CN106755516B - 鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂与方法 - Google Patents

鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂与方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂与方法。本发明公开的鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂，为成套试剂1、成套试剂2和成套试剂3；成套试剂1由IAS05‑P、IAS07‑P和IAS11‑P组成；成套试剂2由成套试剂1和试剂A组成；试剂A由IAS06‑P和IAS08‑P组成；成套试剂3由成套试剂2和试剂B组成；试剂B由IAS12‑P、IAS13‑P、IAS04‑P、IAS03‑P、IAS01‑P和IAS14‑P组成。实验证明，本发明的成套试剂鉴定北京鸭的累积排除概率可达0.99以上，可用于北京鸭的完整、准确的系谱鉴定和个体识别，可校正发生混乱的北京鸭育种系谱。

Description

鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂与方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域中，鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂与方法。
背景技术
中国是世界上最早开展野鸭驯化饲养的国家之一，鸭肉及其加工副产品鸭脖、鸭肠、鸭爪等在中国有着非常广泛的群众基础。北京鸭是由中国农业科学院北京畜牧兽医研究所水禽研究室历经数十年选育而成的品种。
准确的系谱信息是家禽遗传育种能够顺利开展的基础，是获得遗传进展的根本保障。错误的系谱信息会影响遗传评估的准确性，降低遗传进展，给育种场和生产企业带来巨大经济损失。实际的育种工作中，从种蛋收集、孵化、种鸭饲养、到家系组配等各个环节都需要人工来进行操作和记录，因人为错误而导致系谱不准确在所难免。因此，需要通过亲子鉴定纠正系谱记录的错误，以获得尽可能多的遗传进展。
近年来，分子生物学技术发展迅速，AFLP、RAPD、SSR等分子标记被广泛应用于遗传多样性评估和亲子鉴定。目前在畜禽亲子关系鉴定领域应用最多的是微卫星标记，FAO已经推荐了适用于猪、鸡、牛、羊等主要畜禽遗传多样性及亲子鉴定的微卫星标记体系。但是，用于鸭亲子鉴定的微卫星标记体系仍然空缺。目前，NCBI网站仅报道了数百条鸭微卫星标记，且这些标记因其稳定性差、多态性低等原因大都不能用于亲子鉴定，而具有应用前景的3-4碱基重复的高度多态性微卫星序列则及其缺乏。因此，需要通过挖掘和筛选微卫星标记建立适合于北京鸭的亲子鉴定体系。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何鉴定北京鸭的亲子关系。
为解决上述技术问题，本发明首先提供了鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂。
本发明所提供的鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂，为成套试剂3、成套试剂2或成套试剂1；
所述成套试剂1由名称分别为IAS05-P、IAS07-P和IAS11-P的引物对组成；
所述IAS05-P由名称分别为IAS05-F和IAS05-R的单链DNA组成；
所述IAS05-F是如下a1)至a4)中的任一种单链DNA：
a1)序列表中序列1所示的单链DNA；
a2)在a1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
a3)与a1)或a2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
a4)在严格条件下与a1)或a2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS05-R是如下b1)至b4)中的任一种单链DNA：
b1)序列表中序列2所示的单链DNA；
b2)在b1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
b3)与b1)或b2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
b4)在严格条件下与b1)或b2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS07-P由名称分别为IAS07-F和IAS07-R的单链DNA组成；
所述IAS07-F是如下c1)至c4)中的任一种单链DNA：
c1)序列表中序列3所示的单链DNA；
c2)在c1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
c3)与c1)或c2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
c4)在严格条件下与c1)或c2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS07-R是如下d1)至d4)中的任一种单链DNA：
d1)序列表中序列4所示的单链DNA；
d2)在d1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
d3)与d1)或d2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
d4)在严格条件下与d1)或d2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS11-P由名称分别为IAS11-F和IAS11-R的单链DNA组成；
所述IAS11-F是如下e1)至e4)中的任一种单链DNA：
e1)序列表中序列5所示的单链DNA；
e2)在e1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
e3)与e1)或e2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
e4)在严格条件下与e1)或e2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS11-R是如下f1)至f4)中的任一种单链DNA：
f1)序列表中序列6所示的单链DNA；
f2)在f1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
f3)与f1)或f2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
f4)在严格条件下与f1)或f2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述成套试剂2由所述成套试剂1和试剂A组成；
所述试剂A为名称为IAS06-P的引物对和/或名称为IAS08-P的引物对；
所述IAS06-P由名称分别为IAS06-F和IAS06-R的单链DNA组成；
所述IAS06-F是如下g1)至g4)中的任一种单链DNA：
g1)序列表中序列7所示的单链DNA；
g2)在g1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
