CN106831614B - 取代的苯并二氮杂环类化合物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了取代的苯并二氮杂环类化合物及其制备方法和用途，进一步涉及该化合物的药物组合物和用途。其中，所述取代的苯并二氮杂环类化合物可以通过选择性拮抗或者协同激动NOD1/2信号传导通路的激活，达到预防或治疗免疫炎性疾病或肿瘤的效果，且具有多肽酶稳定性，在机体内不会被多肽酶降解。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，具体而言，本发明涉及取代的苯并二氮杂环类化合物及其制备方法和用途。
背景技术
NOD1/2蛋白为胞质内的模式识别受体，识别进入胞内的细菌胞壁及其降解产物，介导NF-κB和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径。NOD1受体还通过干扰素刺激基因因子3(ISGF3)信号途径诱导产生1型干扰素，NOD2受体能识别ssRNA和病毒基因组ssRNA，通过线粒体抗病毒信号蛋白(MAV)信号途径而激活干扰素调节因子3(IRF3)。它们分别参与了抗细菌、抗病毒、抗寄生虫等病原微生物免疫应答。
然而，通过选择性拮抗NOD1/2信号传导通路的激活预防或治疗免疫炎性疾病或肿瘤的研究还有待深入。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种取代的苯并二氮杂环类化合物及其制备方法和用途。
本发明是基于发明人对以下事实和问题的发现而提出的：
N-乙酰基胞壁酰二肽(MDP，N-acetly-muramly dipeptide)是具有免疫佐剂活性的最小结构糖肽片段，最早发现于分支杆菌细胞壁中，可通过非特异地激活人体免疫细胞(如巨噬细胞、骨髓单核细胞、中性粒细胞、T和B淋巴细胞等)有效增加机体对抗原的体液免疫反应和细胞免疫反应，因而可以发挥非特异性抗感染(肺炎杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、单核细胞增多性李斯特菌、白色念球菌等)、抗肿瘤(纤维肉瘤、肝细胞瘤等)、免疫调节等作用。
式(a)MDP的化学结构
为了发现活性更高同时副作用小的MDP结构类似物，药物化学家们针对MDP分子进行了大量结构优化与构效关系方面的研究工作。例如Murabutide作为MDP分子与脂肪烷烃的共缀物，能够提高宿主免疫***的非特异性抗菌和抗病毒能力，诱导机体释放CSF，调解巨噬细胞功能等；Mifamurtide(MTP-PE)是以丙氨酸作为linker，将MDP与磷脂酰基氨基乙醇连接于一体的共缀物，目前已获准上市，用于辅助性治疗骨肉瘤，其主要副作用是发热和寒战；MDP-Lys(L18)是MDP分子通过赖氨酸(Lys)连接脂肪烷烃所得到的共缀物，能够提高体内多种细胞因子(如CSF、IL-1、IL-6和TNF-α)水平，并具有较强的抗感染和抗肿瘤活性，虽然作为放、化疗免疫增强剂上市，但其毒副作用导致撤市；近年来，我们发现了免疫佐剂MDP-C，是以赖氨酸(Lys)为linker将MDP分子与芳香共轭体系连接所得的共缀物，与MDP相比，MDP-C具有无热源性、无致敏性以及毒性较低等优势，可用于诊断、预防及免疫治疗HBV或癌症等疾病。但是，鉴于MDP-C化合物中含有糖片段，合成路线复杂，周期长，成本高，我们设计了新型MDP新衍生物，保留MDP分子中的活性核心片段D-Gln，将胞壁酰基替换成邻硝基苯甲酰基或其衍生物，并将L-构型丙胺酰基替换成其它脂溶性氨基酸酰基，通式如下所示，在保留较好免疫佐剂活性的同时，结构较MDP-C简单。
式(b)Mifamurtide的化学结构
式(c)MDP-C的化学结构
式(d)MDP衍生物的化学结构
然而，发明人发现，以上发明的成果都以线性结构为基础，具有多肽酶不稳定的可能性。
鉴于此，发明人提出了一种取代的苯并二氮杂卓类化合物及其制备方法和用途。发明人通过模拟或者电子等排该类化合物以上的生物活性或者药理活性，并通过提高酶稳定性来实现其更加优良的治疗价值。更加意外的是，发明人通过大量实验结果发现，该类化合物是通过选择性拮抗NOD1/2信号传导通路的激活，达到预防或治疗免疫炎性疾病或肿瘤的效果。显然，由于NOD1/2的生物学功能尚不完全清楚，本发明的NOD1/2选择性拮抗剂的治疗意义将不限于免疫炎性疾病或肿瘤。
本发明第一方面提出了一种化合物。根据本发明的实施例，其为式(I)所示的化合物或式(I)所示化合物的立体异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或它的前药，
其中，R1为H、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷基、任选取代的杂烷基、任选取代的环烷基或任选取代的杂环烷基；
R2为OR6或NR7R8；
R3为任选取代的烷基、任选取代的杂烷基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基、
R4、R5分别独立地为H或烷基；
R6为H或烷基；
R7、R8分别独立地为H、任选取代的烷基或与R2中的氮原子形成任选取代的杂环烷基；
R9为任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷基或任选取代的烯基；
R10为H、任选取代的烷基、任选取代的杂烷基、任选取代的环烷基或任选取代的杂环烷基；
R11为任选取代的苯乙烯基、任选取代的烯基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷基、任选取代的杂烷基、任选取代的环烷基或任选取代的杂环烷基；
Y为N、O、S或烷基；
X为N、O、S或烷基；
X1、X2、X3、X4分别独立地为H、卤素、甲基、羟基、氨基、氰基、烷氧基、三氟甲基或巯基及其这些取代基的烷基衍生物；
n为1、2或3。
在本发明的一些实施例中，R1为任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6杂烷基、任选取代的C4-6环烷基或与X形成任选取代的C4-6杂环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基或
R2为OR6或NR7R8；
R3为任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6杂烷基、任选取代的C4-6环烷基或任选取代的C4-6杂环烷基、
R4、R5分别独立地为H或C1-6烷基；
R6为H或C1-6烷基；
R7、R8分别独立地为H、C1-20烷基或与R2中的氮原子形成任选取代的C4-6杂环烷基；
R9为任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的C1-6烷基或任选取代的C1-6烯基；
R10为H、任选取代的C1-3烷基、任选取代的C1-6杂烷基或任选取代的C4-6杂环烷基；R11为任选取代的苯乙烯基、任选取代的烯基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷基、任选取代的杂烷基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基；
Y为N、O、S或烷基；
X为N、O、S或烷基；
X1、X2、X3、X4分别独立地为H、卤素、甲基、羟基、氨基、氰基、烷氧基、三氟甲基或巯基或这些取代基的烷基衍生物；
n为1、2或3。
在本发明的一些实施例中，R1为任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6杂烷基、任选取代的C4-6环烷基或与X形成任选取代的C4-6杂环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基或
R2为OR6或NR7R8；
R3为任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6杂烷基、任选取代的C4-6环烷基或任选取代的C4-6杂环烷基、
R4、R5分别独立地为H或C1-3烷基；
R6为H或C1-3烷基；
R7、R8分别独立地为H、C1-18烷基或与R2中的氮原子形成任选取代的C4-6杂环烷基；
R9为任选取代的苯基、任选取代的萘基、任选取代的噻吩基、任选取代的呋喃基、任选取代的C1-3烷基或任选取代的C1-3烯基；
R10为H、任选取代的C1-3烷基、任选取代的C1-6杂烷基或任选取代的C4-6杂环烷基；
R11为任选取代的苯乙烯基、任选取代的烯基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷基、任选取代的杂烷基、任选取代的环烷基或任选取代的杂环烷基；
Y为N、O或C1-3烷基；
X为N、O；
X1、X2、X3、X4分别独立地为H、甲基或卤素；
n为1或2。
在本发明的一些实施例中，R1为甲基、萘基、二丁胺基、
R2为OR6或NR7R8；
R3为
R4、R5分别独立地为H或甲基；
R6为H或甲基；
R7、R8分别独立地为H、甲基、乙基、正丙基、环丙基、正丁基、叔丁基、正十二烷基、正十六烷基、正十八烷基或与R2中的氮原子形成
或桥环、螺环；
R9为
或乙烯基；
R10为H、
R11为甲基、苄基、对三氟苯烯基、3,4,5-三甲氧基苯基、乙烯基、3-甲基-2丁烯基、对三氟甲基苯基、萘基、3,5-二三氟甲基苯基、环丙基、对氰基苯基、
Y为亚甲基或O；
X1、X2、X3、X4分别独立地为H、甲基或Cl；
n为1或2。
在本发明的一些实施例中，本发明提出的化合物具有以下其中之一的结构：
在本发明的第二方面，本发明提出了一种药物组合物。根据本发明的实施例，该药物组合物包含上述化合物。发明人发现，该药物组合物能够有效地通过选择性拮抗或者协同激动NOD1/2信号传导通路的激活，达到预防或治疗免疫炎性疾病或肿瘤的效果，且具有多肽酶稳定性，在机体内不会被多肽酶降解。
在本发明的一些实施例中，所述药物组合物进一步包含药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂、溶媒或它们的组合。
在本发明的一些实施例中，所述药物组合物进一步包含其它的预防或治疗免疫炎性疾病或肿瘤的药物。
在本发明的一些实施例中，所述其它的预防或治疗免疫炎性疾病或肿瘤的药物包括但不限于美法仑(melphalan)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、异环磷酰胺(ifosfamide)、白消安(busulfan)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、链脲佐菌素(streptozocin)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、达卡巴嗪(dacarbazine)、替莫唑胺(temozolomide)、丙卡巴肼(procarbazine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、阿糖胞苷(cytarabine)、吉西他滨(gemcitabine)、巯基嘌呤(mercaptopurine)、氟达拉滨(fludarabine)、长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春瑞滨(vinorelbine)、紫杉醇(paclitaxel)、多西紫杉醇(docetaxel)、拓扑替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、依托泊苷(etoposide)、曲贝替定(trabectedin)、更生霉素(dactinomycin)、多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、道诺霉素(daunorubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、博来霉素(bleomycin)、丝裂霉素C(mitomycin)、伊沙匹隆(ixabepilone)、他莫昔芬(tamoxifen)、氟他胺(flutamide)、戈那瑞林类似物(gonadorelin analogues)、甲地孕酮(megestrol)、强的松(prednidone)、***(dexamethasone)、甲泼尼龙(methylprednisolone)、沙利度胺(thalidomide)、干扰素α(interferon alfa)、亚叶酸钙(leucovorin)、西罗莫司(sirolimus)、替西罗莫司(temsirolimus)、依维莫司(everolimus)、阿法替尼(afatinib)、阿西替尼(axitinib)、博舒替尼(bosutinib)、卡博替尼(cabozantinib)、色瑞替尼(ceritinib)、克卓替尼(crizotinib)、达拉菲尼(dabrafenib)、达沙替尼(dasatinib)、厄洛替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、依鲁替尼(ibrutinib)、盐酸埃克替尼(icotinib hydrochloride)、伊马替尼(imatinib)、拉帕替尼(lapatinib)、尼洛替尼(nilotinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、哌加他尼(pegaptanib)、普纳替尼(ponatinib)、拉多替尼(radotinib)、瑞格菲尼(regorafenib)、鲁索利替尼(ruxolitinib)、索拉菲尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、托法替尼(tofacitinib)、曲美替尼(trametinib)、凡德他尼(vandetanib)、威罗菲尼(vemurafenib)、甲磺酸阿帕替尼(apatinib mesylate)、马赛替尼(masitinib)、丙氨酸布立尼布(brivanib alaninate)、西地尼布(cediranib)、达可替尼(dacomitinib)、福他替尼(fostamatinib)、二磷酸莫替沙尼(motesanib diphosphate)、来那替尼(neratinib)、司美替尼(selumetinib)、替吡法尼(替吡法尼)、巴非替尼(bafetinib)、多维替尼(dovitinib)、塞卡替尼(saracatinib)、替拉替尼(telatinib)、替沃扎尼(tivozanib)、阿仑单抗(alemtuzumab)、贝伐单抗(bevacizumab)、贝伦妥单抗维多汀(brentuximab vedotin)、卡妥索单抗(catumaxomab)、西妥昔单抗(cetuximab)、地诺单抗(denosumab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、伊匹单抗(ipilimumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、帕尼单抗(panitumumab)、利妥昔单抗(rituximab)、托西莫单抗(tositumomab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、idelalisib(艾代拉里斯)、duvelisib(IPI-145)、(吉列替尼)、buparlisib(布帕尼西)、taselisib(GDC 0032)、copanlisib(库潘尼西)、voxtalisib(XL765)、pilaralisib(XL-147)、sonolisib(PX-866)、perifosine(哌立福新)、alectinib(艾乐替尼)、ibrutinib(依布鲁替尼)、pertuzumab(帕妥珠单抗)、nintedanib(尼达尼布)、cobimetinib(考比替尼)、temsirolimus(替西罗莫司)、sirolimus(雷帕霉素)、pixantrone(比生群)、lpilimumab(易普利姆玛)、nivolumab(纳武单抗)或它们的任意组合。
在本发明的第三方面，本发明提出了上述化合物或上述药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗免疫炎性疾病或肿瘤。发明人发现，所述药物能够有效地通过选择性拮抗或者协同激动NOD1/2信号传导通路的激活，达到预防或治疗免疫炎性疾病或肿瘤的效果，且具有多肽酶稳定性，在机体内不会被多肽酶降解。
在本发明的一些实施例中，所述药物用于预防或治疗类风湿关节炎、干燥综合征、韦格纳肉芽肿病、白塞病、结节病、大动脉炎、反应性关节炎、骨关节炎、艾滋病、过敏性疾病、风湿性关节炎、过敏性哮喘、慢性疲劳、II型糖尿病、枯草热、红瘢狼疮或多发性硬化症、结肠癌、直肠癌、胃癌、胃腺癌、胰腺癌、膀胱癌、胆囊癌、乳腺癌、肾癌、肾细胞癌、肝癌、肝细胞癌、肺癌、皮肤癌、黑色素瘤、甲状腺癌、骨肉瘤、软组织肉瘤、头颈癌、中枢神经***肿瘤、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、卵巢癌、子宫癌、子宫内膜癌、***癌、急性骨髓性白血病或急性淋巴细胞白血病或它们的转移癌、真性红细胞增多症、原发性血应性关节炎、骨关节炎、艾滋病、过敏性疾病、风湿性关节炎、过敏性哮喘、慢性疲劳、II型糖尿病、枯草热、红瘢狼疮或多发性硬化症。
在本发明的第四方面，本发明提出了上述化合物或上述药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于选择性拮抗或者协同激动NOD1/2信号传导通路的激活。
另外，在本发明的第五方面，本发明提出了上述化合物的制备、分离纯化和表征的方法。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1是根据本发明实施例的化合物13对NOD1及NOD2的拮抗作用实验结果，
其中A为化合物13对hNOD1/2的拮抗作用结果，
B为化合物13的细胞毒性结果；
图2是根据本发明实施例的化合物13在人外周血来源的巨噬细胞上对C12-ie-DAP激活的NOD1通路的拮抗作用实验结果，
其中A为化合物13对C12-ie-DAP激活NOD1引起前炎性细胞因子IL-6转录的影响结果，
B为化合物13对C12-ie-DAP激活NOD1引起前炎性细胞因子TNF-alpha转录的影响结果；
图3是根据本发明实施例的化合物13在人外周血来源的巨噬细胞上对MDP激活的NOD2通路的拮抗作用实验结果，
其中A为化合物13对MDP激活NOD2引起前炎性细胞因子IL-6转录的影响结果，
B为化合物13对MDP激活NOD2引起前炎性细胞因子TNF-alpha转录的影响结果；
图4为根据本发明实施例的化合物13对经C12-ie-DAP和MDP激活的NOD1和NOD2信号通路后相关蛋白的表达影响结果，
其中A为化合物13对经C12-ie-DAP刺激激活NOD1通路后相关蛋白的表达变化实验结果，
B为化合物13对经MDP刺激激活NOD2通路后相关蛋白的表达变化实验结果；
图5为根据本发明实施例的化合物13对小鼠Lewis肺癌模型(LLC)肿瘤生长的影响结果，
其中A为实验结束时的肿瘤照片，
B为瘤体积变化曲线图，
C为瘤重变化结果图，
D为瘤重抑制率结果图；
图6为根据本发明实施例的化合物13对NOD1/2的选择性拮抗实验结果。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
定义和一般术语
现在详细描述本发明的某些实施方案，其实例由随附的结构式和化学式说明。本发明意图涵盖所有的替代、修改和等同技术方案，它们均包括在如权利要求定义的本发明范围内。本领域技术人员应认识到，许多与本文所述类似或等同的方法和材料能够用于实践本发明。本发明绝不限于本文所述的方法和材料。在所结合的文献、专利和类似材料的一篇或多篇与本申请不同或相矛盾的情况下(包括但不限于所定义的术语、术语应用、所描述的技术，等等)，以本申请为准。
应进一步认识到，本发明的某些特征，为清楚可见，在多个独立的实施方案中进行了描述，但也可以在单个实施例中以组合形式提供。反之，本发明的各种特征，为简洁起见，在单个实施方案中进行了描述，但也可以单独或以任意适合的子组合提供。
除非另有说明或者上下文中有明显的冲突，本文所使用的冠词“一”、“一个(种)”和“所述”旨在包括“至少一个”或“一个或多个”。因此，本文所使用的这些冠词是指一个或多于一个(即至少一个)宾语的冠词。例如，“一组分”指一个或多个组分，即可能有多于一个的组分被考虑在所述实施方案的实施方式中采用或使用。
本发明所使用的术语“患者”是指人(包括成人和儿童)或者其他动物。在一些实施方案中，“患者”是指人。
术语“包含”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。
如本发明所使用的术语“治疗”任何疾病或病症，是指所有可以减缓、中断、阻止、控制或停止疾病或病症的进展，但不一定表示所有疾病或病症的症状全部消失，其也包括对所述症状的预防性治疗，尤其是在容易患有这样疾病或障碍的患者中。在其中一些实施方案中指改善疾病或病症(即减缓或阻止或减轻疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一些实施方案中，“治疗”指缓和或改善至少一种身体参数，包括可能不为患者所察觉的身体参数。在另一些实施方案中，“治疗”指从身体上(例如稳定可察觉的症状)或生理学上(例如稳定身体的参数)或上述两方面调节疾病或病症。在另一些实施方案中，“治疗”指预防或延迟疾病或病症的发作、发生或恶化。
如本发明所使用的术语“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是指能够引发个体的生物学或医学响应(例如降低或抑制酶或蛋白质活性，或改善症状、缓解病症、减缓或延迟疾病发展，或预防疾病等)的本发明化合物的量。
如本发明所使用的术语“给予”和“给药”应当理解为向需要其的个体提供本发明的化合物或本发明化合物的前药。应当认识到本领域技术人员通过使用有效量的本发明化合物治疗目前患有神经性和精神性障碍的患者或者预防性地治疗患有此障碍的患者。
如本发明所使用的术语“组合物”是指包含规定量的规定成分的产物，以及规定量的规定成分的组合所直接或间接地产生的任何产物。与药物组合物相关的这种术语的含义包括包含活性成分(单个或者多个)和组成载体的惰性成分(单个或者多个)的产物，以及由任何两种或多种成分混合、复合或聚集，或者由一种或多种成分分解，或者由一种或多种成分的其他类型的反应或相互作用而直接或间接产生的任何产物。因此，本发明药物组合物包括通过将本发明化合物与可药用载体混合而制备的任何组合物。
像本发明所描述的，本发明的化合物可以任选地被一个或多个取代基所取代，如上面的通式化合物，或者像实施例里面特殊的例子，子类，和本发明所包含的一类化合物。
一般而言，术语“取代的”表示所给结构中的一个或多个氢原子被具体取代基所取代。除非其他方面表明，一个被取代的基团可以有一个取代基在基团各个可取代的位置进行取代。当所给出的结构式中不止一个位置能被选自具体基团的一个或多个取代基所取代时，那么取代基可以相同或不同地在各个可取代的位置取代。
另外，需要说明的是，除非以其他方式明确指出，在本发明中所采用的描述方式“分别独立地为”应做广义理解，其既可以是指在不同基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响，也可以表示在相同的基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响。
在本说明书的各部分，本发明公开化合物的取代基按照基团种类或范围公开。特别指出，本发明包括这些基团种类和范围的各个成员的每一个独立的次级组合。例如，术语“C1-6烷基”特别指独立公开的甲基、乙基、C3烷基、C4烷基、C5烷基和C6烷基。
在本发明的各部分，描述了连接取代基。当该结构清楚地需要连接基团时，针对该基团所列举的马库什变量应理解为连接基团。例如，如果该结构需要连接基团并且针对该变量的马库什基团定义列举了“烷基”或“芳基”，则应该理解，该“烷基”或“芳基”分别代表连接的亚烷基基团或亚芳基基团。
本发明使用的术语“烷基”或“烷基基团”，表示饱和的直链或支链一价烃基基团，其中，所述烷基基团可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。除非另外详细说明，烷基基团含有1-20个碳原子。在一实施方案中，烷基基团含有1-12个碳原子；在另一实施方案中，烷基基团含有3-12个碳原子；在另一实施方案中，烷基基团含有1-6个碳原子；在又一实施方案中，烷基基团含有1-4个碳原子。
烷基基团的实例包含，但并不限于，甲基(Me、-CH3)，乙基(Et、-CH2CH3)，正丙基(n-Pr、-CH2CH2CH3)，异丙基(i-Pr、-CH(CH3)2)，正丁基(n-Bu、-CH2CH2CH2CH3)，异丁基(i-Bu、-CH2CH(CH3)2)，仲丁基(s-Bu、-CH(CH3)CH2CH3)，叔丁基(t-Bu、-C(CH3)3)，正戊基(-CH2CH2CH2CH2CH3)，2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)，3-戊基(-CH(CH2CH3)2)，2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)，3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)，3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)，2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)，正己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)，2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)，3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))，2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)，3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)，4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)，3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)，2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)，2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)，3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3)，正庚基，正辛基，等等。
术语“取代基的烷基衍生物”表示该取代基可以通过烷基衍生物进行取代，例如，卤素的烷基衍生物可以为被卤素取代的烷基，氰基的烷基衍生物可以为被氰基取代的烷基，其中，术语“烷基”具有如本发明所述的定义。
术语“烯基”表示直链或支链一价烃基，其中至少有一个碳-碳sp2双键，其包括“cis”和“trans”的定位，或者“E”和“Z”的定位。其中，所述烯基基团可以任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。在一实施方案中，烯基基团包含2-12个碳原子；在另一实施方案中，烯基基团包含3-12个碳原子；在另一实施方案中，烯基基团包含2-6个碳原子；在又一实施方案中，烯基基团包含2-4个碳原子。烯基基团的实例包括，但并不限于，乙烯基(-CH＝CH2)、烯丙基(-CH2CH＝CH2)等等。
术语“环烷基”表示含有3-12个环碳原子的，单价或多价的饱和单环，双环或三环体系。在一实施方案中，环烷基包含7-12个环碳原子；在又一实施方案中，环烷基包含3-8个环碳原子；在又一实施方案中，环烷基包含3-6个环碳原子。所述环烷基基团可以独立地未被取代或被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“杂环基”和“杂环”在此处可交换使用，都是指包含3-12个环原子的饱和或部分不饱和的非芳香性的单价或多价单环、双环或三环，其中至少一个环原子选自氮、硫或氧原子。除非另外说明，杂环基可以是碳基或氮基，且-CH2-基团可以任选地被-C(＝O)-替代。环的硫原子可以任选地被氧化成S-氧化物。环的氮原子可以任选地被氧化成N-氧化合物。杂环基的实例包括，但不限于：环氧乙烷基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、吡咯烷基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢噻吩基、1,3-二氧环戊基、二硫环戊基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、哌嗪基、二噁烷基、二噻烷基、噻噁烷基、高哌嗪基、高哌啶基、二氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氧氮杂
基、二氮杂
基、硫氮杂
基、吲哚啉基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、1,3-苯并二噁茂基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基。杂环基中-CH2-基团被-C(＝O)-替代的实例包括，但不限于，2-氧代吡咯烷基、氧代-1,3-噻唑烷基、2-哌啶酮基、3,5-二氧代哌啶基和嘧啶二酮基。杂环基中硫原子被氧化的实例包括，但不限于，环丁砜基、1,1-二氧代硫代吗啉基。其中，所述的杂环基基团可以任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“杂环烷基”是指含有3-12个环原子的单价或多价的饱和单环、双环或者三环体系，其中至少一个环原子选自氮、硫或氧原子。其中，所述的杂环烷基基团可以任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。
