CN106420381A - 青蒿素类成分或其组合物在皮肤护理中的新应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及到所定义的青蒿素类成分或其组合物的新应用,即在哺乳动物皮肤护理领域中的新应用。其通过提供调节异常角化、抑制色素沉着、抗瘢痕形成、延缓皮肤衰老、保持皮肤弹性、抗炎、止血、镇痛、抗菌及皮肤寄生虫等益处,消除或缓解哺乳动物皮肤不良状态以增强皮肤的健康与美丽。所述益处由明显预防或缓解痤疮脱屑等角化疾病症状、预防或减少皮肤细纹皱纹、预防或缓解皮肤灰黄暗淡等来证明。所述的益处通过向哺乳动物施用青蒿素类成分或其组合物或包含青蒿素类成分或其组合物的护肤组合物如健康产品、日化产品、保健品或药品来实现。本发明将青蒿素类成分或其组合物的用途拓展于皮肤护理领域,使其为人民健康事业做出更大的贡献。
Description
技术领域
本发明涉及到所定义的青蒿素类成分或其组合物的一种新应用,即在哺乳动物皮肤护理领域的新应用包括:a)通过纠正异常角化作用预防、延迟和/或治疗哺乳动物痤疮、头屑、脱屑瘙痒、干燥皲裂、银屑病、硬皮病、毛囊周角化病等由异常角化所引起的角化病症;b)通过促进角化作用软化或柔顺哺乳动物的唇、皮肤、毛发、指趾甲、蹄等,并促进哺乳动物唇、皮肤、毛发、指趾甲、蹄等的更新,调节它们的油性与光泽;c)通过抗色素沉着作用促进皮肤亮白红润,预防、延迟和/或治疗哺乳动物皮肤变黑、灰黄暗淡、色斑、痘印、日晒损伤、炎症损伤等色素沉着症状的出现;d)通过抗瘢痕形成作用预防、延迟和/或治疗哺乳动物皮肤炎症刺激伤害造成的瘢痕生长、外界刺激伤害造成的瘢痕生长、痘印等瘢痕症状的出现;e)通过延缓衰老保持皮肤弹性作用增强皮肤弹性与光泽,预防、延迟和/或治疗哺乳动物皮肤细纹、皱纹、松垂、萎缩、肿胀、毛孔粗大的出现;f)通过抗细菌、抗真菌、抗皮肤寄生虫作用保持哺乳动物皮肤的清洁,预防、延迟和/或治疗细菌、真菌、皮肤寄生虫等所引起的哺乳动物皮肤不良状态;g) 通过抗炎、镇痛、止血等作用消除或缓解皮肤炎症红肿热痛、出血等不良状态;h)通过促进角化、纠正角化异常、抗色素沉着、抑制瘢痕形成、延缓皮肤老化、保持皮肤弹性、抗炎、镇痛、止血、抗细菌、抗真菌、抗皮肤寄生虫等一系列对哺乳动物皮肤有益的作用,消除或缓解哺乳动物皮肤不良状态从而提供增强的皮肤健康与美丽。
通过将含有安全有效量的青蒿素类成分或其组合物的护肤组合物如健康产品、日化产品、保健品或药品等施用到需要这类效果的哺乳动物上,可实现这些方法与益处。
背景技术
随着经济与社会的高速发展人们对健康与美丽的要求也随之提高,尤其是皮肤护理受到了更加广泛的关注,对护肤用品的功能性与安全性提出了更高的要求。目前困扰***的皮肤问题主要是:痤疮、脱屑、皮肤灰黄暗淡变黑、松弛下垂、细纹皱纹、残留瘢痕痘印、红肿热痛等。因此市场上以面霜、面膜、洗面乳、沐浴乳、洗发露、皮肤软膏剂等为代表的皮肤护理产品,大多添加了用以解决各种皮肤问题的活性成分。然而这些成分大多为人工合成来源,在追求自然崇尚天然的今天,能有效解决各种皮肤问题的天然来源的活性成分,以其绿色、环保、安全性高、毒副作用小等特点倍受***的期盼且其消费需求也在不断的增长。
青蒿素是传统中医药送给世界人民的礼物,对防治疟疾等传染性疾病维护世界人民健康具有重要意义。2015年屠呦呦研究员因青蒿素而获得诺贝尔生理学或医学奖,表明了全世界对青蒿素类成分的认可,是我国传统医药文化走向世界,为世界人民所认识进程中的一座丰碑。目前青蒿素类成分已成为世界各国的研究热点,对其抗肿瘤、抗寄生虫、治疗***性红斑狼疮等作用进行了深入的研究。但是以上研究都是围绕药物研究而展开的,为响应国家深入发掘中医药宝库中的精华,充分发挥中医药的独特优势,推进中医药现代化,推动中医药走向世界的号召,申请者本着严谨求实的态度对青蒿素类成分进行广泛的药效学筛选研究,以期使青蒿素类成分更好的为社会大众所服务。