g3)与g1)或g2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
g4)在严格条件下与g1)或g2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS06-R是如下h1)至h4)中的任一种单链DNA：
h1)序列表中序列8所示的单链DNA；
h2)在h1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
h3)与h1)或h2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
h4)在严格条件下与h1)或h2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS08-P由名称分别为IAS08-F和IAS08-R的单链DNA组成；
所述IAS08-F是如下i1)至i4)中的任一种单链DNA：
i1)序列表中序列9所示的单链DNA；
i2)在i1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
i3)与i1)或i2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
i4)在严格条件下与i1)或i2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS08-R是如下j1)至j4)中的任一种单链DNA：
j1)序列表中序列10所示的单链DNA；
j2)在j1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
j3)与j1)或j2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
j4)在严格条件下与j1)或j2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述成套试剂3由所述成套试剂2和试剂B组成；
所述试剂B为名称分别为IAS12-P、IAS13-P、IAS04-P、IAS03-P、IAS01-P和IAS14-P的引物对中的六种、任五种、任四种、任三种、任两种或任一种；
所述IAS12-P由名称分别为IAS12-F和IAS12-R的单链DNA组成；
所述IAS12-F是如下k1)至k4)中的任一种单链DNA：
k1)序列表中序列11所示的单链DNA；
k2)在k1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
k3)与k1)或k2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
k4)在严格条件下与k1)或k2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS12-R是如下l1)至l4)中的任一种单链DNA：
l1)序列表中序列12所示的单链DNA；
l2)在l1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
l3)与l1)或l2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
l4)在严格条件下与l1)或l2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS13-P由名称分别为IAS13-F和IAS13-R的单链DNA组成；
所述IAS13-F是如下m1)至m4)中的任一种单链DNA：
m1)序列表中序列13所示的单链DNA；
m2)在m1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
m3)与m1)或m2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
m4)在严格条件下与m1)或m2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS13-R是如下n1)至n4)中的任一种单链DNA：
n1)序列表中序列14所示的单链DNA；
n2)在n1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
n3)与n1)或n2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
n4)在严格条件下与n1)或n2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS04-P由名称分别为IAS04-F和IAS04-R的单链DNA组成；
所述IAS04-F是如下o1)至o4)中的任一种单链DNA：
o1)序列表中序列15所示的单链DNA；
o2)在o1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
o3)与o1)或o2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
o4)在严格条件下与o1)或o2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS04-R是如下p1)至p4)中的任一种单链DNA：
p1)序列表中序列16所示的单链DNA；
p2)在p1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
p3)与p1)或p2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
p4)在严格条件下与p1)或p2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS03-P由名称分别为IAS03-F和IAS03-R的单链DNA组成；
所述IAS03-F是如下q1)至q4)中的任一种单链DNA：
q1)序列表中序列17所示的单链DNA；
q2)在q1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
q3)与q1)或q2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
q4)在严格条件下与q1)或q2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS03-R是如下r1)至r4)中的任一种单链DNA：
r1)序列表中序列18所示的单链DNA；
r2)在r1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
r3)与r1)或r2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
r4)在严格条件下与r1)或r2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS01-P由名称分别为IAS01-F和IAS01-R的单链DNA组成；
所述IAS01-F是如下s1)至s4)中的任一种单链DNA：
s1)序列表中序列19所示的单链DNA；
s2)在s1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
