CN106922948A - 适用于食用油生产厂环境中进行发酵豆粕的生产工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及适用于食用油生产厂环境中进行发酵豆粕的生产工艺。具体而言，本发明涉及一种提高豆粕发酵中的酶解效果和/或提高发酵豆粕中酸溶蛋白含量的方法，或豆粕发酵方法，所述方法包括在隔绝环境空气的环境中发酵含酶、豆粕和水的混合物。采用本发明的方法可在食用油生产厂环境中有效提高豆粕发酵中的酶解效果和/或提高发酵豆粕中酸溶蛋白含量。
Description
技术领域
本发明属于饲料生产领域，具体涉及适用于食用油生产厂环境中进行发酵豆粕的生产工艺。
背景技术
我国是世界上最大的养殖生产国之一，同时也是世界上饲料原料特别是蛋白质原料的需求大国，我国饲料工业生产中蛋白质饲料资源的严重不足，鱼粉、肉骨粉以及血浆蛋白粉等高品质动物蛋白原料主要依赖国际进口，而动物性蛋白原料面临资源匮乏和饲料产品的安全性问题，豆粕作为一种质量稳定的植物蛋白原料，成为一种取代动物蛋白的优质植物蛋白资源，我国有着丰富的豆粕资源，在中国豆粕年产约1000万吨，由于豆粕中的抗营养因子如抗原蛋白、植酸、脲酶等的存在，尤其是胰蛋白酶抑制因子，它能阻碍猪体内胰蛋白酶对豆类蛋白的消化吸收造成腹泻，影响生长，适口性差，难于消化，饲料利用率低等，严重限制了豆粕的应用范围和应用价值，目前，应用发酵技术处理豆粕，可有效降解豆粕中抗营养因子，提高其营养价值。
众多研究阐述了发酵豆粕的生产工艺：
CN103385360中讲述了一种发酵豆粕的生产工艺：经过粉碎过35目筛的豆粕与经过粉碎过30目筛的甘草、野菊花、银杏叶和青皮混合后，于发酵菌液按照一定的比例混合，混合后于发酵罐中密封发酵66-72h。
CN102763678 A中阐述了一种发酵豆粕的生产工艺，通过添加外源蛋白酶和固态微生物种子，采用堆积固态发酵工艺。
CN102599341 B中阐述了一种发酵豆粕的生产工艺，豆粕按照一定的比例和红薯淀粉、食盐、酵母等混合，在地下发酵池中无氧条件下15-35度发酵5-10天。
CN 102948614 B中公开了一种菌酶协同发酵豆粕制备活性饲用肽的方法：经过活化的复合酶中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、非淀粉多糖酶，果胶酶等协同复合菌迟缓芽孢杆菌、发酵乳酸菌、产朊假丝酵母等作用豆粕分阶段控温，制备活性饲用肽。
Livestock science 170(2014)91-99研究了一种固态发酵豆粕所得产品饲养小猪对小猪的影响，其中发酵豆粕的制作工艺为：中性蛋白酶和碱性蛋白酶混合的复合酶与经过粉碎过1.0mm筛网的豆粕混合，加入嗜热链球菌和酿酒酵母发酵液，混合厌氧发酵7天。
Livestock science 163(2014)94-101中研究了菌酶协同作用发酵豆粕用于取代鱼粉，其中发酵豆粕的生产工艺为：8种菌株和菠萝蛋白酶菌酶协同作用进行发酵豆粕的生产。
众多研究均未提到：在生产食用油厂附近发酵豆粕的生产工艺，经试验验证普通生产工艺用于食用油厂附近发酵豆粕的生产所生产的发酵豆粕品质不佳。本发明以豆粕为原料，通过特定工艺，可以在食用油厂附近环境中进行油脂发酵豆粕的生产。
发明内容
本发明第一方面提供一种提高豆粕发酵中的酶解效果和/或提高发酵豆粕中酸溶蛋白含量的方法，所述方法包括在隔绝环境空气的环境中发酵含酶、豆粕和水的混合物。
在某些实施方案中，发酵温度为25～50℃。
在某些实施方案中，发酵时间为24～96h。
在某些实施方案中，在恒温培养箱或恒温水浴中实施所述发酵。
在某些实施方案中，通过将所述含酶、豆粕和水的混合物置于可密封的容器中来实现与环境空气的隔绝。
在某些实施方案中，通过向所述可密封的容器中通入非环境空气的气体，例如洁净空气、氮气、二氧化碳、氧气和/或氢气，来排出所述容器中原先含有的环境空气。
在某些实施方案中，将吸附剂加到所述可密封的容器中、并密封该容器来实现所述环境空气的隔绝。
在某些实施方案中，通过将所述可密封的容器抽真空，并密封该容器来实现所述环境空气的隔绝。
在某些实施方案中，将所述混合物直接加到所述可密封的容器中。
在某些实施方案中，先将所述混合物加到自封袋或玻璃容器中，然后将自封袋或玻璃容器放到所述可密封的容器中。
