CN106396861A - 一种复合微生物笋肥及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种复合微生物笋肥及其制备方法，具体是一种针对毛竹专用的复合微生物笋肥及其制备方法。该微生物笋肥的原料由深褐芽孢杆菌菌粉，赖氨酸芽孢杆菌菌粉，瑞格链霉菌,菌粉，秋田链霉菌菌粉，淡黄木霉菌粉，黄腐酸钾，氨基酸原粉；本发明中所使用的这5株菌株都是可从土壤中直接分离得到，都具有根迹促生作用，具有解磷，固氮，解钾作用，可在作物表面、植株内部或土壤中繁殖生长的同时，并定向植物根际分泌某些次生代谢产物，能够提高植物对养分的吸收、刺激植株生长起到肥料的效果；本发明微生物笋肥对人、畜安全，属于环境友好型，本发明制备方法简单、成本低、使用简单。

Description

一种复合微生物笋肥及其制备方法

技术领域

本发明属于微生物肥料技术领域，具体涉及一种复合微生物笋肥及其制备方法。

背景技术

我国毛竹面积386.83万hm2，占全国竹林总面积的71.89%,森林总面积的2.13%，对于南方集体林区的生态建设和“三农”增收有重要的意义，施肥作为毛竹林培育的重要技术措施得到更广泛应用。

从竹林对不同养分的需求来看，毛竹对氮的需要量比较多，但土壤中氮的含量却很低。毛竹对磷的需要量虽然比氮少，但土壤供给量也很少，许多土壤特别是红壤地区土壤磷含量较低。K通常在土壤中含量较丰富，但也有土壤局部缺K现象。施肥一般都是以氮、磷、钾肥为主。从肥料的作用效果来看，有机肥与微生物笋肥长期施用可以改良土壤结构，增加土壤通气性和保水能力，而复合肥和无机肥能直接被根或叶面吸收，虽然见效快，但长期施用或施用不当，易造成地力衰退而使作物减产、品质恶化或对生态环境产生不良影响。因而在过去的几十年中，大多数学者对毛竹施肥的研究大部分集中在氮、磷、K三要素上，有关微生物肥在毛竹上的应用的研究报导较少。专门针对毛竹的微生物笋肥则未见报道。

发明内容

本发明所要解决的问题是研制出一种复合微生物笋肥，制备该复合微生物笋肥的原料按重量份为：深褐芽孢杆菌菌粉10-30份，赖氨酸芽孢杆菌菌粉20-40份，瑞格链霉菌菌粉20-40份，秋田链霉菌菌粉10-30份，淡黄木霉菌粉20-40份，黄腐酸钾20-60份，氨基酸原粉10-30份；该笋肥复配的菌种特点主要是适应性强，稳定性好，能共生共存，合理利用微生物间的相互作用，配备高技术的生产发酵技术生产出优质的产品。本发明中所使用的这5株菌株都是可从土壤中直接分离得到，都具有根迹促生作用，具有解磷，固氮，解钾作用，可在毛竹根，茎，叶表面或土壤中繁殖生长的同时，并定向毛竹根际分泌某些次生代谢产物，能够提高毛竹对养分的吸收、刺激其生长起到肥料的效果；本发明微生物笋肥对人、畜安全，属于环境友好型，本发明制备方法简单、使用成本低、使用简单。

另一个目的，提供了一种复合微生物笋肥的制备方法，其具体制备方法，包括以下步骤：

步骤一、深褐芽孢杆菌菌粉的制备

取出深褐芽孢杆菌保藏管，用营养肉汁固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养48小时。在平板下挑取单个菌落接种至装有营养肉汁固体培养基，在30℃培养箱中培养48小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L深褐芽孢杆菌液体种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前12小时通气量为200L/min，12小时后通气量为320L/min ，30℃培养16-24小时，待总菌含量不低于10亿cfu/ml，即可作为深褐芽孢杆菌液体种子；

发酵：将上述制备的深褐芽孢杆菌液体种子加至深褐芽孢杆菌固体发酵培养基中，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5-10cm，控制发酵温度为30-40℃，发酵36-48小时，待芽孢含量不低于50亿cfu/g，即可晒干，待水分含量低于10%，粉碎过40目筛，即得到深褐芽孢杆菌菌粉；

其中，所述营养肉汁固体培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂20 g，水1000mL，pH7.2；

