CN106749474B - 一种提取鹅去氧胆酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提取鹅去氧胆酸的方法，属于生物工程技术领域。该方法包括如下步骤：(1)制备胆汁酸钠盐、(2)制备胆汁酸氨盐、(3)萃取分离胆汁酸氨盐溶液、(4)盐析、碱解。该方法提取鹅去氧胆酸时利用鹅去氧胆酸和胆酸的氨盐在丁酯类溶剂中，在有机酸的调节下，鹅去氧胆酸氨盐和胆酸氨盐有明显的溶解度差异，使得鹅去氧胆酸氨盐和胆酸氨盐进行粗分离，并且通过粗分离将胆酸的含量降低至3％以下；并进一步利用鹅去氧胆酸胺盐和胆酸胺盐在高浓度丁酯类溶剂和二氯甲烷的水溶液体系中，存在较大的溶解差异，再次实现胆酸的清除处理，从而精致纯化鹅去氧胆酸，将胆酸的含量降低至0.2％以内，大大提高了鹅去氧胆酸的提取率。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，特别是指一种提取鹅去氧胆酸的方法。
背景技术
胆汁酸中的鹅去氧胆酸具有降低胆汁内胆固醇饱和度的作用，从而对胆囊结石病有较好的治疗效果。并且鹅去氧胆酸是制备熊去氧胆酸的原料，而鹅去氧胆酸中的胆酸含量一般大于5％，为鹅去氧胆酸中的主要杂质，必将影响鹅去氧胆酸制备熊去氧胆酸的转化率，因此，从胆汁酸中提取鹅去氧胆酸后进一步清除胆酸，是提纯鹅去氧胆酸的重要步骤。
目前清楚鹅去氧胆酸的常规方法是洗涤法，此法虽然操作简单，但洗涤清除速度慢、效率低、有效成分损耗大，并产生大量水相要处理。而且有效成分也会随着水相流失，造成生物资源浪费，这些都将给生产成本和环保污水处理带来很大压力。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提出一种提取鹅去氧胆酸的方法，该方法利用鹅去氧胆酸氨盐和胆酸氨盐在丁酯类溶剂的环境下，在有机酸酸度的调节下，因为存在明显的溶解度差异而实现两种氨盐粗分离；并且通过以三乙醇胺作为络合沉淀剂，利用沉淀后鹅去氧胆酸胺盐和胆酸胺盐在丁酯类溶剂与二氯甲烷的混合溶剂中溶解度的差异而实现鹅去氧胆酸的精制提取。该提取方法高效、低成本且清除效果好、收率高。
基于上述目的本发明提供的一种提取鹅去氧胆酸的方法，包括如下步骤：(1)制备胆汁酸盐：取胆汁酸原料，皂化，调节pH至6.0～7.0，得胆汁酸盐溶液；(2)制备胆汁酸氨盐：向步骤(1)制备的胆汁酸盐溶液中加入氨水溶液，加热至溶液中无固体物质后回流，冷却，得胆汁酸氨盐溶液；(3)萃取分离胆汁酸氨盐溶液：向步骤(2)制备的胆汁酸氨盐溶液中加入丁酯类溶剂，加热至45℃～55℃，加有机酸调节溶液pH静置分液，收集上层液体，脱色、冷却、压滤，得滤液，备用；(4)盐析、碱解：向步骤(3)制备的滤液中加入N,N-二甲基酰胺，加热至65℃～75℃，沉淀，冷却至45℃～55℃，压滤，得鹅去氧胆酸胺盐沉淀；然后加水和氢氧化钠加热碱解，回收N,N-二甲基酰胺，冷却，调pH至3～3.5，得鹅去氧胆酸粗品，精制提纯得高纯度鹅去氧胆酸；
根据本发明的一种提取鹅去氧胆酸的方法，所述步骤(4)中精制提纯是向鹅去氧胆酸粗品中加水和三乙醇胺，搅拌溶解，然后加入丁酯类溶剂和二氯甲烷，加热回流，冷却，压滤，得鹅去氧胆酸精制胺盐，然后碱解、中和，得高纯度鹅去氧胆酸。
根据本发明的一种提取鹅去氧胆酸的方法，所述步骤(1)中皂化温度为90℃～95℃，皂化后溶液pH为11～13。
根据本发明的一种提取鹅去氧胆酸的方法，所述步骤(3)中丁酯类溶剂为乙酸丁酯、甲酸丁酯中的一种或两种。
根据本发明的一种提取鹅去氧胆酸的方法，所述步骤(3)中有机酸为丁酸、乙酸中的一种或两种。
根据本发明的一种提取鹅去氧胆酸的方法，所述步骤(3)中脱色采用的是活性炭。
根据本发明的一种提取鹅去氧胆酸的方法，所述步骤(3)中加有机酸调节溶液pH至6.2～6.4。
根据本发明的一种提取鹅去氧胆酸的方法，所述步骤(3)中加有机酸调节溶液pH至5.2～5.4。
根据本发明的一种提取鹅去氧胆酸的方法，所述步骤(4)中强碱为氢氧化钠、氢氧化钾中的一种或两种。
本发明中提取鹅去氧胆酸时，通过皂化反应可以使由胆膏提取而来的胆汁酸原料再次提取，以达到类脂类物质充分水解、原料均质等效果。皂化反应后所得的溶液呈强碱性，通过加入稀盐酸调节溶液为偏弱酸性至中性环境以利于由胆汁酸盐向胆汁酸氨盐的反应；加入氨水调节后，生成的胆汁酸氨盐溶液的pH值为8.5～9.0，有利于后续提取过程的进行。
本发明步骤(3)中鹅去氧胆酸和胆酸的氨盐在丁酯类溶剂中，在有机酸的调节下，鹅去氧胆酸氨盐和胆酸氨盐有明显的溶解度差异，从而鹅去氧胆酸氨盐和胆酸氨盐进行了粗分离。
