CN107056381A - 一种富含多肽深海鱼蛋白液的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种深海鱼蛋白水解液制备方法，包括如下步骤：1)深海鱼下脚料预冷冻，脱盐；2)压榨，水洗，脱油；3)加入EM菌及酵母粉厌氧发酵5‑8天；4)加入适量牛奶继续发酵2‑4天；5)分离上清液，调节pH值，盐析，过滤；6)高温灭活，灌装得作物营养液。本工艺采用厌氧发酵方式将鱼蛋白水解为功能肽、游离氨基酸等水溶性物质，冲施或叶面喷施均可有效补充作物所需营养，螯合中微量元素促进其转移及吸收，提高作物产量及品质，具有重大应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种富含多肽深海鱼蛋白液的制备方法，属于肥料生产技术领域。
背景技术
向海洋进军，开发海洋药物、食物，已成为世界各沿海国家一项重要研究内容。我国海洋生物资源蕴藏量十分丰富，其中鱼类蛋白资源种类尤其繁多。由于特殊地理环境影响，鱼类所含氨基酸构成与陆生动物有显著区别，表现出其独特生理活性，因而开发鱼蛋白水解物和分离物引起了人们的广泛兴趣。
近年来，有关动物源水解蛋白和活性肽的产品研究和开发日益受到重视。鱼下脚料是鱼产品加工后剩下的部分，大约占鱼总重量的40-50％。以干重计算，鱼下脚料大约50％是蛋白质。传统加工技术将鱼下脚料直接切碎，用于养殖饵料，产品价值利用率低，大量营养成分流失，更造成了环境的污染。因此，高效鱼蛋白加工技术开发具有重要意义。
蛋白酶水解法是最常用加工方法。专利CN201410418450.2公开了一种酶解鱼蛋白工艺。控制微波频率50～100Hz，酶解时间15-20分钟，得到鱼蛋白水解物；专利CN201410520344.5涉及一种柴鱼蛋白水解物制备方法。其主要步骤包括：酶解、膜分离、层析分离、浓缩、喷雾干燥。质谱确定其肽功效组分的分子量均小于700Da；专利CN201610591499.7以银鱼为原料，经过粉碎、酶解、灭酶、离心、浓缩和喷雾干燥工艺制备速溶银鱼蛋白粉。酶解法生产条件相对苛刻，不适用于所有鱼类，生产产品主要用于食品和饲料。
酶解鱼蛋白液腥味较重，极大限制其使用。专利CN200310108046.7涉及一种鱼奶的制备，其技术关键在于利用酵母发酵对水解液进行二次脱腥苦味；专利CN200610019333.4添加动物蛋白复合酶、风味酶对淡水鱼蛋白进行水解，其所述风味酶是一种蛋白外切酶；专利CN201110327398.6在每升鳀鱼酶解液中加入10-100毫升酵母培养物，显著降低游离氨的含量，增加产品风味。二次处理可有效提高鱼蛋白液质量，但同时也增加生产成本。
研究表明鱼蛋白液螯合微量元素更有利于保存。专利CN201110360779.4以低值海水鱼如带鱼下脚料为原料，经过前处理、加入复合酶水解、多肽螯合修饰制备铁强化作用的鱼蛋白水解螯合物。专利CN201610646953.4利用生姜蛋白酶降解鱼蛋白，恒温水浴振荡条件下螯合微量元素。鱼蛋白螯合微量元素产品是未来行业发展趋势，但目前还未见其在农业生产中应用。
发明内容
本发明旨在设计一种富含功能肽深海鱼蛋白水解液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)取深海鱼加工下脚料冷冻5h以上，取出后室温条件下加1倍体积水浸洗，每次浸泡时间1h，连续洗涤3次，收集洗液；
2)步骤1)深海鱼压榨处理，控制压力1MPa-3MPa，将压榨后物料转移至反应罐中，加5-10倍体积热水，搅拌0.5-1h，过滤得滤饼，滤液合并步骤1)洗液可用于制备鱼油；
3)步骤2)滤饼转移至发酵罐，加10倍体积水，0.2％-0.4％EM菌液，0.3％-0.6％酵母粉，2％-5％葡萄糖，维持温度18℃-35℃，密闭发酵5-8天；
4)继续向步骤3)发酵罐中加入3％-5％牛奶，氮气置换空气，维持温度15℃-25℃，密闭发酵2-4天；
