CN106727492A - 一种多甲氧基黄酮在制备治疗皮肤***状瘤的药物上的应用 - Google Patents

一种多甲氧基黄酮在制备治疗皮肤***状瘤的药物上的应用 Download PDF

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杨谷良
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Abstract

本发明涉及多甲氧基黄酮治疗皮肤***状瘤。该发明的有效成分包括5,7,3’,4’‑四甲氧基黄酮、5,7,3’,4’,5’‑五甲氧基黄酮以及5,6,7,3’,4’,5’‑六甲氧基黄酮等多甲氧基黄酮。以二甲基苯并蒽和三(2‑吡啶甲基)胺诱导ICR小鼠形成皮肤***状瘤，与诱导组相比，分别以5μmol/L浓度的5,7,3’,4’‑四甲氧基黄酮、5,7,3’,4’,5’‑五甲氧基黄酮或5,6,7,3’,4’,5’‑六甲氧基黄酮处理后，小鼠皮肤肿瘤数量分别减少24.2％、42.5％与54.2％。

Description

一种多甲氧基黄酮在制备治疗皮肤***状瘤的药物上的应用
技术领域
本发明涉及一种多甲氧基黄酮在制备治疗皮肤***状瘤的药物上的应用。
背景技术
在防御机制中，体内适当的发炎反应可以活化免疫***，并启动免疫与发炎反应，清除外来物的伤害。当外来物被清除及组织修补后，急性发炎即停止；若外来物清除不完全、免疫***不全或解除发炎作用的信号传递失调等，就会形成慢性发炎反应，正常细胞或组织受到发炎或免疫细胞产生的自由基的破坏，导致血管过度舒张、组织坏死，产生致癌性影响，其中包含引起DNA碱基突变及蛋白质的结构修饰，影响细胞膜功能或造成细胞内蛋白质或酶的功能丧失。炎症细胞开始转变成肿瘤细胞并不断增生[Allavena,P.,Garlanda,C.,Borrello,M.G.,Sica,A.,and Mantovani,A.(2008)Pathways connectinginflammation and cancer.Curr.Opin.Genet.Dev.,18,3-10.]。
化学致癌作用通常是在化合物的作用下，诱发肿瘤形成。早在1947年，Bernblum及Shubik的研究结果就证实，在小鼠皮肤表面局部涂抹化学致癌药物，会使相应部位皮肤形成***状肿瘤[Berenblum,I.and Shubik,P.(1949)The persistence of latent tumourcells induced in the mouse's skin by a single application of 9:10-dimethyl-1:2-benzanthracene.Br.J.Cancer,3,384-386.]。这种处理方法能够缩短长期致癌实验的时间，涂抹过程中可以清楚观察到肿瘤生长的动态，有助于了解致癌物在肿瘤发生与发展的不同阶段，对肿瘤形成与发展的作用机制[Mueller,M.M.(2006)Inflammation inepithelial skin tumours:old stories and new ideas.Eur.J.Cancer,42,735-744.]。化学致癌作用较常使用的化学致癌剂包括二甲基苯并蒽(7,12-dimethylbenzanthraene,DMBA)和三(2-吡啶甲基)胺(12-O-Tetradecanoyl-phorbol 13-Acetate,TPA)。作为一种多环的芳香烃基类多潜能致癌物，DMBA经皮肤吸收后进入生物体内，能诱发DNA的多位点突变，影响一系列癌基因和抑癌基因的表达，启动细胞的癌变。在小鼠皮肤的局部涂抹TPA会造成氧化自由基的增加，导致氧化压力上升及局部发炎的现象。TPA将造成细胞内抗氧化***失衡，使肿瘤组织维持在发炎的微环境，促进细胞发生癌变。在发炎反应中，诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)及其产物一氧化氮(NitrogenMonoxide,NO)的含量要高于正常组织，会导致DNA损伤、破坏错误复制DNA的修复能力，导致所表达的蛋白质发生变化，使其丧失原有的功能与活性；NO具有促进血管新生、白细胞的黏附、浸润与肿瘤细胞的转移。已有许多研究证实，在不同慢性炎症性疾病和恶性肿瘤组织中，都具有较高含量的NO。