CN107106725A - 可流动的止血组合物 - Google Patents

Abstract

本公开总的来说涉及止血组合物，其包含用可用作止血组合物的交联剂交联的基于多糖的聚合物，例如支链淀粉、直链淀粉、糊精、麦芽糖糊精和艾考糊精及其改性形式。还提供了使用本文中公开的止血组合物治疗损伤和减缓或停止出血的方法。

Description

可流动的止血组合物

技术领域

本公开总的来说涉及包含基于多糖或淀粉的聚合物、包括支链淀粉、直链淀粉、糊精例如麦芽糖糊精及其改性形式的止血组合物，及其在受试者中停止或减少出血的用途。

背景技术

目前，止血剂和密封剂在外科手术期间被用于协助阻止流血，包括出血。FDA已批准将止血基质例如(Baxter International)用于患者，以增强天然的凝血级联或在手术或创伤位点处机械阻止流血。是在明胶基质内包含人类凝血酶的止血密封剂。

(Baxter International)是一种组合有凝血因子纤维蛋白原和凝血酶的胶原蛋白海绵基质。它被血液和体液激活形成凝块，将所述海绵粘合到组织表面。止血和出血的停止在几分钟内实现。

其他形式的止血组合物包括止血海绵、衬垫(pad)或粉剂，其包含基于植物的材料例如连接有用于改性淀粉的羧甲基的纯化的植物淀粉(Starch Medical)。也参见U.S.8,623,842，其公开了包含明胶化马铃薯淀粉的止血组合物。

本公开提供了改进的止血组合物。

发明概述

本公开提供了一种止血组合物，其在可用作止血基质的可流动的水凝胶中包含多糖或淀粉例如交联的支链淀粉、麦芽糖糊精或交联改性支链淀粉、麦芽糖糊精。目前，许多在患者中使用的止血组合物包含动物来源的起始原料(例如明胶)来制造止血基质。本发明的组合物使用非动物的、基于植物的多糖/淀粉聚合物来制造止血基质。

在各种不同实施方式中，本公开提供了一种止血组合物，其包含交联的多糖或淀粉例如支链淀粉、直链淀粉、糊精如麦芽糖糊精或艾考糊精，或它们的交联改性形式。在各种不同实施方式中，本公开提供了一种止血组合物，其包含交联的支链淀粉、艾考糊精或麦芽糖糊精或交联改性的支链淀粉、艾考糊精或麦芽糖糊精。

在各种不同实施方式中，所述止血组合物是可流动的水凝胶。在各种不同实施方式中，所述止血组合物为粉末形式、可喷雾形式或在海绵、衬垫、膜或纤维中使用。

在各种不同实施方式中，所述止血组合物包含选自如下的交联剂：表氯醇、双-环氧丙基醚、乙二醇-双-环氧丙基醚、三偏磷酸钠(STMP)、己二酸-乙酸酐、三氯氧磷、双环氧化合物、二氧化乙烯基环己烯、二氧化丁二烯、甲醛、戊二醛和京尼平。

在各种不同实施方式中，所述止血组合物还包含一种或多种促凝血剂。示例性的促凝血剂包括但不限于凝血因子，例如凝血酶、血纤蛋白、因子VIII(FVIII)、因子VII(FVII)、因子IX(FIX)、血管假性血友病因子(vWF)、因子II(FII)、因子V(FV)、因子X(FX)、因子XI(FXI)、因子XII(FXII)和因子XIII(FXIII)，组织因子，胶原蛋白；止血剂，包括抗出血剂和收敛剂；以及其他止血剂。在一个实施方式中，所述止血组合物还包含凝血酶。

在各种不同实施方式中，所述止血组合物还包含选自如下的官能团：胺、醛、磷酸酯、膦酸酯、硫酸酯、磺酸酯和羧酸酯基团。

在各种不同实施方式中，所述止血组合物激活凝血级联或增强与组织的结合。

在各种不同实施方式中，所述支链淀粉、直链淀粉或糊精组合物在2000至500,000Da之间、10,000至300,000Da之间、20,000至250,000Da之间、50,000至200,000Da之间、75,000至150,000Da之间、10,000至100,000之间、25,000至75,000之间或40,000至60,000Da之间。

在各种不同实施方式中，所述麦芽糖糊精选自低分子量、中分子量或高分子量麦芽糖糊精。在一个实施方式中，所述低分子量麦芽糖糊精小于2,000Da。在一个实施方式中，所述中分子量麦芽糖糊精在2,000至45,000Da之间。在一个实施方式中，所述高分子量麦芽糖糊精大于45,000Da。在各种不同实施方式中，所述艾考糊精在13000-19000Da之间。

在各种不同实施方式中，所述止血组合物还包含一种或多种活性剂和/或添加剂。本文中设想的活性剂是指在疾病的诊断、治愈、减轻、治疗或预防中提供药理活性或其他直接效应，或影响人或动物身体的结构或任何功能的药剂。本文中设想的添加剂是指起到提高或促进活性成分的活性或所述止血组合物的稳定性或其他性质的作用的药剂。在各种不同实施方式中，所述活性剂或添加剂选自多糖、聚乙烯醇、聚乙烯亚胺、壳聚糖、海藻酸、岩藻多糖、透明质酸、肝素、乙酰肝素、硫酸软骨素、支链淀粉、直链淀粉、黄原胶、瓜尔胶、卡拉胶、羧甲基纤维素、羧甲基麦芽糖糊精、羧甲基艾考糊精、羧甲基淀粉、琼脂糖和天然或合成聚合物(例如中性、阳离子、阴离子、碱性或酸性聚合物)。

