CN106645484A - 伪劣肉松产品的鉴定方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种伪劣肉松产品的鉴定方法。该伪劣肉松的鉴定方法通过检测肉松中色素的方法来鉴别肉松是否掺假，可同时检测肉松中的日落黄、柠檬黄、胭脂红、王金黄等合成色素，通过检测肉松中有无添加色素，来鉴别肉松是否掺假。该鉴定方法利用色素在水中易溶，在大部分有机溶剂中溶解度极小的特性首先除去脂肪成分，使用盐析的方法使蛋白质凝聚沉淀而去除蛋白质的干扰，使用固相萃取法去除多糖和天然色素的干扰，并浓缩样品溶液。该鉴定方法解决了王金黄固相萃取回收率低的问题，分离效果好，专属性强，检出限和定量限足够低，线性范围良好，重复性好，准确可靠，可用于日常监督检测。

Description

伪劣肉松产品的鉴定方法

技术领域

本发明涉及食品检测领域，尤其是涉及一种伪劣肉松产品的鉴定方法。

背景技术

肉松是指用禽、畜瘦肉为主要原料，经煮制、切块、撇油、配料、收汤、炒松、搓松等步骤制成的纤维蓬松成絮状的肉制品。肉松中90％以上的成分是由水分、蛋白质、脂肪、多糖构成，其中，蛋白质的含量普遍在30％～60％之间。

近些年来，随着肉松的需求使用量越来越大，各种伪劣肉松产品也随之混入市场。榨完油的大豆豆粕就含有很高含量的蛋白质和多糖，含量跟肉松中的蛋白质和多糖含量接近，所以市场上经常出现以大豆豆粕为原料的大豆蛋白粉经过处理冒充肉松。这些不法行为不仅破坏贸易公平，给消费者和真正的肉松生产者带来损失，而且由于大豆豆粕经过处理所形成的“肉松”在颜色上跟禽、畜瘦肉肉松区别明显，所以通常需要用着色剂进行染色。经常使用的染色剂有柠檬黄、日落黄、王金黄、胭脂红等合成色素。在强制性国家标准《GB2760-2014食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中，这些色素都是禁止添加的，长期食用合成色素，会容易导致过敏、甚至对肝脏和肾脏造成伤害。

目前，人们主要采用感官判断的方法来鉴别肉松的真假，包括用手捏、眼睛看、口品尝的方式来鉴别肉松，但该方法对于鉴别者的要求实在太高，鉴别结果准确性和可靠性都不高。

发明内容

基于此，有必要针对传统的肉松产品检测的准确性和可靠性都不高的问题，提供一种伪劣肉松产品的鉴定方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下。

一种伪劣肉松产品的鉴定方法，包括如下步骤：

步骤一：向肉松产品的样品中加入有机溶剂萃取其中的脂肪成分，挥干所述有机溶剂，收集固相；

步骤二：向步骤一得到的固相中加入乙腈水溶液，提取其中的色素成分，离心，收集液相溶液；

步骤三：将步骤二收集的液相溶液浓缩处理后加入硫酸铵溶液，以沉淀去除其中的蛋白质成分，离心，收集液相溶液；

步骤四：将步骤三收集的液相溶液吹至净干后，转入聚酰胺固相萃取柱，以除去其中的天然色素成分，收集液相溶液；

步骤五：将步骤四中收集的液相溶液吹至净干，用水转移定溶后过高效液相色谱仪，使用二极管阵列检测器检测其中的合成色素含量，以保留时间定性，外标法定量，得到鉴定结果。

在其中一个实施例中，在所述步骤一中，所用的有机溶剂是初馏点不低于30℃且终馏点不高于60℃的石油醚。

在其中一个实施例中，在所述步骤二中，所述乙腈水溶液的体积浓度是70％；

所述提取其中的色素成分是将加入有所述乙腈水溶液的溶液用超声处理，以使含有色素成分溶于所述乙腈水溶液中，再离心，并用所述乙腈水溶液重复提取多次直至离心后的提取液无色，合并提取液得到液相溶液。

在其中一个实施例中，在所述步骤三中，所述将步骤二收集的液相溶液浓缩处理后加入硫酸铵溶液包括：将液相溶液加热旋转蒸发浓缩后，趁热加入质量浓度为10％的所述硫酸铵溶液。

在其中一个实施例中，在所述步骤三中，还包括：使用水洗涤离心得到的沉淀，再离心收集液相溶液，并合并各离心液得到液相溶液。

在其中一个实施例中，在所述步骤四中，所述将步骤三收集的液相溶液吹至净干是使用氮气将该液相溶液吹至净干；

所述转入聚酰胺固相萃取柱，以除去其中的天然色素成分，收集液相溶液包括：将吹至净干的溶液转入聚酰胺固相萃取柱后，先使用60℃的pH 4.0的水溶液洗涤所述聚酰胺固相萃取柱多次，然后使用无水乙醇-氨水-水溶液洗涤至解吸液无色，合并各解吸液得到液相溶液。

