CN106399527A - 一种用于检测肾癌的引物组及检测方法 - Google Patents

一种用于检测肾癌的引物组及检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106399527A
CN106399527A CN201610895870.9A CN201610895870A CN106399527A CN 106399527 A CN106399527 A CN 106399527A CN 201610895870 A CN201610895870 A CN 201610895870A CN 106399527 A CN106399527 A CN 106399527A
Authority
CN
China
Prior art keywords
primer
seq
reverse
pcr
detecting
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610895870.9A
Other languages
English (en)
Inventor
徐以兵
朱莉莉
张大宏
何强
寿鑫
朱珍芳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Bo Kang Biotechnology Co Ltd
Zhejiang University ZJU
Zhejiang Provincial Peoples Hospital
Original Assignee
Shanghai Bo Kang Biotechnology Co Ltd
Zhejiang University ZJU
Zhejiang Provincial Peoples Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Bo Kang Biotechnology Co Ltd, Zhejiang University ZJU, Zhejiang Provincial Peoples Hospital filed Critical Shanghai Bo Kang Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201610895870.9A priority Critical patent/CN106399527A/zh
Publication of CN106399527A publication Critical patent/CN106399527A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供用于检测肾癌的引物组及其检测方法，本发明的引物包括SEQ ID No.1‑‑SEQ ID No.18,可对MN/CA9，TS，CYP3A4，PD‑L1，VEGFR2，cadherin‑6，CK19，CD24，EPCAM基因进行联合检测。通过PCR或荧光定量PCR的方法，可在短时间内灵敏检测出靶基因的表达及表达水平；采用优化的PCR条件，通过增加扩增反应的循环数，使观察结果更显著，进一步提高方法适用性；扩增产物具有特异性，确保PCR和RT‑PCR荧光定量检测高准确度和灵敏度。实施本发明中用于肾癌检测的引物组，通过检测病人样本中靶基因的表达，可以简单、方便且准确地诊断肾癌。

Description

一种用于检测肾癌的引物组及检测方法
技术领域
本发明涉及肿瘤基因领域，具体涉及一种用于检测肾癌的引物组及检测方法。
背景技术
肾癌是起源于肾实质泌尿小管上皮***的恶性肿瘤，学术名词全称为肾细胞癌，又称肾腺癌，简称为肾癌，是最常见的肾脏实质恶性肿瘤，由于平均寿命延长和医学影像学的进步，肾癌的发病率比前增加，肾癌患者的主诉和临床表现多变，容易误诊为其他疾病。肾位置隐蔽，与外界主要的联系是尿，因此血尿是发现肾癌最常见的病状，但血尿的出现必须在肿瘤侵入肾盂后方才有可能，因此已不是早期病状。因此对肾癌的早期诊断十分必要。
目前肾癌的诊断方法包括影像学检查，细胞病理学和组织病理学诊断。影像学检查包括X射线、CT扫描、超声扫描、核磁共振检查等，但是其效率较低并且检测准确度不高。通常的细胞和组织病理学检测包括细胞活检，需要通过外科手术或者穿刺的方法从患者上获取肿瘤组织的检材。不但不方便，而且会对患者造成人体伤害，甚至可能造成穿刺道肿瘤转移。