在各种不同实施方式中，所述多糖或淀粉聚合物、包括支链淀粉、直链淀粉、糊精、艾考糊精或麦芽糖糊精，源自于植物材料、细菌、真菌或藻类。在各种不同实施方式中，所述植物材料选自玉米、大豆、水稻、木薯、小麦、糯玉米或糯米。

在各种不同实施方式中，当所述止血组合物为粉末形式时，所述组合物处于粒子形式，其中所述粒子在10至1000μm、50至800μm、50至700μm、150至700μm、200至700μm、300至550μm、350至550μm之间。

在各种不同实施方式中，所述止血组合物的可流动形式含有50％(w/w)以上具有100至1000μm的尺寸的粒子，或80％(w/w)以上具有100至1000μm的尺寸的粒子。设想了所述可流动形式含有交联的生物相容的聚合物，其量为5至30％(w/w)、10至25％(w/w)或12至20％(w/w)。

在各种不同实施方式中，所述止血基质具有超过3小时、4小时、5小时、6小时、12小时、24小时、2天、3天、5天、10天、15天、20天、25天或30天的降解时间。

在各种不同实施方式中，所述止血基质具有400％至1300％、500％至1100％或600％至900％范围内的E溶胀。

在各种不同实施方式中，所述止血基质具有接近所述E溶胀的Q溶胀。设想了在某些实施方式中高的Q溶胀可能是有益的，并且接近所述E溶胀的Q溶胀可以更快地达到最大溶胀。

度量所述止血组合物的稳定性和效能的其他参数包括测定凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)血小板因子4(PF4)，抗凝参数包括抗凝血酶III(AT-III)，血纤蛋白溶解参数包括血纤维蛋白溶酶原(PLG)、血纤蛋白降解产物(FDP)和D-二聚体，血液粘度(BV)和血浆粘度(PV)。

在某些实施方式中，所述组合物在预先包装在注射器或用于递送到患者的其他装置中时是稳定的。在各种不同实施方式中，所述组合物在所述递送装置内部或外部稳定1、2、3、4、5、6、7、8、9或10天。在某些实施方式中，所述组合物在可流动形式下，在室温下稳定1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时。

在各种不同实施方式中，本公开提供了一种选自创伤、出血、受损组织和出血组织的损伤的治疗方法，所述方法包括向损伤位点给药本文中描述的止血组合物。

还设想了一种用于减缓或停止出血的方法，所述方法包括向出血区域施加本文中描述的止血组合物。

在各种不同实施方式中，所述损伤或出血发生在外科手术期间。

在各种不同实施方式中，所述止血组合物作为水凝胶、采取粉末形式或作为衬垫、膜或纤维施用。在各种不同实施方式中，所述止血组合物为粉末形式，并且首先将所述组合物与液体混合以形成可流动的组合物。在各种不同实施方式中，所述液体选自盐水、水、缓冲溶液和蛋白质溶液。设想了所述蛋白质溶液包含一种或多种凝血因子或天然或合成的促凝血剂。

在各种不同实施方式中，在所述方法中使用的止血组合物在数秒或数分钟内终止出血。设想了所述止血组合物在受试者中，在10、20、30、40、50或60秒内或在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或15分钟内终止或减少出血。

还设想了一种用于选自创伤、出血、受损组织和出血组织的损伤的治疗或用于减缓或停止出血的试剂盒，其包含a)本文中描述的止血组合物，和b)使用说明书。

在所述试剂盒的各种不同实施方式中，所述止血组合物为干燥形式，并且所述试剂盒还包含用于重构所述止血组合物的可药用液体或稀释剂。

还设想了制造本文中所描述的止血组合物的方法。在各种不同实施方式中，本公开提供了一种制造止血组合物的方法，所述方法包括将适合于改性的聚合组合物(天然或合成的多糖，或天然或合成的不基于糖类的聚合物)用选自表氯醇、双-环氧丙基醚、乙二醇-双-环氧丙基醚、三偏磷酸钠(STMP)、己二酸-乙酸酐、三氯氧磷、甲醛、双环氧化合物、二氧化乙烯基环己烯、二氧化丁二烯、甲醛、戊二醛和京尼平的双功能交联剂交联，所述交联通过将所述聚合物与所述交联剂在水性或有机或其组合的溶液例如缓冲液或蛋白质溶液中，以0.01:1至20:1范围内的不同摩尔当量(聚合物：交联剂)，在7.0至14.0范围内的不同pH条件下，在0-100℃例如4℃、20℃、25℃、37℃、42℃或50℃下接触至少1至24小时来进行，以及分离所述交联的聚合物组合物。

应该理解，设想了本文中描述的特点的所有组合，即使所述特点的组合未能在本文的同一语句或段落中具体找到。这特别是包括在本文中所描述的本发明的所有情况下，单独或组合地使用本文中公开的所有标志物进行个体分析或单体型分析。

附图简述

图1描绘了用于评估密封剂施用之前和之后的出血的目测出血量表。

图2的图示出了止血成功率随FLOSEAL VH S/D和可流动麦芽糖糊精的时间的变化曲线。

图3示出了FLOSEAL VH S/D和可流动麦芽糖糊精的止血成功率(所有时间点/病损)。

详细描述

本公开提供了一种包含基于多糖或淀粉的聚合物的止血组合物，其中所述聚合物的性质已被改变，以获得具有优化的止血概貌的终产物。例如，所述聚合物被交联以改变降解时间和粒子的溶胀/流体摄取和粒子的孔隙度，以用作止血基质。所述基于多糖的水凝胶可以以水合/可流动的格式使用或作为干粉使用。

