CN107024587A - 一种肺癌早期诊断标志物及诊断试剂盒和应用 - Google Patents

一种肺癌早期诊断标志物及诊断试剂盒和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107024587A
CN107024587A CN201710453002.XA CN201710453002A CN107024587A CN 107024587 A CN107024587 A CN 107024587A CN 201710453002 A CN201710453002 A CN 201710453002A CN 107024587 A CN107024587 A CN 107024587A
Authority
CN
China
Prior art keywords
lung cancer
thromboxane
control group
group
thrombus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710453002.XA
Other languages
English (en)
Inventor
刘义
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenzhen Ruike Biological Technology Co Ltd
Original Assignee
Shenzhen Ruike Biological Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shenzhen Ruike Biological Technology Co Ltd filed Critical Shenzhen Ruike Biological Technology Co Ltd
Priority to CN201710453002.XA priority Critical patent/CN107024587A/zh
Publication of CN107024587A publication Critical patent/CN107024587A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种肺癌早期诊断标志物及诊断试剂盒和应用，公开了血栓素可以作为肺癌早期诊断鉴别标志物，通过对实验组和对照组的血栓素含量进行对比，发现血栓素在实验组和对照组中的含量差距十分显著，适合应用于肺癌早期的鉴别诊断，具有良好的推广应用价值，为肺癌的早期诊断提供了一种新的临床诊断方法。