申请者以青蒿素类成分或其组合物进行广泛的药效学筛选,并惊奇的发现青蒿素类成分或其组合物在哺乳动物皮肤上具有促进角化、纠正角化异常、抑制色素沉着、抑制瘢痕生成、延缓皮肤老化、保持皮肤弹性、消除红肿热痛、杀灭皮肤蠕形螨等有着显著益处的皮肤护理活性。因此申请者发现安全有效量的青蒿素类成分或其组合物及含有安全有效量的青蒿素类成分或其组合物的护肤组合物可以对皮肤疾病或皮肤不良状态提供预防性或治疗性处理。例如,申请者已经发现青蒿素类成分或其组合物具有预防、延迟和/或治疗哺乳动物痤疮、头屑、银屑病、硬皮病、毛囊周角化病等由异常角化所引起的角化病症;软化或柔顺哺乳动物的唇、皮肤、毛发、指趾甲、蹄等,并促进哺乳动物唇、皮肤、毛发、指趾甲、蹄等的更新,调节它们的油性与光泽;预防、延迟和/或治疗哺乳动物皮肤变黑、灰黄暗淡、色斑、痘印、日晒损伤、炎症损伤等色素沉着症状的出现;预防、延迟和/或治疗哺乳动物皮肤瘢痕,痘印等瘢痕症状的出现;预防、延迟和/或治疗哺乳动物皮肤细纹、皱纹、松垂、萎缩、肿胀、毛孔粗大的出现;保持哺乳动物皮肤的清洁,预防、延迟和/或治疗细菌、真菌、皮肤寄生虫等所引起的哺乳动物皮肤不良状态;通过促进角化、纠正角化异常、抗色素沉着、抑制瘢痕形成、延缓皮肤老化、保持皮肤弹性、抗炎、镇痛、止血、抗细菌、抗真菌、抗皮肤寄生虫等一系列对哺乳动物皮肤有益的作用,消除或缓解哺乳动物皮肤不良状态从而提供增强的皮肤健康与美丽。以上发现必将推进健康产品、日化产品、保健品或药品的研发创新,并将对***的身心健康和日常生活产生深远的影响。
发明内容
本发明的第一个方面在于提供所定义的青蒿素类成分或其组合物的一种新应用,即在皮肤护理领域的新应用;本发明的第二个方面在于提供一种护肤组合物其包含安全有效量的青蒿素类成分或其组合物及皮肤学与药学可接受的其他活性添加剂及基质;本发明的第三个方面在于提供一种消除或缓解哺乳动物皮肤不良状态以提供增强的皮肤健康与美丽的方法,所述方法包括向哺乳动物施用所定义的青蒿素类成分或其组合物或本发明的护肤组合物。
本文所述的青蒿素类成分或其组合物是指青蒿素及其衍生物和相关物及他们的盐类包括但不限于,青蒿素、双氢青蒿素、青蒿琥酯、青蒿琥酯钠、蒿甲醚、蒿***、青蒿素C13衍生物、青蒿素C12衍生物、青蒿素C4衍生物、脱氧桥青蒿素结构相关化合物、脱甲基青蒿素结构相关化合物、脱羰基氧青蒿素结构相关化合物、甾类青蒿素结构相关化合物、内酰胺青蒿素结构相关化合物、开环青蒿素结构相关化合物、4,5-环氧碳代青蒿素结构相关化合物、青蒿素结构简化物、其他青蒿素结构相关化合物及他们的盐类;或含有青蒿素类成分的组合物或提取物包括但不限于,中药青蒿(ARTEMISIAE ANNUAE HERBA)及其制品、植物黄花蒿(Artemisia annua L.)及其制品、其他菊科蒿属(Artemisia Linn. Sensu stricto, excl. Sect. Seriphidium Bess.)植物及其制品、青蒿组织培养液、青蒿素母液等;或选自上述成分的任意组合物。青蒿素类成分或其组合物的来源可以是合成或自然包括但不限于,天然产物提取、化学全合成、化学半合成、生物合成、组织细胞培养、真菌转化、代谢通路等途径。
本文所述的皮肤是指哺乳动物的皮肤及其附属器官包括但不限于,皮肤、汗腺、皮脂腺、指甲、趾甲、毛发、唇、表皮、真皮等。
本文所述的护肤组合物是指包含安全有效量的青蒿素类成分或其组合物及皮肤学与药学可接受的其他活性添加剂及基质所组成的各种健康产品、日化用品、药品、保健品等包括但不限于,乳剂类化妆品、水状类化妆品、粉类化妆品、膏霜类化妆品、气溶胶类化妆品、发用类制品、美容类化妆品、皂类、面膜、疗效类化妆品、防晒类化妆品、片剂、散剂、丸剂、软膏剂、贴膜剂、凝胶剂、胶囊剂、颗粒剂、泡腾剂、熏蒸剂、缓释剂等及其他皮肤护理用品。
本文所述的安全有效量是指本领域的相关技术人员合理判断使用青蒿素类成分或其组合物足以产生显著的有益效果,且该量又足以避免严重的不良反应,即提供合理的效险比,其含量优选为约0.0001%~90%,更优选为约0.01%~35%,最优选为约1%~22%其中所述百分比是以组合物质量为100%计。