在细胞外，NO极不稳定，几秒钟后便转化为亚硝酸盐，通常都通过测定亚硝酸盐的含量来检测细胞内NO的含量[Moncada,S.,Palmer,R.M.,and Higgs,E.A.(1991)Nitric oxide:physiology,pathophysiology,andpharmacology.Pharmacol.Rev.,43,109-142.]。环氧合酶-2(cyclooxygenase,COX-2)是由***素合成，COX-2的合成受到肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)的诱发，在发炎反应时期，COX-2的表达会增加血管通透性，提升白血球与免疫细胞的趋化性，扩大发炎反应的范围[Tsujii,M.,Kawano,S.,Tsuji,S.,Sawaoka,H.,Hori,M.,andDuBois,R.N.(1998)Cyclooxygenase regulates angiogenesis induced by coloncancer cells.Cell,93,705-716.]；另有研究指出，在DMBA和TPA处理之前，用iNOS与COX-2抑制剂预处理小鼠皮肤后，能够明显降低DMBA和TPA所诱发的肿瘤发生率与形成肿瘤的数量[Chun,K.S.,Cha,H.H.,Shin,J.W.,Na,H.K.,Park,K.K.,Chung,W.Y.,and Surh,Y.J.(2004)Nitric oxide induces expression of cyclooxygenase-2 in mouse skinthrough activation of NF-kappaB.Carcinogenesis,25,445-454.]。所以，从发炎的诱导到发展成肿瘤的过程中，iNOS与COX-2都起着重要作用。
皮肤***状瘤是由于表皮***样结构的上皮组织增生后形成的。皮肤***状瘤的发病率呈现出逐年增高及年轻化的趋势，由于该病诱发因素较多，病因复杂，确切发病机理仍不清楚。在临床治疗上，皮肤***状瘤具有容易恶变成为皮肤癌、手术治疗后容易复发、多发性和产生组织破坏等特点。目前，国内外关于皮肤***状瘤治疗方面的研究报道相对较少，如何有效控制该病的发生，提高治疗效果，防止肿瘤的复发和恶变，具有非常重要的意义。
近年来，众多的研究结果证实，部分从植物中提取的天然物质，具有较强的预防肿瘤细胞生长的活性。多甲氧基黄酮属于黄酮类化合物，在柑橘果皮中具有较高的含量。此类化合物的C6-C3-C6骨架上接有两个以上的甲氧取代基，因极性较低而具有较好的生物可利用率。现有的研究结果表明，多甲氧基黄酮类物质具有抗发炎的生物活性[Middleton EJr,Kandaswami,C.,and Theoharides,T.C.(2000)The effects of plant flavonoids onma mmalian cells:implications for inflammation,heart disease,andcancer.Pharmacol.Rev.,52,673-751.Manthey,J.A.,Grohmann,K.,and Guthrie,N.(2001)Biological properties of citrus flavonoids pertaining to cancer andinflammation.Curr.Med.Chem.,8,135-153.]。许多研究证实，多甲氧基黄酮具有和未被甲基化黄酮相似的活性，如抗癌、抗病毒等，并且生物可利用率高于未被甲基化的黄酮[Nielsen,S.E.,Breinholt,V.,Cornett,C.,and Dragsted,L.O.(2000)Biotransformation of the citrus flavone tangeretin in rats.Identification ofmetabolites with intact flavane nucleus.Food Chem.Toxicol.,38,739-746.]。