在某些实施方案中，将含所述混合物的自封袋或玻璃容器置于水浴中来实现环境空气的隔绝。
在某些实施方案中，可对所述自封袋或玻璃容器抽真空、通入非环境空气的气体、或通入非环境空气的气体后排出自封袋中所有气体，和/或将吸附剂放入所述自封袋或玻璃容器中。
在某些实施方案中，发酵过程中一直向混合物所在的非封闭的发酵环境中通入非环境空气的气体来实现与环境空气的隔绝。
在某些实施方案中，本发明的方法包括：将含酶、豆粕和水的可密封容器(如自封袋)置于盛有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后将该玻璃容器放置在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将含酶、豆粕和水和吸附剂的可密封容器(如自封袋)密封，将其放置在25～50℃的恒温水浴中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将含酶、豆粕和水的混合物直接加到盛有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将含酶、豆粕和水的密封容器(如自封袋)抽真空后，放置在25～50℃的恒温水浴中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将含酶、豆粕和水的密封容器(如自封袋)抽真空后，然后将其放置到盛有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后将该玻璃容器放置在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：先在密封容器中混匀酶与豆粕；通入非环境空气的气体一段时间；在通入非环境空气的气体的情况下加水到该密封容器中，密封后混匀；除去密封容器中的气体并密封该密封容器，从而提供所述含有酶、豆粕和水的混合物的密封容器；所述方法还包括，将该密封容器放置在含有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后将该玻璃容器放置在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：向含酶、豆粕和水的密封容器中通入非环境空气的气体一段时间后，将该密封容器密封，然后将该密封容器放置在含有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后再将该玻璃容器放置在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将含酶、豆粕和水的混合物的可密封容器封口后放于玻璃容器中，将非环境空气的气体通入所述玻璃容器中，排出环境空气，随后密封该玻璃容器，置于25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将含酶、豆粕和水的混合物直接加到玻璃容器中，将非环境空气的气体通入所述玻璃容器中，排出环境空气，随后密封该玻璃容器，置于25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将非环境空气的气体通入含酶、豆粕和水的混合物的自封袋或玻璃容器中，或通入恒温培养箱中，并在通入所述气体的情况下在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在某些实施方式中，所述吸附剂选自活性炭、白土和大孔树脂。
在某些实施方式中，所述非环境空气的气体选自：洁净空气、氮气、二氧化碳、氧气和氢气。
在某些实施方案中，通入惰性气体的时间不少于2分钟，优选不少于5分钟，更优选为5～20分钟。
在某些实施方式中，所述酶选自：蛋白酶、果胶酶、木聚糖酶、α-半乳糖苷酶和纤维素酶中的一种或者多种的混合物。
在某些实施方式中，所述酶的添加量为每克豆粕不小于100单位的酶。
在某些实施方案中，所述含酶、豆粕和水的混合物中水的含量为25～60％。
在某些实施方案中，发酵温度为30～50℃，发酵时间为48～90h。
在某些实施方案中，发酵温度为35～50℃，发酵时间为60～80h。
在某些实施方案中，所述方法在食用油生产厂环境中实施。