s3)与s1)或s2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
s4)在严格条件下与s1)或s2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS01-R是如下t1)至t4)中的任一种单链DNA：
t1)序列表中序列20所示的单链DNA；
t2)在t1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
t3)与t1)或t2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
t4)在严格条件下与t1)或t2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS14-P由名称分别为IAS14-F和IAS14-R的单链DNA组成；
所述IAS14-F是如下u1)至u4)中的任一种单链DNA：
u1)序列表中序列21所示的单链DNA；
u2)在u1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
u3)与u1)或u2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
u4)在严格条件下与u1)或u2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；
所述IAS14-R是如下v1)至v4)中的任一种单链DNA：
v1)序列表中序列22所示的单链DNA；
v2)在v1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；
v3)与v1)或v2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；
v4)在严格条件下与v1)或v2)限定的单链DNA杂交的单链DNA。
所述添加一个或几个核苷酸具体可添加一至五个核苷酸。
这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本发明的序列1-22中任一序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。
所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min；或，0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃条件下杂交并洗膜。
上述85％以上同一性，可为85％、90％或95％以上的同一性。
所述鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂的引物对均可由荧光物质标记。所述IAS01-P、所述IAS07-P、所述IAS11-P和所述IAS04-P均可由HEX标记。所述IAS03-P、所述IAS06-P、所述IAS08-P和所述IAS05-P均可由FAM标记。所述IAS13-P、所述IAS12-P和所述IAS14-P均可由TAMRA标记。
所述成套试剂的各引物对可单独使用，也可在一起使用，无论单独使用还是在一起使用，各引物对的配比均可根据具体需要确定。所述成套试剂各引物对中两条单链DNA的摩尔比均可为1:1。各引物对或各引物对的两条单链DNA均可独立包装。
为解决上述技术问题，本发明还提供了鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的***。
本发明所提供的鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的***，包括所述鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂。
所述***具体可由所述鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂与A1和/或A2组成；所述A1为进行PCR扩增所需的试剂和/或仪器；所述A2为进行微卫星标记基因分型所需的仪器和/或软件和/或模块。所述进行PCR扩增所需的试剂具体可为北京蕾创生物科技有限公司的2×Taq PCR MasterMix。所述进行微卫星标记基因分型所需的仪器可为ABIPRISM3730XL遗传分析仪。所述进行微卫星标记基因分型所需的软件可为GeneMapper V3.2软件。
为解决上述技术问题，本发明还提供了鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套分子标记。
本发明所提供的鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套分子标记，为成套标记3、成套标记2或成套标记1；
所述成套标记1由名称分别为IAS05、IAS07和IAS11的分子标记组成；
所述IAS05、所述IAS07和所述IAS11分别为以北京鸭基因组DNA为模板利用所述IAS05-P、所述IAS07-P和所述IAS11-P进行PCR扩增得到的DNA分子；
所述成套标记2由所述成套标记1和成套标记A组成；
所述成套标记A为名称为IAS06的分子标记和/或名称为IAS08的分子标记；
所述IAS06和所述IAS08分别为以北京鸭基因组DNA为模板利用所述IAS06-P和所述IAS08-P进行PCR扩增得到的DNA分子；
所述成套标记3由所述成套标记2与成套标记B组成；
所述成套标记B为名称分别为IAS12、IAS13、IAS04、IAS03、IAS01和IAS14的分子标记中的六种、任五种、任四种、任三种、任两种或任一种；
所述IAS12、所述IAS13、所述IAS04、所述IAS03、所述IAS01和所述IAS14分别为以北京鸭基因组DNA为模板利用所述IAS12-P、所述IAS13-P、所述IAS04-P、所述IAS03-P、所述IAS01-P和所述IAS14-P进行PCR扩增得到的DNA分子。
所述IAS05、所述IAS07、所述IAS11、所述IAS06、所述IAS08、所述IAS12、所述IAS13、所述IAS04、所述IAS03、所述IAS01和所述IAS14均为微卫星标记。
为解决上述技术问题，本发明还提供了鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的方法。
本发明所提供的鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的方法，包括：利用所述鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂分别检测待测子代北京鸭和待测亲本北京鸭的分子标记，根据所述分子标记鉴定所述待测子代北京鸭与所述待测亲本北京鸭是否具有亲子关系；
所述分子标记为所述鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套分子标记。
在实际应用中，确定所述分子标记具体为哪些标记时，可根据所述分子标记在待测北京鸭群体中的累积排除概率来确定，所述分子标记的累积排除概率只要满足大于等于0.99即可用于进一步具体的待测北京鸭个体间的亲子鉴定。
在鉴定待测北京鸭亲子关系时，(1)如所用分子标记为所述成套标记1，且累积排除概率大于等于0.99时，则需同时满足所用的分子标记均符合孟德尔遗传才可确定所述待测北京鸭具有亲子关系，即：(1a)累积排除概率大于等于0.99且所用的分子标记均符合孟德尔遗传时，所述待测北京鸭具有或候选具有亲子关系；(1b)累积排除概率大于等于0.99且所用的分子标记至少有一个不满足孟德尔遗传时，所述待测北京鸭不具有或候选不具有亲子关系。