近来，循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells，CTCs)检测的出现给患者的检测带来了新的希望。CTCs是从肿瘤病灶脱离并移位至血液中的肿瘤细胞，是恶性肿瘤患者术后复发和远处转移的重要原因，也是导致肿瘤患者死亡的重要因素。与其他组织学标本如骨髓等相比，外周血标本容易获取，且对患者创伤小，是临床上常规检测较为理想的标本来源。CTCs检测有助于肿瘤的早期诊断、判断患者预后、评估抗肿瘤药物的疗效及制定个体化治疗方案。与传统的诊断方法相比，CTCs检测可更加敏感地发现疾病的变化，且对患者没有副作用。
CTC的检测通常通过抽取一定体积的血液进行。检测分为两类，包括不捕获(富集)直接检测和先捕获(富集)后检测，其中后者为主流的检测方法。先捕获(富集)后检测的方法也分为两类，即正选和负选。正选主要是通过CTC表面标志物或细胞的物理性质(大小、密度)进行捕获；前者是基于免疫磁球技术和微流控芯片技术，后者是基于过滤、离心的原理。负选则是通过白细胞表面标志物间接捕获CTC。然而基于先捕获(富集)后检测的方法有着明显的缺陷。它严重依赖于肿瘤细胞表面标记物的表达，因此无法捕获未表达表面肿瘤标记物的CTC细胞。
采用RT-PCR的方法检测CTC细胞的特异性基因是CTC细胞检测的另外一种方式。首先抽取一定体积的血液，通过密度梯度离心的方式富集CTCs，然后通过RT-PCR的方式检测特定基因的mRNA，以此判断CTCs是否存在，并通过检测CT值的变化给CTCs定量。这种方法检测CTCs费用低，敏感度高，而且容易自动化。
目前RT-PCR方法检测肾癌CTCs检测的标准还没有建立。我们通过检测肾癌患者的CTCs特征基因，确定肾癌CTCs的检测方法和检测标准。这些检测方法和标准的建立有助于肿瘤患者的早期诊断、判断患者预后、评估抗肿瘤药物，包括NK和CAR-T免疫治疗的疗效及制定个体化治疗方案。
针对上述问题，本发明开发一种高灵敏的多基因联合检测的试剂盒，通过联合检测MN/CA9，TS，CYP3A4，PD-L1，VEGFR2，cadherin-6，CK19，CD24和EPCAM 9个基因实现肿瘤的早期筛查或诊断。本发明设计运用靶向特异性引物组，大幅度提高检测的灵敏度。该检测方法的检出率可达到96％，同时具备了灵敏度高，特异性好，快速准确等优点。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种用于检测肾癌的引物组及检测方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种用于检测肾癌的引物组，包含：
本发明的引物组可通过以下两种方法实现肾癌的检测。
方法1：PCR方法。
(1)将权利要求1所述的9对引物分别加入到单个PCR反应管中，并均加入核酸提取物、反转录酶、RNA酶抑制剂、DNA聚合酶、dNTP；其中，PCR反应的每个循环的条件为94摄氏度、30s；55摄氏度、30s；72摄氏度、10s；
(2)进行反转录和PCR反应，用琼脂糖凝胶电泳法进行检测。
方法2：荧光定量PCR方法
(1)将权利要求1所述的9对引物分别加入到单个PCR反应管中，并均加入核酸提取物、反转录酶、RNA酶抑制剂、DNA聚合酶、dNTP；分别加入2×ChamQ SYBR qPCR Master Mix，其中，PCR反应的每个循环的条件为95摄氏度、10s和60摄氏度、30s；40个循环；每管设立三个复孔；
(2)进行反转录和PCR反应，并实时检测荧光；
(3)根据荧光检测结果计算出的Ct值，判断是否有标志物靶基因表达于样品中。
本发明的有益效果在于：本发明通过设计特异性PCR引物，开发出用于肾癌早期检测的多基因联合检测方法。此方法：(1)建立的PCR体系可对MN/CA9，TS，CYP3A4，PD-L1，VEGFR2，cadherin-6，CK19，CD24和EPCAM基因进行联合检测；(2)通过同时对多个基因进行检测肾癌检出率可达到96％；(3)灵敏度高，低至1-5拷贝的基因表达水平均可检出；(4)特异性强，正常人或非肾癌病人样本很少会产生特异性信号；(5)检测速度快，操作简单，费用低廉。
附图说明
图1为实施例中健康人外周血样本检测阴性PCR图。
图2为实施例中非肾癌患者外周血样本检测阴性PCR图。
图3为实施例中非肾癌患者肿瘤组织检测阴性PCR图。
图4为实施例中肾癌患者外周血检测阳性PCR图。
图5为实施例中肾癌患者肿瘤组织检测阳性PCR图。
图中，M.100bp marker；1.B2M，2.MN/CA9，3.TS，4.CYP3A4，5.PD-L1，6.VEGFR2，7.cadherin-6，8.CK19，9.CD24，10.EPCAM。
具体实施方式
本发明针对目前肿瘤中主要的驱动性突变基因，联合检测MN/CA9，TS，CYP3A4，PD-L1，VEGFR2，cadherin-6，CK19，CD24和EPCAM9个基因实现肾癌的早期筛查或诊断。针对目前检测方法灵敏度低，检测过程复杂繁琐，检测所需时间长，无法满足临床检测的实际需求。针对上述问题，设计出用于检测上述9个基因的一整套特异性引物组。