本发明步骤(3)中在胆汁酸氨盐溶液中加入丁酯溶剂后，需要加热至45℃～55℃，如果温度低于该范围，则达不到将鹅去氧胆酸氨盐和胆酸氨盐粗分离的效果，如果温度高于该范围，则有机溶剂挥发，污染环境，并造成溶剂浪费，增加生产成本。
本发明步骤(4)中在加入N,N-二甲基酰胺后，加热至65℃～75℃，如果温度低于该范围，则鹅去氧胆酸氨盐和N,N-二甲基酰胺不会发生反应，如果温度高于该范围，则N,N-二甲基酰胺等有机溶剂挥发，造成有机溶剂浪费，增加生产成本，并污染环境。
本发明步骤(4)中在加入N,N-二甲基酰胺反应完全后，需要冷却至45℃～55℃，如果温度低于该范围，则得到的鹅去氧胆酸胺盐沉淀会出现粘连现象，如果温度高于该范围，则会出现有机溶剂挥发现象，造成浪费，增加生产成本，并污染环境。
本发明步骤(4)中对鹅去氧胆酸粗品进行精制提纯时，进一步以三乙醇胺作为络合沉淀剂，利用沉淀后鹅去氧胆酸胺盐和胆酸胺盐在高纯度丁酯类溶剂与二氯甲烷的混合溶剂中溶解度的差异而实现鹅去氧胆酸的精制提取。
本发明步骤(4)中对鹅去氧胆酸胺盐沉淀进行碱解时，在反应完全后，调节溶液pH至3～3.5，如果pH高于该范围，则中和不完全，导致有效物质流失，不能充分得到鹅去氧胆酸粗品，如果pH低于该范围，则造成酸浪费，增加生产成本。
从上面所述可以看出，本发明的优点和有益效果是：
(1)本发明利用胆汁酸中的鹅去氧胆酸和胆酸的氨盐在丁酯类溶剂中，在有机酸的调节下，鹅去氧胆酸氨盐和胆酸氨盐有明显的溶解度差异，使得鹅去氧胆酸氨盐和胆酸氨盐进行粗分离，并且通过粗分离将胆酸的含量降低至3％以下，低于胆酸在鹅去氧胆酸中含量的常规标准。
(2)本发明中利用鹅去氧胆酸胺盐和胆酸胺盐在丁酯类溶剂和二氯甲烷的水溶液体系中，存在较大的溶解差异，再次实现胆酸的清除处理，从而精制纯化鹅去氧胆酸，将胆酸的含量降低至0.2％以内，并大大提高了鹅去氧胆酸的提取率。
(3)本发明在提取鹅去氧胆酸过程中分离出的胆酸纯度高，可以直接用于生产胆酸下游产品，例如，用于生产培养基的胆盐、胆粉等；并且高纯度胆酸用于合成鹅去氧胆酸，价值更高。
(4)本发明在提取鹅去氧胆酸的整个过程中产生的污水可控，其化学需氧量均能达到当地环保部门的排放标准。
(5)本发明鹅去氧胆酸提取过程中的母液能够通过萃取循环利用，很大程度上减少了鹅去氧胆酸的流失。
(6)本发明提取鹅去氧胆酸使用的丁酯类溶剂沸点高，不易挥发，属于低风险溶剂，提高了操作安全性。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进一步详细说明。
实施例1
一种提取鹅去氧胆酸的方法，包括如下步骤：
(1)制备胆汁酸盐：取由鸡胆膏提取制得的胆汁酸原料320公斤，皂化，采用冷却水冷却皂化后所得溶液至室温，然后继续开启冷却水，采用质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节溶液pH至6.5，得胆汁酸盐溶液；其中，进行皂化反应时，是将320公斤由鸡胆膏提取制得的胆汁酸原料投入5000L不锈钢溶解釜中，加水1600公斤，边搅拌边加入64公斤氢氧化钠，加热至沸，待胆汁酸原料和氢氧化钠充分溶解后，常压下，90℃皂化5小时；皂化后，所得溶液pH为11。
(2)制备胆汁酸氨盐：向步骤(1)制备的胆汁酸盐溶液中边搅拌边加入16公斤、质量百分比浓度为30％的氨水溶液，搅拌加热至溶液中无固体物质后回流2小时，冷却至50℃，得胆汁酸氨盐溶液，溶液pH为8.5；
(3)萃取分离胆汁酸氨盐溶液：向步骤(2)制备的胆汁酸氨盐溶液中加入1920公斤乙酸丁酯，蒸汽加热至50℃，边搅拌边缓慢加入丁酸至溶液pH为6.3；静置分液2小时，收集上层液体1于釜中，下层液体泵入1号3800L的不锈钢溶解釜中，下层液体中加入960公斤乙酸丁酯，加热至50℃，边搅拌边缓慢加入丁酸至溶液pH至5.4；静置分液2小时，收集上层液体2，并将第二次萃取的下层液体泵入1号3000L不锈钢浓缩釜中；将上层液体2泵入第一次萃取使用的5000L的不锈钢溶解釜中，将上层液体1和上次液体2合并，加入8公斤活性炭，加热回流1.5小时脱色，冷却至50℃，采用10平米的嵌入式压滤机压滤，得压滤液，将压滤液泵入2号3800L不锈钢釜中备用；
