创面止血组合物中，离子盐在骨创面止血组合物中的重量百分含量为0.05％～5％，优选为1-3％。

本发明骨创面止血组合物的制备方法包括以下步骤：

a.将溶剂基质和增稠剂混合，在20℃～75℃下搅拌，直至形成粘稠的溶剂基质，溶胀过夜；

b.在搅拌、共混或捏合条件下将赋形剂缓慢加入到溶胀完全的粘稠的溶剂基质中，加完后继续搅拌、共混或捏合，直至形成均一膏体或胶剂；

c.在搅拌、共混或捏合下将离子盐缓慢加入膏体或胶剂中，加完后继续搅拌、共混或捏合，直至形成均一膏体或胶剂，即为骨创面止血组合物。

本发明骨创面止血组合物为一种均一的粘稠膏体或胶剂，其同时具有优良的涂抹操作性、可塑性、粘附性和优异的吸血特性，可吸收降解，不会影响创面愈合，对机体也无毒副刺激，可以制成膏剂或涂抹剂等剂型。在实际使用时，为了适用于不同的创面形状、部位，可以将该均一膏体或胶剂制成不同的形状，例如可以将该均一膏体直接放入封闭膏剂盒中，真空密封于铝箔袋中，灭菌后常温保存。也可以将其用不同的模具制成片状、柱状或其他形状，然后用淋膜纸包装后真空密封于铝箔袋中，灭菌后常温保存。也可以将其装于各种医用操作工具中，例如医用涂抹器、医用软管、医用注射器等中，然后真空密封于铝箔袋中，灭菌后常温保存。但无论该膏体或胶剂制成何种形状、保存于何种容器中，均具有很好的可塑性。

上述步骤a中，升温至20℃～75℃继续搅拌，直至形成粘稠的溶剂基质。大约需30min左右。

上述步骤b和c中，通过搅拌、共混或捏合的方式进行混合，这些操作可以在带有搅拌装置的容器、乳化搅拌机、共混机或捏合机中完成。

上述步骤b中，形成均一膏体的时间约为1-2h；步骤c中，形成均一膏体的时间约为0.5-1h。

本发明骨创面止血组合物具有良好的任意塑形特点，可根据骨创面的特点由临床医生按需塑形，可涂抹、可填塞，因此可以用于各种骨创面出血的止血，临床应用效果好。基于此，本发明还提供了上述骨创面止血组合物在制备人或动物骨创面止血制品中的应用。其中，所述骨创面可以是各种原因造成的骨创伤所形成的创面。

本发明具有以下有益效果：

1、本组合物具有良好的任意塑形特点，可根据骨创面的特点由临床医生按需塑形，可涂抹、可填塞，同时该组合物具有良好的骨粘附性，依靠其特有的粘结强度可牢固地粘附于骨创面，可填塞骨创面的出血部位(血窦和裂隙)，起到很好的止血效果。此外，该组合物具有较高的吸水特性，液体吸收性不小于30倍，与血液接触后，可以吸收骨创面渗出的血液中的水分、浓缩血液，聚集血液中的血小板、红细胞、凝血蛋白，加速自然凝血过程，从而提高骨创面止血效果。

2、本发明组合物pH为中性，各项指标控制严格，所采用的溶剂基质、增稠剂和赋形剂在人体或动物体内易降解，降解后可被机体吸收代谢，在人体内或动物体内无残留，对机体无任何刺激，无毒副作用，安全性高，生物相容性好，避免了使用者异物反应和组织炎症等并发症的出现，不影响创面愈合。

3、本发明组合物制备方法简单，使用方便，具有理想的硬度、韧性及粘度，可塑形可涂抹，可降解可吸收，止血效果好，临床使用方便，在人或动物的骨创面止血方面有很好的应用前景。