术语“芳基”表示含有6-14个环原子，或6-12个环原子，或6-10个环原子的单环、双环或三环的碳环体系，其中，至少一个环是芳香族的，且有一个或多个附着点与分子的其余部分相连。术语“芳基”可以和术语“芳香环”交换使用。在一实施方案中，芳基为由6-10个环原子组成的，且其中至少含有一个芳香环的碳环体系。芳基基团的实例可以包括苯基、萘基和蒽基。其中，所述芳基基团可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“杂芳基”表示含有5-12个环原子，或5-10个环原子，或5-6个环原子的单环、双环或三环，其中至少一个环是芳香族的，且至少一个芳香环包含一个或多个杂原子，且有一个或多个附着点与分子其余部分相连。术语“杂芳基”可以与术语“杂芳环”或“杂芳族化合物”交换使用。其中，所述杂芳基基团任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。在一实施方案中，杂芳基为包含1、2、3或4个独立选自O、S和N的杂原子的5-12个原子组成的杂芳基；在另一实施方案中，杂芳基为包含1、2、3或4个独立选自O、S和N的杂原子的5-6个原子组成的杂芳基。
杂芳基基团的实例包括，但并不限于，2-呋喃基、3-呋喃基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、噁二唑基(如1,2,3-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基)、噁***基(如1,2,3,4-噁***基)、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、异噻唑基、2-噻二唑基(如1,3,4-噻二唑基、1,2,3-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基)、噻***基(如1,2,3,4-噻***基)、四唑基(如2H-1,2,3,4-四唑基、1H-1,2,3,4-四唑基)、***基(如2H-1,2,3-***基、1H-1,2,4-***基、4H-1,2,4-***基)、2-噻吩基、3-噻吩基、1H-吡唑基(如1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、1H-吡唑-5-基)、1,2,3-硫代二唑基、1,3,4-硫代二唑基、1,2,5-硫代二唑基、N-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、哒嗪基(如3-哒嗪基、4-哒嗪基)、2-吡嗪基、三嗪基(如1,3,5-三嗪)、四嗪基(如1,2,4,5-四嗪、1,2,3,5-四嗪)；也包括以下的双环，但绝不限于这些双环：苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基(如2-吲哚基)、嘌呤基、喹啉基(如2-喹啉基，3-喹啉基，4-喹啉基)、异喹啉基(如1-异喹啉基、3-异喹啉基或4-异喹啉基)、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、[1,2,4]***并[4,3-b]哒嗪基、[1,2,4]***并[1,5-a]嘧啶基、[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶基，等等。
本发明所使用的术语“前药”，代表一个化合物在体内转化为式(I)所示的化合物。这样的转化受前体药物在血液中水解或在血液或组织中经酶转化为母体结构的影响。本发明前体药物类化合物可以是酯，在现有的发明中酯可以作为前体药物的有苯酯类，脂肪族(C1-C24)酯类，酰氧基甲基酯类，碳酸酯，氨基甲酸酯类和氨基酸酯类。例如本发明里的一个化合物包含羟基，即可以将其酰化得到前体药物形式的化合物。其他的前体药物形式包括磷酸酯，如这些磷酸酯类化合物是经母体上的羟基磷酸化得到的。关于前体药物完整的讨论可以参考以下文献：T.Higuchi and V.Stella,Pro-drugs as Novel DeliverySystems,Vol.14of the A.C.S.Symposium Series,Edward B.Roche,ed.,BioreversibleCarriers in Drug Design,American Pharmaceutical Association and PergamonPress,1987,J.Rautio et al.,Prodrugs:Design and Clinical Applications,NatureReview Drug Discovery,2008,7,255-270,and S.J.Hecker et al.,Prodrugs ofPhosphates and Phosphonates,Journal of Medicinal Chemistry,2008,51,2328-2345。
“代谢产物”是指具体的化合物或其盐在体内通过代谢作用所得到的产物。一个化合物的代谢产物可以通过所属领域公知的技术来进行鉴定，其活性可以通过如本发明所描述的那样采用试验的方法进行表征。这样的产物可以是通过给药化合物经过氧化，还原，水解，酰氨化，脱酰氨作用，酯化，脱脂作用，酶裂解等等方法得到。相应地，本发明包括化合物的代谢产物，包括将本发明的化合物与哺乳动物充分接触一段时间所产生的代谢产物。
本发明所使用的“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的有机盐和无机盐。药学上可接受的盐在所属领域是为我们所熟知的，如文献：S.M.Berge et al.,describepharmaceutically acceptable salts in detail in J.Pharmaceutical Sciences,1977,66:1-19.所记载的。药学上可接受的无毒的酸形成的盐包括，但并不限于，与氨基基团反应形成的无机酸盐有盐酸盐，氢溴酸盐，磷酸盐，硫酸盐，高氯酸盐，和有机酸盐如乙酸盐，草酸盐，马来酸盐，酒石酸盐，柠檬酸盐，琥珀酸盐，丙二酸盐，或通过书籍文献上所记载的其他方法如离子交换法来得到这些盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐，藻酸盐，抗坏血酸盐，天冬氨酸盐，苯磺酸盐，苯甲酸盐，重硫酸盐，硼酸盐，丁酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，环戊基丙酸盐，二葡萄糖酸盐，十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，甲酸盐，反丁烯二酸盐，葡庚糖酸盐，甘油磷酸盐，葡萄糖酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己酸盐，氢碘酸盐，2-羟基-乙磺酸盐，乳糖醛酸盐，乳酸盐，月桂酸盐，月桂基硫酸盐，苹果酸盐，甲磺酸盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，硝酸盐，油酸盐，棕榈酸盐，扑酸盐，果胶酸盐，过硫酸盐，3-苯基丙酸盐，苦味酸盐，特戊酸盐，丙酸盐，硬脂酸盐，硫氰酸盐，对甲苯磺酸盐，十一酸盐，戊酸盐，等等。通过适当的碱得到的盐包括碱金属，碱土金属，铵和N+(C1-4烷基)4的盐。本发明也拟构思了任何所包含N的基团的化合物所形成的季铵盐。水溶性或油溶性或分散产物可以通过季铵化作用得到。碱金属或碱土金属盐包括钠，锂，钾，钙，镁，等等。药学上可接受的盐进一步包括适当的、无毒的铵，季铵盐和抗平衡离子形成的胺阳离子，如卤化物，氢氧化物，羧化物，硫酸化物，磷酸化物，硝酸化物，C1-8磺酸化物和芳香磺酸化物。
本发明的“溶剂化物”是指一个或多个溶剂分子与本发明的化合物所形成的缔合物。形成溶剂化物的溶剂包括，但并不限于，水，异丙醇，乙醇，甲醇，二甲亚砜，乙酸乙酯，乙酸和氨基乙醇。术语“水合物”是指溶剂分子是水所形成的缔合物。
当所述溶剂为水时，可以使用术语“水合物”。在一些实施例中，一个本发明化合物分子可以与一个水分子相结合，比如一水合物；在另外一些实施例中，一个本发明化合物分子可以与多于一个的水分子相结合，比如二水合物，还有一些实施例中，一个本发明化合物分子可以与少于一个的水分子相结合，比如半水合物。应注意，本发明所述的水合物保留有非水合形式的所述化合物的生物有效性。
如本发明所使用的术语“治疗”任何疾病或病症，是指所有可以减缓、中断、阻止、控制或停止疾病或病症的进展，但不一定表示所有疾病或病症的症状全部消失，其也包括对所述症状的预防性治疗，尤其是在容易患有这样疾病或障碍的患者中。在其中一些实施方案中指改善疾病或病症(即减缓或阻止或减轻疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一些实施方案中，“治疗”指缓和或改善至少一种身体参数，包括可能不为患者所察觉的身体参数。在另一些实施方案中，“治疗”指从身体上(例如稳定可察觉的症状)或生理学上(例如稳定身体的参数)或上述两方面调节疾病或病症。在另一些实施方案中，“治疗”指预防或延迟疾病或病症的发作、发生或恶化。
如本发明所使用的术语化合物“给予”和“给药”化合物应当理解为向需要其的个体提供本发明的化合物或本发明化合物的前药。应当认识到本领域技术人员通过使用有效量的本发明化合物治疗目前患有神经性和精神性障碍的患者或者预防性地治疗患有此障碍的患者。
如本发明所使用的术语“组合物”是指包含规定量的规定成分的产物，以及规定量的规定成分的组合所直接或间接地产生的任何产物。与药物组合物相关的这种术语的含义包括包含活性成分(单个或者多个)和组成载体的惰性成分(单个或者多个)的产物，以及由任何两种或多种成分混合、复合或聚集，或者由一种或多种成分分解，或者由一种或多种成分的其他类型的反应或相互作用而直接或间接产生的任何产物。因此，本发明药物组合物包括通过将本发明化合物与可药用载体混合而制备的任何组合物。
本发明的化合物的描述
本发明公开了一种取代苯并二氮杂环类化合物，其药学上可接受的盐、药物制剂及其组合物可以作为NOD1/2信号传导通路的拮抗剂，对人类疫炎性疾病或肿瘤，例如类风湿关节炎、干燥综合征、韦格纳肉芽肿病、白塞病、结节病、大动脉炎、反应性关节炎、骨关节炎、艾滋病、过敏性疾病、风湿性关节炎、过敏性哮喘、慢性疲劳、II型糖尿病、枯草热、红瘢狼疮或多发性硬化症、结肠癌、直肠癌、胃癌、胃腺癌、胰腺癌、膀胱癌、胆囊癌、乳腺癌、肾癌、肾细胞癌、肝癌、肝细胞癌、肺癌、皮肤癌、黑色素瘤、甲状腺癌、骨肉瘤、软组织肉瘤、头颈癌、中枢神经***肿瘤、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、卵巢癌、子宫癌、子宫内膜癌、***癌、急性骨髓性白血病或急性淋巴细胞白血病或它们的转移癌、真性红细胞增多症、原发性血应性关节炎、骨关节炎、艾滋病、过敏性疾病、风湿性关节炎、过敏性哮喘、慢性疲劳、II型糖尿病、枯草热、红瘢狼疮或多发性硬化症的治疗有潜在的用途。
本发明第一方面提出了一种化合物。根据本发明的实施例，其为式(I)所示的化合物或式(I)所示化合物的立体异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或它的前药，
其中，R1为H、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷基、任选取代的杂烷基、任选取代的环烷基或任选取代的杂环烷基；
R2为OR6或NR7R8；
R3为任选取代的烷基、任选取代的杂烷基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基、
R4、R5分别独立地为H或烷基；
R6为H或烷基；
R7、R8分别独立地为H、任选取代的烷基或与R2中的氮原子形成任选取代的杂环烷基；
R9为任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷基或任选取代的烯基；
R10为H、任选取代的烷基、任选取代的杂烷基、任选取代的环烷基或任选取代的杂环烷基；
R11为任选取代的苯乙烯基、任选取代的烯基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷基、任选取代的杂烷基、任选取代的环烷基或任选取代的杂环烷基；
Y为N、O、S或烷基；
X为N、O、S或烷基；
X1、X2、X3、X4分别独立地为H、卤素、甲基、羟基、氨基、氰基、烷氧基、三氟甲基或巯基及其这些取代基的烷基衍生物；
n为1、2或3。
在本发明的一些实施例中，R1为任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6杂烷基、任选取代的C4-6环烷基或与X形成任选取代的C4-6杂环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基或
R2为OR6或NR7R8；
R3为任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6杂烷基、任选取代的C4-6环烷基或任选取代的C4-6杂环烷基、
R4、R5分别独立地为H或C1-6烷基；
R6为H或C1-6烷基；
R7、R8分别独立地为H、C1-20烷基或与R2中的氮原子形成任选取代的C4-6杂环烷基；
R9为任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的C1-6烷基或任选取代的C1-6烯基；
R10为H、任选取代的C1-3烷基、任选取代的C1-6杂烷基或任选取代的C4-6杂环烷基；R11为任选取代的苯乙烯基、任选取代的烯基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷基、任选取代的杂烷基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基；
Y为N、O、S或烷基；
X为N、O、S或烷基；
X1、X2、X3、X4分别独立地为H、卤素、甲基、羟基、氨基、氰基、烷氧基、三氟甲基或巯基或这些取代基的烷基衍生物；
n为1、2或3。
在本发明的一些实施例中，R1为任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6杂烷基、任选取代的C4-6环烷基或与X形成任选取代的C4-6杂环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基或
R2为OR6或NR7R8；
R3为任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6杂烷基、任选取代的C4-6环烷基或任选取代的C4-6杂环烷基、
R4、R5分别独立地为H或C1-3烷基；
R6为H或C1-3烷基；
R7、R8分别独立地为H、C1-18烷基或与R2中的氮原子形成任选取代的C4-6杂环烷基；
R9为任选取代的苯基、任选取代的萘基、任选取代的噻吩基、任选取代的呋喃基、任选取代的C1-3烷基或任选取代的C1-3烯基；
R10为H、任选取代的C1-3烷基、任选取代的C1-6杂烷基或任选取代的C4-6杂环烷基；
R11为任选取代的苯乙烯基、任选取代的烯基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷基、任选取代的杂烷基、任选取代的环烷基或任选取代的杂环烷基；
Y为N、O或C1-3烷基；
X为N、O；
X1、X2、X3、X4分别独立地为H、甲基或卤素；
n为1或2。
在本发明的一些实施例中，R1为甲基、萘基、二丁胺基、
R2为OR6或NR7R8；
R3为
R4、R5分别独立地为H或甲基；
R6为H或甲基；
R7、R8分别独立地为H、甲基、乙基、正丙基、环丙基、正丁基、叔丁基、正十二烷基、正十六烷基、正十八烷基或与R2中的氮原子形成
或桥环、螺环；
R9为
或乙烯基；
R10为H、
R11为甲基、苄基、对三氟苯烯基、3,4,5-三甲氧基苯基、乙烯基、3-甲基-2丁烯基、对三氟甲基苯基、萘基、3,5-二三氟甲基苯基、环丙基、对氰基苯基、
Y为亚甲基或O；
X1、X2、X3、X4分别独立地为H、甲基或Cl；
n为1或2。
在本发明的一些实施例中，本发明提出的化合物具有以下其中之一的结构：
发明人发现，该类化合物能够有效地通过选择性拮抗或者协同激动NOD1/2信号传导通路的激活，达到预防或治疗免疫炎性疾病或肿瘤的效果，且具有多肽酶稳定性，在机体内不会被多肽酶降解。
需要说明的是，上述“选择性拮抗NOD1/2信号传导通路的激活”是指本发明的化合物能够在不影响细胞内其它可能的受体的同时，具有拮抗对NOD1/2信号传导通路激活的作用。
需要说明的是，上述术语“多肽酶稳定性”是指化合物不被机体内多肽酶降解的能力。
除非另作说明，式(I)所示化合物的立体异构体、溶剂化物、代谢产物、盐和药学上可接受的前药都包含在本发明范围内。
本发明公开化合物可含有不对称或手性中心，因此可以不同的立体异构体形式存在。本发明旨在使式(I)所示化合物的所有立体异构体形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体、阻转异构体和几何(或构象)异构体，以及它们的混合物如外消旋混合物，成为本发明的组成部分。
在本发明公开的结构中，当任意特定的手性原子的立体化学未指明时，则该结构的所有立体异构体都考虑在本发明之内，并且作为本发明公开化合物包括在本发明中。当立体化学被表示特定构型的实楔形线(solid wedge)或虚线指明时，则该结构的立体异构体就此明确和定义。
式(I)所示化合物可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这些互变异构体，都包括在本发明范围内。
式(I)所示化合物可以以盐的形式存在。在一实施方案中，所述盐是指药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的”是指物质或组合物必须与包含制剂的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物在化学上和/或毒理学上相容。在另一实施方案中，所述盐不一定是药学上可接受的盐，可以是用于制备和/或提纯式(I)所示化合物和/或用于分离本式(I)所示化合物的对映体的中间体。
可药用的酸加成盐可由本发明公开化合物与无机酸或有机酸作用形成，例如乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。
可药用碱加成盐可由本发明公开化合物与无机碱或有机碱作用形成。
可以由其衍生得到盐的无机碱包括，例如铵盐和周期表的I族至XII族的金属。在某些实施方案中，该盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别适合的盐包括铵、钾、钠、钙和镁盐。
可以由其衍生得到盐的有机碱包括伯胺、仲胺和叔胺，取代的胺包括天然存在的取代的胺、环状胺、碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括，例如，异丙胺、苄星青霉素(benzathine)、胆碱盐(cholinate)、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺(meglumine)、哌嗪和氨丁三醇。
本发明的可药用盐可以用常规化学方法由母体化合物、碱性或酸性部分来合成。一般而言，该类盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计量量的适宜碱(如Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应，或者通过使这些化合物的游离碱形式与化学计量量的适宜酸反应来进行制备。该类反应通常在水或有机溶剂或二者的混合物中进行。一般地，在适当的情况中，需要使用非水性介质如***、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。在例如“Remington′s Pharmaceutical Sciences”，第20版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，(1985)；和“药用盐手册：性质、选择和应用(Handbook of PharmaceuticalSalts：Properties，Selection，and Use)”，Stahl and Wermuth(Wiley-VCH，Weinheim，Germany，2002)中可找到另外一些适宜盐的列表。
另外，本发明公开的化合物、包括它们的盐，也可以以它们的水合物形式或包含其溶剂(例如乙醇、DMSO，等等)的形式得到，用于它们的结晶。本发明公开化合物可以与药学上可接受的溶剂(包括水)固有地或通过设计形成溶剂化物；因此，本发明旨在包括本发明公开化合物溶剂化的和未溶剂化的形式。
本发明给出的任何结构式也意欲表示这些化合物未被同位素富集的形式以及同位素富集的形式。同位素富集的化合物具有本发明给出的通式描绘的结构，除了一个或多个原子被具有所选择原子量或质量数的原子替换。可引入本发明化合物中的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，如2H、3H、11C、13C、14C、15N、17O、18O、18F、31P、32P、35S、36Cl和125I。
另一方面，本发明所述化合物包括同位素富集的本发明所定义的化合物，例如，其中存在放射性同位素，如3H、14C和18F的那些化合物，或者其中存在非放射性同位素，如2H和13C的那些化合物。该类同位素富集的化合物可用于代谢研究(使用14C)、反应动力学研究(使用例如2H或3H)、检测或成像技术，如正电子发射断层扫描术(PET)或包括药物或底物组织分布测定的单光子发射计算机断层成像术(SPECT)，或可用于患者的放疗中。18F富集的化合物对PET或SPECT研究而言是特别理想的。同位素富集的式(I)所示化合物可以通过本领域技术人员熟悉的常规技术或本发明中的实施例和制备过程所描述使用合适的同位素标记试剂替代原来使用过的未标记试剂来制备。
此外，较重同位素特别是氘(即，2H或D)的取代可提供某些治疗优点，这些优点是由代谢稳定性更高带来的。例如，体内半衰期增加或剂量需求降低或治疗指数得到改善带来的。应当理解，本发明中的氘被看作式(I)所示化合物的取代基。可以用同位素富集因子来定义该类较重同位素特别是氘的浓度。本发明所使用的术语“同位素富集因子”是指所指定同位素的同位素丰度和天然丰度之间的比例。如果本发明化合物的取代基被指定为氘，该化合物对各指定的氘原子而言具有至少3500(各指定氘原子处52.5％的氘掺入)、至少4000(60％的氘掺入)、至少4500(67.5％的氘掺入)，至少5000(75％的氘掺入)，至少5500(82.5％的氘掺入)、至少6000(90％的氘掺入)、至少6333.3(95％的氘掺入)、至少6466.7(97％的氘掺入)、至少6600(99％的氘掺入)或至少6633.3(99.5％的氘掺入)的同位素富集因子。本发明可药用的溶剂化物包括其中结晶溶剂可以是同位素取代的例如D2O、丙酮-d6、DMSO-d6的那些溶剂化物。
另一方面，本发明涉及制备式(I)所示化合物的中间体。
另一方面，本发明涉及式(I)所示化合物的制备、分离和纯化的方法。
另一方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明化合物。在一实施方案中，本发明所述药物组合物，更进一步包括药学上可接受的载体、赋形剂、佐剂、溶媒或它们的组合。在另一实施方案中，药物组合物可以是液体、固体、半固体、凝胶或喷雾剂型。
本发明化合物的药物组合物、制剂和给药
本发明提供一种药物组合物，其包含本发明公开化合物，例如实施例中所列化合物。根据本发明的具体示例，该药物组合物还可以进一步包括药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂、溶媒或它们的组合。
本发明提供治疗、预防或改善疾病或病症的方法，包括给予安全有效量的包含本发明公开化合物与一种或多种治疗活性剂的联合药物。其中，联合药物包含一种或多种其它的预防或治疗免疫炎性疾病或肿瘤的药物。
所述其它的预防或治疗免疫炎性疾病或肿瘤的药物包括但不限于美法仑(melphalan)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、异环磷酰胺(ifosfamide)、白消安(busulfan)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、链脲佐菌素(streptozocin)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、达卡巴嗪(dacarbazine)、替莫唑胺(temozolomide)、丙卡巴肼(procarbazine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、阿糖胞苷(cytarabine)、吉西他滨(gemcitabine)、巯基嘌呤(mercaptopurine)、氟达拉滨(fludarabine)、长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春瑞滨(vinorelbine)、紫杉醇(paclitaxel)、多西紫杉醇(docetaxel)、拓扑替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、依托泊苷(etoposide)、曲贝替定(trabectedin)、更生霉素(dactinomycin)、多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、道诺霉素(daunorubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、博来霉素(bleomycin)、丝裂霉素C(mitomycin)、伊沙匹隆(ixabepilone)、他莫昔芬(tamoxifen)、氟他胺(flutamide)、戈那瑞林类似物(gonadorelin analogues)、甲地孕酮(megestrol)、强的松(prednidone)、***(dexamethasone)、甲泼尼龙(methylprednisolone)、沙利度胺(thalidomide)、干扰素α(interferon alfa)、亚叶酸钙(leucovorin)、西罗莫司(sirolimus)、替西罗莫司(temsirolimus)、依维莫司(everolimus)、阿法替尼(afatinib)、阿西替尼(axitinib)、博舒替尼(bosutinib)、卡博替尼(cabozantinib)、色瑞替尼(ceritinib)、克卓替尼(crizotinib)、达拉菲尼(dabrafenib)、达沙替尼(dasatinib)、厄洛替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、依鲁替尼(ibrutinib)、盐酸埃克替尼(icotinib hydrochloride)、伊马替尼(imatinib)、拉帕替尼(lapatinib)、尼洛替尼(nilotinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、哌加他尼(pegaptanib)、普纳替尼(ponatinib)、拉多替尼(radotinib)、瑞格菲尼(regorafenib)、鲁索利替尼(ruxolitinib)、索拉菲尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、托法替尼(tofacitinib)、曲美替尼(trametinib)、凡德他尼(vandetanib)、威罗菲尼(vemurafenib)、甲磺酸阿帕替尼(apatinib mesylate)、马赛替尼(masitinib)、丙氨酸布立尼布(brivanib alaninate)、西地尼布(cediranib)、达可替尼(dacomitinib)、福他替尼(fostamatinib)、二磷酸莫替沙尼(motesanib diphosphate)、来那替尼(neratinib)、司美替尼(selumetinib)、替吡法尼(替吡法尼)、巴非替尼(bafetinib)、多维替尼(dovitinib)、塞卡替尼(saracatinib)、替拉替尼(telatinib)、替沃扎尼(tivozanib)、阿仑单抗(alemtuzumab)、贝伐单抗(bevacizumab)、贝伦妥单抗维多汀(brentuximab vedotin)、卡妥索单抗(catumaxomab)、西妥昔单抗(cetuximab)、地诺单抗(denosumab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、伊匹单抗(ipilimumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、帕尼单抗(panitumumab)、利妥昔单抗(rituximab)、托西莫单抗(tositumomab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、idelalisib(艾代拉里斯)、duvelisib(IPI-145)、gilteritinib(吉列替尼)、buparlisib(布帕尼西)、taselisib(GDC 0032)、copanlisib(库潘尼西)、voxtalisib(XL765)、pilaralisib(XL-147)、sonolisib(PX-866)、perifosine(哌立福新)、alectinib(艾乐替尼)、ibrutinib(依布鲁替尼)、pertuzumab(帕妥珠单抗)、nintedanib(尼达尼布)、cobimetinib(考比替尼)、temsirolimus(替西罗莫司)、sirolimus(雷帕霉素)、pixantrone(比生群)、lpilimumab(易普利姆玛)、nivolumab(纳武单抗)或它们的任意组合。
本发明公开的药物组合物中化合物的量是指能有效检测到拮抗生物样本或患者体内NOD1/2受体的量。本发明组合物中活性组分的剂量可以改变，但是，活性组分的量必须是可以获得适当剂型的量。活性组分可以以提供最佳药物效力的剂量给药于需要这种治疗的患者(动物和人)。所选择的剂量取决于期望的治疗效果，取决于给药途径和治疗持续时间。剂量将会随患者而异，这取决于疾病的属性和严重程度、病人的重量、病人的具体饮食、同时使用的药物以及本领域技术人员将会认识到的其它因素。剂量范围通常为每个患者每天约0.5mg到1.0g，可以单剂或多剂的形式给药。在一个实施方案中，剂量范围为每个患者每天约0.5mg至500mg；在另一实施方案中为每个患者每天约0.5mg至200mg；在还另一实施方案中为每个患者每天约5mg至50mg。
