CN106544242B - 一种美观的蝉花酒制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种美观的蝉花酒的制备方法，该方法包括如下步骤：步骤1，蝉花菌种在固体培养过程中，用多孔盖板压在培养基表面；步骤2，待孢梗束从小孔中生长至适宜高度，将盖板与培养基接触部分的孢梗束与培养基分离；步骤3，将盖板及生长于其中的孢梗束一起置于容器中；步骤4，向容器中注酒；和步骤5，贮存。本发明制备方法既保证了孢梗束长势均一，也能去除培养基在酒中浸泡久了所造成的酒的混浊现象，保证了蝉花酒的品质。

Description

一种美观的蝉花酒制备方法

技术领域

本发明涉及一种蝉花酒制备方法，具体涉及一种用带孔的盖板培养蝉花，再制备蝉花酒的方法。

背景技术

蝉花(Isaria cicadae Miquel)属于真菌界、子囊菌门、盘菌亚门、粪壳菌纲、肉座菌目、虫草科、棒束孢属(Isaria)。

蝉花是我国名贵的中药材，是寄生在蝉(俗称“知了”)上的一种虫草菌。其药用已有1000多年历史，是我国传统的名贵药材之一，具有多方面的药用价值。主要成分有：腺苷、虫草多糖、虫草酸(甘露醇)、虫草素、尿嘧啶、甾醇、生物碱、维生素、无机盐、矿物质元素等。

蝉花具有调节人体免疫的功能，提高食欲，促进睡眠，增强自身抗病的能力。在这些成分当中，虫草多糖具有独特的生物活性，具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗辐射、抗衰老等功效，免疫调节作用成为研究开发的热点。腺苷能抑制中枢神经元的兴奋性，可以扩张冠状及周围血管、增加冠状动脉血流量、降低血压、减慢心率等作用。腺苷还具有抗血小板聚集、抗辐射和抗肿瘤等作用。不仅如此，蝉花中的活性成分ISP-1具有双向免疫调节活性，可以大大的提高器官移植手术的成功率，对患者的康复也有着明显的积极效果。

将蝉花泡酒是通常采用的营养吸收方法，其泡制过程为：将蝉花培养在酒瓶中并且倒入白酒、密封、放置适当天数即可饮用。采用这种泡制方法，培养周期很长，且长势不均匀，高低不一，疏密不一，形态外观都较差。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种蝉花酒制备方法，该方法在蝉花固体培养过程中，在培养基上压一块带小孔的盖板，让子实体从盖板的小孔中逐步长出。待长到适宜高度时，将盖板下的培养物沿盖板切下，然后切去盖板底部的培养基，放入盛酒的容器中，注酒，贮存。这样既保证了子实体长势均一，也能去除培养基在酒中浸泡久了所造成的酒的混浊现象。保证了蝉花酒的品质。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

一种美观的蝉花酒的制备方法，该方法包括如下步骤：

步骤1，蝉花菌种在固体培养过程中，用多孔盖板压在培养基表面；

步骤2，待孢梗束从小孔中生长至适宜高度，将盖板与培养基接触部分的孢梗束与培养基分离；

步骤3，将盖板及生长于其中的孢梗束一起置于容器中；

步骤4，向容器中注酒；和

步骤5，贮存。

进一步，步骤1所述固体培养过程中，待暗培养结束后将多孔盖板压在培养基表面；更进一步，待菌丝体布满培养基时结束暗培养，转为光照培养；更进一步，多孔盖板选择其表面菌丝体生长良好的培养基下压。

进一步，步骤1所述盖板由密度大于基酒且不与基酒发生反应的材质制成，如石膏板、玻璃板、不锈钢板等；所述盖板形状取决于容器口的形状，其面积略小于容器口面积；所述盖板的小孔孔径为4～6mm，孔间距为1～2mm；更进一步，所述盖板的小孔孔径为4～5mm。