在其中一个实施例中，所述pH 4.0的水溶液是用柠檬酸调节超纯水至pH 4.0的水溶液；

所述无水乙醇-氨水-水溶液中无水乙醇、氨水及水的体积比为7:2:1。

在其中一个实施例中，在所述步骤五中，所述将步骤四中收集的液相溶液吹至净干，用水转移定溶后过高效液相色谱仪包括：将步骤四中收集的液相溶液用乙酸调节pH至7.0，使用氮吹蒸至净干，用水转移定溶后过高效液相色谱仪。

在其中一个实施例中，在所述步骤五中，还包括将水转移定溶后得到的溶液过0.22μm的滤膜过滤的步骤，过滤后得到的溶液作为过所述高效液相色谱仪的供试液。

在其中一个实施例中，在所述步骤五中，色谱的条件是：

色谱柱：尺寸为5mm*4.6mm*250mm的十八烷基硅烷键合硅胶柱；

流动相：体积比为15:85的甲醇与浓度为20mmol/L的乙酸铵水溶液的混合液；

流速：1mL/min；

柱温：40℃；

二极管阵列检测器检测时所用的波长为450nm。

上述伪劣肉松的鉴定方法通过检测肉松中着色剂(色素)的方法来鉴别肉松是否掺假，可同时检测肉松中的日落黄、柠檬黄、胭脂红、王金黄等合成色素，通过检测肉松中有无添加色素，来鉴别肉松是否掺假。该鉴定方法利用色素在水中易溶，在大部分有机溶剂中溶解度极小的特性首先除去脂肪成分，使用盐析的方法使蛋白质凝聚沉淀而去除蛋白质的干扰，使用固相萃取法去除多糖和天然色素的干扰，并浓缩样品溶液。该鉴定方法解决了王金黄固相萃取回收率低的问题，分离效果好，专属性强，检出限和定量限足够低，线性范围良好，重复性好，准确可靠，可用于日常监督检测。

附图说明

图1为标准溶液图谱，依次为柠檬黄、胭脂红、日落黄和王金黄；

图2为样品溶液图谱。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将结合附图对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

一实施方式的伪劣肉松产品的鉴定方法，包括如下步骤：

步骤一：向肉松产品的样品中加入有机溶剂萃取其中的脂肪成分，挥干有机溶剂，收集固相。

所用的有机溶剂是初馏点不低于30℃且终馏点不高于60℃的石油醚。

步骤二：向步骤一得到的固相中加入乙腈水溶液，提取其中的色素成分，离心，收集液相溶液。

乙腈水溶液的体积浓度优选是70％。

具体的提取其中的色素成分是将加入有乙腈水溶液的溶液用超声处理，如超声10min，以使含有色素成分溶于乙腈水溶液中，再离心，如以10000r/min离心5min，并用乙腈水溶液重复提取多次直至离心后的提取液无色，合并提取液得到液相溶液。

步骤三：将步骤二收集的液相溶液浓缩处理后加入硫酸铵溶液，以沉淀去除其中的蛋白质成分，离心，收集液相溶液。

具体的，可以将液相溶液加热旋转蒸发浓缩，如在60℃旋转蒸发除去部分溶剂，再趁热加入质量浓度为10％的硫酸铵溶液。

优选的，步骤三还包括使用水洗涤离心得到的沉淀，再离心收集液相溶液，并合并各离心液得到液相溶液。

步骤四：将步骤三收集的液相溶液吹至净干后，转入聚酰胺固相萃取柱，以除去其中的天然色素成分，收集液相溶液。

所述将步骤三收集的液相溶液吹至净干是使用氮气将该液相溶液吹至净干，以除去多余的有机成分，浓缩样品。

所述转入聚酰胺固相萃取柱，以除去其中的天然色素成分，收集液相溶液包括：将吹至净干的溶液转入聚酰胺固相萃取柱后，先使用60℃的pH 4.0的水溶液洗涤聚酰胺固相萃取柱多次，然后使用无水乙醇-氨水-水溶液洗涤至解吸液无色，合并各解吸液得到液相溶液。优选的，pH 4.0的水溶液是用柠檬酸调节超纯水至pH 4.0的水溶液；无水乙醇-氨水-水溶液中无水乙醇、氨水及水的体积比为7:2:1。