4、本发明的组合物添加生长因子、磷酸钙、羟基磷灰石、碳酸钙、硫酸钙、生物活性玻璃及其他促进骨生长的物质后可被开发为具有促进骨愈合的骨止血剂；本发明的组合物添加抗生素或其他有治疗性功能的药物后可被开发成为具有抗感染或其他治疗效用的骨止血剂。

具体实施方式

下面结合具体实施实例对本发明作进一步详细说明。

实施例1

本发明骨创面止血组合物配方如下表1所示：

表1.实施例1配方表

该骨创面止血组合物制备方法如下：

1.按配方表称取丙三醇、医用级的高黏羧甲基纤维素钠，搅拌条件下得到均一的溶液。对该溶液缓慢升温，在30℃温度下搅拌30min，使均一溶液变为粘稠溶剂基质，溶胀过夜。

2.按配方表称取羧甲基淀粉钠，慢慢加入到溶胀完全的粘稠溶剂基质中，边加入边强力搅拌，直至形成均一膏体，约2h；

3.按配方表称取硫酸钙，缓慢加入到上述膏体中，继续搅拌，直至形成均一膏体，约1h。

4.将步骤3得到的膏体装入封闭膏剂盒中，真空密封于铝箔袋中，灭菌后常温保存；或利用压片机制成片状和柱状，然后用淋膜纸包装后真空密封于铝箔袋中，灭菌后常温保存；或装于医用注射器中，真空密封于铝箔袋中，灭菌后常温保存；或装于给凝胶器中，真空密封于铝箔袋中，灭菌后常温保存。

实施例2

本发明骨创面止血组合物配方如下表2所示：

表2.实施例2配方表

该骨创面止血组合物制备方法如下：

1.按配方表称取丙三醇、聚乙二醇-400、标称黏度为50～1500cps的羟丙基甲基纤维素和标称黏度为1500-2500cps的羟乙基纤维素，搅拌条件下得到的均一溶液。对该溶液缓慢升温，在75℃温度下搅拌30min，使均一溶液变为粘稠溶剂基质，溶胀过夜。

2.将得到的粘稠溶剂基质放入捏合机中，开动捏合机搅拌，按配方表称取海藻酸钠、糊精，将这两者混匀，然后慢慢加入到捏合机中，边加入边捏合直至形成均一膏体，约1h；

3.按配方表称取氯化钙、硫酸铁，依次缓慢加入到上述膏体中，继续捏合，直至形成均一膏体，约0.5h。

实施例3

本发明骨创面止血组合物配方如下表3所示：

表3.实施例3配方表

该骨创面止血组合物制备方法如下：

1.按配方表称取丙二醇、聚乙二醇-300、医用级别卡拉胶、标称黏度为250-400cps的羟乙基纤维素和标称黏度为4000～9000cps的羟丙基甲基纤维素，搅拌条件下得到的均一溶液。对该溶液缓慢升温，在50℃温度下搅拌30min，使均一溶液变为粘稠溶剂基质，溶胀过夜。

2.将得到的粘稠溶剂基质放入捏合机中，开动捏合机搅拌，按配方表称取马铃薯淀粉、羧甲基淀粉钠，将这两者混匀，然后慢慢加入到捏合机中，边加入边捏合，直至形成均一膏体，约1h；

3.按配方表称取硝酸铁，缓慢加入到上述膏体中，继续捏合，直至形成均一膏体，约0.5h。

实施例4

本发明骨创面止血组合物配方如下表4所示：

表4.实施例4配方表

该骨创面止血组合物制备方法如下：

1.按配方表称取聚乙二醇-400和卡波姆934，放入乳化搅拌机中，在室温下充分搅拌，直至形成粘稠溶剂基质，溶胀过夜。

2.将得到的粘稠溶剂基质放入捏合机中，开动捏合机搅拌，按配方表称取可溶性淀粉、羧甲基淀粉钠和糊精，将这三者混匀，然后慢慢加入到捏合机中，边加入边捏合，直至形成均一膏体，约1.5h；