本发明第二方面提供一种豆粕发酵方法，所述方法包括：在隔绝环境空气的环境中发酵酶、豆粕和水的混合物。
在某些实施方案中，发酵温度为25～50℃。
在某些实施方案中，发酵时间为24～96h。
在某些实施方案中，在恒温培养箱或恒温水浴中实施所述发酵。
在某些实施方案中，通过将所述含酶、豆粕和水的混合物置于可密封的容器中来实现与环境空气的隔绝。
在某些实施方案中，通过向所述可密封的容器中通入非环境空气的气体，例如氮气、二氧化碳、氧气和/或氢气，来排出所述容器中原先含有的环境空气。
在某些实施方案中，将吸附剂加到所述可密封的容器中、并密封该容器来实现所述环境空气的隔绝。
在某些实施方案中，通过将所述可密封的容器抽真空，并密封该容器来实现所述环境空气的隔绝。
在某些实施方案中，将所述混合物直接加到所述可密封的容器中。
在某些实施方案中，先将所述混合物加到自封袋或玻璃容器中，然后将自封袋放到所述可密封的容器中。
在某些实施方案中，将含所述混合物的自封袋或玻璃容器置于水浴中来实现环境空气的隔绝。
在某些实施方案中，可对所述自封袋或玻璃容器抽真空、通入非环境空气的气体、或通入非环境空气的气体后排出自封袋中所有气体，和/或将吸附剂放入所述自封袋或玻璃容器中。
在某些实施方案中，发酵过程中一直向混合物所在的非封闭的发酵环境中通入非环境空气的气体来实现与环境空气的隔绝。
在某些实施方案中，本发明的方法包括：将含酶、豆粕和水的可密封容器(如自封袋)置于盛有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后将该玻璃容器放置在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将含酶、豆粕和水和吸附剂的可密封容器(如自封袋)密封，将其放置在25～50℃的恒温水浴中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将含酶、豆粕和水的混合物直接加到盛有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将含酶、豆粕和水的密封容器(如自封袋)抽真空后，放置在25～50℃的恒温水浴中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将含酶、豆粕和水的密封容器(如自封袋)抽真空后，然后将其放置到盛有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后将该玻璃容器放置在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：先在密封容器中混匀酶与豆粕；通入非环境空气的气体一段时间；在通入非环境空气的气体的情况下加水到该密封容器中，密封后混匀；除去密封容器中的气体并密封该密封容器，从而提供所述含有酶、豆粕和水的混合物的密封容器；所述方法还包括，将该密封容器放置在含有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后将该玻璃容器放置在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：向含酶、豆粕和水的密封容器中通入非环境空气的气体一段时间后，将该密封容器密封，然后将该密封容器放置在含有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后再将该玻璃容器放置在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将含酶、豆粕和水的混合物的可密封容器封口后放于玻璃容器中，将非环境空气的气体通入所述玻璃容器中，排出环境空气，随后密封该玻璃容器，置于25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将含酶、豆粕和水的混合物直接加到玻璃容器中，将非环境空气的气体通入所述玻璃容器中，排出环境空气，随后密封该玻璃容器，置于25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将非环境空气的气体通入含酶、豆粕和水的混合物的自封袋或玻璃容器中，或通入恒温培养箱中，并在通入所述气体的情况下在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在某些实施方式中，所述吸附剂选自活性炭、白土和大孔树脂。