根据上述9个基因的参考序列设计特异性扩增引物，其PCR产物长度最优是在180-200bp之间，退火温度不高于60度，GC含量在40-60％之间，符合一般引物设计软件的要求。通过采用实时荧光PCR反应检测体系，实现多个基因联合的高灵敏检测，其检测方法如下所述。
本发明结合附图和实施例作进一步的说明。如未特别指明之处，可根据本领域技术人员所熟悉的《分子可隆实验指南》第三版(Cold Spring Harbor laboratory Press)、《细胞实验指南》(科学出版社，北京，中国，2001年)、《RNA实验技术手册》(科学出版社，北京，中国，2004年)、《免疫检测技术》(科学出版社，北京，中国，1991)等实验手册以及本文所引用的参考文献中所列方法来实施。其中，所用的(带标记的)探针、引物可以委托上海生工生物工程技术服务有限公司合成。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1:基因选择
多项研究表明，单基因筛查敏感度约为20-60％，大部分用于肿瘤早期筛查的单个基因检测，其检测敏感度或特异度偏低，不能满足临床需要。采用多基因联合检测可以有效解决敏感度低的问题，提高肿瘤早期筛查和诊断的准确度。为了提高早期肿瘤的检出率，提高肿瘤患者的治愈率，改善病人预后，我们对肾癌和正常组织的差异表达基因进行了筛选。我们通过大量比对实验发现MN/CA9，TS，CYP3A4，PD-L1，VEGFR2，cadherin-6，CK19，CD24和EPCAM组成的基因组对肾癌具有较高的检出率，达到96％，相对于现有的检测技术，产生了意想不到的技术效果，具有显著的进步。
实施例2:引物筛选
(1)设计引物a1～a3、b1～b3、c1～c3、d1～d3、e1～e3、f1～f3、g1～g3、h1～h3、i1～i3，具体为：利用生物信息学软件对靶基因A-I序列进行分析，利用序列分析软件设计特异性引物组，利用NCBI引物搜索软件检测各配对引物在人基因组中的特异性，分别设计出3对特异性扩增引物a1～a3、b1～b3、c1～c3、d1～d3、e1～e3、f1～f3、g1～g3、h1～h3、i1～i3；
表1：PCR检测引物
(2)外周血样品的处理
收集某医院收治并经病理证实的肾癌患者外周血，清晨7点，空腹，经肘静脉采集新鲜血液，存放于抗凝管中，摇匀，常温下保存≤4h。
2.1将抗凝管中的全血样本加入等体积PBS(pH7.0)，于室温3000rpm离心5min，去除上层血浆；
2.2加入等体积氯化铵红细胞裂解液(可购自碧云天)，于室温200rpm离心8min混匀后，以3000rpm室温离心5min，弃去上清；
2.3将下层血细胞和生理盐水按照体积比1:2～2:1混合后，加入Ficoll分离液，混合液与Ficoll分离液的体积比为1:2～2:1，离心力为700g，离心20～40min；
2.4吸弃上清，取细胞沉淀，洗涤，即得到PBMC；
2.5取PBMC用于核酸提取，多余的PBMC用RNA保护剂重悬，保存于-20度。
(3)核酸的提取
3.1取不多于5×105的PBMC，加入250μL Buffer RLT Plus，吹打混匀；
3.2将裂解液转移至gDNA清除离心型柱中，8000×g(10,000rpm)离心30s。收集流穿液，弃离心柱；
3.3加入1倍体积的70％乙醇(350μL)至流穿液中，吹打混匀；
3.4将样品转移至RNeasyMinElute离心柱，盖紧盖子，8000×g(10,000rpm)离心15s，弃流穿液；
3.5在RNeasyMinElute离心柱中加入700μL Buffer RW1，盖紧盖子，8000×g(10,000rpm)离心15s，弃流穿液；
3.6在RNeasyMinElute离心柱中加入500μL Buffer RPE，盖紧盖子，8000×g(10,000rpm)离心15s，弃流穿液；
3.7将RNeasyMinElute离心柱置于新的2mL收集管中，打开盖子，全速离心5min，使乙醇挥发；
3.8将RNeasyMinElute离心柱置于新的1.5mL收集管中，加入20μLRNase-freeH2O，盖紧盖子，全速离心1min洗脱RNA。
(4)模板cDNA的获得
4.1准确测得样品RNA浓度；
4.2严格按照cDNA反转录试剂盒说明书在冰上制备反转录体系；
成分 体积
5×Mix 8μL
RNA 500ng
RNase-free H2O 至40μL
4.3轻柔混匀以上反应体系，并利用离心机短暂离心，55度20min，85度2min，获得模板cDNA；
(5)普通PCR扩增