将第二次萃取的下层液体送检，通过薄层色谱法检测液体中鹅去氧胆酸和胆酸的比例为1:9，高效液相色谱检测鹅去氧胆酸的含量为2％；将第二次萃取的下层液体在温度为80℃、真空度为0.38个大气压的条件下进行真空浓缩乙酸丁酯，共收集到210公斤乙酸丁酯，然后将浓缩后剩余的液体冷却至室温，边搅拌边加入质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节溶液pH至3.5，然后静置24小时，用1000型不锈钢离心机离心，得离心液和沉淀物，将沉淀物放入气流沸腾床干燥，得水分含量为3％的胆酸13公斤。
(4)盐析、碱解：向步骤(3)制备的压滤液中加入22.4公斤N,N-二甲基酰胺，搅拌加热至70℃反应30分钟，沉淀，冷却至50℃，压滤，分别收集压滤液和滤饼，收集得230公斤滤饼，即得鹅去氧胆酸胺盐沉淀；将鹅去氧胆酸胺盐沉淀投入2号3000L不锈钢釜中，然后加250公斤水，真空浓缩乙酸乙酯，再加入460公斤水和34.5公斤的氢氧化钠加热碱解，回收N,N-二甲基酰胺，剩余溶液冷却至室温，加质量百分比浓度为10％的稀盐酸调溶液pH至3.5，然后用1000型不锈钢离心机离心，离心液送污水站处理，离心得鹅去氧胆酸粗品260公斤，送气流沸腾床干燥，得干燥的鹅去氧胆酸162公斤；送检，得样品鹅去氧胆酸质量为：含水量为1％，鹅去氧胆酸纯度为91％，胆酸纯度为3.2％；
将上述压滤所得的压滤液泵入3800L不锈钢釜中，加入质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节压滤液pH为6后，分离出水相，然后在温度为80℃、真空度为0.4个大气压的条真空浓缩乙酸丁酯，共收集乙酸丁酯2526公斤。
(5)精制提纯：将步骤(4)制备的162公斤干燥的鹅去氧胆酸投入3号3000L不锈钢釜中，边搅拌边加入1620公斤水和40.5公斤的三乙醇胺，常温搅拌溶解1小时，至釜中无颗粒物质，然后加入273.4公斤含水量为0.2％、相对密度为0.87g/cm3的乙酸丁酯，以及18.2公斤含水量为0.3％、相对密度为1.3g/cm3的二氯甲烷，加热至沸，回流1小时，冷却至室温，用10平米的嵌入式压滤机压滤、分离，得到滤饼和滤液，滤饼即为鹅去氧胆酸胺盐；称重鹅去氧胆酸胺盐为148公斤，投入2000L的不锈钢釜中，加水296公斤和氢氧化钠22.2公斤，搅拌加热，回收三乙醇胺31公斤，剩余溶液降温至30℃，加入质量百分比浓度为10％的稀盐酸中和溶液pH为3.5，离心分离，离心液送污水站处理，离心物送气流沸腾床干燥，得88.8公斤干品，送检，含水量为1％，鹅去氧胆酸含量为98.4％，胆酸含量为0.2％。
将上述压滤后所得的滤液泵入4号3000L的不锈钢釜中，加入300公斤乙酸丁酯搅拌萃取鹅去氧胆酸，反复两次，合并两次萃取所得的上层液体后，返入下批生产中；萃取后的液体减压真空回收乙酸丁酯，然后将剩余液体冷却至室温，加质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节pH至3.5，精置反应24小时，离心，分离得到离心物和溶液，离心物即为较高纯度的胆酸，送检，测定胆酸纯度为70％，离心溶液送污水站处理。
实施例2
一种提取鹅去氧胆酸的方法，包括如下步骤：
(1)制备胆汁酸盐：取由鸡胆膏提取制得的胆汁酸原料310公斤，皂化，采用冷却水冷却皂化后所得溶液至室温，然后继续开启冷却水，采用质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节溶液pH至6.6，得胆汁酸盐溶液；其中，进行皂化反应时，是将310公斤由鸡胆膏提取制得的胆汁酸原料投入5000L不锈钢溶解釜中，加水1550公斤，边搅拌边加入62公斤氢氧化钠，加热至沸，待胆汁酸原料和氢氧化钠充分溶解后，常压下，90℃皂化4小时；皂化后，所得溶液pH为12。
(2)制备胆汁酸氨盐：向步骤(1)制备的胆汁酸盐溶液中边搅拌边加入15.5公斤、质量百分比浓度为30％的氨水溶液，搅拌加热至溶液中无固体物质后回流1.5小时，冷却至45℃，得胆汁酸氨盐溶液，溶液pH为8.7；
(3)萃取分离胆汁酸氨盐溶液：向步骤(2)制备的胆汁酸氨盐溶液中加入1860公斤乙酸丁酯，蒸汽加热至45℃，边搅拌边缓慢加入丁酸至溶液pH为6.4；静置分液2小时，收集上层液体1于釜中，下层液体泵入1号3800L的不锈钢溶解釜中，下层液体中加入930公斤乙酸丁酯，加热至45℃，边搅拌边缓慢加入丁酸至溶液pH至5.2；静置分液2小时，收集上层液体2，并将第二次萃取的下层液体泵入1号3000L不锈钢浓缩釜中；将上层液体2泵入第一次萃取使用的5000L的不锈钢溶解釜中，将上层液体1和上次液体2合并，加入7.75公斤活性炭，加热回流1.5小时脱色，冷却至45℃，采用10平米的嵌入式压滤机压滤，得压滤液，将压滤液泵入2号3800L不锈钢釜中备用；