在某些实施方式中，所述非环境空气的气体选自：洁净空气、氮气、二氧化碳、氧气和氢气。
在某些实施方案中，通入惰性气体的时间为5～20分钟。
在某些实施方式中，所述酶选自：蛋白酶、果胶酶、木聚糖酶、α-半乳糖苷酶和纤维素酶中的一种或者多种的混合物。
在某些实施方式中，所述酶的添加量为每克豆粕不小于100单位的酶。
在某些实施方案中，所述含酶、豆粕和水的混合物中水的含量为30～60％。
在某些实施方案中，发酵温度为30～50℃，发酵时间为48～90h。
在某些实施方案中，发酵温度为35～50℃，发酵时间为60～80h。
具体实施方式
发酵豆粕品质的优劣、营养价值的高低，除粗蛋白指标外，小肽含量也是业内人士普遍关注的重要指标，肽含量与酸溶蛋白质含量是正相关，所以在发酵豆粕中可使用酸溶蛋白质含量评价发酵豆粕品质，既可以反映豆粕中抗原蛋白和其它抗营养因子蛋白被水解的程度，同时又可一定程度上反映肽含量。当发酵豆粕中酸溶蛋白含量≥16％时，抗原蛋白降解效果显著，故当酸溶蛋白含量＜16％时，发酵豆粕品质较差。
本发明人发现，生产食用油的工厂及该油厂附近，通过普通工艺所生产的发酵豆粕酶解效果差，产品中小肽含量低。本发明可有效解决此问题，使在油厂及油厂附近的环境中，发酵豆粕蛋白酶效果显著，小肽含量提升，抗原蛋白降解效果显著。
本发明以豆粕为原料，通过特定工艺进行发酵豆粕的生产，可在食用油生产厂环境中进行优质发酵豆粕的生产，可将抗原蛋白有效降解为小分子肽，有利于幼小动物的消化吸收。
因此，本发明提供提高豆粕发酵中的酶解效果的方法，提高发酵豆粕中酸溶蛋白含量的方法，以及豆粕发酵方法。虽然本发明的方法可在任何地方实施，但优选的是，从经济的角度考虑，本发明的方法在生产食用油的工厂及该油厂附近，如此可极大地降低运输豆粕产生的成本。
本发明的方法包括在隔绝环境空气的情况下使含有酶、豆粕和水的混合物发酵。
通常，发酵温度为25～50℃，优选为30～50℃，更优选为35～50℃。可通过恒温培养箱或恒温水浴来提供所述发酵温度。
发酵时间可以是24～96h，例如48～90h或60～80h。
可通过将所述含酶、豆粕和水的混合物置于可密封的容器中来实现与环境空气的够绝。此时，可通过向可密封的容器中排入非环境空气的气体，例如洁净空气、氮气、二氧化碳、氧气和/或氢气，来排出密封容器中原先含有的环境空气，然后密封盖容器。“洁净空气”可从洁净的环境中获得，此环境包括但不限于食用油环境中的高空处和非食用油环境。或者，可将吸附剂加到所述容器中，经由吸附剂吸附该容器中的环境空气，如此也能实现本文所述的隔绝环境空气。适用于本发明的吸附剂包括但不限于活性炭、白土和大孔树脂。
或者，发酵过程中一直向混合物所在的非封闭的发酵环境中通入非环境空气的气体也可实现与环境空气的隔绝。
水浴由于水蒸气的存在而使水浴范围内的环境与环境空气隔绝，因此也能构建本发明的隔绝环境空气的环境。因此，本发明也可将盛放有所述含酶、豆粕和水的混合物置于水浴中进行发酵。
通常，可将所述混合物盛放于一可密封容器中。然后再将该容器置于隔绝环境空气的环境中进行发酵。适用于盛放所述混合物的可密封容器可以是自封袋(通常是塑料制成)或玻璃容器，优选自封袋。更优选地，在使用自封袋时，在自封袋中也放入吸附剂。在使用玻璃容器盛放所述混合物的情况下，除非该玻璃容器本身就用作隔绝环境空气的容器，否则也不应将其封口，这样会阻止玻璃容器中原本所含的环境空气逸出。或者，可将所述混合物直接置于玻璃容器，同时在玻璃容器中放入吸附剂(吸附剂可独立包装)，密封后也可构建本文所述的与环境空气隔绝的环境。
本发明中，可密闭的容器可以是包括自封袋和玻璃容器。通常，自封袋用于盛放酶、豆粕与水的混合物，而玻璃容器用来隔绝环境空气。当然，如本申请某些实施方案中所述的，玻璃容器也可用来直接盛放所述混合物。
本方案中所用吸附剂用量一般为豆粕质量的0.05％～1％。
因此，本发明的方法可包括：
(1)在恒温水浴中进行发酵。此时可将混合物放入含有吸附剂的自封袋或玻璃容器中。然后将该自封袋或玻璃容器置于水浴中进行发酵。此时，自封袋和玻璃容器可封口，也可不封口。或者，在某些实施方案中，可将盛放所述混合物的自封袋或玻璃容器抽真空，同时放入或不放入吸附剂，然后置于水浴中进行发酵。