其中，所述深褐芽孢杆菌液体种子培养基：葡萄糖8g/L，玉米粉10 g/L， 豆粉10 g/L，硫酸镁0.2 g/L，硫酸锰0.1 g/L，磷酸二氢钾0.5 g/L，磷酸氢二钠1.0 g/L，pH7.0。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；

其中，深褐芽孢杆菌固体发酵培养基：啤酒糟60%， 玉米皮35%，菜粕粉2%，石粉3%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，硫酸锰0.01%，培养基含水量50%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。

步骤二、赖氨酸芽孢杆菌菌粉的制备

取出赖氨酸芽孢杆菌保藏管，用无氮固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养72小时。在平板下挑取单个菌落接种至装有无氮固体培养基，在30℃培养箱中培养72小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L赖氨酸芽孢杆菌种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前8小时通气量为100L/min，8-24小时后通气量为200L/min ，24小时后通气量为300L/min ，30℃培养32-48小时，待总菌数含量不低于20亿cfu/ml，即可作为赖氨酸芽孢杆菌种子液；

发酵：将上述制备的赖氨酸芽孢杆菌种子液以10%-20%的比例接种至赖氨酸芽孢杆菌固体培养基上，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5-10cm，控制发酵温度为30-40℃，发酵36-48小时，待芽孢含量不低于50亿cfu/g，即可晒干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到赖氨酸芽孢杆菌菌粉；

其中，所述无氮固体培养基：蔗糖10g，磷酸氢二钾0.2g，硫酸镁0.2g，氯化钠0.2g，硫酸钙0.1g，碳酸钙5g，琼脂18g，蒸馏水1000mL，pH7.2；

其中，所述赖氨酸芽孢杆菌种子培养基：糖蜜20g/L，玉米淀粉10 g/L， 花生粕粉30 g/L，硫酸镁0.4 g/L，硫酸锰0.6g/L，磷酸二氢钾0.6 g/L，碳酸钙10 g/L， pH7.0。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；

赖氨酸芽孢杆菌固体培养基：玉米酒糟57%，麸皮35%，棉粕5%，石粉1%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟 。

步骤三，瑞格链霉菌菌粉的制备

取出瑞格链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为瑞格链霉菌种子液；

发酵：将上述制备的瑞格链霉菌种子液以3%的接种量接种至灭菌的瑞格链霉菌固体发酵培养基上，菌种与瑞格链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的瑞格链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为3-6cm，控温28-32℃，第一天空气湿度保持为60%-75%，过后空气湿度保持为40%-50%，发酵3-4天，检测其孢子含量不低于20亿CFU/g，即可低温风干至水分低于8%，粉碎过40目筛，即得到瑞格链霉菌菌粉；

其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0﹒5克，硫酸镁：0﹒5克，氯化钠：0﹒5克，硫酸亚铁：0﹒01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml ，PH7﹒2～7﹒4；

其中，所述的瑞格链霉菌固体发酵培养基：甘蔗渣80%，豆粕2%，玉米芯粉1%，石粉10%，麸皮7%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。

步骤四，秋田链霉菌菌粉的制备

取出秋田链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为秋田链霉菌种子液；

发酵：将上述制备的秋田链霉菌种子液以5%的接种量接种至灭菌的秋田链霉菌固体发酵培养基上，菌种与秋田链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的秋田链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为5-8cm，控温28-32℃，前两天空气湿度保持为60%-75%，过后空气湿度保持为40%-50%，发酵4-6天，检测其孢子含量不低于10亿CFU/g，即可低温风干水分低于8%，粉碎过40目筛，即得到秋田链霉菌菌粉；

其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0﹒5克，硫酸镁：0﹒5克，氯化钠：0﹒5克，硫酸亚铁：0﹒01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml ，PH7﹒2～7﹒4；

其中，所述的秋田链霉菌固体发酵培养基：米糠80%，棉粕2%，玉米粉1%，石粉2%，麸皮15%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。

步骤五，淡黄木霉菌粉的制备

A、淡黄木霉种子液的制备：取出淡黄木霉菌种保藏管，用PDA固体培养基划平板进行复苏，30℃培养6天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升PDA固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养4-6天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为淡黄木霉种子液；

发酵：将上述制备的淡黄木霉种子液以2%的接种量接种至灭菌的淡黄木霉固体发酵培养基上，菌种与淡黄木霉固体培养基混合均匀后，将接好种的淡黄木霉固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为5-10cm，控温28-32℃，湿度保持为60%-75%，发酵4-6天，检测其总孢子含量不低于30亿CFU/g，即可低温风干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到淡黄木霉菌粉；