3.按配方表称取硝酸钙，缓慢加入到上述膏体中，继续捏合，直至形成均一膏体，约0.5h。

实施例5

本发明骨创面止血组合物配方如下表5所示：

表5.实施例5配方表

该骨创面止血组合物制备方法如下：

1.按配方表称取丙二醇、丙二醇和标称黏度为4500-6500cps的羟乙基纤维素，搅拌条件下得到的均一溶液。对该溶液缓慢升温，在40℃温度下搅拌30min，使均一溶液变为粘稠溶剂基质，溶胀过夜。

2.将得到的粘稠溶剂基质放入捏合机中，开动捏合机搅拌，按配方表称取糊精，慢慢加入到捏合机中，边加入边捏合，直至形成均一膏体，约1.5h；

3、按配方表称取氯化铁，缓慢加入到上述膏体中，继续捏合，直至形成均一膏体，约0.5h。

实施例6

本发明骨创面止血组合物配方如下表6所示：

表6.实施例6配方表

该骨创面止血组合物制备方法如下：

1.按配方表称取丙三醇、卡波姆934、医用级的低黏羧甲基纤维素钠和标称黏度为3500-5500cps的羟乙基纤维素，搅拌条件下得到的均一溶液。室温下搅拌30min，使均一溶液变为粘稠溶剂基质，溶胀过夜。

2.将得到的粘稠溶剂基质放入捏合机中，开动捏合机搅拌，按配方表称取糊精和羧甲基淀粉钠，将这两者混匀，然后慢慢加入到捏合机中，边加入边捏合，直至形成均一膏体，约1h；

3.按配方表称取氯化铁，缓慢加入到上述膏体中，继续捏合，直至形成均一膏体，约1h。

实施例7

本发明骨创面止血组合物配方如下表7所示：

表7.实施例7配方表

该骨创面止血组合物制备方法如下：

1.按配方表称取丙三醇、标称黏度为10000-15000的羟丙基甲基纤维素和卡波姆910，搅拌条件下得到的均一溶液。对该溶液缓慢升温，在30℃温度下搅拌30min，使均一溶液变为粘稠溶剂基质，溶胀过夜。

2.按配方表称取羧甲基淀粉钠、马铃薯淀粉和糊精，在强力搅拌下依次慢慢加入到溶胀完全的粘稠溶剂基质中，边加入边搅拌，直至形成均一膏体，约2h；

3.按配方表称取氯化铁、氯化钙，缓慢加入到上述膏体中，继续搅拌，直至形成均一膏体，约1h。

对比例1

配方为(％w/w)：溶剂基质：丙三醇35％、甘露醇30％，增稠剂：PVP 5.5％、黄原胶1.5％，赋形剂：可溶性淀粉26％，离子盐：磷酸二氢钙2％。

按照实施例2的方法，将丙三醇、甘露醇、PVP、黄原胶混合，搅拌条件下得到的均一溶液。对该溶液缓慢升温，在75℃温度下搅拌30min，使均一溶液变为粘稠溶剂基质，溶胀过夜。将得到的粘稠溶剂基质放入捏合机中，开动捏合机搅拌，缓慢加入可溶性淀粉，边加入边捏合直至混合均匀，然后缓慢加入磷酸二氢钙，继续捏合，直至混合均匀。将所得混合物装入封闭膏剂盒中，真空密封于铝箔袋中，灭菌后常温保存；或加工成片状、柱状或其他形状，用淋膜纸包装后真空密封于铝箔袋中，灭菌后常温保存。

对比例2

配方为(％w/w)：麦芽糖10％，羧甲基纤维素20％，羟丙基淀粉15％，壳聚糖10％，明胶10％，丙三醇30％，吐温5％。

将丙三醇和吐温混合，升温至40℃，密封搅拌1h，然后加入麦芽糖、羧甲基纤维素、羟丙基淀粉、壳聚糖和明胶，在60℃下真空搅拌4-5h。将所得混合物装入封闭膏剂盒中，真空密封于铝箔袋中，灭菌后常温保存；或用淋膜纸包装后真空密封于铝塑袋中，灭菌后常温保存。