将第二次萃取的下层液体送检，通过薄层色谱法检测液体中鹅去氧胆酸和胆酸的比例为1:9，高效液相色谱检测鹅去氧胆酸的含量为1.95％；将第二次萃取的下层液体在温度为80℃、真空度为0.4个大气压的条件下进行真空浓缩乙酸丁酯，共收集到220公斤乙酸丁酯，然后将浓缩后剩余的液体冷却至室温，边搅拌边加入质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节溶液pH至3.3，然后静置24小时，用1000型不锈钢离心机离心，得离心液和沉淀物，将沉淀物放入气流沸腾床干燥，得水分含量为2.8％的胆酸13.7公斤。
(4)盐析、碱解：向步骤(3)制备的压滤液中加入21.7公斤N,N-二甲基酰胺，搅拌加热至65℃反应30分钟，沉淀，冷却至45℃，压滤，分别收集压滤液和滤饼，收集得223公斤滤饼，即得鹅去氧胆酸胺盐沉淀；将鹅去氧胆酸胺盐沉淀投入2号3000L不锈钢釜中，然后加240公斤水，真空浓缩乙酸乙酯，再加入446公斤水和33.4公斤的氢氧化钠加热碱解，回收N,N-二甲基酰胺，剩余溶液冷却至室温，加质量百分比浓度为10％的稀盐酸调溶液pH至3，然后用1000型不锈钢离心机离心，离心液送污水站处理，离心得鹅去氧胆酸粗品252公斤，送气流沸腾床干燥，得干燥的鹅去氧胆酸157公斤；送检，得样品鹅去氧胆酸质量为：含水量为1.2％，鹅去氧胆酸纯度为91.2％，胆酸纯度为2.9％；
将上述压滤所得的压滤液泵入3800L不锈钢釜中，加入质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节压滤液pH为6.5后，分离出水相，然后在温度为80℃、真空度为0.38个大气压的条真空浓缩乙酸丁酯，共收集乙酸丁酯2448公斤。
(5)精制提纯：将步骤(4)制备的157公斤干燥的鹅去氧胆酸投入3号3000L不锈钢釜中，边搅拌边加入1570公斤水和39.2公斤的三乙醇胺，常温搅拌溶解1小时，至釜中无颗粒物质，然后加入264.9公斤含水量为0.2％、相对密度为0.88g/cm3的乙酸丁酯，以及17.7公斤含水量为0.3％、相对密度为1.3g/cm3的二氯甲烷，加热至沸，回流1小时，冷却至室温，用10平米的嵌入式压滤机压滤、分离，得到滤饼和滤液，滤饼即为鹅去氧胆酸胺盐；称重鹅去氧胆酸胺盐为143.5公斤，投入2000L的不锈钢釜中，加水287公斤和氢氧化钠21.5公斤，搅拌加热，回收三乙醇胺30公斤，剩余溶液降温至30℃，加入质量百分比浓度为10％的稀盐酸中和溶液pH为3.5，离心分离，离心液送污水站处理，离心物送气流沸腾床干燥，得89.7公斤干品，送检，含水量为1.1％，鹅去氧胆酸含量为98.5％，胆酸含量为0.18％。
将上述压滤后所得的滤液泵入4号3000L的不锈钢釜中，加入290公斤乙酸丁酯搅拌萃取鹅去氧胆酸，反复两次，合并两次萃取所得的上层液体后，返入下批生产中；萃取后的液体减压真空回收乙酸丁酯，然后将剩余液体冷却至室温，加质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节pH至3.5，精置反应24小时，离心，分离得到离心物和溶液，离心物即为较高纯度的胆酸，送检，测定胆酸纯度为71％，离心溶液送污水站处理。
实施例3
一种提取鹅去氧胆酸的方法，包括如下步骤：
(1)制备胆汁酸盐：取由鸡胆膏提取制得的胆汁酸原料335公斤，皂化，采用冷却水冷却皂化后所得溶液至室温，然后继续开启冷却水，采用质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节溶液pH至6.4，得胆汁酸盐溶液；其中，进行皂化反应时，是将335公斤由鸡胆膏提取制得的胆汁酸原料投入5000L不锈钢溶解釜中，加水1675公斤，边搅拌边加入67公斤氢氧化钠，加热至沸，待胆汁酸原料和氢氧化钠充分溶解后，常压下，95℃皂化3小时；皂化后，所得溶液pH为13。
(2)制备胆汁酸氨盐：向步骤(1)制备的胆汁酸盐溶液中边搅拌边加入16.75公斤、质量百分比浓度为30％的氨水溶液，搅拌加热至溶液中无固体物质后回流2.5小时，冷却至55℃，得胆汁酸氨盐溶液，溶液pH为8.7；