步骤五：将步骤四中收集的液相溶液吹至净干，用水转移定溶后过高效液相色谱仪，使用二极管阵列检测器检测其中的合成色素含量，以保留时间定性，外标法定量，得到鉴定结果。

所述将步骤四中收集的液相溶液吹至净干，用水转移定溶后过高效液相色谱仪包括：将步骤四中收集的液相溶液用乙酸调节pH至7.0，使用氮吹蒸至净干，除去氨水和乙醇，用水转移定溶后过高效液相色谱仪。

优选的，在步骤五中，还包括将水转移定溶后得到的溶液过0.22μm的滤膜过滤的步骤，过滤后得到的溶液作为过高效液相色谱仪的供试液。

色谱的条件优选但不限于是：

色谱柱：尺寸为5mm*4.6mm*250mm的十八烷基硅烷键合硅胶柱。

流动相：体积比为15:85的甲醇与浓度为20mmol/L的乙酸铵水溶液的混合液。

流速：1mL/min。

柱温：40℃。

二极管阵列检测器检测时所用的波长优选但不限于为450nm。

以下为具体实施例部分。

1.仪器和试剂

1.1高效液相色谱仪(携带二极管阵列检测器)。

1.2标准物质：日落黄、柠檬黄、王金黄、胭脂红。

1.3分析纯试剂：乙酸铵、硫酸铵、石油醚(30～60℃)、乙醇、甲酸、乙酸、柠檬酸。

1.4色谱纯试剂：甲醇、乙腈。

1.5聚酰胺固相萃取小柱。

1.6pH＝4的水，用柠檬酸调节超纯水至pH＝4。

1.7甲醇甲酸混合液：甲醇:甲酸＝6:4(体积比)。

1.8无水乙醇-氨水-水溶液：无水乙醇:氨水:水＝7:2:1(体积比)。

2.标准溶液的制备

多色素混合储备液：称取个标准物质适量，用水溶解并稀释成浓度约为1mg/mL的储备液。

多色素标准使用液：取储备液用水稀释成浓度约50μg/mL的标准使用液。

3.样品检测

3.1取肉松产品样品约10g，置100mL三角锥瓶中，加石油醚50mL，搅拌弃去石油醚，重复三次，挥干，加入70％乙腈水溶液超声提取10min，10000r/min离心5min，提取液转入离心烧瓶，重复提取过程至提取液无色。

3.2合并提取液，于60℃旋转蒸发至5mL，趁热加入1mL 10％硫酸铵水溶液，10000r/min离心5min，上清液转入新的离心管，用少许水洗涤沉淀，离心，合并离心液。

3.3将离心液使用氮气吹至净干。

3.4将上述溶液转入聚酰胺固相萃取柱，先使用60℃的pH 4.0的水溶液洗涤3次，然后使用无水乙醇-氨水-水溶液洗涤至解吸液无色。

3.5合并解吸液，使用乙酸调节pH至7.0，氮吹蒸至净干，用水转移定容至20mL，过0.22μm滤膜，作为供试液。

3.6取标准溶液和样品溶液各10μL注入高效液相色谱仪，通过保留时间定性、峰面积定量。

色谱条件：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱，5*4.6*250mm

流动相：甲醇:20mmol/L乙酸铵水溶液＝15:85(体积比)

流速：1mL/min 柱温：40℃

检测器：二极管阵列检测器 波长：450nm

3.6结果判定，检测出日落黄、柠檬黄、胭脂红及王金黄中的任何一种色素均可判定为伪劣肉松产品。

4.方法验证

4.1分离度

去加标浓度三图谱注入液相高效色谱仪进行分析，分离度结果如下表1。标准溶液图谱见图1，样品溶液图谱见图2。

表1

组分名称	柠檬黄	胭脂红	日落黄	王金黄
					分离度	---	45	14	63

4.2检出限和定量限

取标准溶液进行测试，以信噪比为3时的浓度为检出限，信噪比为10时的浓度为定量限，结果如下表2。

表2

组分名称	柠檬黄	胭脂红	日落黄	王金黄
					浓度(μg/mL)	2.311	2.186	0.981	1.219
信噪比	68.04	46.27	40.56	94.18
					检出限(mg/kg)	0.21	0.29	0.15	0.08
定量限(mg/kg)	0.68	0.95	0.49	0.26

3.3线性范围，见表3。

表3

柠檬黄的线性范围：2.3μg/mL～23μg/mL，线性相关系数：1.0000；

胭脂红的线性范围：2.2μg/mL～22μg/mL，线性相关系数：1.0000；

日落黄的线性范围：0.98μg/mL～9.8μg/mL，线性相关系数：1.0000；

王金黄的线性范围：1.2μg/mL～12μg/mL，线性相关系数：0.9997。

4.4精密度，见表4。

表4

4.5准确度

各称取三份混合均匀的样品10g(精确到0.001g)置于小烧杯中，按照下表加入标准溶液，按照2.2.3制备好供试液，进行测试，计算回收率，结果见表5。

表5

柠檬黄的回收率在91.315～98.40％之间，胭脂红的回收率在90.48％～97.37％之间，日落黄的回收率在90.29％～99.00％之间，王金黄的回收率在92.50～99.31％之间，说明方法准确可靠。