用Taq DNA聚合酶配置反应体系，用引物为a-i和人内参基因(B2M)进行PCR扩增各样品，产物用1％凝胶检测；
扩增体系
成分 体积
2×Mix 10μL
cDNA 1μL
引物-F 0.8μL
引物-R 0.8μL
RNase-free H2O 7.4μL
PCR反应条件是95℃预变性3分钟，1个循环；95℃变性20秒，55℃退火20秒，72℃延伸10秒，35个循环；72℃延伸7分钟。
(6)荧光实时定量PCR扩增
根据设计的特异引组a-i，通过荧光定量PCR进行扩增，体系如下：
95℃预变性20s，1个循环；95℃10s，60℃30s，40个循环；每管设立三个复孔；
根据步骤5和6的pcr结果，筛选出以下引物组，作为本发明用于检测肾癌的引物组。
实施例3：效果验证
根据实施例2的筛选结果，采用下表所述的引物组对100个肿瘤样本进行检测。
其中，CD10的正向引物为TGATGATAAGAATTCTGTGA，反向引物为GCAAGCTGGTTTTCATCGAT，N-cadherin的正向引物为CCTTAACTGAGGAGTCAGTG，反向引物为CAGACCTGATCCTGACAAGC，Vimentin的正向引物为CGTGACGTACGTCAGCAATA，反向引物为AAGGGCATCCACTTCACAGG。
1～8号引物组的检出率如上表所示，从表中可以看出，引物组中，随着引物数量的增加，在一定程度上可以提高其检出率。进一步地，通过比较5～8号引物组可以发现，引物组内的组合对于检出率的高低有重要影响。同时在相同的检测基因数量情况下，5号引物组的检出率高于6～8号引物组。因此，我们优选5号引物组的基因组合用于肾癌的检测。进一步通过研究发现，5号引物组中，CK19的表达可提示上皮细胞来源的肿瘤,被认为有肿瘤转移诊断价值；EPCAM的表达可提示上皮源性恶性肿瘤细胞,MN/CA9是碳酸酐酶家族成员，在正常人组织中极少表达，在肾恶性肿瘤中呈现高表达；TS是DNA生物合成的关键酶，与肿瘤的恶性生物学行为密切相关；CYP3A4是CYP3A亚家族的主要成员，也是成人肝微粒体CYP450中最重要的成分，现已发现CYP3A4参与了大约38个类别共150多种药物(约占全部药物50％)的代谢，对肿瘤治疗用药有指导作用；活化的T细胞与肿瘤相关蛋白PD-L1之间的相互作用导致细胞程序性死亡，临床研究表明，PD-L1表达与不良预后和/或疾病进展相关；VEGFR-1与血管内皮生长因子(VEGF)相互作用影响肿瘤血管和***；cadherin-6在组织的生长发育中发挥重要作用，与肿瘤细胞的浸润和转移相关；CD24在促进肿瘤细胞增殖、黏附及转移过程中发挥着重要作用，同时CD24过表达与肿瘤患者的不良预后相关。由上可知，本发明并不是将9对引物进行简单叠加组合，9对引物相铺相成，在功能上彼此支持，使得检出率得到大幅度提升，取得了意想不到的技术效果。综上所述，本专利中选择的基因涉及肿瘤的代谢、增殖、侵袭等方面，可较为全面的检测出肾癌的细胞生物学特征。
实施例4：特异性分析
根据实施例2的筛选结果，采用下表所述的引物组对正常人外周血样本(图1)、非肾癌病人的外周血(图2)和组织样本(图3)、肾癌病人的外周血(图4)和组织样本(图5)进行检测。结果如图1-5所示，从图中可见所述的引物组在正常人外周血(图1)、非肾癌病人的外周血(图2)和组织样本(图3)中均未检测到较强的基因的表达。在肾癌病人的外周血(图4)和组织样本(图5)中可检测到多个基因的强表达，分别为6/9和9/9，说明本发明中所述引物组具有相当高度的特异性。

Claims (3)

1.一种用于检测肾癌的引物组，其特征在于，所述引物组可以包含a～i 9对引物，所述引物a的正向引物如SEQ ID No.1所示，引物a的反向引物如SEQ ID No.2所示，引物b的正向引物如SEQ ID No.3所示，引物b的反向引物如SEQ ID No.4所示，引物c的正向引物如SEQID No.5所示，引物c的反向引物如SEQ ID No.6所示，引物d的正向引物如SEQ ID No.7所示，引物d的反向引物如SEQ ID No.8所示，引物e的正向引物如SEQ ID No.9所示，引物e的反向引物如SEQ ID No.10所示,引物f的正向引物如SEQ ID No.11所示，引物f的反向引物如SEQ ID No.12所示,引物g的正向引物如SEQ ID No.13所示，引物g的反向引物如SEQ IDNo.14所示,引物h的正向引物如SEQ ID No.15所示，引物h的反向引物如SEQ ID No.16所示,引物i的正向引物如SEQ ID No.17所示，引物i的反向引物如SEQ ID No.18所示。