也应认识到，本发明的某些化合物可以以游离形式存在并用于治疗，或者如果适当可以以其药学上可接受的衍生物的形式存在。药学上可接受的衍生物包括药学上可接受的前药、盐、酯、这些酯的盐，或者对有需要的患者给药时能直接或间接提供本发明所述化合物或其代谢产物或残留物的任何另外的加合物或衍生物。
本发明公开的药物或药物组合物可制备并包装为散装(bulk)形式，其中可提取安全有效量的式(I)所示的化合物，然后以粉末或糖浆形式给予患者。通常，以每日0.0001到10mg/kg体重之间的剂量水平向患者，给药以获得对NOD1/2受体有效的拮抗作用。或者，本发明公开的药物组合物可制备并包装为单位剂型，其中每个物理上离散的单位含有安全有效量的式(I)所示的化合物。当以单位剂型制备时，本发明公开的药物组合物通常可含，例如，0.5mg至1g、或1mg至700mg、或5mg至100mg的本发明公开的化合物。
当本发明的药物组合物除含有本发明化合物之外还含有一种或多种其它活性组分时，本发明化合物与第二活性组分的化合物重量比可以变化并且取决于每种组分的有效剂量。通常，使用每种的有效剂量。因此，例如，当本发明化合物与另一种药剂混合时，本发明化合物与另一种药剂的重量比范围通常为约1000:1至约1:1000，例如约200:1到约1:200。本发明化合物与其它活性组分的混合物通常也在上述范围内，但是在每种情况下，都应当使用每种活性组分的有效剂量。
本发明所用“药学上可接受的赋形剂”意指与给药剂型或药物组合物一致性相关的药学上可接受的材料，混合物或溶媒。每种赋形剂在混合时必须与药物组合物的其它成分相容，以避免对患者给药时会大大降低本发明公开化合物的功效的相互作用和会导致不是药学上可接受的药物组合物的相互作用。此外，每种赋形剂必须是药学上可接受的，例如，具有足够高的纯度。
合适的药学上可接受的赋形剂会依所选具体剂型而不同。此外，可根据它们在组合物中的特定功能来选择药学上可接受的赋形剂。例如，可选择能有助于生产均一剂型的某些药学上可接受的赋形剂。可选择能有助于生产稳定剂型的某些药学上可接受的赋形剂。可选择对患者给药时有助于携带或运输本发明公开化合物从身体的一个器官或部分到身体的另一个器官或部分的某些药学上可接受的赋形剂。可选择增强患者依从性的某些药学上可接受的赋形剂。
合适的药学上可接受的赋形剂包括以下类型的赋形剂：稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、造粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、矫味剂、掩味剂、着色剂、防结块剂、保湿剂、螯合剂、塑化剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。技术人员可认识到，某些药学上可接受的赋形剂可提供不止一种功能，并提供可供选择的功能，这取决于制剂中存在多少该赋形剂和制剂中存在那些其他赋形剂。
技术人员掌握本领域的知识和技能，以使他们能选择用于本发明的适当量的合适的药学上可接受的赋形剂。此外，存在大量技术人员可获得的资源，他们描述药学上可接受的赋形剂，并用于选择合适的药学上可接受的赋形剂。实例包括Remington'sPharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company),The Handbook ofPharmaceutical Additives(Gower Publishing Limited),and The Handbook ofPharmaceutical Excipients(the American Pharmaceutical Association and thePharmaceutical Press)。
在Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21st edition,2005,ed.D.B.Troy,Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia,and Encyclopedia ofPharmaceutical Technology,eds.J.Swarbrick and J.C.Boylan,1988-1999,MarcelDekker,New York中披露了用于配置药学上可接受的组合物的各种载体，和用于其制备的公知技术，这些文献各自的内容通过引用并入本发明。除任何诸如因产生任何不期望的生物作用，或以有害方式与药学上可接受组合物中的任何其它成分发生相互作用而与本发明公开化合物不相容的任何常用载体外，关注其应用属于本发明的范围。
本发明公开的药物组合物使用本领域技术人员已知的技术和方法来制备。本领域一些常用方法的描述可参见Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack PublishingCompany)。
因此，另一方面，本发明涉及制备药物组合物的工艺，所述药物组合物包含本发明公开化合物和药学上可接受的赋形剂，载体，辅剂，溶媒或它们的组合，该工艺包括混合各种成分。包含本发明公开化合物的药物组合物，可以在例如环境温度和大气压下混合来制备。
本发明公开的化合物通常被配制成适合于通过所需途径对患者给药的剂型。例如，剂型包括那些适合于以下给药途径的剂型：(1)口服给药，例如片剂、胶囊剂、囊片剂、丸剂、含片剂、粉剂、糖浆剂、酏剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、香包剂和扁囊剂；(2)胃肠外给药，例如无菌溶液剂、混悬剂和复溶粉末；(3)透皮给药，例如透皮贴片剂；(4)直肠给药，例如栓剂；(5)吸入，例如气雾剂、溶液剂和干粉剂；和(6)局部给药，例如乳膏剂、油膏剂、洗剂、溶液剂、糊剂、喷雾剂、泡沫剂和凝胶剂。
在一实施方案中，本发明公开的化合物可以配制成口服剂型。在另一实施方案中，本发明公开的化合物可以配制成吸入剂型。在另一实施方案中，本发明公开的化合物可以配制成经鼻给药剂型。在又一实施方案中，本发明公开的化合物可以配制成透皮给药剂型。还在一实施方案中，本发明公开的化合物可以配制成局部给药剂型。
本发明提供的药物组合物可以以压制片、研制片、可咀嚼锭剂、速溶片、复压片、或肠溶片、糖衣或薄膜衣片来提供。肠溶片是用能抗胃酸作用但在肠中溶解或崩解的物质包衣的压制片，从而防止了活性成分接触胃的酸性环境。肠包衣包括，但不限于，脂肪酸、脂肪、水杨酸苯酯、蜡、紫胶、氨化紫胶和邻苯二甲酸乙酸纤维素酯。糖衣片为糖衣包围的压制片，其可利于掩盖令人不愉快的味道或气味并且能防止片剂氧化。薄膜包衣片为用水溶性物质的薄层或薄膜覆盖的压制片。薄膜包衣包括，但不限于，羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇4000和邻苯二甲酸乙酸纤维素酯。薄膜包衣赋有和糖包衣相同的一般特性。复压片为经过超过一个压缩周期制备的压制片，包括多层片、和压制包衣或干包衣片。
片剂剂型可以由呈粉末、结晶或颗粒状的活性成分单独的或与本发明描述的一种或多种载体或赋形剂组合来制备，所述载体和赋形剂包括粘合剂、崩解剂、控释聚合物、润滑剂、稀释剂和/或着色剂。增香剂和甜味剂在形成咀嚼片和锭剂时特别有用。
本发明提供的药物组合物可以以软胶囊或硬胶囊来提供，其可以由明胶、甲基纤维素、淀粉或海藻酸钙来制备。所述硬明胶胶囊也称为干填充胶囊(DFC)，由两段组成，一段塞入另一段中，因此完全包封了活性成分。软弹性胶囊(SEC)是软的、球形壳，比如明胶壳，其通过加入甘油、山梨醇或类似的多元醇塑化。软明胶壳可以包含防腐剂来预防微生物生长。合适的防腐剂为如本发明所述的那些，包括尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，以及山梨酸。本发明提供的液体、半固体和固体剂型可以包囊在胶囊中。合适的液体和半固体剂型包括在碳酸丙烯酯、植物油或甘油三酯中的溶液和混悬剂。包含这样的溶液的胶囊可以如在美国专利U.S.Pat.Nos.4,328,245；4,409,239和4,410,545中描述的来制备。所述胶囊也可以采用如本领域技术人员已知的涂层，从而改善或维持活性成分的溶出。
本发明提供的药物组合物可以以液体和半固体剂型来提供，包括乳剂、溶液、混悬剂、酏剂和糖浆剂。乳剂为二相***，其中一种液体以小球形式完全分散在另一种液体中，其可以是水包油型或油包水型。乳剂可以包括药学上可接受的非水液体和溶剂、乳化剂和防腐剂。混悬剂可以包括药学上可接受的助悬剂和防腐剂。含水醇溶液可以包括药学上可接受的缩醛，比如低级烷基醛的二(低级烷基)缩醛，例如乙醛二乙基缩醛；和具有一个或多个羟基的水溶性溶剂，比如丙二醇和乙醇。酏剂是透明的、甜味的水醇溶液。糖浆剂是浓的糖例如蔗糖的水溶液，并且还可以包含防腐剂。对于液体剂型，例如，在聚乙二醇中的溶液可以用足量的药学上可接受的液体载体例如水稀释，以精确方便地给药。
其它有用的液体和半固体剂型包括，但不限于包含本发明提供的活性成分和二级化单-或聚-烷撑二醇的那些剂型，所述单-或聚-烷撑二醇包括：1,2-二甲氧基甲烷、二甘醇二甲醚、三甘醇二甲醚、四甘醇二甲醚、聚乙二醇-350-二甲醚、聚乙二醇-550-二甲醚、聚乙二醇-750-二甲醚、其中350、550、750指聚乙二醇的近似平均分子量。这些制剂可以进一步包括一种或多种抗氧剂，比如丁羟甲苯(BHT)、丁羟茴醚(BHA)，没食子酸丙酯、维生素E、氢醌、羟基香豆素、乙醇胺、卵磷脂、脑磷脂、抗坏血酸、苹果酸、山梨醇、磷酸、亚硫酸氢盐、焦亚硫酸钠、硫代二丙酸及其酯和二硫代氨基甲酸酯。
适当时，可以将口服给药的剂量单位制剂微囊包封。也可以将其制备成延长或维持释放的组合物，例如通过将微粒材料包衣或包埋在聚合物、蜡或类似物中。
本发明提供的口服药物组合物还可以以脂质体、胶束、微球或纳米体系的形式提供。胶束剂型可以用U.S.Pat.No.6,350,458描述的方法来制备。
本发明提供的药物组合物可以以非泡腾或泡腾的颗粒剂和粉剂来提供，以重构成液体剂型。在非泡腾颗粒剂或粉剂中使用的药学上可接受的载体和赋形剂可以包括稀释剂、甜味剂和润湿剂。在泡腾颗粒剂或粉剂中使用的药学上可接受的载体和赋形剂可以包括有机酸和二氧化碳源。
在所有上述剂型中可以使用着色剂和调味剂。
本发明所公开的化合物也可以与作为靶向药物载体的可溶性聚合物结合。这样的聚合物包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚或棕榈酰残基取代的聚氧乙烯聚赖氨酸。此外，本发明所公开的化合物可以与在实现药物的控制释放中使用的一类生物可降解的聚合物结合，例如，聚乳酸、聚ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。
本发明提供的药物组合物可以配制成立即或改性释放剂型，包括延迟-、缓释-、脉冲-、控制-、靶向-和程序化释放形式。
本发明提供的药物组合物可以与不会损害预期的治疗作用的其它活性成分共同配制，或者与补充预期的作用的物质共同配制。
本发明提供的药物组合物可以通过注射、输注或植入肠胃外给药，用于局部或全身给药。如本发明使用的肠胃外给药包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内、滑膜内和皮下给药。
本发明提供的药物组合物可以配制成适于肠胃外给药的任何剂型，包括溶液、混悬剂、乳剂、胶束、脂质体、微球、纳米体系和适于在注射前在液体中制成溶液或混悬液的固体形式。这样的剂型可以根据药物科学领域的技术人员已知的常规方法来制备(参见Remington:The Science和Practice of Pharmacy,同上)。
预期用于肠胃外给药的药物组合物可以包括一种或多种药学上可接受的载体和赋形剂，包括，但不限于，含水运载体、水混溶性运载体、非水运载体、抗微生物剂或抗微生物生长的防腐剂、稳定剂、溶解增强剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧剂、局部麻醉剂、助悬剂和分散剂、湿润剂或乳化剂、络合剂、多价螯合剂或螯合剂、防冻剂、冷冻保护剂、增稠剂、pH调节剂和惰性气体。
合适的含水运载体包括，但不限于：水、盐水、生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)、氯化钠注射液、Ringers注射液、等渗葡萄糖注射液、无菌水注射液、葡萄糖和乳酸化的Ringers注射液。非水运载体包括，但不限于，植物来源的非挥发油、蓖麻油、玉米油、棉籽油、橄榄油、花生油、薄荷油、红花油、芝麻油、豆油、氢化植物油、氢化豆油和椰子油的中链甘油三酯、及棕榈种子油。水混溶性运载体包括，但不限于，乙醇、1,3-丁二醇、液体聚乙二醇(例如聚乙二醇300和聚乙二醇400)、丙二醇、甘油、N-甲基-2-吡咯烷酮、N,N-二甲基乙酰胺和二甲亚砜。
合适的抗微生物剂或防腐剂包括，但不限于，苯酚、甲酚、汞剂、苯甲醇、氯代丁醇、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯扎氯铵(例如苄索氯铵)、尼泊金甲酯和尼泊金丙酯及山梨酸。合适的等渗剂包括，但不限于，氯化钠、甘油和葡萄糖。合适的缓冲剂包括，但不限于，磷酸盐和柠檬酸盐。合适的抗氧化剂为如本
发明描述的那些，包括亚硫酸氢盐和偏亚硫酸氢钠。合适的局部麻醉剂包括，但不限于盐酸普鲁卡因。合适的助悬剂和分散剂为如本发明描述的那些，包括羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。合适的乳化剂包括本发明描述的那些，包括聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯。聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80和油酸三乙醇胺酯。合适的多价螯合剂或螯合剂包括，但不限于EDTA。合适的pH调节剂包括，但不限于氢氧化钠、盐酸、柠檬酸和乳酸。合适的络合剂包括，但不限于环糊精，包括α-环糊精、β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺基丁基醚-β-环糊精和磺基丁基醚7-β-环糊精(
CyDex,Lenexa,KS)。
本发明提供的药物组合物可以配制成单剂量或多剂量给药。所述单剂量制剂被包装在安瓿剂、小瓶或注射器中。所述多剂量肠胃外制剂必须包含抑菌或抑真菌浓度的抗微生物剂。所有的肠胃外制剂都必须是无菌的，如本领域已知和实践的。
在一实施方案中，药物组合物以即用型无菌溶液来提供。在另一实施方案中，药物组合物以无菌干燥可溶性产品提供，包括冻干粉末和皮下注射片剂，其在使用前用运载体重构。在又一实施方案中，药物组合物被配制成即用型无菌悬浮液。在又一实施方案中，药物组合物被配制成使用之前用运载体重构的无菌干燥不可溶性产品。还在一实施方案中，药物组合物被配制成即用型无菌乳剂。
药物组合物可以配置成混悬剂、固体、半固体或触变液体，用作植入的贮库给药。在一实施方案中，本发明所公开的药物组合物分散在固体内部基质中，其被不溶于体液但允许药物组合物中的活性成分扩散通过的外部聚合膜所包围。
适合的内部基质包括聚甲基丙烯酸甲酯、聚丁基丙烯酸甲酯、增塑的或未增塑的聚氯乙烯、增塑的尼龙、增塑的聚对苯二甲酸乙二酯、增塑的聚对苯二甲酸乙酯、天然橡胶、聚异戊二烯、聚异丁烯、聚丁二烯、聚乙烯、乙烯-醋酸乙烯酯共聚物、硅酮橡胶、聚二甲硅氧烷、硅酮碳酸酯共聚物、亲水性聚合物比如丙烯酸和甲基丙烯酸的酯的水凝胶、胶原、交联聚乙烯醇及教练的部分水解的聚乙酸乙烯酯。
适合的外部聚合膜包括聚乙烯、聚丙烯、乙烯/丙烯共聚物、乙烯/丙烯酸乙酯共聚物、乙烯/乙烯基乙酸酯共聚物、硅酮橡胶、聚二甲基硅氧烷、氯丁橡胶、氯化聚乙烯、聚氯乙烯、氯化乙烯与乙酸乙烯酯的共聚物、偏二氯乙烯、乙烯和丙烯、离子交联聚合物聚对苯二甲酸乙二酯、丁基橡胶氯醇橡胶、乙烯/乙烯醇共聚物、乙烯/乙酸乙烯酯/乙烯醇三聚物和乙烯/乙烯氧基乙醇共聚物。
另一方面，本发明所公开的药物组合物可以配制成适于对患者吸入给药的任何剂型，例如干粉剂、气雾剂、混悬剂或溶液组合物。在一实施方案中，本发明所公开的药物组合物可以配制成适于用干粉剂对患者吸入给药的剂型。在又一实施方案中，本发明所公开的药物组合物可以配制成适于通过喷雾器对患者吸入给药的剂型。通过吸入递送至肺的干粉组合物通常包含精细粉末状得本发明所公开的化合物和一种或多种精细粉末状的药学上可接受的赋形剂。特别适合用作干粉剂的药学上可接受的赋形剂为本领域技术人员所知晓，其包括乳糖、淀粉、甘露醇、和单-、二-和多糖。精细粉末可通过例如微粉化和研磨制备得到。一般来说，尺寸减小的(如微粉化的)化合物可以通过约1至10微米的D50值(例如，用激光衍射法测量的)来定义。
气雾剂可以通过将本发明所公开的化合物悬浮或溶解在液化推进剂中配制。适合的推进剂包括氯代烃、烃类和其它液化气体。代表性的推进剂包括：三氯氟甲烷(推进剂11)、二氯氟甲烷(推进剂12)、二氯四氟乙烷(推进剂114)、四氟乙烷(HFA-134a)、1,1-二氟乙烷(HFA-152a)、二氟甲烷(HFA-32)、五氟乙烷(HFA-12)、七氟丙烷(HFA-227a)、全氟丙烷、全氟丁烷、全氟戊烷、丁烷、异丁烷和戊烷。包含本发明所公开的化合物的气雾剂通常通过计量剂量吸入器(MDI)对患者给药。这样的装置为本领域技术人员所知晓
气雾剂可包含额外的、可通过MDIs使用的药学上可接受的赋形剂，例如表面活性剂、润滑剂、共溶剂和其它赋形剂，以改善制剂的物理稳定性、改善阀门特性、改善溶解性、或者改善口味。
适合于透皮给药的药物组合物可制备成不连续的贴片剂，意在与患者的表皮保持紧密接触一段延长的时间。例如，可通过离子渗透从贴片剂中递送活性成分，如Pharmaceutical Research,3(6),318(1986)中的一般描述。
适合于局部给药的药物组合物可以被配制成油膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、粉剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。例如，油膏剂、乳膏剂和凝胶剂可以用水或油基质，和适合的增稠剂和/或凝胶剂和/或溶剂来配置。这样的基质可以包括，水，和/或油例如液体液体石蜡和植物油(例如花生油或蓖麻油)，或溶剂例如聚乙二醇。根据基质性质使用的增稠剂和凝胶剂包括软石蜡、硬脂酸铝、鲸蜡硬脂醇、聚乙二醇、羊毛脂、蜂蜡、聚羧乙烯和纤维素衍生物，和/或单硬脂酸甘油脂和/或非离子型乳化剂。
洗剂可以用水或油基质配制，并且通常也含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂或增稠剂。
外用粉剂可以在任意适合的粉基质例如滑石粉、乳糖或淀粉的存在下成型。滴剂可以用包含一种或多种分散剂、增溶剂、助悬剂或防腐剂的水或非水基质配制而成。
局部制剂可以通过在患处每天应用一次或多次来给药；覆盖皮肤的封闭敷料优先被使用。粘附性储库***可实现连续或延长的给药。
本发明化合物和组合物的用途
本发明所公开的化合物或药物组合物可以用于制备用于治疗、预防、改善、控制或减轻哺乳动物，特别是人类的治疗免疫炎性疾病或肿瘤的药品，也可以用于制备拮抗NOD1/2受体的其他药品。
本发明的化合物或药物组合物可以应用于，但绝不限于，使用本发明的化合物或药物组合物的有效量对患者给药来预防、治疗或减轻免疫炎性疾病或肿瘤。所述的免疫炎性疾病或肿瘤，进一步包括但并不限于，类风湿关节炎、干燥综合征、韦格纳肉芽肿病、白塞病、结节病、大动脉炎、反应性关节炎、骨关节炎、艾滋病、过敏性疾病、风湿性关节炎、过敏性哮喘、慢性疲劳、II型糖尿病、枯草热、红瘢狼疮或多发性硬化症、结肠癌、直肠癌、胃癌、胃腺癌、胰腺癌、膀胱癌、胆囊癌、乳腺癌、肾癌、肾细胞癌、肝癌、肝细胞癌、肺癌、皮肤癌、黑色素瘤、甲状腺癌、骨肉瘤、软组织肉瘤、头颈癌、中枢神经***肿瘤、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、卵巢癌、子宫癌、子宫内膜癌、***癌、急性骨髓性白血病或急性淋巴细胞白血病或它们的转移癌、真性红细胞增多症、原发性血应性关节炎、骨关节炎、艾滋病、过敏性疾病、风湿性关节炎、过敏性哮喘、慢性疲劳、II型糖尿病、枯草热、红瘢狼疮或多发性硬化症。
本发明的化合物及药物组合物除了对人类治疗有益以外，还可应用于兽医治疗宠物、引进品种的动物和农场的动物中的哺乳动物。另外一些动物的实例包括马、狗和猫。在此，本发明的化合物包括其药学上可接受的衍生物。
治疗方法
在一实施方案中，本发明公开的治疗方法包括对有需要的患者给予安全有效量的本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物。本发明公开的各实施方案包括通过对有需要的患者给予安全有效量的本发明公开化合物或包含本发明公开化合物的药物组合物，来治疗上面所提到疾病的方法。
在一实施方案中，本发明公开化合物或包含本发明公开化合物的药物组合物可以通过任何适合的给药途径来给药，包括全身给药和局部给药。全身给药包括口服给药、胃肠外给药、透皮给药和直肠给药。典型的胃肠外给药是指通过注射或输注给药，包括静脉内、肌内和皮下注射或输注给药。局部给药包括施用于皮肤以及眼内、耳、***内、吸入和鼻内给药。在一个实施方案中，本发明公开化合物或包含本发明公开化合物的药物组合物可以是口服给药。在另一实施方案中，本发明公开化合物或包含本发明公开化合物的药物组合物可以是吸入给药。还有一实施例中，本发明公开化合物或包含本发明公开化合物可以是经鼻内给药。
在一实施方案中，本发明公开化合物或包含本发明公开化合物的药物组合物可以一次性给药，或者根据给药方案，在指定时间段内，在不同的时间间隔给药若干次。例如，每天给药一次、两次、三次或四次。在一实施方案中，每天给药一次。在又一实施方案中，每天给药两次。可以给药直至达到想要的治疗效果或无限期地维持想要的治疗效果。本发明公开化合物或包含本发明公开化合物的药物组合物的合适给药方案取决于该化合物的药代动力学性质，例如稀释、分布和半衰期，这些可以由技术人员测定。此外，本发明公开化合物或包含本发明公开化合物的药物组合物的合适给药方案，包括实施该方案的持续时间，取决于被治疗的疾病，被治疗疾病的严重程度、被治疗患者的年龄和身体状况、被治疗患者的医疗史、同时疗法的性质、想要的治疗效果等在技术人员知识和经验范围内的因素。这样的技术人员还应该理解，对于个体患者对给药方案的反应，或随着时间推移个体患者需要变化时，可要求调整事宜的给药方案。
本发明公开化合物可以与一种或多种其它治疗剂同时，或在其之前或之后给药。本发明化合物可以与其他治疗剂通过相同或不同给药途径分别给药，或与之以同以药物组合物形式给药。
对于约50-70kg的个体，本发明公开药物组合物和联合物可以是含有约1-1000mg、或约1-500mg、或约1-250mg、或约1-150mg、或约0.5-100mg、或约1-50mg活性成分的单位剂量形式。化合物、药物组合物或其联合物的治疗有效量是取决于个体的物种、体重、年龄及个体情况、被治疗的疾病(disorder)或疾病(disease)或其严重程度。具备常用技能的医师、临床医师或兽医可以容易决定预防、治疗或抑制疾病(disorder)或疾病(disease)发展过程中所需各活性成分的有效量。
以上所引用的剂量特性已在采用有利的哺乳动物(例如小鼠、大鼠、狗、猴)或其离体器官、组织及标本的体外及体内试验中证实。本发明公开化合物以溶液，例如水溶液形式在体外使用，也可以例如悬浮液或水溶液形式在体内的肠内，胃肠外，尤其是静脉内使用。
在一实施方案中，本发明公开化合物的治疗有效剂量为每天约0.1mg至约2,000mg。其药物组合物应当提供约0.1mg至约2,000mg剂量的该化合物。在一特定实施方案中，制备的药物剂量单位形式能提供约1mg至约2,000mg，约10mg至约1,000mg，约20mg至约500mg，或约25mg至约250mg的主要活性成分或每剂量单位形式中各主要成分的组合。在一特定实施方案中，制备的药物剂量单位形式能提供约10mg,20mg,25mg,50mg,100mg,250mg,500mg,1000mg或2000mg主要活性成分。
此外，本发明公开的化合物可以以前药形式给药。在本发明中，本发明公开化合物的“前药”是对患者给药时，最终能在体内释放出本发明公开化合物的功能性衍生物。以前药形式给予本发明公开的化合物时，本领域技术人员可实施下列方式中的一种及以上：(a)变更化合物的体内起效时间；(b)变更化合物的体内作用持续时间；(c)变更化合物的体内输送或分布；(d)变更化合物的体内溶解度；及(e)克服化合物所面临的副作用或其他难点。用于制备前药的典型的功能性衍生物，包含在体内以化学方式或酶的方式裂解的化合物的变体。包含制备磷酸盐、酰胺、酯、硫代酯、碳酸盐及氨基甲酸盐的这些变体对本领域技术人员来讲是众所周知的。
一般合成步骤
为描述本发明，以下列出了实施例。但需要理解，本发明不限于这些实施例，只是提供实践本发明的方法。
一般地，本发明的化合物可以通过本发明所描述的方法制备得到，除非有进一步的说明，其中取代基的定义如式(I)所示。下面的反应方案和实施例用于进一步举例说明本发明的内容。
所属领域的专业人员将认识到：本发明所描述的化学反应可以用来合适地制备许多本发明的其他化合物，且用于制备本发明的化合物的其它方法都被认为是在本发明的范围之内。例如，根据本发明那些非例证的化合物的合成可以成功地被所属领域的技术人员通过修饰方法完成，如适当的保护干扰基团，通过利用其他已知的试剂除了本发明所描述的，或将反应条件做一些常规的修改。另外，本发明所公开的反应或已知的反应条件也公认地适用于本发明其他化合物的制备。
实验所用试剂如无特别说明，均购自北京偶合科技有限公司、北京百灵威科技有限公司、Acros Organics,Alfa Aesar,Sigma-Aldrich和TCI，未经纯化直接使用。实验所用溶剂主要购自北京化工厂和西陇化工股份有限公司，除THF和DMF经美国VAC公司(Vacuumatmospheres company)溶剂纯化***进一步处理外，其余均未经处理直接使用。GF254薄层层析硅胶板，GF254硅胶厚制备板以及柱层析用硅胶粉(60-100目、160-200目、200-300目)均购自青岛海洋化工厂。
HPLC-MS分析仪：HPLC分析仪为Agilent 1100HPLC***，Agilent G1312A泵，Agilent G1314A紫外检测器，Agilent G1313A自动进样器，Agilent G1316A柱温箱和分流阀。色谱柱为Kromasil C18分析柱(4.6μm,4.6mm×50mm)，购自DIKMA公司。流动相为含有0.05％HCOOH的乙腈和水。线性梯度洗脱5:95(v:v)acetonitrile-H2O到95:5(v:v)acetonitrile-H2O，时间5minutes，流速1mL/min。UV检测波长254nm。ThermoFinnigan LCQ-Advantage质谱仪，洗脱液中的5％分流进入质谱仪，采用正离子或者负离子扫描方式，电喷雾离子源(ESI)。主要用于反应监测和化合物纯度的初步测定。
UPLC-MS分析仪：Waters公司的Acquity UPLC-MS***，包括二元溶剂管理器、样品管理器、色谱柱管理器、PDA检测器以及SQ质谱检测器。色谱柱为Waters公司的Acquity
BEH C18柱(1.7μm,2.1mm×50mm)。流动相为含有0.05％HCOOH的乙腈和水。线性梯度洗脱5:95(v:v)acetonitrile-H2O到95:5(v:v)acetonitrile-H2O，时间3minutes，流速0.3mL/min。UV检测波长254nm。SQ质谱检测仪采用正离子或者负离子扫描方式，电喷雾离子源(ESI)。主要用于反应监测和化合物纯度的初步测定。
HPLC分析仪：Agilent 1260HPLC***，Agilent G1311C四元泵，Agilent G4212B紫外检测器，Agilent G1367E高性能自动进样器，Agilent G1316A柱温箱。手性分析柱：DAICEL CHIRALPAK AD-H,250×4.6mm,5μM(日本大赛璐公司DAICEL生产)。流动相为正己烷/异丙醇，等度洗脱。UV检测波长254nm。主要用于目标化合物的光学纯度分析。
高分辨质谱仪：Agilent LC/MSD TOF***。色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18(Rapid resolution,3.5μm,2.1×30mm)。流动相：MeOH:H2O＝75:25(v:v)，含有5mmol/L甲酸，等度洗脱。时间5min，流速0.40mL/min。质谱检测采用正离子扫描方式，电喷雾离子源(ESI)。主要用于测定目标化合物的准确分子量。
核磁共振仪：Varian Mercury 300MHz,400MHz,500MHz,600MHz and BrukerAvance 400MHz，溶剂为CDCl3,DMSO-d6,acetone-d6or methanol-d4。
熔点仪：Yanaco微量熔点仪，OptiMelt熔点仪，均未校正。
制备本发明公开化合物的典型合成步骤如下面的合成方案所示。除非另外说明，各R1、R2、R3、R4、R5、X1、X2、X3、X4和Y具有如本发明所述的定义。
合成方案1
化合物(6)可以按照上图中的合成方案1制备得到：化合物(1)与浓硫酸和硝酸钾在加热条件下反应得到中间体(2)；中间体(2)与取代的苯酚在加热条件下反应得到中间体(3)；在N,N-二异丙基碳二亚胺作用下，中间体(3)发生缩合反应，得到中间体(4)；中间体(4)在冰醋酸、铁粉作用下环化得到中间体(5)；NaH作用下，中间体(5)中的氨基被R3取代，得到化合物(6)。
下面参考具体实施例，对本发明的化合物进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。
实施例1
(R)-甲基3-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-8-(2-((3-氟苄基)氧杂)乙酰氨基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(1)的合成
步骤(a)：合成5-氯-2,4-二硝基苯甲酸(1-a)
室温搅拌下，将3-氯苯甲酸(10.0 g,63.9mmol)溶于120 mL浓硫酸，15 min内分批加入硝酸钾(16.5 g,163.2 mmol)。反应液依次在80℃反应30 min，110℃反应2 h，120℃反应2 h。将反应液倒入660 g冰水中，过滤，所得白色固体用乙醇和水的混合溶剂重结晶，得淡黄色晶体(1-a)8.08 g，收率51.3％。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ14.21(brs,1H),8.85(s,1H),8.28(s,1H).13C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ163.78,147.95,145.70,132.86,132.06,130.52,122.05.