其中，所述的PDA固体培养基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，琼脂20g；

其中，所述的淡黄木霉固体发酵培养基：甘蔗渣85%，芝麻渣粕2%，玉米芯5%，石粉4%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%-60%；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。

步骤六，将上面制成的各种菌粉按深褐芽孢杆菌菌粉10-30份，赖氨酸芽孢杆菌菌粉20-40份，瑞格链霉菌菌粉20-40份，秋田链霉菌菌粉10-30份，淡黄木霉菌粉20-40份，黄腐酸钾20-60份，氨基酸原粉10-30份；混合，均匀，即为复合微生物笋肥。

其中，本发明复合微生物笋肥的使用方法为施肥开沟环施，每亩施用量为2-10kg；也可以全地洒施，每亩施用量为5-20kg；

从竹林对不同养分的需求来看，毛竹对氮的需要量比较多，但土壤中氮的含量却很低。本发明中的赖氨酸芽孢杆菌具有较强的固氮能力，其进入土壤后，能持续不断的为毛竹提供氮素原料；毛竹对磷的需要量虽然比氮少，但土壤供给量也很少，许多土壤特别是红壤地区土壤磷含量较低，土壤中N、P元素是植物生长的必需元素，但大量的P在土壤中以不溶的金属鳌合物存在。本发明中的瑞格链霉菌，秋田链霉菌，淡黄木霉能产生磷酸酶，增溶土壤中的P元素，更好地促进植物吸收，从而减少磷肥的施用也能达到补磷的效果；另外，它们还能诱导毛竹中的菌根(AM)中真菌的孢子萌发，有利于菌根这一真菌一植物互惠共生体生长；

本发明中含有深褐芽孢杆菌与赖氨酸芽孢杆菌，这两株芽孢杆菌都是从土壤和植株中分离得到，能产生耐热、抗逆性的芽孢，具有显著的生防潜力；它们作为根迹促生微生物，能寄生根，叶，和其他植物表面。能迅速拓殖植物根毛，树叶，和其他表面，能防止致病真菌和细菌的建立。

本发明的有益效果与优点：通过将本发明的微生物笋肥沟施至毛竹根迹，改善了毛竹根迹周边的微环境，使得土壤疏松透气，起到保水保肥作用，同时起到解磷，固氮，解钾作用，利于毛竹根迹的生长，快速促进毛竹笋的生长与萌芽。经过大田试验，每亩的笋产量比有机肥组产量增产率达到63.2%。

该笋肥复配的菌种特点主要是适应性强，稳定性好，能共生共存，合理利用微生物间的相互作用，配备高技术的生产发酵技术生产出优质的产品。本发明中所使用的这5株菌株都是可从土壤中直接分离得到，都具有根迹促生作用，具有解磷，固氮，解钾作用，可在毛竹根，茎，叶表面或土壤中繁殖生长的同时，并定向毛竹根际分泌某些次生代谢产物，能够提高毛竹笋对养分的吸收、刺激其生长起到肥料的效果；本发明微生物笋肥对人、畜安全，属于环境友好型，本发明制备方法简单、使用成本低、使用简单。

具体实施方式

实施例1

一种复合微生物笋肥，其特征在于，制备该微生物笋肥的原料按重量份为：深褐芽孢杆菌菌粉20份，赖氨酸芽孢杆菌菌粉35份，瑞格链霉菌菌粉35份，秋田链霉菌菌粉15份，淡黄木霉菌粉30份，黄腐酸钾50份，氨基酸原粉30份；其具体制备方法，包括以下步骤：

步骤一、深褐芽孢杆菌菌粉的制备

取出深褐芽孢杆菌保藏管，用营养肉汁固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养48小时。在平板下挑取单个菌落接种至装有营养肉汁固体培养基，在30℃培养箱中培养48小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L深褐芽孢杆菌液体种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前12小时通气量为200L/min，12小时后通气量为320L/min ，30℃培养16-24小时，待总菌含量不低于10亿cfu/ml，即可作为深褐芽孢杆菌液体种子；

发酵：将上述制备的深褐芽孢杆菌液体种子加至深褐芽孢杆菌固体发酵培养基中，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5-10cm，控制发酵温度为30-40℃，发酵40小时，检测其芽孢含量为55亿cfu/g，即可晒干，待水分含量低于10%，粉碎过40目筛，即得到深褐芽孢杆菌菌粉；