Description

一种肺癌早期诊断标志物及诊断试剂盒和应用
技术领域
本发明涉及医学生物检测技术领域，尤其涉及血栓素作为一种肺癌早期诊断标志物及诊断试剂盒和应用。
背景技术
肺癌已经成为全球死亡率和发病率最高的癌症，流行病学和实验室研究结果证实85-90%的肺癌与吸烟有关。目前还缺乏有效的肺癌早期诊断标志物用于与吸烟有关的肺癌的早期诊断。
血栓素具有很强的血管和支气管收缩作用，同时又有很强的血小板凝集作用。作为一种从细胞膜磷脂中代谢而成的***素，血栓素在肺部主要涉及肺部疾病、支气管哮喘、以及肺动脉高血压等，它具有许多生理学活性，包括过敏、免疫应答、血管生成及肿瘤转移等。
发明内容
本发明目的在于提供了血栓素的一种新用途，具体是血栓素作为肺癌早期诊断标志物的应用，以及在制备肺癌早期诊断试剂盒和应用。
血栓素的用途，其用于作为肺癌早期的鉴别诊断标志物。
包含如上所述的肺癌早期诊断标志物的诊断试剂或试剂盒，所述试剂盒含有血栓素用于制备肺癌早期鉴别的诊断试剂。
本发明还公开了包含如上所述的肺癌早期诊断标志物的应用，将检测实验组和对照组的肺组织或血清中的血栓素含量进行检测对比分析。
其中，使用液相二级质谱方法对肺组织中的血栓素含量进行检测对比分析。
其中，使用酶联免疫吸附剂测定方法对试验组和对照组的血栓素含量进行检测对比分析。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
所述肺癌的鉴别诊断试剂盒的用途，用于制备肺癌的鉴别的诊断试剂或试剂盒。
发明人通过对亚硝胺诱发的实验组和注射生理盐水的对照组在4W-24W的实验周范围内的鼠肺组织病理切片进行对比，发现实验组的肺组织病理切片中血栓素含量明显高于对照组的肺组织病理切片中血栓素含量；对比实验组血清中血栓素和对照组血清中的血栓素含量，发现其显著性差异与肺组织中血栓素含量显著性差异规律一致，进一步确定血栓素在肺癌早期诊断标志物中的应用价值，因此血栓素适合应用于肺癌早期鉴别诊断。
本发明的有益效果如下：
本发明通过对肺癌的实验组和对照组的肺组织和血清中血栓素进行对比分析，具有明显的显著性差异，可以作为肺癌早期诊断标志物使用，可以推广应用。
附图说明
下面结合附图，通过对本发明的具体实施方式详细描述，将使本发明的技术方案及其它有益效果显而易见。
图1中实验周期为4周实验组鼠肺组织病理切片图（甲苯胺蓝×200）；
图2中实验周期为4周对照组鼠肺组织病理切片图（甲苯胺蓝×200）；
图3中实验周期为8周实验组鼠肺组织病理切片图（甲苯胺蓝×200）；
图4中实验周期为8周对照组鼠肺组织病理切片图（甲苯胺蓝×200）；
图5中实验周期为12周实验组鼠肺组织病理切片图（甲苯胺蓝×200）；
图6中实验周期为12周对照组鼠肺组织病理切片图（甲苯胺蓝×200）；
图7中实验周期为16周实验组鼠肺组织病理切片图（甲苯胺蓝×200）；
图8中实验周期为16周对照组鼠肺组织病理切片图（甲苯胺蓝×200）；
图9中实验周期为20周实验组鼠肺组织病理切片图（甲苯胺蓝×200）；
图10中实验周期为20周对照组鼠肺组织病理切片图（甲苯胺蓝×200）；
图11中实验周期为24周实验组鼠肺组织病理切片图（甲苯胺蓝×200）；
图12中实验周期为24周对照组鼠肺组织病理切片图（甲苯胺蓝×200）；
图13为图10的放大示意图（甲苯胺蓝×400）；
图14为图11的放大示意图（甲苯胺蓝×400）；
图15为图12的放大示意图（甲苯胺蓝×400）；
图16为实验组和对照组血清中血栓素含量平均值及平均值差异图；
图17为实验组和对照组肺组织中血栓素含量平均值及平均值差异图。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合本发明的优选实施例及其附图进行详细描述。
血栓素的用途，其用于作为肺癌早期的鉴别诊断标志物。
包含如上所述的肺癌早期诊断标志物的诊断试剂或试剂盒，所述试剂盒含有血栓素用于制备肺癌早期鉴别的诊断试剂。
本发明还公开了包含如上所述的肺癌早期诊断标志物的应用，将检测实验组和对照组的肺组织或血清中的血栓素含量进行检测对比分析。
其中，使用液相二级质谱方法对肺组织中的血栓素含量进行检测对比分析。
其中，使用酶联免疫吸附剂测定方法对试验组和对照组的血栓素含量进行检测对比分析。
实施例
在肺癌的鼠肺组织病理切片检测血栓素含量及与对照组的肺组织血栓素含量的比较，具体步骤如下
1、备样：
发明人选择60只8周龄的SPF级A/J雌性小鼠，体重（20±3）g，小鼠购于南京大学模式动物研究所，许可证编号为：S(XK苏)201000001。准确称取220mg亚硝胺，溶于11mL的生理盐水中，形成20mg·mL-1的NNK水溶液，避光保存于-20℃冰箱中备用。将小鼠用0.1%苦味酸染液按照1－60号码进行编号并记录体重，按照随机区组法原则分成两大组，每组30组鼠。通过Excel软件按照造模时间周期分组如表1，实验组30只小鼠每只鼠腹腔注射0.1mL NNK溶液（20 mg·mL-1）； 对照组30只鼠每只鼠腹腔注射0.1mL生理盐水，然后按照造模时间的长短分批取材。