除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员所通常理解的相同的意义。下面的参考文献为本领域技术人员提供了在本公开中使用的许多术语的一般性定义：Singleton等，《微生物学和分子生物学词典》(DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY)(第二版，1994)；《剑桥科学技术词典》(THE CAMBRIDGE DICTIONARY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY)(Walker主编，1988)；《遗传学词汇》(THE GLOSSARY OF GENETICS)，第五版，R.Rieger等主编，Springer Verlag(1991)；以及Hale&Marham，《HARPER COLLINS生物学词典》(THE HARPER COLLINSDICTIONARY OF BIOLOGY)(1991)。

当在本公开和随附的权利要求书中使用时，没有具体数量的指称包括复数指称物以及单数指称物，除非上下文明确规定不是如此。

当在本文中使用时，除非另有规定，否则下述术语具有归属于它们的意义。

术语“约”或“大约”意味着对于特定值来说，由本领域普通技术人员所确定的可接受的误差，其部分依赖于所述值的测量或确定方式。在某些实施方式中，术语“约”或“大约”意味着在1、2、3或4个标准偏差之内。在某些实施方式中，术语“约”或“大约”意味着在给定值或范围的30％、25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％之内。当在一系列两个或更多个数值中的第一个数值之前使用术语“约”或“大约”时，应该理解所述术语“约”或“大约”应用于该系列中的每一个数值。

“止血组合物”是指可用于停止或减少由损伤或手术引起的出血的组合物。设想了本公开的止血组合物包含基于多糖或淀粉的聚合物，例如支链淀粉、直链淀粉或糊精包括淀粉糊精、环糊精、麦芽糖糊精、艾考糊精或其改性的变体。

“可流动的”组合物或“水凝胶”是指基本上液体的略微粘稠的溶液、固体、半固体、假塑性或塑性结构，其含有水性组分以产生具有能够通过注射器或其他装置流动并给药到受试者的性质的凝胶状或胶冻状料团或糊状溶液。所述可流动的水凝胶在室温和体温下是液体状、略微粘稠的溶液或糊状溶液。在各种不同实施方式中，可流动组合物是在通过注射器或其他装置挤出以给药到受试者时保持形状的组合物。

诊断或治疗的“受试者”是人或非人类动物，包括哺乳动物或灵长类动物。哺乳动物的实例包括但不限于哺乳纲的任何成员：人类，非人类灵长动物例如黑猩猩以及其他猿和猴物种；家畜例如牛、马、绵羊、山羊、猪；驯养动物例如兔、狗和猫；实验室动物包括啮齿动物例如大鼠、小鼠和豚鼠，等等。非哺乳动物的实例包括但不限于鸟类、鱼类等。所述术语不指示特定年龄或性别。

术语治疗剂的“有效量”意味着足以对受试者的健康状况、病理或疾病产生所需结果或用于诊断目的的剂量。所述所需结果可以包括在所述剂量的接受者中的主观或客观改善。“治疗有效量”是指药剂的对健康产生目标有益效果有效的量。

当在本文中使用时，术语“止血剂”是指用于在受试者中减缓或停止出血和/或可以促进凝血级联以停止出血的组合物。Glick等人(Indian Dermatol Online J.4(3):172–176,2013)和Sundaram等人(Indian J Urol.26(3):374–378,2010)描述了各种不同的止血剂。示例性的止血剂包括但不限于氯化铝、硫酸铁(Monsel's溶液)、硝酸银、氯化银糊剂、凝血酶、明胶(例如猪明胶和明胶混合物)、微孔多糖球、具有钾盐的亲水性聚合物(HPPS)、氧化的再生纤维素、微纤维胶原、氨基己酸、抑肽酶、氨甲环酸、藻酸盐、矿物沸石、氰基丙烯酸盐、壳聚糖和高岭土。

止血组合物

止血组合物已使用各种不同的聚合物和外科和伤口护理领域中的不同组合物来制备。例如，以前已公开了京尼平交联的生物材料，包括京尼平交联的明胶(参见例如美国专利号6,608,040，EP2181722，WO2008/076407；Bigi等，Biomaterials 23(2002),4827-4832；Yao等，Mat.Chem.Phys.83(2004),204-208；Turo等，Int.J.Biol.Macromol.(2011)，doi:10.1016；Chiono等，J.Materl.Sci.:Mater Med.(2008)19:889-898)。美国专利出版物20130129710公开了一种可流动止血组合物，其在止血材料中使用京尼平类型的交联剂。

Atyabin等人(Archives of Pharmacal Research 29:1179-1186,2006)公开了交联的淀粉微球。Satyanarayana等人(Superdisintegrants,Int.J.ChemTech Res 3:1786-1798,2010)描述了2-羟基亚甲基交联的糊精的合成和评估。美国专利6,419,957描述了具有官能团的交联的高直链淀粉含量的淀粉作为基质用于药剂的缓慢释放。也参见美国专利出版物20100255101、U.S.2007/0087061、美国专利6,060,461、WO 2008/117300、WO 2009/091549和WO 2009153798。