(3)萃取分离胆汁酸氨盐溶液：向步骤(2)制备的胆汁酸氨盐溶液中加入2010公斤乙酸丁酯，蒸汽加热至55℃，边搅拌边缓慢加入丁酸至溶液pH为6.2；静置分液2小时，收集上层液体1于釜中，下层液体泵入1号3800L的不锈钢溶解釜中，下层液体中加入1005公斤乙酸丁酯，加热至55℃，边搅拌边缓慢加入丁酸至溶液pH至5.3；静置分液2小时，收集上层液体2，并将第二次萃取的下层液体泵入1号3000L不锈钢浓缩釜中；将上层液体2泵入第一次萃取使用的5000L的不锈钢溶解釜中，将上层液体1和上次液体2合并，加入8.4公斤活性炭，加热回流1.5小时脱色，冷却至55℃，采用10平米的嵌入式压滤机压滤，得压滤液，将压滤液泵入2号3800L不锈钢釜中备用；
将第二次萃取的下层液体送检，通过薄层色谱法检测液体中鹅去氧胆酸和胆酸的比例为1:9，高效液相色谱检测鹅去氧胆酸的含量为1.9％；将第二次萃取的下层液体在温度为80℃、真空度为0.38个大气压的条件下进行真空浓缩乙酸丁酯，共收集到210公斤乙酸丁酯，然后将浓缩后剩余的液体冷却至室温，边搅拌边加入质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节溶液pH至3.5，然后静置24小时，用1000型不锈钢离心机离心，得离心液和沉淀物，将沉淀物放入气流沸腾床干燥，得水分含量为3％的胆酸13公斤。
(4)盐析、碱解：向步骤(3)制备的压滤液中加入23.5公斤N,N-二甲基酰胺，搅拌加热至75℃反应30分钟，沉淀，冷却至55℃，压滤，分别收集压滤液和滤饼，收集得241公斤滤饼，即得鹅去氧胆酸胺盐沉淀；将鹅去氧胆酸胺盐沉淀投入2号3000L不锈钢釜中，然后加245公斤水，真空浓缩乙酸乙酯，再加入482公斤水和36.2公斤的氢氧化钠加热碱解，回收N,N-二甲基酰胺，剩余溶液冷却至室温，加质量百分比浓度为10％的稀盐酸调溶液pH至3.4，然后用1000型不锈钢离心机离心，离心液送污水站处理，离心得鹅去氧胆酸粗品272公斤，送气流沸腾床干燥，得干燥的鹅去氧胆酸170公斤；送检，得样品鹅去氧胆酸质量为：含水量为0.85％，鹅去氧胆酸纯度为91.3％，胆酸纯度为2.8％；
将上述压滤所得的压滤液泵入3800L不锈钢釜中，加入质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节压滤液pH为6.4后，分离出水相，然后在温度为80℃、真空度为0.4个大气压的条真空浓缩乙酸丁酯，共收集乙酸丁酯2645公斤。
(5)精制提纯：将步骤(4)制备的170公斤干燥的鹅去氧胆酸投入3号3000L不锈钢釜中，边搅拌边加入1700公斤水和42.5公斤的三乙醇胺，常温搅拌溶解1小时，至釜中无颗粒物质，然后加入286.9公斤含水量为0.1％、相对密度为0.87g/cm3的乙酸丁酯，以及19.1公斤含水量为0.3％、相对密度为1.3g/cm3的二氯甲烷，加热至沸，回流1小时，冷却至室温，用10平米的嵌入式压滤机压滤、分离，得到滤饼和滤液，滤饼即为鹅去氧胆酸胺盐；称重鹅去氧胆酸胺盐为164公斤，投入2000L的不锈钢釜中，加水328公斤和氢氧化钠24.6公斤，搅拌加热，回收三乙醇胺32.5公斤，剩余溶液降温至30℃，加入质量百分比浓度为10％的稀盐酸中和溶液pH为3.5，离心分离，离心液送污水站处理，离心物送气流沸腾床干燥，得97公斤干品，送检，含水量为0.9％，鹅去氧胆酸含量为98.9％，胆酸含量为0.15％。
将上述压滤后所得的滤液泵入4号3000L的不锈钢釜中，加入315公斤乙酸丁酯搅拌萃取鹅去氧胆酸，反复两次，合并两次萃取所得的上层液体后，返入下批生产中；萃取后的液体减压真空回收乙酸丁酯，然后将剩余液体冷却至室温，加质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节pH至3.3，精置反应24小时，离心，分离得到离心物和溶液，离心物即为较高纯度的胆酸，送检，测定胆酸纯度为71.5％，离心溶液送污水站处理。
实施例4
一种提取鹅去氧胆酸的方法，包括如下步骤：
(1)制备胆汁酸盐：取由鸡胆膏提取制得的胆汁酸原料300公斤，皂化，采用冷却水冷却皂化后所得溶液至室温，然后继续开启冷却水，采用质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节溶液pH至6.0，得胆汁酸盐溶液；其中，进行皂化反应时，是将300公斤由鸡胆膏提取制得的胆汁酸原料投入5000L不锈钢溶解釜中，加水1500公斤，边搅拌边加入84公斤氢氧化钾，加热至沸，待胆汁酸原料和氢氧化钾充分溶解后，常压下，92℃皂化4小时；皂化后，所得溶液pH为11。
(2)制备胆汁酸氨盐：向步骤(1)制备的胆汁酸盐溶液中边搅拌边加入15公斤、质量百分比浓度为30％的氨水溶液，搅拌加热至溶液中无固体物质后回流2小时，冷却至48℃，得胆汁酸氨盐溶液，溶液pH为8.9；