其中，所述营养肉汁固体培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂20 g，水1000mL，pH7.2；

其中，所述深褐芽孢杆菌液体种子培养基：葡萄糖8g/L，玉米粉10 g/L， 豆粉10 g/L，硫酸镁0.2 g/L，硫酸锰0.1 g/L，磷酸二氢钾0.5 g/L，磷酸氢二钠1.0 g/L，pH7.0。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；

其中，深褐芽孢杆菌固体发酵培养基：啤酒糟60%， 玉米皮35%，菜粕粉2%，石粉3%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，硫酸锰0.01%，培养基含水量50%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。

步骤二、赖氨酸芽孢杆菌菌粉的制备

取出赖氨酸芽孢杆菌保藏管，用无氮固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养72小时。在平板下挑取单个菌落接种至装有无氮固体培养基，在30℃培养箱中培养72小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L赖氨酸芽孢杆菌种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前8小时通气量为100L/min，8-24小时后通气量为200L/min ，24小时后通气量为300L/min ，30℃培养32-48小时，待总菌数含量不低于20亿cfu/ml，即可作为赖氨酸芽孢杆菌种子液；

发酵：将上述制备的赖氨酸芽孢杆菌种子液以10%-20%的比例接种至赖氨酸芽孢杆菌固体培养基上，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5-10cm，控制发酵温度为30-40℃，发酵42小时，检测芽孢含量为58亿cfu/g，即可晒干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到赖氨酸芽孢杆菌菌粉；

其中，所述无氮固体培养基：蔗糖10g，磷酸氢二钾0.2g，硫酸镁0.2g，氯化钠0.2g，硫酸钙0.1g，碳酸钙5g，琼脂18g，蒸馏水1000mL，pH7.2；

其中，所述赖氨酸芽孢杆菌种子培养基：糖蜜20g/L，玉米淀粉10 g/L， 花生粕粉30 g/L，硫酸镁0.4 g/L，硫酸锰0.6g/L，磷酸二氢钾0.6 g/L，碳酸钙10 g/L， pH7.0。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；

赖氨酸芽孢杆菌固体培养基：玉米酒糟57%，麸皮35%，棉粕5%，石粉1%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。

步骤三，瑞格链霉菌菌粉的制备

取出瑞格链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为瑞格链霉菌种子液；

发酵：将上述制备的瑞格链霉菌种子液以3%的接种量接种至灭菌的瑞格链霉菌固体发酵培养基上，菌种与瑞格链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的瑞格链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为3-6cm，控温28-32℃，第一天空气湿度保持为60%-75%，过后空气湿度保持为40%-50%，发酵4天，检测其孢子含量为25亿CFU/g，即可低温风干至水分低于8%，粉碎过40目筛，即得到瑞格链霉菌菌粉；

其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0﹒5克，硫酸镁：0﹒5克，氯化钠：0﹒5克，硫酸亚铁：0﹒01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml ，PH7﹒2～7﹒4；

其中，所述的瑞格链霉菌固体发酵培养基：甘蔗渣80%，豆粕2%，玉米芯粉1%，石粉10%，麸皮7%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。

步骤四，秋田链霉菌菌粉的制备

取出秋田链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为秋田链霉菌种子液；

发酵：将上述制备的秋田链霉菌种子液以5%的接种量接种至灭菌的秋田链霉菌固体发酵培养基上，菌种与秋田链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的秋田链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为5-8cm，控温28-32℃，前两天空气湿度保持为60%-75%，过后空气湿度保持为40%-50%，发酵5天，检测其孢子含量为15亿CFU/g，即可低温风干水分低于8%，粉碎过40目筛，即得到秋田链霉菌菌粉；

其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0﹒5克，硫酸镁：0﹒5克，氯化钠：0﹒5克，硫酸亚铁：0﹒01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml ，PH7﹒2～7﹒4；

其中，所述的秋田链霉菌固体发酵培养基：米糠80%，棉粕2%，玉米粉1%，石粉2%，麸皮15%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。

步骤五，淡黄木霉菌粉的制备

淡黄木霉种子液的制备：取出淡黄木霉菌种保藏管，用PDA固体培养基划平板进行复苏，30℃培养6天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升PDA固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养4-6天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为淡黄木霉种子液；