本公开设想了在止血组合物中使用基于多糖或淀粉的聚合物，例如支链淀粉、直链淀粉或糊精包括淀粉糊精、环糊精、麦芽糖糊精、艾考糊精或其衍生物和片段。支链淀粉是存在于植物中的一种可溶性多糖，是高度分支的葡萄糖聚合物，并且与直链淀粉一起，是淀粉的组分。淀粉包含约70重量％的支链淀粉。支链淀粉的葡萄糖单元以线性方式用α(1→4)糖苷键相连。分支使用每24至30个葡萄糖单元出现的α(1→6)键进行。直链淀粉不溶于水。直链淀粉包含α(1→4)连接的葡萄糖分子，但含有非常少的α(1→6)键。

糊精是一类由淀粉的水解产生的低分子量糖类。麦芽糖糊精是短链淀粉糖。环糊精是通过淀粉被某些细菌的降解形成的环状解聚蛋白。淀粉糊精是可以由α-1,6糖苷键的酶水解或支链淀粉去分支产生的直链糊精或短链直链淀粉。

本文中设想了交联剂，其包括但不限于表氯醇、双-环氧丙基醚、乙二醇-双-环氧丙基醚、三偏磷酸钠(STMP)、己二酸-乙酸酐、三氯氧磷、甲醛、双环氧化合物、二氧化乙烯基环己烯或二氧化丁二烯(如专利WO 2009153798 A1中所述)、甲醛/戊二醛和京尼平。Atyabi等人的研究证实了通过改变交联剂的类型和浓度以及交联时间，可以控制淀粉粒子的尺寸、溶胀比和包含在粒子内的小分子的释放。

在某些实施方式中，在交联之前或之后，所述多糖聚合物，包括支链淀粉、麦芽糖糊精或艾考糊精，可以被进一步官能化以含有诸如胺、醛、磷酸酯、膦酸酯、硫酸酯、磺酸酯、羧酸酯的基团，所述基团能够与组织和体液相互作用，目的在于激活凝血级联和/或增强与组织的结合。这些增添的性质(例如阴离子或阳离子电荷)可以为所述水凝胶提供止血性质，并因此消除了对止血剂例如凝血酶的需要。粉末或可流动止血组合物可以被配制成含有或不含凝血酶。

在各种不同实施方式中，将所述交联的多糖聚合物干燥。在干燥状态下，所述止血组合物即使在高温(例如超过20℃、超过30℃或甚至超过40℃)下也长时间储存稳定。干燥条件包括将交联的多糖聚合物包括艾考糊精或麦芽糖糊精干燥至水分含量低于15％(w/w)、低于10％、低于5％或低于1％。对于干燥的组合物来说，设想了所述组合物具有至少2g/g、至少3.5g/g或3.75g/g或更高的重新水合率。不使用重新水合助剂制备的类似粉末的重新水合率通常低于3，并且重新水合率的提高百分率通常为至少5％、至少10％或至少25％或更高。

在另一个实施方式中，产品以水合或湿润状态供应，其中水合溶液可以是生物相容的缓冲液或溶液。

在一个实施方式中，符合本公开的止血组合物含有颗粒形式的交联的多糖聚合物，例如作为颗粒材料。所述颗粒材料当暴露于流体(即可药用稀释剂)时可以快速溶胀，并且在这种溶胀形式下能够有助于可以施用到出血位点的可流动糊剂。所述多糖聚合物例如麦芽糖糊精或艾考糊精可以作为膜提供，其然后可以被磨碎以形成颗粒材料。该颗粒材料中包含的大多数粒子(例如超过90％w/w)具有10至1000μm、50至800μm、50至700μm、150至700μm、200至700μm、300至550μm和350至550μm的粒子尺寸。

在各种不同实施方式中，所述止血组合物是吸收液体的。例如，在与液体例如水性溶液或悬液(特别是缓冲液或血液)接触后，所述聚合物吸收液体，并根据水合程度表现出一定程度的溶胀。所述材料吸收以重量计至少300％、约400％至约2000％、约500％至约1300％的水或水性缓冲液，对应于亚基的单个粒子的直径或宽度的理论增加在例如约50％至约500％或约50％至约250％的范围内。例如，如果(干燥的)颗粒状粒子具有0.01mm至1.5mm或0.05mm至1mm的优选尺寸范围，则完全水合的组合物(例如在给药到伤口上之后或与水性缓冲溶液接触之后)可能具有0.05mm至3mm、特别是0.25mm至1.5mm的尺寸范围。

取决于目标用途，本公开的止血组合物的平衡溶胀一般可以在例如400％至1300％、500％至1100％或600％至900％的范围内。这种平衡溶胀可以例如(对于交联的聚合物来说)通过改变交联程度来控制，所述交联程度的改变进而通过改变交联条件例如交联剂的暴露持续时间、交联剂的浓度、交联温度等来实现。具有不同平衡溶胀值的材料在不同应用中表现不同。所述控制交联和平衡溶胀的能力允许本发明的组合物被优化用于各种不同的用途。除了平衡溶胀之外，在即将递送到靶位点之前控制材料的水合也是重要的。当然，水合和平衡溶胀是密切关联的。具有0％水合的材料不溶胀。具有100％水合的材料将具有其平衡水含量。0％至100％之间的水合将对应于最小和最大量之间的溶胀。