进一步，步骤2所述适宜高度为4～8cm；更进一步，选择其生长茂盛且整齐一致的孢梗束进行分离；更进一步，所选的孢梗束高度以容器高度而定，距容器口距离为2～3cm，孢梗束高度差小于2cm；更进一步，所选的孢梗束高度差小于1cm。

进一步，步骤4注酒量为孢梗束：基酒(w/w)＝10-20：80-90。

进一步，步骤4注酒方法为：注入基酒至高出孢梗束1～2cm处，静置30～60min，再次注酒至距离瓶口1～2cm处。

进一步，步骤5贮存条件为：相对湿度50～70％，温度10～30℃。

进一步，步骤5贮存天数为45天以上。

本发明所述蝉花的培养过程为：将蝉花菌种通过液体培养进行扩增；扩增后的菌种进行固体培养。所述液体培养和固体培养方法可参照现有技术公开的蝉花培养方法。液体培养为以菌种扩增为目的，可采用常规的菌种扩培方法，包括斜面培养、摇瓶培养、种子罐培养、发酵罐培养中的任意一种或几种方法的组合；所用培养基为本领域常规的液体培养基，如PSA培养基或酵母浸出粉-复合氨基酸-蔗糖培养基，酵母浸出粉-白砂糖-大豆水解蛋白培养基，麸皮煮汁-白砂糖培养基等；进一步优选为PSA培养基或酵母浸出粉-复合氨基酸-蔗糖培养基；更进一步，PSA培养基各成分比例为：马铃薯15-25％、蔗糖1-5％、琼脂1-5％；酵母浸出粉-复合氨基酸-蔗糖培养基各成分比例为：酵母浸出粉0.5-2％、复合氨基酸0.2-1％、蔗糖2-5％。更进一步，PSA培养基各成分比例为：马铃薯20％、蔗糖2％、琼脂2％；酵母浸出粉-复合氨基酸-蔗糖培养基各成分比例为：酵母浸出粉1％、复合氨基酸0.5％、蔗糖3.5％。

固体培养基在菌丝体生长阶段为暗培养，温度为18～23℃，相对湿度65～85％，至培养基布满菌丝体为止，培养时间一般为6～8天；孢梗束生长阶段转为光照培养，培养温度为18～20℃，相对湿度80～85％，在孢梗束培养后期，逐渐加大室内空气的流通和交换，培养温度提高到23～25℃，至孢梗束长至4-8cm，培养时间一般为35～50天。固体培养基为以谷物、农作物秸杆、农作物皮壳、经济林木树枝或植物茎杆为主要成分的培养基；其中优选谷物培养基；所述谷物可选自小麦、玉米、大米、小米、黄豆粉、荞麦、大麦、燕麦、糙米、粳米中的任意一种或几种。进一步，固体培养基中还包括辅料，如白砂糖、酵母浸出粉、维生素B1、复合氨基酸、大豆蛋白等。

本发明所述蝉花广泛分布在我国秦岭-淮河以南的18个省、市、区。在我国长江以南的亚热带和热带地区，且多在低洼地带及滇藏高原的金沙江、怒江、澜沧江和雅鲁藏布江等河谷地带。只要在其生长季节，每年的6-8月，按照一般中药材的采集方法都可采到，是现有技术中已知菌种，并可以从商业途径购买获得。发明人还直接从安徽省石台县的竹林中采集并分离到到该菌种，保存于浙江泛亚生物医药股份有限公司研究院菌种库(液氮及冻干保存)，菌株编号AC17-7，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)注册保藏，保藏号为CGMCC No.3453)。亦可用其它食用菌厂或研究所提供的蝉花菌种。