(3)萃取分离胆汁酸氨盐溶液：向步骤(2)制备的胆汁酸氨盐溶液中加入1800公斤甲酸丁酯，蒸汽加热至48℃，边搅拌边缓慢加入乙酸至溶液pH为6.3；静置分液2小时，收集上层液体1于釜中，下层液体泵入1号3800L的不锈钢溶解釜中，下层液体中加入900公斤甲酸丁酯，加热至48℃，边搅拌边缓慢加入乙酸至溶液pH至5.2；静置分液2小时，收集上层液体2，并将第二次萃取的下层液体泵入1号3000L不锈钢浓缩釜中；将上层液体2泵入第一次萃取使用的5000L的不锈钢溶解釜中，将上层液体1和上次液体2合并，加入7.5公斤活性炭，加热回流1.5小时脱色，冷却至48℃，采用10平米的嵌入式压滤机压滤，得压滤液，将压滤液泵入2号3800L不锈钢釜中备用；
将第二次萃取的下层液体送检，通过薄层色谱法检测液体中鹅去氧胆酸和胆酸的比例为1:9，高效液相色谱检测鹅去氧胆酸的含量为1.85％；将第二次萃取的下层液体在温度为80℃、真空度为0.38个大气压的条件下进行真空浓缩甲酸丁酯，共收集到180公斤甲酸丁酯，然后将浓缩后剩余的液体冷却至室温，边搅拌边加入质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节溶液pH至3.4，然后静置24小时，用1000型不锈钢离心机离心，得离心液和沉淀物，将沉淀物放入气流沸腾床干燥，得水分含量为3％的胆酸11.5公斤。
(4)盐析、碱解：向步骤(3)制备的压滤液中加入21公斤N,N-二甲基酰胺，搅拌加热至68℃反应30分钟，沉淀，冷却至48℃，压滤，分别收集压滤液和滤饼，收集得216公斤滤饼，即得鹅去氧胆酸胺盐沉淀；将鹅去氧胆酸胺盐沉淀投入2号3000L不锈钢釜中，然后加216公斤水，真空浓缩甲酸乙酯，再加入432公斤水和45.4公斤的氢氧化钾加热碱解，回收N,N-二甲基酰胺，剩余溶液冷却至室温，加质量百分比浓度为10％的稀盐酸调溶液pH至3.2，然后用1000型不锈钢离心机离心，离心液送污水站处理，离心得鹅去氧胆酸粗品233公斤，送气流沸腾床干燥，得干燥的鹅去氧胆酸146公斤；送检，得样品鹅去氧胆酸质量为：含水量为0.88％，鹅去氧胆酸纯度为92.1％，胆酸纯度为2.5％；
将上述压滤所得的压滤液泵入3800L不锈钢釜中，加入质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节压滤液pH为6.2后，分离出水相，然后在温度为80℃、真空度为0.4个大气压的条真空浓缩甲酸丁酯，共收集甲酸丁酯2369公斤。
(5)精制提纯：将步骤(4)制备的146公斤干燥的鹅去氧胆酸投入3号3000L不锈钢釜中，边搅拌边加入1460公斤水和36.5公斤的三乙醇胺，常温搅拌溶解1小时，至釜中无颗粒物质，然后加入246.4公斤含水量为0.15％、相对密度为0.87g/cm3的甲酸丁酯，以及16.4公斤含水量为0.2％、相对密度为1.3g/cm3的二氯甲烷，加热至沸，回流1小时，冷却至室温，用10平米的嵌入式压滤机压滤、分离，得到滤饼和滤液，滤饼即为鹅去氧胆酸胺盐；称重鹅去氧胆酸胺盐为141公斤，投入2000L的不锈钢釜中，加水282公斤和氢氧化钾29.7公斤，搅拌加热，回收三乙醇胺27.9公斤，剩余溶液降温至30℃，加入质量百分比浓度为10％的稀盐酸中和溶液pH为3.4，离心分离，离心液送污水站处理，离心物送气流沸腾床干燥，得86.4公斤干品，送检，含水量为0.7％，鹅去氧胆酸含量为99.1％，胆酸含量为0.13％。
将上述压滤后所得的滤液泵入4号3000L的不锈钢釜中，加入271公斤甲酸丁酯搅拌萃取鹅去氧胆酸，反复两次，合并两次萃取所得的上层液体后，返入下批生产中；萃取后的液体减压真空回收甲酸丁酯，然后将剩余液体冷却至室温，加质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节pH至3.2，精置反应24小时，离心，分离得到离心物和溶液，离心物即为较高纯度的胆酸，送检，测定胆酸纯度为72％，离心溶液送污水站处理。
实施例5
一种提取鹅去氧胆酸的方法，包括如下步骤：
(1)制备胆汁酸盐：取由鸡胆膏提取制得的胆汁酸原料350公斤，皂化，采用冷却水冷却皂化后所得溶液至室温，然后继续开启冷却水，采用质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节溶液pH至7.0，得胆汁酸盐溶液；其中，进行皂化反应时，是将350公斤由鸡胆膏提取制得的胆汁酸原料投入5000L不锈钢溶解釜中，加水1750公斤，边搅拌边加入98公斤氢氧化钾，加热至沸，待胆汁酸原料和氢氧化钾充分溶解后，常压下，95℃皂化3小时；皂化后，所得溶液pH为13。
