CN106973892A - 一种用于公共场所的植物精油消毒剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种植物源消毒剂，具体地说是一种用于公共场所的植物精油消毒剂，它含有下列组分按其体积份数比：茶树精油5‑15份，吐温‑20 5‑20份，聚氧乙烯40氢化蓖麻油5‑20份，乙醇10‑30份，该消毒剂具有显著的杀菌作用，杀菌时间短，杀菌效率高，稳定性好，无毒副作用，适宜长期应用于医院、幼儿园、学校、电影院等公共场所及家庭的消毒。

Description

一种用于公共场所的植物精油消毒剂

技术领域

本发明涉及一种植物源消毒剂，具体地说是一种用于公共场所的植物精油消毒剂。

背景技术

消毒剂用于杀灭传播媒介上病原微生物，使其达到无害化要求，将病原微生物消灭于人体之外，切断传染病的传播途径，达到控制传染病的目的。消毒剂按照其作用的水平可分为灭菌剂、高效消毒剂、中效消毒剂、低效消毒剂。现在人们一般使用化学消毒剂，在使用过程中人们逐渐认识到化学消毒剂在杀灭病原菌的同时，对人类、畜禽、环境也存在不同程度的毒副作用。比如，甲醛的致癌、酚类消毒剂的刺激性、用于饮用水消毒的氯制剂的致突变作用等，同时耐药菌株的出现导致消毒效果下降或失效，因此，对消毒剂提出了更高的要求。

在当今世界共同聚焦食品和环境安全的前景下，开发安全高效的植物源杀菌消毒剂已越来越受到关注。比如专利号201510159682.5的专利中采用野菊花、连翘、石荠苧、紫草、当归、巴豆、牡丹皮、薰衣草精油、玫瑰果油、茶树精油等多种混合物制成消毒剂，组分复杂，杀菌效果不显著，作用时间不明确；专利(申请号2014100451136.4)组合了多种中草药提取物，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有良好杀菌效果，但是中药提取物的叶绿素不易去除，药液颜色较深，容易污染墙壁、家具、衣物等。

茶树精油(tea tree oil)提取于桃金娘科(Myrtaceae)白千层属(Melaleuca)的灌木树种—互叶白千层(Melaleuca alternifo-lia)的新鲜枝叶。近年来，茶树精油作为天然抗菌剂逐渐引起了医药界研究者的广泛关注，证实了茶树精油是一种抗菌谱广、抗菌活性强、临床疗效好、不良反应少的天然抗菌药物。细菌对植物提取物不易产生耐药性，而且植物提取物毒副作用较小。

消毒剂与抑菌剂作用不尽相同，根据《消毒技术规范》要求，载体定量试验和载体流动浸泡试验时，每次试验对各类微生物的杀灭对数值或灭活对数值≥3.00，即灭杀微生物的效果达到99.9％。而抑菌效果，指能可逆性抑制细菌的繁殖，但不直接杀死细菌。一般要求抑制微生物生长达到50％即可达到抑菌效果。大量研究，如丁香、薰衣草、迷迭香和鼠尾草等精油都具有很好的抑菌效果，但作为天然植物源产物很难达到杀菌效果。所以，克服现有技术的不足，研发出一款天然提取物消毒剂，满足了市场对非化学品消毒剂的迫切需求，对天然消毒剂市场的发展具有重要的推动作用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中存在的不足，提供一种具有显著的杀菌作用，杀菌时间短，杀菌效果好，无毒副作用，适宜长期应用于公共场所的植物精油消毒剂。

本发明是通过以下技术方案予以实现：

一种用于公共场所的植物精油消毒剂，其特征在于：它含有下列组分按其体积份数比：茶树精油5-15份，吐温-20 5-20份，聚氧乙烯40氢化蓖麻油5-20份，乙醇10-30份。

所述的含有组份中，其按其体积份数比：茶树精油8份，吐温-20 12份，聚氧乙烯40氢化蓖麻油15份，乙醇10份。

该消毒剂所采用的茶树精油为4-松油醇含量不低于30％，桉叶油含量不高于3％。

本发明的有益效果是：

本消毒剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌等常见致病菌具有显著的杀菌效果和稳定性，急性毒性试验证明，该植物精油消毒剂属于实际无毒级物质，制备方法简单，易于工业化，适宜应用于医院、幼儿园、学校等公共场所及家庭环境的消毒。

具体实施方式

为了使本技术领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合最佳实施例对本发明作进一步的详细说明。

实施例1

将茶树精油5mL、吐温-20 5mL混合，加入聚氧乙烯40氢化蓖麻油10mL，加热至35-37℃，搅拌使其充分溶解。当混合液降温至25℃后，加入10mL乙醇，搅拌混匀即得。