本文所述的皮肤不良状态是指由于机体的内在因素或外在因素所引起的皮肤生理健康与美学外观减弱的状态包括但不限于,皮肤角化异常、皮肤脱屑瘙痒、皮肤灰黄暗淡、皮肤变黑、皮肤衰老松弛、皮肤细纹皱纹、皮肤肿胀增厚、皮肤萎缩下垂、毛孔粗大、皮肤炎症红肿、皮肤油腻粗糙、皮肤干燥皲裂、皮肤出血疼痛、皮肤受炎症或外界刺激伤害造成的色素沉着、皮肤受炎症或外界刺激伤害造成的瘢痕生长等。例如哺乳动物的痤疮、头屑、银屑病、硬皮病、毛囊周角化病等由异常角化所引起的角化病症;哺乳动物唇、皮肤、毛发、指趾甲、蹄等的干燥龟裂或过度油腻;哺乳动物皮肤变黑、灰黄暗淡、色斑、痘印、日晒损伤、炎症损伤等色素沉着症状的出现;哺乳动物皮肤瘢痕,痘印等瘢痕症状的出现;哺乳动物皮肤细纹、皱纹、松垂、萎缩、毛孔粗大的出现;哺乳动物皮肤由细菌、真菌、皮肤寄生虫等所引起的不良状态等。
本文所述的增强的皮肤健康与美丽是指由于减轻或消除皮肤不良状态而使皮肤的生理健康与美学外观恢复或进一步增强包括但不限于,
a)通过纠正异常角化作用预防、延迟和/或治疗哺乳动物痤疮、头屑、脱屑瘙痒、干燥皲裂、银屑病、硬皮病、毛囊周角化病等由异常角化所引起的角化病症;
b)通过促进角化作用软化或柔顺哺乳动物的唇、皮肤、毛发、指趾甲、蹄等,并促进哺乳动物唇、皮肤、毛发、指趾甲、蹄等的更新,调节它们的油性与光泽;
c)通过抗色素沉着作用促进皮肤亮白红润,预防、延迟和/或治疗哺乳动物皮肤变黑、灰黄暗淡、色斑、痘印、日晒损伤、炎症损伤等色素沉着症状的出现;
d)通过抗瘢痕形成作用预防、延迟和/或治疗哺乳动物皮肤炎症刺激伤害造成的瘢痕生长、外界刺激伤害造成的瘢痕生长、痘印等瘢痕症状的出现;
e)通过延缓衰老保持皮肤弹性作用增强皮肤弹性与光泽,预防、延迟和/或治疗哺乳动物皮肤细纹、皱纹、松垂、萎缩、肿胀、毛孔粗大的出现;
f)通过抗细菌、抗真菌、抗皮肤寄生虫作用保持哺乳动物皮肤的清洁,预防、延迟和/或治疗细菌、真菌、皮肤寄生虫等所引起的哺乳动物皮肤不良状态;
g) 通过抗炎、镇痛、止血等作用消除或缓解皮肤炎症红肿热痛、出血等不良状态;
h)通过促进角化、纠正角化异常、抗色素沉着、抑制瘢痕形成、延缓皮肤老化、保持皮肤弹性、抗炎、镇痛、止血、抗细菌、抗真菌、抗皮肤寄生虫等一系列对哺乳动物皮肤有益的作用,消除或缓解哺乳动物皮肤不良状态从而提供增强的皮肤健康与美丽。
本文所述的施用是指通过各种给药途径包括但不限于,局部涂抹、局部外敷、口服、熏蒸等方式使本文所述的青蒿素类成分或其组合物或本文所述的护肤组合物作用于皮肤。
本文所述的其他活性添加剂及基质是指本领域所公知的在目前护肤日化用品、药品、保健品、健康品中已有应用或可能应用的除青蒿素类成分及其组合物以外的宽范围的任选的其他活性添加剂及基质包括但不限于,油质原料、粉质原料、胶质原料、溶剂原料、水溶性聚合物、防腐剂、增稠剂、酸碱类调节剂、抗氧化剂、保湿剂、收敛剂、防晒剂、杀菌剂、调理剂、剥脱剂、遮光剂、止痒剂、磨砂剂、表面活性剂、皮肤助渗剂、皮肤感觉剂、皮肤舒缓剂、皮肤愈合剂、营养添加剂、微量元素和激素类添加剂、生理活性物质添加剂、合成类营养添加剂、活性肽、天然提取物、生物学添加剂、精油、香精、香料、色素、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、助悬剂、包衣材料、赋形剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂、微囊、微球、脂质体等以及他们的组合。
本文所述的皮肤学与药学可接受的是指所述组合物及其含有组分适用于与哺乳动物皮肤相接触,而没有过度的毒性、不相容性、不稳定性、变应性反应等;或适用于在经过各种给药途径与哺乳动物机体相接触,而没有过度的毒性、不相容性、不稳定性、变应性反应等。
本文所述的药理学可接受的基质是指所述的基质不会对药理学实验产生影响,可以恰当的分散青蒿素类成分或其组合物,并作为实验中的阴性对照组。
现在将借助以下非限制性实例对本发明的具体实施方案作进一步的描述并进行举例说明,所举实例只用于解释本发明,并非用于限定本发明的范围。本文所述内容仅为本发明精神和范围条件下的基本说明,其目的在于使本领域内的技术人员能够理解本发明的内容并据以实施,不能仅以以下实施例来限定本发明的专利范围,对依据本发明技术方案的普通技术人员来说,依据本发明所揭示的精神实质对本发明进行任何等效变换或修饰,均应属于本发明的保护范围。
实施例1:青蒿素护肤霜的制备。
如下组分通过护肤霜现有生产工艺可制成青蒿素护肤霜。
组分 | 质量分数% | 组分 | 质量分数% |