(2)在恒温培养箱中进行发酵。此时由于恒温培养箱无法构建一个隔绝环境空气的环境，因此需额外提供一个隔绝环境空气的环境。例如，通过将所述混合物直接加到含吸附剂的可密封的玻璃容器中，然后密封该玻璃容器，由此可提供一个隔绝环境空气的环境。或者，可向含所述混合物的可密封的玻璃容器中通入非环境空气的气体，排出该容器所含的环境空气；或对该玻璃容器抽真空；或同时或单独在该玻璃容器中放入吸附剂，之后密封该玻璃容器，以此来提供隔绝环境空气的环境。此时，混合物可预先盛放在自封袋中，而自封袋自身也可被抽真空后密封，或通入非环境空气后密封，或通入非环境空气后将所有气体排出后密封，或同时或单独地，自封袋也可装有吸附剂。或者，可在发酵的过程中一直向装有混合物的自封袋或玻璃容器中通入非环境空气，或一直向放置该自封袋或玻璃容器的恒温培养箱中通入非环境空气，以此来提供隔绝环境空气的环境。
因此，在某些实施方案中，本发明的方法包括：将含酶、豆粕和水的可密封容器(如自封袋)置于盛有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后将该玻璃容器放置在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将含酶、豆粕和水和吸附剂的可密封容器(如自封袋)密封，将其放置在25～50℃的恒温水浴中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将酶、豆粕和水的混合物直接加到盛有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将含酶、豆粕和水的密封容器(如自封袋)抽真空后，放置在25～50℃的恒温水浴中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将含酶、豆粕和水的密封容器(如自封袋)抽真空后，然后将其放置到盛有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后将该玻璃容器放置在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：先在密封容器中混匀酶与豆粕；通入非环境空气的气体一段时间；在通入非环境空气的气体的情况下加水到该密封容器中，密封后混匀；除去密封容器中的气体并密封该密封容器，从而提供所述含有酶、豆粕和水的混合物的密封容器；所述方法还包括，将该密封容器放置在含有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后将该玻璃容器放置在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：向含酶、豆粕和水的密封容器中通入非环境空气的气体一段时间后，将该密封容器密封，然后将该密封容器放置在含有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后再将该玻璃容器放置在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将含酶、豆粕和水的混合物的可密封容器封口后放于玻璃容器中，将非环境空气的气体通入所述玻璃容器中，排出环境空气，随后密封该玻璃容器，置于25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
在其它实施方案中，本发明方法包括：将酶、豆粕和水的混合物直接加到玻璃容器中，将非环境空气的气体通入所述玻璃容器中，排出环境空气，随后密封该玻璃容器，置于25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
通常，通入非环境空气的气体的时间为5～20分钟，例如10～15分钟。
适用于本发明的酶是本领域周知的用于发酵豆粕的各种酶，包括但不限于蛋白酶、果胶酶、木聚糖酶、α-半乳糖苷酶和纤维素酶中的一种或者多种的混合物。按本领域常规的量添加所述酶，通常为每克豆粕不小于100单位的酶。
通常，所述含酶、豆粕和水的混合物中水的含量为30～60％。