步骤(b)：合成5-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,4-二硝基苯甲酸(1-b)
把化合物1-a(4.877 g,19.78 mmol)，加入36 mL水中，加入碳酸氢钠(3.556 g,42.33 mmol,2.14eq),加入3,5-二甲基苯酚(2.872g,20.97mmol,1.06eq)，加热至110℃，回流反应2h，至原料消失。冷却，冰水浴，调PH至3-4，过滤，抽干，干燥得到化合物1-b，收率60％。
步骤(c)：合成(R)-二甲基2-(5-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,4-二硝基苯甲酰氨基)戊烷二酸酯(1-c)
把化合物1-b(4.546g,13.1mmol)，D-谷氨酸二甲酯盐酸盐(2.909g,13.75mmol，1.05e q)，N,N-二异丙基碳二亚胺DIC(3.06mL，19.65mmol，1.5eq)依次加入120mL THF中，室温搅拌反应4h，过滤，蒸干，加入二氯甲烷，水洗，饱和食盐水洗，干燥，过滤蒸干，柱层析得到化合物1-c，收率70-85％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.15(d,J＝7.7Hz,1H),8.85(s,1H),7.32-7.28(m,1H),6.96(s,1H),6.69(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),6.57-6.56(m,1H),6.47(dd,J＝7.9,2.0Hz,1H),4.43(td,J＝8.8,5.3Hz,1H),3.58(d,J＝8.1Hz,6H),2.92(s,6H),2.41–2.37(m,2H),2.05(td,J＝13.3,7.7Hz,1H),1.85(dt,J＝14.3,8.3Hz,1H)。
步骤(d)：合成(R)-甲基3-(8-氨基-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-yl)丙酸甲酯(1-d)
把化合物1-c(25 0mg,0.464mmol)加入10mL冰醋酸中，加入铁粉(520mg,9.38mmol,20eq)，加热至90℃，反应1.5-2.5h，用LC-MS检测至目标产物为主点(约75％)。冷却，加入20mL DCM，过硅藻土，滤液蒸干，柱层析得到化合物1-d，收率30-40％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),8.05(d,J＝5.2Hz,1H),7.15-7.11(m,1H),7.00(s,1H),6.48(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),6.39(s,1H),6.39-6.37(m,1H),6.18(dd,J＝7.9,2.0Hz,1H),5.70(s,2H),3.69-3.64(m,1H),3.56(s,3H),2.88(s,6H),2.44–2.39(m,2H),2.04–1.97(m,1H),1.80(dt,J＝14.2,7.3Hz,1H)。
步骤(e)：合成2-((3-氟代苄基)氧)乙酸(1-e)
氩气保护下，冰水浴，钠氢(880mg，60％，22mmol)加入30mL THF中，冰水浴下，滴加化合物间氟苄醇(10mmol,1eq),冰水浴搅拌1h。滴加2-溴乙酸(1.11g,8mmol,0.8eq)/20mLTHF溶液，滴毕，自然升至室温搅拌过夜。甲醇，水淬灭反应，甲基叔丁基醚萃取杂质，水相用6N HCl调PH至2-3，乙酸乙酯萃取，干燥过滤蒸干，得到化合物1-e，收率71.3％。
步骤(f)：合成标题化合物1
化合物1-e(0.2mmol,2eq)溶于4mL二氯甲烷中，冰水浴下，滴加草酰氯(0.4mmol，4eq)，6μL DMF，转至室温反应1h，原料消失(加入甲醇中检测)，蒸干溶剂，溶于1mL THF中，得到中间体的THF溶液，100％直接用于投下一步反应。将上述所得THF溶液与59(0.1mmol)、三乙胺(0.5mmol,5eq)混合于2mL THF中，反应1h。硅胶柱层析，得到化合物1，收率64.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),9.40(s,1H),8.45(d,J＝5.3Hz,1H),8.16(s,1H),7.34–7.28(m,1H),7.23–7.09(m,5H),6.57(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),6.43(s,1H),6.28(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),4.62(s,2H),4.27–4.18(m,2H),3.75-3.70(m,1H),3.57(s,3H),2.89(s,6H),2.45-2.38(m,2H),2.04(dt,J＝14.5,6.8Hz,1H),1.82(td,J＝14.7,7.8Hz,1H)。
实施例2
(R)-甲基3-(8-(2-((3-溴苄基)氧杂)乙酰氨基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(2)的合成
步骤(a)：合成2-((3-溴代苄基)氧)乙酸(2-a)
依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将间溴苄醇和2-溴乙酸反应，得2-a。
步骤(b)：合成标题化合物2
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与2-a制备，得到化合物2，收率69％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),9.40(s,1H),8.44(d,J＝5.3Hz,1H),8.15(s,1H),7.56(s,1H),7.48(d,J＝7.9Hz,1H),7.33(d,J＝7.6Hz,1H),7.22(m,2H),7.14(s,1H),6.57(d,J＝8.4Hz,1H),6.43(s,1H),6.29(d,J＝9.7Hz,1H),4.60(s,2H),4.27–4.18(m,2H),3.72–3.69(m,1H),3.57(s,3H),2.89(s,6H),2.45–2.36(m,2H),2.04(dt,J＝14.6,6.9Hz,1H),1.82(dt,J＝12.2,6.2Hz,1H)。
实施例3
(R)-甲基3-(8-(2-((4-溴代苄基)氧杂)乙酰氨基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(3)的合成
步骤(a)：合成2-((3-溴代苄基)氧)乙酸(3-a)
依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将对溴苄醇和2-溴乙酸反应，得3-a。
步骤(b)：合成标题化合物3
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与3-a制备，得到化合物3，收率64％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.44(s,1H),9.38(s,1H),8.45(d,J＝5.3Hz,1H),8.17(s,1H),7.42(d,J＝8.3Hz,2H),7.27(d,J＝8.3Hz,2H),7.22(t,J＝8.2Hz,1H),7.16(s,1H),6.59(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),6.43(t,J＝2.0Hz,1H),6.27(dd,J＝7.9,1.8Hz,1H),4.57(s,2H),4.26–4.17(m,2H),3.72–3.69(m,1H),3.57(s,3H),2.90(s,6H),2.45–2.378(m,2H),2.09–2.00(m,1H),1.82(td,J＝14.7,7.9Hz,1H)。
实施例4
(R)-甲基3-(8-(2-((4-对氯苄醇)氧杂)乙酰氨基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(4)的合成
步骤(a)：合成2-((4-氯代苄基)氧)乙酸(4-a)
依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将对氯苄醇和2-溴乙酸反应，得4-a。
步骤(b)：合成标题化合物4
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采1-d与4-a制备，得到化合物4，收率52.7％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.44(s,1H),9.38(s,1H),8.45(d,J＝5.3Hz,1H),8.17(s,1H),7.34(d,J＝8.4Hz,2H),7.29(d,J＝8.5Hz,2H),7.22(t,J＝8.2Hz,1H),7.15(s,1H),6.59(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H),6.43(s,1H),6.27(dd,J＝7.9,1.6Hz,1H),4.59(s,2H),4.26–4.17(m,2H),3.72–3.69(m,1H),3.53(s,3H),2.90(s,6H),2.45–2.40(m,2H),2.04(dt,J＝20.8,7.1Hz,1H),1.82(td,J＝14.6,7.6Hz,1H)。
实施例5
(R)-甲基3-(8-(2-(苄氧基)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(5)的合成
步骤(a)：合成2-(苄氧基)乙酸(5-a)
依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将苄醇和2-溴乙酸反应，得5-a。
步骤(b)：合成标题化合物5
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与5-a制备，得到化合物5，收率28.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),9.40(s,1H),8.45(d,J＝5.2Hz,1H),8.18(s,1H),7.33–7.20(m,6H),7.15(s,1H),6.59(dd,J＝8.3,1.7Hz,1H),6.45(s,1H),6.30(dd,J＝7.8,1.3Hz,1H),4.60(s,2H),4.25–4.16(m,2H),3.75-3.71(m,1H),3.57(s,3H),2.90(s,6H),2.45-2.40(m,2H),2.04(td,J＝14.2,6.9Hz,1H),1.83(td,J＝14.6,7.7Hz,1H)。
实施例6
(R)-3-(8-(2-(苯氧基)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)-N,N-二乙基丙酰胺(6)的合成
将化合物5(1mmol)溶于6mL THF和3mL H2O混合溶液中，加入LiOH(3mmol,3eq)室温反应0.5h，反应完全，将反应液蒸干，加水稀释，使用1M盐酸调pH至酸性，析出固体，过滤，干燥，得中间产物，产率82％。将上述中间产物(0.5mmol)、DIC(1mmol,2eq)、HoSu(1mmol,2eq)溶于THF溶液中，室温搅拌过夜，加入二乙胺(1.5mmol,3eq)反应0.5h，蒸干溶剂，柱层析分离，得到化合物6，收率12％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),9.39(s,1H),8.44(d,J＝5.3Hz,1H),8.17(s,1H),7.33–7.20(m,6H),7.14(s,1H),6.59(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),6.45-6.44(m,1H),6.29(dd,J＝7.9,1.8Hz,1H),4.60(s,2H),4.25–4.16(m,2H),3.75-3.70(m,1H),3.26–3.17(m,4H),2.90(s,6H),2.41-2.37(m,2H),2.05–1.97(m,1H),1.80(td,J＝14.9,7.7Hz,1H),1.06(t,J＝7.0Hz,3H),0.96(t,J＝7.0Hz,3H)。
实施例7
(R)-2-(苄氧基)-N-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-3-(3-氧-3-(哌啶-1-基)丙基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)乙酰胺(7)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用5与哌啶制备，得到化合物7，收率46％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),9.40(s,1H),8.43(d,J＝5.0Hz,1H),8.17(s,1H),7.34–7.20(m,6H),7.13(s,1H),6.59(d,J＝8.2Hz,1H),6.45(s,1H),6.30(d,J＝7.8Hz,1H),4.60(s,2H),4.20(d,J＝2.2Hz,2H),3.72–3.69(m,1H),3.36(s,4H),2.90(s,6H),2.39(t,J＝7.1Hz,2H),2.01–1.98(m,1H),1.82–1.77(m,1H),1.53(s,2H),1.44(s,2H),1.37(s,2H)。
实施例8
(R)-甲基3-(8-(2-(苄氧基)乙酰胺基)-7-(2-氯代-5-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(8)的合成
步骤(a)：合成2-氯代-5-(二甲氨基)苯酚(8-a)
把3,5-二甲基苯酚(2g，0.014577mol)溶于氢氧化钠(1.447g，0.03617mol)的水溶液(15mL)中，冰水浴，滴加次氯酸钠(12.5mL,0.0146mol)，加毕0℃反应1h，用6M盐酸调PH至7，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，干燥，过滤蒸干，柱层析得195mg化合物8-a。
步骤(b)：合成5-(2-氯代-5-(二甲氨基)苯氧基)-2,4-二硝基苯甲酸(8-b)
依照实施例1中所述化合物1-b的合成方法，将化合物1-a与8-a反应，得到化合物8-b，收率51％。
步骤(c)：合成(R)-二甲基2-(5-(2-氯代-5-(二甲氨基)苯氧基)-2,4-二硝基苯甲酰氨基)戊烷二酸酯(8-c)
依照实施例1中所述化合物1-c的合成方法，将化合物8-b与D-谷氨酸二甲酯盐酸盐反应，得到化合物8-c，收率90％。
步骤(d)：合成(R)-甲基3-(8-氨基-7-(2-氯代-5-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-yl)丙酸甲酯(8-d)
依照实施例1中所述化合物1-d的合成方法，将化合物8-c与铁粉反应，得到化合物8-d，收率29％。
步骤(e)：合成标题化合物8
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用8-d与5-a制备，得到化合物8，收率34％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.41(s,1H),9.50(s,1H),8.45(d,J＝5.3Hz,1H),8.19(s,1H),7.40-7.37(m,3H),7.27-7.22(m,3H),6.91(s,1H),6.68(dd,J＝9.0,2.9Hz,1H),6.62(d,J＝2.8Hz,1H),4.66(s,2H),4.30–4.21(m,2H),3.72-3.67(m,1H),3.56(s,3H),2.91(s,6H),2.44–2.40(m,2H),2.03(dt,J＝14.6,6.5Hz,1H),1.81(td,J＝14.6,7.6Hz,1H)。
实施例9
(R)-3-(8-(2-(苄氧基)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)-N-十八烷基丙酰胺(9)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用5与十八烷氨制备，得到化合物9，收率56％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),9.38(s,1H),8.43(d,J＝5.3Hz,1H),8.19(s,1H),7.75(t,J＝5.5Hz,1H),7.32(dd,J＝7.0,2.3Hz,2H),7.28-7.20(m,4H),7.15(s,1H),6.59(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),6.44-6.43(m,1H),6.29(dd,J＝7.9,1.8Hz,1H),4.60(s,2H),4.24–4.15(m,2H),3.67-3.62(m,1H),2.98-2.93(m,2H),2.90(s,6H),2.20-2.16(m,2H),2.00(td,J＝13.6,7.0Hz,1H),1.79(td,J＝13.9,6.9Hz,1H),1.28–1.17(m,32H),0.85(t,J＝6.8Hz,3H)。
实施例10
(R)-3-(8-(2-(苄氧基)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)-N-十二烷基丙酰胺(10)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用5与十二烷氨制备，得到化合物10，收率83％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.39(s,1H),9.37(s,1H),8.42(d,J＝5.3Hz,1H),8.18(s,1H),7.75(t,J＝5.5Hz,1H),7.31(dd,J＝7.0,2.2Hz,2H),7.26–7.19(m,4H),7.14(s,1H),6.58(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),6.43-6.42(m,1H),6.28(dd,J＝7.9,1.8Hz,1H),4.59(s,2H),4.24–4.14(m,2H),3.66-3.61(m,1H),2.98-2.93(m,2H),2.89(s,6H),2.19-2.16(m,2H),1.99(td,J＝14.3,7.5Hz,1H),1.78(td,J＝14.5,7.4Hz,1H),1.31-1.16(m,20H),0.84(t,J＝6.7Hz,3H)。
实施例11
(R)-3-(8-(2-(苄氧基)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)-N-十六烷基丙酰胺(11)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用5与十六烷氨制备，得到化合物11，收率61％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.39(s,1H),9.37(s,1H),8.42(d,J＝5.3Hz,1H),8.18(s,1H),7.75(t,J＝5.5Hz,1H),7.31(dd,J＝6.9,2.2Hz,2H),7.28–7.17(m,4H),7.14(s,1H),6.58(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H),6.43(m,1H),6.28(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),4.59(s,2H),4.26–4.12(m,2H),3.64(m,1H),2.95(m,2H),2.89(s,6H),2.17(m,2H),2.06–1.93(m,1H),1.78(td,J＝14.2,7.0Hz,1H),1.23(m,28H),0.85(t,J＝6.7Hz,3H)。
实施例12
(R)-3-(8-(2-(苄氧基)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)-N,N-二甲基丙酰胺(12)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用5与二甲胺制备，得到化合物12，收率64％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.39(s,1H),9.38(s,1H),8.42(d,J＝5.2Hz,1H),8.16(s,1H),7.32(dd,J＝6.9,2.4Hz,2H),7.27–7.20(m,4H),7.13(s,1H),6.58(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),6.45-6.44(m,1H),6.29(dd,J＝7.9,1.8Hz,1H),4.59(s,2H),4.24–4.15(m,2H),3.75-3.70(m,1H),2.91(s,3H),2.89(s,6H),2.77(s,3H),2.40-2.37(m,2H),2.04–1.95(m,1H),1.79(td,J＝14.6,7.3Hz,1H)。
实施例13
(R)-3-(8-(2-(苄氧基)乙酰氨基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)-N-丙酸丙酰胺(13)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用5与正丙胺制备，得到化合物13，收率70％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.39(s,1H),9.38(s,1H),8.43(d,J＝5.1Hz,1H),8.17(s,1H),7.77(t,J＝4.7Hz,1H),7.32–7.19(m,6H),7.13(s,1H),6.59–6.57(m,1H),6.44(s,1H),6.28(d,J＝7.8Hz,1H),4.59(s,2H),4.24–4.15(m,2H),3.68-3.63(m,1H),2.96–2.93(m,2H),2.89(s,6H),2.19(t,J＝6.6Hz,2H),2.04–1.97(m,1H),1.78(dt,J＝21.2,7.3Hz,1H),1.31(dt,J＝14.0,7.0Hz,2H),0.75(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例14
(R)-甲基3-(8-(2-((2-氯代苄基)氧杂)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(14)的合成
步骤(a)：合成2-((2-苄氯)氧)乙酸(14-a)
依照实施例1中所述化合1-e的合成方法，将临氯苄醇和2-溴乙酸反应，得14-a。
步骤(b)：合成标题化合物14
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与14-a制备，制备得到化合物14，收率86％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.41(s,1H),9.39(s,1H),8.43(d,J＝5.2Hz,1H),8.16(s,1H),7.48(d,J＝7.3Hz,1H),7.42(d,J＝7.8Hz,1H),7.34-7.30(m,1H),7.23–7.18(m,2H),7.13(s,1H),6.56(dd,J＝8.2,1.3Hz,1H),6.41(s,1H),6.27(d,J＝7.9Hz,1H),4.69(s,2H),4.32–4.24(m,2H),3.74-3.70(m,1H),3.56(s,3H),2.88(s,6H),2.44-2.33(m,2H),2.02(dt,J＝14.8,7.4Hz,1H),1.81(td,J＝14.8,7.6Hz,1H)。
实施例15
(R)-甲基3-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-8-(2-((4-氟代苄基)氧杂)乙酰胺基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(15)的合成
步骤(a)：合成2-((4-苄氟)氧)乙酸(15-a)
依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将对氟苄醇和2-溴乙酸反应，得15-a。
步骤(b)：合成标题化合物15
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与15-a制备，得到化合物15，收率68％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),9.36(s,1H),8.43(d,J＝5.4Hz,1H),8.16(s,1H),7.38-7.34(m,2H),7.23-7.19(m,1H),7.14(s,1H),7.08-7.03(m,2H),6.58(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),6.43-6.42(m,1H),6.27(dd,J＝7.9,1.9Hz,1H),4.57(s,2H),4.23-4.15(m,2H),3.74-3.70(m,1H),3.56(s,3H),2.89(s,6H),2.44–2.39(m,2H),2.06-2.00(m,1H),1.82(td,J＝14.6,7.9Hz,1H)。
实施例16
(R)-甲基3-(8-(2-((3-氯代苄基)氧杂)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(16)的合成
步骤(a)：合成2-((3-苄氯)氧)乙酸(16-a)
依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将间氯苄醇和2-溴乙酸反应，得16-a。
步骤(b)：合成标题化合物16
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与16-a制备，得到化合物16，收率56％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),9.40(s,1H),8.44(d,J＝5.3Hz,1H),8.15(s,1H),7.42(s,1H),7.36-7.32(m,1H),7.30–7.29(m,2H),7.23-7.18(m,1H),7.14(s,1H),6.57(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),6.43-6.42(m,1H),6.29(dd,J＝7.9,1.9Hz,1H),4.61(s,2H),4.27–4.18(m,2H),3.75-3.70(m,1H),3.57(s,3H),2.89(s,6H),2.45–2.40(m,2H),2.07–2.00(m,1H),1.82(td,J＝14.7,7.9Hz,1H)。
实施例17
(R)-甲基3-(8-(2-((2-氯代-4-氟代苄基)氧杂)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(17)的合成
步骤(a)：合成2-((2-氯代-4-氟代苄基)氧)乙酸(17-a)
依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将2-氯代-4-氟代苄醇和2-溴乙酸反应，得17-a。
步骤(b)：合成标题化合物17
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与17-a制备，得到化合物17，收率50％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.41(s,1H),9.36(s,1H),8.43(d,J＝5.4Hz,1H),8.15(s,1H),7.54-7.50(m,1H),7.42-7.39(m,1H),7.21-7.17(m,1H),7.13(s,1H),7.10-7.05(m,1H),6.56(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),6.40-6.39(m,1H),6.25(dd,J＝7.9,1.8Hz,1H),4.65(s,2H),4.31–4.22(m,2H),3.74-3.69(m,1H),3.56(s,3H),2.88(s,6H),2.44–2.39(m,2H),2.08–1.97(m,1H),1.81(td,J＝14.7,8.0Hz,1H)。
实施例18
(R)-甲基3-(8-(2-((3,4-二氟苄基)氧杂)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(18)的合成
步骤(a)：合成2-((3,4-氟代苄基)氧)乙酸(18-a)
依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将临氯苄醇和2-溴乙酸反应，得18-a。
步骤(b)：合成标题化合物18
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与18-a制备，得到化合物18，收率76％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),9.37(s,1H),8.44(d,J＝5.2Hz,1H),8.14(s,1H),7.42–7.37(m,1H),7.33-7.26(m,1H),7.21–7.17(m,2H),7.13(s,1H),6.56(dd,J＝8.3,1.8Hz,1H),6.40(s,1H),6.26(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),4.57(s,2H),4.25–4.17(m,2H),3.74-3.69(m,1H),3.56(s,3H),2.88(s,6H),2.44-2.37(m,2H),2.03(dt,J＝14.3,6.9Hz,1H),1.81(td,J＝14.4,7.5Hz,1H)。
实施例19
(R)-3-(8-(2-(苄氧基)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)-N-叔丁基丙酰胺(19)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用5与叔丁胺制备，得到化合物19，收率20％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.38(s,1H),9.37(s,1H),8.38(d,J＝5.2Hz,1H),8.17(s,1H),7.36(s,1H),7.32–7.25(m,5H),7.20(t,J＝8.2Hz,1H),7.13(s,1H),6.59–6.57(m,1H),6.43(s,1H),6.26(dd,J＝7.8,1.3Hz,1H),4.59(s,2H),4.23–4.15(m,2H),3.68-3.63(m,1H),2.89(s,6H),2.15-2.11(m,2H),1.96(dt,J＝13.1,8.7Hz,1H),1.75(dt,J＝20.2,6.5Hz,1H),1.17(s,9H)。
实施例20
(R)-甲基3-(8-(2-(苄氧基)乙酰胺基)-7-(2-氯代-3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(20)的合成
步骤(a)：合成2-氯代-3-(二甲氨基)苯酚(20-a)
把3,5-二甲基苯酚(2g，0.014577mol)溶于氢氧化钠(1.447g，0.03617mol)的水溶液(15mL)中，冰水浴，滴加次氯酸钠(12.5mL,0.0146mol)，加毕0℃反应1h，用6M盐酸调PH至7，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，干燥，过滤蒸干，柱层析得102mg化合物20-a。
步骤(b)：合成5-(2-氯代-3-(二甲氨基)苯氧基)-2,4-二硝基苯甲酸(20-b)
依照实施例1中所述化合物1-b的合成方法，将化合物1-a与20-a反应，得到化合物20-b，收率55％。
步骤(c)：合成(R)-二甲基2-(5-(2-氯代-3-(二甲氨基)苯氧基)-2,4-二硝基苯甲酰氨基)戊烷二酸酯(20-c)
依照实施例1中所述化合物1-c的合成方法，将化合物20-b与D-谷氨酸二甲酯盐酸盐反应，得到化合物20-c，收率95％。
步骤(d)：合成(R)-甲基3-(8-氨基-7-(2-氯代-3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(20-d)
依照实施例1中所述化合物1-d的合成方法，将化合物20-c与铁粉反应，得到化合物20-d，收率32％。
步骤(e)：合成标题化合物20
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用20-d与5-a制备，得到化合物20，收率34％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),9.46(s,1H),8.44(d,J＝5.1Hz,1H),8.20(s,1H),7.34(dd,J＝14.6,7.0Hz,3H),7.25–7.19(m,3H),7.09(d,J＝8.1Hz,1H),6.96(s,1H),6.89(d,J＝8.0Hz,1H),4.63(s,2H),4.27–4.19(m,2H),3.74-3.69(m,1H),3.56(s,3H),2.78(s,6H),2.413-2.40(m,2H),2.03(td,J＝14.2,6.7Hz,1H),1.81(td,J＝14.8,7.7Hz,1H)。
实施例21
(R)-甲基3-(8-(2-(苄氧基)乙酰胺基)-7-(4-氯代-3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(21)的合成
步骤(a)：合成4-氯代-3-(二甲氨基)苯酚(21-a)
把3,5-二甲基苯酚(2g，0.014577mol)溶于氢氧化钠(1.447g，0.03617mol)的水溶液(15mL)中，冰水浴，滴加次氯酸钠(12.5mL,0.0146mol)，加毕0℃反应1h，用6M盐酸调PH至中性，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，干燥，过滤蒸干，柱层析得21-a(195mg)。
步骤(b)：合成5-(4-氯代-3-(二甲氨基)苯氧基)-2,4-二硝基苯甲酸(21-b)
依照实施例1中所述化合物1-b的合成方法，将化合物1-a与21-a反应，得到化合物21-b，收率51％。
步骤(c)：合成(R)-二甲基2-(5-(4-氯代-3-(二甲氨基)苯氧基)-2,4-二硝基苯甲酰氨基)戊烷二酸酯(21-c)
依照实施例1中所述化合物1-c的合成方法，将化合物21-b与D-谷氨酸二甲酯盐酸盐反应，得到化合物21-c，收率90％。
步骤(d)：合成(R)-甲基3-(8-氨基-7-(4-氯代-3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(21-d)
依照实施例1中所述化合物1-d的合成方法，将化合物21-c与铁粉反应，得到化合物21-d，收率29％。
步骤(e)：合成标题化合物21
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用21-d与5-a制备，得到化合物21，收率61％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.46(s,1H),9.37(s,1H),8.45(d,J＝5.2Hz,1H),8.14(s,1H),7.40(d,J＝8.7Hz,1H),7.31-7.26(m,5H),7.20(s,1H),6.87(d,J＝2.6Hz,1H),6.61(dd,J＝8.7,2.6Hz,1H),4.57(s,2H),4.22–4.14(m,2H),3.76-3.71(m,1H),3.56(s,3H),2.71(s,6H),2.42(dd,J＝11.5,6.9Hz,2H),2.04(td,J＝14.3,6.9Hz,1H),1.83(td,J＝14.8,7.8Hz,1H).
实施例22
(R)-甲基3-(8-(2-(苄氧基)乙酰胺基)-7-(3-氯代-5-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(22)的合成
步骤(a)：合成2-氨基-3-氯代-5-硝基苯酚(22-a)
把2-氨基-5-硝基苯酚(12g,0.0779mol)溶于430mL乙腈中，搅拌溶解，加入NCS(10.8g,0.081mol)，加热至80℃反应2h，蒸干溶剂，柱层析得到化合物22-a(10.3g)，收率70％。
步骤(b)：合成3-氯代-5-硝基苯酚(22-b)
把化合物22-a(11g，0.05836mol)加入187mL乙醇中，加入浓硫酸(5.4mL，98％，0.0986mol)，加热至回流30min，分批加入亚硝酸钠固体，用时30min，加毕，回流反应1h，无原料后，蒸干溶剂，加入水和乙酸乙酯，分液，水洗，碳酸氢钠溶液洗，饱和食盐水洗，干燥过滤蒸干，柱层析得到化合物22-b(6.3g)，收率59.5％。
步骤(c)：合成3-氨基-5-氯酚(22-c)
把化合物22-b(2g，0.01153mol)溶于35mL乙醇和35mL乙酸中，加热至85℃，分批加入铁粉(6.4g,0.1153mol)，反应2h至无原料，过滤，蒸干，加入水，碳酸氢钠调PH至8-9，二氯甲烷萃取，干燥过滤蒸干，柱层析得到化合物22-c(1.15g)，产率59％。
步骤(d)：合成3-氯代-5-(二甲氨基)苯酚(22-d)
把化合物22-c(1.435g,10mmol)加入6mL DMF中，加热至80℃，滴加硫酸二甲酯(2.4mL，25mmol)，滴毕，反应1h，TLC无原料，反应液加入30mL水中，碳酸氢钠溶液调PH至7-8，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，干燥过滤蒸干，柱层析得到化合物22-d(0.412g)，收率24％。
步骤(e)：合成5-(3-氯代-5-(二甲氨基)苯氧基)-2,4-二硝基苯甲酸(22-e)
依照实施例1中所述化合物1-b的合成方法，将化合物1-a与22-d反应，得到化合物22-e，收率85％。
步骤(f)：合成(R)-二甲基2-(5-(3-氯代-5-(二甲氨基)苯氧基)-2,4-二硝基苯甲酰氨基)戊烷二酸酯(22-f)
依照实施例1中所述化合物1-c的合成方法，将化合物22-e与D-谷氨酸二甲酯盐酸盐反应，得到化合物22-f，收率100％。
步骤(g)：合成(R)-甲基3-(8-氨基-7-(3-氯代-5-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(22-g)
依照实施例1中所述化合物1-d的合成方法，将化合物22-f与铁粉反应，得到化合物22-g，收率32％。
步骤(h)：合成标题化合物22
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用22-g与5-a制备，收率68％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.45(s,1H),9.35(s,1H),8.45(d,J＝5.2Hz,1H),8.14(s,1H),7.30-7.28(m,5H),7.20(s,1H),6.55(s,1H),6.36(s,1H),6.28(s,1H),4.58(s,2H),4.23–4.14(m,2H),3.77-3.72(m,1H),3.56(s,3H),2.89(s,6H),2.45–2.41(m,2H),2.04(td,J＝14.5,7.2Hz,1H),1.83(td,J＝14.8,7.7Hz,1H)。
实施例23
(R)-甲基3-(8-(2-(苄氧基)乙酰胺基)-2,5-二氧-7-(2,4,5-三氯代-3-(二甲氨基)苯氧基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(23)的合成
步骤(a)：合成2,4,5-三氯-3-(二甲氨基)苯酚(23-a)
把化合物22-d(400mg,2.33mmol)加入12mL乙腈中，加入NCS(311mg,2.33mmol)，室温反应3h，转加热反应30min，补加NCS(31mg,0.233mol)，至无原料，蒸干溶剂，柱层析，得到化合物23-a(63mg)。
步骤(b)：合成2,4-二硝基-5-(2,4,5-三氯-3-(二甲氨基)苯氧基)苯甲酸(23-b)
依照实施例1中所述化合物1-b的合成方法，将化合物1-a与23-a反应，得到化合物23-b，收率64％。
步骤(c)：合成(R)-二甲基2-(2,4-二硝基-5-(2,4,5-三氯-3-(二甲氨基)苯氧基)苯甲酰氨基)戊烷二酸酯(23-c)
依照实施例1中所述化合物1-c的合成方法，将化合物23-b与D-谷氨酸二甲酯盐酸盐反应，得到化合物23-c，收率91％。
步骤(d)：合成(R)-甲基3-(8-氨基-2,5-二氧-7-(2,4,5-三氯-3-(二甲氨基)苯氧基)-2,3,4,5--四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(23-d)
依照实施例1中所述化合物1-d的合成方法，将化合物23-c与铁粉反应，得到化合物23-d，收率26％。
步骤(e)：合成标题化合物23
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用23-d与5-a制备，收率38％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.48(s,1H),9.42(s,1H),8.48(d,J＝4.8Hz,1H),8.13(s,1H),7.33–7.25(m,6H),7.12(s,1H),4.61(s,2H),4.25–4.16(m,2H),3.77-3.72(m,1H),3.56(s,3H),2.87(s,6H),2.42(s,2H),2.07-2.01(m,1H),1.85-1.80(m,1H)。
实施例24
(R)-甲基3-(8-(2-(苄氧基)乙酰胺基)-7-(2,3-二氯代-5-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(24)的合成
步骤(a)：合成2,3-二氯-5-(二甲氨基)苯酚(24-a)
把化合物22-d(400mg,2.33mmol)加入12mL乙腈中，加入NCS(311mg,2.33mmol)，室温反应3h，转加热反应30min，补加NCS(31mg,0.233mol)，至无原料，蒸干溶剂，柱层析，得到化合物24-a(98mg)。
步骤(b)：合成5-(2,3-二氯-5-(二甲氨基)苯氧基)-2,4-二硝基苯甲酸(24-b)
依照实施例1中所述化合物1-b的合成方法，将化合物1-a与24-a反应，得到化合物24-b，收率77％。
步骤(c)：合成(R)-二甲基2-(5-(2,3-二氯-5-(二甲氨基)苯氧基)-2,4-二硝基苯甲酰氨基)戊烷二酸酯(24-c)
依照实施例1中所述化合物1-c的合成方法，将化合物24-b与D-谷氨酸二甲酯盐酸盐反应，得到化合物24-c，收率98％。
步骤(d)：合成(R)-甲基3-(8-氨基-7-(2,3-二氯-5-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5--四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(24-d)
依照实施例1中所述化合物1-d的合成方法，将化合物24-c与铁粉反应，得到化合物24-d，收率25％。
步骤(e)：合成标题化合物24
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用24-d与5-a制备，收率24％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),9.46(s,1H),8.45(d,J＝4.7Hz,1H),8.17(s,1H),7.36-7.34(m,2H),7.25-7.24(m,3H),6.95(s,1H),6.85(s,1H),6.58(s,1H),4.64(s,2H),4.28–4.19(m,2H),3.72-3.67(m,1H),3.56(s,3H),2.91(s,6H),2.45-2.37(m,2H),2.06-2.00(m,1H),1.86–1.79(m,1H)。
实施例25
(R)-甲基3-(8-(2-(苄氧基)乙酰胺基)-2,5-二氧-7-(2,3,4-三氯代-5-(二甲氨基)苯氧基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(25)的合成
步骤(a)：合成2,3,4-三氯-5-(二甲氨基)苯酚(25-a)
把化合物22-d(400mg,2.33mmol)加入12mL乙腈中，加入NCS(311mg,2.33mmol)，室温反应3h，转加热反应30min，补加NCS(31mg,0.233mol)，至无原料，蒸干溶剂，柱层析，得到化合物25-a(63mg)。
步骤(b)：合成2,4-二硝基-5-(2,3,4-三氯-5-(二甲氨基)苯氧基)苯甲酸(25-b)
依照实施例1中所述化合物1-b的合成方法，将化合物1-a与25-a反应，得到化合物25-b，收率88％。
步骤(c)：合成(R)-二甲基2-(2,4-二硝基-5-(2,3,4-三氯-5-(二甲氨基)苯氧基)苯甲酰氨基)戊烷二酸酯(25-c)
依照实施例1中所述化合物1-c的合成方法，将化合物25-b与D-谷氨酸二甲酯盐酸盐反应，得到化合物25-c，收率84％。
步骤(d)：合成(R)-甲基3-(8-氨基-2,5-二氧-7-(2,3,4-三氯-5-(二甲氨基)苯氧基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(25-d)
依照实施例1中所述化合物1-d的合成方法，将化合物25-c与铁粉反应，得到化合物25-d，收率26％。
步骤(e)：合成标题化合物25
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用25-d与5-a制备，收率36％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.47(s,1H),9.46(s,1H),8.46(d,J＝5.5Hz,1H),8.14(s,1H),7.33–7.31(m,2H),7.25-7.23(m,3H),7.02(d,J＝11.0Hz,2H),4.62(s,2H),4.26-4.18(m,2H),3.73-3.69(m,1H),3.56(s,3H),2.74(s,6H),2.41(dd,J＝11.0,7.3Hz,2H),2.03(dt,J＝14.2,6.7Hz,1H),1.82(td,J＝14.6,7.8Hz,1H)。
实施例26
(R)-3-(8-(2-(苄氧基)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)-N-环丙烷基丙酰胺(26)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用5与环丙胺制备，得到化合物26，收率64％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.38(s,1H),9.37(s,1H),8.39(d,J＝5.2Hz,1H),8.16(s,1H),7.85(d,J＝3.6Hz,1H),7.32–7.25(m,5H),7.23-7.19(m,1H),7.13(s,1H),6.58(dd,J＝8.6,1.5Hz,1H),6.44(s,1H),6.30–6.28(m,1H),4.59(s,2H),4.23–4.15(m,2H),3.68-3.63(m,1H),2.89(s,6H),2.57–2.53(m,1H),2.15-2.12(m,2H),1.98(dt,J＝13.9,7.0Hz,1H),1.76(td,J＝14.6,7.6Hz,1H),0.57-0.51(m,2H),0.33-0.26(m,2H)。
实施例27