本发明产品的有效性、稳定性、安全性、生物相容性、止血性等优良性能可通过以下试验对本发明优点进行证明。

验证实例1：有效性和稳定性试验

根据YY/T 0681.1-2009《无菌医疗器械包装试验方法第1部分：加速老化试验指南》中规定的方法，我们对灭菌后的样品进行了加速老化试验，观察加速老化后的样品的性能是否稳定，性能是否良好，以评价样品的稳定性。加速老化试验评价指标主要有：

1.酸碱度：灭菌后的样品放于60℃恒温恒湿箱中，分别于0个月、3个月后取出，按一定比例与纯化水混合，搅拌均匀，浸提24h后所得的酸碱度；

2.涂抹操作性：灭菌后的样品放于60℃恒温恒湿箱中，分别于0个月、3个月后取出，将样品拿在手中涂抹在预先被水浸泡过的样板上，观察是否容易涂抹均匀，样品是否能牢固的粘附在样板上；

3.塑形性：灭菌后的样品放于60℃恒温恒湿箱中，分别于0个月、3个月后取出，用手任意揉捏塑形，评价塑形过程中的难易程度，观察塑形后状态是否良好；

4.吸水性：灭菌后的样品放于60℃恒温恒湿箱中，分别于0个月、3个月后取出，浸泡于足量的水中，样品完全分散均匀后，分离出水分，计算样品吸收的水分是样品重量的多少倍。

5.强度：灭菌后的样品放于60℃恒温恒湿箱中，分别于0个月、3个月后取出，按照行业标准BS757:1975规定，利用质构仪的Bloom***，测试样品具有的强度，此指标影响产品的涂抹操作性、塑形性，也是样品性能稳定的主要参数。

将上述实施例和对比例产品分别进行加速老化试验，结果如下表8和9所示：

表8.加速老化试验前即0个月样品性能表

从上述结果可以看出，本发明配方和工艺制备出的样品性能优良，可根据需要任意塑形，进行骨创面止血时容易涂抹，且黏附牢固，因具有优良的液体吸收性，止血效果良好，非常适合临床医生的临床操作。

表9.加速老化试验3个月后样品性能表

从上述结果可以看出，经过老化试验后，样品性能稳定，仍具备临床医生进行骨创面止血时的要求。按标准规定，60℃加速老化3个月，相当于室温存放约两年的时间，此实验结果表明，本发明工艺配方所得到的样品不仅批量生产容易实现、满足临床的操作要求，而且满足一般上市产品24个月有效期内仍性能优良的要求，具有比较大的实际意义。

验证实例2：安全性和生物相容性试验

为保证用于临床时的安全性，对样品进行了生物相容性的评价。评价方法如下：

1.细胞毒性试验

1.1供试液制备：

取样品在含血清细胞培养基浸提，浸提条件为37±1℃、24±2h。

1.2细胞悬液制备

将已培养48h～72h生长旺盛的细胞用消化液消化后加入细胞培养液，吸管吹打混匀后用血球计数板在显微镜下计数，按下式计算细胞密度：

C＝10⁴×n/4

式中：

C----细胞密度，单位为个每毫升(个/mL)；

N----计数板四角四大格内细胞总数，单位为个。

根据实测细胞密度，加入适量细胞培养液配制成试验要求密度的细胞悬液备用。

1.3将配制好的1×10⁴/mL细胞悬液接种于96孔培养板，设空白对照、阴性对照、阳性对照和供试品组，每组各设至少6孔，每孔接种100μL细胞悬液。置二氧化碳培养箱(含体积分数5％的二氧化碳气体)37℃培养24h后，弃去原培养液。空白对照组加入新鲜细胞培养液，阴性对照组加入阴性对照品浸提液，阳性对照组加入阳性对照溶液或阳性对照品浸提液，供试品组加入试验样品浸提液，每孔100μL，置二氧化碳气体培养箱继续培养72h。