2.一种用于检测肾癌的PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将权利要求1所述的9对引物分别加入到单个PCR反应管中，并均加入核酸提取物、反转录酶、RNA酶抑制剂、DNA聚合酶、dNTP；其中，PCR反应的每个循环的条件为94摄氏度、30s；55摄氏度、30s；72摄氏度、10s；
(2)进行反转录和PCR反应，用琼脂糖凝胶电泳法进行检测。
3.一种用于检测肾癌的荧光定量PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将权利要求1所述的9对引物分别加入到单个PCR反应管中，并均加入核酸提取物、反转录酶、RNA酶抑制剂、DNA聚合酶、dNTP；分别加入2×ChamQ SYBR qPCR Master Mix，其中，PCR反应的每个循环的条件为95摄氏度、10s和60摄氏度、30s；40个循环；每管设立三个复孔；
(2)进行反转录和PCR反应，并实时检测荧光；
(3)根据荧光检测结果计算出的Ct值，判断是否有标志物靶基因表达于样品中。
CN201610895870.9A 2016-10-14 2016-10-14 一种用于检测肾癌的引物组及检测方法 Pending CN106399527A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610895870.9A CN106399527A (zh) 2016-10-14 2016-10-14 一种用于检测肾癌的引物组及检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610895870.9A CN106399527A (zh) 2016-10-14 2016-10-14 一种用于检测肾癌的引物组及检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106399527A true CN106399527A (zh) 2017-02-15

Family

ID=59229250

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610895870.9A Pending CN106399527A (zh) 2016-10-14 2016-10-14 一种用于检测肾癌的引物组及检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106399527A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107338305A (zh) * 2017-07-23 2017-11-10 嘉兴允英医学检验有限公司 一种用于pd‑1表达水平检测的试剂盒
CN108977522A (zh) * 2017-06-01 2018-12-11 郑州大学 检测人体CYP3A4代谢酶表达用的LncRNAs生物标志物及其检测引物和检测方法
CN109628593A (zh) * 2018-12-26 2019-04-16 中国人民解放军第二军医大学第二附属医院 一种骨肉瘤干细胞分子标志物cd24及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007528737A (ja) * 2004-05-04 2007-10-18 バイエル ヘルスケア Ｍｎ／ｃａｉｘ／ｃａ９及び腎臓癌の予後診断
CN103492590A (zh) * 2011-02-22 2014-01-01 卡里斯生命科学卢森堡控股有限责任公司 循环生物标志物
CN103966351A (zh) * 2014-05-29 2014-08-06 上海度微医学技术有限公司 CST1mRNA和CST4mRNA或其编码的蛋白质在制备肾癌标志物中的应用及其试剂盒

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007528737A (ja) * 2004-05-04 2007-10-18 バイエル ヘルスケア Ｍｎ／ｃａｉｘ／ｃａ９及び腎臓癌の予後診断
CN103492590A (zh) * 2011-02-22 2014-01-01 卡里斯生命科学卢森堡控股有限责任公司 循环生物标志物
CN103966351A (zh) * 2014-05-29 2014-08-06 上海度微医学技术有限公司 CST1mRNA和CST4mRNA或其编码的蛋白质在制备肾癌标志物中的应用及其试剂盒