为了将所述交联聚合物完工成可药用止血组合物，使用可药用稀释剂。

在各种不同实施方式中，所述可药用稀释剂是水性溶液，并且可以含有选自NaCl、CaCl₂、乙酸钠、乳酸钠、柠檬酸钠、癸酸钠和甘露糖醇的物质。例如，可药用稀释剂包含注射用水，并彼此独立地包含50至200mM NaCl(例如150mM)、10至80mM CaCl₂(例如40mM)、1至50mM乙酸钠(例如20mM)和至多10％w/w甘露糖醇(例如2％w/w)。在各种不同实施方式中，所述稀释剂还可以包括缓冲液或缓冲***，以便将重构的干燥组合物的pH缓冲在例如3.0至10.0的pH、6.4至7.5的pH或6.9至7.1的pH。

在某些实施方式中，所述可药用稀释剂包含10至1000I.U.凝血酶/ml或250至700I.U.凝血酶/ml的凝血酶。在各种不同实施方式中，即用形式的止血组合物含有10至100,000国际单位(I.U.)的凝血酶、100至10,000I.U.或500至5,000I.U。即用组合物中的凝血酶浓度在10至10,000I.U.或50至5,000I.U.或100至1,000I.U./ml的范围内。所述稀释剂以在即用组合物中实现所需终浓度的量使用。所述凝血酶制剂可以含有其他有用组分，例如离子、缓冲剂、赋形剂、稳定剂等。设想了所述凝血酶制剂含有人白蛋白、甘露糖醇或其混合物。优选的盐类是NaCl和/或CaCl₂，两者都以常用于凝血酶的量和浓度使用(例如0.5至1.5％NaCl(例如0.9％)和/或20至80mM CaCl₂(例如40mM))。

凝血酶(或任何其他诱导凝血的药剂例如蛇毒、血小板激活物、凝血酶受体激活肽和纤维蛋白原沉淀剂)可以源自于适合用于人类或动物(即可药用)的任何制剂。适合的凝血酶来源包括人或牛血液、血浆或血清(如果预期没有不利的免疫反应，可以使用其他动物来源的凝血酶)和重组来源的凝血酶(例如人重组凝血酶)；对于某些应用来说，自体人凝血酶可能是优选的。

所述稀释剂优选地包含例如pH为3.0至10.0的缓冲液或缓冲体系。

在各种不同实施方式中，本公开提供了一种止血组合物，其包含本文中设想的采取颗粒形式的适用于止血(控制出血)的多糖聚合物包括支链淀粉或糊精，其中所述组合物以糊剂形式存在，其含有量为5至30％(w/w)、10至25％(w/w)或12至20％(w/w)的交联的生物相容聚合物。在另一个实施方式中，所述交联的聚合物例如本文中描述的支链淀粉或糊精以15.0至19.5％(w/w)(＝每单位重量的最终组合物的干燥明胶重量)、16.0至19.5％(w/w)、16.5至19.5％(w/w)、17.0至18.5％(w/w)或7.5至18.5％(w/w)、16.5至19.0％(w/w)或16.8至17.8％(w/w)或16.5至17.5％(w/w)的量存在，并且其中所述组合物任选地包含挤出增强剂例如白蛋白。例如，如果所述挤出增强剂是白蛋白(例如人血清白蛋白)，则它以0.5至5.0％(w/w)(＝每单位重量的最终组合物的挤出增强剂重量)之间、1.0至5.0％(w/w)之间、2.0至4.5％(w/w)之间、1.5至5.0％(w/w)之间或约1.5％(w/w)的量提供。

在各种不同实施方式中，本公开涉及一种止血组合物，其用于选自创伤、出血、受损组织、出血组织和/或骨骼缺损的损伤的治疗。

在各种不同实施方式中，本公开提供了一种选自创伤、出血、受损组织和/或出血组织的损伤的治疗方法，所述方法包括向损伤位点给药符合本发明的止血组合物。

本公开还提供了一种用于将符合本发明的止血组合物递送到患者体内的靶位点的方法，所述方法包括将止血组合物递送到所述靶位点。尽管在某些实施方式中可以将干燥组合物直接施用到靶位点(并且任选地，如果需要，在靶位点处与可药用稀释剂相接触)，但设想了在给药到靶位点之前将所述干燥的止血组合物与可药用稀释剂相接触，以便获得湿润形式、特别是水凝胶形式的可流动止血组合物。

本文中设想的稀释剂还可以含有其他成分例如赋形剂。“赋形剂”是添加到溶液以例如确保凝血酶在储存(或灭菌(例如通过辐射))后保留其化学稳定性和生物活性的惰性物质，或用于美观原因的惰性物质例如着色剂。赋形剂包括蛋白质例如人白蛋白，糖类例如甘露糖醇，聚合物例如聚乙二醇(PEG)，以及乙酸钠。所设想的用于重构产品的人白蛋白的浓度为0.1至100mg/ml或1至10mg/ml。甘露糖醇浓度可以在0.5至500mg/ml或10至50mg/ml的浓度范围内。PEG浓度可以在0.5至500mg/ml或10至50mg/ml的浓度范围内。PEG的平均分子量可以在500至20,000的范围内。乙酸钠浓度在1至10mg/ml或2至5mg/ml的范围内。