发酵：将上述制备的淡黄木霉种子液以2%的接种量接种至灭菌的淡黄木霉固体发酵培养基上，菌种与淡黄木霉固体培养基混合均匀后，将接好种的淡黄木霉固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为5-10cm，控温28-32℃，湿度保持为60%-75%，发酵5天，检测其总孢子含量为33亿CFU/g，即可低温风干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到淡黄木霉菌粉；

其中，所述的PDA固体培养基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，琼脂20g；

其中，所述的淡黄木霉固体发酵培养基：甘蔗渣85%，芝麻渣粕2%，玉米芯5%，石粉4%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%-60%；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。

步骤六，将上面制成的各种菌粉按深褐芽孢杆菌菌粉20份，赖氨酸芽孢杆菌菌粉35份，瑞格链霉菌菌粉35份，秋田链霉菌菌粉15份，淡黄木霉菌粉30份，黄腐酸钾50份，氨基酸原粉30份；混合均匀，即为复合微生物笋肥。

实施例2本发明的复合微生物笋肥在大田中的试验效果

2013年7月，在湖南省隆回县滩头镇材用毛竹林基地内，每个小区约为1亩，每组三个小区间隔进行，中间有5米保护行；试验组：施本发明的复合微生物笋肥5公斤/亩；化肥组：20公斤/亩（N，P，K=5：2：3）；有机肥组：200公斤/亩；沟施，各样地土壤类型及立地条件类似。逐株检尺样地毛竹的底竹数，及2014年出笋数，成竹数，平均笋重，总产笋重量，及竹笋增产率。

试验结果：从表1可以看出，施用微生物笋肥的2014年出笋数358远远高于施用化肥与有机肥组310与305根，成竹数，平均笋重，总产笋重量，施用微生物笋肥能显著增加竹林土壤的笋产量，及立竹度，从而增加竹林生物量。每亩的笋产量比有机肥组产量增产率达到63.2%，施用微生物笋肥中含有固氮菌与解磷菌，提供了新竹留养所需的养分，促进了新竹的留养，提高了林地的生产力。

表1复合微生物笋肥在大田中的试验效果

Claims (3)

1.一种复合微生物笋肥，其特征在于，制备该复合微生物笋肥的原料按重量份为：深褐芽孢杆菌菌粉10-30份，赖氨酸芽孢杆菌菌粉20-40份，瑞格链霉菌菌粉20-40份，秋田链霉菌菌粉10-30份，淡黄木霉菌粉20-40份，黄腐酸钾20-60份，氨基酸原粉10-30份；其具体制备方法，包括以下步骤：

步骤一、深褐芽孢杆菌菌粉的制备

取出深褐芽孢杆菌保藏管，用营养肉汁固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种至装有营养肉汁固体培养基，在30℃培养箱中培养48小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L深褐芽孢杆菌液体种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前12小时通气量为200L/min，12小时后通气量为320L/min ，30℃培养16-24小时，待总菌含量不低于10亿cfu/ml，即可作为深褐芽孢杆菌液体种子；

发酵：将上述制备的深褐芽孢杆菌液体种子加至深褐芽孢杆菌固体发酵培养基中，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5-10cm，控制发酵温度为30-40℃，发酵36-48小时，待芽孢含量不低于50亿cfu/g，即可晒干，待水分含量低于10%，粉碎过40目筛，即得到深褐芽孢杆菌菌粉；

其中，所述营养肉汁固体培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂20 g，水1000mL，pH7.2 %；

其中，所述深褐芽孢杆菌液体种子培养基：葡萄糖8g/L，玉米粉10 g/L， 豆粉10 g/L，硫酸镁0.2 g/L，硫酸锰0.1 g/L，磷酸二氢钾0.5 g/L，磷酸氢二钠1.0 g/L，pH7.0；

其中，深褐芽孢杆菌固体发酵培养基：啤酒糟60%， 玉米皮35%，菜粕粉2%，石粉3%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，硫酸锰0.01%，培养基含水量50%-60%，各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；

步骤二、赖氨酸芽孢杆菌菌粉的制备

取出赖氨酸芽孢杆菌保藏管，用无氮固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养72小时，在平板下挑取单个菌落接种至装有无氮固体培养基，在30℃培养箱中培养72小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L赖氨酸芽孢杆菌种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前8小时通气量为100L/min，8-24小时后通气量为200L/min ，24小时后通气量为300L/min ，30℃培养32-48小时，待总菌数含量不低于20亿cfu/ml，即可作为赖氨酸芽孢杆菌种子液；