表1 小鼠分组表
日 期 组别 4周 8周 12周 16周 20周 24周
对照组（只） 5 5 5 5 5 5
空白组（只） 5 5 5 5 5 5
2、取样
取样分为血清取样和肺组织取样，按照表1中造模周期分批将5只小鼠处死，将对照组和实验组的小鼠的肺组织和小鼠眼眶进行取血样，将肺组织置于装有10%中性甲醛固定液的玻璃瓶中保存，将血样置于4℃冰箱中冷藏4h，离心取血清于-20℃冰箱中保存。
3、样品处理
3.1制蜡块：将实验组和对照组的肺组织进行梯度乙醇、酒精脱水、二甲苯透明，浸蜡包埋制成蜡块；
3.2切片：石蜡块固定于切片机上，切4μm厚的切片，放在装有42℃水的展片机中，待切片完全展平后，取最完好者于蛋清甘油涂抹过的载玻片上，然后放烤箱（65℃）脱蜡4～6h；
3.3染色：二甲苯透明处理、梯度酒精脱水干燥，蒸馏水处理，苏木素复染，流动水稍洗，盐酸乙醇分化液浸液处理，水洗，自来水冲洗返蓝，伊红染色，蒸馏水处理，梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明处理制得中性树胶封片。
4、测试：
4.1显微镜观察：
将制得实验周数为4W、8W、12W、16W、20W、24W的对照组的中性树胶封片置于显微镜下观察，如图1、图3、图5、图7、图9、图11，将制得实验周数为4W、8W、12W、16W、20W、24W的实验组的中性树胶封片置于显微镜下观察，如图2、图4、图6、图8、图10、图12，发现实验组相比于对照组具有明显的肺癌组织癌变迹象。其中图13、图14、图15为图10、图11、图12的放大示意图。4。2建立立改良的LC－MS/MS（液相二级质谱方法）方法对小鼠组织中的血栓素含量进行检测，同时使用Elisa（酶联免疫吸附剂测定方法）检测试剂盒进行分析，探讨血栓素与NNK诱导的A/J小鼠肺癌发生、发展的关系，为肿瘤的诊断、预后和新药作用靶点的研究打下基础。
4.2血清中血栓素含量测量
请参考表2 为实验周期为4W、8W、12W、16W、20W、24W的实验组和对照组小鼠血清中的血栓素的含量（ng/ml）对比表，图16为实验周期为4W、8W、12W、16W、20W、24W的实验组和对照组小鼠血清中的血栓素的含量平均值和平均值差异图，从中可以发明，实验周数为4W的实验组和对照组的血栓素含量差异显著性值为0.73，平均值高1.4；实验周数为8W的实验组和对照组的血栓素含量差异显著性值为0.08，平均值高5.9；实验周数为12W的实验组和对照组的血栓素含量差异显著性值为0.14，平均值高6.9；实验周数为16W的实验组和对照组的血栓素含量差异显著性值小于0.01，平均值高17.8；实验周数为20W的实验组和对照组的血栓素含量差异显著性值小于0.01，平均值高19.6；实验周数为24W的实验组和对照组的血栓素含量差异显著性值小于0.01，平均值高23.6。
从中可以发现，血栓素在肺癌病例的血清早期诊断中具有显著的标志性，适用于用于肺癌早期的诊断鉴别，为肺癌早期诊断提供了一种新的诊断方法。
表2实验组和对照组血清中血栓素含量对照表
4.3肺组织中血栓素含量测量
请参考表3 为实验周期为4W、8W、12W、16W、20W、24W的实验组和对照组小鼠肺组织中的血栓素的含量(ng/g)对比表，图17为实验周期为4W、8W、12W、16W、20W、24W的实验组和对照组小鼠肺组织中的血栓素的含量平均值和平均值差异图，从中可以发明，实验周数为4W的实验组和对照组的血栓素含量差异显著性值为0.73，平均值高1.4；实验周数为8W的实验组和对照组的血栓素含量差异显著性值为0.08，平均值高5.9；实验周数为12W的实验组和对照组的血栓素含量差异显著性值为0.14，平均值高6.9；实验周数为16W的实验组和对照组的血栓素含量差异显著性值小于0.01，平均值高17.8；实验周数为20W的实验组和对照组的血栓素含量差异显著性值小于0.01，平均值高19.6；实验周数为24W的实验组和对照组的血栓素含量差异显著性值小于0.01，平均值高23.6。
从中可以发现，血栓素在肺癌病例的肺组织早期诊断中具有显著的标志性，与血清中血栓素含量实验组和对照组的差异规律一致，进一步证明血栓素适用于用于肺癌早期的诊断鉴别，为肺癌早期诊断提供了一种新的诊断方法。
表3实验组和对照组的肺组织中血栓素含量对照表
经过测试得到的实验组的鼠的肺组织和血清中的血栓素的含量明显高于对照组的鼠肺组织的血栓素的含量，具有明显的显著性差异，可以作为肺癌早期诊断标志物使用，本发明为肺癌早期诊断提供了一种新的诊断方法。
以上所述，对于本领域的普通技术人员来说，可以根据本发明的技术方案和技术构思作出其他各种相应的改变和变形，而所有这些改变和变形都应属于本发明权利要求的保护范围。