在一个实施方式中，最终容器还含有当暴露于灭菌辐射时有效抑制聚合物的改性的量的稳定剂，优选为抗坏血酸、抗坏血酸钠、抗坏血酸的其他盐或抗氧化剂。

在各种不同实施方式中，本发明的止血组合物的即用形式可以提供有稀释剂，然后可以将其直接施用到患者。还设想了将止血组合物的即用形式给药患者或与患者相接触的方法，其中在第一注射器中提供所述止血组合物，并在第二注射器中提供用于重构的稀释剂，所述第一和第二注射器彼此相连，并且流体被带入到第一注射器中以产生所述止血组合物的可流动形式；并任选地将所述止血组合物的可流动形式返回到第二注射器至少一次。这一过程(也被称为“涡动”(swooshing))提供了符合本公开的组合物的适合的即用形式，其可以容易且高效地并在短时间内制造，例如在手术期间的紧急形势下制造。本文中提供的止血组合物的这种可流动形式特别适合于使用在选自创伤、出血、受损组织、出血组织和/或骨骼缺损的损伤的治疗中。在各种不同实施方式中，所述即用制剂作为水凝胶存在或提供。

出于稳定性原因，这些产品(以及符合本公开的产品)在某些实施方式中以干燥形式提供在最终容器中，并在即将使用之前变成即用形式(其通常为水凝胶、悬液或溶液的形式)，这需要添加润湿剂或溶解(悬浮)剂。

在各种不同实施方式中，所述止血组合物的可流动形式含有50％(w/w)以上具有100至1000μm的尺寸的粒子或80％(w/w)以上具有100至1000μm的尺寸的粒子。设想了所述可流动形式含有交联的支链淀粉或糊精，其量为5至30％(w/w)、10至25％(w/w)或12至20％(w/w)。

符合本公开的止血交联多糖聚合物、包括本文中的支链淀粉或糊精，在施用到伤口后形成高效的基质，其可以形成血液流动的屏障物。具体来说，所述止血聚合物的溶胀性质可以使其成为对抗出血和再次出血过程的有效的机械屏障物。

在符合本发明的止血组合物中可能存在其他组分。在各种不同实施方式中，符合本发明的止血组合物还可以包含选自如下的一种或多种物质：抗血纤蛋白溶解剂、促凝血剂、血小板激活剂、抗生素、血管收缩剂、染料、生长因子、骨形态发生蛋白和止痛剂。

本公开还提供了拉丝过的最终容器。该最终容器含有无菌、储存稳定和可销售形式的本发明的止血组合物。所述最终容器可以是适合盛放(和储存)可药用化合物的任何容器。可以使用注射器、小瓶、管等；然而，将符合本发明的止血组合物提供在注射器中是优选的。由于注射器在医学实践中的操作优势，注射器也是现有技术中公开的止血组合物的优选给药手段。然后可以优选地将所述组合物通过特定的注射针头或通过适合的导管施用(如有必要，在重构之后)。所述重构的止血组合物(其被重构以形成水凝胶)也可以通过各种不同的其他手段施用，例如通过抹刀、刷子、喷射、人工加压或通过任何其他常规技术。设想了通过内窥镜(腹腔镜)手段将所述可流动止血组合物给药到患者。在各种不同实施方式中，所述止血组合物使用注射器或能够将重构的组合物通过孔口、孔隙、针头、管或其他通道挤出以形成材料的珠子、层或类似部分的类似施药器施用。所述组合物的机械破坏可以通过经注射器或其他施药器中的孔口挤出来进行，所述孔口通常具有0.01mm至5.0mm、优选地0.5mm至2.5mm范围内的尺寸。

本发明的另一方面涉及一种提供即用型止血组合物的方法，所述方法包括将通过本发明的方法生产的止血组合物与可药用稀释剂相接触。

试剂盒

本文中还设想了包含可用于执行所述方法的止血组合物的试剂盒。所述试剂盒包含符合本公开的止血组合物和使用说明书。

设想了所述试剂盒还包含用于重构止血组合物的可药用稀释剂，特别是如果所述止血组合物以干燥形式包含的话。试剂盒的其他组分可以是一种或多种用于给药的装置例如注射器、导管、刷子等(如果组合物尚未提供在所述装置中)，或对于在医学(手术)实践中使用来说必需的其他组分例如替换用针头或导管、额外的小管或其他伤口覆盖手段。在各种不同实施方式中，本文中的试剂盒包含盛装有干燥和稳定的止血组合物的注射器和含有稀释剂的注射器(或被提供以从另一个稀释剂容器吸取稀释剂)。还设想了所述试剂盒包含可用于混合或“涡动”所述组合物的连锁注射器。

从下面的实施例，本发明的其他特点和详细情况将变得显而易见，所述实施例旨在说明而不是限制。

实施例

实施例1-可流动止血基质的制备

制备了一系列使用低(<2,000Da)、中(20kDa)和高分子量(>45,000Da)麦芽糖糊精(艾考糊精)起始原料的交联的麦芽糖糊精。制备随着交联剂(表氯醇)和基料相对于麦芽糖糊精的比率、反应温度、添加或不添加表面活性剂、在水性还是非水性介质中、搅拌还是在静态条件下以及合成后加工(清洗、研磨、干燥)而变。水凝胶的亲水性(溶胀)通过测量它们在0.9％盐水中温育24小时后的水摄取量来评估(平衡溶胀)，并确定其溶胀重量。然后将样品在120℃干燥2小时并确定其干燥重量。使用重量差来计算平衡溶胀的％(E-溶胀)。使用艾考糊精制备的水凝胶具有120至900％范围内的E溶胀和120至350范围内的30秒时的Q溶胀。反应时间约为22至23分钟。使用高分子量艾考糊精制造的水凝胶显示出450至1200％范围内的E溶胀。反应时间约为16分钟。