以下将以具体实施例的方式阐述本发明。应理解，这些实施例仅仅是阐述性的，并非限制本发明的保护范围。实施例中用到的方法和试剂，除非另有说明，否则为本领域常规的方法和试剂。
实施例1：利用常规工艺进行发酵豆粕的生产
此实验分别在7个地方实施，七个地方包括：
丰益(上海)生物技术研发中心有限公司；
大海粮油工业(防城港)有限公司；
益海(泰州)粮油工业有限公司；
益海(连云港)粮油工业有限公司；
秦皇岛金海粮油工业有限公司；
青岛；
江南大学；
其中前5个均为益海嘉里食用油生产厂，而青岛和江南大学附近无食用油生产厂。
具体试验方法和实验结果如下：
取50g商品豆粕放于自封袋中，按照500U/g豆粕添加蛋白酶，混合均匀，加水23g，再次混合均匀，将混合好的样品放于40℃恒温培养中培养72h后于65℃烘箱中烘6h后，粉碎过60目筛，进行粗蛋白和酸溶蛋白的检测。其中粗蛋白质含量测定采用微量凯氏定氮法(GB/T 5511-2008)；酸溶蛋白含量检测采用三氯乙酸(TCA)法(GB/T 22492-2008)。结果如下表一所示。
表一：实施例1试验结果
结论：在生产食用油工厂所做发酵豆粕，小肽含量均偏低，小于16％，而在青岛和江南大学所做样品，小肽含量明显高于其他五处。所以在食用油生产厂附近利用常规工艺进行发酵豆粕的生产所得发酵豆粕小肽含量偏低，不利于工业化的实施。
从实施例2开始以下实施例均是在食用油生产厂环境中进行。
实施例2：活性炭吸附对发酵豆粕品质的影响
取50g商品豆粕放于自封袋中，按照400U/g豆粕添加蛋白酶，混合均匀，加水23g，再次混合均匀，封口，将含所述豆粕、蛋白酶和水的自封袋放于恒温培养箱中培养(称为样品1)；
或将该自封袋放于盛有活性炭的密封玻璃容器中，而后放于恒温培养箱中培养(称为样品2)；
或混合好的样品放于含有活性炭的自封袋中，封口后放于恒温水浴中(称为样品3)；
或混合好的样品放于含有活性炭的自封袋中，封口后放于恒温培养箱中(称为样品4)；
或将50g商品豆粕与400U/g豆粕添加蛋白酶及23g水在烧杯中混合，待混合均匀后将烧杯中样品直接倾注到放于盛有活性炭的玻璃瓶中(活性炭纱布包扎)，玻璃瓶封口后放于恒温培养箱中(称为样品5)。
各个样品的培养温度均为40℃，培养时间为72h，培养72h后于将样品放于65℃烘箱中烘6h，粉碎过60目筛，进行粗蛋白和酸溶蛋白的检测。其中粗蛋白质含量测定采用微量凯氏定氮法(GB/T 5511-2008)；酸溶蛋白含量检测采用三氯乙酸(TCA)法(GB/T 22492-2008)。结果如下表二所示。
表二：实施例2试验结果
结论：在生产食用油厂环境中进行发酵豆粕的生产，发酵工艺中用活性炭进行处理，放于水浴和密封玻璃容器中可有效提高小肽含量。
实施例3：抽真空技术进行发酵豆粕的生产
取50g商品豆粕放于自封袋中，按照400U/g豆粕添加蛋白酶，混合均匀，加水23g，再次混合均匀，封口，将含所述豆粕、蛋白酶和水的自封袋放于恒温培养箱中培养(称为样品1)；
或将该自封袋进行抽真空处理，封口后放于恒温水浴中(称为样品2)；
或抽真空处理过的自封袋封口后放于恒温培养箱中进行培养(称为样品3)；
或抽真空处理过的自封袋封口后放于密封的玻璃容器中后放于恒温培养箱中进行培养(称为样品4)；
或将真空处理过的自封袋放于盛有活性炭的密封玻璃容器中后放于恒温培养箱中进行培养(称为样品5)。
各个样品培养温度均为40℃，培养时间为72h，培养72h后于65℃烘箱中烘6h后，粉碎过60目筛，进行粗蛋白和酸溶蛋白的检测。其中粗蛋白质含量测定采用微量凯氏定氮法(GB/T 5511-2008)；酸溶蛋白含量检测采用三氯乙酸(TCA)法(GB/T 22492-2008)。结果如下表三所示。
表三：实施例3试验结果
结论：在生产食用油厂环境中进行发酵豆粕的生产，发酵豆粕样品在发酵前进行抽真空处理后，放于水浴或含有活性炭的密封玻璃容器中，可有效提高发酵豆粕小肽含量。
实施例4：通N2对发酵豆粕品质的影响
取50g商品豆粕放于自封袋中，按照400U/g豆粕添加蛋白酶，混合均匀，加水23g，再次混合均匀，封口，将含所述豆粕、蛋白酶和水的自封袋放于恒温培养箱中培养(样品1)。
或者，在自封袋中将酶与豆粕混合均匀后，将氮气管深入自封袋底部，进行通N2，通N215min后在通N2条件下加水23g密封，在密封的状态下混合均匀，混合均匀后快速赶尽自封袋中的气体，密封，将密封好的自封袋放于密封玻璃容器中，称为样品2；或将赶尽气体、密封好的自封袋放于含有活性炭的密封玻璃容器中，称为样品3；