(R)-2-(苄氧基)-N-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-3-(3-氧-3-(吡咯烷-1-基)丙基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)乙酰胺(27)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用5与四氢吡咯制备，得到化合物27，收率95％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.38(s,1H),9.38(s,1H),8.43(d,J＝5.0Hz,1H),8.16(s,1H),7.33–7.26(m,5H),7.24-7.19(m,1H),7.13(s,1H),6.58(d,J＝8.3Hz,1H),6.44(s,1H),6.29(d,J＝7.9Hz,1H),4.60(s,2H),4.24–4.15(m,2H),3.76-3.72(m,1H),3.34(s,2H),3.23(t,J＝6.7Hz,2H),2.89(s,6H),2.36-2.33(m,2H),2.01(td,J＝13.6,6.8Hz,1H),1.85–1.78(m,3H),1.76-1.69(m,2H)。
实施例28
(R)-2-((4-氯代苄基)氧杂)-N-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-3-(3-氧-3-(哌啶-1-基)丙基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)乙酰胺(28)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用4与哌啶制备，得到化合物28，收率93％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.38(s,1H),9.36(s,1H),8.41(d,J＝5.1Hz,1H),8.15(s,1H),7.33(d,J＝8.1Hz,2H),7.28(d,J＝8.2Hz,2H),7.23-7.18(m,1H),7.14(s,1H),6.58(d,J＝8.3Hz,1H),6.42(s,1H),6.26(d,J＝7.9Hz,1H),4.58(s,2H),4.25–4.16(m,2H),3.74-3.69(m,1H),3.36-3.34(m,4H),2.89(s,6H),2.41-2.37(m,2H),2.04–1.95(m,1H),1.79(td,J＝14.5,7.4Hz,1H),1.54-1.53(m,2H),1.43-1.36(m,4H)。
实施例29
(R)-甲基3-(7-(2-氯代-3-(二甲氨基)苯氧基)-8-(2-((4-氯代苄基)氧杂)乙酰胺基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(29)的合成
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用4-a与20-d制备，收率75％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),9.44(s,1H),8.43(d,J＝5.1Hz,1H),8.18(s,1H),7.36-7.34(m,3H),7.24(d,J＝8.0Hz,2H),7.09(d,J＝8.1Hz,1H),6.97(s,1H),6.87(d,J＝8.0Hz,1H),4.62(s,2H),4.28–4.20(m,2H),3.73-3.69(m,1H),3.56(s,3H),2.77(s,6H),2.41-2.39(m,2H),2.02(dt,J＝14.2,7.1Hz,1H),1.81(td,J＝14.7,7.7Hz,1H)。
实施例30
(R)-甲基3-(7-(4-氯代-3-(二甲氨基)苯氧基)-8-(2-((4-氯代苄基)氧杂)乙酰胺基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(30)的合成
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用4-a与21-d制备，得到化合物30，收率73％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.45(s,1H),9.36(s,1H),8.44(d,J＝5.1Hz,1H),8.13(s,1H),7.39(d,J＝8.7Hz,1H),7.34–7.29(m,4H),7.20(s,1H),6.86(s,1H),6.59(dd,J＝8.2,1.2Hz,1H),4.57(s,2H),4.23–4.15(m,2H),3.76-3.71(m,1H),3.56(s,3H),2.72(s,6H),2.44-2.42(m,2H),2.08–2.00(m,1H),1.87-1.78(m,1H)。
实施例31
(R)-3-(8-(2-(苄氧基)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)-N,N-二丁基丙酰胺(31)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用5与二正丁胺制备，得到化合物31，收率53％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.41(s,1H),9.39(s,1H),8.44(d,J＝5.3Hz,1H),8.17(s,1H),7.33–7.25(m,5H),7.24-7.19(m,1H),7.12(s,1H),6.58(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),6.44-6.43(m,1H),6.28(dd,J＝7.9,1.9Hz,1H),4.59(s,2H),4.24–4.15(m,2H),3.70-3.66(m,1H),3.23–3.10(m,4H),2.89(s,6H),2.46-2.31(m,2H),2.05–1.96(m,1H),1.79(td,J＝13.9,7.3Hz,1H),1.46–1.39(m,2H),1.38-1.30(m,2H),1.25-1.22(m,2H),1.18–1.13(m,2H),0.86(t,J＝7.3Hz,3H),0.81(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例32
(R)-甲基3-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-8-(2-((4-(三氟甲基)苄基)氧杂)乙酰胺基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(32)的合成
步骤(a)：合成2-((4-(三氟甲基)苄基)氧)乙酸(32-a)
依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将对三氟甲基苄醇和2-溴乙酸反应，得32-a，收率55％。
步骤(b)：合成标题化合物32
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与32-a制备，得到化合物32，收率66％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),9.41(s,1H),8.44(d,J＝5.0Hz,1H),8.16(s,1H),7.57(d,J＝8.1Hz,2H),7.52(d,J＝8.0Hz,2H),7.22-7.18(m,1H),7.16(s,1H),6.58–6.56(m,1H),6.43(s,1H),6.27–6.25(m,1H),4.70(s,2H),4.30–4.21(m,2H),3.75-3.70(m,1H),3.56(s,3H),2.87(s,6H),2.44-2.40(m,2H),2.03(td,J＝14.5,7.3Hz,1H),1.82(td,J＝14.7,7.7Hz,1H)。
实施例33
(R)-甲基3-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-8-(2-((4-甲氧基苄基)氧杂)乙酰胺基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(33)
步骤(a)：合成2-((4-(甲氧基)苄基)氧)乙酸(33-a)
依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将对甲氧基苄醇和2-溴乙酸反应，得33-a，收率46％。
步骤(b)：合成标题化合物33
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与33-a制备，得到化合物33，收率59％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),9.35(s,1H),8.43(d,J＝5.4Hz,1H),8.17(s,1H),7.25–7.20(m,3H),7.14(s,1H),6.77(d,J＝8.6Hz,2H),6.59(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),6.45-6.44(m,1H),6.29(dd,J＝7.9,1.9Hz,1H),4.51(s,2H),4.19–4.11(m,2H),3.74–3.71(m,1H),3.70(s,3H),3.56(s,3H),2.89(s,6H),2.44-2.37(m,2H),2.03(dt,J＝14.2,6.4Hz,1H),1.81(td,J＝14.6,7.8Hz,1H)。
实施例34
(R)-甲基3-(8-(2-((4-氰基苄基)氧杂)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(34)的合成
步骤(a)：合成2-((4-(氰基)苄基)氧)乙酸(34-a)
将对氰基苯甲醛(2.62g,20mmol)加入EtOH中，冰水浴，分批加入NaBH4(0.912g,24mmol)，室温反应1h，待反应完全，后处理，柱层析，得中间体2.57g，依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将上述中间体和2-溴乙酸反应，得34-a，收率47％。
步骤(b)：合成标题化合物34
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与34-a制备，得到化合物34，收率59％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.43(s,1H),9.40(s,1H),8.44(d,J＝5.4Hz,1H),8.14(s,1H),7.69(d,J＝8.2Hz,2H),7.49(d,J＝8.2Hz,2H),7.22-7.18(m,1H),7.14(s,1H),6.57(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),6.40-6.39(m,1H),6.25(dd,J＝7.9,1.9Hz,1H),4.69(s,2H),4.30–4.21(m,2H),3.74-3.70(m,1H),3.56(s,3H),2.88(s,6H),2.44–2.39(m,2H),2.03(dt,J＝15.2,7.0Hz,1H),1.82(td,J＝14.6,8.0Hz,1H)。
实施例35
(R)-甲基3-(8-(2-((4-氯代苄基)氧杂)乙酰胺基)-2,5-二氧-7-(3-(吡咯烷-1-基)苯氧基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(35)的合成
步骤(a)：合成3-(吡咯烷-1-基)苯酚(35-a)
把间羟基苯胺(1.09g，10mmol)加入1,4-二溴丁烷(2.4mL，20mmol)中，加热至130℃，反应12h，待原料反应完全，停止反应，冷却，加入乙酸乙酯，水，分液，1M HCl洗乙酸乙酯相，合并水相，氢氧化钠调PH至6-7，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，干燥，过滤蒸干，柱层析得到化合物35-a(0.737g)，收率45％。
步骤(b)：合成2,4-二硝基-5-(3-(吡咯烷-1-基)苯氧基)苯甲酸(35-b)
依照实施例1中所述化合物1-b的合成方法，将化合物1-a与35-a反应，得到化合物35-b，收率87％。
步骤(c)：合成(R)-二甲基2-(2,4-二硝基-5-(3-(吡咯烷-1-基)苯氧基)苯甲酰氨基)戊烷二酸酯(35-c)
依照实施例1中所述化合物1-c的合成方法，将化合物35-b与D-谷氨酸二甲酯盐酸盐反应，得到化合物35-c，收率72％。
步骤(d)：合成(R)-甲基3-(8-氨基-2,5-二氧-7-(3-(吡咯烷-1-基)苯氧基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(35-d)
依照实施例1中所述化合物1-d的合成方法，将化合物35-c与铁粉反应，得到化合物35-d，收率33％。
步骤(e)：合成标题化合物35
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用35-d与4-a制备，收率65％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6))δ10.44(s,1H),9.37(s,1H),8.45(d,J＝5.4Hz,1H),8.17(s,1H),7.31(q,J＝8.6Hz,4H),7.21–7.17(m,2H),6.41(dd,J＝8.3,1.6Hz,1H),6.23–6.20(m,2H),4.59(s,2H),4.26–4.18(m,2H),3.72–3.69(m,1H),3.57(s,3H),3.19(t,J＝6.3Hz,4H),2.45–2.40(m,2H),2.09–2.00(m,1H),1.95(t,J＝6.4Hz,4H),1.82(dt,J＝14.4,7.8Hz,1H)。
实施例36
(R)-3-(8-(2-((4-氯代苄基)氧杂)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)-N-丙基丙酰胺(36)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用4与正丙胺制备，得到化合物36，收率44％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),9.36(s,1H),8.43(d,J＝5.3Hz,1H),8.15(s,1H),7.77(t,J＝5.6Hz,1H),7.33(d,J＝8.5Hz,2H),7.28(d,J＝8.5Hz,2H),7.23-7.19(m,1H),7.13(s,1H),6.58(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),6.43-6.42(m,1H),6.25(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),4.58(s,2H),4.25–4.16(m,2H),3.68-3.63(m,1H),2.96–2.91(m,2H),2.90(m,6H),2.20-2.17(m,2H),2.00(dt,J＝13.4,6.8Hz,1H),1.78(td,J＝14.3,7.0Hz,1H),1.36–1.27(m,2H),0.75(t,J＝7.4Hz,3H)。
实施例37
(R)-3-(8-(2-((4-溴代苄基)氧杂)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)-N-丙基丙酰胺(37)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用3与正丙胺制备，得到化合物37，收率54％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),9.36(s,1H),8.43(d,J＝5.3Hz,1H),8.16(s,1H),7.77(t,J＝5.5Hz,1H),7.41(d,J＝8.3Hz,2H),7.26(d,J＝8.3Hz,2H),7.23-7.18(m,1H),7.13(s,1H),6.58(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),6.42(s,1H),6.25(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),4.57(s,2H),4.25–4.16(m,2H),3.68-3.63(m,1H),2.96–2.92(m,2H),2.90(s,6H),2.20-2.17(m,2H),1.99(td,J＝13.8,7.2Hz,1H),1.78(td,J＝14.0,6.6Hz,1H),1.36–1.27(m,2H),0.75(t,J＝7.4Hz,3H)。
实施例38
(R)-3-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-8-(2-((4-氟代苄基)氧杂)乙酰胺基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)-N-丙基丙酰胺(38)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用15与正丙胺制备，得到化合物38，收率49％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),9.36(s,1H),8.43(d,J＝5.2Hz,1H),8.15(s,1H),7.77(t,J＝5.5Hz,1H),7.37-7.34(m,2H),7.23-7.19(m,1H),7.12(s,1H),7.08-7.03(m,2H),6.58(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),6.43-6.42(m,1H),6.26(dd,J＝7.9,2.0Hz,1H),4.57(s,2H),4.23–4.15(m,2H),3.68-3.63(m,1H),2.96-2.91(m,2H),2.89(s,6H),2.20-2.16(m,2H),1.99(td,J＝13.7,6.6Hz,1H),1.78(td,J＝14.9,7.6Hz,1H),1.36-1.27(m,2H),0.75(t,J＝7.4Hz,3H)。
实施例39
(R)-2-(苄氧基)-N-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-3-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-丙酰)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)乙酰胺(39)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用5与N-甲基哌嗪制备，得到化合物39，收率42％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),9.39(s,1H),8.43-8.42(m,1H),8.16(s,1H),7.33–7.20(m,6H),7.12(s,1H),6.58(d,J＝9.2Hz,1H),6.44(s,1H),6.29(d,J＝7.9Hz,1H),4.59(s,2H),4.24–4.15(m,2H),3.73-3.68(m,1H),3.38(d,J＝0.8Hz,4H),2.89(s,6H),2.41-2.38(m,2H),2.23–2.14(m,7H),2.01–1.96(m,1H),1.82–1.75(m,1H)。
实施例40
(R)-2-(苄氧基)-N-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-3-(3-氧-3-(哌嗪-1-基)丙基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)乙酰胺(40)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用5与哌嗪制备，得到化合物40，收率35％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.39(s,1H),9.39(s,1H),8.42(d,J＝4.2Hz,1H),8.16(s,1H),7.31-7.13(m,6H),7.13(s,1H),6.58(dd,J＝7.6,1.5Hz,1H),6.44(s,1H),6.30–6.28(m,1H),4.59(s,2H),4.24–4.15(m,2H),3.72-3.70(m,1H),3.43-3.38(m,4H),2.89(s,6H),2.62-2.58(m,4H),2.40–2.36(m,2H),2.02-1.97(m,2H),1.82–1.76(m,1H)。
实施例41
(R)-甲基3-(8-(2-((2,4-二氯代苄基)氧杂)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(41)的合成
步骤(a)：合成2-((2,4-二氯苄基)氧)乙酸(41-a)
依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将2,4-二氯苄醇和2-溴乙酸反应，得41-a，产率85％。
步骤(b)：合成标题化合物41
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与41-a制备，得到化合物41，收率53％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),9.38(s,1H),8.44(d,J＝5.6Hz,1H),8.15(s,1H),7.58(s,1H),7.48(d,J＝8.7Hz,1H),7.26(d,J＝7.4Hz,1H),7.21-7.17(m,1H),7.13(s,1H),6.56(dd,J＝8.0,0.8Hz,1H),6.40(d,J＝0.7Hz,1H),6.24(dd,J＝7.2,0.8Hz,1H),4.66(s,2H),4.28(s,2H),3.74-3.69(m,1H),3.56(s,3H),2.88(s,6H),2.43–2.40(m,2H),2.05–1.99(m,1H),1.84–1.7(m,1H)。
实施例42
(R)-甲基3-(8-(2-((3,4-二氯代苄基)氧杂)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(42)的合成
步骤(a)：合成2-((3,4-二氯苄基)氧)乙酸(42-a)
依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将3,4-二氯苄醇和2-溴乙酸反应，得42-a，产率68％。
步骤(b)：合成标题化合物42
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与42-a制备，收率95％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),9.39(s,1H),8.44(d,J＝4.4Hz,1H),8.14(s,1H),7.60(s,1H),7.49(d,J＝8.3Hz,1H),7.31(dd,J＝8.3,1.1Hz,1H),7.22-7.17(m,1H),7.13(s,1H),6.56(dd,J＝8.3,1.8Hz,1H),6.41-6.40(m,1H),6.26(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),4.60(s,2H),4.27–4.19(m,2H),3.76-3.69(m,1H),3.56(s,3H),2.88(s,6H),2.44–2.40(m,2H),2.06–1.99(m,1H),1.84-1.79(m,1H)。
实施例43
(R)-甲基3-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-8-(2-(噻吩-3-甲氧基)乙酰胺基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(43)的合成
步骤(a)：合成2-(噻吩-3-甲氧基)乙酸(43-a)
依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将3-甲醇噻吩和2-溴乙酸反应，得43-a，产率62％。
步骤(b)：合成标题化合物43
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与43-a制备，得到化合物43，收率63％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),9.33(s,1H),8.44(d,J＝5.3Hz,1H),8.16(s,1H),7.46(dd,J＝4.9,2.9Hz,1H),7.40-7.39(m,1H),7.23-7.19(m,1H),7.14(s,1H),7.06(dd,J＝4.9,1.0Hz,1H),6.58(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),6.46-6.45(m,1H),6.28(dd,J＝7.9,2.0Hz,1H),4.59(s,2H),4.21-4.13(m,2H),3.75-3.70(m,1H),3.56(s,3H),2.91(s,6H),2.44–2.40(m,2H),2.03(dt,J＝15.0,6.7Hz,1H),1.82(td,J＝14.5,8.0Hz,1H)。
实施例44
(R)-甲基3-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-8-(2-(呋喃-3-甲氧基)乙酰胺基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(44)的合成
步骤(a)：合成2-(呋喃-3-甲氧基)乙酸(111)
依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将3-甲醇呋喃和2-溴乙酸反应，得44-a，产率73％。
步骤(b)：合成标题化合物44
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与44-a制备，得到化合物44，收率63％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.41(s,1H),9.28(s,1H),8.43(d,J＝5.3Hz,1H),8.15(s,1H),7.64-7.59(m,2H),7.23-7.19(m,1H),7.12(s,1H),6.58(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),6.45-6.44(m,2H),6.28(dd,J＝7.9,1.9Hz,1H),4.46(s,2H),4.18–4.10(m,2H),3.74-3.69(m,1H),3.56(s,3H),2.90(s,6H),2.44–2.39(m,2H),2.03(td,J＝14.6,6.7Hz,1H),1.81(td,J＝15.0,8.0Hz,1H)。
实施例45
(S)-甲基3-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-8-(2-((4-(三氟甲基)苄基)氧杂)乙酰胺基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(45)的合成
步骤(a)：合成(S)-二甲基2-(5-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,4-二硝基苯甲酰氨基)戊烷二酸酯(45-a)
依照实施例1中所述化合物1-c的合成方法，将化合物1-b与L-谷氨酸二甲酯盐酸盐反应，得到化合物45-a，收率55％。
步骤(b)：合成(S)-甲基3-(8-氨基-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(45-b)
依照实施例1中所述化合物1-d的合成方法，将化合物45-a与铁粉反应，得到化合物45-b，收率30％。
步骤(c)：合成标题化合物45
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用45-b与32-a制备，收率65％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.44(s,1H),9.42(s,1H),8.45(d,J＝4.7Hz,1H),8.16(s,1H),7.57(d,J＝8.2Hz,2H),7.52(d,J＝7.9Hz,2H),7.22-7.18(m,1H),7.15(s,1H),6.57(dd,J＝8.1,1.1Hz,1H),6.44(s,1H),6.27–6.26(m,1H),4.70(s,2H),4.30–4.22(m,2H),3.75-3.70(m,1H),3.56(s,3H),2.88(s,6H),2.44-2.40(m,2H),2.03(td,J＝14.7,7.6Hz,1H),1.86–1.79(m,1H)。
实施例46
(S)-3-(8-(2-(苄氧基)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)-N-丙基丙酰胺(46)的合成
步骤(a)：(S)-甲基3-(8-(2-(苄氧基)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(46-a)
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用45-b与5-a制备，得化合物46-a，收率100％。
步骤(b)：合成标题化合物46
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用46-a与正丙胺制备，得到化合物46，收率75％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),9.38(s,1H),8.43(d,J＝4.9Hz,1H),8.17(s,1H),7.77(t,J＝4.9Hz,1H),7.33–7.26(m,5H),7.23-7.19(m,1H),7.12(s,1H),6.58(d,J＝8.2Hz,1H),6.44(s,1H),6.28(d,J＝7.9Hz,1H),4.59(s,2H),4.24–4.15(m,2H),3.68-3.63(m,1H),2.96-2.91(m,2H),2.89(s,6H),2.20-2.17(m,2H),2.02-1.97(m,1H),1.78(td,J＝14.4,7.5Hz,1H),1.34-1.29(m,2H),0.75(t,J＝7.4Hz,3H)。
实施例47
(S)-甲基3-(8-(2-((2-氯代-4-氟代苄基)氧杂)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(47)的合成
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用45-b与17-a制备，得到化合物47，收率31％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),9.37(s,1H),8.44(d,J＝4.2Hz,1H),8.15(s,1H),7.54-7.50(m,1H),7.42-7.40(m,1H),7.21-7.17(m,1H),7.13(s,1H),7.10-7.06(m,1H),6.56(d,J＝7.9Hz,1H),6.39(s,1H),6.25(d,J＝7.6Hz,1H),4.65(s,2H),4.31–4.22(m,2H),3.74-3.69(m,1H),3.56(s,3H),2.88(s,6H),2.46–2.37(m,2H),2.03(td,J＝13.2,6.5Hz,1H),1.86–1.77(m,1H)。
实施例48
(R)-甲基3-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-8-(2-(萘乙酰胺-2-甲氧基)乙酰胺基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(48)的合成
步骤(a)：合成2-(萘乙酰胺-2-甲氧基)乙酸(48-a)
依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将萘甲醇和2-溴乙酸反应，得48-a，收率71％。
步骤(b)：合成标题化合物48
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与48-a制备，得到化合物48，收率47％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),9.45(s,1H),8.43(d,J＝5.2Hz,1H),8.18(s,1H),7.87–7.79(m,3H),7.69-7.67(m,1H),7.51–7.45(m,3H),7.23-7.19(m,1H),7.13(s,1H),6.59(d,J＝8.5Hz,1H),6.44(s,1H),6.31(d,J＝8.0Hz,1H),4.78(s,2H),4.31–4.23(m,2H),3.74-3.69(m,1H),3.56(s,3H),2.85(s,6H),2.44–2.39(m,2H),2.03(dt,J＝14.8,6.8Hz,1H),1.81(dt,J＝15.1,7.3Hz,1H)。
实施例49
(R)-甲基3-(2,5-二氧-7-苯氧基-8-(2-((4-(三氟甲基)苄基)氧杂)乙酰胺基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(49)的合成
步骤(a)：合成2,4-二硝基-5-苯氧基苯甲酸(49-a)
依照实施例1中所述化合物1-b的合成方法，将化合物1-a与苯酚反应，得到化合物49-a，收率100％。
步骤(b)：合成(R)-二甲基2-(2,4-二硝基-5-苯氧基苯甲酰氨基)戊烷二酸酯(49-b)
依照实施例1中所述化合物1-c的合成方法，将化合物49-a与D-谷氨酸二甲酯盐酸盐反应，得到化合物49-b，收率100％。
步骤(c)：合成(R)-甲基3-(8-氨基-2,5-二氧-7-苯氧基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(49-c)
依照实施例1中所述化合物1-d的合成方法，将化合物49-b与铁粉反应，得到化合物49-c，收率18％。
步骤(d)：合成标题化合物49
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用49-c与32-a制备，收率46％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.46(s,1H),9.44(s,1H),8.46(d,J＝4.9Hz,1H),8.16(s,1H),7.60(d,J＝7.9Hz,2H),7.52(d,J＝7.9Hz,2H),7.44-7.40(m,2H),7.23-7.20(m,1H),7.14(s,1H),7.08-7.06(m,2H),4.68(s,2H),4.29–4.20(m,2H),3.76-3.71(m,1H),3.56(s,3H),2.44-2.40(m,2H),2.05–1.97(m,1H),1.82(td,J＝14.2,7.2Hz,1H)。
实施例50
(R)-甲基3-(8-(2-((4-(叔丁基)苄基)氧杂)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(50)的合成
步骤(a)：合成2-((4-(叔丁基)苄基)氧)乙酸(50-a)
依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将对叔丁基苄醇和2-溴乙酸反应，得50-a，收率64％。
步骤(b)：合成标题化合物50
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与50-a制备，得到化合物50，收率49％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.44(s,1H),9.41(s,1H),8.45(d,J＝5.2Hz,1H),8.18(s,1H),7.25-7.18(m,5H),7.13(s,1H),6.60(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),6.48(s,1H),6.31(dd,J＝8.0,1.1Hz,1H),4.55(s,2H),4.23–4.15(m,2H),3.74-3.69(m,1H),3.56(s,3H),2.90(s,6H),2.44–2.39(m,2H),2.05–1.98(m,1H),1.82(dt,J＝14.4,7.2Hz,1H),1.20(s,9H)。
实施例51
(R)-3-(8-(2-(苯氧基)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)-N-丙酸丁酰胺(51)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用5与正丁胺制备，得到化合物51，收率37％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.41(s,1H),9.39(s,1H),8.44(d,J＝4.7Hz,1H),8.18(s,1H),7.77(t,J＝4.8Hz,1H),7.32–7.20(m,6H),7.14(s,1H),6.59(d,J＝7.9Hz,1H),6.44(s,1H),6.29(d,J＝7.4Hz,1H),4.60(s,2H),4.25–4.16(m,2H),3.67–3.63(m,1H),2.98(m,2H),2.90(s,6H),2.18(t,J＝6.2Hz,2H),2.00(dd,J＝13.1,6.7Hz,1H),1.79(dd,J＝13.8,6.9Hz,1H),1.31–1.24(m,2H),1.20-1.15(m,2H),0.79(t,J＝7.1Hz,3H)。
实施例52
(R)-甲基3-(8-(2-((4-氯代苄基)氧杂)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-1-甲基-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(52)的合成
取化合物3(100mg,0.168mmol)溶于DMF，加入K2CO3(45mg,0.326mmol)和碘甲烷(10μL,0.168mmol)，室温搅拌过夜，待原料消失，蒸干溶剂，柱层析，得化合物52，收率37％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.48(s,1H),8.57(d,J＝5.5Hz,1H),8.31(s,1H),7.35(d,J＝7.9Hz,2H),7.29(d,J＝8.4Hz,2H),7.25-7.21(m,1H),7.05(s,1H),6.60(dd,J＝7.8,1.2Hz,1H),6.45(s,1H),6.31(dd,J＝7.5,0.7Hz,1H),4.60(s,2H),4.22(s,2H),3.80-3.75(m,1H),3.55(s,3H),3.28(s,3H),2.90(s,6H),2.41-2.36(m,2H),2.06–1.98(m,1H),1.89–1.82(m,1H)。
实施例53
(R)-甲基3-(8-(2-(烯丙氧基)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(53)的制备
步骤(a)：合成2-(烯丙氧基)乙酸(53-a)
依照实施例1中所述化合物1-e的合成方法，将烯丙醇和2-溴乙酸反应，得53-a。
步骤(b)：合成标题化合物53
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与53-a制备，得到化合物53，收率78％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),9.28(s,1H),8.43(d,J＝5.0Hz,1H),8.16(s,1H),7.22-7.18(m,1H),7.13(s,1H),6.57(d,J＝8.3Hz,1H),6.44(s,1H),6.27(d,J＝7.7Hz,1H),5.86(ddd,J＝22.0,10.4,5.2Hz,1H),5.26(d,J＝17.2Hz,1H),5.14(d,J＝10.4Hz,1H),4.13(d,J＝1.6Hz,2H),4.05(d,J＝4.9Hz,2H),3.74-3.70(m,1H),3.56(s,3H),2.90(s,6H),2.44-2.37(m,2H),2.03(dt,J＝14.7,7.6Hz,1H),1.81(td,J＝14.7,7.7Hz,1H)。
实施例54
(R)-甲基3-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-8-(4-苯基丁烷氨)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(54)的合成
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与苯丁酸制备，得到化合物54，收率83％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.33(s,1H),9.64(s,1H),8.40(d,J＝5.0Hz,1H),7.99(s,1H),7.29-7.25(m,2H),7.21-7.17(m,4H),7.09(s,1H),6.54(d,J＝8.2Hz,1H),6.42(s,1H),6.27(d,J＝7.7Hz,1H),3.73-3.68(m,1H),3.56(s,3H),2.88(s,6H),2.57(t,J＝7.6Hz,2H),2.46–2.43(m,4H),2.05-2.00(m,1H),1.87-1.80(m,3H)。
实施例55
(R,E)-甲基3-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-8-(3-(4-(三氟甲基)苯基)丙烯酰胺)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(55)的合成
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与对三氟甲基肉桂酸制备，得到化合物55，收率37.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),9.99(s,1H),8.42(d,J＝4.8Hz,1H),8.25(s,1H),7.86-7.80(m,4H),7.69(d,J＝15.7Hz,1H),7.45(d,J＝15.7Hz,1H),7.23(t,J＝8.2Hz,1H),7.08(s,1H),6.59(d,J＝8.7Hz,1H),6.50(s,1H),6.35(d,J＝8.0Hz,1H),3.75-3.71(m,1H),3.56(s,3H),2.91(s,6H),2.44-2.42(m,2H),2.08–1.9(m,1H),1.82(dt,J＝21.6,7.4Hz,1H)。
实施例56
3-((R)-8-(2-(苯氧基)乙酰胺基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)-N-(2-羟丙基)丙酰胺(56)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用5与2-羟基丙胺制备，得到化合物56，收率99％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),9.38(s,1H),8.43(d,J＝4.9Hz,1H),8.17(s,1H),7.76(t,J＝5.5Hz,1H),7.32(d,J＝7.0Hz,2H),7.27-7.20(m,4H),7.13(s,1H),6.58(d,J＝8.0Hz,1H),6.44(s,1H),6.29(d,J＝7.9Hz,1H),4.60(s,2H),4.24–4.16(m,2H),3.67(dd,J＝12.6,5.9Hz,1H),3.60–3.53(m,1H),2.93(d,J＝6.4Hz,2H),2.89(s,6H),2.21(t,J＝6.9Hz,2H),1.99(dd,J＝13.1,6.2Hz,1H),1.78(td,J＝14.4,6.9Hz,1H),0.93(d,J＝5.8Hz,3H)。
实施例57
(R)-N-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-3-(3-氧-3-(哌啶-1-基)丙基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)-2-((4-(三氟甲基)苄基)氧杂)乙酰胺(57)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用32与哌啶制备，得到化合物57，收率76％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.41(s,1H),9.42(s,1H),8.43(d,J＝4.9Hz,1H),8.16(s,1H),7.57(d,J＝8.0Hz,2H),7.52(d,J＝8.0Hz,2H),7.20(t,J＝8.2Hz,1H),7.14(s,1H),6.57(d,J＝8.6Hz,1H),6.44(s,1H),6.26(d,J＝8.0Hz,1H),4.70(s,2H),4.30–4.22(m,2H),3.71(dd,J＝12.4,6.4Hz,1H),3.35(s,4H),2.88(s,6H),2.39(t,J＝7.2Hz,2H),2.04–1.95(m,1H),1.83–1.75(m,1H),1.53(d,J＝4.8Hz,2H),1.43(s,2H),1.36(s,2H)。
实施例58
(R,E)-甲基3-(8-(3-(4-氯-2-氟苯基)丙烯酰胺)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(58)的合成
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与4-氯-2-氟肉桂酸制备，得到化合物58，收率44％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.41(s,1H),10.04(s,1H),8.42(d,J＝5.0Hz,1H),8.22(s,1H),7.74(t,J＝8.2Hz,1H),7.59(dd,J＝20.5,13.3Hz,2H),7.41–7.37(m,2H),7.22(t,J＝8.1Hz,1H),7.08(s,1H),6.58(d,J＝8.1Hz,1H),6.48(s,1H),6.34(d,J＝8.0Hz,1H),3.73(dd,J＝12.4,6.5Hz,1H),3.56(s,3H),2.91(s,6H),2.42(s,2H),2.08–1.96(m,1H),1.81(td,J＝15.2,8.0Hz,1H)。
实施例59
(R,E)-甲基3-(8-(丁基-2-烯酰胺)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(59)的合成
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与巴豆酸制备，得到化合物59，收率61％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),9.67(s,1H),8.40(d,J＝5.2Hz,1H),8.09(s,1H),7.20(t,J＝8.2Hz,1H),7.07(s,1H),6.88–6.79(m,1H),6.55(d,J＝8.4Hz,1H),6.46(d,J＝15.7Hz,2H),6.29(d,J＝7.0Hz,1H),3.73-3.69(m,1H),3.55(s,3H),2.89(s,6H),2.40(dd,J＝11.2,6.2Hz,2H),2.01(tt,J＝13.5,6.7Hz,2H),1.84(d,J＝6.9Hz,3H).