实施例2

将茶树精油15mL、吐温-20 20mL混合，加入聚氧乙烯40氢化蓖麻油20mL，加热至35-37℃，搅拌使其充分溶解。当混合液降温至25℃后，加入30mL乙醇，搅拌混匀即得。

实施例3

将茶树精油8mL、吐温-20 12mL混合，加入聚氧乙烯40氢化蓖麻油15mL，加热至35-37℃，搅拌使其充分溶解。当混合液降温至25℃后，加入10mL乙醇，搅拌混匀即得。

以上各实施例中，消毒剂的剂型优选为喷雾剂。

茶树精油杀菌抑菌效果的鉴定

(1)实验方法：

取无菌小平皿，标明所注入10％的茶树精油溶液。按每片5.0mL的量，吸取相应浓度的溶液注入平皿中。将盛有消毒剂平皿置20℃±1℃水浴箱内5min后，用无菌镊子分别放入预先制备的菌片3片，并使之浸透于消毒液中。待菌药相互作用至各预定时间，用无菌镊子将菌片取出分别移入一含5.0mL中和剂试管中。用电动混合器混合20s，或将试管在手掌上振敲80次，使菌片上的细菌被洗脱进入中和液中，再放置5min以上，使中和作用充分。最终进一步混匀后，吸取1.0mL直接接种平皿，每管接种2个平皿，测定存活菌数。

另取一平皿，注入10.0mL稀释液代替消毒液，放入2片菌片，作为阳性对照组所有试验样本均在37℃温箱中培养，对细菌繁殖体培养48h观察最终结果

(2)实验结果：

表1 10％茶树精油对金黄色葡萄菌的杀菌抑菌率

表2 10％茶树精油对绿脓杆菌的杀菌抑菌率

根据载体定量杀灭试验的方法和要求，各次的杀灭率均≥99.9％或杀灭对数值均≥3.00，可判断消毒合格。根据结果在30min以内，10％茶树精油溶液达不到消毒剂杀菌要求。

2.茶树精油消毒剂配方的确定

目前对茶树精油抗菌活性的作用机制的研究表明，细菌细胞膜是茶树精油作用位点。主要作用机制是茶树精油中的成分***到胞膜磷脂分子之间，改变其结构，破坏膜的完整性和增加膜的流动性。但这种破坏作用并不是引起整个细菌溶解，而是增加胞膜的通透性，引起细菌内重要物质泄漏以及降低胞膜调节渗透压和排出有害物质的能力，最终导致细菌死亡。同时，根据研究发现，一定比例的乙醇可以有效的增强茶树精油对细菌细胞壁的穿透性，从而增强精油与细菌的结合，增强其抑菌杀菌的功能。另外，乙醇的添加可以帮助茶树精油在水中的溶解性，使茶树精油在水中溶解的更均匀，增强其稳定性。本发明通过对添加不同浓度的乙醇，开发出一款满足杀菌剂规范要求的植物源杀菌剂。

实验方法：

取无菌小平皿，标明所注入茶树精油与乙醇的浓度。按每片5.0mL的量，吸取相应浓度的溶液注入平皿中。将盛有消毒剂平皿置20℃±1℃水浴箱内5min后，用无菌镊子分别放入预先制备的菌片3片，并使之浸透于消毒液中。待菌药相互作用至各预定时间，用无菌镊子将菌片取出分别移入一含5.0mL中和剂试管中。用电动混合器混合20s，或将试管在手掌上振敲80次，使菌片上的细菌被洗脱进入中和液中，再放置5min以上，使中和作用充分。最终进一步混匀后，吸取1.0mL直接接种平皿，每管接种2个平皿，测定存活菌数。

另取一平皿，注入10.0mL稀释液代替消毒液，放入2片菌片，作为阳性对照组所有试验样本均在37℃温箱中培养，对细菌繁殖体培养48h观察最终结果

实验结果：

表3 10％茶树精油+5％乙醇对金黄色葡萄菌的杀菌抑菌率

表4 10％茶树精油+20％乙醇对金黄色葡萄菌的杀菌抑菌率

表5 10％茶树精油+20％乙醇对大肠杆菌的杀菌抑菌率

根据载体定量杀灭试验的方法和要求，各次的杀灭率均≥99.9％或杀灭对数值均≥3.00，可判断消毒合格。

实施例3的定量杀菌试验、急性毒性试验及稳定性试验

实验方法

试验用菌：

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC 6538，大肠杆菌(Escherichiacoli)8099，白色念珠菌(Candida albicans)ATCC 10231

细菌悬液的制备

按照2002版《消毒技术规范》将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌接种于新鲜营养琼脂培养基上，置37℃培养24小时，加入3.0mL～5.0mL无菌PBS缓冲溶液加入斜面试管内，反复吹吸，洗下菌苔。