本发明的有益效果在于：

①外形美观：本发明利用带孔的盖板固定蝉花，使其呈垂直状态，能保证蝉花酒的性状稳定一致，美观大方。②品质高：由于去掉了固体培养基，在蝉花酒贮存过程中，不会有培养基中的物质析出，保证了酒色剔透、明晰，商业价值更高；③有效成分含量高：本发明方法制备的蝉花酒其腺苷含量达到23.45μg/ml，HEA(即N6-(2-羟乙基)腺苷，又名茧草菌素，是蝉花孢梗束的特有成分，已作为其的质量控制指标之一)含量达到33.72μg/ml，明显高于普通泡酒方法。

附图说明

图1本发明制备的蝉花酒

图2多孔盖板

效果实验例

实验例1本发明盖板方法与常规泡酒方法效果比较

一、实验方法

按如下两种方法制备蝉花酒，每种方法设置5组重复：

方法一，常规泡制方法：取实施例1扩大培养得到的蝉花菌种，直接接种到盛酒容器中按实施例4进行固体培养，待培养结束后，按实施例10的方法注酒并贮存；

方法二，本发明盖板法：取实施例1扩大培养得到的蝉花菌种按实施例4进行固体培养，待暗培养结束后按实施例9进行压板和切割，将盖板及孢梗束一起置于容器中，按实施例10的方法注酒并贮存。

考察不同方法制备的蝉花酒外观及有效成分含量。

二、实验结果

结果见表1。

表1 不同方法制备的蝉花酒效果比较(n＝5)

实验例2不同盖板方法效果比较

一、实验方法

按如下两种方法制备蝉花酒，每种方法设置5组重复：

方法一：取实施例1扩大培养得到的蝉花菌种按实施例4进行固体培养，待培养结束后，取生长茂盛且整齐一致的孢梗束进行采收，并***盖板的小孔中，将盖板及孢梗束置于容器中，按实施例10的方法注酒并贮存；

方法二：取实施例1扩大培养得到的蝉花菌种按实施例4进行固体培养，待暗培养结束后按实施例9进行压板和切割，将盖板及孢梗束一起置于容器中，按实施例10的方法注酒并贮存。

考察不同方法制备效果的差异。

二、实验结果

结果见表2。

表2 不同方法制备的蝉花酒效果比较(n＝5)

具体实施方式

实施例1液体培养

斜面培养：将分离纯化的蝉花菌种接种于斜面试管中，再将接种菌种的斜面试管放入22℃培养箱，培养时间为7天，待菌丝长满试管；

摇瓶培养：在500m1三角瓶中装入200m1液体培养基，在0.11Mpa压力下高压灭菌30分钟，待冷却至室温，将1支斜面试管的菌种接种到500m1三角瓶培养基上，并置于恒温振荡培养箱，温度22±1℃，150转/分钟条件下培养，培养时间为3天；

种子罐培养：在50L气升式发酵罐中装入20L液体培养基，培养基温度大于95℃，加入食用消泡剂，加入量为培养基重量的0.03％,在0.11Mpa压力下，通入蒸汽加热到121℃，并保压30-45分钟；灭菌后，冷却至20℃时，将4瓶上述培养好的500m1摇瓶菌种接入培养基，培养温度为22±1℃，通气量为1：0.5V/V min，保压4.903-7.0845×10⁴Pa，经3天通气培养，达到对数生长期后即可，终培养体积为20L。

发酵罐培养：在500L气升式发酵罐中装入200L液体培养基，培养基温度大于95℃，加入食用消泡剂，加入量为培养基重量的0.03％,在0.11Mpa压力下，通入蒸汽加热到121℃，并保压30-45分钟；灭菌后，冷却至20℃时，将上述培养好的200L种子罐种子全部接入培养，培养温度为22±1℃，通气量为1：0.5V/V min，保压4.903-7.0845×10⁴Pa，经3天通气培养，达到对数生长期后即可。终培养体积为200L。