双氢青蒿素 | 2.00 | 凡士林 | 6.00 |
羊毛脂 | 4.00 | 鳄梨油 | 4.00 |
十六醇 | 2.00 | 香精 | 适量 |
十六醇聚氧乙烯醚 | 1.50 | 去离子水 | 加至100.00 |
实施例2:青蒿素洗发露的制备。
如下组分通过洗发露现有生产工艺可制成青蒿素洗发露。
组分 | 质量分数% | 组分 | 质量分数% |
青蒿素 | 3.00 | 硬脂酸 | 5.00 |
十二烷基硫酸钠 | 20.00 | 氢氧化钠 | 0.75 |
椰子油单乙醇酰胺 | 1.00 | 香精 | 适量 |
丙二醇单硬脂酸酯 | 2.00 | 去离子水 | 加至100.00 |
实施例3: 青蒿面膜的制备。
如下组分通过面膜现有生产工艺可制成青蒿面膜。
组分 | 质量分数% | 组分 | 质量分数% |
青蒿提取物 | 10.00 | 甘油 | 5.00 |
聚乙烯吡咯烷酮 | 2.00 | 乙醇 | 10.00 |
羧甲基纤维素 | 3.00 | 香精 | 适量 |
聚乙二醇 | 15.00 | 去离子水 | 加至100.00 |
实验例1:本发明青蒿素类成分或其组合物的抗炎作用
青蒿素类成分或其组合物以药理学可接受的基质分散。取昆明种小鼠24只,随机分为2组,即基质对照组与2%青蒿素类成分或其组合物组,每组各12只。二甲苯0.05mL涂于小鼠右耳,刺激后分别于15min、30min、45min局部给予各组等量的基质与2%青蒿素类成分或其组合物,60min断颈处死动物,剪下左右耳壳,用直径8mm的打孔器分别在两耳的同一部位取下耳片称取质量,以两耳片的质量差计算各组耳壳肿胀度进行比较。
表1. 青蒿素类成分或其组合物对二甲苯所致小鼠耳壳急性炎症的影响(mean±
SD)
组别 | 只数 | 肿胀度 |
基质对照组 | 12 | 55.8±3.27 |
2%青蒿素类成分或其组合物组 | 12 | 22.5±2.96 |
P<0.01,与基质对照组比较
由表1可见青蒿素类成分或其组合物有抗炎作用,与基质对照组有显著差异。
实验例2:本发明青蒿素类成分或其组合物的镇痛作用
青蒿素类成分或其组合物以药理学可接受的基质分散。取昆明种小鼠30只,随机分为2组,即基质对照组与2%青蒿素类成分或其组合物组,每组各15只。局部给予各组等量的基质与2%青蒿素类成分或其组合物给药后保鲜膜覆盖,胶布固定30min后解开,以生理盐水洗净药物,再用干药棉拭干,立即给小鼠右后足背皮下注射新配制的2.5%甲醛溶液30μL。注射甲醛后立即记录每只小鼠首次舔咬右后足的潜伏期及10min内舔咬右后足的次数。
表2. 青蒿素类成分或其组合物对甲醛致小鼠疼痛的影响(mean±SD)
组别 | 只数 | 潜伏期/s | 10min内舔足次数 |
基质对照组 | 15 | 7.9±1.55 | 25.4±5.2 |
2%青蒿素类成分或其组合物组 | 15 | 13.2±3.25 | 14.9±5.4 |
P<0.01,与基质对照组比较
由表2可见青蒿素类成分或其组合物有镇痛作用,与基质对照组有显著差异。
实验例3:本发明青蒿素类成分或其组合物的止血作用
青蒿素类成分以药理学可接受的溶媒分散。取昆明种小鼠24只,随机分为2组,即基质对照组与2%青蒿素类成分或其组合物组,每组各12只。将小鼠固定于鼠筒中,尾尖部2cm浸泡于2%青蒿素类成分或其组合物溶液或溶媒中,给药时间30min,间隔2h后,重复给药1次。末次给药30min后,以利剪在小鼠距尾尖1.5cm处剪断,待血液自然流出时开始计录出血时间,每隔5秒用己事先称重的棉球吸取血滴,直至出血自然停止(棉球吸时无血)。按下式计算各组动物出血量:出血量=带血棉球重量一初始棉球重量(mg)。
表3. 青蒿素类成分或其组合物对小鼠断尾的止血作用(mean±SD)
组别 | 只数 | 出血时间/s | 出血量/mg |
基质对照组 | 12 | 124.7±11.68 | 45.3±12.1 |
2%青蒿素类成分或其组合物组 | 12 | 113.1±12.77 | 25.3±8.7 |
P<0.05,与基质对照组比较
由表3可见青蒿素类成分或其组合物有止血作用,与基质对照组有显著差异。
实验例4:本发明青蒿素类成分或其组合物的抗细菌作用