于更换培养液后的72h，置显微镜下观察细胞形态。每孔加入20μL质量浓度为5g/L的四唑盐溶液，继续培养4h后弃去孔内液体，加入150μL DMSO,置振荡器上震荡10min，在酶标仪570nm和630nm波长下测定吸光度，按下式计算相对增值率(RGR)。

RGR＝A/A₀×100％

式中：

RGR----相对增值率，％；

A----供试品组(阴性、阳性组)吸光度；

A₀---空白对照组吸光度。

根据RGR按下表分级标准判定。阴性对照组的反应应不大于1级，阳性对照组至少为3级反应。如阴性对照组合阳性对照组反应不成立时应重新试验。

细胞毒性反应分级表

级别	相对增值率/％
		0	≥100
1	80～99
		2	50～79
3	30～49
		4	0～29

结果判定：在阴性对照和阳性对照产生预期反应的情况下，分析判定供试品细胞毒性反应程度。

2.皮内反应

2.1供试液制备：

2.2试验步骤

试验前4～18h，彻底除去动物背部脊柱两侧被毛，以备注射浸提液。

在每只兔脊柱一侧的5个点皮内注射0.2mL用极性溶剂制备的浸提液。同样在每只兔脊柱同一侧的后五个点皮内注射0.2mL极性溶剂対照液。在每只兔的脊柱另一侧注射用非极性溶剂制备的浸提液和非极性溶剂对照组，操作步骤同上。

注射后即刻并在24h、48h和72h观察记录各注射部位的状况。按下表中的评分***进行组织反应评分，并记录试验结果。

3.溶血试验

取样品在37±1℃、72±2h下浸提，浸提介质为生理盐水，以生理盐水作为阴性对照，灭菌蒸馏水为阳性对照。各加稀释后的新鲜兔血，取上清液，用紫外分光光度计在545nm波长下，测定各自的光密度值(OD)值。溶血率按下式计算：

溶血率(％)＝(D_t-D_nc)/(D_pc-D_nc)

式中，D_t为供试品吸光度；D_nc为阴性对照吸光度；D_pc为阳性对照吸光度。

供试品的溶血率在5％以内为符合规定。

4.热原试验

取样品在含血清细胞培养基浸提，浸提条件为37±1℃、72±2h，得供试品溶液。

取适用的家兔3只测定其正常体温后15分钟以内，自耳静脉缓缓注入规定剂量并温热至约38℃的供试品溶液，然后每隔30分钟按前法测量其体温1次，共测6次，以6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度。

在3只家兔中，体温升高均低于0.6℃，并且3只家兔体温升高总和低于1.3℃。判定供试品的热原检查符合规定。

5.急性全身毒性试验

取样品在含血清细胞培养基浸提，浸提条件为37±1℃、72±2h，得供试液。选用健康检疫合格的小鼠，每组5只，经尾静脉/腹腔注射供试液，给样剂量为50ml/kg。注射后观察小鼠即时反应，并于给样后4h、24h，48h，72h观察和记录各组动物的体重增长状况及一般状态、毒性表现和死亡动物数。体重明显增长，无死亡、一般行为检查及剖解无异常、无毒性反应即为合格。

6.骨植入试验

试验样品原样，骨植入1周、4周、12周，组织学观察应良好。按照GB/T 16886.6—1997规定的骨植入方法将灭菌后的样品制备成直径为2cm，长6cm的圆柱，填入兔股骨钻出的骨腔中。

上述实施例和对比例产品分别进行安全性和生物相容性试验，实验结果如下表10所示：

表10.安全性和生物相容性评价结果

经过重复的生物学评价试验，每次严格操作，最后结果表明，本发明工艺配方得到的样品安全无刺激，且性能稳定，可安全用于临床应用。

验证实例3：止血试验

选用健康成年普通级新西兰白兔，雌雄不限，体重2.5～3.0Kg。饲养温度：20～26℃；相对湿度：40～70％；光照：15～20Lx；饲喂全价颗粒兔饲料，自由饮水。