5)取步骤4)上层清液，调节pH值6.0-8.0，加入5％的钾盐，1％-2％助滤剂，搅拌1-2h，板框过滤；
6)步骤5)滤液转移至反应罐中，升温70℃-85℃，保温2h，转移至萃取罐中，静置，弃去下层粘稠物，灌装即得鱼蛋白水解液。
进一步，步骤1)深海鱼是指石斑、偏口鱼、黄花鱼、金枪鱼、鲳鱼、沙尖鱼的一种或几种。
进一步，步骤1)深海鱼加工下脚料冷冻温度0℃-5℃。
进一步，步骤2)热水温度55℃-60℃。
进一步，步骤3)发酵罐装料系数为0.75-0.85。
进一步，步骤4)添加牛奶要预先在5℃-10℃条件下密封放置24h。
进一步，步骤5)所述钾盐为磷酸二氢钾、磷酸一氢钾、硝酸钾、硫酸钾的一种或几种。
进一步，步骤5)助滤剂为硅藻土、珍珠岩、膨润土的一种或几种。
本发明还要求保护使用上述方法制备得到的鱼蛋白水解液在葡萄、苹果、水稻、小麦、西瓜、大蒜、黄瓜等品种上的应用。
本发明的有益效果是：
1)深海鱼下脚料富含多种营养，满足作物生长需要。鱼肉中氨基酸组成更加全面，鱼骨中有机钙含量非常高，这些物质经处理后可快速补充作物营养需求，提产增收。
2)本发明制备生产工艺简单，易于规模化生产。本发明主要采用厌氧发酵工艺，条件温和，设备要求低，虽时间相对较长但耗能低、工艺重现性好、产品质量稳定。
3)产品质量优势明显。本发明在加工过程中尽可能保留功能肽活性，游离氨基酸占总蛋白含量15％左右；产品水溶性好，满足肥料复配要求；味道纯正，无刺激性气味。
4)绿色、环保。生产原料为高营养废弃物，生产工艺不使用有机溶剂，生产过程不产生废渣废液，整体工艺环保无污染，符合当今时代发展要求。
具体实施方式
以下结合实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
1)取深海鱼加工下脚料400kg，-4℃冷冻5h以上，取出后室温条件下加1倍体积水浸洗，每次浸泡时间1h，连续洗涤3次，收集洗液；
2)将步骤1)深海鱼压榨处理，控制压力1.5MPa，将压榨后物料转移至反应罐中，加5倍体积55℃热水，搅拌1h，过滤，得滤饼。滤液合并步骤1)洗液可用于制备鱼油；
3)步骤2)滤饼约200kg转移至2.5吨发酵罐中，加2000L水，4kgEM菌液，6kg酵母粉，40kg葡萄糖，维持温度25℃，密闭发酵5天；
4)继续向步骤3)发酵罐中加入60L牛奶，氮气置换空气，维持温度25℃，密闭发酵4天；
5)取步骤4)上层清液，调节pH值6.0，加入100kg的磷酸二氢钾，20kg助滤剂硅藻土，搅拌2h，板框过滤；
6)步骤5)滤液转移至反应罐中，升温70℃，保温2h，转移至萃取罐中，静置，弃去下层粘稠物，灌装即得鱼蛋白水解液。
7)将制备得到的蛋白水解液产品稀释400倍，喷施于葡萄生长期，共喷施3次每次间隔10天。可见实验组的植株整体长势旺盛，茎秆粗壮挺立，叶片舒展无病害，果实饱满果个端正圆润，产量明显增加。
实施例2
1)取深海鱼加工下脚料250kg，-4℃冷冻5h以上，取出后室温条件下加1倍体积水浸洗，每次浸泡时间1h，连续洗涤3次，收集洗液；
2)将步骤1)深海鱼压榨处理，控制压力3MPa，将压榨后物料转移至反应罐中，加8倍体积60℃热水，搅拌1h，过滤，得滤渣。滤液合并步骤1)洗液可用于制备鱼油；
3)将步骤2)滤饼约150kg转移至2吨发酵罐，加1500L水，4.5kgEM菌液，6kg酵母粉，45kg葡萄糖，维持温度30℃，密闭发酵8天；
4)继续向步骤3)发酵罐中加入60L牛奶，氮气置换空气，维持温度25℃，密闭发酵4天；
5)取步骤4)上层清液，调节pH值7.0，加入75kg的磷酸二氢钾和硝酸钾的混合物(质量比1:1)，30kg助滤剂珍珠岩，搅拌2h，板框过滤；
6)步骤5)滤液转移至反应罐中，升温至80℃，保温2h，转移至萃取罐中，静置，弃去下层粘稠物，灌装即得鱼蛋白水解液。