本发明所使用的多甲氧基黄酮化合物为以下三种：5,7,3’,4’-四甲氧基黄酮(3’,4’,5,7-Tetramethoxy flavone,4-PMF)、5,7,3’,4’,5’-五甲氧基黄酮(5,7,3’,4’,5’-pentamethoxy flavones,5-PMF)以及5,6,7,3’,4’,5’-六甲氧基黄酮(5,6,7,3’,4’,5’-Hexamethoxy flavone,6-PMF)，三者都属于多甲氧基黄酮，而4-PMF为月橘(Murrayapaniculata)与黑姜(Kaempferia parviflora)中主要的多甲氧基黄酮之一，这些植物的提取物已被证实具有抗发炎、抗肿瘤以及抗氧化等生物活性[Kinoshita,T.and Shimada,M.(2002)Isolation and structure elucidation of a new prenylcoumarin fromMurraya paniculata var.omphalocarpa(Rutaceae).Chem.Pharm.Bull.(Tokyo),50,118-120.Yenjai,C.,Prasanphen,K.,Daodee,S.,Wongpanich,V.,and Kittakoop,P.(2004)Bioactive flavonoids from Kaempferia parviflora.Fitoterapia,75,89-92.]。本专利为多甲氧基黄酮在制备治疗皮肤***状瘤上的应用，达到治疗皮肤***状瘤的目的。
发明内容
针对大多皮肤乳状瘤具有易恶变为皮肤癌、术后易复发、多发性生长并易产生组织破坏的特点，本发明提供了一种多甲氧基黄酮在制备治疗皮肤***状瘤的药物上的应用。通过细胞实验和动物实验，发现该类化合物对皮肤***状瘤具有明显的作用效果。
所述的多甲基黄酮包括所有C6-C3-C6骨架上接有两个以上的甲氧取代基的黄酮，包括，4-PMF(结构式见图1)、5-PMF(结构式见图1)以及6-PMF(结构式见图1)。
化学试剂的配制：
DMBA：准确称取1.2815mg DMBA，用200μL丙酮溶解后，配制成1μmol/mL的DMBA溶液，现配现用。
TPA：准确称取5mg TPA，用200μL丙酮溶解后配制成100nmol/200μL的TPA贮备液，使用前用丙酮稀释成5nmol/200μL。
4-PMF、5-PMF、6-PMF：准确称取0.0342g 4-PMF、0.0372g 5-PMF、0.0402g6-PMF，分别用200μL丙酮溶解后，配制成100μmol/200μL的储备液，使用前用丙酮稀释成所需要的浓度。该多甲氧基黄酮的使用浓度为2.5-40μmol/L。
本发明所述的多甲氧基黄酮对小鼠巨噬细胞RAW 264.7生长抑制作用的使用方法为：将细胞培养在含100U/ml的青霉素和100μg/ml的链霉素、10％胎牛血清的DMEM培养基中，培养温度为37℃，二氧化碳浓度为5％的条件下，当细胞生长到8分满时，分别在DMEM培养基加入终浓度为100ng/mL的脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)和终浓度为2.5-10μmol/L以丙酮溶解的多甲氧基黄酮，培养24h后，收集细胞培养液的上清液，测定亚硝酸盐含量。
本发明所述的多甲氧基黄酮对化学诱导ICR小鼠皮肤***状瘤生长抑制作用的使用方法为：将ICR小鼠按6只/笼随机分配至各个笼子，二笼为一组(即一组共有12只)，共分为诱导组，对照组、5μmol/200μL 4-PMF处理组、5μmol/200μL 5-PMF处理组和5μmol/200μL6-PMF处理组。适应饲养一周后，用小型剃刀将ICR小鼠背部靠近尾巴部位剔除一块面积约2cm2区域的毛发。在剔除毛发部位涂抹200μL浓度为1μmol/mL的DMBA，2天后再在相同部位涂抹200μL相同浓度的DMBA。经过DMBA处理一星期后，在剔除毛发部位，诱导组持续每星期用5nmol/200μL浓度的TPA涂抹2次；对照组持续每星期用200μL的丙酮涂抹2次；4-PMF处理组持续每星期用200μL浓度为5μmol/200μL的4-PMF涂抹2次；5-PMF处理组持续每星期用200μL浓度为5μmol/200μL的5-PMF涂抹2次；6-PMF处理组持续每星期用200μL浓度为5μmol/200μL的6-PMF涂抹2次，在第2次DMBA处理后，所有组再持续处理20周。每周记录直径大于1mm并持续存在2星期以上的肿瘤数量，并测量肿瘤大小。20周后处死小鼠，统计肿瘤数量、肿瘤发生率(％)及肿瘤大小。