1.髂骨止血

髂骨松质骨面积较大，骨孔网络结构丰富，且孔径较大，是生物体骨骼骨创面出血最多的部位，在此部位观察骨止血组合物的止血效果比较具有代表性。

取实验动物5只，用2％戊巴比妥钠经耳静脉注射麻醉，脱毛备皮，术区消毒，铺好无菌手术洞巾，分别做双侧髂嵴外侧切口，剥离骨膜，漏出髂骨外板，利用直径2.5mm的骨钻钻出约4mm深的创面，创面出血后，利用本发明实施例2的样品进行涂抹止血，观察止血效果。创面涂抹上本发明样品后，本发明样品能牢固粘附于骨创面上，周围无渗血，样品涂抹完毕后渗血被止住，止血迅速。另利用骨钳咬断髂骨外板约1mm厚度的表面骨部分，显露髂骨表面直径约1cm的创面，表面出血迅速且出血量较大，利用本发明实施例7样品进行涂抹止血，观察止血效果。因为骨创面面积较大，涂抹一层本发明样品后稍有渗血，再补加样品涂抹量后，无渗血。两个部位的止血时间均未超过5min。整个过程操作方便，涂抹简单，止血效果良好。

取实验动物3只，按照上面同样的方法在髂骨外板上钻出约4mm深的创面，创面出血后用对比例1的样品进行涂抹止血，观察止血效果。创面涂抹上对比例1样品后，样品无法粘附于渗血骨创面，未有效止血。同时，采用同样的方法利用骨钳咬断髂骨外板约1mm厚度的表面骨部分，显露髂骨表面，用对比例1的样品进行涂抹止血，观察止血效果。创面涂抹上对比例1样品后，样品无法粘附于渗血渗血骨创面，未有效止血。

2.颅骨止血

颅骨部位因具有较高的颅内压，颅骨部位若有骨缺损而出血时，一般因压强太大出血量较大较急促比较难止血。

取实验动物5只，用2％戊巴比妥钠经耳静脉注射麻醉，脱毛备皮，术区消毒，铺好无菌手术洞巾，行头部正中长约3cm切口，剥离骨膜，漏出头部顶骨，利用骨钻和咬骨钳将顶骨撬开不规则形状的创面，创面出血后，利用本发明实施例4的样品进行涂抹止血，观察止血效果。创面涂抹上本发明样品后，本发明样品能牢固粘附于骨创面上，样品被血液浸入后由白色变成红色，周围微量渗血，五分钟内未见渗血量增加，样品止血迅速。对于不规则骨创面，本组合物同样操作方便，止血效果良好。

取实验动物3只，采用同样的方法在顶骨处开出不规则形状的创面，利用对比例1的样品进行涂抹止血，观察止血效果。创面涂抹上对比例1的样品后，样品无法粘附于骨创面，未有效止血。

验证实例4：降解试验

取实验动物24只，分为4组，用2％戊巴比妥钠经耳静脉注射麻醉，脱毛备皮，术区消毒，铺好无菌手术洞巾，于股骨处切口，剥离骨膜，显露股骨，用低转速间歇地在骨上钻孔，钻头直径为2mm，操作时用生理盐水充分灌洗，以免局部组织过热。每根股骨钻出3个孔，每组分别将实施例3、6、7和对比例2的样品植入于组内新西兰兔的左腿骨孔中，右腿骨孔空白。术后分别于1周、4周、12周分别随机抽取2只动物并处死，以相同方式显露术区，观察新西兰兔左腿植入部位愈合情况和样品残留情况，并与同一只兔子的右腿作比较。截取股骨植入部分，去除肌肉组织，用***溶液浸泡固定，送病理观察。