或者，在自封袋中将豆粕与酶混合均匀后，加水23g，再次混合均匀，混合均匀后，将氮气管深入自封袋底部，进行通N2，通N215min后密封自封袋，将密封好的自封袋放于密封玻璃容器中称为样品4；或将通氮后密封好的自封袋放于含有活性炭的密封玻璃容器中，称为样品5。
将所有制备好的样品放于40℃恒温培养箱培养，培养72h后于65℃烘箱中烘6h后，粉碎过60目筛，进行粗蛋白和酸溶蛋白的检测。其中粗蛋白质含量测定采用微量凯氏定氮法(GB/T 5511-2008)；酸溶蛋白含量检测采用三氯乙酸(TCA)法(GB/T 22492-2008)。结果如下表四所示。
表四：实施例4试验结果
结论：在生产食用油厂环境中进行发酵豆粕的生产，发酵工艺中进行通N2后放于盛有活性炭的密封玻璃容器中可有效提高发酵豆粕中小肽含量。
实施例5：发酵环境中通N2处理对发酵豆粕品质的影响
取50g商品豆粕放于自封袋中，按照400U/g豆粕添加蛋白酶，混合均匀，加水23g，再次混合均匀，封口，将样品放于恒温培养箱中培养(样品1)；
或将封口后的样品放于密封的玻璃容器中，放于恒温培养箱中培养(样品2)；
或将封口后的样品放于玻璃容器中，然后将氮气管深入玻璃容器底部，进行通N2，通N215min后将玻璃容器加盖密封，放于恒温培养箱中培养(样品3)；
或将豆粕、酶和水三者在烧杯中混合，混合好用直接倾注于玻璃容器中，然后将氮气管深入玻璃容器底部，进行通N2，通N215min后将玻璃容器加盖密封，放于恒温培养箱中培养(样品4)；
或在自封袋中将豆粕与酶混合均匀后，加水23g，再次混合均匀，混合均匀后，将洁净空气管深入自封袋底部，并将盛有发酵样品的自封袋放于40℃恒温培养箱中进行边通气边发酵，发酵时间为72h(样品5)。
所有制备好的样品培养温度为40℃，培养72h后于65℃烘箱中烘6h后，粉碎过60目筛，进行粗蛋白和酸溶蛋白的检测。其中粗蛋白质含量测定采用微量凯氏定氮法(GB/T 5511-2008)；酸溶蛋白含量检测采用三氯乙酸(TCA)法(GB/T 22492-2008)。结果如下表五所示。
表五：实施例5试验结果
上述试验证明，在食用油生产厂环境中进行普通工艺的发酵豆粕的发酵，酶解效果差，发酵豆粕产品品质较低。本发明提供可以在食用油厂环境中进行发酵豆粕生产的生产工艺，且豆粕中抗原蛋白等抗营养因子得到有效降解，发酵豆粕中小肽含量得到显著提升。
Claims (10)
1.一种提高豆粕发酵中的酶解效果和/或提高发酵豆粕中酸溶蛋白含量的方法，或豆粕发酵方法，其特征在于，所述方法包括在隔绝环境空气的环境中发酵含酶、豆粕和水的混合物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，通过将所述含酶、豆粕和水的混合物置于可密封的容器中来实现与环境空气的隔绝，或通过在水浴中发酵来实现与环境空气的隔绝，或在发酵过程中一直向混合物所在的非封闭的发酵环境中通入非环境空气的气体来实现与环境空气的隔绝。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，通过以下方式实现所述与环境空气的隔绝：
(1)向所述可密封的容器中通入非环境空气的气体，例如洁净空气、氮气、二氧化碳、氧气和/或氢气，来排出所述容器中原先含有的环境空气，并密封盖容器；
(2)将所述可密封的容器抽真空，并密封该容器；和
(3)与(1)或(2)同时或单独地，将吸附剂加到所述可密封的容器中、并密封该容器。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括：
将所述混合物直接加到所述可密封的容器中，或
先将所述混合物加到自封袋或玻璃容器中，然后将自封袋或玻璃容器放到所述可密封的容器中，或
将含所述混合物的自封袋或玻璃容器置于水浴中。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，对所述自封袋或玻璃容器实施以下处理：
(a)抽真空；
(b)通入非环境空气的气体；
(c)或通入非环境空气的气体后排出自封袋中所有气体；和
(d)与(a)、(b)或(c)同时或单独地，将吸附剂放入所述自封袋或玻璃容器中。