本发明具有的有益效果：
本发明中所选用的多甲氧基黄酮，均能够从植物中提取分离，属于植物天然化合物，来源广泛，也能够直接从试剂公司购买。与诱导组相比，分别以5mol/L浓度的4-PMF、5-PMF或6-PMF处理后，小鼠皮肤肿瘤数量分别减少24.2％、42.5％与54.2％。实验结果表明，多甲氧基黄酮对皮肤***状瘤的治疗效果显著。本发明可指导开发新的皮肤***状瘤治疗方法，为今后开发利用多甲氧基黄酮类化合物提供了新的方向和策略。
附图说明
图1为4-PMF、5-PMF和6-PMF的分子结构。
图2为RAW 264.7细胞用100ng/ml的LPS和不同浓度多甲氧基黄酮处理24h后培养基中亚硝酸盐的含量。
图3为不同组ICR小鼠背部皮肤中iNOS和COX-2的表达情况。
图4为不同组ICR小鼠背部皮肤中DNMT1和DNMT3b的表达情况。
图5为不同组ICR小鼠背部皮肤中GPR55的表达情况。
图6为不同组ICR小鼠背部皮肤中p38和p-p38的表达情况。
图7为不同组ICR小鼠背部皮肤中p-PI3K和p-Akt的表达情况。
图8为多甲氧基黄酮对DMBA/TPA诱导的ICR小鼠皮肤肿瘤数量的作用。
图9为不同组ICR小鼠皮肤肿瘤诱导百分率。
图10为多甲氧基黄酮对DMBA/TPA诱导的ICR小鼠皮肤肿瘤的抑制作用。
具体实施方式
实施例1多甲氧基黄酮对小鼠巨噬细胞RAW 264.7亚硝酸盐含量的影响
所培养的细胞为小鼠巨噬细胞RAW 264.7，培养基为DMEM培养基，含有终浓度为100U/ml的青霉素和100μg/ml的链霉素、体积比为10％的胎牛血清，培养温度为37℃，二氧化碳浓度为5％。将小鼠巨噬细胞RAW 264.7培养在24孔细胞培养板中，当细胞生长到8分满后，分别在不同孔中加入终浓度为100ng/mL的脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)和终浓度为2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L的4-PMF、5-PMF或6-PMF，继续培养24小时后，分别取100μL上述各处理的培养基上清液至96孔板中，每孔加入100μL格里斯试剂(含有1％磺胺和0.1％盐酸萘乙二胺的水溶液)混合均匀后，在波长570nm下，用酶标仪检测吸光値。吸光值检测结果如图2所示，与诱导组相比，4-PMF处理组的NO含量减少3.39～16.42％，抑制效果与诱导组相比并无显著性差异；在浓度2.5、5及10M时，5-PMF处理组有明显抑制NO合成的效果，NO含量分别减少30.96％、40.38％与35.75％；浓度为2.5、5、10、20和40M的6-PMF对NO合成的抑制率分别为0.11％、24.60％、31.12％、45.38％与45.76％，呈现剂量依赖的现象，且与诱导组相比具有显著性差异。从上述结果得知，多甲氧基黄酮具有抑制NO合成的能力，且随着甲氧基数量的增加，其抑制现象愈明显，以6-PMF抑制能力最佳。
实施例2多甲氧基黄酮对DMBA/TPA诱导ICR小鼠皮肤***状瘤生长的影响
实验用ICR小鼠购自乐斯科生物科技股份有限公司，按6只/笼随机分配至各个笼子，二笼为一组(即一组共有12只)，共分为诱导组，对照组、5μmol/200μL 4-PMF处理组、5μmol/200μL 5-PMF处理组和5μmol/200μL 6-PMF处理组。饲养环境保持25℃恒温，每天光照12小时/黑暗12小时，垫料及饮用水每周更换2次。适应饲养一周后，用刀片将ICR小鼠背部靠近尾巴部位剔除一块面积约为2cm2的毛发。在剔除毛发部位涂抹200μL浓度为1μmol/mL的DMBA，2天后再在相同部位涂抹200μL相同浓度的DMBA。经过DMBA处理一星期后，在剔除毛发部位，各组按如下处理方法连续处理20周：诱导组持续每星期用5nmol/200μL浓度的TPA涂抹2次；对照组持续每星期用200μL的丙酮涂抹2次；4-PMF处理组持续每星期用200μL浓度为5μmol/200μL的4-PMF涂抹2次，每次涂完4-PMF 30分钟后，在相同部位涂抹5nmol/200μL的TPA；5-PMF处理组持续每星期用200μL浓度为5μmol/200μL的5-PMF涂抹2次，每次涂完5-PMF 30分钟后，在相同部位涂抹5nmol/200μL的TPA；6-PMF处理组持续每星期用200μL浓度为5μmol/200μL的6-PMF涂抹2次，每次涂完6-PMF 30分钟后，在相同部位涂抹5nmol/200μL的TPA。实验全程使用标准可灭菌饲料与单蒸水供实验动物食用。每周记录直径大于1mm并持续存在2星期以上肿瘤的数量并测量肿瘤大小。20周后，在最后一次TPA处理24小时后处死小鼠，统计肿瘤数量、肿瘤发生率(％)及肿瘤大小(图3、图4、图10)。