(2)如所用分子标记为所述成套标记2，且累积排除概率大于等于0.99时，则需同时满足所用的分子标记完全符合孟德尔遗传才可确定所述待测北京鸭具有亲子关系，即：(2a)累积排除概率大于等于0.99且所用的分子标记均符合孟德尔遗传时，所述待测北京鸭具有或候选具有亲子关系；(2b)累积排除概率大于等于0.99且所用的分子标记至少有1个不符合孟德尔遗传时，所述待测北京鸭不具有或候选不具有亲子关系。
(3)如所用分子标记为所述成套标记3，且累积排除概率大于等于0.99时，则需同时满足所用的分子标记有不大于1个不符合孟德尔遗传才可确定所述待测北京鸭具有亲子关系，即：(3a)累积排除概率大于等于0.99且所用的分子标记有小于等于1个不符合孟德尔遗传时，所述待测北京鸭具有或候选具有亲子关系；(3b)累积排除概率大于等于0.99且所用的分子标记有大于等于2个不符合孟德尔遗传时，所述待测北京鸭不具有或候选不具有亲子关系。
上文中，增加所用分子标记的个数的目的是使累积排除概率大于等于0.99，在累积排除概率大于等于0.99时按照(2a)和(2b)确定所述待测北京鸭是否具有亲子关系。
上文中，在进一步增加所用分子标记的个数以进一步确定所述待测北京鸭是否具有亲子关系时，所增加的分子标记可依据排除概率从大到小顺序依次增加。
所增加的分子标记具体可按照表5的顺序依次增加，即可按照所述IAS05标记、所述IAS07标记、所述IAS11标记、所述IAS06标记、所述IAS08标记、所述IAS12标记、所述IAS13标记、所述IAS04标记、所述IAS03标记、所述IAS01标记和所述IAS14标记的顺序依次增加。
在本发明的一个实施例中，在检测待测北京鸭与待测父母对是否存在亲子关系时，所述分子标记为所述成套标记1的所述IAS05、所述IAS07和所述IAS11。
在待测子代北京鸭的一个亲本已知、鉴定待测亲本北京鸭是否为所述待测子代北京鸭的另一亲本时，所述分子标记为所述成套标记2的所述IAS05、所述IAS07、所述IAS11、所述IAS06和所述IAS08。
在待测子代北京鸭的一个亲本未知、鉴定待测亲本北京鸭是否为所述待测子代北京鸭的另一亲本时，所述分子标记为所述成套标记3的所述IAS05、所述IAS07、所述IAS11、所述IAS06、所述IAS08、所述IAS12、所述IAS13、所述IAS04、所述IAS03、所述IAS01和所述IAS14。
上述方法中，所述检测待测子代北京鸭和待测亲本北京鸭的分子标记可为检测所述待测子代北京鸭与所述待测亲本北京鸭所述分子标记的基因型或序列。
所述根据所述分子标记鉴定所述待测子代北京鸭与所述待测亲本北京鸭是否具有亲子关系可为根据所述待测子代北京鸭与所述待测亲本北京鸭所述分子标记的基因型或序列鉴定所述待测子代北京鸭与所述待测亲本北京鸭是否具有亲子关系。
所述根据所述分子标记鉴定所述待测子代北京鸭与所述待测亲本北京鸭是否具有亲子关系具体可为根据所述分子标记在所述待测子代北京鸭与所述待测亲本北京鸭间是否符合孟德尔遗传规律以及所述分子标记的累积排除概率，鉴定所述待测子代北京鸭与所述待测亲本北京鸭是否具有亲子关系。
在所述分子标记为所述成套标记1中的所述IAS05、所述IAS07和所述IAS11且累积排除概率大于0.99时，如这3个标记中至少有一个标记不符合孟德尔遗传，则所述待测亲本不为或候选不为所述待测子代的亲本；如这3个标记都符合孟德尔遗传，则所述待测亲本为或候选为所述待测子代的亲本。
在所述分子标记为所述成套标记2中的所述IAS05、所述IAS07、所述IAS11、所述IAS06和所述IAS08且累积排除概率大于0.99时，如这5个标记中有大于等于1个标记不符合孟德尔遗传，则所述待测亲本不为或候选不为所述待测子代的亲本；如5个标记均符合孟德尔遗传，则所述待测亲本为或候选为所述待测子代的亲本。
在所述分子标记为所述成套标记3中的所述IAS05、所述IAS07、所述IAS11、所述IAS06、所述IAS08、所述IAS12、所述IAS13、所述IAS04、所述IAS03、所述IAS01和所述IAS14且累积排除概率大于0.99时，如这11个标记中有大于等于2个标记不符合孟德尔遗传，则所述待测亲本不为或候选不为所述待测子代的亲本；如11个标记中有小于2个标记不符合孟德尔遗传，则所述待测亲本为或候选为所述待测子代的亲本。
上述方法中，所述利用成套试剂分别检测待测子代北京鸭和待测亲本北京鸭的分子标记，可为利用所述成套试剂分别对所述待测子代北京鸭和所述待测亲本北京鸭的基因组DNA进行PCR扩增检测所述分子标记。
上述方法中，在进行所述PCR扩增时，所述IAS05-P、所述IAS07-P、所述IAS11-P、所述IAS06-P、所述IAS08-P、所述IAS12-P、所述IAS13-P、所述IAS04-P、所述IAS03-P、所述IAS01-P和所述IAS14-P的退火温度均可为55-60℃。
上述方法中，所述IAS05-P的退火温度具体可为60℃。
所述IAS07-P的退火温度具体可为58.5℃。
所述IAS11-P的退火温度具体可为57.5℃。
所述IAS06-P的退火温度具体可为58℃。
所述IAS08-P的退火温度具体可为58.5℃。
所述IAS12-P的退火温度具体可为57.5℃。
所述IAS13-P的退火温度具体可为58℃。
所述IAS04-P的退火温度具体可为57.5℃。
所述IAS03-P的退火温度具体可为57.5℃。
所述IAS01-P的退火温度具体可为58.5℃。
所述IAS14-P的退火温度具体可为58.5℃。
在利用所述成套试剂中的各引物对进行所述PCR扩增的反应体系中，各单链DNA的浓度均可为0.4mM。
为解决上述技术问题，本发明还提供了下述任一应用：
X1、所述成套试剂在制备鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系产品中的应用；
X2、所述成套试剂在鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系中的应用；
X3、所述成套试剂在北京鸭育种中的应用；
X4、所述***在制备鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系产品中的应用；
X5、所述***在鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系中的应用；
X6、所述***在北京鸭育种中的应用；
X7、所述成套分子标记在鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系中的应用；
X8、所述成套分子标记在北京鸭育种中的应用；
X9、所述方法在北京鸭育种中的应用。
本发明中，在经过排除概率的评价后，所述成套试剂、所述***、所述成套分子标记和所述方法也均可用于其他品种的鸭群体。
本发明中，所述排除概率(Probability of paternity exclusion，PE)是评价遗传标记在亲子鉴定中实用价值大小的一个重要指标，是利用各标记的等位基因频率来计算候选亲本某标记的等位基因不是来自亲生父亲或亲生母亲的排除概率。所述累积排除概率(Combined exclusion probabilities)与所述排除概率可按照以下方法计算：
(1)当另一亲本信息未知时，排除子代与候选亲本是亲子关系的排除概率P为：
k个微卫星标记的累积排除概率CPE(1)的计算公式为：
CPE(1)＝1-(1-P1)(1-P2)(1-P3)…(1-Pk)，Pk为第k个微卫星标记的排除概率；