斜面试管培养基：马铃薯煮汁20％，白砂糖3.5％、酵母浸粉0.5％；

摇瓶、种子罐及发酵罐中的液体培养基：含有酵母浸出粉0.5％，复合氨基酸1％，白砂糖3.5％，余量补水至100％，pH值为6.5。

实施例2液体培养

斜面培养：将分离纯化的蝉花菌种接种于斜面试管中，再将接种菌种的斜面试管放入22℃培养箱，培养时间为7天，待菌丝长满试管；

摇瓶培养：在500m1三角瓶中装入200m1液体培养基，在0.11Mpa压力下高压灭菌30分钟，待冷却至室温，将1支斜面试管的菌种接种到500m1三角瓶培养基上，并置于恒温振荡培养箱，温度22±1℃，150转/分钟条件下培养，培养时间为3天；

种子罐培养：在50L气升式发酵罐中装入20L液体培养基，培养基温度大于95℃，加入食用消泡剂，加入量为培养基重量的0.03％,在0.11Mpa压力下，通入蒸汽加热到121℃，并保压30-45分钟；灭菌后，冷却至20℃时，将4瓶上述培养好的500m1摇瓶菌种接入培养基，培养温度为22±1℃，通气量为1：0.5V/V min，保压4.903-7.0845×10⁴Pa，经3天通气培养，达到对数生长期后即可，终培养体积为20L。

斜面试管培养基：每1升液体含有200克土豆煮汁，20克蔗糖，20克琼脂，余补水至1000毫升，pH值为6.5；

摇瓶及种子罐培养基：每1升液体含有30克酵母浸出粉，30克白砂糖，5克大豆水解蛋白，加水补至1000毫升，pH值为6.5。

实施例3液体培养

斜面培养：将分离纯化的蝉花菌种接种于斜面试管中，再将接种菌种的斜面试管放入22℃培养箱，培养时间为7天，待菌丝长满试管；

种子罐培养：在50L气升式种子罐中装入20L液体培养基，培养基温度大于95℃，加入食用消泡剂，加入量为培养基重量的0.03％,在0.11Mpa压力下，通入蒸汽加热到121℃，并保压30-45分钟；灭菌后，冷却至20℃时，将4瓶上述斜面试管的菌种接入培养基，培养温度为22±1℃，通气量为1：0.5V/V min，保压4.903-7.0845×10⁴Pa，经3天通气培养，达到对数生长期后即可，终培养体积为20L。

发酵罐培养：在500L气升式发酵罐中装入200L液体培养基，培养基温度大于95℃，加入食用消泡剂，加入量为培养基重量的0.03％,在0.11Mpa压力下，通入蒸汽加热到121℃，并保压30-45分钟；灭菌后，冷却至20℃时，将上述培养好的200L种子罐种子全部接入培养，培养温度为22±1℃，通气量为1：0.5V/V min，保压4.903-7.0845×10⁴Pa，经3天通气培养，达到对数生长期后即可。终培养体积为200L。

斜面试管培养基：每1升液体含有200克土豆煮汁，20克蔗糖，20克琼脂，余补水至1000毫升，pH值为6.5；

种子罐及发酵罐培养基：每1升液体含有40克麸皮煮汁，30克白砂糖，余补水至1000毫升，pH值为6.5。

实施例4固体培养

固体培养基：按白砂糖3.5％、酵母浸出粉0.5％、维生素B1 10mg/1000ml的比例配成营养液，将大米和营养液按1:1.6的比例配制而成。将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内，121℃下灭菌30-50min；灭菌后，培养容器移置缓冲室内，自然冷却至24℃以下移置接种室内。

接种：接种前培养容器先在超净工作台或百级层流罩内(下)用紫外光照射0.5h；每个培养容器按7％的接种量将实施例1～3经扩大培养得到的菌种接种到固体培养基上，接种后的容器放入培养室培养。

培养条件：菌丝培养阶段：发菌室温度宜为18～23℃，空气相对湿度65％～85％，遮光；室内培养6～8d，长满菌丝；孢梗束生长阶段：待菌丝布满整个盒面并深扎到盒底，开始见光，但避免太阳光直射，调整培养温度为18～20℃，湿度80％～85％；在孢梗束培养后期，逐渐加大室内空气的流通和交换，培养温度提高到23～25℃。培养阶段若发现污染应立即清除。待孢梗束长至4～8cm，培养结束。