实施例60
(R)-甲基3-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-8-(3-甲基-2-烯丁烯酰胺)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(60)的合成
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用1-d与3-甲基-2-丁烯酸制备，得到化合物60，收率48％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.29(s,1H),9.45(s,1H),8.35(d,J＝4.8Hz,1H),8.10(s,1H),7.21-7.18(m,1H),7.07(s,1H),6.55(d,J＝8.0Hz,1H),6.44(s,1H),6.28(d,J＝7.5Hz,1H),6.20(s,1H),3.71–3.69(m,1H),3.56(s,3H),2.90(s,6H),2.41-2.40(m,2H),2.15(s,3H),2.03(dt,J＝11.3,6.9Hz,1H),1.85(s,3H),1.82-1.77(m,1H)。
实施例61
(R)-N-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-3-(3-(4-氟代哌啶-1-基)-3-丙酰基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)-2-((4-(三氟甲基)苄基)氧杂)乙酰胺(61)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用32与4-氟哌啶盐酸盐制备，得到化合物61，收率36.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.38(s,1H),9.40(s,1H),8.40(s,1H),8.15(s,1H),7.57(d,J＝7.7Hz,2H),7.52(d,J＝7.2Hz,2H),7.18(dd,J＝16.9,8.7Hz,2H),6.57(d,J＝8.3Hz,1H),6.43(s,1H),6.26(d,J＝7.6Hz,1H),4.70(s,2H),4.29–4.21(m,2H),3.73-3.72(m,1H),3.55-3.51(m,2H),3.43–3.37(m,3H),2.87(s,6H),2.43(t,J＝6.4Hz,2H),2.03–1.99(m,3H),1.81-1.79(m,3H)。
实施例62
(R)-N-(3-(3-(4,4-二氟代哌啶-1-基)-3-丙酰基)-7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)-2-((4-(三氟甲基)苄基)氧杂)乙酰胺(62)的合成
依照实施例6中所述化合物6的合成方法，采用32与4,4-二氟哌啶盐酸盐制备，得到化合物62，收率20％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.39(s,1H),9.40(s,1H),8.39(d,J＝3.3Hz,1H),8.15(s,1H),7.57(d,J＝7.5Hz,2H),7.52(d,J＝7.1Hz,2H),7.18(dd,J＝16.6,8.2Hz,2H),6.57(d,J＝8.0Hz,1H),6.43(s,1H),6.26(d,J＝7.7Hz,1H),4.70(s,2H),4.30–4.21(m,2H),3.75-3.71(m,1H),3.52-3.51(m,4H),2.87(s,6H),2.47(s,2H),2.04–1.97(m,3H),1.88–1.78(m,3H)。
实施例63
(R)-甲基3-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-8-(N-甲基-2-((4-(三氟甲基)苄基)氧)乙酰胺基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(63)的合成
步骤(a)：合成(R)-甲基3-(7-(3-(二甲氨基)苯氧基)-8-(甲氨基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(63-a)
将化合物1-d(50mg，1eq)溶于DCM，依次加入37％甲醛溶液(3.3μL，1eq)和催化量AcOH，室温反应2小时后，加入NaBH3CN(38.1mg，5eq)继续反应1小时，待反应完全，加水淬灭反应，DCM萃取，柱层析分离，得45mg化合物63-a，产率87％。
步骤(b)：合成标题化合物63
依照实施例1中所述化合物1的合成方法，采用63-a与32-a制备，收率23.22％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.39(s,1H),9.40(s,1H),8.39(d,J＝3.3Hz,1H),8.15(s,1H),7.57(d,J＝7.5Hz,2H),7.52(d,J＝7.1Hz,2H),7.18(dd,J＝16.6,8.2Hz,2H),6.57(d,J＝8.0Hz,1H),6.43(s,1H),6.26(d,J＝7.7Hz,1H),4.70(s,2H),4.30–4.21(m,2H),3.75-3.71(m,1H),3.52-3.51(m,4H),2.87(s,6H),2.47(s,2H),2.04–1.97(m,3H),1.88–1.78(m,3H)。
实施例64
(R)-N-(3-(3-氨基-3-丙酰)-7-(3,5-二甲基苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)-3,4,5-三甲氧基苯甲酰胺(64)的合成
步骤(a)：合成5-(3,5-二甲基苯氧基)-2,4-二硝基苯甲酸(64-a)
将1.66g(1.0eq)化合物1-a，1.2g(2.2eq)NaHCO3，0.87g(1.09eq)3,5-二甲基苯酚溶于25mL蒸馏水中，110℃加热回流反应。2小时后，冷却至室温，冰浴条件下，用盐酸将溶液体系pH值调至1-2，析出大量淡黄色固体，过滤，抽干，得到浅黄色固体，利用EtOH和蒸馏水的混合溶剂(体积比1:2)重结晶，晶体从母液中充分析出后，过滤，抽干，得到1.8克浅黄色固体，即目标产物(64-a)，产率81.0％，m.p.＝194-196℃。
步骤(b)：合成化合物64-b
将3.32g(1.0eq)化合物64-a，2.11g(1.0eq)HCl·H-D-Glu(OMe)-OMe与2.36mL(1.5eq)DIC溶于100mL THF中，室温搅拌4小时。反应结束后，过滤除去不溶物(DIU)，滤液减压蒸干，残余物用DCM稀释，然后，依次用稀盐酸，饱和NaHCO3水溶液和蒸馏水萃取DCM相，收集DCM相，减压蒸干，得到4.25g黄色油状物，即目标产物(64-b)，产率87.0％。
步骤(c)：合成化合物64-c
将4.25g化合物64-b，4.25g Pd/C和8.5gHCOONH4溶于100mL THF和EtOH等比例混合溶剂中，室温搅拌2小时。反应结束后，过滤除去Pd/C，滤液减压蒸干，残余物用DCM稀释，然后，依次用稀盐酸，饱和NaHCO3水溶液和蒸馏水萃取DCM相，收集DCM相，减压蒸干，将残余物溶于100mL AcOH中，90℃加热回流反应5小时。反应结束后，减压蒸干溶剂，得到棕红色固体，经硅胶柱层析纯化，得到1.79g黄色固体，即目标产物(64-c)，产率52.0％。
步骤(d)；合成化合物64-d
将1.79mg(1.0eq)化合物64-c溶于100mL MeOH中，逐滴加入LiOH饱和水溶液，将溶液体系pH值调至13-14，室温搅拌20分钟。反应结束后，用2N的盐酸将溶液体系的pH值调至6-7。减压蒸干溶剂，残余物溶于THF中，依次加入1.07mL(1.5eq)DIC和779mg(1.5eq)HOSu，室温反应12小时，过滤除去不溶物(DIU)。冰浴条件下，向滤液中通入干燥的氨气30分钟。反应结束后，减压蒸干溶剂，残余物经硅胶柱层析纯化，得到741mg黄色固体，即目标产物(64-d)，产率43.0％。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):5.72(2H,s,1-H),7.00(1H,s,2-H),6.42(1H,s,3-H),6.58(2H,s,4and 5-H),7.33(1H,s,6-H),2.38(6H,s,7and 8-H),8.06(1H,d,J＝5.4Hz,9-H),3.62(1H,m,10-H),10.17(1H,s,11-H),1.74(1H,s,12-Ha),1.95(1H,s,12-Hb),2.16(2H,m,13-H),6.74(2H,s,14-H).
ESI-MS:383.04[M+H]+.
HR-MS(TOF):observed for 383.1724[M+H]+,calculated for 383.1720
[M+H]+,C20H22N4O4.
步骤(e)：合成标题化合物64
将50mg(1.0eq)化合物64-d溶于10mL THF中，加入36.1μL(2.0eq)TEA，冰浴条件下，向溶液体系内加入36mg(1.2eq)3,4,5-三甲氧基苯甲羰酰氯，70℃加热回流条件下，反应2小时。反应结束后，蒸干溶剂，残余物经硅胶柱层析纯化，得到24mg白色固体，即目标产物(64)，产率32％。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):9.84(1H,s,1-H),7.25(1H,s,2-H),6.77(1H,s,3-H),6.54(2H,s,4and 5-H),7.58(1H,s,6-H),2.22(6H,s,7and 8-H),8.51(1H,d,J＝5.4Hz,9-H),3.71(1H,m,10-H),10.47(1H,s,11-H),1.82(1H,s,12-Ha),2.04(1H,s,12-Hb),2.16(2H,m,13-H),6.77(1H,s,14-Ha),7.28(1H,s,14-Hb),7.10(2H,s,15and 16-H),3.80(6H,s,17and19-H),3.71(3H,s,18-H).
ESI-MS:577.53[M+H]+,1153.30[2M+H]+.
HR-MS(TOF):observed for 577.2303[M+H]+,calculated for 577.2293[M+H]+,C30H32N4O8.
实施例65
(R)-N-(3-(3-氨基-3-丙酰)-7-甲氧基-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)丁酰胺(65)的合成
步骤(a)：合成5-甲氧基-2,4-二硝基苯甲酸(65-a)
将3.0g(1.0eq)化合物1-a，2.4g(3.5eq)KOH溶于40mL MeOH中，室温反应。12小时后，反应结束。减压蒸干溶剂，残余物用50mL蒸馏水稀释，冰浴条件下，用盐酸将溶液体系pH值调至1-2，析出大量淡黄色固体，过滤，抽干，得到浅黄色固体，利用60mL蒸馏水重结晶，晶体充分析出后，过滤，抽干，得到2.6克浅黄色针状晶体，即目标产物65-a，产率85.0％，m.p.＝188-189℃。
步骤(b)：合成化合物65-b
将2.42g(1.0eq)化合物65-a，2.11g(1.0eq)HCl·H-D-Glu(OMe)-OMe与2.36mL(1.5eq)DIC溶于100mL THF中，室温搅拌4小时。反应结束后，过滤除去不溶物(DIU)，滤液减压蒸干，残余物用DCM稀释，然后，依次用稀盐酸，饱和NaHCO3水溶液和蒸馏水萃取DCM相，收集DCM相，减压蒸干，得到3.63g黄色油状物，即目标产物(65-b)，产率91.0％。
步骤(c)：合成化合物65-c
将3.63g化合物65-b，3.63g Pd/C和7.26g HCOONH4溶于100mL THF和EtOH等比例混合溶剂中，室温搅拌2小时。反应结束后，过滤除去Pd/C，滤液减压蒸干，残余物用DCM稀释，然后，依次用稀盐酸，饱和NaHCO3水溶液和蒸馏水萃取DCM相，收集DCM相，减压蒸干，将残余物溶于100mLAcOH中，90℃加热回流反应5小时。反应结束后，减压蒸干溶剂，得到棕红色固体，经硅胶柱层析纯化，得到1.54g黄色固体，即目标产物(65-c)，产率55.0％。
步骤(d)：合成化合物65-d
将1.54mg(1.0eq)化合物65-c溶于100mLMeOH中，逐滴加入LiOH饱和水溶液，将溶液体系pH值调至13-14，室温搅拌20分钟。反应结束后，用2N的盐酸将溶液体系的pH值调至6-7。减压蒸干溶剂，残余物溶于DMF中，依次加入1.55g DCC(1.5eq)和866mg HOSu(1.5eq)，室温反应12小时，过滤除去不溶物(DCU)。冰浴条件下，向滤液中通入干燥的氨气30分钟。反应结束后，减压蒸干溶剂，残余物经硅胶柱层析纯化，得到571mg黄色固体，即目标产物(65-d)，产率39.0％。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):5.51(2H,s,1-H),7.27(1H,s,2-H),6.73(1H,s,3-H),3.77(3H,s,4-H),8.00(1H,d,J＝4.8Hz,5-H),3.58(1H,m,6-H),9.99(1H,s,7-H),1.76(1H,m,8-Ha),1.95(1H,m,8-Hb),2.16(2H,m,9-H),6.27(1H,s,10-Ha),7.04(1H,s,10-Hb).
ESI-MS:293.14[M+H]+.
HR-MS(TOF):observed for 293.1246[M+H]+,calculated for 293.1244[M+H]+,C13H16N4O4.
步骤(e)：合成标题化合物65
将55mg(1.0eq)化合物65-d溶于10mL THF中，先后向溶液体系内加入78μL(3.0eq)TEA和39μL(2.0eq)丁酰氯，70℃加热回流条件下，反应2小时。反应结束后，蒸干溶剂，残余物经硅胶柱层析纯化，得到31mg白色固体，即目标产物(65)，产率46％。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):9.25(1H,s,1-H),7.99(1H,s,2-H),6.53(1H,s,3-H),3.87(3H,s,4-H),8.38(1H,d,J＝5.4Hz,5-H),3.60(1H,m,6-H),10.12(1H,s,7-H),1.78(1H,m,8-Ha),1.99(1H,m,8-Hb),2.18(2H,t,J＝7.2Hz,9-H),7.25(2H,s,10-H),2.42(2H,t,J＝7.2Hz,11-H),1.18(2H,m,12-H),0.86(2H,t,J＝7.8Hz,13-H).
ESI-MS:363.08[M+H]+,725.00[2M+H]+.
HR-MS(TOF):observed for 363.1670[M+H]+,calculated for 363.1663[M+H]+,C17H22N4O5.
实施例66
(R)-N-(3-(3-氨基-3-丙酰)-7-甲氧基-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)呋喃-2-甲酰胺(66)的合成
将70mg(1.0eq)化合物65-d溶于10mL THF中，先后向溶液体系内加入33.3μL(2.0eq)TEA和23.5μL(1.0eq)2-呋喃甲酰氯，70℃加热回流条件下，反应2小时。反应结束后，蒸干溶剂，残余物经硅胶柱层析纯化，得到23mg白色固体，即目标产物(66)，产率24％。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):9.17(1H,s,1-H),7.96(1H,s,2-H),6.73(1H,s,3-H),3.93(3H,s,4-H),8.45(1H,d,J＝5.1Hz,5-H),3.67(1H,m,6-H),10.31(1H,s,7-H),1.80(1H,m,8-Ha),2.00(1H,m,8-Hb),2.20(2H,t,J＝7.8Hz,9-H),7.28(2H,s,10-H),7.37(1H,m,11-H),6.75(1H,m,12-H),7.98(1H,dd,J＝8.1and 0.9Hz,13-H).
ESI-MS:387.18[M+H]+,773.55[2M+H]+.
HR-MS(TOF):observed for 387.1317[M+H]+,calculated for 387.1299[M+H]+,C18H18N4O6.
实施例67
(R)-N-(3-(3-氨基-3-丙酰)-7-甲氧基-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)-5-硝基呋喃-2-甲酰胺(67)的合成
将50mg(1.0eq)化合物65-d溶于10mL THF中，先后向溶液体系内加入47.2μL(2.0eq)TEA和59.5mg(2.0eq)5-硝基-2-呋喃甲酰氯，70℃加热回流条件下，反应2小时。反应结束后，蒸干溶剂，残余物经硅胶柱层析纯化，得到18mg白色固体，即目标产物(67)，产率25％。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):9.83(1H,s,1-H),7.27(1H,s,2-H),6.75(1H,s,3-H),3.92(3H,s,4-H),8.50(1H,d,J＝5.4Hz,5-H),3.68(1H,m,6-H),10.34(1H,s,7-H),1.81(1H,m,8-Ha),2.03(1H,m,8-Hb),2.21(2H,m,9-H),7.36(1H,s,10-Ha),7.72(1H,s,10-Hb),7.69(1H,d,J＝4.2Hz,11-H),7.83(1H,d,J＝4.2Hz,12-H).
ESI-MS:431.95[M+H]+.
HR-MS(TOF):observed for 432.1166[M+H]+,calculated for 432.1150[M+H]+,C18H17N5O8.
实施例68
(R)-甲基3-(8-丙烯酰胺基-7-(3-(二甲基氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(68)的合成
将41.2mg(1.0eq)化合物1-d溶于10mL DCM中，加入27.7μL(2.0eq)TEA，冰浴条件下，向溶液体系内加入9.7μL(1.2eq)丙烯酰氯，搅拌15分钟。反应结束后，蒸干溶剂，残余物经硅胶柱层析纯化，得到18mg浅黄色固体，即目标产物(68)，产率38.6％。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):9.90(1H,s,1-H),7.06(1H,s,2-H),8.10(1H,s,3-H),6.45(1H,br.s,4-H),6.55(1H,d,J＝8.4Hz,5-H),7.20(1H,t,J＝8.4Hz,6-H),6.25(1H,d,J＝8.4Hz,7-H),2.89(6H,s,8and 9-H),8.40(1H,d,J＝5.1Hz,10-H),3.70(1H,m,11-H),10.36(1H,s,12-H),1.81(1H,m,13-Ha),2.05(1H,m,13-Hb),2.40(2H,t,J＝7.2Hz,14-H),3.55(3H,s,15-H),6.77(1H,dd,J＝10.2and 16.8Hz,16-H),5.76(1H,d,J＝10.2Hz,17-Ha),6.29(1H,d,J＝16.8Hz,17-Hb).
ESI-MS:467.33[M+H]+,933.09[2M+H]+.
HR-MS(TOF):observed for 467.1923[M+H]+,calculated for 467.1925[M+H]+,C24H26N4O6.
实施例69
(R)-甲基3-(7-(3-(二甲基氨基)苯氧基)-8-(4-氟代苯甲酰氨基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(69)的合成
将70mg(1.0eq)化合物1-d溶于10mL DCM中，加入47.2μL(2.0eq)TEA，冰浴条件下，向溶液体系内加入30.5μL(1.5eq)4-氟苯甲酰氯，搅拌20分钟。反应结束后，蒸干溶剂，残余物经硅胶柱层析纯化，得到21mg黄色固体，即目标产物(69)，产率23％。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):9.98(1H,s,1-H),7.23(1H,s,2-H),7.72(1H,s,3-H),6.53(1H,br.s,4-H),6.60(1H,m,5-H),7.20(1H,m,6-H),6.36(1H,d,J＝6.3Hz,7-H),2.89(6H,s,8and 9-H),8.48(1H,d,J＝5.1Hz,10-H),3.76(1H,m,11-H),10.45(1H,s,12-H),1.85(1H,m,13-Ha),2.02(1H,m,13-Hb),2.43(2H,m,14-H),3.57(3H,s,15-H),7.93(2H,m,16and 17-H),7.34(2H,t,J＝8.7Hz,18and 19-H).
ESI-MS:535.27[M+H]+1069.14[2M+H]+.
HR-MS(TOF):observed for 535.1991[M+H]+,calculated for 535.1987[M+H]+,C28H27FN4O6.
实施例70
(R)-甲基3-(8-(环丙基甲酰胺基)-7-(3-(二甲基氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(70)的合成
将60mg(1.0eq)化合物1-d溶于10mL DCM中，加入41.6μL(2.0eq)TEA，冰浴条件下，向溶液体系内加入41.6μL(2.0eq)环丙基羰酰氯，搅拌30分钟。反应结束后，蒸干溶剂，残余物经硅胶柱层析纯化，得到21mg黄色固体，即目标产物(70)，产率29.2％。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):9.95(1H,s,1-H),7.99(1H,s,2-H),7.08(1H,s,3-H),6.69(1H,br.s,4-H),6.75(1H,br.s,5-H),7.27(1H,t,J＝7.8Hz,6-H),6.44(1H,br.s,7-H),2.94(6H,s,8and 9-H),8.38(1H,d,J＝4.8Hz,10-H),3.69(1H,m,11-H),10.31(1H,s,12-H),1.80(1H,m,13-Ha),2.02(1H,m,13-Hb),2.40(2H,t,J＝7.5Hz,14-H),3.55(3H,s,15-H),1.22(1H,br.s,16-H),0.78(4H,br.s,17and 18-H).
ESI-MS:481.46[M+H]+,961.15[2M+H]+.
HR-MS(TOF):observed for 481.2084[M+H]+,calculated for 481.2082[M+H]+,C25H28N4O6.
实施例71
(R)-甲基3-(7-甲氧基-2,5-二氧-8-(4-(三氟甲基)苯甲酰胺基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(71)的合成
称取中间体65-c约31mg(1eq)于25mL圆底烧瓶中，加入5mL THF溶解，冰水浴条件下，边搅拌边依次加入1.2eq的4-三氟苯甲酰氯，21μL(1.5eq)Et3N，升温至室温，LC-MS监测，约2h后，反应完毕。
加入适量甲醇淬灭反应，减压蒸干反应液，加入适量蒸馏水，与DCM萃取3次，收集有机层，得目标化合物粗品。
硅胶柱层析分离纯化，固定相为200-300目硅胶，流动相为DCM:MeOH＝100:4，得目标化合物纯品。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.40(s,1H),10.02(s,1H),8.56(d,J＝5.4,1H),8.32(dd,J＝14.0,6.3,2H),8.06(d,J＝8.1,1H),7.86(t,J＝8.1,1H),7.78(s,1H),7.42(s,1H),3.96(s,3H),3.80(dd,J＝13.4,6.3,1H),3.64(s,3H),2.52(dd,J＝14.8,6.4,2H),2.18–2.07(m,1H),1.92(td,J＝14.5,7.9,1H).HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd forC22H21O6N3F,480.1377,found:480.1380.
实施例72
(R)-甲基3-(8-(((9H-芴-3-基)甲基)氨基)-7-甲氧基-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(72)的合成
取中间体65-c 31mg(1eq)于25mL圆底烧瓶中，加入5mLTHF溶解，室温条件下，边搅拌边依次加入2eq醛基组分，25mg(4eq)NaBH3CN，升温至回流，LC-MS监测，约24h后，反应完毕。
减压蒸干反应液，加入适量蒸馏水，与DCM萃取3次，收集有机层，得目标化合物粗品。
硅胶柱层析分离纯化，固定相为200-300目硅胶，流动相为DCM:MeOH＝100:4，得目标化合物纯品。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ9.98(s,1H),8.01(d,J＝5.2,1H),7.87–7.83(m,2H),7.56(d,J＝3.8,2H),7.39–7.26(m,3H),7.06(s,1H),6.45(t,J＝6.1,1H),6.17(s,1H),4.47–4.30(m,2H),3.89(s,2H),3.85(s,3H),3.63–3.55(m,1H),3.53(s,3H),3.32(s,3H),2.39(dd,J＝13.0,6.5,2H),2.06–1.90(m,1H),1.84–1.69(m,1H).HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcdfor C28H28O5N3,486.2024,found:486.2021.
实施例73
(R)-甲基3-(8-(2-萘酰胺基)-7-甲氧基-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(73)的合成
依照实施例71中化合物71的合成方法，采用65-c与β-萘甲酰氯制备，得到化合物73。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ10.31(s,1H),9.76(s,1H),8.47(d,J＝5.4,1H),8.21(d,J＝9.1,1H),8.10–7.98(m,3H),7.77(d,J＝7.0,1H),7.59(t,J＝3.8,3H),7.32(s,1H),3.84(s,3H),3.77–3.69(m,1H),3.56(s,3H),2.44(s,2H),2.13–1.96(m,1H),1.91–1.75(m,1H).13C NMR(150MHz,DMSO)δ174.40,173.76,173.46,171.98,168.77,157.46,155.11,144.66,136.23,132.59,131.00,130.40,124.49,123.66,121.94,119.78,119.10,118.40,52.85,52.56,49.26,39.22,32.21,32.12,29.40,28.25,23.46,21.44,19.50,13.81,12.97.HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C25H24O6N3,462.1660,found:462.1658.
实施例74
(R)-甲基3-(8-(3,5-二(三氟甲基)苯甲酰胺基)-7-甲氧基-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(74)的合成
依照实施例71中化合物71的合成方法，采用65-c与对三氟甲基苯甲酰氯制备，得到化合物74。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ10.34(s,1H),10.29(s,1H),8.55(s,2H),8.49(d,J＝5.4,1H),8.37(s,1H),7.62(s,1H),7.35(s,1H),3.87(s,3H),3.72(d,J＝7.2,1H),3.56(s,3H),2.44–2.40(m,2H),2.10–1.98(m,1H),1.92–1.74(m,1H).HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd forC23H20O6N3F6,548.1251,found:548.1252.
实施例75
(R)-甲基3-(8-((2-乙基丁基)氨基)-2,5-二氧-7-苯氧基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(75)的合成
依照实施例72中所述化合物72的合成方法，采用49-c与2eq醛基组分制备。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ10.21(s,1H),8.07(d,J＝4.9,1H),7.40(t,J＝8.0,2H),7.17–7.11(m,1H),7.03–7.00(m,3H),6.35(s,1H),5.96(t,J＝5.7,1H),3.71(s,1H),3.59(s,3H),3.01(t,J＝6.2,2H),2.49–2.42(m,2H),7.17–7.11(m,1H),2.11–2.04(m,1H),1.65–1.57(m,1H),1.35–1.26(m,3.3,4H),0.89–0.83(m,6H).HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcdfor C25H32O5N3,454.2336,found:454.2331.
实施例76
(R)-甲基3-(8-(3-(4-氟代苯基)脲基)-2,5-二氧-7-苯氧基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(76)的合成
称取中间体49-c约31mg(1eq)于25mL圆底烧瓶中，加入5mL THF溶解，冰水浴条件下，边搅拌边依次加入1.2eq对氟苯基异氰酸酯，升温至室温，LC-MS监测，约24h后，反应完毕。
减压蒸干反应液，加入适量蒸馏水，与DCM萃取3次，收集有机层，得目标化合物粗品。
硅胶柱层析分离纯化，固定相为200-300目硅胶，流动相为DCM:MeOH＝100:4，得目标化合物纯品。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ10.38(s,1H),9.47(s,1H),8.78(s,1H),8.34(s,1H),8.17(s,1H),7.46(d,J＝6.8,4H),7.27–7.04(m,6H),3.78–3.64(m,1H),3.56(s,3H),2.46–2.37(m,2H),2.11–1.95(m,1H),1.88–1.75(m,1H).HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for269H24O6N4F,507.1674,found:507.1678.