细菌组经培养48h后观察有无菌落生长,以无菌落生长者的药物最低浓度为药物的最低抑菌浓度(MIC)。
表4. 青蒿素类成分或其组合物对常见致病细菌最低抑菌浓度
菌种名 | MIC/g% |
金黄色葡萄球菌 | 1.1 |
痤疮丙酸杆菌 | 0.9 |
绿脓杆菌 | 1.1 |
乳酸杆菌 | 1.0 |
由表4可见青蒿素类成分或其组合物对常见致病细菌,尤其是引起皮肤疾病的金黄色葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌、绿脓杆菌有一定的抑制作用。
实验例5:本发明青蒿素类成分或其组合物的抗真菌作用
真菌组经培养72h后观察点种的菌范围不增大,且逐渐变小干燥,为菌株已被药物抑制的最低浓度(MIC)。
表5. 青蒿素类成分或其组合物对常见皮肤真菌最低抑菌浓度
菌种名 | MIC/g% |
糠秕孢子菌 | 0.9 |
白色念珠菌 | 0.9 |
表皮癣菌 | 1.1 |
由表5可见青蒿素类成分或其组合物对常见的皮肤真菌有一定的抑制作用。
实验例6:本发明青蒿素类成分或其组合物的抗蠕形螨作用
青蒿素类成分或其组合物以药理学可接受的基质分散。采用透明胶带粘贴过夜法获取人体蠕形螨,随机分成基质组和2%青蒿素类成分或其组合物组,每组12只。用微量移液器吸取等量的基质和2%青蒿素类成分或其组合物各200μL药液滴加于载波片上,用推片将药液均匀铺开,将检出蠕形螨的胶带贴于载玻片上,保证药液与虫体充分接触。然后将载玻片置于人工气候箱(温度30℃,湿度75%),12h后显微镜下观察蠕形螨死亡情况。死亡判断标准:在400倍显微镜下连续观察1min,螨体鳌肢或足爪不动者初步判断为死亡,30min后继续观察仍不动者确定为死亡。
表6. 青蒿素类成分或其组合物对蠕形螨的杀灭作用
组别 | 只数 | 死亡只数 | 死亡率 |
基质对照组 | 12 | 0 | 0% |
2%青蒿素类成分或其组合物组 | 12 | 10 | 83% |
由表6可见青蒿素类成分或其组合物对蠕形螨有显著的杀灭作用。
实验例7:本发明青蒿素类成分或其组合物的角化调节作用
青蒿素类成分或其组合物以药理学可接受的基质分散。取昆明种小鼠30只,雌雄各半,随机分成基质组和2%青蒿素类成分或其组合物组。2组小鼠每天分别局部涂抹等量的基质与2%青蒿素类成分或其组合物给药后保鲜膜覆盖,胶布固定30min后解开,以生理盐水洗净药物,再用干药棉拭干,连续21天,一天2次。于第22天处死动物,在距尾根2cm处取鼠尾表皮,以10%甲醛溶液固定石蜡包埋,HE染色,在光镜下观察每个小鼠的尾部鳞片。凡鳞片表皮有连续成行的颗粒细胞者,称为有颗粒层形成的鳞片,颗粒细胞为表皮中扁平或菱形细胞所组成,胞浆内充满粗大深嗜碱性、HE染色呈深兰色透明的角质颗粒。计数鼠尾表皮100个鳞片中有颗粒层形成数。
表7. 青蒿素类成分或其组合物对小鼠鼠尾颗粒细胞形成的影响(mean±SD)
组别 | 只数 | 鼠尾每100个鳞片中颗粒层形成数 |
基质对照组 | 15 | 7.3±1.1 |
2%青蒿素类成分或其组合物组 | 15 | 13.8±1.7 |
P<0.05,与基质对照组比较
由表7可见青蒿素类成分或其组合物有促进角化、纠正异常角化的作用,与基质对照组有显著差异。
实验例8:本发明青蒿素类成分或其组合物的延缓皮肤老化作用
青蒿素类成分或其组合物以药理学可接受的基质分散。以人正常皮肤成纤维细胞(NHDF)传代培养得到细胞浓度较好的培养液用于实验。将培养的细胞接种到细胞培养皿中,培养24h,待细胞生长至占据培养皿面积80%时,吸去培养基,PBS清洗一遍,然后加入300(μL)PBS,以透明膜封口,以为144mJ/cm2照射剂量UVB照射细胞40s,照射后立即用PBS清洗一遍,分别接种到2%青蒿素类成分或其组合物的培养液与空白培养液中,在37℃培养72h。取其中1ml培养液,用于抑制胶原蛋白分解酶(MMP-L1)生成的测定,1mL用于细胞存活力的测定。该实验重复3次。利用免疫ELISA试剂盒测定培养液中的胶原蛋白分解酶生成量。
表8. 青蒿素类成分或其组合物对胶原蛋白分解酶的抑制作用
组别 | MMP-L1酶蛋白质量平均浓度 | MMP-L1酶生成抑制率 |