(2)当另一亲本信息已知时，排除子代与候选亲本是亲子关系的排除概率R为：
k个微卫星标记的累积排除概率CPE(2)的计算公式为：
CPE(2)＝1-(1-R1)(1-R2)(1-R3)…(1-Rk)，Rk为第k个微卫星标记的排除概率；
(3)排除子代与无关的候选父母对是亲子关系的排除概率Q为：
k个微卫星标记的累积排除概率CPE(3)的计算公式为：
CPE(3)＝1-(1-Q1)(1-Q2)(1-Q3)…(1-Qk)，Qk为第k个微卫星标记的排除概率。
其中，n代表每个微卫星标记的等位基因数，pi代表第i个微卫星标记的频率。
实验证明，本发明提供的鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂与成套分子标记可用于鉴定北京鸭，该成套分子标记中的11个标记多态性高，标记间不连锁且片段大小间隔适当，易于同时检测。利用本发明的成套试剂与成套分子标记在检测待测北京鸭与待测父母是否存在亲子关系时的累积排除概率可达0.999999，在待测子代北京鸭的一个亲本已知、鉴定待测亲本北京鸭是否为所述待测子代北京鸭的另一亲本时的累积排除概率可达0.99974，在待测子代北京鸭的一个亲本未知、鉴定待测亲本北京鸭是否为所述待测子代北京鸭的另一亲本时的累积排除概率可达0.991419。本发明还通过优化PCR扩增条件(如退火温度)和PCR扩增体系(如引物浓度)，建立了基于上述成套试剂与成套分子标记的微卫星标记基因分型方法。本发明的成套试剂与成套分子标记可用于北京鸭的完整、准确的系谱鉴定和个体识别，可校正发生混乱的北京鸭育种系谱，从而提高育种准确性和加快育种进程，具有良好的应用前景和经济效益。
附图说明
图1为IAS07标记和IAS08标记的基因型分型。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂、仪器等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂能用于鉴定北京鸭亲子鉴定
一、鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂的制备
本实施例提供的鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂，为成套试剂1、成套试剂2和成套试剂3；
成套试剂1由名称分别为IAS05-P、IAS07-P和IAS11-P的引物对组成；IAS05-P由名称分别为IAS05-F和IAS05-R的单链DNA组成；IAS07-P由名称分别为IAS07-F和IAS07-R的单链DNA组成；IAS11-P由名称分别为IAS11-F和IAS11-R的单链DNA组成；
成套试剂2由成套试剂1和试剂A组成；试剂A由名称分别为IAS06-P和IAS08-P的引物对组成；IAS06-P由名称分别为IAS06-F和IAS06-R的单链DNA组成；IAS08-P由名称分别为IAS08-F和IAS08-R的单链DNA组成；
成套试剂3由成套试剂2和试剂B组成；试剂B由名称分别为IAS12-P、IAS13-P、IAS04-P、IAS03-P、IAS01-P和IAS14-P的引物对组成；IAS12-P由名称分别为IAS12-F和IAS12-R的单链DNA组成；IAS13-P由名称分别为IAS13-F和IAS13-R的单链DNA组成；IAS04-P由名称分别为IAS04-F和IAS04-R的单链DNA组成；IAS03-P由名称分别为IAS03-F和IAS03-R的单链DNA组成；IAS01-P由名称分别为IAS01-F和IAS01-R的单链DNA组成；IAS14-P由名称分别为IAS14-F和IAS14-R的单链DNA组成。
各引物对的PCR产物具有不同片段长度、处于不同染色***置，属于11种不同的微卫星标记，将其分别命名为IAS05标记、IAS07标记、IAS11标记、IAS06标记、IAS08标记、IAS12标记、IAS13标记、IAS04标记、IAS03标记、IAS01标记和IAS14标记。各引物对中两条单链DNA的摩尔比均为1:1，各引物对的两条单链DNA均独立包装，各引物对均由荧光物质标记，具体信息如表1所示。
表1、鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂各引物对的具体信息
二、鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂的排除概率
分别提取中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京鸭保种场的96只北京鸭的基因组DNA，以基因组DNA为模板利用各引物对和退火温度进行PCR扩增，PCR扩增利用经过优化的反应体系(表2)及优化后的反应条件(表3)。将PCR产物经ABI PRISM3730XL遗传分析仪进行电泳与测序后，利用GeneMapper V3.2软件，设定分子量标准条带后，根据遗传分析仪所收集电泳荧光信号的颜色和位置，自动计算各微卫星标记的基因型。图1以IAS07标记和IAS08标记为例，该图中IAS07-P(FAM，荧光绿)标记为杂合子，片段大小为(254bp，276bp)；IAS08-P(HEX，荧光蓝)标记为纯合子，片段大小为(157bp，157bp)。
表2、PCR反应体系
注：表2中，2×Taq PCR MasterMix为北京蕾创生物科技有限公司产品，组成成分包括：0.1units/ml的Taq DNA Polymerase(recombinant)，4mM的MgCl2，dNTPs(dATP、dCTP、dGTP和dTTP，每种dNTP的浓度均为0.5mM)，其它稳定剂和增强剂；蓝色染料。
表3、PCR反应循环条件
微卫星标记的群体遗传学分析：
应用Cervus 3.07软件统计11个微卫星标记遗传多态性参数，包括等位基因数、观测杂合度、期望杂合度和多态信息含量，统计结果见表4。11个微卫星标记等位基因数在4～13个，均表现高度多态性；各标记的观测杂合度在0.551～0.859之间，期望杂合度在0.585～0.856之间，且每个微卫星标记的观测杂合度和期望杂合度差值不大，在0.004～0.138之间，说明各微卫星标记的等位基因分布合理，能够准确的反映群体的遗传结构。各标记的多态信息含量(PIC)在0.545～0.834之间，说明这11个微卫星标记在鉴定北京鸭中具有较高的应用价值。
表4、 11个微卫星标记的遗传多态性
标记 等位基因数 观测杂合度 期望杂合度 多态信息含量
IAS01标记 7 0.641 0.614 0.571
IAS03标记 4 0.615 0.647 0.582
IAS04标记 5 0.551 0.673 0.627
IAS05标记 13 0.718 0.856 0.834
IAS14标记 5 0.564 0.585 0.545
IAS07标记 8 0.808 0.838 0.811
IAS08标记 7 0.615 0.745 0.708
IAS12标记 5 0.769 0.738 0.691
IAS11标记 8 0.859 0.835 0.807
IAS06标记 8 0.756 0.764 0.722
IAS13标记 4 0.718 0.714 0.66
根据各微卫星标记的等位基因频率，计算所检测标记的排除概率及累积排除概率(Combined exclusion probabilities)。排除概率(Probability of paternityexclusion，PE)是评价遗传标记在亲子鉴定中实用价值大小的一个重要指标，是利用各标记的等位基因频率来计算候选亲本某标记的等位基因不是来自亲生父亲或亲生母亲的排除概率。排除概率与累积排除概率按照以下三种情况计算：