将交联的麦芽糖糊精0092-120A用研钵和研杵磨碎，然后通过0.5mm筛网筛分。将筛分的材料评估为可流动止血基质。5mL注射器装有0.8克的磨碎材料，然后连接到另一个含有3.8mL水的注射器。将所述注射器前后涡动约20次以将所述粉剂水合，然后静置约30秒，随后挤出所述水合的材料。在挤出后，观察到具有与Floseal VH/SD止血基质可比的稠度的水凝胶。

实施例2-评估使用所述止血组合物的止血的方法

本文中的止血组合物的止血能力可以使用本领域中已知的几种测定法来度量。

凝血弹性描记法(TEG)如本领域中所述来进行。例如，使用5000止血***并利用软件TEG Analytical Software(TAS)。简单来说，将0.125g试验品用625μl含有500IU/ml凝血酶和40mM CaCl₂的凝血酶储用溶液重构，然后将其静置5min。将大约150μl或150mg重构的试验品转移到置于仪器中的TEG杯。向所述杯立即加入210μl用5U/ml肝素抗凝的血液并快速混合。然后开始TEG并通常进行20分钟的数据收集。使用幅度(A)和最大幅度(MA)值对产品性能进行评分并与参比标准品进行比较。>50mm的A和MA值和>1的A/MA值预测了良好的止血活性和稳健的凝块形成。

挤出力(EF)如文献中所述来测量(参见例如US 20130129710)。进行EF分析是为了确定附连有标准的6.35cm递送尖头的具有公鲁尔接口锁***的5cc注射器(其中圆柱体具有0.482英寸的内径)的力量值。简单来说，将0.80g试验品转移到5.0ml Matrix(如上所述)注射器中。将4.0ml凝血酶/CaCl₂储用溶液(含有500IU/ml凝血酶和40mM CaCl₂和约50mg/ml白蛋白)吸取到带有母鲁尔接口锁***的5.0ml标准注射器中。将两个注射器相连并将所述试验品快速重构20次，然后允许在分析之前等待30±3分钟。然后将所述连锁的注射器再“涡动”两次，并将带有公鲁尔接口锁***的含有重构样品的注射器配上施药器尖头并***到MTS INSIGHT^TM电机械测力计中。将样品以250mm/分钟的设定挤压速率挤出，并记录在全部样品挤出过程中确定的平均力。

胶原酶测定法可用于测量细胞裂解的时间，其是在体内停留时间的指示。对于所述测定法来说，在立式圆筒混合机(end over end mixer)中将0.08g试验和对照样品与2mlPBS缓冲液在37℃下温育30分钟。然后将所述样品在Eppendorf离心机中在室温下以14000rpm进行5分钟离心。舍弃上清液并将沉淀物重悬浮在1.2ml含有0.111U/ml胶原酶的PBS缓冲液中。将参比样品与1.2ml PBS缓冲液(不添加胶原酶)温育。将所述样品在立式圆筒混合机中在37℃下温育，并在确定的静置时间后吸取上清液，称重并收集以备蛋白质测定(BCA试验)，并将样品用1.2ml含有胶原酶的PBS缓冲液重新装填。裂解时间可以通过测量随时间释放到上清液中的降解蛋白质的含量来确定。在这种测定法中测量试验品的估算的90％裂解时间，是所述水凝胶的潜在体内停留时间的间接估算。

实施例3-可流动止血剂的体内评估

材料和方法：对于本研究来说，进行中线剖腹手术，然后通过电烙术来停止从手术切口的出血。暴露出肝脏并分离肝叶。使用直径10mm的钻孔活检来产生一系列2个不完整厚度的病损，深约5mm，并移除核心组织。在所述病损上进行处理前出血评估，其包括使用预先称重的纱布收集从每个病损流出的血液6秒钟。

将试验品(即可流动止血组合物)随机分配并递给在病损产生之前对处理不知情的外科医生。将约1.0ml分派的止血试验品局部施用到病损。使用盐水润湿的纱布帮助试验品接近它们的指定病损，并启动计时器。在2分钟后移除盐水润湿的接近纱布。

在移除纱布后立即(0时间点)和其后2、3、5、7和10分钟时评估从每个病损出血的程度，所述时间等于施用后2、4、5、7、9和12分钟。

处理后定量出血评估使用预先定义的评分***(图1)来进行，其中成功的止血被定义为出血评分≤1。饱和有血液但是没有主动出血的试验品接受0的出血评分。在5分钟的评估后，使用盐水将过量试验品从病损处冲走。所述程序在多个肝叶中重复并进行。单个外科医生产生、处理并进行观察评估。

将试验品粉剂分配到5mL注射器(0.8g/注射器)中，重新指定为可流动麦芽糖糊精并在猪肝钻孔模型中进行评估。使用的对照组合物是10mL试剂盒型号的FLOSEAL VH S/D。制备在0.9％盐水中含有500I.U./ml凝血酶的溶液，并用于重构每个试验品(3mL/注射器)。

通过在注射器之间通过(“涡动”)20次将每个试验品样品快速混合，并在制备后5分钟至60分钟之间施用到病损。将重构试验品的1毫升等分试样分配到各个3mL容积的注射器中。然后使用这些各个3mL注射器将试验品施用到肝脏钻孔病损。

作为比较，也使用猪肝钻孔活检模型进行FLOSEAL VH S/D的体内评估。通过IFU准备压紧器并在制备后5-60分钟之间施用到病损。将重构FLOSEAL Matrix的1毫升等分试样分配到各个3mL容积的注射器中。然后使用这些各个3mL注射器在各种不同时间点将试验品施用到肝脏钻孔病损。