空白对照组 | 0.17 | - |
2%青蒿素类成分或其组合物组 | 0.07 | - |
MMP-L1酶生成抑制率 | - | 58.8% |
由表8可见青蒿素类成分或其组合物有明显抑制皮肤细胞胶原蛋白分解酶生成作用,具有皮肤抗老化与增强皮肤弹性的功能。
实验例9:本发明青蒿素类成分或其组合物的抗色素沉着作用
青蒿素类成分或其组合物以药理学可接受的基质分散。取豚鼠6只,每只动物背部去毛,取2个相离区域,UVB照射选用UVB光源照射,照射总量为2500mJ/cm2,照射2个面积相等的区域一周后开始涂药,分别局部涂抹等量的基质与2%青蒿素类成分或其组合物,连续21天,一天2次。分别在UVB照射前、照射后1周和用药后1周、2周、3周和4周时以多功能皮肤测试仪测量豚鼠背部皮肤各区域的颜色变化,进行客观比较。4周后组织活检并作镜下观察分析。以Schmorl法染色,高倍镜计数每份样品每平方毫米表皮含黑素颗粒细胞数。以Imokawa法染色,高倍镜计数每份样品每平方毫米表皮基底层含多巴阳性黑素细胞数。
表9. 青蒿素类成分或其组合物对UVB照射豚鼠皮肤颜色值的测定的影响(mean)
组别 | 照射前 | 照射后 | 用药1周 | 用药2周 | 用药3周 | 用药4周 |
基质对照组 | 30 | 59 | 59 | 58 | 60 | 58 |
2%青蒿素类成分或其组合物组 | 31 | 58 | 56 | 51 | 47 | 41 |
P<0.05,用药4周与基质对照组比较
表10. 青蒿素类成分或其组合物对UVB有豚鼠色素沉着的抑制作用(mean±SD)
组别 | 多巴阳性的黑素细胞(个/mm2) | 含黑素颗粒的细胞(个/mm2) |
基质对照组 | 773.18±68.52 | 2801.13±180.72 |
2%青蒿素类成分或其组合物组 | 566.97±82.67 | 2136.14±192.35 |
P<0.05,与基质对照组比较
由表9,10可见青蒿素类成分或其组合物有抗哺乳动物色素沉着作用。
实验例10:本发明青蒿素类成分或其组合物的抗皮肤瘢痕形成作用
青蒿素类成分或其组合物以药理学可接受的基质分散。将12只日本大耳白兔麻醉,在双侧兔耳腹侧内侧缘上、下部位分别做2个直径约1cm的正方形切口,切口间隔2.0cm,去除兔耳皮肤和皮下组织和软骨膜,保留软骨,纱布压迫止血。将每只耳朵创面随机分为基质组与2%青蒿素类成分或其组合物组,浸有基质或2%青蒿素类成分或其组合物的纱布块外敷5分钟并保留,后纱布包扎,在术后3、6、9、12、15、18、21天采用同样的方法换药。创面在术后12天可见创面肉芽组织生长,28天可见创面全部瘢痕愈合,愈合后18天开始出现高出皮面的增生性瘢痕。术后50天处死动物,切取标本,10%甲醛溶液固定,石蜡包埋后切片,HE染色。在HE染色每张切片随机选取3个高倍视野(×200倍),计数各单位视野的成纤维细胞数,取平均值。计算瘢痕增生指数(Hypertrophic Index,HI):HE染色组织切片于低倍镜下用测微尺测量,按公式HI=A/B计算瘢痕增生指数。A=瘢痕凸起最高点至耳软骨表面的垂直高度;B=瘢痕周边正常皮肤皮缘至耳软骨表面的垂直高度。
50天时肉眼观察可见基质组创面愈合区组织明显高于周围正常皮肤,表现为瘢痕中央呈***状突起,呈淡红色,质韧,增生块高出皮面。2%青蒿素类成分或其组合物组愈合区略高于正常皮肤,色泽较淡。HE染色组织切片观察可见基质组瘢痕毛细血管增生明显、成纤维细胞核大、密集增生、位于真皮全层、胶原排列紊乱。2%青蒿素类成分或其组合物组瘢痕组织较薄,表面平整、层次有序、成纤维细胞明显减少。
表11. 青蒿素类成分或其组合物的抗皮肤瘢痕形成作用(mean±SD)
组别 | 瘢痕增生指数 | 成纤维细胞数 |
基质对照组 | 3.18±0.86 | 86.01±2.87 |
2%青蒿素类成分或其组合物组 | 1.79±0.77 | 39.78±2.63 |
P<0.05,与基质对照组比较
由表11可见青蒿素类成分或其组合物有抗哺乳动物皮肤瘢痕形成作用。
实验例11:本发明青蒿素类成分或其组合物对家兔痤疮模型的治疗作用