发酵：将上述制备的赖氨酸芽孢杆菌种子液以10%-20%的比例接种至赖氨酸芽孢杆菌固体培养基上，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5-10cm，控制发酵温度为30-40℃，发酵36-48小时，待芽孢含量不低于50亿cfu/g，即可晒干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到赖氨酸芽孢杆菌菌粉；

其中，所述无氮培养基：蔗糖10g，磷酸氢二钾0.2g，硫酸镁0.2g，氯化钠0.2g，硫酸钙0.1g，碳酸钙5g，琼脂18g，蒸馏水1000mL，pH7.2；

其中，所述赖氨酸芽孢杆菌种子培养基：糖蜜20g/L，玉米淀粉10 g/L， 花生粕粉30 g/L，硫酸镁0.4 g/L，硫酸锰0.6g/L，磷酸二氢钾0.6 g/L，碳酸钙10 g/L， pH7.0，各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；

赖氨酸芽孢杆菌固体培养基：玉米酒糟57%，麸皮35%，棉粕5%，石粉1%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%-60%，各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟 ；

步骤三，瑞格链霉菌菌粉的制备

取出瑞格链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为瑞格链霉菌种子液；

发酵：将上述制备的瑞格链霉菌种子液以3%的接种量接种至灭菌的瑞格链霉菌固体发酵培养基上，菌种与瑞格链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的瑞格链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为3-6cm，控温28-32℃，第一天空气湿度保持为60%-75%，过后空气湿度保持为40%-50%，发酵3-4天，检测其孢子含量不低于20亿CFU/g，即可低温风干至水分低于8%，粉碎过40目筛，即得到瑞格链霉菌菌粉；

其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0.5克，硫酸镁：0.5克，氯化钠：0.5克，硫酸亚铁：0.01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml ，PH7.2～7.4；

其中，所述的瑞格链霉菌固体发酵培养基：甘蔗渣80%，豆粕2%，玉米芯粉1%，石粉10%，麸皮7%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%-60%；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；

步骤四，秋田链霉菌菌粉的制备

取出秋田链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为秋田链霉菌种子液；

发酵：将上述制备的秋田链霉菌种子液以5%的接种量接种至灭菌的秋田链霉菌固体发酵培养基上，菌种与秋田链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的秋田链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为5-8cm，控温28-32℃，前两天空气湿度保持为60%-75%，过后空气湿度保持为40%-50%，发酵4-6天，检测其孢子含量不低于10亿CFU/g，即可低温风干水分低于8%，粉碎过40目筛，即得到秋田链霉菌菌粉；

其中，所述的高氏一号固体培养基与步骤三中的高氏一号固体培养基相同；

其中，所述的秋田链霉菌固体发酵培养基：米糠80%，棉粕2%，玉米粉1%，石粉2%，麸皮15%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%-60%；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；

步骤五，淡黄木霉菌粉的制备

淡黄木霉种子液的制备：取出淡黄木霉菌种保藏管，用PDA固体培养基划平板进行复苏，30℃培养6天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升PDA固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养4-6天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为淡黄木霉种子液；

发酵：将上述制备的淡黄木霉种子液以2%的接种量接种至灭菌的淡黄木霉固体发酵培养基上，菌种与淡黄木霉固体培养基混合均匀后，将接好种的淡黄木霉固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为5-10cm，控温28-32℃，湿度保持为60%-75%，发酵4-6天，检测其总孢子含量不低于30亿CFU/g，即可低温风干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到淡黄木霉菌粉；

其中，所述的PDA固体培养基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，琼脂20g；

其中，所述的淡黄木霉固体发酵培养基：甘蔗渣85%，芝麻渣粕2%，玉米芯5%，石粉4%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%-60%；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；

步骤六，将上面制成的各种菌粉按深褐芽孢杆菌菌粉10-30份，赖氨酸芽孢杆菌菌粉20-40份，瑞格链霉菌菌粉20-40份，秋田链霉菌菌粉10-30份，淡黄木霉菌粉20-40份，黄腐酸钾20-60份，氨基酸原粉10-30份；混合，均匀，即为复合微生物笋肥。

2.根据权利要求1所述的一种复合微生物笋肥，其特征在于，所述的复合微生物笋肥的使用方法为施肥开沟环施，每亩施用量为2-10kg。

3.根据权利要求1所述的一种复合微生物笋肥，其特征在于，所述的复合微生物笋肥的使用方法为全地洒施，每亩施用量为5-20kg。