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GUORONG LI等: "Rapid and Sensitive Detection of Messenger RNA Expression for Molecular Differential Diagnosis of Renal Cell Carcinoma", 《CLINICAL CANCER RESEARCH》 *
MOORE LE等: "Folate metabolism genes，vegetable intake and renal cancer risk in central Europe", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF CANCER》 *
张守波等: "肾癌的基因表达谱及其临床意义的研究进展", 《医学综述》 *
贾绍昌等: "肾细胞癌MN/CA9蛋白的表达及其生物学意义", 《肿瘤防治杂志》 *
陈兴国: "肿瘤标志物在肾癌诊断中的研究进展", 《中国校医》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108977522A (zh) * 2017-06-01 2018-12-11 郑州大学 检测人体CYP3A4代谢酶表达用的LncRNAs生物标志物及其检测引物和检测方法
CN108977522B (zh) * 2017-06-01 2021-11-23 郑州大学 检测人体CYP3A4代谢酶表达用的LncRNAs生物标志物及其检测引物和检测方法
CN107338305A (zh) * 2017-07-23 2017-11-10 嘉兴允英医学检验有限公司 一种用于pd‑1表达水平检测的试剂盒
CN109628593A (zh) * 2018-12-26 2019-04-16 中国人民解放军第二军医大学第二附属医院 一种骨肉瘤干细胞分子标志物cd24及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107663533A (zh) 一种肺癌EGFR L858R和19Del的ddPCR检测方法及应用
CN109504780A (zh) 用于肺癌检测的DNA甲基化qPCR试剂盒及使用方法
WO2017202185A1 (zh) 甄别肺部微小结节良恶性的外周血基因标志物及其用途
CN106399527A (zh) 一种用于检测肾癌的引物组及检测方法
CN108866187B (zh) 一种与肺癌辅助诊断相关的长链非编码rna标志物及其应用
CN103074431B (zh) 检测结直肠癌血清miRNA-128的专用引物、试剂盒及方法
CN107475363A (zh) 一种非小细胞肺癌的生物标记物组合、该生物标记物组合的筛选及其应用
CN105648075A (zh) 一种肝癌诊断组合及含有该组合的试剂盒
CN106520924A (zh) 一种用于检测卵巢癌的引物组及检测方法
CN106834447A (zh) 一种用于检测神经母细胞瘤的引物组及检测方法
KR102211972B1 (ko) 액체생검 다중 암 유전자 바이오마커를 이용한 유방암 조기진단 및 치료 후 모니터링 방법
CN106544416A (zh) 一种用于检测胃癌的引物组及检测方法
CN110257514A (zh) 一种新的食管癌血液miRNA标志物及其应用
CN105671179A (zh) 血清microRNA在肝癌诊断中的应用及诊断试剂盒
CN113862370B (zh) 用于筛查肝癌的引物和探针、试剂盒及其应用
CN106755459A (zh) 一种用于检测乳腺癌的引物组及检测方法
Tripathi et al. Evaluating Clinical Applications of Liquid Biopsy by Combining Circulating Tumor DNA and Tumor cells
CN106498041A (zh) 一种用于检测***的引物组及检测方法
CN105132557B (zh) 一种用于诊断肝癌的唾液检测试剂及试剂盒
CN106434936A (zh) 一种用于检测肺癌的引物组及检测方法
CN106636440A (zh) 血浆microRNAs用于制备筛查诊断男性群体中肺腺癌患者的诊断试剂的用途
CN106987649A (zh) 一种用于检测脑胶质瘤的引物组及检测方法
CN106520925A (zh) 一种用于检测食道癌的引物组及检测方法
CN111690746A (zh) 与肺癌相关的血小板rna标志物及其应用
CN110904233A (zh) 检测样本中abcg2基因相对表达量的寡核苷酸和方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170215