(1)当另一亲本信息未知时，排除子代与候选亲本是亲子关系的排除概率P为：
k个微卫星标记的累积排除概率CPE(1)的计算公式为：
CPE(1)＝1-(1-P1)(1-P2)(1-P3)…(1-Pk)，Pk为第k个微卫星标记的排除概率；
(2)当另一亲本信息已知时，排除子代与候选亲本是亲子关系的排除概率R为：
k个微卫星标记的累积排除概率CPE(2)的计算公式为：
CPE(2)＝1-(1-R1)(1-R2)(1-R3)…(1-Rk)，Rk为第k个微卫星标记的排除概率；
(3)排除子代与无关的候选父母对是亲子关系的排除概率Q为：
k个微卫星标记的累积排除概率CPE(3)的计算公式为：
CPE(3)＝1-(1-Q1)(1-Q2)(1-Q3)…(1-Qk)，Qk为第k个微卫星标记的排除概率。
其中，n代表每个微卫星标记的等位基因数，pi代表第i个微卫星标记的频率。
亲子鉴定是基于孟德尔遗传的两个基本定律：分离和自由组合归律。子代的两个等位基因一个来自父亲，一个来自母亲。通过结果分析，如果符合孟德尔遗传定律，则不能排除具有亲子关系，否则可以排除其亲子关系。根据孟德尔遗传定律，后代染色体上的全部基因，一半遗传于其亲生父亲，一半遗传于其亲生母亲。因此，在应用微卫星标记进行亲子鉴定时，(i)肯定子代的某个标记基因型来自亲生亲本，而候选亲本并不携带此标记基因型，这就违背了孟德尔遗传定律，可以排除子代与候选亲本之间的亲子关系；(ii)肯定子代的某个标记基因型来自亲生亲本，而候选亲本也携带此标记基因型，则符合孟德尔遗传定律，因此不能排除子代与候选亲本之间的亲缘关系。
计算每个候选亲本在所有微卫星标记排除概率(表5)，由表5可知，IAS05标记的排除概率最高为0.543，IAS14、IAS01、IAS03标记的排除概率相对较低。通过计算累积排除概率(表6)，由表6可知，这11个微卫星标记在三种不同情况下，累积排除概率CPE(1)、CPE(2)、CPE(3)分别高达0.9914、0.9997、0.999999，说明这11个微卫星标记亲子鉴定效力极高。
表5、 11个微卫星标记的排除概率
标记 P R Q
IAS05标记 0.543 0.706 0.875
IAS07标记 0.496 0.667 0.842
IAS11标记 0.486 0.659 0.833
IAS06标记 0.365 0.543 0.728
IAS08标记 0.352 0.534 0.731
IAS12标记 0.326 0.504 0.689
IAS13标记 0.286 0.459 0.635
IAS04标记 0.262 0.439 0.63
IAS03标记 0.219 0.376 0.541
IAS01标记 0.215 0.388 0.579
IAS14标记 0.191 0.363 0.551
表6、微卫星标记累积排除概率
标记 CPE(1) CPE(2) CPE(3)
IAS05标记 0.543 0.706 0.875
IAS07标记 0.769672 0.902098 0.98025
IAS11标记 0.881611 0.966615 0.996702
IAS06标记 0.924823 0.984743 0.999103
IAS08标记 0.951285 0.99289 0.999759
IAS12标记 0.967166 0.996474 0.999925
IAS13标记 0.976557 0.998092 0.999973
IAS04标记 0.982699 0.99893 0.99999
IAS03标记 0.986488 0.999332 0.999995
IAS01标记 0.989393 0.999591 0.999998
IAS14标记 0.991419 0.99974 0.999999
注：表6中，与微卫星标记同行的CPE(1)均为另一亲本信息未知时，该行标记与该标记上方标记的累积排除概率，如与IAS05标记同行的CPE(1)为0.543，0.543为IAS05标记在另一亲本信息未知时的排除概率，与IAS12标记同行的CPE(1)为0.967166，0.967166为在另一亲本信息未知时IAS05标记、IAS07标记、IAS11标记、IAS06标记、IAS08标记和IAS12标记的累积排除概率，如与IAS14标记同行的CPE(1)为0.991419，0.991419为在另一亲本信息未知时这11个微卫星标记的累积排除概率。CPE(2)和CPE(3)同CPE(1)。
将11个微卫星标记按照单个标记排除概率的高低进行排序(顺序见表5)，然后划分为不同标记数目的标记组合，分别含1-11个标记。在实际应用中，所用含N(1≤N≤11)个标记的微卫星标记组合中的微卫星标记是按照排除概率排序名称靠前的N个标记，以保证标记数目一定的情况下，获得最大的累积排除概率。
由表6可知，在不同应用场景下，微卫星标记的鉴定效力是不同的。微卫星标记数目为11时单亲累积排除概率(即在另一亲本信息未知时的累积排除概率)大于0.99，而对于第二亲本信息已知和候选父母对的鉴定，则只分别需要前5个微卫星标记(即IAS05标记、IAS07标记、IAS11标记、IAS06标记和IAS08标记)和前3个微卫星标记(即IAS05标记、IAS07标记和IAS11标记)，即可使累积排除概率大于0.99；因此，依据亲子鉴定累积排除概率不低于0.99的标准，为降低检测成本，在实际应用时所需要选择的微卫星标记分别为：(1)当另一亲本信息未知时，检测待测子代与待测亲本是否为亲子关系需应用全部11个微卫星标记(即由IAS05标记、IAS07标记、IAS11标记、IAS06标记、IAS08标记、IAS12标记、IAS13标记、IAS04标记、IAS03标记、IAS01标记和IAS14标记组成的成套标记3)；(2)当另一亲本信息已知时，检测待测子代与待测亲本是否为亲子关系需要应用前5个微卫星标记(即由IAS05标记、IAS07标记、IAS11标记、IAS06标记和IAS08标记组成的成套标记2)；(3)排除待测子代与待测父母对是否为亲子关系时，则只需要应用前3个微卫星标记(即由IAS05标记、IAS07标记和IAS11标记组成的成套标记1)。
在进行具体检测时，当另一亲本信息未知时，利用步骤一中的成套试剂3对待测亲本与待测子代基因组DNA进行检测，确定待测亲本与待测子代成套标记中11个微卫星标记的基因型，根据其基因型确定该待测亲本是否为该待测子代的亲本：如11个微卫星标记中有大于等于2个标记不符合孟德尔遗传，则该待测亲本非该待测子代的亲本；如11个微卫星标记中有小于2个标记不符合孟德尔遗传，则该待测亲本为该待测子代的亲本；
当另一亲本信息已知时，利用步骤一中的成套试剂2对待测亲本与待测子代基因组DNA进行检测，确定待测亲本与待测子代成套标记2这5个微卫星标记的基因型，根据其基因型确定该待测亲本是否为该待测子代的亲本：如5个微卫星标记中至少有1个标记不符合孟德尔遗传，则该待测亲本非该待测子代的亲本；如5个微卫星标记均符合孟德尔遗传，则该待测亲本为该待测子代的亲本；
排除子代与无关的候选父母对是亲子关系时，利用步骤一中的成套试剂1对待测父母对的每个候选亲本与待测子代基因组DNA进行检测，确定待测父母对的每个候选亲本与待测子代成套标记1中这3个微卫星标记的基因型，根据其基因型确定该待测父母对是否为待测子代的亲本：针对该待测父母对中的每个待测亲本，如3个微卫星标记中有至少1个标记不符合孟德尔遗传，则该待测父母对中的该待测亲本非待测子代的亲本；如3个微卫星标记都符合孟德尔遗传，则该待测父母对中的该待测亲本为待测子代的亲本。