(2)制备胆汁酸氨盐：向步骤(1)制备的胆汁酸盐溶液中边搅拌边加入17.5公斤、质量百分比浓度为30％的氨水溶液，搅拌加热至溶液中无固体物质后回流2小时，冷却至52℃，得胆汁酸氨盐溶液，溶液pH为9.0；
(3)萃取分离胆汁酸氨盐溶液：向步骤(2)制备的胆汁酸氨盐溶液中加入2100公斤甲酸丁酯，蒸汽加热至52℃，边搅拌边缓慢加入乙酸至溶液pH为6.2；静置分液2小时，收集上层液体1于釜中，下层液体泵入1号3800L的不锈钢溶解釜中，下层液体中加入1050公斤甲酸丁酯，加热至52℃，边搅拌边缓慢加入乙酸至溶液pH至5.4；静置分液2小时，收集上层液体2，并将第二次萃取的下层液体泵入1号3000L不锈钢浓缩釜中；将上层液体2泵入第一次萃取使用的5000L的不锈钢溶解釜中，将上层液体1和上次液体2合并，加入8.8公斤活性炭，加热回流1.5小时脱色，冷却至52℃，采用10平米的嵌入式压滤机压滤，得压滤液，将压滤液泵入2号3800L不锈钢釜中备用；
将第二次萃取的下层液体送检，通过薄层色谱法检测液体中鹅去氧胆酸和胆酸的比例为1:9，高效液相色谱检测鹅去氧胆酸的含量为1.8％；将第二次萃取的下层液体在温度为80℃、真空度为0.38个大气压的条件下进行真空浓缩甲酸丁酯，共收集到210公斤甲酸丁酯，然后将浓缩后剩余的液体冷却至室温，边搅拌边加入质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节溶液pH至3.3，然后静置24小时，用1000型不锈钢离心机离心，得离心液和沉淀物，将沉淀物放入气流沸腾床干燥，得水分含量为2.5％的胆酸13.4公斤。
(4)盐析、碱解：向步骤(3)制备的压滤液中加入24.5公斤N,N-二甲基酰胺，搅拌加热至72℃反应30分钟，沉淀，冷却至52℃，压滤，分别收集压滤液和滤饼，收集得252公斤滤饼，即得鹅去氧胆酸胺盐沉淀；将鹅去氧胆酸胺盐沉淀投入2号3000L不锈钢釜中，然后加252公斤水，真空浓缩甲酸乙酯，再加入504公斤水和53公斤的氢氧化钾加热碱解，回收N,N-二甲基酰胺，剩余溶液冷却至室温，加质量百分比浓度为10％的稀盐酸调溶液pH至3.3，然后用1000型不锈钢离心机离心，离心液送污水站处理，离心得鹅去氧胆酸粗品281公斤，送气流沸腾床干燥，得干燥的鹅去氧胆酸176公斤；送检，得样品鹅去氧胆酸质量为：含水量为0.85％，鹅去氧胆酸纯度为92.6％，胆酸纯度为2.8％；
将上述压滤所得的压滤液泵入3800L不锈钢釜中，加入质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节压滤液pH为6.0后，分离出水相，然后在温度为80℃、真空度为0.4个大气压的条真空浓缩甲酸丁酯，共收集甲酸丁酯2764公斤。
(5)精制提纯：将步骤(4)制备的176公斤干燥的鹅去氧胆酸投入3号3000L不锈钢釜中，边搅拌边加入1760公斤水和44公斤的三乙醇胺，常温搅拌溶解1小时，至釜中无颗粒物质，然后加入297公斤含水量为0.14％、相对密度为0.88g/cm3的甲酸丁酯，以及19.8公斤含水量为0.15％、相对密度为1.3g/cm3的二氯甲烷，加热至沸，回流1小时，冷却至室温，用10平米的嵌入式压滤机压滤、分离，得到滤饼和滤液，滤饼即为鹅去氧胆酸胺盐；称重鹅去氧胆酸胺盐为170公斤，投入2000L的不锈钢釜中，加水340公斤和氢氧化钾35.7公斤，搅拌加热，回收三乙醇胺33.6公斤，剩余溶液降温至30℃，加入质量百分比浓度为10％的稀盐酸中和溶液pH为3.3，离心分离，离心液送污水站处理，离心物送气流沸腾床干燥，得100.6公斤干品，送检，含水量为0.9％，鹅去氧胆酸含量为98.4％，胆酸含量为0.15％。
将上述压滤后所得的滤液泵入4号3000L的不锈钢釜中，加入327公斤甲酸丁酯搅拌萃取鹅去氧胆酸，反复两次，合并两次萃取所得的上层液体后，返入下批生产中；萃取后的液体减压真空回收甲酸丁酯，然后将剩余液体冷却至室温，加质量百分比浓度为10％的稀盐酸调节pH至3.0，精置反应24小时，离心，分离得到离心物和溶液，离心物即为较高纯度的胆酸，送检，测定胆酸纯度为72.5％，离心溶液送污水站处理。
将实施例1～5中的胆汁酸原料和最终的高纯度鹅去氧胆酸成品进行理化性质检测，胆汁酸原料的检测结果如表1所示，高纯度鹅去氧胆酸成品及鹅去氧胆酸的提取率检测结果如表2所示。