外观变化：持续处理TPA 20周后，诱导组每只小鼠的背部都有***状瘤生成；对照组则没有肿瘤发生；预处理PMFs的组别中，4-PMF、5-PMF与6-PMF处理组都有抑制肿瘤数量与大小的现象(图3、图4、图10)。
肿瘤生长情形：实验20周后，各组小鼠肿瘤数量与发生率的统计结果如图3、图4。实验过程中诱导组小鼠持续涂抹TPA至第7周后，即开始有***状瘤的生成，到第20周后，每只小鼠只肿瘤数量平均为21颗，肿瘤发生率达百分之百；对照组则直到实验20周结束都没有形成***状瘤，表明该实验的肿瘤诱导模式是成立的；4-PMFs组每只小鼠肿瘤数量平均为12.0颗，肿瘤发生率为92％；5-PMF组每只小鼠肿瘤数量平均为9.1颗，肿瘤发生率为83％；6-PMF组每只小鼠肿瘤数量平均为4.7颗，肿瘤发生率为100％。
肿瘤数量与大小分布：诱导组ICR小鼠皮肤肿瘤大小为：1-3mm3的有7.8±3.8颗；3-5mm3的有3.0±1.1颗；≧5mm3的有10.3±6.9颗。4-PMF组肿瘤大小为1-3mm3的有6.4±2.4颗；3-5mm3的有2.2±2.2颗；≧5mm3的有3.5±3.8颗。5-PMF组肿瘤大小为1-3mm3的有5.4±4.3颗；3-5mm3的有0.8±1.0颗；≧5mm3的有2.9±3.3颗。6-PMF组肿瘤大小为1-3mm3的有2.1±2.0颗；3-5mm3的有0.8±1.0颗；≧5mm3的有1.8±2.0颗。
从上述结果得知，用浓度为5μmol/L的4-PMF、5-PMF或6-PMF处理后，实验小鼠的肿瘤数量均明显减少，与诱导组相比，分别减少24.2％、42.5％与54.2％。据此，我们推论，随着PMFs甲氧基数量的增加，PMF抑制DMBA/TPA所导致的肿瘤数量、大小的效果愈明显，并且达到统计上的显著性，但对于肿瘤发生率却无法改善，其原因可能是因为PMFs无法抑制第一周DMBA诱导过程中的基因突变，随后，涂抹TPA持续刺激皮肤组织，氧化压力逐渐增加，最终无法抑制***状瘤的发生。
实施例3多甲氧基黄酮对DMBA/TPA诱导ICR小鼠基因表达的影响
按实施例2的方法处理小鼠，处死后，收集处理部位的皮肤。把皮肤组织剪成细小的碎片后，按照每20mg皮肤组织加入150-250μL裂解液(含150mmol/L的NaCl、1mmol/L的EDTA、1g/mL的亮抑酶肽、1g/mL的抑蛋白酶肽、1g/mL的胃蛋白酶抑制剂和1mmol/L的PMSF)的比例加入组织裂解液，用玻璃匀浆器匀浆至充***解后，10,000rpm离心5分钟，取上清。以2mg/mL BSA溶液为浓度标准液，用酶标仪测定595nm处的吸光值，换算样本内蛋白浓度。蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳、转膜、结合一抗、二抗后，检测目的蛋白GPR55、phospho-p38、phospho-PI3K、phospho-Akt、DNMT1、DNMT3b、iNOS和COX-2表达水平的变化。每个样品重复3次，实验结果均以平均值±标准偏差表示，并分析各组间的差异，当p值小于0.05时即表示在统计学上具有显著性差异。