三、微卫星标记组合的亲子鉴定效力检验
Cervus软件可以通过亲权模拟(simulation)来评估可信度。模拟的目的是通过比较大量随机后代的LOD值，得到大量的Delta分布(模拟10,000次)。通过比较最可能亲本(most-likely parent)是真正亲本(true parent)时Delta分布与最可能亲本不是真正亲本时Delta分布，得到Delta关键值，假如这个关键值是在特定可信度水平如95％确定的，那么当分析真实数据的亲权关系时，最可能亲本的LOD值超过Delta关键值，其亲权鉴定的可信度即为可信度95％。
应用上文11个微卫星标记对步骤二的96只北京鸭的基因型分型结果进行模拟亲子鉴定，抽样10000次。结果显示，当一个亲本已知时，Delta关键值为0，鉴定成功率达到99％，可信度大于95％；当没有亲本信息时，Delta关键值为1.05，鉴定成功率达到87％，可信度大于95％。
从中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京鸭保种场的北京鸭群体中随机选择系谱记录准确的6对亲子对(E01与D07，E03与D03，E04与D03，E06与C02，E07与D01，E09与A11，每一亲子对中子代的另一亲本信息均未知)和1个无关公鸭(F01)，分别提取上基因组DNA，利用实施例1的成套试剂3按照实施例1的方法进行PCR扩增，在ABI PRISM3730XL遗传分析仪上检测，并确定各对象各微卫星标记的基因型。
通过对它们11个微卫星标记基因型的分析，应用似然法鉴定它们之间的亲子关系。鉴定结果与实际系谱一致，LOD值从3.64～8.32，且置信度均达到95％(表7)。而无关公鸭作为候选父亲时，LOD值均小于0，表示它不可能是各子代的亲生父亲。此结果进一步验证了该微卫星标记组合可以作为北京鸭亲子鉴定的检测体系，检测结果准确可信。
表7、LOD值
实施例2、鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂在北京鸭亲子关系鉴定中的应用
从中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京鸭保种场的北京鸭群体中选择了3只北京鸭，编号分别为E03、E07和C12，现已知编号为E07的北京鸭为编号为C12(公)的北京鸭的子代，编号为E03的北京鸭与E07无亲缘关系(即为无关父亲)。下面将E03与C12作为E07候选父亲，对实施例1的成套试剂能用于鉴定北京鸭亲子关系进行验证。
分别提取上述3只北京鸭的基因组DNA，利用实施例1的成套试剂3按照实施例1的方法进行PCR扩增，在ABI PRISM3730XL遗传分析仪上检测，并确定各样本各微卫星标记的基因型，结果见表8。
表8、检测结果
在被检测的11个微卫星标记中，除IAS11标记外，候选子代E07和候选父亲C12的IAS01标记、IAS03标记、IAS04标记、IAS05标记、IAS14标记、IAS07标记、IAS08标记、IAS12标记、IAS06标记和IAS13标记均完全符合孟德尔遗传，根据前述判定标准，E07与候选父亲C12存在亲子关系；而E07和候选父亲E03有5个标记(IAS07、IAS08、IAS12、IAS13、IAS04))不符合孟德尔遗传规律，故排除子代E07与候选父亲E03的亲子关系。该检测结果与实际情况完全一致。
<110> 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
<120> 鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂与方法
<160> 22
<170> PatentIn version 3.5
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 12
ccaacagaat cacaaagcac a 21
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 13
tccctgatct aaggtccctg 20
<210> 14
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 14
tcaaggcaac aaagaatcac tg 22
<210> 15
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 15
cagccaggat taaaaccaga 20
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 16
taggagatct gtcggccact 20
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 17
aaacactttg gggctttttg 20
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 18
ccacaccgat tttcatcaca 20
<210> 19
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 19
actagggaac aaggcagggt 20
<210> 20
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 20
ctctcccaca ccagaccaat 20
<210> 21
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 21
caactactcc gtggtcagca 20
<210> 22
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 22
agcaacgacc tctactccca 20

Claims (17)

1.鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂，为成套试剂3、成套试剂2或成套试剂1；
所述成套试剂1由名称分别为IAS05-P、IAS07-P和IAS11-P的引物对组成；
所述IAS05-P由名称分别为IAS05-F和IAS05-R的单链DNA组成；
所述IAS05-F是序列表中序列1所示的单链DNA；
所述IAS05-R是序列表中序列2所示的单链DNA；
所述IAS07-P由名称分别为IAS07-F和IAS07-R的单链DNA组成；
所述IAS07-F是序列表中序列3所示的单链DNA；
所述IAS07-R是序列表中序列4所示的单链DNA；
所述IAS11-P由名称分别为IAS11-F和IAS11-R的单链DNA组成；
所述IAS11-F是序列表中序列5所示的单链DNA；
所述IAS11-R是序列表中序列6所示的单链DNA；
所述成套试剂2由所述成套试剂1和试剂A组成；
所述试剂A为名称为IAS06-P的引物对和/或名称为IAS08-P的引物对；
所述IAS06-P由名称分别为IAS06-F和IAS06-R的单链DNA组成；
所述IAS06-F是如序列表中序列7所示的单链DNA；
所述IAS06-R是序列表中序列8所示的单链DNA；
所述IAS08-P由名称分别为IAS08-F和IAS08-R的单链DNA组成；
所述IAS08-F是序列表中序列9所示的单链DNA；
所述IAS08-R是序列表中序列10所示的单链DNA；