| 项目 | 性状 | 鹅去氧胆酸含量 | 胆酸含量 | 水分 |
| 实施例一 | 黑褐色绵状物 | 27.9％ | 17.8％ | 26.5％ |
| 实施例二 | 黑褐色绵状物 | 29.8％ | 16.9％ | 27.6％ |
| 实施例三 | 黑褐色绵状物 | 31.2％ | 16.2％ | 25.8％ |
| 实施例四 | 黑褐色绵状物 | 30.5％ | 17.1％ | 27.1％ |
| 实施例五 | 黑褐色绵状物 | 28.9％ | 17.5％ | 27.6％ |
表1。
| 项目 | 性状 | 鹅去氧胆酸含量 | 胆酸含量 | 水分 | 提取率 |
| 实施例一 | 类白色颗粒 | 98.4％ | 0.2％ | 1.0％ | 97.9％ |
| 实施例二 | 类白色颗粒 | 98.5％ | 0.18％ | 1.1％ | 95.6％ |
| 实施例三 | 类白色颗粒 | 98.9％ | 0.15％ | 0.9％ | 91.8％ |
| 实施例四 | 类白色颗粒 | 99.1％ | 0.13％ | 0.7％ | 93.3％ |
| 实施例五 | 类白色颗粒 | 98.4％ | 0.15％ | 0.9％ | 97.9％ |
表2。
由上述检测结果可知，本发明中提取鹅去氧胆酸时利用胆汁酸中的鹅去氧胆酸和胆酸的氨盐在丁酯类溶剂中，在有机酸的调节下，鹅去氧胆酸氨盐和胆酸氨盐有明显的溶解度差异，使得鹅去氧胆酸氨盐和胆酸氨盐进行粗分离，并且通过粗分离将胆酸的含量降低至3％以下，低于胆酸在鹅去氧胆酸中含量的常规标准；并且进一步利用鹅去氧胆酸胺盐和胆酸胺盐在高浓度丁酯类溶剂和二氯甲烷的水溶液体系中，存在较大的溶解差异，再次实现胆酸的清除处理，从而精致纯化鹅去氧胆酸，将胆酸的含量降低至0.2％以内，大大提高了鹅去氧胆酸的提取率。
所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本公开的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本发明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。因此，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种提取鹅去氧胆酸的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)制备胆汁酸盐：取胆汁酸原料，皂化，调节pH至6.0～7.0，得胆汁酸盐溶液；
(2)制备胆汁酸氨盐：向步骤(1)制备的胆汁酸盐溶液中加入氨水溶液，加热至溶液中无固体物质后回流，冷却，得胆汁酸氨盐溶液；
(3)萃取分离胆汁酸氨盐溶液：向步骤(2)制备的胆汁酸氨盐溶液中加入丁酯类溶剂，加热至45℃～55℃，加有机酸调节溶液pH静置分液，收集上层液体，脱色、冷却、压滤，得滤液，备用，所述丁酯类溶剂为乙酸丁酯、甲酸丁酯中的一种或两种；
(4)盐析、碱解：向步骤(3)制备的滤液中加入N,N-二甲基酰胺，加热至65℃～75℃，沉淀，冷却至45℃～55℃，压滤，得鹅去氧胆酸胺盐沉淀；然后加水和强碱加热碱解，回收N,N-二甲基酰胺，冷却，调pH至3～3.5，得鹅去氧胆酸粗品，精制提纯得高纯度鹅去氧胆酸。
2.根据权利要求1所述的提取鹅去氧胆酸的方法，其特征在于，所述步骤(4)中精制提纯是向鹅去氧胆酸粗品中加水和三乙醇胺，搅拌溶解，然后加入丁酯类溶剂和二氯甲烷，加热回流，冷却，压滤，得鹅去氧胆酸精制胺盐，然后碱解、中和，得高纯度鹅去氧胆酸。
3.根据权利要求1所述的提取鹅去氧胆酸的方法，其特征在于，所述步骤(1)中皂化温度为90℃～95℃，皂化后溶液pH为11～13。
4.根据权利要求1所述的提取鹅去氧胆酸的方法，其特征在于，所述步骤(3)中有机酸为丁酸、乙酸中的一种或两种。
5.根据权利要求1所述的提取鹅去氧胆酸的方法，其特征在于，所述步骤(3)中脱色采用的是活性炭。
6.根据权利要求1所述的提取鹅去氧胆酸的方法，其特征在于，所述步骤(3)中加有机酸调节溶液pH至6.2～6.4。
7.根据权利要求1所述的提取鹅去氧胆酸的方法，其特征在于，所述步骤(3)中加有机酸调节溶液pH至5.2～5.4。
8.根据权利要求1所述的提取鹅去氧胆酸的方法，其特征在于，所述步骤(4)中强碱为氢氧化钠、氢氧化钾中的一种或两种。
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