青蒿素类成分或其组合物以药理学可接受的基质分散。取雄性新西兰兔22只,随机分为基质组与2%青蒿素类成分或其组合物组。对2组新西兰兔双耳内侧面耳管开口处备皮2cm×2cm范围,每日涂抹煤焦油1次,每次0.5mL,连续2周。2周后,取2只新西兰兔造模处皮肤活检、病理切片观察,确定模型形成。2组动物左耳每天分别局部涂抹等量的基质与2%青蒿素类成分或其组合物,连续14天,一天2次。第15天肉眼观察并于动物双耳相应部位取皮肤活检,组织块以10%***固定,10%硝酸脱钙,石蜡包埋,切片,HE染色,于光镜下观察组织学改变。
实验性粉刺的组织学判定标准:(-)无粉刺,漏斗部仅有松散的角化细胞;(+)毛囊漏斗部积聚少量的粘连在一起的角化细胞,漏斗不扩张;(++)毛囊中中等量的角质栓塞,伸入皮脂腺导管,伴随皮脂腺导管的增生,漏斗扩张;(+++)毛囊中紧密的角质栓塞引起毛囊重度扩张,皮脂腺导管上皮明显增生,部分皮脂腺发生退行变。
肉眼观察:兔耳涂药2周后,可见油酸处局部组织明显粗糙、增厚、***,毛囊口有黑色角栓,呈黑头粉刺状,揭开煤焦油痂时,可见附着其上的毛囊角栓,其下可见开放增大的毛囊口,毛囊口***呈丘疹状。2%青蒿素类成分或其组合物组用药14天后,整个皮片厚度变薄,柔软度增加,局部毛囊口角栓及粉刺减少,丘疹变平减少,有部分角栓脱落后遗留点状凹陷的毛囊口。基质组用药14天后,耳部仍可见明显的毛囊角栓,毛囊口***处略平。
光镜观察:造模2周后,可见角化过度,表皮和毛囊上皮的颗粒层增厚,棘层肥厚,相邻扩张的毛囊相互融合,毛囊口及漏斗部充满角化物质,并向皮脂腺延伸,毛囊口角栓堵塞,毛囊漏斗部充满角化物质并扩大呈壶状,真皮上层毛细血管扩张明显,毛囊周围弥漫散在炎性细胞浸润,以小圆形细胞为主,及少量中性粒细胞。2%青蒿素类成分或其组合物组用药14天后,表皮轻度增厚,毛囊口轻度扩张,有少量疏松角化物质充填,未见毛囊漏斗部扩大如壶状,较少真皮炎症细胞浸润。基质组用药14天后,可见角化过度,表皮及毛囊上皮的颗粒层、棘层仍增生明显、毛囊口及漏斗部仍见角化物质堆积,漏斗部扩大如壶状,真皮内有较多炎性细胞浸润。
由以上结果及表12可见青蒿素类成分或其组合物有纠正异常角化、抗哺乳动物痤疮的作用。
表12. 青蒿素类成分或其组合物对家兔实验性耳痤疮组织病理学的影响(mean)
P<0. 05,与基质对照组比较。
Claims (10)
1.青蒿素类成分或其组合物的一种新应用,即在哺乳动物皮肤护理领域中的新应用,其特征在于所述的青蒿素类成分或其组合物是指青蒿素及其衍生物和相关物及他们的盐类包括但不限于,青蒿素、双氢青蒿素、青蒿琥酯、青蒿琥酯钠、蒿甲醚、蒿***、青蒿素C13衍生物、青蒿素C12衍生物、青蒿素C4衍生物、脱氧桥青蒿素结构相关化合物、脱甲基青蒿素结构相关化合物、脱羰基氧青蒿素结构相关化合物、甾类青蒿素结构相关化合物、内酰胺青蒿素结构相关化合物、开环青蒿素结构相关化合物、4,5-环氧碳代青蒿素结构相关化合物、青蒿素结构简化物、其他青蒿素结构相关化合物及他们的盐类;或含有青蒿素类成分的组合物或提取物包括但不限于,中药青蒿(ARTEMISIAE ANNUAE HERBA)及其制品、植物黄花蒿(Artemisia annua L.)及其制品、其他菊科蒿属(Artemisia Linn. Sensu stricto, excl. Sect. Seriphidium Bess.)植物及其制品、青蒿组织培养液、青蒿素母液等;或选自上述成分的任意组合物。
2.含有青蒿素类成分或其组合物的护肤组合物如健康产品、日化产品、保健品或药品等在哺乳动物皮肤护理领域中的新应用,其特征在于含有安全有效量的如权利要求1所述的青蒿素类成分或其组合物,及皮肤学与药学可接受的其他活性添加剂及基质。
3.如权利1~2任一所述的青蒿素类成分或其组合物或护肤组合物在哺乳动物皮肤护理领域的新应用,其特征在于青蒿素类成分或其组合物的来源可以是合成或自然包括但不限于,天然产物提取、化学全合成、化学半合成、生物合成、组织细胞培养、真菌转化、代谢通路等途径。
4.如权利要求1~3任一所述的青蒿素类成分或其组合物或护肤组合物在哺乳动物皮肤护理领域的新应用,其特征在于青蒿素类成分或其组合物在护肤组合物中的含量优选为约0.0001%~90%,更优选为约0.01%~35%,最优选为约1%~22%其中所述百分比是以组合物质量为100%计。