7)将制备得到的产品稀释200倍，灌根冲施于西瓜生长发育期，施肥4次，每次间隔7天。实验组西瓜苗期生长旺盛，茎秆***壮，叶片挺立，西瓜果实整体比对照组大且端正，病害发生率明显降低。
实施例3
1)取深海鱼加工下脚料200kg，0℃冷藏5h以上，取出后室温条件下加1倍体积水浸洗，每次浸泡时间1h，连续洗涤3次，收集洗液；
2)将步骤1)深海鱼压榨处理，控制压力2MPa，将压榨后物料转移至反应罐中，加10倍体积58℃热水，搅拌1h，过滤，得滤渣。滤液合并步骤1)洗液可用于制备鱼油；
3)将步骤2)滤饼约80kg转移至1吨发酵罐，加800L水，3.2kgEM菌液，4.8kg酵母粉，40kg葡萄糖，维持温度28℃，密闭发酵6天；
4)继续向步骤3)发酵罐中加入40L牛奶，氮气置换空气，维持温度20℃，密闭发酵3天；
5)取步骤4)上层清液，调节pH值8.0，加入40kg的磷酸一氢钾和硝酸钾的混合物(质量比1:1)，12kg助滤剂硅藻土与膨润土的等量混合物，搅拌2h，板框过滤；
6)步骤5)滤液转移至反应罐中，升温至85℃，保温2h，转移至萃取罐中，静置，弃去下层粘稠物，灌装即得鱼蛋白水解液。
7)将制备得到的蛋白水解液产品直接与大肥混合冲施于苹果树，开花期、结果期各叶面喷施2次，每次间隔12天。实验组果树比对照组的病害明显减少，树势好，果实大，畸形果、烂果少，产量增加。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种富含功能肽深海鱼蛋白水解液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)取深海鱼加工下脚料冷冻5h以上，取出后室温条件下加1倍体积水浸洗，每次浸泡时间1h，连续洗涤3次，收集洗液；
2)步骤1)深海鱼压榨处理，控制压力1MPa-3MPa，将压榨后物料转移至反应罐中，加5-10倍体积热水，搅拌0.5-1h，过滤得滤饼，滤液合并步骤1)洗液可用于制备鱼油；
3)步骤2)滤饼转移至发酵罐，加10倍体积水，0.2％-0.4％EM菌液，0.3％-0.6％酵母粉，2％-5％葡萄糖，维持温度18℃-35℃，密闭发酵5-8天；
4)继续向步骤3)发酵罐中加入3％-5％牛奶，氮气置换空气，维持温度15℃-25℃，密闭发酵2-4天；
5)取步骤4)上层清液，调节pH值6.0-8.0，加入5％的钾盐，1％-2％助滤剂，搅拌1-2h，板框过滤；
6)步骤5)滤液转移至反应罐中，升温70℃-85℃，保温2h，转移至萃取罐中，静置，弃去下层粘稠物，灌装即得鱼蛋白水解液。
2.根据权利要求1所述的一种富含功能肽深海鱼蛋白水解液的制备方法，其特征在于，步骤1)深海鱼是指石斑、偏口鱼、黄花鱼、金枪鱼、鲳鱼、沙尖鱼的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的一种富含功能肽深海鱼蛋白水解液的制备方法，其特征在于，步骤1)深海鱼加工下脚料冷冻温度0℃-5℃。
4.根据权利要求1所述的一种富含功能肽深海鱼蛋白水解液的制备方法，其特征在于，步骤2)热水温度55℃-60℃。
5.根据权利要求1所述的一种富含功能肽深海鱼蛋白水解液的制备方法，其特征在于，步骤3)发酵罐装料系数为0.75-0.85。
6.根据权利要求1所述的一种富含功能肽深海鱼蛋白水解液的制备方法，其特征在于，步骤4)添加牛奶要预先在5℃-10℃条件下密封放置24h。
7.根据权利要求1所述的一种富含功能肽深海鱼蛋白水解液的制备方法，其特征在于，步骤5)所述钾盐为磷酸二氢钾、磷酸一氢钾、硝酸钾、硫酸钾的一种或几种。
8.根据权利要求1所述的一种富含功能肽深海鱼蛋白水解液的制备方法，其特征在于，步骤5)助滤剂为硅藻土、珍珠岩、膨润土的一种或几种。
9.一种根据权利要求1-8中任一项所述的制备方法制备得到的鱼蛋白水解液在葡萄、苹果、水稻、小麦、西瓜、大蒜、黄瓜等品种上的应用。
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