所述成套试剂3由所述成套试剂2和试剂B组成；
所述试剂B为名称分别为IAS12-P、IAS13-P、IAS04-P、IAS03-P、IAS01-P和IAS14-P的引物对中的六种、任五种、任四种、任三种、任两种或任一种；
所述IAS12-P由名称分别为IAS12-F和IAS12-R的单链DNA组成；
所述IAS12-F是序列表中序列11所示的单链DNA；
所述IAS12-R是序列表中序列12所示的单链DNA；
所述IAS13-P由名称分别为IAS13-F和IAS13-R的单链DNA组成；
所述IAS13-F是序列表中序列13所示的单链DNA；
所述IAS13-R是序列表中序列14所示的单链DNA；
所述IAS04-P由名称分别为IAS04-F和IAS04-R的单链DNA组成；
所述IAS04-F是序列表中序列15所示的单链DNA；
所述IAS04-R是序列表中序列16所示的单链DNA；
所述IAS03-P由名称分别为IAS03-F和IAS03-R的单链DNA组成；
所述IAS03-F是序列表中序列17所示的单链DNA；
所述IAS03-R是序列表中序列18所示的单链DNA；
所述IAS01-P由名称分别为IAS01-F和IAS01-R的单链DNA组成；
所述IAS01-F是序列表中序列19所示的单链DNA；
所述IAS01-R是序列表中序列20所示的单链DNA；
所述IAS14-P由名称分别为IAS14-F和IAS14-R的单链DNA组成；
所述IAS14-F是序列表中序列21所示的单链DNA；
所述IAS14-R是序列表中序列22所示的单链DNA。
2.鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的***，包括权利要求1所述的成套试剂。
3.鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套分子标记，为成套标记3、成套标记2或成套标记1；
所述成套标记1由名称分别为IAS05、IAS07和IAS11的分子标记组成；
所述IAS05为以北京鸭基因组DNA为模板利用权利要求1中所述IAS05-P进行PCR扩增得到的DNA分子；
所述IAS07为以北京鸭基因组DNA为模板利用权利要求1中所述IAS07-P进行PCR扩增得到的DNA分子；
所述IAS11为以北京鸭基因组DNA为模板利用权利要求1中所述IAS11-P进行PCR扩增得到的DNA分子；
所述成套标记2由所述成套标记1和成套标记A组成；
所述成套标记A为名称为IAS06的分子标记和/或名称为IAS08的分子标记；
所述IAS06为以北京鸭基因组DNA为模板利用权利要求1中所述IAS06-P进行PCR扩增得到的DNA分子；
所述IAS08为以北京鸭基因组DNA为模板利用权利要求1中所述IAS08-P进行PCR扩增得到的DNA分子；
所述成套标记3由所述成套标记2与成套标记B组成；
所述成套标记B为名称分别为IAS12、IAS13、IAS04、IAS03、IAS01和IAS14的分子标记中的六种、任五种、任四种、任三种、任两种或任一种；
所述IAS12为以北京鸭基因组DNA为模板利用权利要求1中所述IAS12-P进行PCR扩增得到的DNA分子；
所述IAS13为以北京鸭基因组DNA为模板利用权利要求1中所述IAS13-P进行PCR扩增得到的DNA分子；
所述IAS04为以北京鸭基因组DNA为模板利用权利要求1中所述IAS04-P进行PCR扩增得到的DNA分子；
所述IAS03为以北京鸭基因组DNA为模板利用权利要求1中所述IAS03-P进行PCR扩增得到的DNA分子；
所述IAS01为以北京鸭基因组DNA为模板利用权利要求1中所述IAS01-P进行PCR扩增得到的DNA分子；
所述IAS14为以北京鸭基因组DNA为模板利用权利要求1中所述IAS14-P进行PCR扩增得到的DNA分子。
4.鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的方法，包括：利用成套试剂分别检测待测子代北京鸭和待测亲本北京鸭的分子标记，根据所述分子标记鉴定所述待测子代北京鸭与所述待测亲本北京鸭是否具有亲子关系；
所述成套试剂为权利要求1所述的鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套试剂；
所述分子标记为权利要求3所述的鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系的成套分子标记。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述根据所述分子标记鉴定所述待测子代北京鸭与所述待测亲本北京鸭是否具有亲子关系为根据所述待测子代北京鸭与所述待测亲本北京鸭所述分子标记的基因型或序列鉴定所述待测子代北京鸭与所述待测亲本北京鸭是否具有亲子关系。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于：所述利用成套试剂分别检测待测子代北京鸭和待测亲本北京鸭的分子标记，为利用所述成套试剂分别对所述待测子代北京鸭和所述待测亲本北京鸭的基因组DNA进行PCR扩增检测所述分子标记。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：在进行所述PCR扩增时，所述IAS05-P、所述IAS07-P、所述IAS11-P、所述IAS06-P、所述IAS08-P、所述IAS12-P、所述IAS13-P、所述IAS04-P、所述IAS03-P、所述IAS01-P和所述IAS14-P的退火温度均为55-60℃。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：在进行所述PCR扩增时，所述IAS05-P的退火温度为60℃；
和/或，所述IAS07-P的退火温度为58.5℃；
和/或，所述IAS11-P的退火温度为57.5℃；
和/或，所述IAS06-P的退火温度为58℃；
和/或，所述IAS08-P的退火温度为58.5℃；
和/或，所述IAS12-P的退火温度为57.5℃；
和/或，所述IAS13-P的退火温度为58℃；
和/或，所述IAS04-P的退火温度为57.5℃；
和/或，所述IAS03-P的退火温度为57.5℃；
和/或，所述IAS01-P的退火温度为58.5℃；
和/或，所述IAS14-P的退火温度为58.5℃。
9.权利要求1所述的成套试剂在制备鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系产品中的应用。
10.权利要求1所述的成套试剂在鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系中的应用。
11.权利要求1所述的成套试剂在北京鸭育种中的应用。
12.权利要求2所述的***在制备鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系产品中的应用。
13.权利要求2所述的***在鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系中的应用。
14.权利要求2所述的***在北京鸭育种中的应用。
15.权利要求3所述的成套分子标记在鉴定或辅助鉴定北京鸭亲子关系中的应用。
16.权利要求3所述的成套分子标记在北京鸭育种中的应用。
17.权利要求4-8中任一所述的方法在北京鸭育种中的应用。
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