实验结果显示，诱导组与对照组相比，GPR55的蛋白质表达量明显增加，表明GPR55参与TPA诱使小鼠皮肤产生病变的过程；多甲氧基黄酮预处理组中，以5-PMF组与6-PMF组的抑制现象最为显明，其中5-PMF的抑制效果优于6-PMF(图5)。由此可知，多甲氧基黄酮可通过降低TPA引致皮肤中GPR55的作用，进而达到减轻发炎等现象的产生。诱导组小鼠皮肤中的phospho-p38蛋白表达量显著高于对照组，而4-PMF、5-PMF与6-PMF处理组中，TPA诱导phospho-p38的表达作用都受到了一定的抑制，其中5-PMF处理组的抑制活性最强(图6)；此外，诱导组的phospho-PI3K和phospho-Akt表达水平与对照组相比均有明显增加，4-PMF、5-PMF与6-PMF处理组的phospho-PI3K、phospho-Akt的表达水平与对照组相比显著降低，其中又以5-PMF与6-PMF处理组的抑制作用最为明显(图7)；由图8可知，诱导组的两个重要的DNA甲基转移酶：DNMT1和DNMT3b都没有被活化，而多甲氧基黄酮处理组的DNMT1和DNMT3b表达水平都有增加，5-PMF处理组对DNMT1的表达水平最高，6-PMF处理组的DNMT3b的表达水平最高。综合上述两项结果可以推测，多甲氧基黄酮可通过调控DNMT1和DNMT3b的表达来调节iNOS的转录活性。由此可知，PMFs抑制发炎因子的表达可能是通过调控phospho-p38MAPK途径与PI3K/Akt途径，以抑制NF-κB转移至细胞核内并转录出下游iNOS和COX-2(图9)，进而达到抑制发炎反应的效果。
实施例4多甲氧基黄酮对ICR小鼠的生物毒性评价
按实施例2的方法处理小鼠，处死小鼠后，称量各组ICR小鼠的体重、肝、脾、肾重量，以心脏采血方式采集血液，室温放置1h后，4℃3000rpm离心10min，收集血清，储存于-80℃冰箱中。以全自动生化分析仪检测肝功能生化指数：天门冬酸转氨酶(aspartateaminotransferase，AST)、丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)、三酸甘油脂(triglyceride，TG)及总胆固醇(total cholesterol，T-cho)，检测结果见表1。从检测结果可以看出，两组数据间不存在显着性差异，多甲氧基黄酮对ICR小鼠没有表现出生物毒性。
表1多甲氧基黄酮对ICR小鼠的生物毒性评价
组别 肝脏/体重 肾脏/体重 脾脏/体重 GOT(Unit/L) GPT(Unit/L) TG(mg/dl) T-cho(mg/dl)
诱导组 3.91±0.25 0.85±0.07 0.25±0.03 93.4±9.7 23.2±4.8 113.7±28.9 78.9±4.2
4-PMF处理组 3.95±0.35 0.89±0.02 0.23±0.04 93.6±7.2 24.1±4.9 112.4±28.9 76.5±4.1
5-PMF处理组 3.92±0.28 0.83±0.07 0.24±0.03 93.1±8.1 22.5±3.6 114.3±15.6 76.2±3.6
6-PMF处理组 3.99±0.31 0.88±0.04 0.26±0.05 94.1±6.3 24.9±5.2 113.1±20.3 79.3±4.7

Claims (5)

1.一种多甲氧基黄酮在制备治疗皮肤***状瘤的药物上的应用。
2.权利要求1所述的应用，其特征在于，多甲氧基黄酮包括5,7,3’,4’-四甲氧基黄酮、5,7,3’,4’,5’-五甲氧基黄酮以及5,6,7,3’,4’,5’-六甲氧基黄酮中的任意一种、两种或多种。
3.权利要求2所述的应用，其特征在于，多甲氧基黄酮在治疗皮肤***状廇的药物上的应用。
4.权利要求3所述的应用，其特征在于，所抑制的肿瘤为二甲基苯并蒽和三(2-吡啶甲基)胺诱导ICR小鼠形成的皮肤***状瘤。
5.权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的多甲氧基黄酮的使用浓度为2.5μmol/L-40μmol/L。
CN201611199889.6A 2016-12-22 2016-12-22 一种多甲氧基黄酮在制备治疗皮肤***状瘤的药物上的应用 Pending CN106727492A (zh)

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US20030216481A1 (en) * 2002-04-30 2003-11-20 Unigen Pharmaceuticals, Inc. Formulation of a mixture of Free-B-ring flavonoids and flavans as a therapeutic agent

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