实施例5固体培养

固体培养基：按白砂糖3.5％、酵母浸出粉0.5％、维生素B1 10mg/1000ml的比例配成营养液，将小米和营养液按1:1.6的比例配制而成。将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内，121℃下灭菌30-50min；灭菌后，培养容器移置缓冲室内，自然冷却至24℃以下移置接种室内。

培养条件同实施例4。

实施例6固体培养

固体培养基：将糙米清洗控水后，加入适量的水，其重量比为糙米：水为1：1.5，混合均匀；将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内，121℃下灭菌30-50min；灭菌后，培养容器移置缓冲室内，自然冷却至24℃以下移置接种室内。

培养条件同实施例4。

实施例7固体培养

固体培养基：将小麦清洗控水后，加入适量的水，其重量比为小麦:水为1：1.3，混合均匀；将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内，121℃下灭菌30-50min；灭菌后，培养容器移置缓冲室内，自然冷却至24℃以下移置接种室内。

培养条件同实施例4。

实施例8固体培养

固体培养基：玉米芯69％、棉籽壳16％、木屑11％、石膏3％、石灰1％，固体物料：水＝1：1.5(视原料含水量而定)混合拌匀；将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内，121℃下灭菌30-50min；灭菌后，培养容器移置缓冲室内，自然冷却至24℃以下移置接种室内。

培养条件同实施例4。

实施例9压板及切割

将实施例1～3扩大培养的蝉花菌种按实施例4～8任一方法进行固体培养，在暗培养结束后，取多孔石膏板(直径略小于盛酒容器口，孔径4mm，孔间距为1mm，见图2)，选择其表面菌丝茂盛、生长良好的固体培养基下压，使孢梗束从小孔中生长。待固体培养结束后，选择其表面孢梗束整齐一致、高度约4～5cm左右的盖板，沿边缘将培养基切下，并沿盖板与培养基的接触面去除盖板下部的培养基，将盖板及生长于其中的孢梗束一起置于容器中。

实施例10注酒及贮存

选择清洁并已消毒的桌面，采用无菌操作的方法，将基酒沿酒瓶内壁徐徐流下，注入基酒至高出孢梗束1～2cm处，静置30～60min，再次注入基酒至距离瓶口1～2cm处。

选择较为干燥、清洁、光亮和通风较好的地方，相对环境湿度在70％左右，温度25℃左右；容器封口要严密，防止漏酒和“跑度”；避免强光直接照射。放入酒窖中贮藏约45天左右至酒色成为橙色至橙黄色，即可出窖为成品(见图1)。

Claims (6)

1.一种美观的蝉花酒的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

步骤1，蝉花菌种在固体培养过程中，待暗培养结束后将多孔盖板选择表面菌丝体生长良好的培养基下压；所述多孔盖板由密度大于基酒且不与基酒发生反应的材质制成，所述小孔孔径为4~6mm，孔间距为1~2mm；

步骤2，待孢梗束从小孔中生长至适宜高度，将盖板与培养基接触部分的孢梗束与培养基分离；

步骤3，将盖板及生长于其中的孢梗束一起置于容器中；

步骤4，向容器中注酒；和

步骤5，贮存；

其中，步骤4注酒方法为：注入基酒至高出孢梗束1~2cm处，静置30~60min，再次注酒至距离瓶口1~2cm处。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述盖板为石膏板、玻璃板或不锈钢板中的任意一种。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2所述适宜高度为4~8cm。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2选择其生长茂盛且整齐一致的孢梗束进行分离，孢梗束高度差小于2cm。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4注酒量为：按孢梗束与基酒的重量比为（10-20）：（80-90）注酒。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤5贮存条件为：相对湿度50~70%，温度10~30℃；贮存天数为45天以上。

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