4.6样品适用性

在市场随机购买两批肉松蛋糕和一批肉松饼，小心取下肉松，按照该方法开展检测工作，其中一批检测出添加了日落黄，结果如下表6。

表6

说明方法适合于肉松样品的检测。

结论：方法分离良好，专属性强，检出限和定量限足够低，线性范围良好，重复性好，准确可靠，可用于日常监督检测。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种伪劣肉松产品的鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：向肉松产品的样品中加入有机溶剂萃取其中的脂肪成分，挥干所述有机溶剂，收集固相；

步骤二：向步骤一得到的固相中加入乙腈水溶液，提取其中的色素成分，离心，收集液相溶液；

步骤三：将步骤二收集的液相溶液浓缩处理后加入硫酸铵溶液，以沉淀去除其中的蛋白质成分，离心，收集液相溶液；

步骤四：将步骤三收集的液相溶液吹至净干后，转入聚酰胺固相萃取柱，以除去其中的天然色素成分，收集液相溶液；

步骤五：将步骤四中收集的液相溶液吹至净干，用水转移定溶后过高效液相色谱仪，使用二极管阵列检测器检测其中的合成色素含量，以保留时间定性，外标法定量，得到鉴定结果。

2.如权利要求1所述的伪劣肉松产品的鉴定方法，其特征在于，在所述步骤一中，所用的有机溶剂是初馏点不低于30℃且终馏点不高于60℃的石油醚。

3.如权利要求1所述的伪劣肉松产品的鉴定方法，其特征在于，在所述步骤二中，所述乙腈水溶液的体积浓度是70％；

所述提取其中的色素成分是将加入有所述乙腈水溶液的溶液用超声处理，以使含有色素成分溶于所述乙腈水溶液中，再离心，并用所述乙腈水溶液重复提取多次直至离心后的提取液无色，合并提取液得到液相溶液。

4.如权利要求1所述的伪劣肉松产品的鉴定方法，其特征在于，在所述步骤三中，所述将步骤二收集的液相溶液浓缩处理后加入硫酸铵溶液包括：将液相溶液加热旋转蒸发浓缩后，趁热加入质量浓度为10％的所述硫酸铵溶液。

5.如权利要求4所述的伪劣肉松产品的鉴定方法，其特征在于，在所述步骤三中，还包括：使用水洗涤离心得到的沉淀，再离心收集液相溶液，并合并各离心液得到液相溶液。

6.如权利要求1所述的伪劣肉松产品的鉴定方法，其特征在于，在所述步骤四中，所述将步骤三收集的液相溶液吹至净干是使用氮气将该液相溶液吹至净干；

所述转入聚酰胺固相萃取柱，以除去其中的天然色素成分，收集液相溶液包括：将吹至净干的溶液转入聚酰胺固相萃取柱后，先使用60℃的pH 4.0的水溶液洗涤所述聚酰胺固相萃取柱多次，然后使用无水乙醇-氨水-水溶液洗涤至解吸液无色，合并各解吸液得到液相溶液。

7.如权利要求6所述的伪劣肉松产品的鉴定方法，其特征在于，所述pH 4.0的水溶液是用柠檬酸调节超纯水至pH 4.0的水溶液；

所述无水乙醇-氨水-水溶液中无水乙醇、氨水及水的体积比为7:2:1。

8.如权利要求1所述的伪劣肉松产品的鉴定方法，其特征在于，在所述步骤五中，所述将步骤四中收集的液相溶液吹至净干，用水转移定溶后过高效液相色谱仪包括：将步骤四中收集的液相溶液用乙酸调节pH至7.0，使用氮吹蒸至净干，用水转移定溶后过高效液相色谱仪。

9.如权利要求8所述的伪劣肉松产品的鉴定方法，其特征在于，在所述步骤五中，还包括将水转移定溶后得到的溶液过0.22μm的滤膜过滤的步骤，过滤后得到的溶液作为过所述高效液相色谱仪的供试液。

10.如权利要求9所述的伪劣肉松产品的鉴定方法，其特征在于，在所述步骤五中，色谱的条件是：

色谱柱：尺寸为5mm*4.6mm*250mm的十八烷基硅烷键合硅胶柱；

流动相：体积比为15:85的甲醇与浓度为20mmol/L的乙酸铵水溶液的混合液；

流速：1mL/min；

柱温：40℃；

二极管阵列检测器检测时所用的波长为450nm。