试验中观察到，1周时实施例3、6、7在骨孔中已经消失，4周后实施例3、6、7所植入的骨孔与右腿骨痂生长情况无较大差异，已掩盖了骨孔大部分，12周后左右腿无差异，骨痂将骨孔全部掩盖，骨愈合良好。对比例2的样品1周时在骨孔处明显可见，4周后样品肉眼隐约可见，骨孔处有约四分之一至二分之一的部分被骨痂掩盖，但同一只兔的右腿骨痂已将骨孔大部分掩盖。12周后对比例2植入部位无肉眼可见样品，骨痂将骨孔大部分掩盖，同一只兔子右腿骨痂已将骨孔全部掩盖。

Claims

1.一种骨创面止血组合物，其特征是：由溶剂基质、增稠剂、赋形剂和离子盐组成，所述溶剂基质为多羟基醇，所述离子盐为无机钙盐和无机铁盐中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的骨创面止血组合物，其特征是：所述溶剂基质为丙三醇、聚乙二醇-400、聚乙二醇-300和丙二醇中的一种或两种，优选为丙三醇和聚乙二醇-400中的一种或两种；所述无机钙盐为硫酸钙、氯化钙、硝酸钙，所述无机铁盐为氯化铁、硝酸铁、硫酸铁，所述离子盐选自上述无机钙盐中的一种或多种，或者选自上述无机铁盐中的一种或多种，或者选自上述无机钙盐和无机铁盐中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的骨创面止血组合物，其特征是：所述增稠剂为羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、卡拉胶和卡波姆中一种或两种；所述赋形剂为羧甲基淀粉钠、马铃薯淀粉、可溶性淀粉、海藻酸钠、糊精和糊精衍生物中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的骨创面止血组合物，其特征是：所述羧甲基纤维素钠为医用级的高黏羧甲基纤维素钠、中黏羧甲基纤维素钠或低黏羧甲基纤维素钠；所述羟丙基甲基纤维素为标称黏度为6～15000cps的羟丙基甲基纤维素，优选为标称黏度为50～1500cps的羟丙基甲基纤维素；所述羟乙基纤维素为标称黏度为250-400 cps、1500-2500 cps、3500-5500 cps或4500-6500cps的羟乙基纤维素，优选为标称黏度为1500-2500 cps或3500-5500cps的羟乙基纤维素；所述卡拉胶为医用级别卡拉胶；所述卡波姆为卡波姆910、卡波姆934、卡波姆940或卡波姆941，优选为卡波姆934或卡波姆940。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的骨创面止血组合物，其特征是：溶剂基质在骨创面止血组合物中的重量百分含量为 30%～80%；增稠剂在骨创面止血组合物中的重量百分含量为0.5%～10%；赋形剂在骨创面止血组合物中的重量百分含量为10%～55%；离子盐在骨创面止血组合物中的重量百分含量为0.05%～5%。

6.根据权利要求5所述的骨创面止血组合物，其特征是：溶剂基质在骨创面止血组合物中的重量百分含量为50-70%；增稠剂在骨创面止血组合物中的重量百分含量为5-7%；赋形剂在骨创面止血组合物中的重量百分含量为20-45%；离子盐在骨创面止血组合物中的重量百分含量为1-3%。

7.一种骨创面止血组合物的制备方法，其特征是包括以下步骤：

b．在搅拌、共混或捏合下将赋形剂缓慢加入到溶胀完全的粘稠的溶剂基质中，加完后继续搅拌、共混或捏合，直至形成均一膏体或胶剂；

c．在搅拌、共混或捏合下将离子盐缓慢加入膏体或胶剂中，加完后继续搅拌、共混或捏合，直至形成均一膏体或胶剂，即为骨创面止血组合物。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征是：还包括将骨创面止血组合物制成片状、柱状或其他形状的步骤；或者还包括将骨创面止血组合物制成膏剂或涂抹剂的步骤。

9.权利要求1-6中任一项所述的骨创面止血组合物在制备人或动物骨创面止血制品中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征是：所述骨创面为各种原因造成的骨创伤所形成的创面。