结果：可流动麦芽糖糊精和Floseal VH S/D的体内评估使用猪肝钻孔活检模型在4只动物中进行，每天1只动物。结果呈现在表1和图2和3中。两个样品组(可流动麦芽糖糊精和FLOSEAL VH S/D)的施用前出血速率呈现在表1中。在处理组之间处理前出血速率相近，表明FLOSEAL和可流动Sierra被给药到可比的肝脏病损。

表1.施用前出血速率(mL/min)的概要

图2中呈现的数据证实了在止血评估期间，在各个不同时间点时，在用可流动麦芽糖糊精处理的78.1-90.6％的病损中止血成功(对于Floseal VH S/D来说为74.2-96.8％)。在所有病损中，可流动麦芽糖糊精处理在192个时间点中的157个中引起止血成功(81.8±4.6％)，与此相比用Floseal VH S/D的处理为186个时间点中的161个(86.6±8.0％)(图3)。按照实施例1制备的可流动麦芽糖糊精引起总体上与FLOSEAL VH S/D可比的止血成功和出血减少。

对于本领域技术人员来说，预期可以对如上面的说明性实施例中所阐述的发明进行大量修改和改变。因此，本发明将只受限于权利要求书中出现的限定特征。

Claims (26)

1.一种止血组合物，其包含交联的支链淀粉、艾考糊精或麦芽糖糊精或交联改性的支链淀粉、艾考糊精或麦芽糖糊精。

2.权利要求1的止血组合物，其中所述组合物是可流动的水凝胶。

3.权利要求1的止血组合物，其中所述组合物为粉末形式。

4.权利要求1的止血组合物，其中所述组合物为可喷雾形式。

5.前述权利要求任一项的止血组合物，其还包含选自如下的一种或多种药剂：促凝血剂、凝血因子、止血剂、收敛剂和其他止血药剂。

6.权利要求5的方法，其中所述促凝血剂是凝血酶。

7.前述权利要求任一项的止血组合物，其中支链淀粉、艾考糊精或麦芽糖糊精还包含选自如下的官能团：胺、醛、磷酸酯、膦酸酯、硫酸酯、磺酸酯和羧酸酯基团。

8.前述权利要求任一项的止血组合物，其中所述组合物激活凝血级联或增强与组织的结合。

9.前述权利要求任一项的止血组合物，其中交联的组合物包含选自如下的交联剂：表氯醇、双-环氧丙基醚、乙二醇-双-环氧丙基醚、三偏磷酸钠(STMP)、己二酸-乙酸酐、三氯氧磷、甲醛、双环氧化合物、二氧化乙烯基环己烯、二氧化丁二烯、甲醛、戊二醛和京尼平。

10.前述权利要求任一项的止血组合物，其中所述麦芽糖糊精选自低分子量、中分子量或高分子量麦芽糖糊精。

11.权利要求10的止血组合物，其中所述低分子量麦芽糖糊精小于2,000Da。

12.权利要求10的止血组合物，其中所述中分子量麦芽糖糊精在2,000至45,000Da之间。

13.权利要求10的止血组合物，其中所述高分子量麦芽糖糊精大于45,000Da。

14.前述权利要求任一项的止血组合物，其还包含选自如下的一种或多种添加剂或活性剂：多糖、聚乙烯醇、聚乙烯亚胺、壳聚糖、海藻酸、岩藻多糖、透明质酸、肝素、乙酰肝素、硫酸软骨素、支链淀粉、直链淀粉、黄原胶、瓜尔胶、卡拉胶、羧甲基纤维素、羧甲基麦芽糖糊精、羧甲基艾考糊精、羧甲基淀粉、琼脂糖和天然或合成聚合物。

15.前述权利要求任一项的止血组合物，其中所述支链淀粉、艾考糊精或麦芽糖糊精源自于植物材料、细菌、真菌或藻类。

16.权利要求15的止血组合物，其中所述植物材料选自玉米、大豆、水稻、木薯、小麦、糯玉米和糯米。

17.一种治疗损伤的方法，所述损伤选自创伤、出血、受损组织和出血组织，所述方法包括向损伤位点给药根据前述权利要求任一项所述的止血组合物。

18.一种用于减缓或停止出血的方法，所述方法包括向出血区域施用根据前述权利要求任一项所述的止血组合物。

19.权利要求17或18的方法，其中所述损伤或出血发生在外科手术期间。

20.权利要求17或18的方法，其中所述组合物以粉末形式施用。

21.权利要求17或18的方法，其中所述组合物在海绵、衬垫、膜或纤维中使用。

22.权利要求17或18的方法，其中所述组合物为粉末形式，并且首先将所述组合物与液体混合以形成可流动的组合物。

23.权利要求22的方法，其中所述液体选自盐水、水、缓冲溶液和蛋白质溶液。

24.权利要求18的方法，其中所述组合物在数秒或数分钟内停止出血。

25.一种用于损伤的治疗或用于减缓或停止出血的试剂盒，所述损伤选自创伤、出血、受损组织和出血组织，所述试剂盒包含a)根据前述权利要求任一项所述的止血组合物，和b)使用说明书。

26.根据权利要求25所述的试剂盒，其中所述止血组合物为干燥形式，并且所述试剂盒还包含用于重构所述止血组合物的可药用稀释剂。