5.如权利要求1~4任一所述的青蒿素类成分或其组合物或护肤组合物在哺乳动物皮肤护理领域的新应用,其特征在于可加入的其他活性添加剂及基质是指本领域所公知的在目前护肤日化用品、药品、保健品、健康品中已有应用或可能应用的除青蒿素类成分及其组合物以外的宽范围的任选的其他活性添加剂及基质包括但不限于,油质原料、粉质原料、胶质原料、溶剂原料、水溶性聚合物、防腐剂、增稠剂、酸碱类调节剂、抗氧化剂、保湿剂、收敛剂、防晒剂、杀菌剂、调理剂、剥脱剂、遮光剂、止痒剂、磨砂剂、表面活性剂、皮肤助渗剂、皮肤感觉剂、皮肤舒缓剂、皮肤愈合剂、营养添加剂、微量元素和激素类添加剂、生理活性物质添加剂、合成类营养添加剂、活性肽、天然提取物、生物学添加剂、精油、香精、香料、色素、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、助悬剂、包衣材料、赋形剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂、微囊、微球、脂质体等以及他们的组合。
6.如权利要求1~5任一所述的青蒿素类成分或其组合物或护肤组合物在哺乳动物皮肤护理领域的新应用,其特征在于所述的护肤组合物包括但不限于,健康产品、日化用品、药品、保健品、乳剂类化妆品、水状类化妆品、粉类化妆品、膏霜类化妆品、气溶胶类化妆品、发用类制品、美容类化妆品、皂类、面膜、疗效类化妆品、防晒类化妆品、片剂、散剂、丸剂、软膏剂、贴膜剂、凝胶剂、胶囊剂、颗粒剂、泡腾剂、熏蒸剂、缓释剂等及其他皮肤护理用品。
7.如权利要求1~6任一所述的青蒿素类成分或其组合物或护肤组合物在哺乳动物皮肤护理领域的新应用,其特征在于所述的应用是指减轻或消除皮肤不良状态而使皮肤的生理健康与美学外观恢复或进一步增强包括但不限于,
a)通过纠正异常角化作用预防、延迟和/或治疗哺乳动物痤疮、头屑、脱屑瘙痒、干燥皲裂、银屑病、硬皮病、毛囊周角化病等由异常角化所引起的角化病症;
b)通过促进角化作用软化或柔顺哺乳动物的唇、皮肤、毛发、指趾甲、蹄等,并促进哺乳动物唇、皮肤、毛发、指趾甲、蹄等的更新,调节它们的油性与光泽;
c)通过抗色素沉着作用促进皮肤亮白红润,预防、延迟和/或治疗哺乳动物皮肤变黑、灰黄暗淡、色斑、痘印、日晒损伤、炎症损伤等色素沉着症状的出现;
d)通过抗瘢痕形成作用预防、延迟和/或治疗哺乳动物皮肤炎症刺激伤害造成的瘢痕生长、外界刺激伤害造成的瘢痕生长、痘印等瘢痕症状的出现;
e)通过延缓衰老保持皮肤弹性作用增强皮肤弹性与光泽,预防、延迟和/或治疗哺乳动物皮肤细纹、皱纹、松垂、萎缩、肿胀、毛孔粗大的出现;
f)通过抗细菌、抗真菌、抗皮肤寄生虫作用保持哺乳动物皮肤的清洁,预防、延迟和/或治疗细菌、真菌、皮肤寄生虫等所引起的哺乳动物皮肤不良状态;
g) 通过抗炎、镇痛、止血等作用消除或缓解皮肤炎症红肿热痛、出血等不良状态;
h)通过促进角化、纠正角化异常、抗色素沉着、抑制瘢痕形成、延缓皮肤老化、保持皮肤弹性、抗炎、镇痛、止血、抗细菌、抗真菌、抗皮肤寄生虫等一系列对哺乳动物皮肤有益的作用,消除或缓解哺乳动物皮肤不良状态从而提供增强的皮肤健康与美丽。
8.一种消除或缓解哺乳动物皮肤不良状态以提供增强的皮肤健康与美丽的方法,其特征在于所述方法包括向哺乳动物施用权利1~7任一所述的青蒿素类成分或其组合物或护肤组合物。
9.通过向哺乳动物施用如权利要求1~8任一所述的青蒿素类成分或其组合物或护肤组合物,以消除或缓解哺乳动物皮肤不良状态从而获得增强的皮肤健康与美丽。
10.如权利要求1~9任一所述的青蒿素类成分或其组合物或护肤组合物在哺乳动物皮肤护理领域的应用。
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C10 | Entry into substantive examination | ||
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WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20170222 |