Claims (5)

1.血栓素的用途，其特征在于，用于作为肺癌早期的鉴别诊断标志物。
2.包含如权利要求1所述的肺癌早期诊断标志物的诊断试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有血栓素用于制备肺癌早期鉴别的诊断试剂。
3.包含如权利要求1所述的肺癌早期诊断标志物的应用，其特征在于，将检测实验组和对照组的肺组织或血清中的血栓素含量进行检测对比分析。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，使用液相二级质谱方法对肺组织中的血栓素含量进行检测对比分析。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，使用酶联免疫吸附剂测定方法对试验组和对照组的血栓素含量进行检测对比分析。
CN201710453002.XA 2017-06-15 2017-06-15 一种肺癌早期诊断标志物及诊断试剂盒和应用 Pending CN107024587A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710453002.XA CN107024587A (zh) 2017-06-15 2017-06-15 一种肺癌早期诊断标志物及诊断试剂盒和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710453002.XA CN107024587A (zh) 2017-06-15 2017-06-15 一种肺癌早期诊断标志物及诊断试剂盒和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107024587A true CN107024587A (zh) 2017-08-08

Family

ID=59531590

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710453002.XA Pending CN107024587A (zh) 2017-06-15 2017-06-15 一种肺癌早期诊断标志物及诊断试剂盒和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107024587A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108998530A (zh) * 2018-08-31 2018-12-14 昆明医科大学第附属医院 肺癌上调长链非编码rna标志物及其应用
CN108998531A (zh) * 2018-08-31 2018-12-14 昆明医科大学第附属医院 肺癌下调长链非编码rna标志物及其应用
CN110699457A (zh) * 2019-10-30 2020-01-17 深圳瑞科生物科技有限公司 检测肺癌的引物组和试剂盒

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102520156A (zh) * 2011-12-15 2012-06-27 苏州苏大赛尔免疫生物技术有限公司 血栓烷b2酶联免疫测定试剂盒

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102520156A (zh) * 2011-12-15 2012-06-27 苏州苏大赛尔免疫生物技术有限公司 血栓烷b2酶联免疫测定试剂盒

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
孙京栋等: "血栓素A2、前列环素与Lewis肺癌生长及转移关系的实验研究", 《中国肿瘤临床》 *
张永生等: "《检验项目与临床应用》", 31 December 2014 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108998530A (zh) * 2018-08-31 2018-12-14 昆明医科大学第附属医院 肺癌上调长链非编码rna标志物及其应用
CN108998531A (zh) * 2018-08-31 2018-12-14 昆明医科大学第附属医院 肺癌下调长链非编码rna标志物及其应用
CN108998531B (zh) * 2018-08-31 2021-10-01 昆明医科大学第一附属医院 肺癌下调长链非编码rna标志物及其应用
CN110699457A (zh) * 2019-10-30 2020-01-17 深圳瑞科生物科技有限公司 检测肺癌的引物组和试剂盒

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107024587A (zh) 一种肺癌早期诊断标志物及诊断试剂盒和应用
CN106198984A (zh) 非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞pdl1基因的检测方法
CN103940658A (zh) 一种组织细胞标本石蜡包埋的制作方法
CN104569397B (zh) 一种乳腺癌检测质控品及其制备方法
CN104698191B (zh) Sfta3在肺鳞癌和腺癌病理诊断鉴别中的应用
CN105950700A (zh) 一种真菌荧光染色剂
CN106574927A (zh) 使用luterial的形态学特征筛选癌症预防剂或抗癌剂的方法
KR20220050844A (ko) 루테리알의 형태특성을 이용한 질병의 진단방법
Verboven et al. Measurement and visualization of food microstructure: Fundamentals and recent advances
CN109643450A (zh) 用于从组织活检物中检测管状物的装置
CN106932579A (zh) 一种基于液体活检的肝癌检测的试剂盒
CN106918484A (zh) 一种基于组织切片的三维模型的构建方法
CN113834941B (zh) 基于b细胞表达的结肠癌预后诊断用标记物及其用途
CN106536748A (zh) Luterial和用于其分离及培养的方法
Jung et al. Distribution of mast cells and locations, depths, and sizes of the putative acupoints CV 8 and KI 16
Kurz et al. Pericytes in the mature chorioallantoic membrane capillary plexus contain desmin and α-smooth muscle actin: Relevance for non-sprouting angiogenesis
CN103389376B (zh) 评估肝细胞癌临床分期和预后的试剂盒及ecscr的应用
CN105717104B (zh) 一种肝细胞癌患者外周血gpc3检测方法
KR20090095102A (ko) 인삼의 근령 분석 방법
CN104359746A (zh) 细胞团块收集器及收集体液标本中细胞的方法
CN107823644A (zh) 一种no供体化合物在制备抑制富含巯基分子的肿瘤细胞的侵袭和转移能力药物中的应用
Yao et al. Relationship between hemodynamic parameters and portal venous pressure in cirrhosis patients with portal hypertension
Chang et al. Three-dimensional imaging coupled with topological quantification uncovers retinal vascular plexuses undergoing obliteration
CN101020066A (zh) 一种原位移植构建人类肝癌小鼠模型的方法
CN103494803A (zh) 脱水穿心莲内酯的新用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170808

RJ01 Rejection of invention patent application after publication