实施例77
(R)-甲基3-(8-(环丙基甲酰胺基)-7-(3,4-二甲基苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(77)的合成
步骤(a)：合成5-(3，4-二甲基苯甲氧基)-2，4-二硝基苯甲酸(77-a)
称取2.46g 5-氯-2,4-二硝基苯甲酸,1.34g(1.1eq)3，4-二甲基苯酚于100ml圆底烧瓶中，加入约30ml蒸馏水，超声助溶。室温搅拌下，缓慢加入1.85g(2.2eq)NaHCO3,继续室温搅拌至不再有气泡产生，升温至100-110℃，LC-MS监测反应，约1h后，反应完毕。待反应液降至室温后，加入稀盐酸调PH值至1～2,可见大量黄色固体析出，减压抽滤，得目标物，不经纯化，直接进行下步反应。
步骤(b)：合成5-(3,4-二甲基)苯氧基-2,4-二硝基苯甲酸D谷氨酸二甲酯酰胺(77-b)
称取332mg 77-a于100mL圆底烧瓶，依次加入30mL DCM，3～5滴DMF，超声助溶，室温条件下边搅拌，边缓慢加入0.25mL(3eq)草酰氯，待不再有大量气体生成时，升温至回流，反应约1～2h后，使反应液降温至室温，减压蒸干溶剂后加入30mLDCM，冰水浴条件下加入0.42mL(3eq)Et3N，0.32g(1.5eq)D-谷氨酸二甲酯，逐渐升温至室温，LC-MS监测反应，约1～3h后，反应完毕。
加入适量蒸馏水，萃取3次，收集有机层，得目标化合物粗品。
硅胶柱层析分离纯化，固定相为200～300目硅胶，流动相为DCM:MeOH＝100:1，得目标化合物纯品。
步骤(c)：4-氨基-5-(3,4-二甲基)苯甲氧基-1，4-苯并二氮杂卓-2-5-二酮(77-c)
称取489mg 77-b于100mL圆底烧瓶，依次加入10mL THF，10mLEtOH，超声助溶，室温条件下边搅拌，边缓慢加入400mg Pd/C，800mg甲酸铵，升温至40℃，反应约3～5h后，使反应液降温至室温，减压过滤，收集滤液，减压蒸干溶剂，不经纯化，直接取1mol于50mL圆底烧瓶中，15mL冰醋酸溶解，90℃反应，LC-MS监测，约2h后，反应完毕，减压蒸干溶剂，得目标化合物粗品。
硅胶柱层析分离纯化，固定相为200～300目硅胶，流动相为DCM:MeOH＝100:4，得目标化合物纯品
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.15(s,1H),8.04(d,J＝5.1,1H),7.12(d,J＝8.2,1H),6.94(s,1H),6.81(d,J＝2.1,1H),6.70(dd,J＝8.2,2.3,1H),6.40(s,1H),5.72(s,2H),3.69–3.64(m,1H),3.57(s,3H),2.44–2.39(m,2H),2.19(d,J＝5.2,6H),2.04–1.97(m,1H),1.84–1.74(m,1H).
步骤(d)：合成目标化合物77
称取中间体77-c约30mg(1eq)于25mL圆底烧瓶中，加入5mL THF溶解，冰水浴条件下，边搅拌边依次加入1.2eq的环丙基甲酰氯，21μL(1.5eq)Et3N，升温至室温，LC-MS监测，约2h后，反应完毕。
加入适量甲醇淬灭反应，减压蒸干反应液，加入适量蒸馏水，与DCM萃取3次，收集有机层，得目标化合物粗品。
硅胶柱层析分离纯化，固定相为200-300目硅胶，流动相为DCM:MeOH＝100:4，得目标化合物纯品。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ10.31(s,1H),9.97(s,1H),8.39(d,J＝5.4,1H),8.03(s,1H),7.21(d,J＝8.2,1H),7.00(s,1H),6.94(d,J＝2.3,1H),6.85(dd,J＝8.0,2.4,1H),3.70(dd,J＝12.3,6.8,1H),3.57(s,3H),2.09–1.94(m,1H),0.81(d,J＝7.4,4H).
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C25H28O6N3,466.1973,found:466.1973.
实施例78
(R)-甲基3-(8-(2-(苯氧基)乙酰胺基)-7-(3,4-二甲基苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(78)的合成
依照实施例1中化合物1的合成方法，采用77-c与5-a制备，得到化合物78。1H NMR(300MHz,DMSO)δ10.42(s,1H),9.39(s,1H),8.43(d,J＝5.4,1H),8.17(s,1H),7.35–7.25(m,5H),7.19(d,J＝8.0,1H),7.07(s,1H),6.94–6.87(m,1H),6.81(dd,J＝8.9,3.1,1H),4.59(s,2H),4.20(s,2H),3.75–3.68(m,1H),3.56(s,3H),2.41(d,J＝12.2,2H),2.22(s,6H),2.07–1.99(m,1H),1.87–1.74(m,1H).
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C30H32O7N3,546.2235,found:546.2239.
实施例79
(R)-3-(8-(环丙基甲酰胺基)-7-(3,4-二甲基苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸(79)的合成
称取化合物77约47mg于25mL圆底烧瓶中，加入5mL THF溶解，室温条件下，边搅拌边加入2.5eq LiOH的5mL水溶液，室温继续反应，LC-MS监测，约15mim后，反应完毕。
加入适量稀盐酸淬灭反应，减压蒸干THF，加入适量蒸馏水，超声，可见固体粉末析出，即得目标化合物粗品。
硅胶柱层析分离纯化，固定相为200-300目硅胶，流动相为DCM:MeOH:HOAc＝100:5:2，得目标化合物纯品。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.085(s,1H),10.28(s,1H),9.96(s,1H),8.43(d,J＝4.8,1H),8.02(s,1H),7.20(d,J＝8.2,1H),6.99(s,1H),6.93(d,J＝2.3,1H),6.84(dd,J＝8.2,2.5,1H),3.69–3.64(m,1H),2.30(t,J＝7.4,2H),2.23(d,J＝3.4,6H),2.18(dd,J＝12.4,6.7,1H),1.99–1.94(m,1H),1.79–1.74(m,1H),0.82–0.79(m,4H).13C NMR(150MHz,dmso)δ174.03,172.63,170.97,166.88,153.53,144.09,138.25,132.65,132.31,131.95,130.72,121.12,120.89,117.08,117.04,113.96,30.09,23.31,19.48,18.66,14.17,7.86,7.77.
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C24H26O6N3,452.1816,found:452.1814.
实施例80
(R)-甲基3-(8-(3-氰基苯甲酰胺基)-7-(3-(二甲基氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(80)的合成
依照实施例71中化合物71的合成方法，采用1-d与对氰基苯甲酰氯制备，得到化合物80。1H NMR(300MHz,DMSO)δ10.46(s,1H),10.21(s,1H),8.50(s,1H),8.20–8.03(m,3H),7.76–7.69(m,2H),7.26–7.14(m,2H),6.54–6.50(m,1H),6.46–6.40(m,1H),6.29–6.25(m,1H),3.78(s,1H),2.87(s,6H),2.15–1.95(m,1H),1.95–1.70(m,1H).13C NMR(150MHz,DMSO)δ173.38,171.55,167.34,164.53,157.37,152.42,146.27,135.74,135.62,133.07,132.62,132.51,131.92,130.54,130.28,123.93,119.45,118.66,117.66,111.94,108.60,106.40,103.38,51.82,51.39,40.41,30.15,23.64.
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C29H28O6N5,542.2034,found:542.2033.
实施例81
(R)-甲基3-(7-(3-(二甲基氨基)苯氧基)-8-(2-(十二烷基氨基)乙酰胺基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(81)的合成
依照实施例71中化合物71的合成方法，采用1-d与2-(十二烷基氨基)乙酰氯制备，得到化合物81。1H NMR(300MHz,DMSO)δ10.46(s,1H),8.46(d,J＝5.0,1H),8.28(s,1H),7.24(t,J＝8.2,1H),7.17(s,1H),6.60(dd,J＝8.5,2.0,1H),6.47(s,1H),6.30(d,J＝7.9,1H),3.76(dd,J＝12.4,6.6,1H),3.61(s,3H),2.95(s,6H),2.49–2.44(m,4H),2.15–2.01(m,1H),1.96–1.74(m,1H),1.37–1.18 1.28(m,24H),0.90(t,J＝6.3,3H).
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C35H52O6N5,638.3912,found:638.3908.
实施例82
甲基3-((3R)-8-((降冰片烯-2-基甲基)氨基)-7-(3-(二甲基氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(82)的合成
依照实施例72中化合物72的合成方法，采用1-d与2eq醛基组分制备，得到化合物82。1H NMR(300MHz,DMSO)δ10.09(s,1H),8.04(s,1H),7.17(t,J＝8.1,1H),6.99(d,J＝1.9,1H),6.55(d,J＝7.7,1H),6.47(s,1H),6.35–6.32(m,1H),6.26(d,J＝7.7,1H),6.18(s,1H),6.00(s,1H),3.67(s,1H),3.56(s,3H),2.90(s,7H),2.78(s,3H),2.43(s,3H),2.08–2.00(m,1H),1.87–1.74(m,2H),1.38–1.28(m,1H),1.21(d,J＝8.8,2H),0.54(d,J＝12.8,1H).
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C29H35O5N4,519.2602,found:519.2603.
实施例83
(R)-3-(8-(2-(苯氧基)乙酰胺基)-7-(3-(二甲基氨基)苯氧基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酰胺(83)的合成
称取化合物5约5 0mg于25mL圆底烧瓶中，加入5mL THF溶解，室温条件下，边搅拌边加入2.5eq LiOH的5mL水溶液，室温继续反应，LC-MS监测，约15mim后，反应完毕。
加入适量稀盐酸淬灭反应，减压蒸干THF，加入适量蒸馏水，超声，可见固体粉末析出，即得其水解产物。
将其溶于10mL THF,室温条件下，边搅拌边依次加入1.5eqHOSu,1.5eqDIC,室温反应过夜，次日检测，底物均转化为活泼酯中间体。室温条件下，边搅拌边向反应液中加入3eq氨水，LC-MS监测，约30min后，反应完毕。
加入大量甲醇淬灭反应，减压蒸干反应液，加入适量蒸馏水，与DCM萃取3次，收集有机层，得目标化合物粗品。
硅胶柱层析分离纯化，固定相为200-300目硅胶，流动相为DCM:MeOH＝100:5，得目标化合物纯品。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.40(s,1H),9.38(s,1H),8.43(d,J＝5.5,1H),8.17(s,1H),7.34–7.20(m,7H),7.13(s,1H),6.73(s,1H),6.60–6.57(m,1H),6.45(t,J＝2.3,1H),6.31–6.29(m,1H),4.60(s,2H),4.20(d,J＝2.8,2H),3.65(s,1H),2.89(s,6H),2.17(d,J＝6.8,2H),2.00–1.95(m,1H),1.81–1.75(m,1H).
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C29H32O6N5,546.2347,found:546.2349.
实施例84
(R)-甲基3-(8-乙酰胺基-7-(二丁基氨基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(84)的合成
步骤(a)：合成5-(二丁基氨基)-2，4-二硝基苯甲酸(84-a)
称取2.46g1-a于100mL圆底烧瓶中，加入约30mLTHF，超声助溶。室温搅拌下，依次缓慢加入3.5mL(2.5eq)Et3N，1.85mL(1.1eq)二丁基氨，继续室温反应，LC-MS监测反应，约3h后，反应完毕。加入稀盐酸调pH值至酸性，减压蒸干THF，加入适量DCM与H2O萃取3次，收集有机层，减压蒸干溶剂，得目标物，不经纯化，直接进行下步反应。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.52(s,4H),7.19(s,1H),3.28(t,J＝7.2,4H),1.64–1.52(m,4H),1.29(dd,J＝14.8,7.3,4H),0.89(t,J＝7.3,6H).
步骤(b)：合成5-二丁基氨基-2,4-二硝基苯甲酸D谷氨酸二甲酯酰胺(84-b)
称取297mg 84-a于100mL圆底烧瓶，依次加入30mLDCM，3～5滴DMF，超声助溶，室温条件下边搅拌，边缓慢加入0.25mL(3eq)草酰氯，待不再有大量气体生成时，升温至回流，反应约1～2h后，使反应液降温至室温，减压蒸干溶剂后加入30mL DCM，冰水浴条件下加入0.42mL(3eq)Et3N，0.32g(1.5eq)D-谷氨酸二甲酯，逐渐升温至室温，LC-MS监测反应，约1～3h后，反应完毕。
加入适量蒸馏水，萃取3次，收集有机层，得目标化合物粗品。
硅胶柱层析分离纯化，固定相为200～300目硅胶，流动相为DCM:MeOH＝100:2.5，得目标化合物纯品
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.60(s,1H),7.03(s,1H),6.69(d,J＝7.5,1H),4.86–4.81(m,1H),3.81(s,3H),3.68(s,3H),3.29–3.25(m,4H),2.60–2.51(m,2H),2.38–2.33(m,1H),2.20–2.13(m,1H),1.63–1.55(m,4H),1.35–1.28(m,4H),.
步骤(c)：合成4-氨基-5-二丁基氨基-1，4-苯并二氮杂卓-2-5-二酮(84-c)
称取497mg 84-b于100mL圆底烧瓶，依次加入10mLTHF，10mL EtOH，超声助溶，室温条件下边搅拌，边缓慢加入400mg Pd/C，800mg甲酸铵，升温至40℃，反应约3～5h后，使反应液降温至室温，减压过滤，收集滤液，减压蒸干溶剂，不经纯化，直接取约1mol于50mL圆底烧瓶中，15mL冰醋酸溶解，再向反应容器中加入0.15mL蒸馏水，90℃反应，LC-MS监测，约2h后，反应完毕，减压蒸干溶剂，得目标化合物粗品。
硅胶柱层析分离纯化，固定相为200-300目硅胶，流动相为DCM:MeOH＝100:4，得目标化合物纯品。
步骤(d)：合成目标化合物84
依照实施例71中化合物71的合成方法，采用84-c与乙酰氯制备，得到化合物81。1HNMR(400MHz,DMSO)δ10.34(s,1H),9.05(s,1H),8.38(d,J＝5.3,1H),8.00(s,1H),7.55(s,1H),3.73–3.68(m,1H),3.56(s,3H),2.86–2.82(m,4H),2.47–2.39(m,2H),2.15(s,3H),2.09–1.96(m,1H),1.88–1.76(m,1H),1.35–1.23(m,8H),0.84(t,J＝6.9,6H).13C NMR(150MHz,dmso)δ172.87,170.95,168.40,167.36,138.72,136.17,133.86,124.46,120.89,110.91,54.39,51.26,50.92,29.68,28.87,24.35,23.18,19.92,13.81.
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C23H35O5N4,447.2602,found:447.2599.
实施例85
(R)-甲基3-(8-(环丙基甲酰胺基)-7-吗啉基-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(85)的合成
步骤(a)：合成5-吗啉-2，4-二硝基苯甲酸(85-a)
称取2.46g 5-氯-2,4-二硝基苯甲酸于100mL圆底烧瓶中，加入约30mL THF，超声助溶。室温搅拌下，依次缓慢加入3.5mL(2.5eq)Et3N，0.96Ml(1.1eq)吗啉，继续室温反应，LC-MS监测反应，约3h后，反应完毕。加入稀盐酸调pH值至酸性，减压蒸干THF，加入适量DCM与H2O萃取3次，收集有机层，减压蒸干溶剂，得目标物,不经纯化，直接进行下步反应。
步骤(b)：合成5-吗啉基-2,4-二硝基苯甲酸D谷氨酸二甲酯酰胺(85-b)
称取297mg 85-a于100圆底烧瓶，依次加入30mLDCM，3～5滴DMF，超声助溶，室温条件下边搅拌，边缓慢加入0.25mL(3eq)草酰氯，待不再有大量气体生成时，升温至回流，反应约1～2h后，使反应液降温至室温，减压蒸干溶剂后加入30mL DCM，冰水浴条件下加入0.42mL(3eq)Et3N，0.32g(1.5eq)D-谷氨酸二甲酯，逐渐升温至室温，LC-MS监测反应，约1～3h后，反应完毕。
加入适量蒸馏水，萃取3次，收集有机层，得目标化合物粗品。
硅胶柱层析分离纯化，固定相为200～300目硅胶，流动相为DCM:MeOH＝100:2.5，得目标化合物纯品
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.65(s,1H),7.08(s,1H),6.86(d,J＝7.5,1H),4.84–4.77(m,7.9,1H),3.88–3.84(m,4H),3.81(s,3H),3.67(s,3H),3.32–3.28(m,4H),2.61–2.50(m,2H),2.39–2.29(m,1H),2.21–2.11(m,1H).
步骤(c)：合成4-氨基-5-吗啉基-1，4-苯并二氮杂卓-2-5-二酮(85-c)
称取454mg 85-b于100mL圆底烧瓶，依次加入10mL THF，10mL EtOH，超声助溶，室温条件下边搅拌，边缓慢加入400mg Pd/C，800mg甲酸铵，升温至40℃，反应约3～5h后，使反应液降温至室温，减压过滤，收集滤液，减压蒸干溶剂，不经纯化，直接取约1mol于50mL圆底烧瓶中，15mL冰醋酸溶解，再向反应容器中加入0.15mL蒸馏水，90℃反应，LC-MS监测，约2h后，反应完毕，减压蒸干溶剂，得目标化合物粗品。
硅胶柱层析分离纯化，固定相为200～300目硅胶，流动相为DCM:MeOH＝100:6，得目标化合物纯品。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ10.09(s,1H),8.01(d,J＝5.0,1H),7.22(s,1H),6.31(s,1H),5.57(s,2H),3.75(s,4H),3.57(s,3H),2.83–2.69(m,4H),2.42(s,2H),2.05–1.97(m,1H),1.86–1.75(m,1H).
步骤(d)：合成目标化合物85
依照实施例71中化合物71的合成方法，采用85-c与环丙基甲酰氯制备，得到化合物85。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.29(s,1H),9.32(s,1H),8.38(d,J＝5.3,1H),7.89(s,1H),7.46(s,1H),3.87–3.79(m,4H),3.72–3.67(m,1H),3.56(s,3H),2.89–2.84(m,2H),2.78–2.72(m,2H),2.45–2.39(m,2H),2.14–2.07(m,1H),2.05–1.98(t,J＝14.8,1H),1.86–1.77(m,1H),0.83(d,J＝6.0,4H).
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C21H27O6N4,431.1925,found:431.1933.
实施例86
(R)-甲基3-(7-吗啉基-2,5-二氧-8-(2-苯基乙酰胺基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(86)的合成
依照实施例85中化合物85的合成方法，采用85-c与苯乙酰氯制备，得到化合物86。1HNMR(400MHz,DMSO)δ10.34(s,1H),8.94(s,1H),8.39(d,J＝5.4,1H),7.98(s,1H),7.44(s,1H),7.40(d,J＝4.3,4H),7.36–7.31(m,1H),3.83(q,J＝15.1,2H),3.71–3.66(m,1H),3.56(s,3H),3.55–3.46(m,4H),2.68–2.62(m,2H),2.61–2.55(m,2H),2.44–2.36(m,2H),2.05–1.99(m,1H),1.85–1.78(m,1H).13C NMR(150MHz,dmso)δ172.87,170.97,169.35,167.28,138.00,136.06,135.13,133.78,129.47,128.83,127.11,121.80,121.31,111.97,66.02,51.84,51.30,50.88,43.83,29.64,23.17.
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C25H29O6N3,481.2082,found:481.2081.
实施例87
(R)-N-(3-(3-(十二烷基氨基)-3-丙酰)-7-吗啉基-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)环丙基甲酰胺(87)的合成
依照实施例6中化合物6的合成方法，采用85与十二烷基胺制备，得到化合物87。1HNMR(400MHz,DMSO)δ10.25(s,1H),9.29(s,1H),8.35(d,J＝5.3,1H),7.89(s,1H),7.72(t,J＝5.6,1H),7.44(s,1H),3.83–3.79(m,4H),3.63–3.58(m,1H),2.96–2.91(m,2H),2.86–2.83(m,2H),2.76–2.71(m,2H),2.16(t,J＝7.1,2H),2.12–2.05(m,1H),2.01–1.91(m,1H),1.80–1.73(m,1H),1.31–1.16(m,20H),0.85–0.81(m,8H).13C NMR(150MHz,dmso)δ174.81,174.05,173.82,170.13,141.02,139.04,136.36,124.21,124.02,115.49,68.81,54.74,53.97,41.08,34.07,33.99,31.81,31.79,31.78,31.73,31.48,31.42,29.06,26.57,24.87,17.51,16.73,10.63,10.50.
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C32H50O5N5,584.3806,found:584.3806.
实施例88
N-((3R)-7-吗啉基-2,5-二氧-3-(3-氧-3-((1,2,3,4-四氢萘乙酰胺-1-基)氨基)丙基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)环丙基甲酰胺(88)的合成
依照实施例6中化合物6的合成方法，采用85与1,2,3,4-四氢-1-萘胺制备，得到化合物88。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.29(s,1H),9.33(d,J＝2.3Hz,1H),8.42–8.33(m,1H),8.20(d,J＝8.6Hz,1H),7.92(d,J＝4.2Hz,1H),7.47(d,J＝7.4Hz,1H),7.23–6.84(m,4H),4.90(s,1H),3.93–3.73(m,4H),3.75–3.56(m,1H),2.96–2.82(m,2H),2.80–2.72(m,2H),2.26(t,J＝7.1Hz,2H),2.22–2.01(m,3H),1.99–1.72(m,4H),1.73–1.49(m,2H),0.85(d,J＝5.7Hz,4H).
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C30H36O5N5,546.2711,found:546.2708.
实施例89
(R)-N-(3-(3-((2-(环己基-1-烯-1-基)乙基)氨基)-3-丙酰)-7-吗啉基-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)环丙基甲酰胺(89)的合成
依照实施例6中化合物6的合成方法，采用85与2-(1-环己烯基)乙胺制备，得到化合物89。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.26(s,1H),9.30(s,1H),8.37(d,J＝5.3,1H),7.90(s,1H),7.70(s,1H),7.45(s,1H),5.28(s,1H),3.87–3.78(m,4H),3.65–3.60(m,1H),3.06–3.01(dd,m,2H),2.89–2.82(m,2H),2.79–2.71(m,2H),2.19–2.15(m,2H),2.13–2.07(m,1H),2.02–1.97(m,1H),1.92–1.87(m,4H),1.85–1.81(m,2H),1.76–1.74(m,1H),1.52–1.42(m,4H),0.83(d,J＝6.1,4H).13C NMR(150MHz,dmso)δ173.37,172.55,172.37,168.68,139.57,137.57,136.19,134.89,123.11,122.73,122.49,114.04,67.48,53.27,38.91,38.28,32.56,28.90,25.96,25.15,23.71,23.25,16.05,9.17,9.05.
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C28H38O5N5,524.2867,found:524.2869.
实施例90
(R,Z)-甲基3-(8-(3-(2-氯代-4-氟代苯基)丙烯酰胺基)-7-(萘乙酰基-1-基氧)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(90)的合成
步骤(a)：合成5-(1)-萘甲氧基-2，4-二硝基苯甲酸(90-a)
称取2.46g 1-a，1.58g(1.1eq)1-萘酚于100mL圆底烧瓶中，加入约30mL蒸馏水，超声助溶。室温搅拌下，缓慢加入1.85g(2.2eq)NaHCO3，继续室温搅拌至不再有气泡产生，升温至100～110℃，LC-MS监测反应，约1h后，反应完毕。待反应液降至室温后，加入稀盐酸调PH值至1～2,可见黄色固体析出，减压抽滤，得目标物，不经纯化，直接进行下步反应。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.85(s,1H),8.09(d,J＝7.7,1H),7.97(d,J＝8.2,2H),7.70–7.55(m,3H),7.45(d,J＝7.4,1H),7.04(s,1H).
步骤(b)：合成5-萘氧基-2,4-二硝基苯甲酸D谷氨酸二甲酯酰胺(90-b)
称取354mg 90-a于100mL圆底烧瓶，依次加入30mL DCM，3～5滴DMF，超声助溶，室温条件下边搅拌，边缓慢加入0.25mL(3eq)草酰氯，待不再有大量气体生成时，升温至回流，反应约1～2h后，使反应液降温至室温，减压蒸干溶剂后加入30mLDCM，冰水浴条件下加入0.42mL(3eq)Et3N，0.32g(1.5eq)D-谷氨酸二甲酯，逐渐升温至室温，LC-MS监测反应，约1～3h后，反应完毕。
加入适量蒸馏水，萃取3次，收集有机层，得目标化合物粗品。
硅胶柱层析分离纯化，固定相为200～300目硅胶，流动相为DCM:MeOH＝100:1，得目标化合物纯品。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.79(s,1H),7.94(d,J＝7.1,2H),7.84(d,J＝8.3,1H),7.62–7.47(m,3H),7.29–7.20(m,1H),6.92(s,1H),6.81(d,J＝7.4,1H),4.66–4.59(m,1H),3.65(s,3H),3.54(s,3H),2.43–2.36(m,2H),2.24–2.14(m,1H),2.06–1.99(m,1H).
步骤(c)；合成4-氨基-5-α萘甲氧基-1，4-苯并二氮杂卓-2-5-二酮(90-c)
称取511mg 90-b于100mL圆底烧瓶，依次加入10mL THF，10mL EtOH，超声助溶，室温条件下边搅拌，边缓慢加入400mg Pd/C，800mg甲酸铵，升温至40℃，反应约3～5h后，使反应液降温至室温，减压过滤，收集滤液，减压蒸干溶剂，得目标化合物。不经纯化，直接取1mol于50mL圆底烧瓶中，15mL冰醋酸溶解，90℃反应，LC-MS监测，约2h后，反应完毕，减压蒸干溶剂，得目标化合物粗品。
硅胶柱层析分离纯化，固定相为200～300目硅胶，流动相为DCM:MeOH＝100:4，得目标化合物纯品。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ10.20(s,1H),8.13(d,J＝9.3,1H),8.04(d,J＝5.2,1H),7.99(d,J＝9.1,1H),7.71(d,J＝8.2,1H),7.62–7.53(m,2H),7.47(t,J＝7.9,1H),6.93(d,J＝6.3,2H),6.48(s,1H),5.91(s,2H),3.67(d,J＝5.7,1H),3.56(s,3H),2.40(d,J＝7.1,2H),2.00(s,1H),1.80(d,J＝7.5,1H).
步骤(d)：合成目标化合物90
称取中间体90-c 1eq于25mL圆底烧瓶中，加入5mL THF溶解，冰水浴条件下，边搅拌边依次加入1.2eq的(Z)-3-(2-氯-4-氟代苯基)丙烯酰氯，1.5eq Et3N，升温至室温，LC-MS监测，约2h后，反应完毕。
加入适量甲醇淬灭反应，减压蒸干反应液，加入适量蒸馏水，与DCM萃取3次，收集有机层，得目标化合物粗品。
硅胶柱层析分离纯化，固定相为200-300目硅胶，流动相为DCM:MeOH＝100:4，得目标化合物纯品。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.45(s,1H),10.20(s,1H),8.38(d,J＝5.3,1H),8.32(s,1H),8.05(t,J＝6.9,2H),7.89–7.80(m,3H),7.65–7.55(m,4H),7.37–7.31(m,2H),7.21(d,J＝7.5,1H),6.91(s,1H),3.74–3.69(m,1H),3.55(s,3H),2.44–2.37(m,2H),2.07–1.98(m,1H),1.84–1.74(m,1H).13C NMR(150MHz,dmso)δ175.97,174.07,169.83,166.98,166.40,164.73,154.19,147.62,138.16,137.75,137.6(d,J＝5.4),135.49,135.40,132.52(d,J＝9.3),132.38(d,J＝3.5),131.13,130.07,129.69,129.40,129.33,128.25,127.82,124.73(d,J＝9.75),122.65,120.41(d,J＝24.9),119.65,118.83,118.53(d,J＝21.6),117.01,54.41,53.99,32.76,26.26.
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C32H26O6N3ClF,602.1489,found:602.1494.
实施例91
(R)-甲基3-(8-(环丙基甲酰胺基)-7-(萘乙酰基-1-基氧)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲酯(91)的合成
依照实施例90中化合物90的合成方法，采用90-c与环丙基甲酰氯制备，得到化合物91。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.35(s,1H),10.16(s,1H),8.36(d,J＝5.3,1H),8.08(d,J＝5.2,2H),8.03(d,J＝7.4,1H),7.83(d,J＝8.2,1H),7.62–7.53(m,3H),7.14(d,J＝7.5,1H),6.91(s,1H),3.71–3.66(m,1H),3.55(s,3H),2.41–2.37(m,4.6,2H),2.22–2.17(m,1H),2.05–1.96(m,1H),1.82–1.73(m,1H),0.84–0.80(m,4H).
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C27H26O6N3,488.1816,found:488.1824.
实施例92
(R,Z)-3-(8-(3-(2-氯代-4-氟代苯基)丙烯酰胺基)-7-(萘乙酰基-1-基氧)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸(92)的合成
将化合物90(1mmol)溶于6mL THF和3mL H2O混合溶液中，加入LiOH(3mmol,3eq)室温反应0.5h，反应完全，将反应液蒸干，加水稀释，使用1M盐酸调pH至酸性，析出固体，过滤，干燥，得目标化合物92。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.09(s,1H),10.46(s,1H),10.21(s,1H),8.39(d,J＝5.3,1H),8.33(s,1H),8.06(t,J＝7.9,2H),7.91–7.80(m,3H),7.65–7.56(m,4H),7.38–7.32(m,2H),7.22(d,J＝7.4,1H),6.92(s,1H),3.73-3.69(m,1H),2.32(t,J＝7.8,2H),2.04–1.96(m,1H),1.82–1.74(m,1H).