6.如权利要求1－5中任一项所述的方法，其特征在于，
发酵温度为25～50℃，如30～50℃，35～50℃；和
发酵时间为24～96h，如48～90h，50～80h。
7.如权利要求1－6中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法具有以下一个或多个特征：
在恒温培养箱或恒温水浴中实施所述发酵；
所述吸附剂选自活性炭、白土和大孔树脂；
所述非环境空气的气体选自：洁净空气、氮气、二氧化碳、氧气和氢气；和
所述酶选自：蛋白酶、果胶酶、木聚糖酶、α-半乳糖苷酶和纤维素酶中的一种或者多种的混合物。
8.如权利要求1－8中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法具有以下一个或多个特征：
通入非环境空气的气体的时间不少于2分钟，优选不少于5分钟，更优选5～20分钟；
所述酶的添加量为每克豆粕不小于100单位的酶；和
所述含酶、豆粕和水的混合物中水的含量为25～60％。
9.如权利要求1－9中任一项所述的方法，其特征在于，
所述方法包括：将含酶、豆粕和水的自封袋置于盛有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后将该玻璃容器放置在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h；
所述方法包括：将含酶、豆粕和水的混合物盛放于盛放有吸附剂的自封袋中，密封后将其放置在25～50℃的恒温水浴中发酵24～96h；
所述方法包括：将含酶、豆粕和水的混合物直接加到盛有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h；
所述方法包括：将含酶、豆粕和水的密封容器抽真空后，放置在25～50℃的恒温水浴中发酵24～96h；
所述方法包括：将含酶、豆粕和水的密封容器抽真空后，将其放置到盛有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后将该玻璃容器放置在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h；
所述方法包括：先在密封容器中混匀酶与豆粕；通入非环境空气的气体一段时间；在通入非环境空气的气体的情况下加水到该密封容器中，密封后混匀；除去密封容器中的气体并密封该密封容器，从而提供所述含有酶、豆粕和水的混合物的密封容器；所述方法还包括，将该密封容器放置在含有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后将该玻璃容器放置在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h；
所述方法包括：向含酶、豆粕和水的密封容器中通入非环境空气的气体一段时间后，将该密封容器密封，然后将该密封容器放置在含有吸附剂的玻璃容器中，密封该玻璃容器后再将该玻璃容器放置在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h；
所述方法包括：将含酶、豆粕和水的密封容器密封后放于玻璃容器中，将非环境空气的气体通入所述玻璃容器中，排出环境空气，随后密封该玻璃容器，置于25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h；
所述方法包括：将含酶、豆粕和水的混合物直接加到玻璃容器中，将非环境空气的气体通入所述玻璃容器中，排出环境空气，随后密封该玻璃容器，置于25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h；或
所述方法包括：将非环境空气的气体通入含酶、豆粕和水的混合物的自封袋或玻璃容器中，或通入恒温培养箱中，并在通入所述气体的情况下在25～50℃的恒温培养箱中发酵24～96h。
10.如权利要求1－9中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法在食用油生产厂环境中实施。
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