制备不同浓度的实验菌悬液备用，菌悬液含菌量1×108cfu/mL～5×108cfu/mL

菌片的制备

将经灭菌的10mm×10mm滤纸片平铺于无菌平皿内，涂匀整个载体表面菌液滴加量每片为10μl，滴染菌液后，置室温下自然阴干后再使用。

中和剂鉴定试验

实验菌株为金黄色葡萄球菌，共6组试验，按载体定量杀菌试验方法进行。结果判定，以第1组有极少量菌生长或无菌生长，第2组有较第1组为多，但较第3、4、5(组)为少的试验菌菌落生长，第3、4、5(组)间细菌数的误差率不超出15％，第6组不长菌，试验重复3次。

载体浸泡定量杀菌试验

取无菌小平皿，标明所注入消毒液的浓度。按每片5.0mL的量，吸取相应浓度的消毒剂溶液注入平皿中。将盛有消毒剂平皿置20℃±1℃水浴箱内5min后，用无菌镊子分别放入预先制备的菌片3片，并使之浸透于消毒液中。待菌药相互作用至各预定时间，用无菌镊子将菌片取出分别移入一含5.0mL中和剂试管中。用电动混合器混合20s，或将试管在手掌上振敲80次，使菌片上的细菌被洗脱进入中和液中，再放置5min以上，使中和作用充分。最终进一步混匀后，吸取1.0mL直接接种平皿，每管接种2个平皿，测定存活菌数。

另取一平皿，注入10.0mL稀释液代替消毒液，放入2片菌片，作为阳性对照组所有试验样本均在37℃温箱中培养，对细菌繁殖体培养48h观察最终结果；

急性毒性试验

选取体重为20g昆明种小鼠20只，雌雄各半。试验前禁食过夜，不限制饮水。染毒方法用经口灌胃方式将受试物给予动物。按每次0.2mL/10g(体重)的量，分两次进行(中间隔12h),对每只小鼠先称重再灌相应量的消毒剂。染毒后观察动物的中毒表现和死亡数及死亡时间，观察时间14天。

稳定性试验

茶树精油消毒剂是以植物为主要有效成分的消毒剂，故应用微生物法进行稳定性实验。将消毒剂溶液密封避光包装，采用加速试验，置于54℃恒温箱存放14天，分别在存放前、后按载体定量杀菌试验程序进行试验，各组试验重复3次，计算杀灭对数值。除测定杀灭微生物效果外，还应观察消毒剂有无颜色变化，有无沉淀或悬浮物产生。

实验结果

中和剂鉴定试验效果

中和剂鉴定试验结果见表1。结果表明，中和剂选用含4％甘氨酸、2％卵磷脂、4％甘氨酸、PBS(0.03mol/L)的中和剂能有效中和该消毒剂对试验菌的残留作用，且中和剂及中和产物对试验菌生长无影响。

表6中和剂鉴定试验结果

组别	平均菌落数(CFU/mL)
		消毒剂+菌悬液	25
消毒剂+菌悬液+中和剂	260
		(消毒剂+中和剂)+菌悬液	2590000
中和剂+菌悬液	2750000
		菌悬液	2650000
未接种菌培养基对照	0

定量杀菌试验结果

定量杀菌试验结果表明，该消毒剂作用20min,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的平均杀灭对数值均≥3(表2)

表7消毒剂杀菌试验结果

注：要求载体定量杀灭试验中，各次的杀灭对数均应≥3.00，可判定为消毒合格。试验重复三次

急性毒性试验

给药14天后动物未见明显的中毒症状，观察期间无动物死亡，可判定该消毒剂对小鼠急性经口灌胃LD50大于5000mg/kg(体重)，属于实际无毒级物质。

稳定性试验

稳定性试验结果表明，该消毒剂原液在54℃保存14d后，对金黄色葡萄球菌的平均杀灭对数值差基本无差别。

表8消毒剂放置前后对金黄色葡萄球菌的杀灭效果

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种用于公共场所的植物精油消毒剂，其特征在于：它含有下列组分按其体积份数比：茶树精油5-15份，吐温-20 5-20份，聚氧乙烯40氢化蓖麻油5-20份，乙醇10-30份。

2.根据权利要求1所述的一种用于公共场所的植物精油消毒剂，其特征在于：所述的含有组份中，其按其体积份数比：茶树精油8份，吐温-2012份，聚氧乙烯40氢化蓖麻油15份，乙醇10份。

3.根据权利要求1或2所述一种用于公共场所的植物精油消毒剂，其特征在于：该消毒剂所采用的茶树精油为4-松油醇含量不低于30％，桉叶油含量不高于3％。