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C31H24O6N3ClF,588.1332,found:588.1341.
实施例93
(R)-N-(3-(3-氨基-3-丙酰)-7-(萘乙酰基-1-基氧)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)环丙基甲酰胺(93)的合成
依照实施例6中化合物6的合成方法，采用91与氨水制备，得到化合物93。1H NMR(300MHz,DMSO)δ10.33(s,1H),10.16(s,1H),8.36(d,J＝4.8,1H),8.13–7.98(m,3H),7.83(d,J＝8.3,1H),7.67–7.49(m,3H),7.23(s,1H),7.15(d,J＝7.2,1H),6.91(s,1H),6.72(s,1H),3.66–3.60(m,1H),2.20–2.13(m,3H),2.03–1.84(m,1H),1.79–1.69(m,1H),0.83(s,4H).
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C26H25O5N4,473.1819,found:473.1823.
实施例94
(R,Z)-N-(3-(3-氨基-3-丙酰)-7-(萘乙酰基-1-基氧)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)-3-(2-氯代-4-氟代苯基)丙烯酰胺(94)的合成
依照实施例6中化合物6的合成方法，采用90与氨水制备，得到化合物94。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.43(s,1H),10.19(s,1H),8.38(d,J＝5.2,1H),8.31(s,1H),8.05(t,J＝9.2,2H),7.89–7.80(m,3H),7.65–7.53(m,4H),7.37–7.30(m,2H),7.22(d,J＝7.7,2H),6.91(s,1H),6.72(s,1H),3.68–3.63(m,1H),2.16(t,J＝7.2,2H),1.99–1.94(m,1H),1.77–1.72(m,1H).13C NMR(150MHz,dmso)δ173.69,171.05,166.68,163.85,163.28,161.61,151.10,144.47,135.02,134.63,134.45(d,J＝10.9),132.39,132.32,129.40(d,J＝9.3),129.37,129.26(d,J＝3.1),128.01,126.95,126.57,126.29,126.22,125.15,124.67,121.63(d,J＝6.3),117.29(d,J＝25),116.51,115.68,115.41(d,J＝21.75),113.85,51.33,30.83,23.41.
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C31H25O5N4ClF,587.1492,found:587.1495.
实施例95
(R,Z)-3-(2-氯代-4-氟代苯基)-N-(3-(3-(二乙基氨基)-3-丙酰)-7-(萘乙酰基-1-基氧)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-8-基)丙烯酰胺(95)的合成
依照实施例6中化合物6的合成方法，采用90与二乙胺制备，得到化合物95。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.42(s,1H),10.20(s,1H),8.38(d,J＝5.4,1H),8.31(s,1H),8.08–8.03(m,2H),7.89–7.70(m,3H),7.65–7.55(m,4H),7.36–7.32(m,2H),7.21(d,J＝7.5,1H),6.90(s,1H),3.75–3.68(m,1H),3.24–3.18(m,4H),2.36(t,J＝7.3,2H),2.03–1.95(m,1H),1.81–1.72(m,1H),1.03(t,J＝7.1,3H),0.94(t,J＝7.1,3H).13C NMR(150MHz,dmso)δ171.21,170.45,166.72,163.86,163.29,161.62,151.11,144.52,135.04,134.64,134.49,134.41,132.33,129.45,129.39,129.29,129.26,128.03,126.96,126.60,126.31,126.22,125.15,124.72,121.72,121.59,117.39,117.22,116.50,115.77,115.49,115.35,113.88,55.94,28.38,23.66,14.09,13.11.
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C35H33O5N4ClF,643.2118,found:643.2116.
实施例96
(R,E)-甲基3-(8-(3-(2-氯代-4-氟代苯基)丙烯酰胺基)-7-(二正丁胺基)-2,5-二氧-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酸甲(96)酯的合成
依照实施例84中化合物84的合成方法，采用84-c与(Z)-3-(2-氯-4-氟代苯基)丙烯酰氯制备，得到化合物96。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.42(s,1H),9.42(s,1H),8.43(d,J＝5.1,1H),8.18(s,1H),8.05–8.00(m,6.5,1H),7.84(d,J＝15.5,1H),7.64–7.56(m,2H),7.41–7.37(m,1H),7.28(d,J＝15.5,1H),3.77–3.72(m,1H),3.57(d,J＝5.9,3H),2.89(t,J＝7.0,4H),2.44(t,J＝9.2,2H),2.10–2.00(m,1H),1.88–1.79(m,1H),1.35–1.23(m,8H),0.82(t,J＝7.1,6H).
HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C30H37O5N4ClF,587.2431,found:587.2426.
实施例97
(R)-N-庚基-3-(7-吗啉基-2,5-二氧-8-(2-苯基乙酰胺基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)丙酰胺(97)的合成
依照实施例6中化合物6的合成方法，采用86与庚胺制备，得到化合物96。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.30(s,1H),8.91(s,1H),8.35(d,J＝5.3,1H),7.97(s,1H),7.71(d,J＝5.5,1H),7.45–7.35(m,5H),7.34–7.26(m,1H),3.81(q,J＝15.2,2H),3.62–3.57(m,1H),3.52–3.46(m,4H),2.93(dd,J＝12.8,6.6,2H),2.65–2.54(m,4H),2.15(t,J＝7.1,2H),2.00–1.92(m,1H),1.79–1.71(m,1H),1.29–1.15(m,10H),0.82(t,J＝7.0,3H).HRMS(ESI):m/z(M+H+)calcd for C31H42O5N5,564.3180,found:564.3182.
实施例98
考察WYZ035-31D(实施例13中制备得到的化合物13)对NOD1及NOD2的拮抗作用
材料与方法
(1)细胞及试剂
受试物：WYZ035-31D配制成20mM的DMSO储备液，临用前用培养基稀释至相应浓度。
细胞：HEK-Blue hNOD1cell，HEK-Blue hNOD2cell及293-hNOD2，均购自InvivoGen。
抗体：β-actin(Abcam,ab6276)，IκBα(CST，9242S)，JNK(CST，9252S)，p-JNK(CST，9251S)，p38(CST，9212S)，p-p38(CST，4631S)，ERK(Santa cruz，sc-94)，p-ERK(Santacruz，sc-7383)，RIP2(CST，4142)，p-RIP2(CST，4364)，Goat polyclonal secondaryAntibody to Rabbit IgG-H&L-HRP(Abcam，ab6721)，Rabbit polyclonal secondaryAntibody to Mouse IgG-H&L-HRP(Abcam，ab6728)。
引物及探针：IL-6(Hs00985639_m1)，TNF-alpha(Hs01113624_g1)及GAPDH(Hs02758991_g1)引物及探针均购自Invitrogen。
试剂：hNOD1激动剂C12-ie-DAP(addition of a lauroyl group to theglutamic reside of ie-DAP)，hNOD2激动剂胞壁酰二肽(Muramyl dipeptide，MDP)，hTLR4激动剂脂多糖(standard lipopolysacchadides,LPS-EK)，HEK-Blue Detection,QUANTI-Blue，Normocin，Blasticidin及Zeocin均购自InvivoGen公司；DMEM培养基，RPMI1640培养基，胎牛血清，Penicillin-Streptomycin，PBS，EDTA，Trizol，High-capacity cDNAReverseTranscription Kits，
Gene Expression Master Mix均购自Invitrogen；Ficoll淋巴细胞分离液购自GE；Bovine Serum Albumin购自MP；CD14MicroBeads及LS-MACSColumn购自Miltenyl；RNeasy Mini Kit购自QIAGEN；Phosphatase inhibitor Cocktail，蛋白酶抑制剂，Na3VO4，SRB，TCA，Tris-base及冰醋酸购自Sigma；NaF及BSA购自Amresco；Skim Milk购自BD；ClarityTM western ECL substrate，PVDF membrane及Precision PlusProtein Dual color standards购自Bio-Rad；3MM滤纸购自Millipore；RIPA裂解液，SDS-PAGE Gel Kit，Loading buffer，转膜缓冲液，电泳缓冲液及蛋白印迹膜再生液均购自康为世纪。
(2)仪器及耗材
酶标仪(POLARstar Omega，USA)，水平离心机(Eppendorf)，显微镜(OLYMPUS)，MACS Separator(Miltenyl)，CO2细胞培养箱(Thermo fisher)，超微量分光光度仪Nanodrop spectrophotometry(Thermo fisher)，荧光定量PCR仪(ABI)，PCR仪(Eppendorf)，电泳仪(Bio-Rad)，转印槽(Bio-Rad)，ChemiDocTM XRS+成像仪(Bio-Rad)，血球计数板(上海市求精生化试剂仪器有限公司)，振荡器，摇床等。96孔板(Costar，USA)，6孔板(Costar，USA)，12孔板(Costar，USA)，离心管(Corning)，培养皿(Corning)等。
(3)HEK-Blue hNOD1拮抗剂的检测(HEK-Blue Detection)
HEK-Blue hNOD1细胞培养于含10％FBS，50U/mL penicillin，50μg/mLstreptomycin，50μg/mL Normocin，2mM L-glutamine的DMEM培养基(DMEM完全培养基)中。收集对数生长期的细胞，HEK-Blue Detection检测液调节细胞浓度，并接种于96孔板(50000个/孔)，加入受试化合物梯度工作液(终浓度分别为10μM、5μM、2.5μM、1.25μM、625nM、312.5nM、31.25nM、3.125nM、0.3125nM)及溶媒对照。37℃，5％CO2培养箱中孵育3h后，加入阳性刺激物C12-ie-DAP(终浓度为50ng/mL)，37℃，5％CO2培养箱中继续孵育20h，于655nm处检测OD值。
将阳性对照组OD值记为C，受试组OD值记为(T)。
拮抗率％(Inhibit Rate)＝[(C-T)/C]×100，计算IC50，即[(C-T)/C]×100＝50时的化合物浓度；
检测完毕后，采用SRB法考察化合物对细胞生长的影响。50μL/well加入80％TCA4℃固定1h；去离子水洗板5次，自然晾干；100μL/well加入0.4％SRB染色，室温放置10min；100μL/well 1％的醋酸洗板5次，自然晾干；150μL/well加入Tris base，振荡约5min；酶标仪515nm处检测OD值；将溶媒对照组OD值记为C,受试组OD值记为(T)。生长率％(PercentageGrowth)＝[T/C]×100。
(4)HEK-Blue hNOD2拮抗剂的检测(HEK-Blue Detection)
方法同HEK-Blue hNOD1拮抗剂的检测。细胞密度为25000个/孔，阳性刺激物为MDP(50ng/mL)，孵育时间为18h，检测波长为650nm。
(5)人外周血来源巨噬细胞(hPBMCs-derived macrophage)的培养及处理
取健康志愿者静脉血200mL，Ficoll密度梯度离心法分离外周血单核细胞(hPBMCs)，免疫磁珠法分选CD14+单核细胞，M-CSF体外诱导分化为巨噬细胞，以1×106/孔的密度接种于12孔板内，加入化合物WYZ035-31D(终浓度分别为10μM和1μM)或阳性对照(positive control，1μM)，孵育1h后加入C12-ie-DAP(终浓度为500ng/mL)或MDP(终浓度为5μg/mL)，90min后吸去上清，用Trizol裂解细胞样本。
(6)反转录与荧光定量PCR
用Trizol裂解细胞样本后，用RNAeasy mini kit(Qianen)抽提、纯化总RNA。超微量分光光度仪Nanodrop spectrophotometry(Thermo)检测RNA含量,每个样本在波长260的吸光度与在波长280的吸光度比值(A260:280OD ratios)均大于1.8，将100ng的RNA反转录为cDNA。取1μL cDNA加入相应的引物及探针，终体积为20μL，加样在96孔板中，置于荧光定量PCR仪进行反应。IL-6，TNF-alpha及GAPDH引物及探针均购自Invitrogen(货号分别为Hs00985639_m1，Hs01113624_g1，Hs02758991_g1)。反应体系为：10μL TaqMan GeneExpression Master Mix(2x)，1μL TaqMan Gene Expression Assay(20x)，2μL cDNA，7μLdH2O。
反应参数为：①50℃，2min
②95℃，10min
③95℃，15sec
④60℃，1min③to④40cycles
使用GAPDH作为内参基因，用2-△ct法计算相对表达量，并计算拮抗率。
(7)Western Blotting
收集对数生长期的细胞，接种于6孔板内，加入待测化合物WYZ035-31D(终浓度为10μM和1μM)，NOD1或NOD2阳性拮抗剂(终浓度为1μM)，37℃，5％CO2培养箱中孵育1h后，加入刺激物C12-ie-DAP(终浓度为500ng/mL)或MDP(终浓度为5μg/mL),孵育30min或60min后RIPA裂解液裂解细胞并提取蛋白，进行SDS-PAGE电泳，上样量为15μL/孔。电泳结束后将蛋白转印至PVDF膜，用5％的脱脂奶粉室温封闭2h，再分别加入适当比例稀释的一抗，4℃过夜。1×TBST漂洗3次后，加入适当比例稀释的二抗，室温孵育1h，用1×TBST漂洗后，加入ECL发光底物，ChemiDocTM XRS+成像仪中曝光。
试验结果
如图1A所示，化合物WYZ035-31D对hNOD1/2信号通路有明显的拮抗作用，LogIC50分别为-5.627、-5.379。在上述实验浓度条件下，WYZ035-31D未见明显的细胞毒性，结果见图1
由图2可见，WYZ035-31D可显著拮抗C12-ie-DAP对人外周血来源巨噬细胞NOD1信号通路的激动作用，降低前炎性细胞因子IL-6及TNF-alpha的转录。阳性化合物(positivecontrol)为已知NOD1选择性拮抗剂(结构式见式i)。由图3可见，WYZ035-31D可显著拮抗MDP对人外周血来源巨噬细胞NOD2信号通路的激动作用，降低前炎性细胞因子IL-6及TNF-alpha的转录。阳性化合物(positive control)为已知NOD2选择性拮抗剂(结构式见式ii)。
由图4(A)可见，与溶媒对照(Control)组相比，人外周血来源巨噬细胞经C12-ie-DAP刺激后，磷酸化的RIP2表达增高，IκBα表达降低，表明NF-κB信号通路被激活；磷酸化的JNK、p38及ERK表达增高，表明MAPK信号通路被激活。而细胞经WYZ035-31D处理后，与C12-ie-DAP单独组相比，磷酸化RIP2表达降低，IκBα表达增高，磷酸化的JNK、p38及ERK表达均降低，可见WYZ035-31D可阻断NOD1介导的NF-κB及MAPK信号通路的激活。由图4(B)可见，与溶媒对照Control组相比，293-hNOD2细胞经MDP刺激后，磷酸化的RIP2表达增高，IκBα表达降低，提示NF-κB信号通路被激活；磷酸化的JNK、p38及、ERK表达增高，提示MAPK信号通路被激活。而细胞经WYZ035-31D处理后，与MDP单独组相比，IκBα表达增高，磷酸化的JNK、p38及ERK表达均降低，可见WYZ035-31D可阻断NOD2介导的NF-κB及MAPK信号通路的激活。
WYZ035-31D可显著拮抗NOD1及NOD2介导的NF-κB及MAPK信号通路的激活，为NOD1/2拮抗剂。
实施例99
实施例1-54中制备得到的化合物体外对NOD1及NOD2的拮抗作用
表1详细列出了实施例化合物对NOD1/2信号通路的拮抗百分率。其中，10μM表示待测化合物浓为10μM时对NOD1/2通路的拮抗百分率，5μM值表示待测化合物浓度为5μM时对NOD1/2通路的拮抗百分率。LogIC50值表示拮抗百分率为50％时待测化合物浓度的对数值；“ND”表示未检出。
表1实施例化合物体外对NOD1及NOD2的拮抗作用
结果表明，本发明提出的化合物在5μM时有13个具有80％以上的NOD1/2拮抗活性，其中化合物3，4，45，52，57，61，62对NOD1/2通路的拮抗活性LogIC50值均在1μM以下；17个化合物对NOD1/2拮抗活性在50％-80％之间；33个化合物对NOD1/2拮抗活性低于50％，进一步分析得到构效关系。
实施例100
WYZ035-31D(实施例13中制备得到的化合物13)对小鼠Lewis肺癌模型(LLC)肿瘤生长的影响
受试物
PTX(批号：JF20080401)，WYZ035-31D均配制成20×的DMSO储备液，临用前分别用含5％聚氧乙烯环氧蓖麻油(Cremophor EL)、5％Tween20的生理盐水稀释至给药浓度。
实验动物及瘤株:
雄性C57BL/6小鼠，6～8周龄，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号SCXK(京)2012-0001，小鼠饲养于清华大学动物中心。试验所用瘤株为：小鼠Lewis肺癌移植瘤，由本实验室传代保存。
试验方法：
Lewis肺癌保种的C57BL/6雄性小鼠，颈椎脱臼法处死后，解剖取出肿瘤，无菌条件下匀浆制备肿瘤细胞悬液。另取健康C57BL/6雄性小鼠腋窝皮下接种瘤液，0.1mL/只。设接种当天为D0，接种后第1天(D1)，将小鼠按体重随机分为4组，分别为：①溶媒对照组(Control)；②WYZ035-31D 20mg/kg组；③紫杉醇(PTX)12mg/kg组；④WYZ035-31D(20mg/kg)+PTX(12mg/kg)。PTX 12mg/kg间断给药组动物每4天静脉注射给药1次，共给药3次；WYZ035-31D及溶媒对照组动物每天腹腔注射给药1次，共给药10次；WYZ035-31D(20mg/kg)+PTX(12mg/kg)组动物每4天静脉注射PTX(12mg/kg)1次，每天腹腔注射WYZ035-31D(20mg/kg)1次。
给药过程中每2天称量动物体重，游标卡尺测量肿瘤的长、短径，以公式：(1/2)×长径×(短径)2计算肿瘤大小。接瘤后第11天(D11)结束实验，眼球采血后颈椎脱臼法处死小鼠，解剖取出肿瘤、称重。进行给药组与对照组的比较分析。
试验结果：
与溶媒对照组相比，WYZ035-31D(20mg/kg)和PTX(12mg/kg)单独给药组瘤体积增长速度较对照组缓慢，但没有统计学意义，WYZ035-31D(20mg/kg)+PTX(12mg/kg)组可显著抑制原发瘤的生长，且具有统计学意义(如图5所示)。并且，WYZ035-31D(20mg/kg)+PTX(12mg/kg)合用组抑瘤作用明显高于WYZ035-31D(20mg/kg)和PTX(12mg/kg)单独作用组，同时具有统计学意义。图5A为实验结果时的肿瘤照片。
实施例101
本发明实施例的化合物13NOD1/2选择性拮抗活性的确定
材料与方法
(1)细胞及试剂
受试物：WYZ035-31D配制成20mM的DMSO储备液，临用前用培养基稀释至相应浓度。
细胞系：HEK-Blue hNOD1cell，HEK-Blue hNOD2cell、HEK-Blue hTLR2cell、HEK-Blue hTLR4cell和HEK-Dual hTNF-αcell均购自InvivoGen。
试剂：hNOD1激动剂C12-ie-DAP(addition of a lauroyl group to theglutamic reside of ie-DAP)，hNOD2激动剂胞壁酰二肽(Muramyl dipeptide，MDP)，hTLR4激动剂脂多糖(standard lipopolysacchadides,LPS-EK)，hTLR2激动剂FSL-1(Syntheticdiacylated lipoprotein)，hTNFα激动剂rhTNFα(Recombinant human TNF-α)，HEK-BlueDetection,QUANTI-Blue，Normocin，Blasticidin，Zeocin及HEK-Blue Selection均购自InvivoGen公司；DMEM培养基，胎牛血清，Penicillin-Streptomycin，PBS，SRB，TCA，Tris-base及冰醋酸购自Sigma；
(2)仪器及耗材
酶标仪(POLARstar Omega，USA)，水平离心机(Eppendorf)，显微镜(OLYMPUS)，MACS Separator(Miltenyl)，CO2细胞培养箱(Thermo fisher),血球计数板(上海市求精生化试剂仪器有限公司)，振荡器，摇床等。96孔板(Costar，USA)，离心管(Corning)，培养皿(Corning)等。
(3)HEK-Blue hNOD1拮抗剂的检测(HEK-Blue Detection)
HEK-Blue hNOD1细胞培养于含10％FBS，50U/mL penicillin，50μg/mLstreptomycin，50μg/mL Normocin，2mM L-glutamine的DMEM培养基(DMEM完全培养基)中。收集对数生长期的细胞，HEK-Blue Detection检测液调节细胞浓度，并接种于96孔板(50000个/孔)，加入受试化合物梯度工作液及溶媒对照。37℃，5％CO2培养箱中孵育3h后，加入阳性刺激物C12-ie-DAP(终浓度为50ng/mL)，37℃，5％CO2培养箱中继续孵育20h，于655nm处检测OD值。
将阳性对照组OD值记为C，受试组OD值记为(T)。
拮抗率％(Inhibit Rate)＝[(C-T)/C]×100，计算IC50，即[(C-T)/C]×100＝50时的化合物浓度；
检测完毕后，采用SRB法考察化合物对细胞生长的影响。50μL/well加入80％TCA4℃固定1h；去离子水洗板5次，自然晾干；100μL/well加入0.4％SRB染色，室温放置10min；100μL/well 1％的醋酸洗板5次，自然晾干；150μL/well加入Tris base，振荡约5min；酶标仪515nm处检测OD值；将溶媒对照组OD值记为C，受试组OD值记为(T)。生长率％(PercentageGrowth)＝[T/C]×100。
(4)HEK-Blue hNOD2拮抗剂的检测(HEK-Blue Detection)
方法同HEK-Blue hNOD1拮抗剂的检测。细胞密度为25000个/孔，阳性刺激物为MDP(50ng/mL)，孵育时间为18h，检测波长为650nm。
(5)HEK-Blue hTLR2拮抗剂的检测(QUANTI-Blue)
HEK-Blue hTLR2细胞培养于含10％FBS，50U/mL penicillin，50μg/mLstreptomycin，50μg/mL Normocin，2mM L-glutamine的DMEM培养基(DMEM完全培养基)中。收集对数生长期的细胞，DMEM完全培养基调节细胞浓度，并接种于96孔板(30000个/孔)，加入受试化合物梯度工作液及溶媒对照。37℃，5％CO2培养箱中孵育3h后，加入阳性刺激物FSL-1(终浓度为1ng/mL)，37℃，5％CO2培养箱中继续孵育。
20h后，取20μL细胞上清于含有180μL QUANTI-Blue的96well-plate中，37℃，5％CO2培养箱中孵育显色1h，然后于650nm处检测OD值。
将阳性对照组OD值记为C，受试组OD值记为(T)。
拮抗率％(Inhibit Rate)＝[(C-T)/C]×100，计算IC50，即[(C-T)/C]×100＝50时的化合物浓度。
检测完毕后，采用SRB法考察化合物对细胞生长的影响。50μL/well加入80％TCA4℃固定1h；去离子水洗板5次，自然晾干；100μL/well加入0.4％SRB染色，室温放置10min；100μL/well 1％的醋酸洗板5次，自然晾干；150μL/well加入Tris base，振荡约5min；酶标仪515nm处检测OD值；将溶媒对照组OD值记为C,受试组OD值记为(T)。生长率％(PercentageGrowth)＝[T/C]×100。
(6)HEK-Blue hTLR4拮抗剂的检测(QUANTI-Blue)
方法同HEK-Blue hTLR2拮抗剂的检测。细胞密度为25000个/孔，阳性刺激物为LPS-EK(1ng/mL)，孵育时间为20h，检测波长为650nm。
(7)HEK-Blue hTNFα拮抗剂的检测(QUANTI-Blue)
方法同HEK-Blue hTLR2拮抗剂的检测。细胞密度为50000个/孔，阳性刺激物为rhTNFα(5ng/mL)，孵育时间为20h，检测波长为650nm。
试验结果
如图6所示，本发明实施例的化合物13对NOD1/2通路具有很好的拮抗活性，LogIC50分别为-5.627、-5.379，而对TLR2、TLR4、TNF-α通路基本无拮抗活性，所以化合物13具有选择性拮抗NOD1/2通路的活性。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (10)
1.一种化合物，其为式(I)所示的化合物或式(I)所示化合物的立体异构体、药学上可接受的盐，
其中，R1为甲基、萘基、二丁胺基、
R2为OR6或NR7R8；
R3为
R4、R5分别独立地为H或C1-3烷基；
R6为H或C1-3烷基；
R7、R8分别独立地为H、甲基、乙基、正丙基、环丙基、正丁基、叔丁基、正十二烷基、正十六烷基、正十八烷基或与R2中的氮原子形成
或桥环、螺环；
R9为
或乙烯基；
R10为H、甲基、
R11为甲基、苄基、对三氟苯烯基、3,4,5-三甲氧基苯基、乙烯基、3-甲基-2丁烯基、对三氟甲基苯基、萘基、3,5-二三氟甲基苯基、环丙基、对氰基苯基、
Y为N、O、S或C1-3烷基；
X为N或O；
X1、X2、X3、X4分别独立地为H、卤素、甲基、羟基、氨基、氰基、烷氧基、三氟甲基或巯基；
n为1、2或3。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中，
R4、R5分别独立地为H或甲基；
R6为H或甲基；
Y为亚甲基或O；
X1、X2、X3、X4分别独立地为H、甲基或Cl；
n为1或2。
3.根据权利要求1所述的化合物，其具有以下其中之一的结构：
4.一种药物组合物，其包含权利要求1～3中任一项所述的化合物。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其进一步包含药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂、溶媒或它们的组合。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其进一步包含其它的预防或治疗免疫炎性疾病或肿瘤的药物。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述其它的预防或治疗免疫炎性疾病或肿瘤的药物包括但不限于美法仑、环磷酰胺、异环磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链脲佐菌素、顺铂、卡铂、奥沙利铂、达卡巴嗪、替莫唑胺、丙卡巴肼、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他滨、巯基嘌呤、氟达拉滨、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、紫杉醇、多西紫杉醇、拓扑替康、伊立替康、依托泊苷、曲贝替定、更生霉素、多柔比星、表柔比星、道诺霉素、米托蒽醌、博来霉素、丝裂霉素C、伊沙匹隆、他莫昔芬、氟他胺、戈那瑞林类似物、甲地孕酮、强的松、***、甲泼尼龙、沙利度胺、干扰素α、亚叶酸钙、西罗莫司、替西罗莫司、依维莫司、阿法替尼、阿西替尼、博舒替尼、卡博替尼、色瑞替尼、克卓替尼、达拉菲尼、达沙替尼、厄洛替尼、吉非替尼、依鲁替尼、盐酸埃克替尼、伊马替尼、拉帕替尼、尼洛替尼、帕唑帕尼、哌加他尼、普纳替尼、拉多替尼、瑞格菲尼、鲁索利替尼、索拉菲尼、舒尼替尼、托法替尼、曲美替尼、凡德他尼、威罗菲尼、甲磺酸阿帕替尼、马赛替尼、丙氨酸布立尼布、西地尼布、达可替尼、福他替尼、二磷酸莫替沙尼、来那替尼、司美替尼、替吡法尼、巴非替尼、多维替尼、塞卡替尼、替拉替尼、替沃扎尼、阿仑单抗、贝伐单抗、贝伦妥单抗维多汀、卡妥索单抗、西妥昔单抗、地诺单抗、吉妥珠单抗、伊匹单抗、尼妥珠单抗、奥法木单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗、曲妥珠单抗、艾代拉里斯、IPI-145、吉列替尼、布帕尼西、GDC 0032、库潘尼西、XL765、XL-147、PX-866、哌立福新、艾乐替尼、依布鲁替尼、帕妥珠单抗、尼达尼布、考比替尼、替西罗莫司、雷帕霉素、比生群、易普利姆玛、纳武单抗或它们的任意组合。
8.权利要求1～3中任一项所述的化合物或权利要求4～7中任一项所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗免疫炎性疾病或肿瘤。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述药物用于预防或治疗类风湿关节炎、干燥综合征、韦格纳肉芽肿病、白塞病、结节病、大动脉炎、反应性关节炎、骨关节炎、艾滋病、过敏性疾病、风湿性关节炎、慢性疲劳、II型糖尿病、枯草热、红瘢狼疮或多发性硬化症、结肠癌、直肠癌、胃癌、胃腺癌、胰腺癌、膀胱癌、胆囊癌、乳腺癌、肾癌、肾细胞癌、肝癌、肝细胞癌、肺癌、皮肤癌、黑色素瘤、甲状腺癌、骨肉瘤、软组织肉瘤、头颈癌、中枢神经***肿瘤、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、卵巢癌、子宫癌、子宫内膜癌、***癌、急性骨髓性白血病或急性淋巴细胞白血病或它们的转移癌、真性红细胞增多症、原发性血应性关节炎。
10.权利要求1～3中任一项所述的化合物或权利要求4～7中任一项所述的药物组合物在制备药物中的用途，其特征在于，所述药物用于选择性拮抗NOD1/2信号传导通路的激活。
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